黄刺果实多糖降血糖的用图
黄刺果实多糖降血糖的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于保健品领域，具体涉及黄刺果实多糖在制备降血糖药物中的用途。 技术背景
[0002] 据统计，目前我国糖尿病的患病人数已经达到了 9240万，居全球之首（YangW，et al.NEnglJMed，2010,362(12) :1090-1101)。中国糖尿病治疗费用每年高达1734亿元， 糖尿病所致的直接医疗开支已经占到中国医疗总开支的13%(AlcornT，etal.Lancet， 2012,379(9833) :2227-2228)。由此可见，糖尿病不仅严重危害人民的健康，而且为国家带 来沉重的经济负担。因而，防治糖尿病刻不容缓。
[0003]黄刺，小檗科植物直穗小檗BerberisdasystachyaMaxim?，是与白刺、沙棘（黑 刺）一样为蒙、藏、维吾尔等少数民族药用与食用的传统野生浆果，统称为"青海三刺"。《青 海常用中草药手册》中对黄刺皮（即根皮）有详细记载：黄刺皮即为双子叶植物药小檗科 植物直穗小檗的茎皮。其果实医药功能也做了简要的记述，其具有治疗腹痛，消化不良，腹 胀，痢疾等功能。
[0004]目前还未见对黄刺果实多糖降血糖的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供黄刺果实多糖的新用途。
[0006] 具体地，本发明提供了黄刺果实多糖在制备降血糖的药物、保健品或食品中的用 途。
[0007]进一步地，所述药物、保健品或食品是预防或治疗I型、II型糖尿病或/和糖尿病 并发症的药物、保健品或食品。
[0008] 更进一步地，所述药物、保健品或食品是提高胰岛素水平的药物、保健品或食品。
[0009] 更进一步地，所述药物、保健品或食品是提高氧化酶为超氧化物歧化酶S0D、过氧 化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx活性，降低丙二醛MDA浓度的药物、保健品或食品。
[0010] 进一步地，所述药物、保健品或食品是预防或治疗糖尿病并发症的药物、保健品或 食品。
[0011] 其中，所述药物、保健品或食品为口服剂型；进一步地，所述口服剂型选自片剂、胶 囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服液。
[0012] 其中，本发明所述的黄刺果实多糖为小檗科植物直穗小檗Berberisdasystachya Maxim.果实的提取物，提取物中多糖为主要成分。本发明【具体实施方式】中测定表明，提取物 中多糖含量为93±2%w/w，该多糖纯度较高，用此纯度下的多糖进行生物活性实验，其结 果能够真实的反映出黄刺果实多糖的生物活性，有效地避免了其他成分对多糖活性测定的 干扰。在已知多糖生物活性的基础上，即便是降低多糖在提取物中的含量，只要适当调节提 取物用量，使得多糖达到相应的起效浓度，同样能够发挥出相同或相似的生物活性。因此， 本发明限定，提取物中多糖含量应为60~95%w/w。
[0013] 进一步地，提取物中多糖含量为80~95%w/w，更进一步为90~95%w/w。
[0014] 进一步地，所述黄刺果实多糖采用水提醇沉法制备得到。
[0015] 进一步地，醇沉步骤中，乙醇终浓度达到60~85%v/v即可，更进一步为70~ 80%v/v，优选为 75±2%v/v。
[0016] 更进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：将黄刺果实脱脂、去单糖后，加水提 取，水提液脱色、除蛋白、透析除小分子后，加入乙醇，静置，待沉淀完全，取沉淀，干燥，即得 到黄刺果实多糖。
[0017] 即，具体操作流程为：
[0018] (1)脱脂：将黄刺果实粉碎后，过筛，采用石油醚或乙醚为提取溶剂，提取后的残 渣过滤，挥干溶剂，得已脱脂黄刺果实残渣；
[0019] (2)去单糖：所得已脱脂黄刺果实残渣，以乙醇（70~85%v/v)提取，提取后的残 渣挥干溶剂，即得已除单糖黄刺果实残渣；
[0020] (3)粗多糖提取：所得已除单糖黄刺果实残渣，加水提取，提取液浓缩后，即得到 粗多糖提取液；
[0021] (4)粗多糖纯化：粗多糖提取液脱色、除蛋白后，通过透析法，去除分子量在 3500Da以下的小分子物质，再加入乙醇溶液（使其终浓度达到60~85% )，静置，待沉淀完 毕，取沉淀，干燥，即得到黄刺果实多糖。
[0022] 进一步地，去单糖时，所用乙醇浓度为80%v/v。
[0023] 更进一步地，透析除小分子后加入乙醇至含醇量至70~80 %v/v，优选为75 ± 2 % v/v〇
[0024] 经过上述纯化步骤，可以有效提高黄刺果实多糖的纯度。当然，若是仅仅需要制备 纯度较低的黄刺果实多糖，亦可以省略除醇沉外的其他纯化步骤中的一项或多项。
