中药组合物在制备治疗免疫性肝损伤药物中的应用
中药组合物在制备治疗免疫性肝损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，具体地，涉及一种中药组合物在制备治疗免疫性肝损伤药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 免疫性肝损伤（ImmunologicalLiverInjury,ILI)是一组由异常免疫介导的、具 有相似临床表现的慢性免疫性肝病，是导致肝功能衰竭和肝硬化的重要病因。近年来，免疫 性肝炎检出率逐渐上升，在世界范围内占慢性肝炎的10% -20%，严重危害人类的健康。
[0003] 因此，治疗免疫性肝损伤的药物有待于研宄。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种有效治疗免疫性肝损伤的药物。
[0005] 需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：
[0006] 免疫性肝损伤的主要发病机制是机体在易感性基因的作用下，受环境因素、药物 或感染因子的诱导而发病，由于产生肝细胞膜自身靶抗原，机体免疫功能失调，以及肝脏本 身免疫耐受性减退，导致肝损伤。
[0007] 目前，治疗免疫性肝损伤的药物主要为干扰素、胸腺素、Th细胞因子和疫苗，其中， 以疫苗应用最广泛，但上述药物在治疗免疫性肝损伤时，均存在一定的问题。具体地，部分 人群在接种疫苗后不产生抗体，导致在接种疫苗不久后，处于疾病感染的危险中而不自知。 干扰素、胸腺素和核苷类药物均属于抗病毒类药物，该类药物具有高效、方便的诱导，但存 在长期服用易产生病毒耐药，停药后易复发等问题。
[0008] 芍药甘草汤是一种中药复方，其中，甘草、白芍具有配伍协同作用，是常用的缓急 止痛之方，后世用于治疗多种疼痛，效果显著，且治疗范围日渐扩大，现代临床广泛用于消 化、神经系统及骨伤科、肿瘤科以疼痛或抽搐挛急为特征的病症。
[0009] 现已将含有甘草和白芍的组合物制成中成药，即市售的健肝乐颗粒（国药准字 Z42020070)，该药物的专利申请号为201110007790. 2,该专利所公开的适应症之一为急慢 性病毒性肝炎。病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染病，其中， 急性病毒性肝炎主要由特异的嗜肝细胞病毒引起的广泛的肝脏炎症性疾病，而病毒性肝 炎病程持半年以上者即为慢性病毒性肝炎。急慢病毒性肝炎和免疫性肝损伤虽在临床症状 上存在一定的关联性，但二者的致病机理不同，属于不同的适应症，因此，在研宄和治疗过 程中应区别对待。发明人研宄了大量保肝药物的免疫性肝损伤治疗效果，在反复的研宄比 对中意外地发现，健肝乐之类的含有甘草和白芍的组合物不仅能够降低肝内MDA水平，有 效抑制免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平， 对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。采用本发明的药物组合物治疗免疫性肝损伤，可以有 效避免部分人群在接种疫苗后不产生抗体而导致的致病风险，还可以避免抗病毒类药物长 期服用导致的病毒耐药和停药后易复发等问题，对应免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0010] 因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施 例，所述药物组合物包含：甘草和白芍，所述药物组合物用于治疗免疫性肝损伤。
[0011] 发明人惊奇的发现，本发明的药物组合物不仅能够降低肝内MDA水平，有效抑制 免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平，对免疫 性肝损伤有良好的治疗效果。
[0012] 另外，根据本发明上述实施例的药物组合物，还可以具有如下附加的技术特征：
[0013] 根据本发明的实施例，所述甘草与所述白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9。优选地，为 I:1. 4-1. 6。由此，甘草和白芍的配比得当，协同作用更加明显，对免疫性肝损伤的治疗效果 更佳。
[0014]根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物组合物含有芍药苷的质量为50-70mg。 由此，单位剂量的药物组合物中，含有足够剂量的有效治疗成份的芍药苷，从而，保证药物 组合物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0015] 根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物组合物含有甘草酸的质量为5-25mg。 由此，单位剂量的药物组合物中，含有足够剂量的有效治疗成份的甘草酸，从而，保证药物 组合物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0016] 根据本发明的实施例，所述药物组合物的剂型为选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆 剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此，便于根据给药对象不同，采用不同的剂型。
[0017] 根据本发明的实施例，所述药物组合物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用现 有的中成药，即可治疗免疫性肝损伤，并且，药物的疗效好，毒副作用小。
[0018] 根据本发明的又一方面，本发明还提供了根据前述的药物在制备药物中的用途。 根据本发明的实施例，所述药物用于治疗免疫性肝损伤，其中，所述药物包含：甘草和白芍。
[0019] 根据本发明的实施例，本发明的药物不仅能够降低肝内MDA水平，有效抑制免疫 性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平，对免疫性肝 损伤有良好的治疗效果。
[0020] 根据本发明的实施例，所述甘草与所述白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9,优选地，为 I:1. 4-1. 6。由此，甘草和白芍的配比得当，协同作用更加明显，对免疫性肝损伤的治疗效果 更佳。
[0021] 根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物含有芍药苷的质量为50_70mg。由此， 单位剂量的药物中，含有足够剂量的有效治疗成份的芍药苷，从而，保证药物对免疫性肝损 伤有良好的治疗效果。
[0022] 根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物含有甘草酸的质量为5_25mg。由此，单 位剂量的药物中，含有足够剂量的有效治疗成份的甘草酸，从而，保证药物对免疫性肝损伤 有良好的治疗效果。
