含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物的制作方法
含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物的制作方法【
技术领域：
】[0001]本发明涉及用于激活线粒体的组合物。【
背景技术：
】[0002]线粒体是可以在大多数真核细胞中发现的细胞器，而且具有它们自己的、区别于核DNA的线粒体DNA(?切姻)。线粒体的主要功能为生成用作细胞能源的三磷酸腺苷（ATP)。ATP是使用线粒体基质内产生的NADH和FADH2、通过TCA循环(三羧酸循环)、从电子传递链产生的。因此，产生的ATP将用于各种需要能量的生物合成和代谢过程。[0003]此外，线粒体会在基质中贮存对细胞内信号传导起重要作用的钙离子，并且向细胞质提供它们。进一步，已知它们在细胞凋亡、细胞增殖和细胞代谢中起核心作用。[0004]与核DNA不同是，由于所述线粒体DNA(?故财）缺乏修复机制以及能保护DNA的蛋白质组蛋白，从而相对容易受到损伤。线粒体DNA的损伤将导致线粒体功能的下降且引起细胞活动所需的能源ATP合成的降低，从而引发各种线粒体疾病。【
发明内容】[0005]技术问题本发明在于提供用于激活线粒体的组合物。[0006]技术方案在一方面，本发明提供用于激活线粒体的组合物，该组合物含有香豆雌酚(乃，或者含有包含香豆雌酚的豆提取物，所述香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物作为活性成分。[0007]有益效果本发明的一个实施例中用于激活线粒体的、含有作为活性成分的香豆雌酚(COWffie1StrojO或包含香豆雌酷的豆提取物的组合物，可以激活乙酰化酶I(SIRTl)且能够增加细胞内线粒体的数量。因此，所述组合物可以通过促进能量代谢来提供缓解疲劳、提高耐力、增强肌肉力量或改善运动机能的效果，而且可以通过降低体内脂肪来预防或改善肥胖、高脂血症或高血压。此外，所述组合物可以预防或改善线粒体疾病。【附图说明】[0008]图1展示了通过香豆雌酚的SIRTl活性的提高程度。[0009]图2展示了通过香豆雌酚的被增强表达的线粒体相关基因。[0010]图3展示了通过香豆雌酚的肌肉细胞内线粒体的增加程度。【具体实施方式】[0011]这里使用的"提取物"是指从自然物质中提取的物质且不论其提取方法或成分。所述术语在广义上所使用，其包括如通过使用水或有机溶剂从天然物质中提取的可溶于所述溶剂的成分，或从中提取的天然物质的特定成分，如油类。[0012]下面将更为详细地描述本发明。[0013]在一方面，本发明提供用于激活线粒体的、含有作为活性成分的香豆雌酚、包含香豆雌酚的天然物质或其提取物的组合物。[0014]香豆雌酚（CMS;3,9-二羟基-6H-苯并呋喃（3,2-c)(1)苯并呋喃-6-酮）具有化学式1的结构：化学式1香豆雌酷是一种植物雌激素（troge/750且通常在豆科或菊科植物的种子、根部或叶子中发现。它可被归为coumestan类异黄酮（co臟iso/yarafloioO,并且已知其具有雌激素的作用。[0015]在本发明的一个实施例中，所述组合物包含香豆雌酚、含有香豆雌酚的自然物质或其提取物。在本发明的另一个实施例中，所述含有香豆雌酚的自然物质可以为选自大豆豌豆绿豆（皿Aea/?)以及使之发芽的发芽豆中的一种或多种豆类、红三叶草（ret/c/orer)、苜蓿（aZfaZfa)、抱子甘蓝等。在本发明的另一个实施例中，含有香豆雌酚的自然物质可以为豆。[0016]在本发明的一个实施例中，所述豆可以为含有香豆雌酚的任何豆科植物，并且对其没有特别限制。例如，本发明所用的豆可以为用于豆瓣酱、豆腐、豆芽、煮饭或未成熟的豆的豆。用于豆瓣酱或豆腐的豆的品种包括大丰、湖酱、状元、大黄、小胆、松鹤、大元、真品、蛋白、豆油、新八达、太光、万里、长寿、无限、白云、鸟卵、黄金和长叶。用于豆芽的豆的品种包括神话、小圆、安平、西南、多彩、小绿、小湖、疏明、多元、丰产豆芽、益山豆芽、小白豆芽、光安、短叶和银河。用于煮饭的豆的品种包括青磁、黑青、褐味、鲜黑、黑豆和一品黑豆。此外，用于未成熟的豆的豆的品种包括多兀、新绿、新乙、黑乙、夕凉未熟豆、华严未熟豆和大乙。在本发明的另一个实施例中，所述豆可以为能够发芽且对疾病和害虫的侵害具有抵抗力的豆。所述豆的品种包括如神话、小圆、安平、西南、多彩、小绿、小湖、疏明、多元、丰产豆芽、益山豆芽、小白豆芽、光安、短叶和银河。[0017]在本发明的一个实施例中，所述自然物质或其提取物可以包含大量的香豆雌酚。