[0025] 另外，对于多糖的脱色处理，常常采用离子交换法（如DEAE-纤维素）、氧化法（如 H2O2)、吸附法（如活性炭）等，在实际使用过程中可以根据自身需求，结合后期多糖的收率 和纯度来选定适合的脱色方法，本发明一个【具体实施方式】中选用H2O2脱色，但这并不限于 本发明仅仅只能使用此种脱色方式。
[0026] 对于除蛋白而言，常用方法有三氯乙酸法、盐酸法、Sevage法（亦有记载为Sevag 法）等，在实际使用过程中可以根据自身需求，结合后期多糖的收率和纯度来选定适合的 除蛋白方法，本发明一个【具体实施方式】中选用Sevage法，但这并不限于本发明仅仅只能使 用此种除蛋白方式。
[0027] 其中，所述黄刺为小檗科植物直穗小檗BerberisdasystachyaMaxim.。
[0028] 本发明研宄发现，黄刺果实多糖具有良好的降血糖功能，可升高胰岛素量，对相应 的ROS代谢相关酶活性即：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性有一定 程度的调节作用。
[0029] 同时，本发明还发现，黄刺果实高剂量组的效果与格列本脲的效果相当，而格列本 脲虽为治疗糖尿病的一线化学药物，长期大量地服用格列本脲，最终会造成病人的低血糖 和肾病，甚至导致死亡，反之，黄刺果实本为可食用浆果，安全性良好，更适合作为治疗和预 防糖尿病的食品、保健品或药物。
【附图说明】：
[0030] 图1黄刺果实多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠的体重的影响
【具体实施方式】
[0031] 本发明【具体实施方式】中使用的黄刺果实多糖采用常规的多糖提取、纯化方式制备 得到，在本发明中具体操作如下：
[0032] 实施例1 :黄刺果实多糖的制备
[0033] 1)黄刺果实脱脂：取成熟的黄刺（即直穗小檗）的果实400g烘干，粉碎后过筛； 取黄刺果实与石油醚混合，混合后超声提取，离心除去提取液，残渣过滤，挥干石油醚，得已 除脂黄刺果实残渣；
[0034] 2)黄刺果实除单糖：已除脂黄刺果实残渣与乙醇混合，所述乙醇浓度为70~85% v/v，回流提取，离心除去提取液，残渣过滤后挥干乙醇，得已除单糖黄刺果实残渣；
[0035] 3)黄刺粗多糖提取：将步骤2)所得已除单糖黄刺果实残渣与纯水混合，微波辅助 提取，离心得到提取液，残渣过滤后弃去；提取液浓缩得到粗多糖提取液；
[0036] 4)黄刺粗多糖的纯化：粗多糖提取液中依次采用H2O2，进行脱色、Savege法除去蛋 白质，再透析除去3500Da以下小分子物质，得到纯化的多糖水提液；
[0037] 5)黄刺果实多糖的制备：将步骤4)所得的已纯化的多糖水提液浓缩液加入乙醇 溶液，使乙醇终浓度达到75%v/v，所得沉淀干燥后，即得到黄刺果实多糖BDP共计2. 06g。
[0038] 实施例2 :黄刺果实多糖的制备
[0039] 1)黄刺果实脱脂：取成熟的黄刺（即直穗小檗）的果实400g烘干，粉碎后过筛； 取黄刺果实与石油醚混合，回流提取，离心除去提取液，残渣过滤，挥干石油醚，得已除脂黄 刺果实残渣；
[0040]2)黄刺果实除单糖：已除脂黄刺果实残渣与乙醇混合，所述乙醇浓度为70~85% v/v，超声提取，离心除去提取液，残渣过滤后挥干乙醇，得已除单糖黄刺果实残渣；
[0041] 3)黄刺粗多糖提取：将步骤2)所得已除单糖黄刺果实残渣与纯水混合，温浸提 取，离心得到提取液，残渣过滤后弃去；提取液浓缩得到粗多糖提取液；
[0042] 4)黄刺粗多糖的纯化：粗多糖提取液中依次采用H2O2，进行脱色、Savege法除去蛋 白质，再透析除去3500Da以下小分子物质，得到纯化的多糖水提液；
[0043] 5)黄刺果实多糖的制备：将步骤4)所得的已纯化的多糖水提液浓缩液加入乙醇 溶液，使乙醇终浓度达到80%v/v，所得沉淀干燥，即得到黄刺果实多糖BDP共计I. 355g。
[0044] 实施例3:黄刺果实多糖的制备
[0045] 1)黄刺果实脱脂：取成熟的黄刺（即直穗小檗）的果实400g烘干，粉碎后过筛； 取黄刺果实与石油醚混合，超声后再回流提取，离心除去提取液，残渣过滤，挥干石油醚，得 已除脂黄刺果实残渣；
[0046] 2)黄刺果实除单糖：已除脂黄刺果实残渣与乙醇混合，所述乙醇浓度为70~85% v/v，超声提取，离心除去提取液，残渣过滤后挥干乙醇，得已除单糖黄刺果实残渣；
[0047] 3)黄刺粗多糖提取：将步骤2)所得已除单糖黄刺果实残渣与纯水混合，回流提 取，离心得到提取液，残渣过滤后弃去；提取液浓缩得到粗多糖提取液；
[0048] 4)黄刺粗多糖的纯化 ：粗多糖提取液中依次采用H2O2，进行脱色、Savege法除去蛋 白质，再透析除去3500Da以下小分子物质，得到纯化的多糖水提液；
[0049] 5)黄刺果实多糖的制备：将步骤4)所得的已纯化的多糖水提液浓缩液加入乙醇 溶液，使乙醇终浓度达到70%v/v，所得沉淀用20mL无水乙醇洗涤3次，其洗涤后的沉淀物 进行喷雾干燥，使得物料水分含量降至10 %以下，得到黄刺果实多糖BDP共计I. 67g。