[0023] 根据本发明的实施例，所述药物的剂型选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊、 口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此，便于根据给药对象不同，采用不同的剂型。
[0024] 根据本发明的实施例，所述药物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用现有的中 成药，即可治疗免疫性肝损伤，并且，药物的疗效好，毒副作用小。
[0025] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0026] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0027] 图1显示了根据本发明一个实施例的免疫性肝损伤实验中，各实验组肝组织切片 HE染色图片，其中，A为空白对照组，B为模型组，C为模型+复方益肝灵组，D为模型+肝 爽颗粒组，E为模型+高剂量组（540mg/kg)，F为模型+中剂量组（270mg/kg)和G为模型 +低剂量组（135mg/kg)。
【具体实施方式】
[0028] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0029] 根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物，根据本发明的实施例，该 药物组合物包含：甘草和白芍，并且，该药物组合物用于治疗免疫性肝损伤。
[0030] 发明人惊奇的发现，本发明的药物组合物不仅能够降低肝内MDA水平，有效抑制 免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平，对免疫 性肝损伤有良好的治疗效果。根据本发明的实施例，采用本发明的药物组合物治疗免疫性 肝损伤，可以有效避免部分人群在接种疫苗后不产生抗体而导致的致病风险，还可以避免 抗病毒类药物长期服用导致的病毒耐药和停药后易复发等问题，对应免疫性肝损伤有良好 的治疗效果。
[0031] 根据本发明的具体实施例，甘草与白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9。由此，在该重量 配比范围内，甘草和白芍的配比得当，二者的协同作用明显，有效增强药物的治疗效果，尤 其，对免疫性肝损伤的治疗效果好。根据本发明的优选实施例，甘草与白芍的重量配比为1 : 1. 4-1. 6。由此，在该重量配比范围内，甘草和白芍的协同作用更加显著，对免疫性肝损伤的 治疗效果更佳。
[0032] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物组合物含有芍药苷的质量不受特别的 限制，与甘草配合，对免疫性肝损伤有治疗作用即可，优选地，单位剂量的该药物组合物含 有芍药苷的质量为50-70mg。由此，单位剂量的药物 组合物中，含有足够剂量的有效治疗成 份芍药苷，达到治疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而，保证药物组合物对免疫性肝损伤 有良好的治疗效果。
[0033] 本发明所用术语"单位剂量"是指一次给药的药物剂量，即施用一次本发明的药物 组合物时，该药物组合物的剂量，可以根据药物组合物的剂型确定相应的单位剂量的单位 名称。
[0034] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物组合物含有甘草酸的质量不受特别的 限制，单位剂量的药物组合物含有甘草酸的质量为5-25mg。由此，单位剂量的药物组合物 中，含有足够剂量的有效治疗成份甘草酸，达到治疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而， 保证药物组合物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0035] 根据本发明的一些实施例，该药物组合物的剂型选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆 剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。
[0036] 根据本发明的一些实施例，该药物组合物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用 现有的市售中成药健肝乐，即可治疗免疫性肝损伤，同时，相对于现有的一些治疗免疫性肝 损伤的药物，无耐药性，不易复发。
[0037] 根据本发明的又一方面，本发明还提供了根据前述的药物组合物在制备药物中的 用途，根据本发明的实施例，该药物用于治疗免疫性肝损伤，其中，该药物包含：甘草和白 芍。
[0038] 根据本发明的一些实施例，采用本发明的药物治疗免疫性肝损伤，不仅能够降低 肝内MDA水平，有效抑制免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内 炎症因子的水平，对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。根据本发明的实施例，采用本发明的 药物治疗免疫性肝损伤，可以有效避免部分人群在接种疫苗后不产生抗体而导致的致病风 险，还可以避免抗病毒类药物长期服用导致的病毒耐药和停药后易复发等问题，对应免疫 性肝损伤有良好的治疗效果。
[0039] 根据本发明的具体实施例，甘草与白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9。由此，在该重量 配比范围内，甘草和白芍的配比得当，二者的协同作用明显，有效增强药物的治疗效果，尤 其，对免疫性肝损伤的治疗效果好。根据本发明的优选实施例，甘草与白芍的重量配比为1 : 1. 4-1. 6。由此，在该重量配比范围内，甘草和白芍的协同作用更加显著，对免疫性肝损伤的 治疗效果更佳。
[0040] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物含有芍药苷的质量不受特别的限制， 与甘草配合，对免疫性肝损伤有治疗作用即可，优选地，单位剂量的药物含有芍药苷的质量 为50-70mg。由此，单位剂量的药物中，含有足够剂量的有效治疗成份的芍药苷，可以达到治 疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而，保证药物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0041] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物含有甘草酸的质量不受特别的限制， 单位剂量的药物含有甘草酸的质量为5-25mg。由此，单位剂量的药物中，含有足够剂量的有 效治疗成份甘草酸，达到治疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而，保证药物对免疫性肝损 伤有良好的治疗效果。
