松茸高产菌株(t35)在抗氧化药物中的医药用图
松茸高产菌株(t35)在抗氧化药物中的医药用图
【技术领域】
[0001]本发明提供了松茸高产菌株(T35)在抗氧化药物中的医药用途，属于中药和保健品技术领域。
【背景技术】
[0002]抗氧化是指抗氧化自由基的简称，英文Ant1-Oxidant。人体因为与外界的持续接触，包括呼吸(氧化反应)、外界污染、放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基。抗氧化物就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。人体在不可避免地产生自由基的同时，也在自然产生着抵抗自由基的抗氧化物质，以抵消自由基对人体细胞的氧化攻击。研宄证明，人体的抗氧化系统是一个可与免疫系统相比拟的、具有完善和复杂功能的系统，机体抗氧化的能力越强，就越健康，生命也越长。科学研宄表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。研宄抗氧化可以有效克服其所带来的危害，所以抗氧化被保健品、化妆品企业列为主要的研发方向之一，也是市场最重要的功能性诉求之一。
[0003]人体的抗氧化物质有自身合成的，也有由食物供给的。酶和非酶抗氧化物质在保护由于运动引起的过氧化损伤中起至关重要的作用。补充抗氧化物质有利于运动机体减少自由基的产生或加速其清除，以对抗自由基的副作用，因而对一般人和运动员的健康都有益，可能延缓运动性疲劳发生和加快体能恢复，年龄大的体力活动者比年轻者服用抗氧化剂效果更好。
[0004]松鸾(Tricholoma matsutake Sing.)属担子菌、担子菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属，又名杉蕈、松菇、合菌、台菌、松菌。松茸使用历史悠久，全球分布广泛，肉白嫩肥厚，质地细密，有浓郁的特殊香气，其营养丰富，含有蛋白质、氨基酸、多种维生素、碳水化合物和矿物质等有效成分，是名贵的野生菌类。松茸的主要生物活性物质是多糖、多肽和留醇等，药理作用方面主要集中在松茸的抗肿瘤、免疫调节功能的研宄，对于松茸抗氧化功效仍处于研宄的空白。
[0005]目前松茸主要来自野生采摘，人工栽培十分困难，这就给松茸产业发展带来很大的障碍。因此，采用现代生物工程发酵技术研宄松茸高产菌株(T35)在制备抗氧化功能性保健品及药品的应用具有重要的意义。
【发明内容】
[0006]本发明公开了一种松茸高产菌株(T35)在抗氧化药物中的医药用途，提供了松茸高产菌株(T35)的新用途，具有明显的医疗效果。
[0007]本发明所述的松茸高产菌株(T35)以松茸菌株(CGMCC5.793)为原始菌株，经诱变筛选获得，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址:武汉大学，保藏日期:2014年12月26 日，保藏号为 CCTCC Ν0:Μ 2014671，分类命名为松茸 T35 Tricholoma matsutake T35。
[0008]本发明所述的松茸高产菌株(T35)菌粉的制备方法如下:
将松茸高产菌株(T35)摇瓶培养液按5%~7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖 18~25g/L，酵母浸粉 15~25g/L，KH2P04 0.3-0.6g/L，MgS07.H20 0.3-0.6g/L，维生素 BI
0.05-0.3g/L，于10L发酵罐中进行液体深层发酵培养，26°C，150r/min，通气量3_5L/min，初始PH为5.0，培养48~72h，即得松茸高产菌株(T35)发酵液。
[0009]将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4°C 4000-5000转/分钟离心5~10分钟，弃掉上清，保留沉淀。将沉淀经过冻干或者喷雾干燥去除水分，再经粉碎研磨制成粉末，即获得松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0010]采用小鼠运动氧化模型对松茸高产菌株(T35)抗氧化活性进行研宄，其中小鼠运动氧化模型是指给药一定周期后小鼠强迫30min定时游泳，检测小鼠定时游泳后各生理指标(详见试验例1~3)，本发明验证松茸高产菌株(T35)具有提高机体抗氧化的功效。主要的功效学作用包括以下部分:
显著增强小鼠运动后血液中的抗氧化物活性，降低血液中氧化物含量；
显著增强小鼠运动后肌肉中的抗氧化物活性，降低肌肉中氧化物含量；
显著增强小鼠运动后肝脏中的抗氧化物活性，降低肝脏中氧化物含量。
