一种苍术挥发油的制备方法及其应用
一种苍术挥发油的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种苍术挥发油的制备方法以及所得苍术挥发油在制备抗肿瘤产品 中的应用，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是一大类恶性肿瘤的统称。癌细胞的特点是无限制、无止境地增生，使患者 体内的营养物质被大量消耗；癌细胞释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还 可转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功 能受损等等。与之相对的有良性肿瘤，良性肿瘤则容易清除干净，一般不转移、不复发，对器 官、组织只有挤压和阻塞作用，但癌症(恶性肿瘤）还可破坏组织、器官的结构和功能，引起 坏死出血合并感染，患者最终由于器官功能衰竭而死亡。到了科学高速发展的今天，我们有 理由相信癌症并非不治之症。
[0003] 癌症严重威胁着人类的生命，是当今世界上大多数国家的主要死因之一。据世界 卫生组织统计，全世界每年死于癌症的患者约500万，因此癌症的治疗和预防任务十分艰 巨。
[0004] 苍术(学名：AtractylodesIancea)为茅苍术或北苍术的干燥根莖，一般均为野 生，多年生直立草本，根状茎平卧或斜升，粗长或通常呈疙瘩状，生多数等粗等长或近等长 的不定根。茎直立，单生或少数茎成簇生，下部或中部以下常紫红色，不分枝或上部但少有 自下部分枝的，全部茎枝被稀疏的蛛丝状毛或无毛。别名赤术、枪头菜、马蓟、青术、仙术、山 精。
[0005] 苍术的主要价值：具有燥湿健脾，祛风湿的功效，主治湿阻中焦，风寒湿痹，脚膝肿 痛，瘘软无力，雀目夜盲，调整胃肠运动功能，有较强的抗溃疡作用，保肝作用，苍术提取物 具有消除耐药福氏痢疾杆菌R质粒的作用，能降低细菌耐药性的产生。
[0006] 其他药理作用：（1)有降血糖作用；（2)抗缺氧，苍术抗缺氧的主要活性成分为 0 _桉叶醇；（3)茅苍术、北苍术、0 -桉叶醇、茅术醇有中枢抑制作用；（4)苍术挥发油、茅 术醇、e-桉叶醇在体外对肿瘤有抑制作用，其中茅术醇作用较强；（5)促进骨骼钙化，苍术 中含有与钙磷吸收有关的维生素D。
[0007] 苍术作为一种中药材在制备抗肿瘤产品中的应用很少见到，从而使得苍术的应用 范围受到了一定的限制，为了扩大抗肿瘤药物的应用品种，本发明特意提供了苍术在制备 抗肿瘤产品中的应用。
【发明内容】
[0008] 为了充分利用苍术的营养价值，扩大抗肿瘤产品的应用品种，本发明特别提供了 一种苍术挥发油的制备方法和其在制备抗肿瘤产品中的应用。
[0009] 为实现上述目的，苍术挥发油的制备方法采用以下技术方案： (1)将新鲜的苍术清洗干净，去除根部，切成长l~3mm小段； (2) 取苍术碎段，置于提取器中，用蒸馏水浸泡，并搅拌溶液； (3) 然后加入苍术碎段重量0.PfO. 5%的生物酶试剂进行酶解处理； (4) 酶解完成后，采用水蒸气蒸馏的工艺，收集蒸馏液； (5) 加入蒸馏液体积2~5倍有机溶剂萃取，并加入苍术碎段重量1/5~1/4的干燥剂脱 水； (6 )采用水浴加热回收有机溶剂，得到苍术挥发油。
[0010] 步骤（2)中所述加入蒸馏水与苍术碎段体积质量比为5~10 :1，浸泡时间为 20~40min。
[0011] 步骤（3)中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶 解时的温度设定在30~45°C，酶解时间为1~3小时。
[0012] 步骤（5)中所述的干燥剂为无水硫酸钠、无水硫酸镁中的一种。
[0013] 步骤（5)中所述的有机溶剂为乙醚。
[0014] 本发明制备的苍挥发油抗肿瘤的药理活性通过以下药理实验得到了验证。
[0015] 选用人食管癌细胞（EC)、人大肠癌（HT-29)细胞或人胃癌细胞（SGC)对数期细胞， 用0. 4%的胰蛋白酶分解细胞后，用含10%胎牛血清的1640培养液中配成单个细胞悬浮液， 接种到96孔培养板中，每孔200yL，置37°C，5%C02的条件下培养72小时，倒置显微镜下 观察。设置实验组和对照组，实验组换新的含不同浓度苍术挥发油培养基(苍术挥发油的浓 度为140. 7、100. 2、80. 6mg/ml)，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3组平行孔，置 37°C，5%C02的条件下培养2~4天，离心（1000转，5min)，弃去上清液。每孔加入100yL新 鲜配置的含〇. 15mg/mlMTT的无血清培养基。37°C继续培养3h。小心弃去上清液，并加入 200yLDMS0,用微型超声振荡器混匀后，在酶标仪上以实验波长为570nm测定光密度值。并 计算不同药剂量对肿瘤细胞的抑制率。结果见下表1。
[0016] 肿瘤细胞抑制率=(I-OD实验/OD对照）*100% 表1 :不同剂量的苍术挥发油对肿瘤细胞的抑制率
