一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法
一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物领域，涉及一种治疗哮喘的药物组合物，具体涉及一种由为樟脑、 薄荷脑、丁香油、青风藤、蛇床子为原料制成的药物组合物。
【背景技术】
[0002] 在哮喘是一种常见病、多发病，属于中医的"喘证"范畴。中医认为，本病的发生是 肺脾肾虚、痰饮内伏、痰阻气道、宣降失常所致。哮喘是一种以嗜酸性粒细胞（E0S)、肥大细 胞反应为主，淋巴细胞和巨噬细胞浸润为辅的气道炎症性疾病。往往在人的体质下降，免疫 功能低下时发病。其发病率高居不下，严重危害人类的身体健康。穴位贴敷疗法具有简单、 效验、费用少，无副作用的优点，近年来在防治哮喘的应用中发挥了巨大作用。
[0003] 一、临床研宄 (一）药物选择 研宄表明，药物可通过腧穴、肌肤、孔窍等处吸收，贯通经脉而作用于全身。穴贴用药有 单味药、多味药的不同，但大多是用多味药，如选用细辛、甘遂、白芥子、麻黄等这类刺激性 强和芳香走窜之品，其"切于皮肤，彻于腠理，摄于吸气，融于渗液"，可达到温煦阳气，驱寒 散邪，温肺化饮的作用。所用赋形剂多采用姜汁、蜂蜜、醋、酒等，或在其中加入助渗药物如 二甲基亚砜、氮酮等以提高药物的渗透。
[0004] (二）穴位选择 1、单穴的使用：高修安等用海龙蠲哮方(海蛤粉、地龙、炙麻黄、杏仁、炙甘草、款冬花、 葶苈子、细辛、防风、蒲公英、丹参、橘红、淫羊藿）联用咳喘平(猪牙皂、细辛等）药末，调以白 醋、葱白成糊，贴于双侧涌泉穴，贴药2周。治疗75例发作期患儿，总有效率为89. 3%。张瑜 等将患者随机分为2组，治疗组24例用中药辛桂散(细辛、白芥子、苍术、公丁香、肉桂、法半 夏、人工麝香)敷脐，每天换药1次，10日为1个疗程，每年从小暑开始，共贴3~6个疗程。 对照组21例不予任何治疗和处理，观察期1年，观察治疗前后哮喘病情分级及外周血嗜酸 性粒细胞数的变化，结果有显著性差异，治疗组优于对照组（P〈〇. 05)。
[0005] 2、多穴的使用：徐绿萍等自制"止喘膏"（白芥子、甘遂、细辛、元胡索、生麻黄、冰 片等，姜汁调)，初伏取肺俞、定喘、天突，中伏取风门、厥阴俞、膻中，末伏取大抒、心俞、华 盖。虚寒型加膏肓俞、肾俞；痰热型加丰隆、大椎，3次为1个疗程，连贴3年。结果：治疗 218例，虚寒型156例，有效率为96. 8%，痰热型62例，有效率为93. 7%。张林昌等用自制伏 贴膏（白芥子、延胡索、甘遂、麻黄、附子、黄苗、生川乌、细辛、麝香、姜汁)，于初伏取定喘、肺 俞、心俞、膻中，中伏取风门、厥阴俞、膈俞、大椎，末伏取大抒、肺俞、膏肓、天突，3次为1个 疗程，连贴3年。结果治疗支气管炎、哮喘112例，显效63例，有效45例，无效4例，总有效 率为96. 43%。曹春梅等用膏剂（白芥子、玄胡、甘遂、细辛、地龙、麝香、姜汁)治疗580例，初 伏取大抒、肺俞、膈俞，中伏取肺俞、心俞、膈俞，末伏取肺俞、脾俞、肾俞、足三里，连贴3年， 总有效率为98. 1%。邵素菊等在三伏天选取肺俞、大椎、风门、天突、膻中等穴，贴药(玄胡、干 姜、丁香、生甘遂、细辛、白芥子，姜汁调)，4~6h后取下，一年贴敷3次。治疗40例，临床控 制8例，显效26例，好转4例，无效5例，总有效率为87. 50%。
[0006] 3、穴位贴敷配合他法：陆为华于三伏天在百劳、肺俞、膏肓上贴药(细辛、白芥子、 甘遂、延胡索等)，并使用直流感应电疗仪辅助药物渗透。每次敷药30min，以局部皮肤潮红 为度。每年治疗4次，连治3年。治疗1000例患儿，显效100例，有效660例，无效240例， 总有效率为76%。王希琳于三伏天采用壮医药线，应用梅花形灸法，点灸大椎、肺俞、膏肓俞、 膻中、足三里、脾俞、肾俞，灸后在背部穴位上贴敷自制"消喘膏"，每年贴3次，连治3年。治 疗缓解期患者288例，总有效率达91. 7%。瞿群威等用火针配合贴黑膏药(菟丝子、白芥子、 五味子、元胡、细辛、甘遂、杜仲、僵蚕等)治疗50例患者。寒证取百劳、肺俞、膏肓俞，热证取 大椎、风门、肺俞。火针每6日1次，5次为1个疗程。黑膏药每次贴3天，连续10次为1个 疗程。其治愈率和总显效率分别为54%和84%，且寒证有效率为100%，与热证有效率为89. 6% 相比，有显著性差异（P〈〇. 01)。周志英用自制消喘膏（白芥子、延胡索、细辛、生甘遂、蜂蜜及 姜汁)，连续3年于三伏天在双侧风门、肺俞、膏肓俞、肾俞上拔罐后贴敷上穴，一年贴3次， 并从初伏开始用卡介菌多糖核酸注射液〇. 5mL注射患者双侧足三里，每隔1周注射1次，共 治6次，连续治疗3年。结果114例中，临床控制16例，显效38例，好转46例，无效14例， 总有效率为87. 7%。李国忠在三伏天和三九天用锋钩针勾刺天突穴，配合在肺俞、膏肓俞、风 门、大椎上拔罐后，用药饼(麻黄、白芥子、细辛、洋金花、甘遂、扑尔敏、姜汁）贴上穴，喘甚加 定喘，痰多加脾俞，肾虚加肾俞，一年治6次，结果治疗264例，痊愈36例，有效186例，无效 42例。
[0007] 二、机理研宄 现代研宄认为哮喘的主要病理是慢性气道炎症，而免疫功能异常是导致炎症反复发作 的重要原因。临床研宄表明，穴位贴敷疗法可以改善机体的免疫状态，对气道炎性细胞、免 疫机制、细胞受体、细胞因子、肺功能、哮喘潜伏期等都有非常明显的影响。单翠英等报道 运用伏九贴敷药膏贴穴后，可使患儿FVC、FEV1、PEF、FEF均升高，IgE降低，IgA、IgG升高、 IL-4降低、IFN-Y升高，说明穴贴法能调节机体免疫力，纠正体内Thl/Th2的比例失衡，从 而达到治疗哮喘的作用。杨君军等观察到三伏贴能显著降低患者血浆可溶性细胞间黏附分 子（sICAM-1)水平（P〈0. 01 )，降低血浆可溶性血管-细胞间黏附分子（sVCAM-1)和可溶性 选择素（sEslectin)水平（P〈0. 05)，说明三伏贴可能通过抑制黏附分子的表达或直接抑制 白细胞与内皮细胞的黏附，从而减少炎细胞的浸润，达到治疗目的。
[0008] 动物实验证明穴位贴敷能使IFN-Y明显升高，明显降低潜伏期中的IgE和IL-6、 IL-4、IL-2水平、血清肿瘤坏死因子及血清E、P选择素水平，减少嗜酸性粒细胞浸润等。沈 惠风等运用血清药理学的方法，观察敷贴后含药血清对抗由氯化乙酰胆碱（ACH)引起的豚 鼠体外螺旋气管条的收缩作用，发现其效果与氨茶碱腹腔注射作用等同。并且在一定时间 内，体外气管条的收缩百分比随中药敷贴治疗天数的延长而减少，但治疗7~14天，其作用 趋于稳定，说明对抗ACH解痉作用是中药循经敷贴法治疗哮喘的机制之一，且合理地确定 疗程是十分必要的。
[0009] 三、讨论 中医认为哮喘是宿痰内伏于肺，复因外邪或饮食、情志、劳倦等诱发，致使痰阻气道，肺 失肃降，痰气交阻，壅塞气道所致。穴位贴敷防治哮喘是根据中医"春夏养阳"、"长夏土治， 土能生金"，天人相应的理论、子午流注理论和"未病先防"的思想，融合了经络、穴位、药物、 环境甚至时间的多重作用，"可与内治并行，能补内治之不及"，已成为穴位贴敷疗法临床运 用的成功典范，具有广阔发展前景。
[0010] 本发明贴膏是发明人多年来精心研制，主要用于治疗慢性气管炎和支气管哮喘且 行之有效的外用贴膏。如果在"三伏天"使用，能通过"时间疗法"、药物渗透和穴位调整的 三重治疗而达到健脾益肾、降气平喘、化痰止咳的综合治疗作用。经研宄表明，本发明药物 贴膏对哮喘具有较好的治疗效果。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供一种治疗哮喘的药物组合物。
[0012] 本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。
[0013] 本发明还提供该药物组合物的质量检测方法。
[0014] 本发明还提供了该药物组合物的制药用途。
[0015] 本发明的目的是通过以下方式实现的： 一种治疗哮喘的药物组合物，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1~2 重量份，薄荷脑1~2重量份，丁香油1~2重量份，青风藤10~20重量份，蛇床子10~ 20重量份。
[0016] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑2重量 份，丁香油1重量份，青风藤20重量份，蛇床子10重量份。
[0017] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑2重量份，薄荷脑1重量 份，丁香油2重量份，青风藤10重量份，蛇床子20重量份。
[0018] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑1重量 份，丁香油1重量份，青风藤10重量份，蛇床子10重量份。
[0019] 该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。
[0020] 该药物组合物贴膏剂优选采用如下方法制备： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液，备 用； (4) 称取处方量的e-环糊精，加入蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无 水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制 备成樟脑和薄荷脑的环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，浓缩得 胶液； (7)将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0021] 该药物组合物的含量测定方法为：采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测 定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测。
[0022] 该药物组合物可以用于制备治疗风湿性关节炎的药物。< br>[0023] 该药物组合物还可以用于制备治疗青年慢性疲劳综合征的药物。
[0024] 通过如下实验研宄验证本发明的技术效果： 实验一：本发明贴膏贴敷穴位治疗豚鼠哮喘的实验研宄 1材料与方法 实验动物：健康豚鼠70只（雌雄各半）体重300 ±50g。