[0011]需要检测的生理指标为ATP含量、LDH (乳酸脱氢酶)活性、MDA (丙二醛)含量、GSH-Px (谷胱甘肽过氧化物酶)活性、SOD (超氧化物歧化酶)活性、糖原含量，其中LDH、GSH-Px,SOD为抗氧化物酶，ATP和糖原为供能物质，MDA为自由基作用于脂质发生过氧化反应的氧化终产物，表示自由基破坏组织的强度。
[0012]本发明所述的松茸高产菌株(T35)可用于制备抗氧化保健食品和药品。所述的保健食品包括日常食品加工工艺可以制成的各种食物形式，如:糕点、饮料、糖果等；药物包括常规药物制备工艺制成能够在临床上使用的药物剂型，如:片剂、胶囊剂、口服液、丸剂、颗粒剂、散剂等各类长效制剂和复方制剂。
[0013]本发明的积极效果在于:对松茸菌进行诱变获得松茸高产菌株(T35)，并采用现代生物发酵技术获得大量菌粉，方法简便可行，成本低廉，抗氧化效果显著，无毒副作用，适用于抗氧化保健食品和药物的研发和制备，打破松茸野生资源匮乏的发展屏障，具有巨大的市场前景。
【附图说明】
[0014]图1 (A)、(B)、(C)、(D)、(E):分别为小鼠定时游泳后血液中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性；
图2(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F):分别为小鼠定时游泳后肌肉中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原含量；
图3(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F):分别为小鼠定时游泳后肝脏中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原含量。
【具体实施方式】
[0015]为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。
[0016]实施例1
松茸高产菌株(T35)液体深层发酵制备松茸高产菌株(T35)发酵液将松茸高产菌株(T35)培养液按7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖20g/L，酵母浸粉 15g/L，KH2P04 0.5g/L，MgS07.H20 0.5g/L，维生素 BI 0.2g/L)，于 100L 发酵罐中进行液体深层发酵培养，26°C，150r/min，通气量4L/min，初始pH为5.0，培养48h，即得松茸高产菌株(T35)发酵液。
[0017]实施例2
真空冷冻干燥制备松茸高产菌株(T35)菌粉
将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4500转/分钟离心5分钟，弃上清，保留沉淀，采用真空冷冻干燥技术除去水分。将湿菌粉涂成10_厚度在_26°C进行预冻8小时，然后进行真空冷冻干燥，分为四个阶段:第一阶段在_25°C干燥10 h，第二阶段在-5°C干燥10 h，第三阶段在15°C干燥12 h，第四阶段在40°C干燥8 ho干燥后的松茸菌用粉碎机粉碎过300目筛得到松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0018]实施例3
喷雾干燥制备松茸高产菌株(T35)菌粉
将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4500转/分钟离心5分钟，弃上清，保留沉淀，采用喷雾干燥技术制备菌粉。首先对松茸菌进行均质，均质温度为60°C，均质压力为20MPa，均质后过300目过滤布。然后对松茸菌均质液喷雾干燥，喷雾干燥参数为:进风温度150°C，热空气流量为36m3/h，压缩空气流量为490L/h，进料量4.0*180mL/h，出风温度预测值为60°C，出料口收集松菌粉，既得松茸松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0019]以下试验表明本发明松茸高产菌株(T35)抗氧化的医用用途试验例1:小鼠定时游泳后血液中生理指标检测
用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液，其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株(T35)菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成浓度为0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给药，剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0 .2mL/只，而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液，并增加阳性对照药组作为比较以示说明(阳性对照药为菇神牌姬松茸胶囊，配药方式同实验组，给药剂量为0.04g/L)。每组小鼠雌雄各10只，每天灌胃给药一次，连续灌胃14天。末次给药Ih后，依次将各剂量组与空白组小鼠置于桶式游泳池中，水深25cm，水温25±2°C，从小鼠入水开始计时，游泳30分钟后取出放在温暖干燥处。每只小鼠游泳结束静置3分钟，立即分别对小鼠进行眼眶取血，按照测定试剂盒(购自南京建成生物工程研宄所)说明书所给出的方法分别测定小鼠血液中的ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性，结果见图1 (A)⑶(C)⑶(E)。
