一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成肺损伤药物中的应用
一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成肺损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药应用领域，具体涉及一种中药组合物的新用途。
【背景技术】
[0002] 细颗粒又称PM2. 5、细颗粒物、细粒。细颗粒指环境空气中空气动力学当量直径小 于等于2.5微米的颗粒物。它能较长时间悬浮于空气中，其在空气中含量浓度越高，就代 表空气污染越严重。虽然PM2. 5只是地球大气成分中含量很少的组分，但它对空气质量和 能见度等有重要的影响。与较粗的大气颗粒物相比，PM2. 5粒径小，面积大，活性强，易附带 有毒、有害物质(例如，重金属、微生物等)，且在大气中的停留时间长、输送距离远，因而对 人体健康和大气环境质量的影响更大。
[0003] PM2. 5进入呼吸道内表面后，与肺组织相互作用，其转归有以下几种：（1)通过 呼吸道纤毛-黏液运动排送至咽喉部，以痰液的形式排出体外或进入消化系统。（2)被肺 泡巨噬细胞吞噬后穿过肺泡壁，一部分进入淋巴系统，然后由淋巴液带到淋巴结，最后被 清除掉；另一部分长期储留肺组织中，在肺间质形成病灶。（3)某些颗粒或组分通过肺的 内呼吸换气进入血液从而到达其他器官。PM2. 5的致病机制可归纳为：（1)PM2. 5进入肺内 后，首先与肺泡巨噬细胞、肺上皮细胞作用，通过吸附的毒性成分引起肺组织生化成分改 变I以及炎症因子的释放，诱发炎症，甚至导致肺纤维化。（2)细颗粒物具有自由基活性， 细颗粒物含有的金属成分、有机成分等也能够刺激肺泡巨噬细胞产生自由基，当PM2. 5与 细胞作用后，对组织细胞造成进一步损伤。（3)PM2. 5可引起细胞增生，其化学组分或ROS 直接损害遗传物质，导致癌基因激活、抑癌基因失活、遗传物质突变。
【发明内容】
[0004] 本发明涉及一种中药组合物的新用途。本发明所述中药可以被有相同或相似功效 的中药代替，并且这些药材均可按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》进行炮制。
[0005] 本发明目的是提供一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成的肺损伤药物中的应 用，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成： 连翘252-280金银花252-280板蓝根252-280大黄50-55 广藿香65-85绵马贯众252-280红景天65-85 薄荷脑6_8 麻黄65-85 苦杏仁65-85 鱼腥草252-280 甘草65_85 石膏 252-280。
[0006] 优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成： 连翘252 金银花280板蓝根252大黄55广藿香65 绵马贯众280红景天65薄荷脑8麻黄65 苦杏仁80 鱼渥草252 甘草 80石骨 252。
[0007]或： 连翘280 金银花252板蓝根280大黄50广藿香80 绵马贯众252红景天80薄荷脑6麻黄80 苦杏仁65 鱼渥草280 甘草 65石骨 280。
[0008]或： 连翘255 金银花255板蓝根255大黄51广藿香85 绵马贯众255红景天85薄荷脑7. 5麻黄85炒苦杏仁85 鱼渥草255 甘草 85石骨 255。
[0009] 优先地，所述中药组合物所用原料药中，麻黄为蜜麻黄，苦杏仁为炒苦杏仁。
[0010] 本发明还提供了所述中药组合物的活性成分由以下步骤制成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁，煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后的 滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 步骤（4)所得干膏粉、步骤（2)所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成 分。
[0011] 本发明药物的剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶 齐IJ、喷雾剂或注射剂。
[0012] 其中胶囊剂的制备方法，是由以下步骤制成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁、煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后 的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 将步骤（4)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒； (6)将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入胶囊，即得。
[0013] 优选制备方法为： (1)按照比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次 1. 5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁 煎煮2次，第一次1. 5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提 油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓 度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合 并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料，用85%乙醇制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入胶囊，即得。