[0042] 根据本发明的一些实施例，该药物的剂型选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶 囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此，便于根据给药对象不同，采用不同的剂型。例 如，为了便于给药，可以采用片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊和□服液，并且，可以根据药物的吸 收部位和药物的释放需求，对药物的剂型进行调整，从而提高药物的生物利用度，延长药物 的释放时间。为了增加药物的口感，可以将药物制成糖浆剂。对于病情严重者，可以采用注 射液，进而实现大剂量的给药需求，并且，避免胃肠循环对药物有效成份的影响。
[0043] 根据本发明的具体实施例，该药物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用现有的 市售中成药健肝乐，即可治疗免疫性肝损伤，同时，相对于现有的一些治疗免疫性肝损伤的 药物，无耐药性，不易复发。
[0044] 下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明 性的，而不能理解为对本发明的限制。
[0045] 实施例
[0046] 通过小鼠第1天尾部静脉注射卡介苗，联合第10天腹腔注射脂多糖，建立昆明小 鼠免疫性肝损伤模型，中间连续10天，每天连续灌胃给予受试药物，观察10天后小鼠血液、 肝组织匀浆、脏器、病理切片等各指标，评定受试药物对免疫性肝损伤的药效学作用及与其 在同类药品中特点或优势比较。
[0047] 1、实验材料
[0048] 动物：KM小鼠80只，SPF级，体重18~22g，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动 物有限公司提供，动物许可证号：SCXK(湘）2013-0004。
[0049] 仪器：勾衆机，离心机，96 孔板，I. 5mlEppendorf管，5mlEppendorf管，IOml Eppendorf管，称量天平，手术器械，酶标仪，光镜。
[0050] 试剂与药品：甲醛，由国药集团化学试剂有限公司提供；复方益肝灵，由华润双鹤 药业股份有限公司提供，批号：1405102 ;肝爽颗粒，由保定天浩制药有限公司提供，批号： 140603 ;卡介苗，有武汉大学动物实验中心提供；脂多糖，由武汉科瑞生物技术有限公司提 供。
[0051] 试剂盒：ALT试剂盒、AST试剂盒、TNFa试剂盒、IL-I0试剂盒、SOD试剂盒、MDA 试剂盒、GSH-PX试剂盒、蛋白含量试剂盒，由武汉科瑞生物技术有限公司提供。
[0052] 2、药物配制方法：
[0053] 受试药：
[0054] 27mg/ml(540mg/kg):取2. 862g健肝乐原料药，加106ml蒸馏水，混勾，4°C冰箱保 存；
[0055] 13. 5mg/ml(270mg/kg):取46ml36mg/ml的健肝乐原料药溶液，加46ml蒸馏水，混 匀，4°C冰箱保存；
[0056] 6. 75mg/ml(135mg/kg):取32ml18mg/ml的健肝乐原料药溶液，加32ml蒸馏水，混 匀，4°C冰箱保存。
[0057] 对照药复方益肝灵：
[0058] 取6. 5片复方益肝灵片，研磨成粉末，加60ml蒸馏水，混匀，4°C冰箱保存。
[0059] 对照药肝爽颗粒：
[0060] 取4. 8g肝爽颗粒，加60ml蒸馏水，混匀，4°C冰箱保存。
[0061] 卡介苗：
[0062] 0? 5mg/ml(lmg/kg):取2. 5mg卡介苗，加5ml无菌水，混勾，4°C冰箱保存。
[0063] 脂多糖：
[0064] 0? 01mg/ml(0? 2mg/kg):取 0? 42mg脂多糖，加 42ml无菌水，混勾，4°C冰箱保存。
[0065] 3、实验方法
[0066] 将昆明小鼠80只随机分为8组，造模第1天除正常组外，其余各组每只小鼠尾部 静脉注射（iv)卡介苗lmg/kg(0. 02ml/10g)，各治疗组灌胃给予相应药物；正常组和模型组 给予等量溶媒，连续给药l〇d。第10天，除正常组iv给予等容积溶媒外，其余各组每只小鼠 腹腔注射脂多糖〇. 2mg/kg(0. 2ml/10g)。注射后禁食16h，自小鼠后眼眶静脉丛采血，测定 血清中ALT、AST、TNFa、IL_lf3含量。颈椎脱臼处死小鼠，称取脾脏、肝脏、肾脏重量计算脏 器指数。用分光光度法测定肝组织匀浆MDA、SOD、GSH-Px含量。在同一部位切取肝脏，4% 甲醛固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜下作组织病理学观察。
[0067] 4、统计学解析方法
[0068] 统计学处理：所有数据均以i±s表示，用SPSS19. 0统计软件进行处理，计量资料多 组间比较采用方差分析，各组间两两比较采用T检验。P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0069] 5、实验结果
[0070] (1)卡介苗联合脂多糖诱导的免疫性肝损伤对小鼠体重的影响
[0071] 于第1天、第10天分别给予卡介苗、脂多糖诱导免疫性肝损伤，其中10天连续灌 胃给予受试药，正常组、模型组每天灌胃给予生理盐水，10天的体重增长值见表1。与正常 组体重增长值相比，模型组小鼠体重显著下降（p〈0.05);市售复方益肝灵（45mg/kg)可显 著逆转肝损伤所致的体重下降；市售肝爽颗粒（1600mg/kg)、健肝乐中剂量组体重增长值 有上升趋势，健肝乐低剂量组与模型组体重增长值相当，但均无显著性差异。
[0072] 表1.卡介苗联合脂多糖诱导的免疫性肝损伤对小鼠体重的影响（X土SD)
[0073]
[0074] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0075] 与正常组相比*P〈0. 05 ;与模型组相比#P〈0. 05。
[0076] (2)免疫性肝损伤对小鼠脏器指数的影响及健肝乐的干预作用
[0077] 给予ip脂多糖0.2mg/kg16h后可见，肝、肾水肿，脏器指数显著增高，胸腺明显萎 缩。市售肝爽颗粒（1600mg/kg)、健肝乐高和中剂量组对肝肿胀有一定的改善作用，但无显 著性差异；健肝乐高和中剂量组对肾肿胀有改善作用，但也无显著性差异，结果见表2。
[0078] 表2免疫性肝损伤对小鼠脏器指数的影响（X土SD)
[0079]
[0081] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0082] 与正常组相比 *P〈0. 05, #P〈0. 01 ;与模型组相比 #P〈0. 05, ##P〈0. 01。
[0083] (3)免疫性肝损伤对小鼠血清ALT、AST活性的影响及健肝乐的干预作用
[0084] 给药前iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性ip给予脂多糖0. 2mg/kg，16h 后可见，小鼠血清ALT、AST活性显著升高，各给药组，小鼠血清ALT、AST活性结果见表3,各 受试药组均能显著性降低ALT、AST活性，其中，健肝乐各剂量效果更佳，由此，说明健肝乐 可以显著抑制免疫性肝损伤引起的小鼠血清ALT和AST活性升高，对免疫性肝损伤具有很 好的治疗效果，并且，还具有良好的保肝、护肝功效。
[0085] 表3免疫性肝损伤对小鼠血清ALT、AST活性的影响（X土SD)
[0086]