[0025] 实验药物： 本发明贴膏： 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g、蛇床子5g辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0026] 对比贴膏A: 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g 辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油，连续研磨 至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的 同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的 粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0027] 对比贴膏B: 本发明贴膏： 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g 辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，加90%乙醇回流提取2次，每次 2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤浸 膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸 馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗 粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0028] 对比贴膏C: 本发明贴膏： 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、蛇床子5g 辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次 2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到蛇床子浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、蛇床子浸 膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸 馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗 粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7)将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0029] 桂龙咳喘宁胶囊(桂龙药业(安徽）有限公司生产，国药准字Z20053135) 试剂与仪器卵蛋白干粉制剂(上海博奥生物制品公司生产)，IgE放免试剂盒(北方生物 技术研宄所生产)，IL-4放免试剂盒(北方生物技术研宄所生产)，IgG放免试剂盒（中国原 子能科学研宄所生产)，CX5生化分析仪(黑龙江中医药大学附属第一医院核放射科提供)， CW-20D超声雾化仪(德国百瑞公司制造)，FJ-2008全自动C免疫计数仪（西安二六二厂制 造)。
[0030] 选用穴位肺俞(双)、厥阴俞(双)、心俞(双)、督俞(双)、膈俞(双）(取穴参照《实验针 灸学》（林文注.实验针灸学[M].上海：上海科学技术出版社，1994:88-89)。
[0031] 实验方法动物分组：将70只豚鼠以平衡饲料适应性的喂养1W，依据"数字随机表 分组法"分为本发明贴膏穴位贴敷治疗组(简称本发明贴膏组)、对比贴膏A穴位贴敷治疗组 (简称贴膏A组)、对比贴膏B穴位贴敷治疗组(简称贴膏B组)、对比贴膏C穴位贴敷治疗组 (简称贴膏C组)、空白对照组(简称空白组)、模型对照组(简称模型组)、口服药物对照组(简 称内服组）7组，每组10只。
[0032] 模型复制：参考相关文献(苗三明.实验动物与动物实验技术[M]北京：中国中 医药出版社，1997: 193~ 194)，除空白对照组外，给本发明贴膏组、贴膏A组、贴膏B组、贝占 膏C组、模型组、内服组六组动物造模。给每只豚鼠的腹腔内注射10%卵蛋白生理盐水Iml 进行致敏，IW重复一次。2W后将豚鼠置雾化箱中，以恒压400mmHg雾化吸入1%卵蛋白生理 盐水15min。观察至豚鼠出现张口喘息，肚腹鼓张为止，即造模成功。
[0033] 处理： 本发明贴膏组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将本发明贴膏贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、 心俞、督俞、膈俞穴在内)，然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。 每天1次，共贴敷6次。
[0034] 贴膏A组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏A贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、心俞、 督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天 1次，共贴敷6次。
[0035] 贴膏B组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏B贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、心俞、 督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天 1次，共贴敷6次。
[0036] 贴膏C组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏C贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、心俞、 督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天 1次，共贴敷6次。
[0037] 内服组豚鼠，用桂龙咳喘宁胶囊去胶囊，内装药粉以0. 58g/kg/d的用量(按体表 面积折算的等效剂量，相当于人体常规用量的4. 9倍）用蒸馏水按1 :5的比例调成水糊状， 进行灌胃治疗。
[0038] 空白组、模型组动物除每天抓取刺激外，不作任何处理。
[0039] 标本采集及检测方法EOS检测：对每组豚鼠，均采用毛细取穴管吸取豚鼠尾尖血 液20yL，加入0. 38mL伊红-甲醛稀释液中，轻轻摇匀，静置5min，采用常规计数法检测。
[0040] IgE、IgG、IL-4检测：对每组豚鼠，用3. 5%苯巴比妥钠0?lg/kg腹腔注射麻醉，目艮 球静脉采血6ml，分装3个试管。各2ml待凝固后分离血清，在-20°C保存，按照试剂盒说明 方法和要求操作，采用放免法分低温冰箱检测IgE、IgG、IL-4。
[0041] 统计学处理：应用SPSS10.0系统软件进行处理，所有数据用均数土标准差 (mean土SD)表示，各组间比较用方差分析。
[0042] 2 结果 各组豚鼠血中EOS计数和血清总IgE、IgG、IL-4结果比较(见表1)。
[0043] 表1各组豚鼠血中EOS和血清总IgE、IgG、IL-4的结果比较（mean土SD)
注：模型组与空白组比较，*表示P〈〇.〇5，**表示P〈0.01 ;本发明贴膏组与模型组的比 较，#表示P〈〇. 05, ##表示P〈0. 01 ;本发明贴膏组与内服组的比较，▲表示P〈0. 05 可以看出，造模后模型组动物的EOS计数和IL-4的含量显著上升（P〈0. 05,P〈0. 01)，IgG明显下降（P〈0. 05)，说明造模成功。
[0044] 经过治疗后，本发明贴膏组与模型组比较，EOS显著降低（P〈0. 01)，IgG显著增高 (P〈0. 01)，均有非常显著性差异；IL-4有所下降，但无统计学意义。贴膏A组、贴膏B组、贝占 膏C组与模型组比较，EOS没有显著降低，IgG没有显著增高，均没有显著性差异； 本发明贴膏组与内服组比较，EOS计数下降更明显（P〈0. 05)，IgG含量升高更显著 (P〈0. 05)，较内服组有显著性差异，本发明贴膏组明显优于内服组。
[0045] 血清总IgE水平在空白组、模型组、内服组和贴敷组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C 组的变化均不明显，无显著性差异。
[0046] 3讨论与结论 本实验结果证实，该贴膏穴位贴敷能明显降低哮喘豚鼠血中EOS计数，并能提高血清IgG的含量，充分说明该贴膏能提高机体的免疫功能，有较好的化痰平喘作用。其疗效优于 内服药物桂龙咳喘宁，并且也明显优于贴膏A、贴膏B、贴膏C，说明本发明药物组合物贴膏 中各药味之间的配伍精良，缺一不可，各药味之间的组合产生了明显的协同增效作用，值得 临床推广应用。
[0047] 哮喘的气道炎症反应，在人体是由IgE介导的速发相的变态反应。可激活E0S，释 放气道上皮物质、炎性介质和相关的细胞因子，参与炎症反应的调节。本实验观察到血清总IgE含量在空白组、模型组、内服组与贴敷组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C组均无明显改变。 而模型组IgG含量明显降低，与空白组比较有显著性差异（P〈0. 05)。经本发明贴膏穴位贴 敷和内服桂龙咳喘宁两种方法治疗后，IgG含量明显增高（P〈0. 01，P〈0. 05)，说明豚鼠的哮 喘是由IgG介导的的变态反应，而不是IgE介导的。这与人体的哮喘发病机制有所不同。 [0048] 本发明穴位贴敷疗法是将有效药物贴敷于相关穴位上，通过药物和穴位的双重作 用而达到治疗目的的。该方法对肠胃无刺激，也不经过肝的首过效应，不会引起人体的不良 反应。
[0049] 实验二：本发明药物贴膏穴位敷贴治疗哮喘症疗效观察 1资料和方法 I. 1 一般资料 黑龙江中医药大学附属第一医院2014年4月至2015年1月支气管哮喘症患者42例， 其中男性21例，女性21例；年龄22岁~58岁，平均年龄（40. 5±1. 3)岁；病程1年~20 年，平均病程（7. 4±2. 3)年。纳入标准：符合中华医学会呼吸科学会制定的支气管哮喘的 诊断标准；经相关临床特征、实验室检查、影像学检查确诊。所有患者均签署知情同意书。
[0050] 根据随机数字表法分为研宄组、对照组，每组21例。
[0051] 研宄组男性11例，女性10例，年龄22岁~58岁，平均年龄（40. 3±1. 4)岁；病程 1年~20年，平均病程（7. 6±2. 5)年； 对照组男性10例，女性11例，年龄22~57岁，平均年龄（40. 7±1. 6)岁；病程1年~ 20年，平均病程（7. 2±2. 0)年。
[0052] 两组患者均排除血液系统、肝肾、心脑血管系统疾病、精神疾患、哺乳期、妊娠期女 性，两组患者的性别、平均年龄、平均病程等临床资料无统计学意义（P> 0.05)，结果具有 可比性。