[0020]数据分析得出，定时游泳后小鼠血液中的ATP含量、LDH含量、GSH-Px活性、SOD活性给药组均高于空白组，其中高剂量组均具有显著性，同时松茸高产菌株(T35)菌粉组高于阳性对照药组，MDA含量给药组明显低于空白组，相较于阳性对照组也有所降低。说明松茸菌粉能够提高小鼠血液抗氧化酶的活性，增强小鼠的快速供能，降低氧自由基对于机体的破坏强度，起到了对机体的抗氧化保护能效，同时相较于已上市的姬松茸胶囊抗氧化保健品，松茸高产菌株(T35)菌粉中低剂量组也表现出了优于其的更好抗氧化效果，即松茸高产菌株(T35)具有显著的抗氧化功能。
[0021]试验例2:小鼠定时游泳后肌肉中生理指标检测
用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液，其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株(T35)菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成浓度为0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给药，剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0.2mL/只，而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液，并增加阳性对照药组作为比较以示说明(阳性对照药为菇神牌姬松茸胶囊，配药方式同实验组，给药剂量为0.04g/L)。每组小鼠各10只，每天灌胃给药一次，连续灌胃14天。末次给药Ih后，依次将各剂量组与空白组小鼠置于桶式游泳池中，水深25cm，水温25±2°C，从小鼠入水开始计时，游泳30分钟后取出放在温暖干燥处。每只小鼠游泳结束静置3分钟，立即分别对小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠两侧大腿肌肉，用冰生理盐水冲洗干净，放置于-80°C保存，按照测定试剂盒(购自南京建成生物工程研宄所)说明书所给出的方法分别测定小鼠肌肉中的ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原含量，结果见图2 (A) (B) (C) (D) (E) (F)。
[0022]数据分析得出，定时游泳后小鼠肌肉中的ATP含量、LDH活性、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原给药组均显著高于空白组，其中松茸高产菌株(T35)中、高剂量给药组相对于空白组均具有很好的显著性，并且松茸高产菌株(T35)中、高剂量均高于阳性对照药组，MDA含量给药组显著低于空白组，其中松茸高产菌株(T35)中、高剂量组相较于阳性对照组也有所降低，并随着剂量的增加治疗效果更明显。说明松茸菌粉能够有效提高小鼠肌肉中抗氧化酶的活性，加快小鼠的肌肉能量的产生，降低氧自由基对于肌肉体的破坏强度，对小鼠肌肉起到了抗氧化保护能效，同时相较于已上市的姬松茸胶囊抗氧化保健品，松茸菌粉也表现出了优于其更好的抗氧化效果，即松茸高产菌株(T35)具有显著的抗氧化功能。
[0023]试验例3:小鼠定时游泳后肝脏中生理指标检测
用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液，其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸菌发酵菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成浓度为0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给药，剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0.2mL/只，而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液，并增加阳性对照药组作为比较以示说明(阳性对照药为菇神牌姬松茸胶囊，配药方式同实验组，给药剂量为0.04g/L)。