具体地，它可以包含占所述自然物质或其提取物总重量的0.01-50wt%的香豆雌酚，优选为0.l-30wt%〇[0018]在本发明的一个实施例中，含有香豆雌酚的自然物质的提取物可以通过下述方法获得，即在常温或升高的温度下，通过水或乙醇提取所述含有香豆雌酚的自然物质并将所得的提取物进行完全浓缩，然后在水中再次分散，通过使用等量的选自己烷，二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，乙醇，甲醇和水中的一种或多种的溶剂对其进行分馏。然而，所述提取方法不会局限于此，即可使用任何提取方法。[0019]如上所述，线粒体将通过细胞呼吸分解葡萄糖来合成用于生命活动并作为基本能源的ATP。因此，线粒体功能的异常将导致细胞死亡，并且会对组织和器官产生负面影响。所述线粒体功能的异常也会引起神经和肌肉组织的紊乱以及代谢疾病。同时，它也是衰老的原因。[0020]本发明中一个实施例的组合物中含有的作为活性成分的香豆雌酚，可以通过促进乙酰化酶I(SIRTl)的活性来增强所述线粒体的活性。SIRTl是NAD依赖性脱乙酰基酶(t/e/?(ofeace，而且将参与线粒体的生成中。[0021]本发明中一个实施例的含有的作为活性成分的香豆雌酚的组合物，可以通过激活SIRTl和线粒体来提高能量代谢。通过此过程，它可以提供消除疲劳、提高耐力、增强肌肉力量或改善运动机能的效果。进一步，由于所述组合物会通过促进体内能量消耗来降低体内脂肪，从而它可以预防或改善肥胖、高脂血症或高血压。[0022]本发明中一个实施例的含有的作为活性成分的香豆雌酚的组合物，可以预防或改善线粒体疾病。[0023]在本发明的一个实施例中，所述线粒体疾病包括由线粒体活性的降低引起的神经精神疾病、心血管疾病、内脏疾病、内分泌疾病、感官系统疾病、关节病和肌肉疾病中的一种或多种疾病。[0024]在本发明的一个实施例中，所述神经精神疾病包括老年痴呆症、帕金森氏症、中风、神经精神障碍、自闭症、精神发育迟缓、发作（类似中风性发作（seizure)、偏头痛和神经性疼痛中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病可以是由线粒体活性的降低引起的活性氧气的累积或神经组织的紊乱引发的。[0025]在本发明的一个实施例中，所述心血管疾病包括心功能障碍、心脏衰竭、心肌症、心动过速（（acAycardia)、铁粒幼细胞性贫血、皮尔逊综合症#/7t/r)、顽固性贫血（re/racto/y和低血压中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病可以是从线粒体活性的降低导致的能引发心脏功能障碍的钙超载或过度的氧化应激引发的。[0026]在本发明的一个实施例中，所述内脏疾病包括肝功能衰竭、假性肠梗阻Qintestinalpseudoobstruction).、场]象傲综、令'癌Xirritablebowelsyndrome)^?管反流病（gastroesoMagea/re/Vyj：t/isease)、便秘、腹泻、肾小管性酸中毒（te/w/araciobsis)和范可尼综合症中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病可以是伴随由线粒体活性的降低而引起的线粒体呼吸系统的受损而来的过度氧化应激引发的。[0027]在本发明的一个实施例中，所述内分泌疾病包括胰腺外分泌功能不良（ezocrifleYfl1SWiTicieflciF)、甲状腺功能减退（知/7〇、甲状旁腺功能减退(hypopara、性腺功能低下（、发育迟缓、2型糖尿病和低血糖中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病是由线粒体功能障碍引起的内分泌失调引发的。[0028]在本发明的一个实施例中，所述感官系统疾病包括视神经萎缩、斜视、视网膜色素变性、失明和听力损失中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病是由线粒体功能障碍引起的感官系统的异常引发的。[0029]在本发明的一个实施例中，所述关节病包括退化性关节炎、类风湿关节炎和骨关节炎中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病是由线粒体活性的降低引起的软骨细胞内炎症因子如环氧合酶-2(C0X-2)的表达增加而引发的。[0030]在本发明的一个实施例中，所述肌肉疾病包括共济失调构音障碍(办sartAria)、吞咽困难（办spAagia当前第1页1 2 )、痉挛（，脑肌病（级，)、 肌肉疼痛、肌肉萎缩、肌肉痉挛、上睑下垂（/^o1Sis)、眼肌麻痹（从a办?〇以egia)、进行性 眼外肌麻痹（ATO1^re1S1SiFeo/?A、Leber遗传性视神经病（ZeAerlf 51 Aeret/ite/y /?etfro/7az^7)、呼吸障碍、反射减少和植物神经失调中的一种或多种疾 病，但不限于这些疾病。引发这些疾病的主要原因是，由于线粒体活性的降低将阻碍ATP的 生成，进而降低肌肉代谢，从而导致肌肉萎缩、运动障碍或从中产生疲劳。