由表1可知：苍术提取物对人食管癌细胞（EC)、人大肠癌（HT-29)细胞以及人胃癌细胞 (SGC)有明显的生长抑制作用，其可在抗肿瘤产品中得到应用。
[0017] 本发明所制备的苍术挥发油与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂或 辅剂结合，制成适合人或动物适合的剂型。
[0018] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1 : 首先将清洗干净的苍术去除根部，切成长度为2mm的小段，取100g苍术碎段，加入500 毫升的蒸馏水浸泡30分钟，期间每隔10分钟用玻璃棒搅拌溶液。浸泡30分钟后，加入0.Ig 纤维素酶，在30°C的条件下酶解1小时。酶解完成后，采用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，加入蒸 馏液体积3倍的乙醚萃取，并加入20g无水硫酸钠脱水，37°C水浴回收乙醚，即得苍术挥发 油。
[0020] 实施例2 : 首先将清洗干净的苍术去除根部，切成长度为2mm的小段，取100g苍术碎段，加入750 毫升的蒸馏水浸泡40分钟，期间每隔10分钟用玻璃棒搅拌溶液。浸泡40分钟后，加入0. 3g 纤维素酶，在35°C的条件下酶解2小时。酶解完成后，采用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，加入蒸 馏液体积5倍的乙醚萃取，并加入23g无水硫酸钠脱水，40°C水浴回收乙醚，即得苍术挥发 油。
[0021] 实施例3: 首先将清洗干净的苍术去除根部，切成长度为2mm的小段，取100g苍术碎段，加入1000 ml毫升的蒸馏水浸泡40分钟，期间每隔10分钟用玻璃棒搅拌溶液。浸泡40分钟后， 加入0. 5g纤维素酶，在45°C的条件下酶解3小时。酶解完成后，采用水蒸气蒸馏，收集蒸馏 液，加入蒸馏液体积5倍的乙醚萃取，并加入25g无水硫酸钠脱水，40°C水浴回收乙醚，即得 苍术挥发油。
[0022] 实施例4 : 苍术提取物制成注射剂 在制得的苍术挥发油中加入水、乙醇或它们的混合物作为溶剂，并加入卵磷脂作为增 溶剂，醋酸盐作为PH调节剂，葡萄糖作为渗透压调节剂即可制成注射剂。
[0023] 实施例5 : 苍术提取物制成冻干粉针剂 在制得的苍术挥发油中加入甘露醇、葡萄糖作为支撑剂，制成冻干粉针剂。
【主权项】
1. 一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于它主要是采用以下步骤： (1) 将新鲜的苍术清洗干净，去除根部，切成长l~3mm小段； (2) 取苍术碎段，置于提取器中，用蒸馏水浸泡，并搅拌溶液； (3) 然后加入苍术碎段重量0.PfO. 5%的生物酶试剂进行酶解处理； (4) 酶解完成后，采用水蒸气蒸馏的工艺，收集蒸馏液； (5) 加入蒸馏液体积2~5倍有机溶剂萃取，并加入苍术碎段重量1/5~1/4的干燥剂脱 水； (6 )采用水浴加热回收有机溶剂，得到苍术挥发油。2. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（2)中所述加 入蒸馏水与苍术碎段体积质量比为5~10 :1，浸泡时间为20~40min。3. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（3)中所述的 生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30~45°C， 酶解时间为1~3小时。4. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（5)中所述的 干燥剂为无水硫酸钠、无水硫酸镁中的一种。5. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（5)中所述的 有机溶剂为乙醚。6. 根据权利要求1~5所述方法制备的苍术挥发油在制备抗肿瘤产品中的应用。7. 根据权利要求6所述的抗肿瘤产品为药品、保健品。
【专利摘要】本发明公开了一种苍术挥发油的制备方法及其应用，具体涉及一种利用生物酶解技术辅助减压蒸馏法提取挥发油。本发明采用的工艺步骤是：原材料的处理→浸泡→酶解→蒸馏→萃取→干燥，即得苍术挥发油。其工艺过程简单、合理、操作时间短、挥发油提取率高、应用范围广、具有很高的实用价值。本发明所述的苍术挥发油尤其适合在制备抗肿瘤产品中的应用，所述的产品包括药品、保健品。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/284, C11B9/02
【公开号】CN104906162
【申请号】CN201510263888