每组小鼠各10只，每天灌胃给药一次，连续灌胃14天。末次给药Ih后，依次将各剂量组与空白组小鼠置于桶式游泳池中，水深25cm，水温25±2°C，从小鼠入水开始计时，游泳30分钟后取出放在温暖干燥处。每只小鼠游泳结束静置3分钟，立即分别对小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠肝脏，用冰生理盐水冲洗干净，放置于_80°C保存。按照测定试剂盒(购自南京建成生物工程研宄所)说明书所给出的方法分别测定小鼠肝脏中的ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原含量，结果见图3(A) (B) (C) (D) (E) (F) ο
[0024]数据分析得出，定时游泳后小鼠肝脏中的ATP含量、LDH活性、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原给药组均高于空白组，其中松茸高产菌株(T35)中、高剂量给药组相对于空白组均具有显著性，并且相较于阳性对照药组松茸高产菌株(T35)中、高剂量组均升高，MDA含量给药组显著低于空白组，松茸高产菌株(T35)中、高剂量组相较于阳性对照组也有所降低，并随着剂量的增加治疗效果更明显。说明松茸菌粉能够有效提高小鼠肝脏中抗氧化酶的活性，加快小鼠的肝部能量的产生，降低氧自由基对于肝脏的破坏强度，对小鼠肝脏起到了抗氧化保护能效，与已上市的姬松茸胶囊抗氧化保健品相比，松茸高产菌株(T35)也表现出了优于其更好的抗氧化效果，即松茸高产菌株(T35)具有显著的抗氧化功能。
[0025]综上所述，试验例1~3可以充分说明松茸高产菌株(T35)能够明显减少小鼠体力氧化物含量，提高小鼠体内抗氧化酶活性，增强小鼠抗氧化能力，加快小鼠能量供给，即说明松茸高产菌株(T35)具有很好的抗氧化功效，同时雌雄不同性别小鼠均具有很好的治疗效果未出现相别上的差异，因此松茸高产菌株(T35)在制备抗氧化保健品、食品及药品方面具有很大潜质。
【主权项】
1.松茸高产菌株(T35)在制备抗氧化药物中的用途，于2014年12月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏登记号为CCTCC N0.M 2014671，分类名称:松茸T35 Tricholomamatsutake T35。2.松茸高产菌株(T35)的液体深层发酵培养方法，包括以下步骤完成: 将松茸高产菌株(T35)培养液按5%~7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖18~25g/L，酵母浸粉 15~25g/L，KH2P04 0.3~ 0.6g/L，MgS07.H20 0.3-0.6g/L，维生素 BI0.05-0.3g/L，于10L发酵罐中进行液体深层发酵培养，26°C，150r/min，通气量3~5L/min，初始PH为5.0，培养48~72h，即得松茸高产菌株发酵液。3.松茸高产菌株(T35)菌粉的制备方法，包括一下步骤完成: 将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4°C 4000-5000转/分钟离心5~10分钟，弃掉上清，保留沉淀；将沉淀经过冻干或者喷雾干燥去除水分，再经粉碎研磨制成粉末，即获得松茸高产菌株菌粉。4.松茸高产菌株(T35)用于制备抗氧化保健食品或药物，所述的保健食品包括日常食品加工工艺可以制成的糕点、饮料、糖果和含片等各种食物形式；药物包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液等常规药物制备工艺可以制成的应用于临床上的任何药物剂型。
【专利摘要】本发明提供了一种松茸高产菌株（T35）在抗氧化中的医用用途，采用液体深层发酵、离心、干燥制备成松茸高产菌株菌粉，建立小鼠强迫游泳运动氧化模型，考察松茸高产菌株抗氧化活性，经验证该松茸高产菌粉具有明显的抗氧化功效。本发明方法简单，高产菌株抗氧化功效显著，无毒副作用，成本低廉，可以广泛应用于该类药用真菌在抗氧化系列保健品、食品及药品的研发与制备中。本发明的松茸通过深层液体发酵获得，不需要从天然药材中提取，打破野生资源匮乏的局限，安全有效，具有很高的产业化应用前景。CCTCC NO.M 201467120141226
【IPC分类】A23L1/29, A61P39/06, A61K36/07
【公开号】CN104906148
【申请号】CN201510281411
【发明人】滕利荣, 李佺, 王贞佐, 王霄汉, 孟庆繁, 逯家辉, 李奉熙, 黄玮, 权宇彤
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月28日