[0050] 对本发明方法制备的黄刺果实多糖进行蒽酮-硫酸法测定，其中多糖含量为93% ±2w/w〇
[0051] 实施例4黄刺果实多糖降血糖作用实验
[0052] 1)实验药物：黄刺果实多糖，为本发明制备所得。给药量按大鼠体重计，灌胃低剂 量、中剂量、高剂量分别为75mg/kg，150mg/kg，300mg/kg(以制备所得多糖质量计）
[0053] 2)动物：四周龄昆明大鼠，雄性，普通级，135g，由甘肃中医学院提供。于实验室内 安置于鼠笼中饲养一周后进行实验（每笼8只，温度22± 1°C，湿度42% ±2% )。分为六 组：分别为空白组（静脉注射柠檬酸缓冲液未造模，超纯水灌胃），模型组（尾静脉注射STZ 造模，超纯水灌胃），阳性药组（尾静脉注射STZ造模，格列本脲20mg/kg灌胃），黄刺果实 多糖低剂量组BDP-L(尾静脉注射STZ造模，黄刺果实多糖灌胃75mg/kg)，黄刺果实多糖中 剂量组BDP-M(尾静脉注射STZ造模，黄刺果实多糖灌胃150mg/kg)，黄刺果实多糖高剂量 组BDP-H(尾静脉注射STZ造模，黄刺果实多糖灌胃300mg/kg)。造模方法：提前禁食16h， 而后对其进行STZ(柠檬酸缓冲液配制）尾静脉注射60mg/kg，注射后，72小时测其血糖，检 验模型成功与否。
[0054] 3)实验试剂：95%医用酒精，南京宁氏化学试剂有限公司；生理盐水，山东齐都药 业有限公司；超氧化物歧化酶（SOD)、过氧化氢酶（CAT)/谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX)，丙 二醛（MDA)南京建成生物科技有限公司。
[0055] 4)实验仪器：Bi〇-Rad680型酶标仪，美国伯乐公司；DS-I型组织匀浆仪，上海正慧 工贸有限公司；TGL-16G-A型管式离心机，上海安亭科学仪器厂；UV-722N可见紫外分光光 度计，上海尼柯有限公司；HD型恒温水浴锅，辽阳市恒温仪器厂。
[0056] 5)实验过程：取健康SD大鼠48只，按体重随机分为6组，分为空白组、模型组、阳 性药组和低，中，高剂量组。空白组和模型组每天灌胃给予蒸馏水；阳性药组每天灌胃给予 格列本脲1次；给受试药物组每天灌胃给予黄刺果实多糖1次，六组均连续给予28d，其中 每组保持每隔7天测一次血糖，并记录；末次给予受试物后，麻醉后，经颈动脉取血，所取得 血离心取上清，用于检测末次血糖和胰岛素。至其死亡后，取大鼠肝脏组织，用生理盐水洗 去表面血污，用滤纸吸干，组织匀浆仪进行匀浆，收集匀浆液到离心管中，以3000rpm离心 lOmin，吸取上清液，进行氧化酶和丙二醛活性测定（结果见表1和表2)。
[0057] 6)黄刺果实多糖降低患糖尿病大鼠体内的血糖、体重、胰岛素的测定及结果
[0058] 表1黄刺果实多糖对STZ诱导的大鼠血糖的影响（Mean土SD)
[0059]
[0063] 注：与正常组比较ap< 0. 05 ;与成模组比较bp< 0. 05 ;
[0064] 体重测定数据见图1。
[0065] 由表1、2和图1可知，本发明黄刺果实多糖各剂量组对STZ诱导的糖尿病大鼠的 血糖具有降低作用，对胰岛素、体重具调节上升作用，且呈剂量效应关系，高剂量组与模型 组有显著性差异（P< 〇. 05)。同时，实验表明，高剂量组的效果与格列本脲的效果相当，而 格列本脲作为化学合成的药品，其对机体有一定的副作用，因此，建议采用天然植物中提取 的黄刺果实多糖可做替代药物使用。
[0066] 7)黄刺果实多糖降低患糖尿病大鼠体内氧化酶及MDA测定及结果
[0067] STZ诱导的糖尿病，会使得大鼠胰岛细胞发生核固缩，和玻璃样病变。其脂代谢随 之发生紊乱。同时被诱导大鼠体内的自由基迅速增加以作出应激反应，这时大量的自由基 将诱导细胞或者组织损伤，随之会出现糖尿病引发的各种并发症。有研宄表明，体内常见的 氧化酶为超氧化物歧化酶S0D、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx，这三种酶的存 在可以减少活性氧的量，并且降低由脂代谢紊乱造成的自由基对细胞的损害，且可以减少 自由基破坏细胞膜或者其膜内的DNA及蛋白质。因此，选择糖尿病大鼠体内肝脏中这三种 酶活性作为其体内抗氧化活性的指标。
[0068] 机体通过酶系统和非酶系统产生氧自由基，后者能共计生物膜中的多不饱和脂肪 酸PUFA，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。组织在发生脂质过氧化的时候， 产生了大量的醛类、醇类和烃类物质，醛类以丙二醛（MDA)最具代表性，所以体系中丙二醛 的含量高低可间接反映体系中脂质过氧化作用的强弱。MDA的测定常常与SOD的测定相互 配合，SOD的活力的高低简介反映了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又反映了机体 细胞收自由基攻击的严重程度。（以酶活力/mg蛋白计）