[0014] 本发明药物的其他剂型按比例称取原料药后，采用常规的制备方法制备，例如，范 碧亭《中药药剂学》（上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可 接受的常规剂型。
[0015] 为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充 剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、 预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、 微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲 基纤维素 钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯 吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡 咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等； 矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐 类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000,虫蜡等。为使上述剂型 能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂 学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。
[0016]所述中药组合物在制备降低IL-ie、IL-6、TNF-a因子表达的药物中的应用。
[0017] 所述中药组合物在制备抑制COLlAl、TGF-P、LN因子表达的药物中的应用的药 物中的应用。
[0018] 为证实本发明药物的疗效，用按实施例1制得的胶囊剂（以下称本发明药物)，进行 了以下试验研究： 实验例： 一材料与方法 1、实验动物及饲料：清洁级（SPF级）健康雄性Wistar大鼠48只，体重180-200g左右，全部购自河北医科大学实验动物中心。饲养于河北省人民医院动物实验室，室温 22-28 °C，每日12小时光照；供给标准动物饲料和自来水，自由取食水。所有大鼠均给予标 准适应性喂养1周后开始实验。
[0019] 2、主要试剂 IL-IP酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 IL-6酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 TNF-a酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 CRP酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 丙二醛(MDA)测试盒 南京建成生物工程研究所 乳酸脱氢酶（LDH) 南京建成生物工程研究所 超氧化物歧化酶（SOD)测试盒 南京建成生物工程研究所 谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-PX)测试盒南京建成生物工程研究所 戊巴比妥钠 上海试剂采购供应站 本发明药物干膏粉 石家庄市以岭药业提供 PM2. 5颗粒物 石家庄市环境监测中心提供 3、 主要试剂的配制 PM2. 5悬液制备 将载有PM2. 5的滤膜剪成IXlcm大小，浸入蒸馏水中，经超声震荡器反复震荡，收 集洗脱液。再加入蒸馏水进行第二次超声振荡，再次收集洗脱液。两次洗脱液液体合并于 锥形瓶中，六层无菌纱布过滤，滤液即为PM2. 5悬液，真空冷冻干燥，称重后超低温冰箱保 存。用前以生理盐水配制成7. 5mg/ml的细颗粒物悬液，并经高压灭菌15min，染尘前超声 震荡15min使悬液混匀，4°C备用。
[0020] 本发明药物溶液的配制 羟甲基纤维素钠溶液的配制：羟甲基纤维素钠+蒸馏水； 20%本发明药物溶液配制：本发明药物干膏粉（10. 43g) +羟甲基纤维素钠溶液 (500ml)； 40%本发明药物溶液配制：本发明药物干膏粉（20. 87g) +羟甲基纤维素钠溶液 (500ml)； 80%本发明药物溶液配制：本发明药物干膏粉（41. 73g) +羟甲基纤维素钠溶液 (500ml)； 4、 主要仪器设备 紫外分光光度计 756MC上海精密仪器科学有限公司酶标仪 酶标仪 MultiskanMk3芬兰 电子秤 JA3003上海精科天平 恒温水浴箱 SHH.W21.420北京金北德工贸有限公司 低温离心机 EBA12R德国Hettich公司 不同取液量移液器德国Eppendorf公司 20号大鼠灌胃针 上海 16号静脉留置针针套 5、 实验方法 分组 48只清洁级健康Wistar大鼠适应性喂养1周后，随机分为6组， ① 低剂量本发明药物组(生药2g/kg) ② 中剂量本发明药物组(生药4g/kg) ③ 高剂量本发明药物组(生药8g/kg) ④PM2. 5染尘组 ⑤ 生理盐水对照组 ⑥ 空白对照组 各组分别于气管插管滴入PM2. 5或生理盐水24小时后处死，取材后测定相应指标。
[0021] 动物模型复制 本发明药物组不同剂量模型制备 不同浓度的本发明药物溶液灌胃量均为lOml/kg;气管内滴入PM2. 5溶液量为Iml/kg;首先连续灌胃给本发明药物溶液4天，第4天先称重再灌胃。灌胃后休息1小时，用3% 戊巴比妥钠（40mg/kg)腹腔注射麻醉，待麻醉显效后仰卧位固定动物于特制操作台上，经 气管插管滴入PM2. 5溶液，24小时后处死，取材后测定相应指标。
[0022] PM2. 5动物染尘组模型制备 羟甲基纤维素钠溶液灌胃量为lOml/kg;气管内滴入PM2. 5溶液量为lml/kg;首先连 续灌胃给羟甲基纤维素钠溶液4天，第4天先称重再灌胃。灌胃后休息1小时，用3%戊巴 比妥钠（40mg/kg)腹腔注射麻醉，待麻醉显效后仰卧位固定动物于特制操作台上，经气管 插管滴入PM2. 5溶液,24小时后处死,取材后测定相应指标。