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月22日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种苍术挥发油的制备方法以及所得苍术挥发油在制备抗肿瘤产品 中的应用，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是一大类恶性肿瘤的统称。癌细胞的特点是无限制、无止境地增生，使患者 体内的营养物质被大量消耗；癌细胞释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还 可转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功 能受损等等。与之相对的有良性肿瘤，良性肿瘤则容易清除干净，一般不转移、不复发，对器 官、组织只有挤压和阻塞作用，但癌症(恶性肿瘤）还可破坏组织、器官的结构和功能，引起 坏死出血合并感染，患者最终由于器官功能衰竭而死亡。到了科学高速发展的今天，我们有 理由相信癌症并非不治之症。
[0003] 癌症严重威胁着人类的生命，是当今世界上大多数国家的主要死因之一。据世界 卫生组织统计，全世界每年死于癌症的患者约500万，因此癌症的治疗和预防任务十分艰 巨。
[0004] 苍术(学名：AtractylodesIancea)为茅苍术或北苍术的干燥根莖，一般均为野 生，多年生直立草本，根状茎平卧或斜升，粗长或通常呈疙瘩状，生多数等粗等长或近等长 的不定根。茎直立，单生或少数茎成簇生，下部或中部以下常紫红色，不分枝或上部但少有 自下部分枝的，全部茎枝被稀疏的蛛丝状毛或无毛。别名赤术、枪头菜、马蓟、青术、仙术、山 精。
[0005] 苍术的主要价值：具有燥湿健脾，祛风湿的功效，主治湿阻中焦，风寒湿痹，脚膝肿 痛，瘘软无力，雀目夜盲，调整胃肠运动功能，有较强的抗溃疡作用，保肝作用，苍术提取物 具有消除耐药福氏痢疾杆菌R质粒的作用，能降低细菌耐药性的产生。
[0006] 其他药理作用：（1)有降血糖作用；（2)抗缺氧，苍术抗缺氧的主要活性成分为 0 _桉叶醇；（3)茅苍术、北苍术、0 -桉叶醇、茅术醇有中枢抑制作用；（4)苍术挥发油、茅 术醇、e-桉叶醇在体外对肿瘤有抑制作用，其中茅术醇作用较强；（5)促进骨骼钙化，苍术 中含有与钙磷吸收有关的维生素D。
[0007] 苍术作为一种中药材在制备抗肿瘤产品中的应用很少见到，从而使得苍术的应用 范围受到了一定的限制，为了扩大抗肿瘤药物的应用品种，本发明特意提供了苍术在制备 抗肿瘤产品中的应用。
【发明内容】
[0008] 为了充分利用苍术的营养价值，扩大抗肿瘤产品的应用品种，本发明特别提供了 一种苍术挥发油的制备方法和其在制备抗肿瘤产品中的应用。
[0009] 为实现上述目的，苍术挥发油的制备方法采用以下技术方案： (1)将新鲜的苍术清洗干净，去除根部，切成长l~3mm小段； (2) 取苍术碎段，置于提取器中，用蒸馏水浸泡，并搅拌溶液； (3) 然后加入苍术碎段重量0.PfO. 5%的生物酶试剂进行酶解处理； (4) 酶解完成后，采用水蒸气蒸馏的工艺，收集蒸馏液； (5) 加入蒸馏液体积2~5倍有机溶剂萃取，并加入苍术碎段重量1/5~1/4的干燥剂脱 水； (6 )采用水浴加热回收有机溶剂，得到苍术挥发油。
[0010] 步骤（2)中所述加入蒸馏水与苍术碎段体积质量比为5~10 :1，浸泡时间为 20~40min。
[0011] 步骤（3)中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶 解时的温度设定在30~45°C，酶解时间为1~3小时。
[0012] 步骤（5)中所述的干燥剂为无水硫酸钠、无水硫酸镁中的一种。
[0013] 步骤（5)中所述的有机溶剂为乙醚。
[0014] 本发明制备的苍挥发油抗肿瘤的药理活性通过以下药理实验得到了验证。
[0015] 选用人食管癌细胞（EC)、人大肠癌（HT-29)细胞或人胃癌细胞（SGC)对数期细胞， 用0. 4%的胰蛋白酶分解细胞后，用含10%胎牛血清的1640培养液中配成单个细胞悬浮液， 接种到96孔培养板中，每孔200yL，置37°C，5%C02的条件下培养72小时，倒置显微镜下 观察。设置实验组和对照组，实验组换新的含不同浓度苍术挥发油培养基(苍术挥发油的浓 度为140. 7、100. 2、80. 6mg/ml)，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3组平行孔，置 37°C，5%C02的条件下培养2~4天，离心（1000转，5min)，弃去上清液。每孔加入100yL新 鲜配置的含〇. 15mg/mlMTT的无血清培养基。37°C继续培养3h。小心弃去上清液，并加入 200yLDMS0,用微型超声振荡器混匀后，在酶标仪上以实验波长为570nm测定光密度值。并 计算不同药剂量对肿瘤细胞的抑制率。结果见下表1。
[0016] 肿瘤细胞抑制率=(I-OD实验/OD对照）*100% 表1 :不同剂量的苍术挥发油对肿瘤细胞的抑制率