[0053] 1. 2研宄方法 全部患者均酌情予以氧气疗法、化痰止咳抗感染、糖皮质激素等常规性疗法。研宄组： 在此基础上予以本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，药物贴膏制备方法参见本发明说明书实施 例1，将贴膏分别贴于病人双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞 穴，每24h更换一次，两组均治疗3个月。
[0054] 观察两组的临床效果和咳嗽、啰音、紫绀、喘息的持续时间。
[0055] L3判断和评估标准 显效：体征症状消失或显著减轻，无呼吸困难、低氧血症，意识清晰； 有效：症状略有减轻，轻度低氧血症，意识清楚，未出现呼吸困难； 好转：出现紫绀、哮鸣音，中度低氧血症，略有呼吸困难； 无效：体征症状加重或无改变，重度低氧血症，喘憋。
[0056] 临床有效率为显效与有效的百分比之和。
[0057] 1. 4统计学方法 全部数据采用SPSS18. 0软件系统处理分析，计量资料采用均数土标准差（mean土SD) 表示，计量资料采用t检验，计数资料采用X2检验，以P< 0. 05为差异有统计学意义。
[0058] 2结果 2. 1两组临床效果的评估比较 研宄组的临床有效率95. 24%，显著高于对照组的61. 90%，差异有统计学意义（P< 0? 05)，见表 2。
[0059] 表2两组临床效果的评估比较[n(%)]
2. 2两组患者的体征及症状持续时间评估 研宄组治疗后的咳嗽、喘息、紫绀、啰音等临床症状体征持续时间显著优于对照组，差 异有统计学意义（P< 〇. 05)，见表3。
[0060] 表3两组患者的体征及症状持续时间评估（mean土SD，天）
3讨论与结论 本研宄对支气管哮喘患者进行本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，结果显示：研宄组的临 床有效率为95. 24%，显著优于对照组的61. 90%，差异有统计学意义（P< 0. 05);研宄组治疗 后的咳嗽、喘息、紫绀、啰音等临床症状体征持续时间显著优于对照组，差异有统计学意义 (P< 0. 05)〇
[0061] 综上所述，哮喘症进行本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，可显著改善患者的临床症 状体征，临床效果确切，值得临床推广。
[0062] 实验三：本发明贴膏治疗青年慢性疲劳综合征 1资料与方法I. 1 一般资料 选择黑龙江中医药大学附属第一医院门诊患者40例，诊断标准参照美国疾病控制与 预防中心（CDC)制订的CFS诊断标准，主症为临床评估的不能解释的持续性或反复发作的 慢性疲劳，该疲劳是新得的或有明确的发作期限，不是用力的结果；经休息后不能明显缓 解，导致在工作、社会或个人活动方面明显下降。次症为下述症状中同时出现4项及其以 上，且这些症状已持续存在或反复发作6个月或更长时间，但又不应早于疲劳出现：近期记 忆力或注意力集中明显下降；咽痛；颈部或腋下淋巴结肿大，触痛；肌肉痛；没有红肿的多 关节疼痛；一种类型新、程度重的头痛；不能解乏的睡眠；运动后疲劳持续超过24h。中医诊 断标准参照《中医内科学》（患者证属脾气亏虚肝郁气滞型）。
[0063] 纳入标准：符合CFS诊断主症加次症4项及其以上者；性别不限，年龄22~44岁； 病程超过6个月；经临床评估合格(对持续、反复疲劳低于6个月患者进行常规体检、精神状 态检查，及实验室血常规、尿常规、血沉、电解质、血糖、肝功能、肾功能、促甲状腺激素等检 查）排除因其他疾病引起的慢性疲劳者；知情同意，自愿参加临床试验。
[0064] 排除标准：年龄在22岁以下或44岁以上；有原发病原因可解释的慢性疲劳；双相 情感障碍、精神分裂症、妄想症、痴呆、神经性厌食症；具有心血管病变，肝、肾、肺脏病变，血 液病变，肿瘤或其他代谢疾病；已接受其他有关治疗，可能影响本研宄的效应指标观察；试 验期间合用其他非针对基础病治疗的中西药物。
[0065] 将40例患者随机分为治疗组和对照组，各20例。治疗组中，男10例，女10例；对 照组中，男11例，女9例。两组患者均为青年患者，性别、年龄、病程、症状、体征等一般资料 比较，差异无统计学意义（P> 〇. 05)，具有可比性。
[0066] 1. 2治疗方法 两组均给予心理疏导，具体方法为：采用心理压力消除法，让患者换位思考，在认识、思 考和评价客观事物时，注意从多方面看问题，消除消积情绪，心理压力可能迎刃而解；广泛 结交朋友，向知心朋友倾诉你的感受，同时接受帮助，寻求事情解决的办法；降低生活标准， 积极从事体育锻炼，放松身心，缓解紧张情绪。对照组服用归脾丸1丸，每日2次；谷维素 20mg，每日3次。治疗组加用本发明贴膏治疗，其处方及制备方法参照本发明说明书具体实 施方式中的实施例1。两组患者均以30d为1个疗程，3个疗程后评价疗效。
[0067] 1. 3观察指标 临床症状观察依据疲劳评定量表，临床心理观察依据症状自评量表（SCL-90)的心理测 试量表，在就诊首日、每个疗程结束时进行观察。
[0068] L4统计学处理 采用SPSS10. 0统计软件进行处理，计量资料用均数土标准差（mean土SD)表示，采用t检验，计数资料和等级资料用X2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
[0069] 2 结果 结果见表4和表5。
[0070] 表4两组患者疲劳量表积分比较（mean土SD，分）
注：与本组治疗前比较，*P< 0. 01 ;与对照组治疗后比较，#P< 0. 01。
[0071] 表5两组患者SCL-90量表各因子评分比较（mean土SD，分）
注：与对照组比较，*P< 0. 01。
[0072] 3 结论 本研宄结果显示，采用本发明贴膏治疗的患者疲劳评分改善及SCL-90量表各因子评 分明显优于对照组，表明其治疗CFS疗效佳。针对青年患者，相较于西药和传统汤药或理疗 治疗，运用本膏方治疗具有疗效确切、用药方便等优点，值得临床推广。
[0073] 实验四：本发明药物贴膏质量检测研宄 1仪器与材料 1. 1仪器 电子分析天平(德国赛多利斯股份公司）；国之源超纯水器(湖南科尔顿水务有限公司）； 超声波清洗器(东莞市科桥超声波设备有限公司）；高效液相色谱仪(美国赛默飞世尔科技 有限公司）。
[0074] 1. 2 材料 本发明药物贴膏(批号：140502、140503、140504)，参照本发明说明书【具体实施方式】中 的实施例1制备；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
[0075] 2含量测定 2. 1对照品溶液的制备：精密称取青风藤碱（sinoacutine)对照品75mg，置IOmL量瓶 中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀 释至刻度，制成每ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得。
[0076] 2. 2供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐 酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶 液，加氨水调节PH至9~10,转至分液漏斗中 ，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并 3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液。
[0077] 2. 3色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙 腈-0?Olmol/L庚烷磺酸钠与0? 02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值 2. 8) (21 :79);检测波长：260nm;进样量：10yL。
[0078] 2. 4专属性考察：按处方量称取缺青风藤的其他药材，依照本发明药物贴膏的工 艺制成缺青风藤阴性样品，按"2. 2"项下方法制成缺青风藤阴性对照溶液，在"2. 3"项色谱 条件下测定，结果显示专属性良好。
[0079] 2. 5线性关系考察：精密称取青风藤碱对照品适量，按"2. 1"项下方法制成浓 度依次为5. 4、10. 8、21. 6、43、64. 8yg/mL的对照品溶液，照"2. 3"项下色谱条件分别进 样10yL，记录色谱峰面积，将峰面积积分值Y对相应的浓度X进行线性回归，得回归方程 Y=0. 0344X+0. 0027，r=0. 9999，结果表明青风藤碱浓度在5. 5~64. 9yg/mL范围内，与峰面 积积分值呈良好的线性关系。
[0080] 2. 6精密度试验：取对照品溶液，重复进样6次，测定青风藤碱的峰面积，结果RSD 为1. 07%，表明仪器精密度良好。
[0081] 2. 7重复性试验：取同一批(批号：140502)本发明药物贴膏供试品样品，按样品测 定项下方法，连续测定5次，测定青风藤碱的峰面积，得青风藤碱的平均含量为0. 1634mg/ g，RSD为0. 89% (n=5)，结果表明重现性良好。
[0082] 2. 8稳定性试验：取同一批本发明药物贴膏样品，按含量测定方法，在0、2、4、6、 IOh分别进样10yL，得青风藤碱的平均含量为0. 1611mg/g，RSD为0. 38% (n=5)，结果表明 被测样品溶液在IOh内稳定。
[0083] 2. 9加样回收率试验：在已测含量的本发明药物贴膏样品溶液中，加入一定量的 青风藤碱对照品溶液进行试验，并计算其回收率，结果平均回收率为98. 6%，RSD为1. 06%。
[0084] 2. 10样品中青风藤碱的含量测定：精密称取3批本发明药物贴膏样品（批号： 140501、140502、140503)，按"2. 2"项下方法制成供试品溶液。再按"2. 3"项下色谱条件测 定青风藤碱的含量，结果见表6。
[0085] 表6批本发明药物贴膏样品青风藤碱含量测定结果
3讨论 本发明采用HPLC测定了本发明药物贴膏中青风藤碱的含量，测得其平均含量为 0. 1647mg/g。本发明药利用HPLC法测定了青风藤碱的含量，为该制剂质量标准的制定提供 科学依据。
[0086]
【具体实施方式】： 实施例1 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g、蛇床子5g辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0087] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1623mg/g。