[0023] 生理盐水对照组模型制备 气管内滴入生理盐水量为lml/kg;于实验开始的第4天，称重后用3%戊巴比妥钠（ 40mg/kg)腹腔注射麻醉，待麻醉显效后仰卧位固定动物于特制操作台上，经气管插管滴入 生理盐水，24小时后处死，取材后测定相应指标。
[0024] 大鼠标本的留取及测定 各组动物于相应的时间点称重后3%戊巴比妥钠（40mg/Kg)腹腔注射麻醉。待麻醉显 效后，将大鼠固定在操作台上，暴露气管，立即打开腹腔，暴露腹主动脉，采取腹主动脉血约 4-8ml(促凝管)，常温静置10-20分钟后离心（15分钟，3000转)，取血清，小心吸取血清并 分装于干净EP管内立即转移至-80°C冰箱冻存，待测定相应指标。取血后迅速打开胸腔， 结扎右肺门，取下右肺，部分置于4%多聚甲醛溶液中固定24小时，常规石蜡包埋，切片， 用于苏木素-伊红（ffi)染色；部分固定于戊二醛，用于透射电镜观察；部分新鲜组织分装于 I. 5mlEP管中，迅速置于液氮保存，用于Westernblot检测相应指标。经气管插管缓慢注入 左肺3mlPBS液进行肺泡灌洗，回抽后再注入，反复冲洗3次后回收约2ml肺泡灌洗液，待 检测。
[0025]应用HE染色技术观察各组动物的肺脏病理改变；酶标仪测定血清和肺泡灌洗液 中IL-10、IL-6、TNF-a含量、超敏CRP;分光光度计测定血清MDA、LDH、S0D含量、GSH-PX 活力，肺泡灌洗液中MDA、LDH含量和GSH-PX活力；Westernblot技术测定肺组织(炎性 因子）IL-13、IL-6、TNFa;(氧化应激相关因子）H0-1、NRF-2、NQ0-1、；纤维化相关因子 COLlAl、TGF-P、LN;凋亡相关因子BAX、BCL-2、Caspase-3 ; 二实验结果 1、肺脏病理HE染色显示：PM2. 5染尘组肺组织水肿，肺泡间隔增厚，肺泡腔内可见渗出 物；肺组织可见大量炎性细胞浸润，以中性粒细胞为主。使用中高剂量本发明药物治疗组肺 组织炎症反应减轻，炎性细胞浸润减少。见图1-4。
[0026] 2、肺泡灌洗液中炎性因子IL-IP、IL-6、TNF-a含量空白对照组、生理盐水对照 组与PM2. 5染尘组比较，差异均有统计学意义（P< 0. 05)(见表1、图5)，提示PM2. 5气管 内滴入导致肺组织炎性反应增加。不同剂量本发明药物组大鼠肺泡灌洗液中炎性指标与 PM2. 5染尘组比较(见表2、图6)，结果显示：低、中、高剂量组IL-6水平较PM2. 5染尘 组下 降，差异有统计学意义（P< 〇. 05);提示使用本发明药物后IL-6水平下降，以高剂量组下降 最明显；中高剂量组与低剂量组比较差异有统计学意义（P< 0. 05);但中、高剂量本发明药 物组对IL-6影响差异无统计学意义（P> 0. 05)。高剂量本发明药物组TNF-a、[email protected]水 平较PM2. 5染尘组下降明显，差异有统计学意义。提示高剂量本发明药物组对PM2. 5染尘 大鼠肺脏具有保护作用。
[0027] 3、血清中的炎性因子CRP、IL-6、TNF-a含量空白对照组、生理盐水对照组与 PM2. 5染尘组比较，差异均有统计学意义（P< 0.05)(见表3、图7)。提示PM2. 5气管内滴 入导致机体炎性反应增加。不同剂量本发明药物组大鼠肺血清中炎性指标与PM2. 5染尘组 比较结果显示(表4、图8):中、高剂量组IL-6较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P < 0. 05);中高剂量组与低剂量组比较，差异有统计学意义（P< 0. 05)。各不同剂量本发明 药物组与PM2. 5染尘组比较CRP水平下降，差异有统计学意义，但各剂量组之间差异无统 计学意义（P> 0.05)。高剂量本发明药物组TNF-a与PM2. 5染尘组比较下降，差异有统计 学意义（P< 0.05);高剂量本发明药物组与低剂量本发明药物组比较TNF-a下降，差异有 统计学意义（P< 0.05)。
[0028] 4、空白对照组、生理盐水对照组与PM2. 5染尘组肺泡灌洗液中LDH、MDA、GSH-PX 测定比较，差异均有统计学意义（P< 〇. 〇1)(见表5、图9、10)。低、中、高剂量本发明药物组 肺泡灌洗液中LDH水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0.05);低、中、高剂量 本发明药物组肺泡灌洗液中MDA水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0. 05); 低、中、高剂量本发明药物组肺泡灌洗液中GSH-PX水平较PM2. 5染尘组升高，差异有统计学 意义（P< 0. 05);(见表 6,图 11、12)。
[0029] 5、大鼠血清中氧化应激指标LDH、MDA、SOD和GSH-PX含量测定，PM2. 5染尘组与 生理盐水对照组、空白对照组比较差异均有统计学意义（P< 0.05)(见表7,图13)。不同 剂量本发明药物组MDA水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0.05);高剂量 组LDH水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0. 05);中、高剂量组GSH-PX水 平较PM2. 5染尘组升高，差异有统计学意义（P< 0. 05) ;S0D水平较PM2. 5染尘组增高，但 差异无统计学意义（P> 0.05)(见表8,图14)。
[0030] 6、大鼠肺组织中炎症因子表达 PM2. 5染尘组肺组织中IL-IP、IL-6、TNF-a较对照组明显升高；中、高剂量本发明药 物组较PM2. 5染尘组下降。见图15、图16。图中对照为生理盐水对照。
[0031] 7、大鼠肺组织中氧化应激相关因子表达 高剂量本发明药物组较PM2. 5染尘组肺组织中H0-1、NRF-2、NQ0-1明显升高。见图17、 18。图中对照为生理盐水对照。