[0069] 表3黄刺果实多糖成分对STZ诱导的大鼠SOD，CAT，GSH-PX，MDA影响（Mean土SD)
[0070]
[0071] 注：与正常组比较ap< 0. 05 ;与成模组比较bp< 0. 05 ;与正常组相比。p< 0. 05.
[0072] 黄刺果实多糖能够使实验大鼠SOD，CAT，GSH活性增加，进而达到调节机体脂代谢 紊乱的作用。而对于给药组MDA与模型组相比，均有不同程度的降低，说明给药组对于脂质 过氧化有很好的抑制作用。
[0073] 实验结论：对STZ诱导的糖尿病大鼠进行灌胃，患糖尿病大鼠的血糖具有降低作 用，对胰岛素、体重具调节上升作用，且呈剂量效应关系，高剂量组与模型组有显著性差异(P< 0. 05)。对相应的ROS代谢相关酶活性即：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过 氧化物酶活性有一定程度的调节作用，且上述调节作用与用药浓度呈一定的量效关系。
【主权项】
1. 黄刺果实多糖在制备降血糖的药物、保健品或食品中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品是预防或治疗I 型、II型糖尿病或/和糖尿病并发症的药物、保健品或食品。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品是提高胰岛 素水平的药物、保健品或食品。4. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品是提高氧化 酶为超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx活性，降低丙二醛 MDA浓度的药物、保健品或食品。5. 根据权利要求1~4任意一项所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品 为口服剂型；进一步地，所述口服剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服 液。6. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：多糖纯度为60-95%w/w，进一步为80~ 95%w/w，更进一步为 90 ~95%w/w。7. 根据权利要求1~6任意一项所述的用途，其特征在于：所述黄刺果实多糖采用 水提醇沉法制备得到；进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：将黄刺果实脱脂、去单 糖后，加水提取，水提液脱色、除蛋白、透析除小分子后，加入乙醇至乙醇终浓度达到60~ 85%v/v，静置，待沉淀完全，取沉淀，干燥，即得到黄刺果实多糖；更进一步地，透析除去的 小分子分子量在3500Da以下。8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：脱脂具体操作如下：将黄刺果实粉碎后， 过筛，采用石油醚或乙醚为提取溶剂，提取后的残渣过滤，挥干溶剂，得已脱脂黄刺果实残 渣；去单糖的具体操作如下：所得已脱脂黄刺果实残渣，以70~85%v/v乙醇提取，提取后 的残渣挥干溶剂，即得已除单糖黄刺果实残渣；优选的乙醇浓度为80%v/v。9. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：透析除小分子后加入乙醇至含醇量至 70 ~80%v/v，优选为 75±2%v/v.。10. 根据权利要求1~9任意一项所述的用途，其特征在于：所述黄刺为小檗科植物直 糖、小藥BerberisdasystachyaMaxim. 〇
【专利摘要】本发明提供了黄刺果实多糖在制备降血糖的药物、保健品或食品中的用途。本发明研究发现，黄刺果实多糖具有良好的降血糖功能，可升高胰岛素量，对相应的ROS代谢相关酶活性即：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性有一定程度的调节作用。同时，本发明还发现，黄刺果实高剂量组的效果与格列本脲的效果相当，而格列本脲虽为治疗糖尿病的一线化学药物，长期大量地服用格列本脲，最终会造成病人的低血糖和肾病，甚至导致死亡，反之，黄刺果实本为可食用浆果，安全性良好，更适合作为治疗和预防糖尿病的食品、保健品或药物。
【IPC分类】A61K131/00, A61P3/10, A61K36/29, A61K31/715, A23L1/29
【公开号】CN104906164
【申请号】CN201510323317
【发明人】索有瑞, 韩丽娟, 杨永晶, 杨芳
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月9日
