松茸高产菌株(t35)在抗疲劳中的医用用图
【技术领域】
[0001] 本发明提供了松茸高产菌株(T35)在抗疲劳中的医用用途,属于中药和保健品技 术领域。
【背景技术】
[0002] 当前,随着社会经济高速发展、现代化水平不断提高,人们也面临着越来越多的困 扰,生存环境的恶化、生活节奏的加快、工作压力增大让人们感到力不从心,身心俱疲。疲劳 是一种复杂的心理生理综合性变化过程,人类的各种生理活动需要能源的供给同时也会产 生相应的代谢产物,当活动超过一定限度便会造成能源的供需失衡和代谢物的过量积累, 大脑会发出相应的保护信号,机体会产生无力、酸痛、困顿等不适感。广义上的疲劳不仅仅 是肌体上的疲劳也包括脑力疲劳和心理疲劳,临床表现为记忆力下降、意志消沉、抑郁和焦 虑等,这严重干扰了人们正常的工作和生活。因此,亚健康人群的不断增多,人们对于健康 的重视度不断提高,疲劳已经俨然成为目前人们关注的热点话题。
[0003] 松鸾(TricholomamatsutakeSing.)属担子菌、担子菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑 属,又名杉蕈、松菇、合菌、台菌、松菌。松茸使用历史悠久,全球分布广泛,肉白嫩肥厚,质地 细密,有浓郁的特殊香气,其营养丰富,含有蛋白质、氨基酸、多种维生素、碳水化合物和矿 物质等有效成分,是名贵的野生菌类。松茸的主要生物活性物质是多糖、多肽和留醇等,药 理作用方面主要集中在松茸的抗肿瘤、免疫调节功能的研宄,对于松茸抗疲劳功效仍处于 研宄的空白。
[0004] 目前松茸主要来自野生采摘,人工栽培十分困难,这就给松茸产业发展带来很大 的障碍。因此,采用现代生物工程发酵技术研宄松茸高产菌株在制备抗疲劳功能性保健品 及药品的应用具有重要的意义。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了松茸高产菌株(T35)在抗疲劳中的医用用途,具有明显的医疗效果。
[0006] 本发明所述的松茸高产菌株以松茸菌株(CGMCC5. 793)为原始菌株,经诱变筛选获 得,在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏地址:武汉大学,保藏日期:2014年12月25日, 保藏号为CCTCCM2014671,分类命名为:松茸T35TricholomamatsutakeT35〇
[0007] 本发明所述的松茸高产菌株(T35)菌粉的制备方法如下: 将松茸高产菌株(T35)摇瓶培养液按5%~7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄 糖 18~25g/L,酵母浸粉 15~25g/L,KH2P04 0? 3~0. 6g/L,MgS07.H20 0? 3~0. 6g/L,维生素Bl 0. 05~0. 3g/L,于IOOL发酵罐中进行液体深层发酵培养,26°C,150r/min,通气量3-5L/min, 初始pH为5. 0,培养48~72h,即得松茸高产菌株(T35)发酵液。
[0008] 将松茸高产菌株(T35)发酵液,以4°C4000~5000转/分钟离心5~10分钟,弃掉上 清,保留沉淀。将沉淀经过冻干或者喷雾干燥去除水分,再经粉碎研磨制成粉末,即获得松 茸高产菌株(T35)菌粉。
[0009] 采用小鼠动物行为学实验证明松茸高产菌株(T35)抗疲劳活性,为松茸高产菌株 (T35)应用于抗疲劳系列保健品、食品和药品的研发和制备提供依据。
[0010] 经动物行为学实验验证(详见试验例1~3),本发明验证松茸高产菌株(T35)具有 提高机体抗疲劳的功效。主要的功效学作用包括以下部分: 显著延长小鼠在疲劳转棒上的停留时间; 显著延长小鼠在耐力跑实验中的跑步时间; 显著延长小鼠在负重游泳实验中的游泳时间。
[0011] 本发明所述的松茸高产菌株(T35)可用于制备抗疲劳保健食品和药物制剂。所述 的保健食品包括日常食品加工工艺可以制成的各种食物形式,如:糕点、饮料、糖果等;药 物包括常规药物制备工艺制成能够在临床上使用的药物剂型,如:片剂、胶囊剂、口服液、丸 剂、颗粒剂、散剂等各类长效制剂和复方制剂。
[0012] 本发明的积极效果在于:对松茸菌进行诱变获得松茸高产菌株(T35),并采用现 代生物发酵技术获得大量松茸高产菌株菌粉,方法简便可行,抗疲劳效果显著,成本低,无 毒副作用,适用于抗疲劳保健食品和药物的研发和制备,打破松茸发展屏障,具有十分重大 的现实意义。
【具体实施方式】