[0031] 本发明中一个实施例的含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物，可以 通过激活线粒体并促进其生成来预防或改善上述的由线粒体活性的降低引起的疾病。
[0032] 本发明中一个实施例的组合物可以包含占所述组合物总重量的0. 001_30wt%的 香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物，具体为0. 〇l-l〇wt%，优选为0.l_5wt%。当所述香豆 雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物在上述范围时，不仅能充分地实现本发明所预想的效果并 同时满足稳定性和安全性，而且可以取得良好的成本效益。
[0033] 在本发明的一个实施例中，所述含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合 物可以为食品组合物。所述食品组合物可以为保健食品组合物。
[0034] 在本发明的一个实施例中，所述食品组合物可以被制成各种剂型，其包括如粉末 剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、饮剂等，但不限于这些剂型。
[0035] 进一步，根据需要，所述食品组合物可以包含一种或多种的添加剂。所述添加剂包 括：葡萄、苹果、橙子、柠檬、菠萝、香蕉、梨等的浓缩或粉状果汁；水溶性或脂溶性维生素， 如棕榈酸视黄酯、核黄素、吡哆素、氰钴胺、抗坏血酸、烟酰胺、泛酸钙、叶酸、生物素、胆钙化 醇（cAo/eca/ciferojO、重酒石酸胆碱（cAo/ifleAitertrate)、生育酷、(6-胡萝卜素等；调 味剂，如柠檬香精、橙香精、草莓香精、葡萄香精、香草香精等；氨基酸、核酸或其盐类，如谷 氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸钠、肌苷酸等；或矿物类，如氯化钠、硫 酸镁、氯化钾、氯化镁、碳酸镁、氯化钙、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、甘油磷酸钙、柠檬酸亚铁 钠、柠檬酸铁铵、柠檬酸铁、硫酸锰、硫酸铜、碘化钠、山梨酸钾、锌、锰、铜、碘、钴等。
[0036] 本发明中一个实施例的含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物可以 为药物组合物。
[0037] 所述药物组合物可以进一步包括药物佐剂，如防腐剂、稳定剂、保湿剂、乳化剂、用 于控制渗透压的盐和/或缓冲剂等，或者其他治疗上有用的物质，而且所述药物组合物可 以被制成各种用于口服或肠胃外给药的剂型。
[0038] 所述用于口服给药的剂型可以包括，如片剂，丸剂，硬或软胶囊剂，液体，悬浮液， 乳液，糖浆，颗粒剂等。除了所述活性成分，这些剂型可以包含稀释剂(如乳糖、葡萄糖、蔗 糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素或甘氨酸）或润滑剂(如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁或 钙盐或者聚乙二醇)。
[0039] 用于肠胃外给药的常用剂型包括用于注射的等渗溶液（iso solution)或悬、帮版。
[0040] 要确定的所述活性成分的剂量在本领域普通技术人员已知的范围内。所述活性成 分的一天剂量可能会有所不同，这将取决于各种因素，包括受试者的疾病的进展和阶段、年 龄和身体状况、并发症的存在与否等。通常，本发明的组合物一天可以使用1~2次，所用 的用量为l-500mg/kg，优选为30-200mg/kg。然而，所述剂量不会以任何方式限制本发明的 范围。
[0041] 本发明的特征和效果将通过测试实施例进行详细地描述。然而，下列所提供的测 试实施例仅以说明为目的，并不会限制本发明的范围。
[0042] [测试实施例1]对SIRTl激活效果的评估 通过使用SIRTl活性检测试剂盒（Biomol)来测定香豆雌酚是否能激活SIRTl。用10yM的香豆雌酚处理细胞。将50M的已知能激活SIRTl的白藜芦醇（Res)用作阳性对照组，并且 将ImM的作为SIRTl抑制剂的烟酰胺（NAM)用作阴性对照组。测量对比未处理组的SIRTl 的活性并在图1中展示。