[0088] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0089] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0090] 实施例2 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤10g、蛇床子5g辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1)称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0091] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1843mg/g。
[0092] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0093] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0094] 实施例3 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g、蛇床子IOg辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1)称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入 特制包装袋中，得到最终成品。
[0095] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1632mg/g。
[0096] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0097] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0098] 实施例4 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤10g、蛇床子IOg辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0099] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1872mg/g。
[0100] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0101] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0102] 在本发明药物贴膏中原料药的基源如下： 墻施为墻熟墻屬{植-物墻Cinnamoimmcamphora(L)Presl[LauruscamphoraL]饱根、干、枝、叶经蒸馏精制而成的颗粒状物。
[0103] 薄荷脑为唇形科薄荷属植物薄荷#<9/?成3CaaatZaefl1Si1SZ. /? Brig.;M.arvensisL.var.haplocalyxBrig.;M.arvensisauct./?〇/?Z. 7全草中提 炼出的结晶。
[0104] 丁香油为桃金娘科丁子香属植物丁香及/供 aromaticumCL)Merr.d/^rrjv万.ara舰的干燥花蕾经蒸饱所得的挥 发油。
[0105] 青风藤为防己科防己属植物青藤5Y/?(9膨(7?"/?/?. )ZfeAtZFi/s*.
[MenispermumacuturnThunb.]或毛售藤S.acuturn(Thimb.)Rehd.etWils.var.cinereum(Diels)RehcLetWlis饱藤客。
[0106] 蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床CmWi? n)Cfe1St. monnieriL]饱果实。
[0107] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包 含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当 将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员 可以理解的其他实施方式。
【主权项】
1. 一种治疗哮喘的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制 成的：樟脑1~2重量份，薄荷脑1~2重量份，丁香油1~2重量份，青风藤10~20重量 份，蛇床子10~20重量份。2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原 料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑2重量份，丁香油1重量份，青风藤20重量份，蛇床子10 重量份。3. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原 料制成的：樟脑2重量份，薄荷脑1重量份，丁香油2重量份，青风藤10重量份，蛇床子20 重量份。4. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原 料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑1重量份，丁香油1重量份，青风藤10重量份，蛇床子10 重量份。5. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用中药 学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。6. 如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用如下方法制备： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液，备 用； (4) 称取处方量的e-环糊精，加入蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无 水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制 备成樟脑和薄荷脑的环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，浓缩得 胶液； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。7. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的含量测 定方法为：采用高效液相色谱法进行青风藤碱的含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测。8. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物在制备治疗青年慢性疲劳综合征药物 中的应用。9. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物在制备治疗风湿性关节炎药物中的应 用。
【专利摘要】本发明属于药物领域，发明名称为一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1～2重量份，薄荷脑1～2重量份，丁香油1～2重量份，青风藤10～20重量份，蛇床子10～20重量份。该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。本发明还提供该药物贴膏的含量测定方法，该方法具有较高准确度、稳定性和重复性。该药物组合物可用于制备治疗风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征的药物。
【IPC分类】A61K31/045, A61P19/02, A61P11/06, A61K31/125, A61K36/61, A61K9/70, G01N30/02, A61P39/00
【公开号】CN104906194
【申请号】CN201510353042
【发明人】王锐, 杨婧
【申请人】黑龙江中医药大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月24日
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物领域，涉及一种治疗哮喘的药物组合物，具体涉及一种由为樟脑、 薄荷脑、丁香油、青风藤、蛇床子为原料制成的药物组合物。
【背景技术】
[0002] 在哮喘是一种常见病、多发病，属于中医的"喘证"范畴。中医认为，本病的发生是 肺脾肾虚、痰饮内伏、痰阻气道、宣降失常所致。哮喘是一种以嗜酸性粒细胞（E0S)、肥大细 胞反应为主，淋巴细胞和巨噬细胞浸润为辅的气道炎症性疾病。往往在人的体质下降，免疫 功能低下时发病。其发病率高居不下，严重危害人类的身体健康。穴位贴敷疗法具有简单、 效验、费用少，无副作用的优点，近年来在防治哮喘的应用中发挥了巨大作用。
[0003] 一、临床研宄 (一）药物选择 研宄表明，药物可通过腧穴、肌肤、孔窍等处吸收，贯通经脉而作用于全身。穴贴用药有 单味药、多味药的不同，但大多是用多味药，如选用细辛、甘遂、白芥子、麻黄等这类刺激性 强和芳香走窜之品，其"切于皮肤，彻于腠理，摄于吸气，融于渗液"，可达到温煦阳气，驱寒 散邪，温肺化饮的作用。所用赋形剂多采用姜汁、蜂蜜、醋、酒等，或在其中加入助渗药物如 二甲基亚砜、氮酮等以提高药物的渗透。
[0004] (二）穴位选择 1、单穴的使用：高修安等用海龙蠲哮方(海蛤粉、地龙、炙麻黄、杏仁、炙甘草、款冬花、 葶苈子、细辛、防风、蒲公英、丹参、橘红、淫羊藿）联用咳喘平(猪牙皂、细辛等）药末，调以白 醋、葱白成糊，贴于双侧涌泉穴，贴药2周。治疗75例发作期患儿，总有效率为89. 3%。张瑜 等将患者随机分为2组，治疗组24例用中药辛桂散(细辛、白芥子、苍术、公丁香、肉桂、法半 夏、人工麝香)敷脐，每天换药1次，10日为1个疗程，每年从小暑开始，共贴3~6个疗程。 对照组21例不予任何治疗和处理，观察期1年，观察治疗前后哮喘病情分级及外周血嗜酸 性粒细胞数的变化，结果有显著性差异，治疗组优于对照组（P〈〇. 05)。