【技术领域】
[0001] 本发明属于保健品领域，具体涉及黄刺果实多糖在制备降血糖药物中的用途。 技术背景
[0002] 据统计，目前我国糖尿病的患病人数已经达到了 9240万，居全球之首（YangW，et al.NEnglJMed，2010,362(12) :1090-1101)。中国糖尿病治疗费用每年高达1734亿元， 糖尿病所致的直接医疗开支已经占到中国医疗总开支的13%(AlcornT，etal.Lancet， 2012,379(9833) :2227-2228)。由此可见，糖尿病不仅严重危害人民的健康，而且为国家带 来沉重的经济负担。因而，防治糖尿病刻不容缓。
[0003]黄刺，小檗科植物直穗小檗BerberisdasystachyaMaxim?，是与白刺、沙棘（黑 刺）一样为蒙、藏、维吾尔等少数民族药用与食用的传统野生浆果，统称为"青海三刺"。《青 海常用中草药手册》中对黄刺皮（即根皮）有详细记载：黄刺皮即为双子叶植物药小檗科 植物直穗小檗的茎皮。其果实医药功能也做了简要的记述，其具有治疗腹痛，消化不良，腹 胀，痢疾等功能。
[0004]目前还未见对黄刺果实多糖降血糖的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供黄刺果实多糖的新用途。
[0006] 具体地，本发明提供了黄刺果实多糖在制备降血糖的药物、保健品或食品中的用 途。
[0007]进一步地，所述药物、保健品或食品是预防或治疗I型、II型糖尿病或/和糖尿病 并发症的药物、保健品或食品。
[0008] 更进一步地，所述药物、保健品或食品是提高胰岛素水平的药物、保健品或食品。
[0009] 更进一步地，所述药物、保健品或食品是提高氧化酶为超氧化物歧化酶S0D、过氧 化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx活性，降低丙二醛MDA浓度的药物、保健品或食品。
[0010] 进一步地，所述药物、保健品或食品是预防或治疗糖尿病并发症的药物、保健品或 食品。
[0011] 其中，所述药物、保健品或食品为口服剂型；进一步地，所述口服剂型选自片剂、胶 囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服液。
[0012] 其中，本发明所述的黄刺果实多糖为小檗科植物直穗小檗Berberisdasystachya Maxim.果实的提取物，提取物中多糖为主要成分。本发明【具体实施方式】中测定表明，提取物 中多糖含量为93±2%w/w，该多糖纯度较高，用此纯度下的多糖进行生物活性实验，其结 果能够真实的反映出黄刺果实多糖的生物活性，有效地避免了其他成分对多糖活性测定的 干扰。在已知多糖生物活性的基础上，即便是降低多糖在提取物中的含量，只要适当调节提 取物用量，使得多糖达到相应的起效浓度，同样能够发挥出相同或相似的生物活性。因此， 本发明限定，提取物中多糖含量应为60~95%w/w。
[0013] 进一步地，提取物中多糖含量为80~95%w/w，更进一步为90~95%w/w。
[0014] 进一步地，所述黄刺果实多糖采用水提醇沉法制备得到。
[0015] 进一步地，醇沉步骤中，乙醇终浓度达到60~85%v/v即可，更进一步为70~ 80%v/v，优选为 75±2%v/v。
[0016] 更进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：将黄刺果实脱脂、去单糖后，加水提 取，水提液脱色、除蛋白、透析除小分子后，加入乙醇，静置，待沉淀完全，取沉淀，干燥，即得 到黄刺果实多糖。
[0017] 即，具体操作流程为：
[0018] (1)脱脂：将黄刺果实粉碎后，过筛，采用石油醚或乙醚为提取溶剂，提取后的残 渣过滤，挥干溶剂，得已脱脂黄刺果实残渣；
[0019] (2)去单糖：所得已脱脂黄刺果实残渣，以乙醇（70~85%v/v)提取，提取后的残 渣挥干溶剂，即得已除单糖黄刺果实残渣；
[0020] (3)粗多糖提取：所得已除单糖黄刺果实残渣，加水提取，提取液浓缩后，即得到 粗多糖提取液；
[0021] (4)粗多糖纯化：粗多糖提取液脱色、除蛋白后，通过透析法，去除分子量在 3500Da以下的小分子物质，再加入乙醇溶液（使其终浓度达到60~85% )，静置，待沉淀完 毕，取沉淀，干燥，即得到黄刺果实多糖。
[0022] 进一步地，去单糖时，所用乙醇浓度为80%v/v。
[0023] 更进一步地，透析除小分子后加入乙醇至含醇量至70~80 %v/v，优选为75 ± 2 % v/v〇
[0024] 经过上述纯化步骤，可以有效提高黄刺果实多糖的纯度。当然，若是仅仅需要制备 纯度较低的黄刺果实多糖，亦可以省略除醇沉外的其他纯化步骤中的一项或多项。