[0043] 如图1所示，香豆雌酚（CMS)能促进SIRTl的活性，而且其效果相当于比香豆雌 酚更高浓度的白藜芦醇所具有的效果。由此，可得知香豆雌酚比白藜芦醇具有更好的提高 SIRTl活性的效果。因此，含有香豆雌酚的组合物可以通过激活SIRTl来抑制衰老并促进能 量代谢。进一步，它可以缓解疲劳，增强耐力、肌肉力量和运动机能。
[0044] [测试实施例2]对增加肌肉内线粒体的效果的评估 将取自小鼠的C2C12肌肉细胞(小鼠成肌细胞，ATCC)分化一周，然后通过使用IOM的 香豆雌酷处理24小时。然后，通过蛋白质印迹法（westernblotting)确认线粒体相关基 因的蛋白质水平的表达。其结果在图2中展示。所述测量基因为PGC1、NDUFA9和ATP5a， 而且所述PGCl能够诱导线粒体的生物合成，所述NDUFA9和ATP5a为用于形成所述线粒体 电子传递链的蛋白质。如图2所示，用香豆雌酚处理的基因的表达比未处理组有明显增加。
[0045] 此外，通过MitoTracker绿色（Invitrogen)进行染色后，用焚光检测细胞内线粒 体的数量。经由香豆雌酚处理的组展示出比未处理组线粒体增多（图3)。如图3所示，用香 豆雌酚处理的组中细胞内线粒体的数量有明显增加。
[0046] 由此，可确定香豆雌酚可以促进肌肉细胞内线粒体的生物合成。因此，含有香豆雌 酚的组合物可以通过增加肌肉内线粒体的数量来提高运动机能，从而可以预防或改善线粒 体肌病。进一步，它可以通过促进肌肉内的能量代谢来提高能量消耗，从而降低体内脂肪。 [0047] 本发明的组合物的剂型实施例将在下面进行描述。然而，本发明的范围不会限制 于以下实施例中。
[0048][剂型实施例1]软胶囊剂 将香豆雌酚（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、棕榈油（2mg)、氢化植物油（8mg)、 黄蜂蜡（4mg)和卵磷脂（9mg)进行混合，并根据常用方法制成软胶囊填充液。每个胶囊中填 充400mg的所述溶液。另外，通过使用明胶（66wt%)、甘油（24wt%)和山梨糖醇（10wt%)来 制备软胶囊片（softcapsulesheet)，将所述填充液填充于该软胶囊片内，制成含有400mg 的本发明的组合物的软胶囊剂。
[0049] [剂型实施例2]片剂 将香豆雌酚（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、低聚半乳糖（200mg)、乳糖（60mg) 和麦芽糖（140mg)进行混合并用流化床干燥器制成颗粒。添加糖酯（6mg)后，通过常用方法 将所得组合物（500mg)制成片剂。
[0050] [剂型实施例3]饮剂 将香豆雌酷（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、葡萄糖（10〖)、梓檬酸（0.68)和 低聚糖糖浆（25g)进行混合。添加纯净水（300mL)后，将200mL的所得混合物装入瓶中。然 后，在130°C下进行4~5秒的消毒，制成饮剂。
[0051] [剂型实施例4]颗粒剂 将香豆雌酷（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、无水结晶葡萄糖（250mg)和淀粉 (550mg)进行混合并通过流化床制粒器制成颗粒，然后进行装袋。
[0052] [剂型实施例4]注射剂 香豆雌酷 20mg 用于注射剂的无菌蒸馏水 适量 pH调节剂 适量 根据常用方法，使用每安瓿（ampule) 2ml的上述成分制备注射剂。
[0053] 本领域的技术人员可以在本发明的范围之内对本发明进行各种改良或变化。
【主权项】
1. 香豆雌酚或者包含香豆雌酚的豆提取物在制备用于预防或改善痉挛的组合物中的 用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为食品组合物。3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为药物组合物。
【专利摘要】本发明涉及用于激活线粒体的、含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物。
【IPC分类】A61K31/366, A61P3/06, A61P9/12, A61K36/484, A61P9/00, A61P1/16, A61P25/00, A61P39/00, A61P3/04, A61P9/04, A61P25/28, A23L1/30
【公开号】CN104906177
【申请号】CN201510322898
【发明人】田熙英, 曺始永, 郑炫禹, 徐大方, 李尚骏
【申请人】株式会社爱茉莉太平洋
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2011年3月31日