[0005] 2、多穴的使用：徐绿萍等自制"止喘膏"（白芥子、甘遂、细辛、元胡索、生麻黄、冰 片等，姜汁调)，初伏取肺俞、定喘、天突，中伏取风门、厥阴俞、膻中，末伏取大抒、心俞、华 盖。虚寒型加膏肓俞、肾俞；痰热型加丰隆、大椎，3次为1个疗程，连贴3年。结果：治疗 218例，虚寒型156例，有效率为96. 8%，痰热型62例，有效率为93. 7%。张林昌等用自制伏 贴膏（白芥子、延胡索、甘遂、麻黄、附子、黄苗、生川乌、细辛、麝香、姜汁)，于初伏取定喘、肺 俞、心俞、膻中，中伏取风门、厥阴俞、膈俞、大椎，末伏取大抒、肺俞、膏肓、天突，3次为1个 疗程，连贴3年。结果治疗支气管炎、哮喘112例，显效63例，有效45例，无效4例，总有效 率为96. 43%。曹春梅等用膏剂（白芥子、玄胡、甘遂、细辛、地龙、麝香、姜汁)治疗580例，初 伏取大抒、肺俞、膈俞，中伏取肺俞、心俞、膈俞，末伏取肺俞、脾俞、肾俞、足三里，连贴3年， 总有效率为98. 1%。邵素菊等在三伏天选取肺俞、大椎、风门、天突、膻中等穴，贴药(玄胡、干 姜、丁香、生甘遂、细辛、白芥子，姜汁调)，4~6h后取下，一年贴敷3次。治疗40例，临床控 制8例，显效26例，好转4例，无效5例，总有效率为87. 50%。
[0006] 3、穴位贴敷配合他法：陆为华于三伏天在百劳、肺俞、膏肓上贴药(细辛、白芥子、 甘遂、延胡索等)，并使用直流感应电疗仪辅助药物渗透。每次敷药30min，以局部皮肤潮红 为度。每年治疗4次，连治3年。治疗1000例患儿，显效100例，有效660例，无效240例， 总有效率为76%。王希琳于三伏天采用壮医药线，应用梅花形灸法，点灸大椎、肺俞、膏肓俞、 膻中、足三里、脾俞、肾俞，灸后在背部穴位上贴敷自制"消喘膏"，每年贴3次，连治3年。治 疗缓解期患者288例，总有效率达91. 7%。瞿群威等用火针配合贴黑膏药(菟丝子、白芥子、 五味子、元胡、细辛、甘遂、杜仲、僵蚕等)治疗50例患者。寒证取百劳、肺俞、膏肓俞，热证取 大椎、风门、肺俞。火针每6日1次，5次为1个疗程。黑膏药每次贴3天，连续10次为1个 疗程。其治愈率和总显效率分别为54%和84%，且寒证有效率为100%，与热证有效率为89. 6% 相比，有显著性差异（P〈〇. 01)。周志英用自制消喘膏（白芥子、延胡索、细辛、生甘遂、蜂蜜及 姜汁)，连续3年于三伏天在双侧风门、肺俞、膏肓俞、肾俞上拔罐后贴敷上穴，一年贴3次， 并从初伏开始用卡介菌多糖核酸注射液〇. 5mL注射患者双侧足三里，每隔1周注射1次，共 治6次，连续治疗3年。结果114例中，临床控制16例，显效38例，好转46例，无效14例， 总有效率为87. 7%。李国忠在三伏天和三九天用锋钩针勾刺天突穴，配合在肺俞、膏肓俞、风 门、大椎上拔罐后，用药饼(麻黄、白芥子、细辛、洋金花、甘遂、扑尔敏、姜汁）贴上穴，喘甚加 定喘，痰多加脾俞，肾虚加肾俞，一年治6次，结果治疗264例，痊愈36例，有效186例，无效 42例。
[0007] 二、机理研宄 现代研宄认为哮喘的主要病理是慢性气道炎症，而免疫功能异常是导致炎症反复发作 的重要原因。临床研宄表明，穴位贴敷疗法可以改善机体的免疫状态，对气道炎性细胞、免 疫机制、细胞受体、细胞因子、肺功能、哮喘潜伏期等都有非常明显的影响。单翠英等报道 运用伏九贴敷药膏贴穴后，可使患儿FVC、FEV1、PEF、FEF均升高，IgE降低，IgA、IgG升高、 IL-4降低、IFN-Y升高，说明穴贴法能调节机体免疫力，纠正体内Thl/Th2的比例失衡，从 而达到治疗哮喘的作用。杨君军等观察到三伏贴能显著降低患者血浆可溶性细胞间黏附分 子（sICAM-1)水平（P〈0. 01 )，降低血浆可溶性血管-细胞间黏附分子（sVCAM-1)和可溶性 选择素（sEslectin)水平（P〈0. 05)，说明三伏贴可能通过抑制黏附分子的表达或直接抑制 白细胞与内皮细胞的黏附，从而减少炎细胞的浸润，达到治疗目的。
[0008] 动物实验证明穴位贴敷能使IFN-Y明显升高，明显降低潜伏期中的IgE和IL-6、 IL-4、IL-2水平、血清肿瘤坏死因子及血清E、P选择素水平，减少嗜酸性粒细胞浸润等。沈 惠风等运用血清药理学的方法，观察敷贴后含药血清对抗由氯化乙酰胆碱（ACH)引起的豚 鼠体外螺旋气管条的收缩作用，发现其效果与氨茶碱腹腔注射作用等同。并且在一定时间 内，体外气管条的收缩百分比随中药敷贴治疗天数的延长而减少，但治疗7~14天，其作用 趋于稳定，说明对抗ACH解痉作用是中药循经敷贴法治疗哮喘的机制之一，且合理地确定 疗程是十分必要的。
[0009] 三、讨论 中医认为哮喘是宿痰内伏于肺，复因外邪或饮食、情志、劳倦等诱发，致使痰阻气道，肺 失肃降，痰气交阻，壅塞气道所致。穴位贴敷防治哮喘是根据中医"春夏养阳"、"长夏土治， 土能生金"，天人相应的理论、子午流注理论和"未病先防"的思想，融合了经络、穴位、药物、 环境甚至时间的多重作用，"可与内治并行，能补内治之不及"，已成为穴位贴敷疗法临床运 用的成功典范，具有广阔发展前景。
[0010] 本发明贴膏是发明人多年来精心研制，主要用于治疗慢性气管炎和支气管哮喘且 行之有效的外用贴膏。如果在"三伏天"使用，能通过"时间疗法"、药物渗透和穴位调整的 三重治疗而达到健脾益肾、降气平喘、化痰止咳的综合治疗作用。经研宄表明，本发明药物 贴膏对哮喘具有较好的治疗效果。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供一种治疗哮喘的药物组合物。
[0012] 本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。
[0013] 本发明还提供该药物组合物的质量检测方法。
[0014] 本发明还提供了该药物组合物的制药用途。
[0015] 本发明的目的是通过以下方式实现的： 一种治疗哮喘的药物组合物，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1~2 重量份，薄荷脑1~2重量份，丁香油1~2重量份，青风藤10~20重量份，蛇床子10~ 20重量份。
[0016] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑2重量 份，丁香油1重量份，青风藤20重量份，蛇床子10重量份。
[0017] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑2重量份，薄荷脑1重量 份，丁香油2重量份，青风藤10重量份，蛇床子20重量份。
[0018] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑1重量 份，丁香油1重量份，青风藤10重量份，蛇床子10重量份。
[0019] 该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。
[0020] 该药物组合物贴膏剂优选采用如下方法制备： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液，备 用； (4) 称取处方量的e-环糊精，加入蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无 水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制 备成樟脑和薄荷脑的环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，浓缩得 胶液； (7)将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0021] 该药物组合物的含量测定方法为：采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测 定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测。
[0022] 该药物组合物可以用于制备治疗风湿性关节炎的药物。< br>[0023] 该药物组合物还可以用于制备治疗青年慢性疲劳综合征的药物。
[0024] 通过如下实验研宄验证本发明的技术效果： 实验一：本发明贴膏贴敷穴位治疗豚鼠哮喘的实验研宄 1材料与方法 实验动物：健康豚鼠70只（雌雄各半）体重300 ±50g。
[0025] 实验药物： 本发明贴膏： 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g、蛇床子5g辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0026] 对比贴膏A: 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g 辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油，连续研磨 至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的 同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的 粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0027] 对比贴膏B: 本发明贴膏： 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g 辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，加90%乙醇回流提取2次，每次 2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤浸 膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸 馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗 粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0028] 对比贴膏C: 本发明贴膏： 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、蛇床子5g 辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次 2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到蛇床子浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、蛇床子浸 膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸 馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗 粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7)将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0029] 桂龙咳喘宁胶囊(桂龙药业(安徽）有限公司生产，国药准字Z20053135) 试剂与仪器卵蛋白干粉制剂(上海博奥生物制品公司生产)，IgE放免试剂盒(北方生物 技术研宄所生产)，IL-4放免试剂盒(北方生物技术研宄所生产)，IgG放免试剂盒（中国原 子能科学研宄所生产)，CX5生化分析仪(黑龙江中医药大学附属第一医院核放射科提供)， CW-20D超声雾化仪(德国百瑞公司制造)，FJ-2008全自动C免疫计数仪（西安二六二厂制 造)。