[0025] 另外，对于多糖的脱色处理，常常采用离子交换法（如DEAE-纤维素）、氧化法（如 H2O2)、吸附法（如活性炭）等，在实际使用过程中可以根据自身需求，结合后期多糖的收率 和纯度来选定适合的脱色方法，本发明一个【具体实施方式】中选用H2O2脱色，但这并不限于 本发明仅仅只能使用此种脱色方式。
[0026] 对于除蛋白而言，常用方法有三氯乙酸法、盐酸法、Sevage法（亦有记载为Sevag 法）等，在实际使用过程中可以根据自身需求，结合后期多糖的收率和纯度来选定适合的 除蛋白方法，本发明一个【具体实施方式】中选用Sevage法，但这并不限于本发明仅仅只能使 用此种除蛋白方式。
[0027] 其中，所述黄刺为小檗科植物直穗小檗BerberisdasystachyaMaxim.。
[0028] 本发明研宄发现，黄刺果实多糖具有良好的降血糖功能，可升高胰岛素量，对相应 的ROS代谢相关酶活性即：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性有一定 程度的调节作用。
[0029] 同时，本发明还发现，黄刺果实高剂量组的效果与格列本脲的效果相当，而格列本 脲虽为治疗糖尿病的一线化学药物，长期大量地服用格列本脲，最终会造成病人的低血糖 和肾病，甚至导致死亡，反之，黄刺果实本为可食用浆果，安全性良好，更适合作为治疗和预 防糖尿病的食品、保健品或药物。
【附图说明】：
[0030] 图1黄刺果实多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠的体重的影响
【具体实施方式】
[0031] 本发明【具体实施方式】中使用的黄刺果实多糖采用常规的多糖提取、纯化方式制备 得到，在本发明中具体操作如下：
[0032] 实施例1 :黄刺果实多糖的制备
[0033] 1)黄刺果实脱脂：取成熟的黄刺（即直穗小檗）的果实400g烘干，粉碎后过筛； 取黄刺果实与石油醚混合，混合后超声提取，离心除去提取液，残渣过滤，挥干石油醚，得已 除脂黄刺果实残渣；
[0034] 2)黄刺果实除单糖：已除脂黄刺果实残渣与乙醇混合，所述乙醇浓度为70~85% v/v，回流提取，离心除去提取液，残渣过滤后挥干乙醇，得已除单糖黄刺果实残渣；
[0035] 3)黄刺粗多糖提取：将步骤2)所得已除单糖黄刺果实残渣与纯水混合，微波辅助 提取，离心得到提取液，残渣过滤后弃去；提取液浓缩得到粗多糖提取液；
[0036] 4)黄刺粗多糖的纯化：粗多糖提取液中依次采用H2O2，进行脱色、Savege法除去蛋 白质，再透析除去3500Da以下小分子物质，得到纯化的多糖水提液；
[0037] 5)黄刺果实多糖的制备：将步骤4)所得的已纯化的多糖水提液浓缩液加入乙醇 溶液，使乙醇终浓度达到75%v/v，所得沉淀干燥后，即得到黄刺果实多糖BDP共计2. 06g。
[0038] 实施例2 :黄刺果实多糖的制备
[0039] 1)黄刺果实脱脂：取成熟的黄刺（即直穗小檗）的果实400g烘干，粉碎后过筛； 取黄刺果实与石油醚混合，回流提取，离心除去提取液，残渣过滤，挥干石油醚，得已除脂黄 刺果实残渣；
[0040]2)黄刺果实除单糖：已除脂黄刺果实残渣与乙醇混合，所述乙醇浓度为70~85% v/v，超声提取，离心除去提取液，残渣过滤后挥干乙醇，得已除单糖黄刺果实残渣；
[0041] 3)黄刺粗多糖提取：将步骤2)所得已除单糖黄刺果实残渣与纯水混合，温浸提 取，离心得到提取液，残渣过滤后弃去；提取液浓缩得到粗多糖提取液；
[0042] 4)黄刺粗多糖的纯化：粗多糖提取液中依次采用H2O2，进行脱色、Savege法除去蛋 白质，再透析除去3500Da以下小分子物质，得到纯化的多糖水提液；
[0043] 5)黄刺果实多糖的制备：将步骤4)所得的已纯化的多糖水提液浓缩液加入乙醇 溶液，使乙醇终浓度达到80%v/v，所得沉淀干燥，即得到黄刺果实多糖BDP共计I. 355g。
[0044] 实施例3:黄刺果实多糖的制备
[0045] 1)黄刺果实脱脂：取成熟的黄刺（即直穗小檗）的果实400g烘干，粉碎后过筛； 取黄刺果实与石油醚混合，超声后再回流提取，离心除去提取液，残渣过滤，挥干石油醚，得 已除脂黄刺果实残渣；
[0046] 2)黄刺果实除单糖：已除脂黄刺果实残渣与乙醇混合，所述乙醇浓度为70~85% v/v，超声提取，离心除去提取液，残渣过滤后挥干乙醇，得已除单糖黄刺果实残渣；
[0047] 3)黄刺粗多糖提取：将步骤2)所得已除单糖黄刺果实残渣与纯水混合，回流提 取，离心得到提取液，残渣过滤后弃去；提取液浓缩得到粗多糖提取液；
[0048] 4)黄刺粗多糖的纯化 ：粗多糖提取液中依次采用H2O2，进行脱色、Savege法除去蛋 白质，再透析除去3500Da以下小分子物质，得到纯化的多糖水提液；
[0049] 5)黄刺果实多糖的制备：将步骤4)所得的已纯化的多糖水提液浓缩液加入乙醇 溶液，使乙醇终浓度达到70%v/v，所得沉淀用20mL无水乙醇洗涤3次，其洗涤后的沉淀物 进行喷雾干燥，使得物料水分含量降至10 %以下，得到黄刺果实多糖BDP共计I. 67g。