【技术领域】
[0001]本发明提供了松茸高产菌株(T35)在抗氧化药物中的医药用途，属于中药和保健品技术领域。
【背景技术】
[0002]抗氧化是指抗氧化自由基的简称，英文Ant1-Oxidant。人体因为与外界的持续接触，包括呼吸(氧化反应)、外界污染、放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基。抗氧化物就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。人体在不可避免地产生自由基的同时，也在自然产生着抵抗自由基的抗氧化物质，以抵消自由基对人体细胞的氧化攻击。研宄证明，人体的抗氧化系统是一个可与免疫系统相比拟的、具有完善和复杂功能的系统，机体抗氧化的能力越强，就越健康，生命也越长。科学研宄表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。研宄抗氧化可以有效克服其所带来的危害，所以抗氧化被保健品、化妆品企业列为主要的研发方向之一，也是市场最重要的功能性诉求之一。
[0003]人体的抗氧化物质有自身合成的，也有由食物供给的。酶和非酶抗氧化物质在保护由于运动引起的过氧化损伤中起至关重要的作用。补充抗氧化物质有利于运动机体减少自由基的产生或加速其清除，以对抗自由基的副作用，因而对一般人和运动员的健康都有益，可能延缓运动性疲劳发生和加快体能恢复，年龄大的体力活动者比年轻者服用抗氧化剂效果更好。
[0004]松鸾(Tricholoma matsutake Sing.)属担子菌、担子菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属，又名杉蕈、松菇、合菌、台菌、松菌。松茸使用历史悠久，全球分布广泛，肉白嫩肥厚，质地细密，有浓郁的特殊香气，其营养丰富，含有蛋白质、氨基酸、多种维生素、碳水化合物和矿物质等有效成分，是名贵的野生菌类。松茸的主要生物活性物质是多糖、多肽和留醇等，药理作用方面主要集中在松茸的抗肿瘤、免疫调节功能的研宄，对于松茸抗氧化功效仍处于研宄的空白。
[0005]目前松茸主要来自野生采摘，人工栽培十分困难，这就给松茸产业发展带来很大的障碍。因此，采用现代生物工程发酵技术研宄松茸高产菌株(T35)在制备抗氧化功能性保健品及药品的应用具有重要的意义。
【发明内容】
[0006]本发明公开了一种松茸高产菌株(T35)在抗氧化药物中的医药用途，提供了松茸高产菌株(T35)的新用途，具有明显的医疗效果。
[0007]本发明所述的松茸高产菌株(T35)以松茸菌株(CGMCC5.793)为原始菌株，经诱变筛选获得，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址:武汉大学，保藏日期:2014年12月26 日，保藏号为 CCTCC Ν0:Μ 2014671，分类命名为松茸 T35 Tricholoma matsutake T35。
[0008]本发明所述的松茸高产菌株(T35)菌粉的制备方法如下:
将松茸高产菌株(T35)摇瓶培养液按5%~7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖 18~25g/L，酵母浸粉 15~25g/L，KH2P04 0.3-0.6g/L，MgS07.H20 0.3-0.6g/L，维生素 BI
0.05-0.3g/L，于10L发酵罐中进行液体深层发酵培养，26°C，150r/min，通气量3_5L/min，初始PH为5.0，培养48~72h，即得松茸高产菌株(T35)发酵液。
[0009]将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4°C 4000-5000转/分钟离心5~10分钟，弃掉上清，保留沉淀。将沉淀经过冻干或者喷雾干燥去除水分，再经粉碎研磨制成粉末，即获得松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0010]采用小鼠运动氧化模型对松茸高产菌株(T35)抗氧化活性进行研宄，其中小鼠运动氧化模型是指给药一定周期后小鼠强迫30min定时游泳，检测小鼠定时游泳后各生理指标(详见试验例1~3)，本发明验证松茸高产菌株(T35)具有提高机体抗氧化的功效。主要的功效学作用包括以下部分:
显著增强小鼠运动后血液中的抗氧化物活性，降低血液中氧化物含量；
显著增强小鼠运动后肌肉中的抗氧化物活性，降低肌肉中氧化物含量；
显著增强小鼠运动后肝脏中的抗氧化物活性，降低肝脏中氧化物含量。
[0011]需要检测的生理指标为ATP含量、LDH (乳酸脱氢酶)活性、MDA (丙二醛)含量、GSH-Px (谷胱甘肽过氧化物酶)活性、SOD (超氧化物歧化酶)活性、糖原含量，其中LDH、GSH-Px,SOD为抗氧化物酶，ATP和糖原为供能物质，MDA为自由基作用于脂质发生过氧化反应的氧化终产物，表示自由基破坏组织的强度。