【公告号】CN102905714A, US20130090377, WO2011122872A2, WO2011122872A3
技术领域：
】[0001]本发明涉及用于激活线粒体的组合物。【
背景技术：
】[0002]线粒体是可以在大多数真核细胞中发现的细胞器，而且具有它们自己的、区别于核DNA的线粒体DNA(?切姻)。线粒体的主要功能为生成用作细胞能源的三磷酸腺苷（ATP)。ATP是使用线粒体基质内产生的NADH和FADH2、通过TCA循环(三羧酸循环)、从电子传递链产生的。因此，产生的ATP将用于各种需要能量的生物合成和代谢过程。[0003]此外，线粒体会在基质中贮存对细胞内信号传导起重要作用的钙离子，并且向细胞质提供它们。进一步，已知它们在细胞凋亡、细胞增殖和细胞代谢中起核心作用。[0004]与核DNA不同是，由于所述线粒体DNA(?故财）缺乏修复机制以及能保护DNA的蛋白质组蛋白，从而相对容易受到损伤。线粒体DNA的损伤将导致线粒体功能的下降且引起细胞活动所需的能源ATP合成的降低，从而引发各种线粒体疾病。【
发明内容】[0005]技术问题本发明在于提供用于激活线粒体的组合物。[0006]技术方案在一方面，本发明提供用于激活线粒体的组合物，该组合物含有香豆雌酚(乃，或者含有包含香豆雌酚的豆提取物，所述香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物作为活性成分。[0007]有益效果本发明的一个实施例中用于激活线粒体的、含有作为活性成分的香豆雌酚(COWffie1StrojO或包含香豆雌酷的豆提取物的组合物，可以激活乙酰化酶I(SIRTl)且能够增加细胞内线粒体的数量。因此，所述组合物可以通过促进能量代谢来提供缓解疲劳、提高耐力、增强肌肉力量或改善运动机能的效果，而且可以通过降低体内脂肪来预防或改善肥胖、高脂血症或高血压。此外，所述组合物可以预防或改善线粒体疾病。【附图说明】[0008]图1展示了通过香豆雌酚的SIRTl活性的提高程度。[0009]图2展示了通过香豆雌酚的被增强表达的线粒体相关基因。[0010]图3展示了通过香豆雌酚的肌肉细胞内线粒体的增加程度。【具体实施方式】[0011]这里使用的"提取物"是指从自然物质中提取的物质且不论其提取方法或成分。所述术语在广义上所使用，其包括如通过使用水或有机溶剂从天然物质中提取的可溶于所述溶剂的成分，或从中提取的天然物质的特定成分，如油类。[0012]下面将更为详细地描述本发明。[0013]在一方面，本发明提供用于激活线粒体的、含有作为活性成分的香豆雌酚、包含香豆雌酚的天然物质或其提取物的组合物。[0014]香豆雌酚（CMS;3,9-二羟基-6H-苯并呋喃（3,2-c)(1)苯并呋喃-6-酮）具有化学式1的结构：化学式1香豆雌酷是一种植物雌激素（troge/750且通常在豆科或菊科植物的种子、根部或叶子中发现。它可被归为coumestan类异黄酮（co臟iso/yarafloioO,并且已知其具有雌激素的作用。[0015]在本发明的一个实施例中，所述组合物包含香豆雌酚、含有香豆雌酚的自然物质或其提取物。在本发明的另一个实施例中，所述含有香豆雌酚的自然物质可以为选自大豆豌豆绿豆（皿Aea/?)以及使之发芽的发芽豆中的一种或多种豆类、红三叶草（ret/c/orer)、苜蓿（aZfaZfa)、抱子甘蓝等。在本发明的另一个实施例中，含有香豆雌酚的自然物质可以为豆。[0016]在本发明的一个实施例中，所述豆可以为含有香豆雌酚的任何豆科植物，并且对其没有特别限制。例如，本发明所用的豆可以为用于豆瓣酱、豆腐、豆芽、煮饭或未成熟的豆的豆。用于豆瓣酱或豆腐的豆的品种包括大丰、湖酱、状元、大黄、小胆、松鹤、大元、真品、蛋白、豆油、新八达、太光、万里、长寿、无限、白云、鸟卵、黄金和长叶。用于豆芽的豆的品种包括神话、小圆、安平、西南、多彩、小绿、小湖、疏明、多元、丰产豆芽、益山豆芽、小白豆芽、光安、短叶和银河。用于煮饭的豆的品种包括青磁、黑青、褐味、鲜黑、黑豆和一品黑豆。此外，用于未成熟的豆的豆的品种包括多兀、新绿、新乙、黑乙、夕凉未熟豆、华严未熟豆和大乙。在本发明的另一个实施例中，所述豆可以为能够发芽且对疾病和害虫的侵害具有抵抗力的豆。所述豆的品种包括如神话、小圆、安平、西南、多彩、小绿、小湖、疏明、多元、丰产豆芽、益山豆芽、小白豆芽、光安、短叶和银河。[0017]在本发明的一个实施例中，所述自然物质或其提取物可以包含大量的香豆雌酚。具体地，它可以包含占所述自然物质或其提取物总重量的0.01-50wt%的香豆雌酚，优选为0.l-30wt%〇[0018]在本发明的一个实施例中，含有香豆雌酚的自然物质的提取物可以通过下述方法获得，即在常温或升高的温度下，通过水或乙醇提取所述含有香豆雌酚的自然物质并将所得的提取物进行完全浓缩，然后在水中再次分散，通过使用等量的选自己烷，二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，乙醇，甲醇和水中的一种或多种的溶剂对其进行分馏。