[0050] 对本发明方法制备的黄刺果实多糖进行蒽酮-硫酸法测定，其中多糖含量为93% ±2w/w〇
[0051] 实施例4黄刺果实多糖降血糖作用实验
[0052] 1)实验药物：黄刺果实多糖，为本发明制备所得。给药量按大鼠体重计，灌胃低剂 量、中剂量、高剂量分别为75mg/kg，150mg/kg，300mg/kg(以制备所得多糖质量计）
[0053] 2)动物：四周龄昆明大鼠，雄性，普通级，135g，由甘肃中医学院提供。于实验室内 安置于鼠笼中饲养一周后进行实验（每笼8只，温度22± 1°C，湿度42% ±2% )。分为六 组：分别为空白组（静脉注射柠檬酸缓冲液未造模，超纯水灌胃），模型组（尾静脉注射STZ 造模，超纯水灌胃），阳性药组（尾静脉注射STZ造模，格列本脲20mg/kg灌胃），黄刺果实 多糖低剂量组BDP-L(尾静脉注射STZ造模，黄刺果实多糖灌胃75mg/kg)，黄刺果实多糖中 剂量组BDP-M(尾静脉注射STZ造模，黄刺果实多糖灌胃150mg/kg)，黄刺果实多糖高剂量 组BDP-H(尾静脉注射STZ造模，黄刺果实多糖灌胃300mg/kg)。造模方法：提前禁食16h， 而后对其进行STZ(柠檬酸缓冲液配制）尾静脉注射60mg/kg，注射后，72小时测其血糖，检 验模型成功与否。
[0054] 3)实验试剂：95%医用酒精，南京宁氏化学试剂有限公司；生理盐水，山东齐都药 业有限公司；超氧化物歧化酶（SOD)、过氧化氢酶（CAT)/谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX)，丙 二醛（MDA)南京建成生物科技有限公司。
[0055] 4)实验仪器：Bi〇-Rad680型酶标仪，美国伯乐公司；DS-I型组织匀浆仪，上海正慧 工贸有限公司；TGL-16G-A型管式离心机，上海安亭科学仪器厂；UV-722N可见紫外分光光 度计，上海尼柯有限公司；HD型恒温水浴锅，辽阳市恒温仪器厂。
[0056] 5)实验过程：取健康SD大鼠48只，按体重随机分为6组，分为空白组、模型组、阳 性药组和低，中，高剂量组。空白组和模型组每天灌胃给予蒸馏水；阳性药组每天灌胃给予 格列本脲1次；给受试药物组每天灌胃给予黄刺果实多糖1次，六组均连续给予28d，其中 每组保持每隔7天测一次血糖，并记录；末次给予受试物后，麻醉后，经颈动脉取血，所取得 血离心取上清，用于检测末次血糖和胰岛素。至其死亡后，取大鼠肝脏组织，用生理盐水洗 去表面血污，用滤纸吸干，组织匀浆仪进行匀浆，收集匀浆液到离心管中，以3000rpm离心 lOmin，吸取上清液，进行氧化酶和丙二醛活性测定（结果见表1和表2)。
[0057] 6)黄刺果实多糖降低患糖尿病大鼠体内的血糖、体重、胰岛素的测定及结果
[0058] 表1黄刺果实多糖对STZ诱导的大鼠血糖的影响（Mean土SD)
[0059]
[0063] 注：与正常组比较ap< 0. 05 ;与成模组比较bp< 0. 05 ;
[0064] 体重测定数据见图1。
[0065] 由表1、2和图1可知，本发明黄刺果实多糖各剂量组对STZ诱导的糖尿病大鼠的 血糖具有降低作用，对胰岛素、体重具调节上升作用，且呈剂量效应关系，高剂量组与模型 组有显著性差异（P< 〇. 05)。同时，实验表明，高剂量组的效果与格列本脲的效果相当，而 格列本脲作为化学合成的药品，其对机体有一定的副作用，因此，建议采用天然植物中提取 的黄刺果实多糖可做替代药物使用。
[0066] 7)黄刺果实多糖降低患糖尿病大鼠体内氧化酶及MDA测定及结果
[0067] STZ诱导的糖尿病，会使得大鼠胰岛细胞发生核固缩，和玻璃样病变。其脂代谢随 之发生紊乱。同时被诱导大鼠体内的自由基迅速增加以作出应激反应，这时大量的自由基 将诱导细胞或者组织损伤，随之会出现糖尿病引发的各种并发症。有研宄表明，体内常见的 氧化酶为超氧化物歧化酶S0D、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx，这三种酶的存 在可以减少活性氧的量，并且降低由脂代谢紊乱造成的自由基对细胞的损害，且可以减少 自由基破坏细胞膜或者其膜内的DNA及蛋白质。因此，选择糖尿病大鼠体内肝脏中这三种 酶活性作为其体内抗氧化活性的指标。
[0068] 机体通过酶系统和非酶系统产生氧自由基，后者能共计生物膜中的多不饱和脂肪 酸PUFA，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。组织在发生脂质过氧化的时候， 产生了大量的醛类、醇类和烃类物质，醛类以丙二醛（MDA)最具代表性，所以体系中丙二醛 的含量高低可间接反映体系中脂质过氧化作用的强弱。MDA的测定常常与SOD的测定相互 配合，SOD的活力的高低简介反映了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又反映了机体 细胞收自由基攻击的严重程度。（以酶活力/mg蛋白计）