[0087] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0088] 与正常组相比#P〈0. 01 ;与模型组相比##P〈0. 01。
[0089] (4)免疫性肝损伤对小鼠肝组织MDA含量、SOD活性与GSH-PX的影响及健肝乐的 干预作用
[0090] 给药前iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性ip给予脂多糖0. 2mg/kg，16h 后可见，小鼠肝组织内SOD活性与GSH-PX活性显著下降，MDA含量显著升高。各给药组对 小鼠肝组织MDA含量、SOD活性与GSH-PX的影响见表4,，除健肝乐高剂量（540mg/kg)外， 各受试药组均有升高SOD的趋势，其中，市售肝爽颗粒（1600mg/kg)可显著升高小鼠SOD活 性；各组受试药均可显著降低由免疫性肝损伤引起的MDA含量升高状况，表明受试药可能 通过抗氧化机制，发挥护肝作用，其中，健肝乐中和低剂量组降低MDA的效果尤为显著；健 肝乐可缓解GSH-PX降低的趋势，但无显著性差异。
[0091] 表4免疫性肝损伤对小鼠肝组织MDA含量、SOD活性与GSH-PX的影响（X土SD)
[0092]
[0093] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0094] 与正常组相比#P〈0. 01 ;与模型组相比#P〈0. 05, ##P〈0. 01。
[0095] (5)免疫性肝损伤对小鼠血清TNFa、IL-I0含量的影响及健肝乐的干预作用
[0096] 给药前iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性ip给予脂多糖0. 2mg/kg， 16h后可见，小鼠血清TNFa、IL-10含量显著升高，各受试药物均能显著降低小鼠血清中 的TNFa含量，并对于IL-10有降低其含量的趋势，其中，健肝乐各剂量组可显著性降低小 鼠血清中IL-I0含量，表明健肝乐可以通过有效降低体内炎症因子的水平治疗免疫性肝 损伤，实验结果见表5。
[0097] 表5免疫性肝损伤对小鼠血清TNFa、IL-I0含量的影响（X土SD)
[0100] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0101] 与正常组相比#P〈0. 01 ;与模型组相比#P〈0. 05, ##P〈0. 01
[0102] (6)肝组织切片HE染色结果
[0103] 如图1所示，正常肝细胞结构清晰，肝细胞核大而圆，核膜清晰，核仁明显，胞质丰 富，汇管区无炎性细胞浸润；模型组肝细胞呈广泛的嗜酸性坏死，肝细胞肿胀较明显，有炎 性细胞浸润；健肝乐各剂量组从染色来看，对肝细胞均有一定程度的改善作用，表明健 肝乐有良好的保肝、护肝作用，可以有效治疗免疫性肝损伤。
[0104] (7)结论
[0105] 综上所述，健肝乐对于免疫性肝损伤导致的体重下降、血清ALT、AST升高、肝组织 SOD活性降低，TNFa、IL-I0含量增高、肝匀浆MDA含量升高等方面有显著性抑制作用。，其 中，健肝乐中剂量（270mg/kg)和低剂量（135mg/kg)效果更佳，并且，健肝乐对免疫性肝损 伤引起的肝组织TNFa、IL-lf3含量增高有显著的抑制作用。由此，上述结果说明，含有甘 草和白芍的组合物可以降低肝内MDA水平，有效抑制免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作 用，而且，可以有效降低体内TNFa、IL-I0等炎症因子的水平，对免疫性肝损伤有良好的 治疗效果。此外，采用本发明的药物组合物治疗免疫性肝损伤，可以有效避免部分人群在接 种疫苗后不产生抗体而导致的致病风险，还可以避免抗病毒类药物长期服用导致的病毒耐 药和停药后易复发等问题，对应免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0106] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何 的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0107] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不 脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本 发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1. 一种药物组合物，所述药物组合物包含：甘草和白芍，其特征在于，所述药物组合物 用于治疗免疫性肝损伤。2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述甘草与所述白芍的重量配比 为I:1. 1-1. 9,优选地，为I:1. 4-1. 6。3. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，单位剂量的所述药物组合物含有 芍药苷的质量为50-70mg。4. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型选自注射 液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。5. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物以健肝乐颗粒的 形式提供的。6. 根据权利要求1-5任一项所述的药物组合物，其特征在于，单位剂量的所述药物组 合物含有甘草酸的质量为5-25mg。7. 权利要求1-6任一项所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗免疫 性肝损伤，其中，所述药物包含：甘草和白芍。8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述甘草与所述白芍的重量配比为1 : 1. 1-1. 9,优选地，为I:1. 4-1. 6。9. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，单位剂量的所述药物含有芍药苷的质量 为 50_70mg， 任选地，单位剂量的所述药物含有甘草酸的质量为5-25mg。10. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物的剂型为选自注射液、片剂、颗 粒剂、糖浆剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一， 任选地，所述药物以健肝乐颗粒的形式提供的。
【专利摘要】本发明公开了一种药物组合物。该药物组合物包含：甘草和白芍，该药物组合物用于治疗免疫性肝损伤。该药物组合物不仅对免疫性肝损伤有良好的治疗效果，还可以起到保肝、护肝的作用。
【IPC分类】A61K36/71, A61P1/16
【公开号】CN104906205
【申请号】CN201510269995
【发明人】王学海, 江书银, 曹儒宾, 许勇, 李莉娥, 秦和平, 黄璐, 杨仲文, 刘世勇, 余通, 黄天赐, 杨成兵, 何水英, 尹海龙, 冯芸, 杨婷, 谢长, 于静, 肖强