[0012]本发明所述的松茸高产菌株(T35)可用于制备抗氧化保健食品和药品。所述的保健食品包括日常食品加工工艺可以制成的各种食物形式，如:糕点、饮料、糖果等；药物包括常规药物制备工艺制成能够在临床上使用的药物剂型，如:片剂、胶囊剂、口服液、丸剂、颗粒剂、散剂等各类长效制剂和复方制剂。
[0013]本发明的积极效果在于:对松茸菌进行诱变获得松茸高产菌株(T35)，并采用现代生物发酵技术获得大量菌粉，方法简便可行，成本低廉，抗氧化效果显著，无毒副作用，适用于抗氧化保健食品和药物的研发和制备，打破松茸野生资源匮乏的发展屏障，具有巨大的市场前景。
【附图说明】
[0014]图1 (A)、(B)、(C)、(D)、(E):分别为小鼠定时游泳后血液中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性；
图2(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F):分别为小鼠定时游泳后肌肉中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原含量；
图3(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F):分别为小鼠定时游泳后肝脏中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原含量。
【具体实施方式】
[0015]为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。
[0016]实施例1
松茸高产菌株(T35)液体深层发酵制备松茸高产菌株(T35)发酵液将松茸高产菌株(T35)培养液按7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖20g/L，酵母浸粉 15g/L，KH2P04 0.5g/L，MgS07.H20 0.5g/L，维生素 BI 0.2g/L)，于 100L 发酵罐中进行液体深层发酵培养，26°C，150r/min，通气量4L/min，初始pH为5.0，培养48h，即得松茸高产菌株(T35)发酵液。
[0017]实施例2
真空冷冻干燥制备松茸高产菌株(T35)菌粉
将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4500转/分钟离心5分钟，弃上清，保留沉淀，采用真空冷冻干燥技术除去水分。将湿菌粉涂成10_厚度在_26°C进行预冻8小时，然后进行真空冷冻干燥，分为四个阶段:第一阶段在_25°C干燥10 h，第二阶段在-5°C干燥10 h，第三阶段在15°C干燥12 h，第四阶段在40°C干燥8 ho干燥后的松茸菌用粉碎机粉碎过300目筛得到松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0018]实施例3
喷雾干燥制备松茸高产菌株(T35)菌粉
将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4500转/分钟离心5分钟，弃上清，保留沉淀，采用喷雾干燥技术制备菌粉。首先对松茸菌进行均质，均质温度为60°C，均质压力为20MPa，均质后过300目过滤布。然后对松茸菌均质液喷雾干燥，喷雾干燥参数为:进风温度150°C，热空气流量为36m3/h，压缩空气流量为490L/h，进料量4.0*180mL/h，出风温度预测值为60°C，出料口收集松菌粉，既得松茸松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0019]以下试验表明本发明松茸高产菌株(T35)抗氧化的医用用途试验例1:小鼠定时游泳后血液中生理指标检测
用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液，其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株(T35)菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成浓度为0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给药，剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0 .2mL/只，而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液，并增加阳性对照药组作为比较以示说明(阳性对照药为菇神牌姬松茸胶囊，配药方式同实验组，给药剂量为0.04g/L)。每组小鼠雌雄各10只，每天灌胃给药一次，连续灌胃14天。末次给药Ih后，依次将各剂量组与空白组小鼠置于桶式游泳池中，水深25cm，水温25±2°C，从小鼠入水开始计时，游泳30分钟后取出放在温暖干燥处。每只小鼠游泳结束静置3分钟，立即分别对小鼠进行眼眶取血，按照测定试剂盒(购自南京建成生物工程研宄所)说明书所给出的方法分别测定小鼠血液中的ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性，结果见图1 (A)⑶(C)⑶(E)。