[0013] 为了便于理解本发明,特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而 非对本发明的任何形式的限制。
[0014] 实施例1 松茸高产菌株(T35)液体深层发酵制备松茸高产菌株发酵液 将松茸高产菌株(T35)培养液按5%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖25g/L,酵母浸粉 20g/L,KH2P04 0? 4g/L,MgS07.H20 0? 4g/L,维生素BI0? 3g/L),于 100L发酵罐 中进行液体深层发酵培养,26°C,150r/min,通气量3L/min,初始pH为5. 0,培养72h,即得松 茸高产菌株(T35)发酵液。
[0015] 实施例2 真空冷冻干燥制备松茸高产菌株(T35)菌粉 将松茸高产菌株(T35)发酵液,以5000转/分钟离心5分钟,弃上清,保留沉淀,采用 真空冷冻干燥技术除去水分。将湿菌粉涂成IOmm厚度在_30°C进行预冻8小时,然后进行 真空冷冻干燥,分为四个阶段:第一阶段在_30°C干燥10h,第二阶段在-10 °C干燥10h, 第三阶段在l〇°C干燥10h,第四阶段在40 °C干燥8h。干燥后的松茸菌用粉碎机粉碎过 300目筛得到松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0016] 实施例3 喷雾干燥制备松茸高产菌株(T35)菌粉 将松茸高产菌株(T35)发酵液,以4000转/分钟离心10分钟,弃上清,保留沉淀,采用 喷雾干燥技术制备菌粉。首先对松茸菌进行均质,均质温度为40°C,均质压力为20MPa,均 质后过300目过滤布。然后对松茸菌均质液喷雾干燥,喷雾干燥参数为:进风温度145°C, 热空气流量为35m3/h,压缩空气流量为450L/h,进料量4. 0*180mL/h,出风温度预测值为 65°C,出料口收集松菌粉,既得松茸高产菌株(T35)菌粉。
[0017] 以下试验表明本发明松茸高产菌株(T35)的抗疲劳的医用用途 试验例1 :小鼠
疲劳转棒实验 用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液,其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际 药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成 浓度为〇. 〇3g/L、0.Ig/L、0. 2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠经口灌胃给 药,剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0. 2mL/只,而空白对照组受试小鼠经口灌胃 等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液。每组小鼠各10只,每天灌胃给药一次,连续灌胃14天。 末次给药Ih后,每组小鼠分别放在疲劳转棒仪的转棒上,使肌肉处于静力紧张的状态。调 节转棒的速度为30转/分钟,记录各组小鼠由于肌肉疲劳从转棒上掉落的时间,实验前训 练2次,第3次开始计时,跌落时终止实验,记录该时间作为小鼠疲劳转棒时间。结果见表 1〇
[0018] 表1不同剂量松茸高产菌株菌粉对于小鼠在疲劳转棒实验的影响
*与空白组比P< 0.05, #与空白组比< 0.01 由表1可见,松茸高产菌株菌粉低、中、高剂量小鼠在转棒上的停留时间与空白组相比 有显著性的提高,这说明松茸高产菌株能够延长小鼠疲劳时间,即说明具有抗疲劳作用。
[0019] 试验例2:小鼠耐力跑实验 用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液,其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际 药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成 浓度为〇. 〇3g/L、0.Ig/L、0. 2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠经口灌胃给 药,剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0. 2mL/只,而空白对照组受试小鼠经口灌胃 等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液。每组小鼠各10只,每天灌胃给药一次,连续灌胃14天。 末次给药Ih后,每组小鼠分别放在小鼠跑步机的前端,跑道后端设置电极作为电击刺激地 带,放置好动物待其适应后,对小鼠进行训练1分钟,使其了解逃离电击区域后,将转速设 置为20转/分钟开始计时,电流调到30A,以小鼠处于电击区域30秒不动视为力竭,记录各 组小鼠力竭时间。结果见表2。