【申请人】武汉康乐药业股份有限公司, 湖北生物医药产业技术研究院有限公司, 人福医药集团股份公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月25日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，具体地，涉及一种中药组合物在制备治疗免疫性肝损伤药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 免疫性肝损伤（ImmunologicalLiverInjury,ILI)是一组由异常免疫介导的、具 有相似临床表现的慢性免疫性肝病，是导致肝功能衰竭和肝硬化的重要病因。近年来，免疫 性肝炎检出率逐渐上升，在世界范围内占慢性肝炎的10% -20%，严重危害人类的健康。
[0003] 因此，治疗免疫性肝损伤的药物有待于研宄。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种有效治疗免疫性肝损伤的药物。
[0005] 需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：
[0006] 免疫性肝损伤的主要发病机制是机体在易感性基因的作用下，受环境因素、药物 或感染因子的诱导而发病，由于产生肝细胞膜自身靶抗原，机体免疫功能失调，以及肝脏本 身免疫耐受性减退，导致肝损伤。
[0007] 目前，治疗免疫性肝损伤的药物主要为干扰素、胸腺素、Th细胞因子和疫苗，其中， 以疫苗应用最广泛，但上述药物在治疗免疫性肝损伤时，均存在一定的问题。具体地，部分 人群在接种疫苗后不产生抗体，导致在接种疫苗不久后，处于疾病感染的危险中而不自知。 干扰素、胸腺素和核苷类药物均属于抗病毒类药物，该类药物具有高效、方便的诱导，但存 在长期服用易产生病毒耐药，停药后易复发等问题。
[0008] 芍药甘草汤是一种中药复方，其中，甘草、白芍具有配伍协同作用，是常用的缓急 止痛之方，后世用于治疗多种疼痛，效果显著，且治疗范围日渐扩大，现代临床广泛用于消 化、神经系统及骨伤科、肿瘤科以疼痛或抽搐挛急为特征的病症。
[0009] 现已将含有甘草和白芍的组合物制成中成药，即市售的健肝乐颗粒（国药准字 Z42020070)，该药物的专利申请号为201110007790. 2,该专利所公开的适应症之一为急慢 性病毒性肝炎。病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染病，其中， 急性病毒性肝炎主要由特异的嗜肝细胞病毒引起的广泛的肝脏炎症性疾病，而病毒性肝 炎病程持半年以上者即为慢性病毒性肝炎。急慢病毒性肝炎和免疫性肝损伤虽在临床症状 上存在一定的关联性，但二者的致病机理不同，属于不同的适应症，因此，在研宄和治疗过 程中应区别对待。发明人研宄了大量保肝药物的免疫性肝损伤治疗效果，在反复的研宄比 对中意外地发现，健肝乐之类的含有甘草和白芍的组合物不仅能够降低肝内MDA水平，有 效抑制免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平， 对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。采用本发明的药物组合物治疗免疫性肝损伤，可以有 效避免部分人群在接种疫苗后不产生抗体而导致的致病风险，还可以避免抗病毒类药物长 期服用导致的病毒耐药和停药后易复发等问题，对应免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0010] 因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施 例，所述药物组合物包含：甘草和白芍，所述药物组合物用于治疗免疫性肝损伤。
[0011] 发明人惊奇的发现，本发明的药物组合物不仅能够降低肝内MDA水平，有效抑制 免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平，对免疫 性肝损伤有良好的治疗效果。
[0012] 另外，根据本发明上述实施例的药物组合物，还可以具有如下附加的技术特征：
[0013] 根据本发明的实施例，所述甘草与所述白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9。优选地，为 I:1. 4-1. 6。由此，甘草和白芍的配比得当，协同作用更加明显，对免疫性肝损伤的治疗效果 更佳。
[0014]根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物组合物含有芍药苷的质量为50-70mg。 由此，单位剂量的药物组合物中，含有足够剂量的有效治疗成份的芍药苷，从而，保证药物 组合物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0015] 根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物组合物含有甘草酸的质量为5-25mg。 由此，单位剂量的药物组合物中，含有足够剂量的有效治疗成份的甘草酸，从而，保证药物 组合物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0016] 根据本发明的实施例，所述药物组合物的剂型为选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆 剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此，便于根据给药对象不同，采用不同的剂型。
[0017] 根据本发明的实施例，所述药物组合物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用现 有的中成药，即可治疗免疫性肝损伤，并且，药物的疗效好，毒副作用小。
[0018] 根据本发明的又一方面，本发明还提供了根据前述的药物在制备药物中的用途。 根据本发明的实施例，所述药物用于治疗免疫性肝损伤，其中，所述药物包含：甘草和白芍。
[0019] 根据本发明的实施例，本发明的药物不仅能够降低肝内MDA水平，有效抑制免疫 性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平，对免疫性肝 损伤有良好的治疗效果。
[0020] 根据本发明的实施例，所述甘草与所述白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9,优选地，为 I:1. 4-1. 6。由此，甘草和白芍的配比得当，协同作用更加明显，对免疫性肝损伤的治疗效果 更佳。
[0021] 根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物含有芍药苷的质量为50_70mg。由此， 单位剂量的药物中，含有足够剂量的有效治疗成份的芍药苷，从而，保证药物对免疫性肝损 伤有良好的治疗效果。
[0022] 根据本发明的实施例，单位剂量的所述药物含有甘草酸的质量为5_25mg。由此，单 位剂量的药物中，含有足够剂量的有效治疗成份的甘草酸，从而，保证药物对免疫性肝损伤 有良好的治疗效果。