[0069] 表3黄刺果实多糖成分对STZ诱导的大鼠SOD，CAT，GSH-PX，MDA影响（Mean土SD)
[0070]
[0071] 注：与正常组比较ap< 0. 05 ;与成模组比较bp< 0. 05 ;与正常组相比。p< 0. 05.
[0072] 黄刺果实多糖能够使实验大鼠SOD，CAT，GSH活性增加，进而达到调节机体脂代谢 紊乱的作用。而对于给药组MDA与模型组相比，均有不同程度的降低，说明给药组对于脂质 过氧化有很好的抑制作用。
[0073] 实验结论：对STZ诱导的糖尿病大鼠进行灌胃，患糖尿病大鼠的血糖具有降低作 用，对胰岛素、体重具调节上升作用，且呈剂量效应关系，高剂量组与模型组有显著性差异(P< 0. 05)。对相应的ROS代谢相关酶活性即：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过 氧化物酶活性有一定程度的调节作用，且上述调节作用与用药浓度呈一定的量效关系。
【主权项】
1. 黄刺果实多糖在制备降血糖的药物、保健品或食品中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品是预防或治疗I 型、II型糖尿病或/和糖尿病并发症的药物、保健品或食品。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品是提高胰岛 素水平的药物、保健品或食品。4. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品是提高氧化 酶为超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx活性，降低丙二醛 MDA浓度的药物、保健品或食品。5. 根据权利要求1~4任意一项所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品 为口服剂型；进一步地，所述口服剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服 液。6. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：多糖纯度为60-95%w/w，进一步为80~ 95%w/w，更进一步为 90 ~95%w/w。7. 根据权利要求1~6任意一项所述的用途，其特征在于：所述黄刺果实多糖采用 水提醇沉法制备得到；进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：将黄刺果实脱脂、去单 糖后，加水提取，水提液脱色、除蛋白、透析除小分子后，加入乙醇至乙醇终浓度达到60~ 85%v/v，静置，待沉淀完全，取沉淀，干燥，即得到黄刺果实多糖；更进一步地，透析除去的 小分子分子量在3500Da以下。8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：脱脂具体操作如下：将黄刺果实粉碎后， 过筛，采用石油醚或乙醚为提取溶剂，提取后的残渣过滤，挥干溶剂，得已脱脂黄刺果实残 渣；去单糖的具体操作如下：所得已脱脂黄刺果实残渣，以70~85%v/v乙醇提取，提取后 的残渣挥干溶剂，即得已除单糖黄刺果实残渣；优选的乙醇浓度为80%v/v。9. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：透析除小分子后加入乙醇至含醇量至 70 ~80%v/v，优选为 75±2%v/v.。10. 根据权利要求1~9任意一项所述的用途，其特征在于：所述黄刺为小檗科植物直 糖、小藥BerberisdasystachyaMaxim. 〇
【专利摘要】本发明提供了黄刺果实多糖在制备降血糖的药物、保健品或食品中的用途。本发明研究发现，黄刺果实多糖具有良好的降血糖功能，可升高胰岛素量，对相应的ROS代谢相关酶活性即：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性有一定程度的调节作用。同时，本发明还发现，黄刺果实高剂量组的效果与格列本脲的效果相当，而格列本脲虽为治疗糖尿病的一线化学药物，长期大量地服用格列本脲，最终会造成病人的低血糖和肾病，甚至导致死亡，反之，黄刺果实本为可食用浆果，安全性良好，更适合作为治疗和预防糖尿病的食品、保健品或药物。
【IPC分类】A61K131/00, A61P3/10, A61K36/29, A61K31/715, A23L1/29
【公开号】CN104906164
【申请号】CN201510323317
【发明人】索有瑞, 韩丽娟, 杨永晶, 杨芳
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月9日
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