由表1可知：苍术提取物对人食管癌细胞（EC)、人大肠癌（HT-29)细胞以及人胃癌细胞 (SGC)有明显的生长抑制作用，其可在抗肿瘤产品中得到应用。
[0017] 本发明所制备的苍术挥发油与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂或 辅剂结合，制成适合人或动物适合的剂型。
[0018] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1 : 首先将清洗干净的苍术去除根部，切成长度为2mm的小段，取100g苍术碎段，加入500 毫升的蒸馏水浸泡30分钟，期间每隔10分钟用玻璃棒搅拌溶液。浸泡30分钟后，加入0.Ig 纤维素酶，在30°C的条件下酶解1小时。酶解完成后，采用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，加入蒸 馏液体积3倍的乙醚萃取，并加入20g无水硫酸钠脱水，37°C水浴回收乙醚，即得苍术挥发 油。
[0020] 实施例2 : 首先将清洗干净的苍术去除根部，切成长度为2mm的小段，取100g苍术碎段，加入750 毫升的蒸馏水浸泡40分钟，期间每隔10分钟用玻璃棒搅拌溶液。浸泡40分钟后，加入0. 3g 纤维素酶，在35°C的条件下酶解2小时。酶解完成后，采用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，加入蒸 馏液体积5倍的乙醚萃取，并加入23g无水硫酸钠脱水，40°C水浴回收乙醚，即得苍术挥发 油。
[0021] 实施例3: 首先将清洗干净的苍术去除根部，切成长度为2mm的小段，取100g苍术碎段，加入1000 ml毫升的蒸馏水浸泡40分钟，期间每隔10分钟用玻璃棒搅拌溶液。浸泡40分钟后， 加入0. 5g纤维素酶，在45°C的条件下酶解3小时。酶解完成后，采用水蒸气蒸馏，收集蒸馏 液，加入蒸馏液体积5倍的乙醚萃取，并加入25g无水硫酸钠脱水，40°C水浴回收乙醚，即得 苍术挥发油。
[0022] 实施例4 : 苍术提取物制成注射剂 在制得的苍术挥发油中加入水、乙醇或它们的混合物作为溶剂，并加入卵磷脂作为增 溶剂，醋酸盐作为PH调节剂，葡萄糖作为渗透压调节剂即可制成注射剂。
[0023] 实施例5 : 苍术提取物制成冻干粉针剂 在制得的苍术挥发油中加入甘露醇、葡萄糖作为支撑剂，制成冻干粉针剂。
【主权项】
1. 一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于它主要是采用以下步骤： (1) 将新鲜的苍术清洗干净，去除根部，切成长l~3mm小段； (2) 取苍术碎段，置于提取器中，用蒸馏水浸泡，并搅拌溶液； (3) 然后加入苍术碎段重量0.PfO. 5%的生物酶试剂进行酶解处理； (4) 酶解完成后，采用水蒸气蒸馏的工艺，收集蒸馏液； (5) 加入蒸馏液体积2~5倍有机溶剂萃取，并加入苍术碎段重量1/5~1/4的干燥剂脱 水； (6 )采用水浴加热回收有机溶剂，得到苍术挥发油。2. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（2)中所述加 入蒸馏水与苍术碎段体积质量比为5~10 :1，浸泡时间为20~40min。3. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（3)中所述的 生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30~45°C， 酶解时间为1~3小时。4. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（5)中所述的 干燥剂为无水硫酸钠、无水硫酸镁中的一种。5. 根据权利要求1所述的一种苍术挥发油的制备方法，其特征在于：步骤（5)中所述的 有机溶剂为乙醚。6. 根据权利要求1~5所述方法制备的苍术挥发油在制备抗肿瘤产品中的应用。7. 根据权利要求6所述的抗肿瘤产品为药品、保健品。
【专利摘要】本发明公开了一种苍术挥发油的制备方法及其应用，具体涉及一种利用生物酶解技术辅助减压蒸馏法提取挥发油。本发明采用的工艺步骤是：原材料的处理→浸泡→酶解→蒸馏→萃取→干燥，即得苍术挥发油。其工艺过程简单、合理、操作时间短、挥发油提取率高、应用范围广、具有很高的实用价值。本发明所述的苍术挥发油尤其适合在制备抗肿瘤产品中的应用，所述的产品包括药品、保健品。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/284, C11B9/02
【公开号】CN104906162
【申请号】CN201510263888
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月22日
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