然而，所述提取方法不会局限于此，即可使用任何提取方法。[0019]如上所述，线粒体将通过细胞呼吸分解葡萄糖来合成用于生命活动并作为基本能源的ATP。因此，线粒体功能的异常将导致细胞死亡，并且会对组织和器官产生负面影响。所述线粒体功能的异常也会引起神经和肌肉组织的紊乱以及代谢疾病。同时，它也是衰老的原因。[0020]本发明中一个实施例的组合物中含有的作为活性成分的香豆雌酚，可以通过促进乙酰化酶I(SIRTl)的活性来增强所述线粒体的活性。SIRTl是NAD依赖性脱乙酰基酶(t/e/?(ofeace，而且将参与线粒体的生成中。[0021]本发明中一个实施例的含有的作为活性成分的香豆雌酚的组合物，可以通过激活SIRTl和线粒体来提高能量代谢。通过此过程，它可以提供消除疲劳、提高耐力、增强肌肉力量或改善运动机能的效果。进一步，由于所述组合物会通过促进体内能量消耗来降低体内脂肪，从而它可以预防或改善肥胖、高脂血症或高血压。[0022]本发明中一个实施例的含有的作为活性成分的香豆雌酚的组合物，可以预防或改善线粒体疾病。[0023]在本发明的一个实施例中，所述线粒体疾病包括由线粒体活性的降低引起的神经精神疾病、心血管疾病、内脏疾病、内分泌疾病、感官系统疾病、关节病和肌肉疾病中的一种或多种疾病。[0024]在本发明的一个实施例中，所述神经精神疾病包括老年痴呆症、帕金森氏症、中风、神经精神障碍、自闭症、精神发育迟缓、发作（类似中风性发作（seizure)、偏头痛和神经性疼痛中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病可以是由线粒体活性的降低引起的活性氧气的累积或神经组织的紊乱引发的。[0025]在本发明的一个实施例中，所述心血管疾病包括心功能障碍、心脏衰竭、心肌症、心动过速（（acAycardia)、铁粒幼细胞性贫血、皮尔逊综合症#/7t/r)、顽固性贫血（re/racto/y和低血压中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病可以是从线粒体活性的降低导致的能引发心脏功能障碍的钙超载或过度的氧化应激引发的。[0026]在本发明的一个实施例中，所述内脏疾病包括肝功能衰竭、假性肠梗阻Qintestinalpseudoobstruction).、场]象傲综、令'癌Xirritablebowelsyndrome)^?管反流病（gastroesoMagea/re/Vyj：t/isease)、便秘、腹泻、肾小管性酸中毒（te/w/araciobsis)和范可尼综合症中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病可以是伴随由线粒体活性的降低而引起的线粒体呼吸系统的受损而来的过度氧化应激引发的。[0027]在本发明的一个实施例中，所述内分泌疾病包括胰腺外分泌功能不良（ezocrifleYfl1SWiTicieflciF)、甲状腺功能减退（知/7〇、甲状旁腺功能减退(hypopara、性腺功能低下（、发育迟缓、2型糖尿病和低血糖中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病是由线粒体功能障碍引起的内分泌失调引发的。[0028]在本发明的一个实施例中，所述感官系统疾病包括视神经萎缩、斜视、视网膜色素变性、失明和听力损失中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病是由线粒体功能障碍引起的感官系统的异常引发的。[0029]在本发明的一个实施例中，所述关节病包括退化性关节炎、类风湿关节炎和骨关节炎中的一种或多种疾病，但不限于这些疾病。这些疾病是由线粒体活性的降低引起的软骨细胞内炎症因子如环氧合酶-2(C0X-2)的表达增加而引发的。[0030]在本发明的一个实施例中，所述肌肉疾病包括共济失调构音障碍(办sartAria)、吞咽困难（办spAagia当前第1页1 2 )、痉挛（，脑肌病（级，)、 肌肉疼痛、肌肉萎缩、肌肉痉挛、上睑下垂（/^o1Sis)、眼肌麻痹（从a办?〇以egia)、进行性 眼外肌麻痹（ATO1^re1S1SiFeo/?A、Leber遗传性视神经病（ZeAerlf 51 Aeret/ite/y /?etfro/7az^7)、呼吸障碍、反射减少和植物神经失调中的一种或多种疾 病，但不限于这些疾病。引发这些疾病的主要原因是，由于线粒体活性的降低将阻碍ATP的 生成，进而降低肌肉代谢，从而导致肌肉萎缩、运动障碍或从中产生疲劳。