[0020] 表2不同剂量松茸高产菌株菌粉对小鼠跑步时间的影响
*与空白组比P< 0.05, #与空白组比< 0.01 由表2可见,给药组在高、中、低各个剂量组下均能显著增强小鼠的耐力和体力。这说 明松茸高产菌株能够明显增强小鼠在跑步机中的跑步时间,即证明松茸高产菌株具有抗疲 劳的作用。
[0021] 试验例3:小鼠负重游泳实验 用去离子水配制5%羧甲基纤维素钠溶液,其中羧甲基纤维素钠作为助溶剂并无实际 药理作用。将实施例1~实施例3制备的松茸高产菌株菌粉用5%羧甲基纤维素钠溶液配成 浓度为〇. 〇3g/L、0.Ig/L、0. 2g/L低剂量组、中剂量组、高剂量组菌液。受试小鼠井口灌胃给 药,剂量为20g体重受试小鼠经口灌胃剂量为0. 2mL/只,而空白对照组受试小鼠经口灌胃 等体积的5%羧甲基纤维素钠溶液。每组小鼠各10只,每天灌胃给药一次,连续灌胃14天。 末次给药Ih后,在小鼠尾部1/3~2/3处绑上铅粒(铅粒与小鼠体重的重量比为1:10),依次 将各剂量组与空白组小鼠置于负重游泳测试仪中,水深25cm,水温25±2°C,从小鼠入水开 始计时,以小鼠完全没入水中5s未浮出水面视为力竭,记录各组小鼠游泳力竭时间。结果 见表3。
由表3可见,低剂量组与空白组相比有显著性差异,中、高剂量组与空白组相比有极其 显著性差异,说明松茸高产菌株可以显著延长小鼠的游泳时间,提高小鼠抗疲劳的能力。
[0023]综上所述,试验例1~3可以充分说明松茸高产菌株能够明显增强小鼠体力,提高 小鼠抗疲劳能力,即说明松茸菌具有很好的抗疲劳功效,同时展示出松茸高产菌株(T35)在 制备抗疲劳保健品、食品和药品方面的具大潜质。
【主权项】
1. 松茸高产菌株(T35)在制备抗疲劳药物中的用途,于2014年12月25日在中国典型 培养物保藏中心保藏,保藏登记号为CCTCCNO.M2014671,分类名称:松茸T35Tricholoma matsutakeT35〇2. 松茸高产菌株(T35)的液体深层发酵培养方法,包括以下步骤完成: 将松茸高产菌株(T35)培养液按5%~7%接种量接入60L液体发酵培养基中(葡萄糖 18~25g/L,酵母浸粉 15~25g/L,KH2P04 0? 3~ 0? 6g/L,MgS07.H20 0? 3~0. 6g/L,维生素Bl 0. 05~0. 3g/L,于IOOL发酵罐中进行液体深层发酵培养,26°C,150r/min,通气量3~5L/min, 初始pH为5. 0,培养48~72h,即得松茸高产菌株发酵液。3. 松茸高产菌株(T35)菌粉的制备方法,包括一下步骤完成: 将松茸高产菌株(T35)发酵液,以4°C4000~5000转/分钟离心5~10分钟,弃掉上清, 保留沉淀; 将沉淀经过冻干或者喷雾干燥去除水分,再经粉碎研磨制成粉末,即获得松茸高产菌 株菌粉。4. 松茸高产菌株(T35)用于制备抗疲劳保健食品或药物,所述的保健食品包括日常食 品加工工艺可以制成的糕点、饮料、糖果和含片等各种食物形式;药物包括片剂、颗粒剂、胶 囊剂和口服液等常规药物制备工艺可以制成的应用于临床上的任何药物剂型。
【专利摘要】本发明提供了松茸高产菌株(T35)在抗疲劳中的医用用途,采用液体深层发酵、离心、干燥制备成松茸高产菌株菌粉,经动物行为学实验验证,证明该松茸高产菌株具有明显的抗疲劳功效。本发明方法简单,高产菌株抗疲劳功效显著,无毒副作用,成本低廉,可以广泛应用于该类药用真菌在抗疲劳系列保健品、食品及药品的研发与制备中。本发明的松茸通过深层液体发酵获得,不需要从天然药材中提取,打破野生资源匮乏的局限,安全有效,具有很高的产业化应用前景。CCTCC NO.M 201467120141226
【IPC分类】A61P39/00, A23L1/29, A61K36/07
【公开号】CN104906149
【申请号】CN201510281897
【发明人】滕利荣, 李佺, 孟庆繁, 王迪, 孔繁格, 逯家辉, 刘达, 杨诺, 权宇彤
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月28日