[0023] 根据本发明的实施例，所述药物的剂型选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊、 口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此，便于根据给药对象不同，采用不同的剂型。
[0024] 根据本发明的实施例，所述药物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用现有的中 成药，即可治疗免疫性肝损伤，并且，药物的疗效好，毒副作用小。
[0025] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0026] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0027] 图1显示了根据本发明一个实施例的免疫性肝损伤实验中，各实验组肝组织切片 HE染色图片，其中，A为空白对照组，B为模型组，C为模型+复方益肝灵组，D为模型+肝 爽颗粒组，E为模型+高剂量组（540mg/kg)，F为模型+中剂量组（270mg/kg)和G为模型 +低剂量组（135mg/kg)。
【具体实施方式】
[0028] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0029] 根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物，根据本发明的实施例，该 药物组合物包含：甘草和白芍，并且，该药物组合物用于治疗免疫性肝损伤。
[0030] 发明人惊奇的发现，本发明的药物组合物不仅能够降低肝内MDA水平，有效抑制 免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内炎症因子的水平，对免疫 性肝损伤有良好的治疗效果。根据本发明的实施例，采用本发明的药物组合物治疗免疫性 肝损伤，可以有效避免部分人群在接种疫苗后不产生抗体而导致的致病风险，还可以避免 抗病毒类药物长期服用导致的病毒耐药和停药后易复发等问题，对应免疫性肝损伤有良好 的治疗效果。
[0031] 根据本发明的具体实施例，甘草与白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9。由此，在该重量 配比范围内，甘草和白芍的配比得当，二者的协同作用明显，有效增强药物的治疗效果，尤 其，对免疫性肝损伤的治疗效果好。根据本发明的优选实施例，甘草与白芍的重量配比为1 : 1. 4-1. 6。由此，在该重量配比范围内，甘草和白芍的协同作用更加显著，对免疫性肝损伤的 治疗效果更佳。
[0032] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物组合物含有芍药苷的质量不受特别的 限制，与甘草配合，对免疫性肝损伤有治疗作用即可，优选地，单位剂量的该药物组合物含 有芍药苷的质量为50-70mg。由此，单位剂量的药物 组合物中，含有足够剂量的有效治疗成 份芍药苷，达到治疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而，保证药物组合物对免疫性肝损伤 有良好的治疗效果。
[0033] 本发明所用术语"单位剂量"是指一次给药的药物剂量，即施用一次本发明的药物 组合物时，该药物组合物的剂量，可以根据药物组合物的剂型确定相应的单位剂量的单位 名称。
[0034] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物组合物含有甘草酸的质量不受特别的 限制，单位剂量的药物组合物含有甘草酸的质量为5-25mg。由此，单位剂量的药物组合物 中，含有足够剂量的有效治疗成份甘草酸，达到治疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而， 保证药物组合物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0035] 根据本发明的一些实施例，该药物组合物的剂型选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆 剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。
[0036] 根据本发明的一些实施例，该药物组合物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用 现有的市售中成药健肝乐，即可治疗免疫性肝损伤，同时，相对于现有的一些治疗免疫性肝 损伤的药物，无耐药性，不易复发。
[0037] 根据本发明的又一方面，本发明还提供了根据前述的药物组合物在制备药物中的 用途，根据本发明的实施例，该药物用于治疗免疫性肝损伤，其中，该药物包含：甘草和白 芍。
[0038] 根据本发明的一些实施例，采用本发明的药物治疗免疫性肝损伤，不仅能够降低 肝内MDA水平，有效抑制免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作用，而且，可以有效降低体内 炎症因子的水平，对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。根据本发明的实施例，采用本发明的 药物治疗免疫性肝损伤，可以有效避免部分人群在接种疫苗后不产生抗体而导致的致病风 险，还可以避免抗病毒类药物长期服用导致的病毒耐药和停药后易复发等问题，对应免疫 性肝损伤有良好的治疗效果。
[0039] 根据本发明的具体实施例，甘草与白芍的重量配比为I:1. 1-1. 9。由此，在该重量 配比范围内，甘草和白芍的配比得当，二者的协同作用明显，有效增强药物的治疗效果，尤 其，对免疫性肝损伤的治疗效果好。根据本发明的优选实施例，甘草与白芍的重量配比为1 : 1. 4-1. 6。由此，在该重量配比范围内，甘草和白芍的协同作用更加显著，对免疫性肝损伤的 治疗效果更佳。
[0040] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物含有芍药苷的质量不受特别的限制， 与甘草配合，对免疫性肝损伤有治疗作用即可，优选地，单位剂量的药物含有芍药苷的质量 为50-70mg。由此，单位剂量的药物中，含有足够剂量的有效治疗成份的芍药苷，可以达到治 疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而，保证药物对免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0041] 根据本发明的一些实施例，单位剂量的药物含有甘草酸的质量不受特别的限制， 单位剂量的药物含有甘草酸的质量为5-25mg。由此，单位剂量的药物中，含有足够剂量的有 效治疗成份甘草酸，达到治疗免疫性肝损伤的药物剂量要求，从而，保证药物对免疫性肝损 伤有良好的治疗效果。