[0020]数据分析得出，定时游泳后小鼠血液中的ATP含量、LDH含量、GSH-Px活性、SOD活性给药组均高于空白组，其中高剂量组均具有显著性，同时松茸高产菌株(T35)菌粉组高于阳性对照药组，MDA含量给药组明显低于空白组，相较于阳性对照组也有所降低。说明松茸菌粉能够提高小鼠血液抗氧化酶的活性，增强小鼠的快速供能，降低氧自由基对于机体的破坏强度，起到了对机体的抗氧化保护能效，同时相较于已上市的姬松茸胶囊抗氧化保健品，松茸高产菌株(T35)菌粉中低剂量组也表现出了优于其的更好抗氧化效果，即松茸高产菌株(T35)具有显著的抗氧化功能。
[0021]试验例2:小鼠定时游泳后肌肉中生理指标检测
用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液，其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株(T35)菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成浓度为0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给药，剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0.2mL/只，而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液，并增加阳性对照药组作为比较以示说明(阳性对照药为菇神牌姬松茸胶囊，配药方式同实验组，给药剂量为0.04g/L)。每组小鼠各10只，每天灌胃给药一次，连续灌胃14天。末次给药Ih后，依次将各剂量组与空白组小鼠置于桶式游泳池中，水深25cm，水温25±2°C，从小鼠入水开始计时，游泳30分钟后取出放在温暖干燥处。每只小鼠游泳结束静置3分钟，立即分别对小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠两侧大腿肌肉，用冰生理盐水冲洗干净，放置于-80°C保存，按照测定试剂盒(购自南京建成生物工程研宄所)说明书所给出的方法分别测定小鼠肌肉中的ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原含量，结果见图2 (A) (B) (C) (D) (E) (F)。
[0022]数据分析得出，定时游泳后小鼠肌肉中的ATP含量、LDH活性、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原给药组均显著高于空白组，其中松茸高产菌株(T35)中、高剂量给药组相对于空白组均具有很好的显著性，并且松茸高产菌株(T35)中、高剂量均高于阳性对照药组，MDA含量给药组显著低于空白组，其中松茸高产菌株(T35)中、高剂量组相较于阳性对照组也有所降低，并随着剂量的增加治疗效果更明显。说明松茸菌粉能够有效提高小鼠肌肉中抗氧化酶的活性，加快小鼠的肌肉能量的产生，降低氧自由基对于肌肉体的破坏强度，对小鼠肌肉起到了抗氧化保护能效，同时相较于已上市的姬松茸胶囊抗氧化保健品，松茸菌粉也表现出了优于其更好的抗氧化效果，即松茸高产菌株(T35)具有显著的抗氧化功能。
[0023]试验例3:小鼠定时游泳后肝脏中生理指标检测
用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液，其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸菌发酵菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成浓度为0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给药，剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0.2mL/只，而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液，并增加阳性对照药组作为比较以示说明(阳性对照药为菇神牌姬松茸胶囊，配药方式同实验组，给药剂量为0.04g/L)。