[0030] 选用穴位肺俞(双)、厥阴俞(双)、心俞(双)、督俞(双)、膈俞(双）(取穴参照《实验针 灸学》（林文注.实验针灸学[M].上海：上海科学技术出版社，1994:88-89)。
[0031] 实验方法动物分组：将70只豚鼠以平衡饲料适应性的喂养1W，依据"数字随机表 分组法"分为本发明贴膏穴位贴敷治疗组(简称本发明贴膏组)、对比贴膏A穴位贴敷治疗组 (简称贴膏A组)、对比贴膏B穴位贴敷治疗组(简称贴膏B组)、对比贴膏C穴位贴敷治疗组 (简称贴膏C组)、空白对照组(简称空白组)、模型对照组(简称模型组)、口服药物对照组(简 称内服组）7组，每组10只。
[0032] 模型复制：参考相关文献(苗三明.实验动物与动物实验技术[M]北京：中国中 医药出版社，1997: 193~ 194)，除空白对照组外，给本发明贴膏组、贴膏A组、贴膏B组、贝占 膏C组、模型组、内服组六组动物造模。给每只豚鼠的腹腔内注射10%卵蛋白生理盐水Iml 进行致敏，IW重复一次。2W后将豚鼠置雾化箱中，以恒压400mmHg雾化吸入1%卵蛋白生理 盐水15min。观察至豚鼠出现张口喘息，肚腹鼓张为止，即造模成功。
[0033] 处理： 本发明贴膏组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将本发明贴膏贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、 心俞、督俞、膈俞穴在内)，然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。 每天1次，共贴敷6次。
[0034] 贴膏A组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏A贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、心俞、 督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天 1次，共贴敷6次。
[0035] 贴膏B组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏B贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、心俞、 督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天 1次，共贴敷6次。
[0036] 贴膏C组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面 积3cmX4. 5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏C贴敷于脱毛处(包括肺俞、厥阴俞、心俞、 督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天 1次，共贴敷6次。
[0037] 内服组豚鼠，用桂龙咳喘宁胶囊去胶囊，内装药粉以0. 58g/kg/d的用量(按体表 面积折算的等效剂量，相当于人体常规用量的4. 9倍）用蒸馏水按1 :5的比例调成水糊状， 进行灌胃治疗。
[0038] 空白组、模型组动物除每天抓取刺激外，不作任何处理。
[0039] 标本采集及检测方法EOS检测：对每组豚鼠，均采用毛细取穴管吸取豚鼠尾尖血 液20yL，加入0. 38mL伊红-甲醛稀释液中，轻轻摇匀，静置5min，采用常规计数法检测。
[0040] IgE、IgG、IL-4检测：对每组豚鼠，用3. 5%苯巴比妥钠0?lg/kg腹腔注射麻醉，目艮 球静脉采血6ml，分装3个试管。各2ml待凝固后分离血清，在-20°C保存，按照试剂盒说明 方法和要求操作，采用放免法分低温冰箱检测IgE、IgG、IL-4。
[0041] 统计学处理：应用SPSS10.0系统软件进行处理，所有数据用均数土标准差 (mean土SD)表示，各组间比较用方差分析。
[0042] 2 结果 各组豚鼠血中EOS计数和血清总IgE、IgG、IL-4结果比较(见表1)。
[0043] 表1各组豚鼠血中EOS和血清总IgE、IgG、IL-4的结果比较（mean土SD)
注：模型组与空白组比较，*表示P〈〇.〇5，**表示P〈0.01 ;本发明贴膏组与模型组的比 较，#表示P〈〇. 05, ##表示P〈0. 01 ;本发明贴膏组与内服组的比较，▲表示P〈0. 05 可以看出，造模后模型组动物的EOS计数和IL-4的含量显著上升（P〈0. 05,P〈0. 01)，IgG明显下降（P〈0. 05)，说明造模成功。
[0044] 经过治疗后，本发明贴膏组与模型组比较，EOS显著降低（P〈0. 01)，IgG显著增高 (P〈0. 01)，均有非常显著性差异；IL-4有所下降，但无统计学意义。贴膏A组、贴膏B组、贝占 膏C组与模型组比较，EOS没有显著降低，IgG没有显著增高，均没有显著性差异； 本发明贴膏组与内服组比较，EOS计数下降更明显（P〈0. 05)，IgG含量升高更显著 (P〈0. 05)，较内服组有显著性差异，本发明贴膏组明显优于内服组。
[0045] 血清总IgE水平在空白组、模型组、内服组和贴敷组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C 组的变化均不明显，无显著性差异。
[0046] 3讨论与结论 本实验结果证实，该贴膏穴位贴敷能明显降低哮喘豚鼠血中EOS计数，并能提高血清IgG的含量，充分说明该贴膏能提高机体的免疫功能，有较好的化痰平喘作用。其疗效优于 内服药物桂龙咳喘宁，并且也明显优于贴膏A、贴膏B、贴膏C，说明本发明药物组合物贴膏 中各药味之间的配伍精良，缺一不可，各药味之间的组合产生了明显的协同增效作用，值得 临床推广应用。
[0047] 哮喘的气道炎症反应，在人体是由IgE介导的速发相的变态反应。可激活E0S，释 放气道上皮物质、炎性介质和相关的细胞因子，参与炎症反应的调节。本实验观察到血清总IgE含量在空白组、模型组、内服组与贴敷组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C组均无明显改变。 而模型组IgG含量明显降低，与空白组比较有显著性差异（P〈0. 05)。经本发明贴膏穴位贴 敷和内服桂龙咳喘宁两种方法治疗后，IgG含量明显增高（P〈0. 01，P〈0. 05)，说明豚鼠的哮 喘是由IgG介导的的变态反应，而不是IgE介导的。这与人体的哮喘发病机制有所不同。 [0048] 本发明穴位贴敷疗法是将有效药物贴敷于相关穴位上，通过药物和穴位的双重作 用而达到治疗目的的。该方法对肠胃无刺激，也不经过肝的首过效应，不会引起人体的不良 反应。
[0049] 实验二：本发明药物贴膏穴位敷贴治疗哮喘症疗效观察 1资料和方法 I. 1 一般资料 黑龙江中医药大学附属第一医院2014年4月至2015年1月支气管哮喘症患者42例， 其中男性21例，女性21例；年龄22岁~58岁，平均年龄（40. 5±1. 3)岁；病程1年~20 年，平均病程（7. 4±2. 3)年。纳入标准：符合中华医学会呼吸科学会制定的支气管哮喘的 诊断标准；经相关临床特征、实验室检查、影像学检查确诊。所有患者均签署知情同意书。
[0050] 根据随机数字表法分为研宄组、对照组，每组21例。
[0051] 研宄组男性11例，女性10例，年龄22岁~58岁，平均年龄（40. 3±1. 4)岁；病程 1年~20年，平均病程（7. 6±2. 5)年； 对照组男性10例，女性11例，年龄22~57岁，平均年龄（40. 7±1. 6)岁；病程1年~ 20年，平均病程（7. 2±2. 0)年。
[0052] 两组患者均排除血液系统、肝肾、心脑血管系统疾病、精神疾患、哺乳期、妊娠期女 性，两组患者的性别、平均年龄、平均病程等临床资料无统计学意义（P> 0.05)，结果具有 可比性。
[0053] 1. 2研宄方法 全部患者均酌情予以氧气疗法、化痰止咳抗感染、糖皮质激素等常规性疗法。研宄组： 在此基础上予以本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，药物贴膏制备方法参见本发明说明书实施 例1，将贴膏分别贴于病人双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞 穴，每24h更换一次，两组均治疗3个月。
[0054] 观察两组的临床效果和咳嗽、啰音、紫绀、喘息的持续时间。
[0055] L3判断和评估标准 显效：体征症状消失或显著减轻，无呼吸困难、低氧血症，意识清晰； 有效：症状略有减轻，轻度低氧血症，意识清楚，未出现呼吸困难； 好转：出现紫绀、哮鸣音，中度低氧血症，略有呼吸困难； 无效：体征症状加重或无改变，重度低氧血症，喘憋。
[0056] 临床有效率为显效与有效的百分比之和。
[0057] 1. 4统计学方法 全部数据采用SPSS18. 0软件系统处理分析，计量资料采用均数土标准差（mean土SD) 表示，计量资料采用t检验，计数资料采用X2检验，以P< 0. 05为差异有统计学意义。
[0058] 2结果 2. 1两组临床效果的评估比较 研宄组的临床有效率95. 24%，显著高于对照组的61. 90%，差异有统计学意义（P< 0? 05)，见表 2。
[0059] 表2两组临床效果的评估比较[n(%)]
2. 2两组患者的体征及症状持续时间评估 研宄组治疗后的咳嗽、喘息、紫绀、啰音等临床症状体征持续时间显著优于对照组，差 异有统计学意义（P< 〇. 05)，见表3。
[0060] 表3两组患者的体征及症状持续时间评估（mean土SD，天）
3讨论与结论 本研宄对支气管哮喘患者进行本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，结果显示：研宄组的临 床有效率为95. 24%，显著优于对照组的61. 90%，差异有统计学意义（P< 0. 05);研宄组治疗 后的咳嗽、喘息、紫绀、啰音等临床症状体征持续时间显著优于对照组，差异有统计学意义 (P< 0. 05)〇