[0042] 根据本发明的一些实施例，该药物的剂型选自注射液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶 囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此，便于根据给药对象不同，采用不同的剂型。例 如，为了便于给药，可以采用片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊和□服液，并且，可以根据药物的吸 收部位和药物的释放需求，对药物的剂型进行调整，从而提高药物的生物利用度，延长药物 的释放时间。为了增加药物的口感，可以将药物制成糖浆剂。对于病情严重者，可以采用注 射液，进而实现大剂量的给药需求，并且，避免胃肠循环对药物有效成份的影响。
[0043] 根据本发明的具体实施例，该药物以健肝乐颗粒的形式提供的。由此，利用现有的 市售中成药健肝乐，即可治疗免疫性肝损伤，同时，相对于现有的一些治疗免疫性肝损伤的 药物，无耐药性，不易复发。
[0044] 下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明 性的，而不能理解为对本发明的限制。
[0045] 实施例
[0046] 通过小鼠第1天尾部静脉注射卡介苗，联合第10天腹腔注射脂多糖，建立昆明小 鼠免疫性肝损伤模型，中间连续10天，每天连续灌胃给予受试药物，观察10天后小鼠血液、 肝组织匀浆、脏器、病理切片等各指标，评定受试药物对免疫性肝损伤的药效学作用及与其 在同类药品中特点或优势比较。
[0047] 1、实验材料
[0048] 动物：KM小鼠80只，SPF级，体重18~22g，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动 物有限公司提供，动物许可证号：SCXK(湘）2013-0004。
[0049] 仪器：勾衆机，离心机，96 孔板，I. 5mlEppendorf管，5mlEppendorf管，IOml Eppendorf管，称量天平，手术器械，酶标仪，光镜。
[0050] 试剂与药品：甲醛，由国药集团化学试剂有限公司提供；复方益肝灵，由华润双鹤 药业股份有限公司提供，批号：1405102 ;肝爽颗粒，由保定天浩制药有限公司提供，批号： 140603 ;卡介苗，有武汉大学动物实验中心提供；脂多糖，由武汉科瑞生物技术有限公司提 供。
[0051] 试剂盒：ALT试剂盒、AST试剂盒、TNFa试剂盒、IL-I0试剂盒、SOD试剂盒、MDA 试剂盒、GSH-PX试剂盒、蛋白含量试剂盒，由武汉科瑞生物技术有限公司提供。
[0052] 2、药物配制方法：
[0053] 受试药：
[0054] 27mg/ml(540mg/kg):取2. 862g健肝乐原料药，加106ml蒸馏水，混勾，4°C冰箱保 存；
[0055] 13. 5mg/ml(270mg/kg):取46ml36mg/ml的健肝乐原料药溶液，加46ml蒸馏水，混 匀，4°C冰箱保存；
[0056] 6. 75mg/ml(135mg/kg):取32ml18mg/ml的健肝乐原料药溶液，加32ml蒸馏水，混 匀，4°C冰箱保存。
[0057] 对照药复方益肝灵：
[0058] 取6. 5片复方益肝灵片，研磨成粉末，加60ml蒸馏水，混匀，4°C冰箱保存。
[0059] 对照药肝爽颗粒：
[0060] 取4. 8g肝爽颗粒，加60ml蒸馏水，混匀，4°C冰箱保存。
[0061] 卡介苗：
[0062] 0? 5mg/ml(lmg/kg):取2. 5mg卡介苗，加5ml无菌水，混勾，4°C冰箱保存。
[0063] 脂多糖：
[0064] 0? 01mg/ml(0? 2mg/kg):取 0? 42mg脂多糖，加 42ml无菌水，混勾，4°C冰箱保存。
[0065] 3、实验方法
[0066] 将昆明小鼠80只随机分为8组，造模第1天除正常组外，其余各组每只小鼠尾部 静脉注射（iv)卡介苗lmg/kg(0. 02ml/10g)，各治疗组灌胃给予相应药物；正常组和模型组 给予等量溶媒，连续给药l〇d。第10天，除正常组iv给予等容积溶媒外，其余各组每只小鼠 腹腔注射脂多糖〇. 2mg/kg(0. 2ml/10g)。注射后禁食16h，自小鼠后眼眶静脉丛采血，测定 血清中ALT、AST、TNFa、IL_lf3含量。颈椎脱臼处死小鼠，称取脾脏、肝脏、肾脏重量计算脏 器指数。用分光光度法测定肝组织匀浆MDA、SOD、GSH-Px含量。在同一部位切取肝脏，4% 甲醛固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜下作组织病理学观察。
[0067] 4、统计学解析方法
[0068] 统计学处理：所有数据均以i±s表示，用SPSS19. 0统计软件进行处理，计量资料多 组间比较采用方差分析，各组间两两比较采用T检验。P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0069] 5、实验结果
[0070] (1)卡介苗联合脂多糖诱导的免疫性肝损伤对小鼠体重的影响
[0071] 于第1天、第10天分别给予卡介苗、脂多糖诱导免疫性肝损伤，其中10天连续灌 胃给予受试药，正常组、模型组每天灌胃给予生理盐水，10天的体重增长值见表1。与正常 组体重增长值相比，模型组小鼠体重显著下降（p〈0.05);市售复方益肝灵（45mg/kg)可显 著逆转肝损伤所致的体重下降；市售肝爽颗粒（1600mg/kg)、健肝乐中剂量组体重增长值 有上升趋势，健肝乐低剂量组与模型组体重增长值相当，但均无显著性差异。
[0072] 表1.卡介苗联合脂多糖诱导的免疫性肝损伤对小鼠体重的影响（X土SD)
[0073]
[0074] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0075] 与正常组相比*P〈0. 05 ;与模型组相比#P〈0. 05。
[0076] (2)免疫性肝损伤对小鼠脏器指数的影响及健肝乐的干预作用
[0077] 给予ip脂多糖0.2mg/kg16h后可见，肝、肾水肿，脏器指数显著增高，胸腺明显萎 缩。市售肝爽颗粒（1600mg/kg)、健肝乐高和中剂量组对肝肿胀有一定的改善作用，但无显 著性差异；健肝乐高和中剂量组对肾肿胀有改善作用，但也无显著性差异，结果见表2。
[0078] 表2免疫性肝损伤对小鼠脏器指数的影响（X土SD)
[0079]
[0081] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0082] 与正常组相比 *P〈0. 05, #P〈0. 01 ;与模型组相比 #P〈0. 05, ##P〈0. 01。
[0083] (3)免疫性肝损伤对小鼠血清ALT、AST活性的影响及健肝乐的干预作用
[0084] 给药前iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性ip给予脂多糖0. 2mg/kg，16h 后可见，小鼠血清ALT、AST活性显著升高，各给药组，小鼠血清ALT、AST活性结果见表3,各 受试药组均能显著性降低ALT、AST活性，其中，健肝乐各剂量效果更佳，由此，说明健肝乐 可以显著抑制免疫性肝损伤引起的小鼠血清ALT和AST活性升高，对免疫性肝损伤具有很 好的治疗效果，并且，还具有良好的保肝、护肝功效。
[0085] 表3免疫性肝损伤对小鼠血清ALT、AST活性的影响（X土SD)
[0086]
[0087] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0088] 与正常组相比#P〈0. 01 ;与模型组相比##P〈0. 01。