每组小鼠各10只，每天灌胃给药一次，连续灌胃14天。末次给药Ih后，依次将各剂量组与空白组小鼠置于桶式游泳池中，水深25cm，水温25±2°C，从小鼠入水开始计时，游泳30分钟后取出放在温暖干燥处。每只小鼠游泳结束静置3分钟，立即分别对小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠肝脏，用冰生理盐水冲洗干净，放置于_80°C保存。按照测定试剂盒(购自南京建成生物工程研宄所)说明书所给出的方法分别测定小鼠肝脏中的ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原含量，结果见图3(A) (B) (C) (D) (E) (F) ο
[0024]数据分析得出，定时游泳后小鼠肝脏中的ATP含量、LDH活性、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原给药组均高于空白组，其中松茸高产菌株(T35)中、高剂量给药组相对于空白组均具有显著性，并且相较于阳性对照药组松茸高产菌株(T35)中、高剂量组均升高，MDA含量给药组显著低于空白组，松茸高产菌株(T35)中、高剂量组相较于阳性对照组也有所降低，并随着剂量的增加治疗效果更明显。说明松茸菌粉能够有效提高小鼠肝脏中抗氧化酶的活性，加快小鼠的肝部能量的产生，降低氧自由基对于肝脏的破坏强度，对小鼠肝脏起到了抗氧化保护能效，与已上市的姬松茸胶囊抗氧化保健品相比，松茸高产菌株(T35)也表现出了优于其更好的抗氧化效果，即松茸高产菌株(T35)具有显著的抗氧化功能。
[0025]综上所述，试验例1~3可以充分说明松茸高产菌株(T35)能够明显减少小鼠体力氧化物含量，提高小鼠体内抗氧化酶活性，增强小鼠抗氧化能力，加快小鼠能量供给，即说明松茸高产菌株(T35)具有很好的抗氧化功效，同时雌雄不同性别小鼠均具有很好的治疗效果未出现相别上的差异，因此松茸高产菌株(T35)在制备抗氧化保健品、食品及药品方面具有很大潜质。
【主权项】
1.松茸高产菌株(T35)在制备抗氧化药物中的用途，于2014年12月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏登记号为CCTCC N0.M 2014671，分类名称:松茸T35 Tricholomamatsutake T35。2.松茸高产菌株(T35)的液体深层发酵培养方法，包括以下步骤完成: 将松茸高产菌株(T35)培养液按5%~7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖18~25g/L，酵母浸粉 15~25g/L，KH2P04 0.3~ 0.6g/L，MgS07.H20 0.3-0.6g/L，维生素 BI0.05-0.3g/L，于10L发酵罐中进行液体深层发酵培养，26°C，150r/min，通气量3~5L/min，初始PH为5.0，培养48~72h，即得松茸高产菌株发酵液。3.松茸高产菌株(T35)菌粉的制备方法，包括一下步骤完成: 将松茸高产菌株(T35)发酵液，以4°C 4000-5000转/分钟离心5~10分钟，弃掉上清，保留沉淀；将沉淀经过冻干或者喷雾干燥去除水分，再经粉碎研磨制成粉末，即获得松茸高产菌株菌粉。4.松茸高产菌株(T35)用于制备抗氧化保健食品或药物，所述的保健食品包括日常食品加工工艺可以制成的糕点、饮料、糖果和含片等各种食物形式；药物包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液等常规药物制备工艺可以制成的应用于临床上的任何药物剂型。
【专利摘要】本发明提供了一种松茸高产菌株（T35）在抗氧化中的医用用途，采用液体深层发酵、离心、干燥制备成松茸高产菌株菌粉，建立小鼠强迫游泳运动氧化模型，考察松茸高产菌株抗氧化活性，经验证该松茸高产菌粉具有明显的抗氧化功效。本发明方法简单，高产菌株抗氧化功效显著，无毒副作用，成本低廉，可以广泛应用于该类药用真菌在抗氧化系列保健品、食品及药品的研发与制备中。本发明的松茸通过深层液体发酵获得，不需要从天然药材中提取，打破野生资源匮乏的局限，安全有效，具有很高的产业化应用前景。CCTCC NO.M 201467120141226
【IPC分类】A23L1/29, A61P39/06, A61K36/07
【公开号】CN104906148
【申请号】CN201510281411
【发明人】滕利荣, 李佺, 王贞佐, 王霄汉, 孟庆繁, 逯家辉, 李奉熙, 黄玮, 权宇彤
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月28日
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