[0061] 综上所述，哮喘症进行本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，可显著改善患者的临床症 状体征，临床效果确切，值得临床推广。
[0062] 实验三：本发明贴膏治疗青年慢性疲劳综合征 1资料与方法I. 1 一般资料 选择黑龙江中医药大学附属第一医院门诊患者40例，诊断标准参照美国疾病控制与 预防中心（CDC)制订的CFS诊断标准，主症为临床评估的不能解释的持续性或反复发作的 慢性疲劳，该疲劳是新得的或有明确的发作期限，不是用力的结果；经休息后不能明显缓 解，导致在工作、社会或个人活动方面明显下降。次症为下述症状中同时出现4项及其以 上，且这些症状已持续存在或反复发作6个月或更长时间，但又不应早于疲劳出现：近期记 忆力或注意力集中明显下降；咽痛；颈部或腋下淋巴结肿大，触痛；肌肉痛；没有红肿的多 关节疼痛；一种类型新、程度重的头痛；不能解乏的睡眠；运动后疲劳持续超过24h。中医诊 断标准参照《中医内科学》（患者证属脾气亏虚肝郁气滞型）。
[0063] 纳入标准：符合CFS诊断主症加次症4项及其以上者；性别不限，年龄22~44岁； 病程超过6个月；经临床评估合格(对持续、反复疲劳低于6个月患者进行常规体检、精神状 态检查，及实验室血常规、尿常规、血沉、电解质、血糖、肝功能、肾功能、促甲状腺激素等检 查）排除因其他疾病引起的慢性疲劳者；知情同意，自愿参加临床试验。
[0064] 排除标准：年龄在22岁以下或44岁以上；有原发病原因可解释的慢性疲劳；双相 情感障碍、精神分裂症、妄想症、痴呆、神经性厌食症；具有心血管病变，肝、肾、肺脏病变，血 液病变，肿瘤或其他代谢疾病；已接受其他有关治疗，可能影响本研宄的效应指标观察；试 验期间合用其他非针对基础病治疗的中西药物。
[0065] 将40例患者随机分为治疗组和对照组，各20例。治疗组中，男10例，女10例；对 照组中，男11例，女9例。两组患者均为青年患者，性别、年龄、病程、症状、体征等一般资料 比较，差异无统计学意义（P> 〇. 05)，具有可比性。
[0066] 1. 2治疗方法 两组均给予心理疏导，具体方法为：采用心理压力消除法，让患者换位思考，在认识、思 考和评价客观事物时，注意从多方面看问题，消除消积情绪，心理压力可能迎刃而解；广泛 结交朋友，向知心朋友倾诉你的感受，同时接受帮助，寻求事情解决的办法；降低生活标准， 积极从事体育锻炼，放松身心，缓解紧张情绪。对照组服用归脾丸1丸，每日2次；谷维素 20mg，每日3次。治疗组加用本发明贴膏治疗，其处方及制备方法参照本发明说明书具体实 施方式中的实施例1。两组患者均以30d为1个疗程，3个疗程后评价疗效。
[0067] 1. 3观察指标 临床症状观察依据疲劳评定量表，临床心理观察依据症状自评量表（SCL-90)的心理测 试量表，在就诊首日、每个疗程结束时进行观察。
[0068] L4统计学处理 采用SPSS10. 0统计软件进行处理，计量资料用均数土标准差（mean土SD)表示，采用t检验，计数资料和等级资料用X2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
[0069] 2 结果 结果见表4和表5。
[0070] 表4两组患者疲劳量表积分比较（mean土SD，分）
注：与本组治疗前比较，*P< 0. 01 ;与对照组治疗后比较，#P< 0. 01。
[0071] 表5两组患者SCL-90量表各因子评分比较（mean土SD，分）
注：与对照组比较，*P< 0. 01。
[0072] 3 结论 本研宄结果显示，采用本发明贴膏治疗的患者疲劳评分改善及SCL-90量表各因子评 分明显优于对照组，表明其治疗CFS疗效佳。针对青年患者，相较于西药和传统汤药或理疗 治疗，运用本膏方治疗具有疗效确切、用药方便等优点，值得临床推广。
[0073] 实验四：本发明药物贴膏质量检测研宄 1仪器与材料 1. 1仪器 电子分析天平(德国赛多利斯股份公司）；国之源超纯水器(湖南科尔顿水务有限公司）； 超声波清洗器(东莞市科桥超声波设备有限公司）；高效液相色谱仪(美国赛默飞世尔科技 有限公司）。
[0074] 1. 2 材料 本发明药物贴膏(批号：140502、140503、140504)，参照本发明说明书【具体实施方式】中 的实施例1制备；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
[0075] 2含量测定 2. 1对照品溶液的制备：精密称取青风藤碱（sinoacutine)对照品75mg，置IOmL量瓶 中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀 释至刻度，制成每ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得。
[0076] 2. 2供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐 酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶 液，加氨水调节PH至9~10,转至分液漏斗中 ，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并 3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液。
[0077] 2. 3色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙 腈-0?Olmol/L庚烷磺酸钠与0? 02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值 2. 8) (21 :79);检测波长：260nm;进样量：10yL。
[0078] 2. 4专属性考察：按处方量称取缺青风藤的其他药材，依照本发明药物贴膏的工 艺制成缺青风藤阴性样品，按"2. 2"项下方法制成缺青风藤阴性对照溶液，在"2. 3"项色谱 条件下测定，结果显示专属性良好。
[0079] 2. 5线性关系考察：精密称取青风藤碱对照品适量，按"2. 1"项下方法制成浓 度依次为5. 4、10. 8、21. 6、43、64. 8yg/mL的对照品溶液，照"2. 3"项下色谱条件分别进 样10yL，记录色谱峰面积，将峰面积积分值Y对相应的浓度X进行线性回归，得回归方程 Y=0. 0344X+0. 0027，r=0. 9999，结果表明青风藤碱浓度在5. 5~64. 9yg/mL范围内，与峰面 积积分值呈良好的线性关系。
[0080] 2. 6精密度试验：取对照品溶液，重复进样6次，测定青风藤碱的峰面积，结果RSD 为1. 07%，表明仪器精密度良好。
[0081] 2. 7重复性试验：取同一批(批号：140502)本发明药物贴膏供试品样品，按样品测 定项下方法，连续测定5次，测定青风藤碱的峰面积，得青风藤碱的平均含量为0. 1634mg/ g，RSD为0. 89% (n=5)，结果表明重现性良好。
[0082] 2. 8稳定性试验：取同一批本发明药物贴膏样品，按含量测定方法，在0、2、4、6、 IOh分别进样10yL，得青风藤碱的平均含量为0. 1611mg/g，RSD为0. 38% (n=5)，结果表明 被测样品溶液在IOh内稳定。
[0083] 2. 9加样回收率试验：在已测含量的本发明药物贴膏样品溶液中，加入一定量的 青风藤碱对照品溶液进行试验，并计算其回收率，结果平均回收率为98. 6%，RSD为1. 06%。
[0084] 2. 10样品中青风藤碱的含量测定：精密称取3批本发明药物贴膏样品（批号： 140501、140502、140503)，按"2. 2"项下方法制成供试品溶液。再按"2. 3"项下色谱条件测 定青风藤碱的含量，结果见表6。
[0085] 表6批本发明药物贴膏样品青风藤碱含量测定结果
3讨论 本发明采用HPLC测定了本发明药物贴膏中青风藤碱的含量，测得其平均含量为 0. 1647mg/g。本发明药利用HPLC法测定了青风藤碱的含量，为该制剂质量标准的制定提供 科学依据。
[0086]
【具体实施方式】： 实施例1 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g、蛇床子5g辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0087] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1623mg/g。
[0088] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0089] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0090] 实施例2 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤10g、蛇床子5g辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1)称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0091] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1843mg/g。
[0092] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0093] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0094] 实施例3 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤5g、蛇床子IOg辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1)称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入 特制包装袋中，得到最终成品。
[0095] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1632mg/g。