[0089] (4)免疫性肝损伤对小鼠肝组织MDA含量、SOD活性与GSH-PX的影响及健肝乐的 干预作用
[0090] 给药前iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性ip给予脂多糖0. 2mg/kg，16h 后可见，小鼠肝组织内SOD活性与GSH-PX活性显著下降，MDA含量显著升高。各给药组对 小鼠肝组织MDA含量、SOD活性与GSH-PX的影响见表4,，除健肝乐高剂量（540mg/kg)外， 各受试药组均有升高SOD的趋势，其中，市售肝爽颗粒（1600mg/kg)可显著升高小鼠SOD活 性；各组受试药均可显著降低由免疫性肝损伤引起的MDA含量升高状况，表明受试药可能 通过抗氧化机制，发挥护肝作用，其中，健肝乐中和低剂量组降低MDA的效果尤为显著；健 肝乐可缓解GSH-PX降低的趋势，但无显著性差异。
[0091] 表4免疫性肝损伤对小鼠肝组织MDA含量、SOD活性与GSH-PX的影响（X土SD)
[0092]
[0093] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0094] 与正常组相比#P〈0. 01 ;与模型组相比#P〈0. 05, ##P〈0. 01。
[0095] (5)免疫性肝损伤对小鼠血清TNFa、IL-I0含量的影响及健肝乐的干预作用
[0096] 给药前iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性ip给予脂多糖0. 2mg/kg， 16h后可见，小鼠血清TNFa、IL-10含量显著升高，各受试药物均能显著降低小鼠血清中 的TNFa含量，并对于IL-10有降低其含量的趋势，其中，健肝乐各剂量组可显著性降低小 鼠血清中IL-I0含量，表明健肝乐可以通过有效降低体内炎症因子的水平治疗免疫性肝 损伤，实验结果见表5。
[0097] 表5免疫性肝损伤对小鼠血清TNFa、IL-I0含量的影响（X土SD)
[0100] 注：肝损伤模型鼠为给药前一次性iv给予卡介苗lmg/kg，给药10天后再一次性 ip给予脂多糖〇? 2mg/kg。
[0101] 与正常组相比#P〈0. 01 ;与模型组相比#P〈0. 05, ##P〈0. 01
[0102] (6)肝组织切片HE染色结果
[0103] 如图1所示，正常肝细胞结构清晰，肝细胞核大而圆，核膜清晰，核仁明显，胞质丰 富，汇管区无炎性细胞浸润；模型组肝细胞呈广泛的嗜酸性坏死，肝细胞肿胀较明显，有炎 性细胞浸润；健肝乐各剂量组从染色来看，对肝细胞均有一定程度的改善作用，表明健 肝乐有良好的保肝、护肝作用，可以有效治疗免疫性肝损伤。
[0104] (7)结论
[0105] 综上所述，健肝乐对于免疫性肝损伤导致的体重下降、血清ALT、AST升高、肝组织 SOD活性降低，TNFa、IL-I0含量增高、肝匀浆MDA含量升高等方面有显著性抑制作用。，其 中，健肝乐中剂量（270mg/kg)和低剂量（135mg/kg)效果更佳，并且，健肝乐对免疫性肝损 伤引起的肝组织TNFa、IL-lf3含量增高有显著的抑制作用。由此，上述结果说明，含有甘 草和白芍的组合物可以降低肝内MDA水平，有效抑制免疫性肝损伤引起的膜脂质过氧化作 用，而且，可以有效降低体内TNFa、IL-I0等炎症因子的水平，对免疫性肝损伤有良好的 治疗效果。此外，采用本发明的药物组合物治疗免疫性肝损伤，可以有效避免部分人群在接 种疫苗后不产生抗体而导致的致病风险，还可以避免抗病毒类药物长期服用导致的病毒耐 药和停药后易复发等问题，对应免疫性肝损伤有良好的治疗效果。
[0106] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何 的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0107] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不 脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本 发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1. 一种药物组合物，所述药物组合物包含：甘草和白芍，其特征在于，所述药物组合物 用于治疗免疫性肝损伤。2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述甘草与所述白芍的重量配比 为I:1. 1-1. 9,优选地，为I:1. 4-1. 6。3. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，单位剂量的所述药物组合物含有 芍药苷的质量为50-70mg。4. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型选自注射 液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。5. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物以健肝乐颗粒的 形式提供的。6. 根据权利要求1-5任一项所述的药物组合物，其特征在于，单位剂量的所述药物组 合物含有甘草酸的质量为5-25mg。7. 权利要求1-6任一项所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗免疫 性肝损伤，其中，所述药物包含：甘草和白芍。8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述甘草与所述白芍的重量配比为1 : 1. 1-1. 9,优选地，为I:1. 4-1. 6。9. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，单位剂量的所述药物含有芍药苷的质量 为 50_70mg， 任选地，单位剂量的所述药物含有甘草酸的质量为5-25mg。10. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物的剂型为选自注射液、片剂、颗 粒剂、糖浆剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一， 任选地，所述药物以健肝乐颗粒的形式提供的。
【专利摘要】本发明公开了一种药物组合物。该药物组合物包含：甘草和白芍，该药物组合物用于治疗免疫性肝损伤。该药物组合物不仅对免疫性肝损伤有良好的治疗效果，还可以起到保肝、护肝的作用。
【IPC分类】A61K36/71, A61P1/16
【公开号】CN104906205
【申请号】CN201510269995
【发明人】王学海, 江书银, 曹儒宾, 许勇, 李莉娥, 秦和平, 黄璐, 杨仲文, 刘世勇, 余通, 黄天赐, 杨成兵, 何水英, 尹海龙, 冯芸, 杨婷, 谢长, 于静, 肖强
【申请人】武汉康乐药业股份有限公司, 湖北生物医药产业技术研究院有限公司, 人福医药集团股份公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月25日
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