[0031] 本发明中一个实施例的含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物，可以 通过激活线粒体并促进其生成来预防或改善上述的由线粒体活性的降低引起的疾病。
[0032] 本发明中一个实施例的组合物可以包含占所述组合物总重量的0. 001_30wt%的 香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物，具体为0. 〇l-l〇wt%，优选为0.l_5wt%。当所述香豆 雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物在上述范围时，不仅能充分地实现本发明所预想的效果并 同时满足稳定性和安全性，而且可以取得良好的成本效益。
[0033] 在本发明的一个实施例中，所述含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合 物可以为食品组合物。所述食品组合物可以为保健食品组合物。
[0034] 在本发明的一个实施例中，所述食品组合物可以被制成各种剂型，其包括如粉末 剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、饮剂等，但不限于这些剂型。
[0035] 进一步，根据需要，所述食品组合物可以包含一种或多种的添加剂。所述添加剂包 括：葡萄、苹果、橙子、柠檬、菠萝、香蕉、梨等的浓缩或粉状果汁；水溶性或脂溶性维生素， 如棕榈酸视黄酯、核黄素、吡哆素、氰钴胺、抗坏血酸、烟酰胺、泛酸钙、叶酸、生物素、胆钙化 醇（cAo/eca/ciferojO、重酒石酸胆碱（cAo/ifleAitertrate)、生育酷、(6-胡萝卜素等；调 味剂，如柠檬香精、橙香精、草莓香精、葡萄香精、香草香精等；氨基酸、核酸或其盐类，如谷 氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸钠、肌苷酸等；或矿物类，如氯化钠、硫 酸镁、氯化钾、氯化镁、碳酸镁、氯化钙、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、甘油磷酸钙、柠檬酸亚铁 钠、柠檬酸铁铵、柠檬酸铁、硫酸锰、硫酸铜、碘化钠、山梨酸钾、锌、锰、铜、碘、钴等。
[0036] 本发明中一个实施例的含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物可以 为药物组合物。
[0037] 所述药物组合物可以进一步包括药物佐剂，如防腐剂、稳定剂、保湿剂、乳化剂、用 于控制渗透压的盐和/或缓冲剂等，或者其他治疗上有用的物质，而且所述药物组合物可 以被制成各种用于口服或肠胃外给药的剂型。
[0038] 所述用于口服给药的剂型可以包括，如片剂，丸剂，硬或软胶囊剂，液体，悬浮液， 乳液，糖浆，颗粒剂等。除了所述活性成分，这些剂型可以包含稀释剂(如乳糖、葡萄糖、蔗 糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素或甘氨酸）或润滑剂(如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁或 钙盐或者聚乙二醇)。
[0039] 用于肠胃外给药的常用剂型包括用于注射的等渗溶液（iso solution)或悬、帮版。
[0040] 要确定的所述活性成分的剂量在本领域普通技术人员已知的范围内。所述活性成 分的一天剂量可能会有所不同，这将取决于各种因素，包括受试者的疾病的进展和阶段、年 龄和身体状况、并发症的存在与否等。通常，本发明的组合物一天可以使用1~2次，所用 的用量为l-500mg/kg，优选为30-200mg/kg。然而，所述剂量不会以任何方式限制本发明的 范围。
[0041] 本发明的特征和效果将通过测试实施例进行详细地描述。然而，下列所提供的测 试实施例仅以说明为目的，并不会限制本发明的范围。
[0042] [测试实施例1]对SIRTl激活效果的评估 通过使用SIRTl活性检测试剂盒（Biomol)来测定香豆雌酚是否能激活SIRTl。用10yM的香豆雌酚处理细胞。将50M的已知能激活SIRTl的白藜芦醇（Res)用作阳性对照组，并且 将ImM的作为SIRTl抑制剂的烟酰胺（NAM)用作阴性对照组。测量对比未处理组的SIRTl 的活性并在图1中展示。
[0043] 如图1所示，香豆雌酚（CMS)能促进SIRTl的活性，而且其效果相当于比香豆雌 酚更高浓度的白藜芦醇所具有的效果。由此，可得知香豆雌酚比白藜芦醇具有更好的提高 SIRTl活性的效果。因此，含有香豆雌酚的组合物可以通过激活SIRTl来抑制衰老并促进能 量代谢。进一步，它可以缓解疲劳，增强耐力、肌肉力量和运动机能。