[0096] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0097] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0098] 实施例4 : 药物处方：樟脑0. 5g、薄荷脑0. 5g、丁香油0. 5g、青风藤10g、蛇床子IOg辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP) 3. 5g、聚丙烯酸钠（PANA)I. 5g、明胶lg、羧甲基纤维 素钠（CMC-Na)3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇 400 (PEG400)10g、甘油 15.5g、高岭土 2g、0-环 糊精5. 5g 制备方法： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约 lmL，备用； (4) 称取处方量的0 -环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷 脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于 20min，制备成樟脑和薄荷脑的|3 -环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，体积浓 缩至50mL左右； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。
[0099] 采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每 ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0. 1872mg/g。
[0100] 功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。
[0101] 用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、 双侧膈俞穴，每24h更换一次。
[0102] 在本发明药物贴膏中原料药的基源如下： 墻施为墻熟墻屬{植-物墻Cinnamoimmcamphora(L)Presl[LauruscamphoraL]饱根、干、枝、叶经蒸馏精制而成的颗粒状物。
[0103] 薄荷脑为唇形科薄荷属植物薄荷#<9/?成3CaaatZaefl1Si1SZ. /? Brig.;M.arvensisL.var.haplocalyxBrig.;M.arvensisauct./?〇/?Z. 7全草中提 炼出的结晶。
[0104] 丁香油为桃金娘科丁子香属植物丁香及/供 aromaticumCL)Merr.d/^rrjv万.ara舰的干燥花蕾经蒸饱所得的挥 发油。
[0105] 青风藤为防己科防己属植物青藤5Y/?(9膨(7?"/?/?. )ZfeAtZFi/s*.
[MenispermumacuturnThunb.]或毛售藤S.acuturn(Thimb.)Rehd.etWils.var.cinereum(Diels)RehcLetWlis饱藤客。
[0106] 蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床CmWi? n)Cfe1St. monnieriL]饱果实。
[0107] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包 含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当 将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员 可以理解的其他实施方式。
【主权项】
1. 一种治疗哮喘的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制 成的：樟脑1~2重量份，薄荷脑1~2重量份，丁香油1~2重量份，青风藤10~20重量 份，蛇床子10~20重量份。2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原 料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑2重量份，丁香油1重量份，青风藤20重量份，蛇床子10 重量份。3. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原 料制成的：樟脑2重量份，薄荷脑1重量份，丁香油2重量份，青风藤10重量份，蛇床子20 重量份。4. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原 料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑1重量份，丁香油1重量份，青风藤10重量份，蛇床子10 重量份。5. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用中药 学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。6. 如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用如下方法制备： (1) 称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2 次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏； (2) 分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将 三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用； (3) 樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液，备 用； (4) 称取处方量的e-环糊精，加入蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无 水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制 备成樟脑和薄荷脑的环糊精包合物，备用； (5) 将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与 蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵 中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不 含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用； (6) 称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的0-环糊精包合 物混合均匀后，加入到（2)和（5)制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约Ih后，浓缩得 胶液； (7) 将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适 宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。7. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的含量测 定方法为：采用高效液相色谱法进行青风藤碱的含量测定： (1) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01m〇l/L庚 烷磺酸钠与〇. 〇2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2. 8,比例为21 :79 ; 检测波长：260nm;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置IOmL量瓶中，加三氯甲烷溶 解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置IOmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每ImL甲醇含青风藤碱I. 5mg的对照品溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品lg，置具塞锥形瓶中，加入0. 5%盐酸溶 液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0. 5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加 氨水调节pH至9~10,转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三 氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加IOmL甲醇溶解定容，即得供试品溶液； (4) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪， 进行检测。8. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物在制备治疗青年慢性疲劳综合征药物 中的应用。9. 如权利要求1~4任意一项所述的药物组合物在制备治疗风湿性关节炎药物中的应 用。
【专利摘要】本发明属于药物领域，发明名称为一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1～2重量份，薄荷脑1～2重量份，丁香油1～2重量份，青风藤10～20重量份，蛇床子10～20重量份。该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。本发明还提供该药物贴膏的含量测定方法，该方法具有较高准确度、稳定性和重复性。该药物组合物可用于制备治疗风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征的药物。
【IPC分类】A61K31/045, A61P19/02, A61P11/06, A61K31/125, A61K36/61, A61K9/70, G01N30/02, A61P39/00
【公开号】CN104906194
【申请号】CN201510353042
【发明人】王锐, 杨婧
【申请人】黑龙江中医药大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月24日
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