[0044] [测试实施例2]对增加肌肉内线粒体的效果的评估 将取自小鼠的C2C12肌肉细胞(小鼠成肌细胞，ATCC)分化一周，然后通过使用IOM的 香豆雌酷处理24小时。然后，通过蛋白质印迹法（westernblotting)确认线粒体相关基 因的蛋白质水平的表达。其结果在图2中展示。所述测量基因为PGC1、NDUFA9和ATP5a， 而且所述PGCl能够诱导线粒体的生物合成，所述NDUFA9和ATP5a为用于形成所述线粒体 电子传递链的蛋白质。如图2所示，用香豆雌酚处理的基因的表达比未处理组有明显增加。
[0045] 此外，通过MitoTracker绿色（Invitrogen)进行染色后，用焚光检测细胞内线粒 体的数量。经由香豆雌酚处理的组展示出比未处理组线粒体增多（图3)。如图3所示，用香 豆雌酚处理的组中细胞内线粒体的数量有明显增加。
[0046] 由此，可确定香豆雌酚可以促进肌肉细胞内线粒体的生物合成。因此，含有香豆雌 酚的组合物可以通过增加肌肉内线粒体的数量来提高运动机能，从而可以预防或改善线粒 体肌病。进一步，它可以通过促进肌肉内的能量代谢来提高能量消耗，从而降低体内脂肪。 [0047] 本发明的组合物的剂型实施例将在下面进行描述。然而，本发明的范围不会限制 于以下实施例中。
[0048][剂型实施例1]软胶囊剂 将香豆雌酚（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、棕榈油（2mg)、氢化植物油（8mg)、 黄蜂蜡（4mg)和卵磷脂（9mg)进行混合，并根据常用方法制成软胶囊填充液。每个胶囊中填 充400mg的所述溶液。另外，通过使用明胶（66wt%)、甘油（24wt%)和山梨糖醇（10wt%)来 制备软胶囊片（softcapsulesheet)，将所述填充液填充于该软胶囊片内，制成含有400mg 的本发明的组合物的软胶囊剂。
[0049] [剂型实施例2]片剂 将香豆雌酚（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、低聚半乳糖（200mg)、乳糖（60mg) 和麦芽糖（140mg)进行混合并用流化床干燥器制成颗粒。添加糖酯（6mg)后，通过常用方法 将所得组合物（500mg)制成片剂。
[0050] [剂型实施例3]饮剂 将香豆雌酷（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、葡萄糖（10〖)、梓檬酸（0.68)和 低聚糖糖浆（25g)进行混合。添加纯净水（300mL)后，将200mL的所得混合物装入瓶中。然 后，在130°C下进行4~5秒的消毒，制成饮剂。
[0051] [剂型实施例4]颗粒剂 将香豆雌酷（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、无水结晶葡萄糖（250mg)和淀粉 (550mg)进行混合并通过流化床制粒器制成颗粒，然后进行装袋。
[0052] [剂型实施例4]注射剂 香豆雌酷 20mg 用于注射剂的无菌蒸馏水 适量 pH调节剂 适量 根据常用方法，使用每安瓿（ampule) 2ml的上述成分制备注射剂。
[0053] 本领域的技术人员可以在本发明的范围之内对本发明进行各种改良或变化。
【主权项】
1. 香豆雌酚或者包含香豆雌酚的豆提取物在制备用于预防或改善痉挛的组合物中的 用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为食品组合物。3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为药物组合物。
【专利摘要】本发明涉及用于激活线粒体的、含有香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物的组合物。
【IPC分类】A61K31/366, A61P3/06, A61P9/12, A61K36/484, A61P9/00, A61P1/16, A61P25/00, A61P39/00, A61P3/04, A61P9/04, A61P25/28, A23L1/30
【公开号】CN104906177
【申请号】CN201510322898
【发明人】田熙英, 曺始永, 郑炫禹, 徐大方, 李尚骏
【申请人】株式会社爱茉莉太平洋
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2011年3月31日
【公告号】CN102905714A, US20130090377, WO2011122872A2, WO2011122872A3
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