[0032] 8、大鼠肺组织中纤维化相关因子的表达 PM2. 5染尘组肺组织中COLlAl、TGF-P、LN较对照组明显升高，低剂量本发明药物组 较PM2. 5染毒组下降不明显，而中、高剂量本发明药物组较PM2. 5染尘组明显下降。见图 19、20。图中对照为生理盐水对照。
[0033] 9、大鼠肺组织中凋亡相关基因的表达 PM2. 5染尘组肺组织中BAX、Caspase-3基因的表达增强，中剂量本发明药物组较PM2. 5染毒组Caspase-3基因的表达下降不明显，而小、高剂量本发明药物组较PM2. 5染尘 组BAX、Caspase-3基因的表达明显下降。PM2. 5染尘组肺组织中BCL-2基因表达减少， 而小、中、高剂量组较PM2. 5染尘组BCL-2基因的表达明显增强。见图21、22，图中对照为生 理盐水对照。
[0034] 结论 本发明药物组合物可以减轻PM2. 5导致的炎性反应，减轻PM2. 5导致的氧化应激反应， 减轻PM2. 5导致的肺组织细胞凋亡，减轻对肺组织的损伤。
【附图说明】
[0035] 图1是空白对照组与生理盐水对照组肺组织病理切片图； 图2是生理盐水对照组与PM2. 5组肺组织病理切片图； 图3是PM2. 5组与药物中剂量组肺组织病理切片图； 图4是PM2. 5组与药物高剂量组肺组织病理切片图； 图5是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组肺泡灌洗液中炎性指标比较； 图6是不同剂量药物干预后对肺组织炎症指标比较； 图7是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中炎性指标比较； 图8是不同剂量药物干预后对血清炎症指标比较； 图9是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中氧化应激指标比较； 图10是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中氧化应激（MDA)指标比较； 图11是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中氧化应激（LDH)指标比较； 图12是不同剂量药物干预后血清中氧化应激指标比较； 图13是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组肺泡灌洗液中氧化应激指标比较； 图14是不同剂量药物干预后肺泡灌洗液中氧化应激指标比较； 图15是大鼠肺组织中炎症因子表达； 图16是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中炎症因子表达； 图17是大鼠肺组织中氧化应激相关因子表达； 图18是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中氧化应激相关因子表达 图19是大鼠肺组织中纤维化相关因子表达； 图20是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中纤维化相关因子表达； 图21是大鼠肺组织中凋亡相关基因表达； 图22是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中凋亡相关基因表达。
【具体实施方式】
[0036] 实施例1 : 原料药配方为： 连翘255g金银花255g板蓝根255g大黄51g广藿香85g 绵马贯众255g红景天85g薄荷脑7. 5g蜜麻黄85g炒苦杏仁85g鱼腥草255g甘草85g石膏255g 制备方法为： (1) 按照上述处方称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次 1. 5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁 煎煮2次，第一次1. 5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提 油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为 70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓 缩至在60°C时测定相对密度为1. 15的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入淀粉138克，用85%乙醇制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入1000粒胶囊，即 得。
[0037] 实施例2 : 原料药配方为： 连翘280g金银花252g板蓝根280g大黄50g广藿香80g绵马贯众252g红景天80g薄荷脑6g麻黄80g苦杏仁65g 鱼腥草280g甘草65g石膏280g 制备方法为： (1) 按照上述处方称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用10倍量50%的乙醇提取2次，第一次3小时，第二次 1小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏 仁煎煮2次，第一次0. 5小时，第二次2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿 香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓 度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合 并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入淀粉134克，用85%乙醇制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，按常规制 剂方法制成片剂即得。
[0038] 实施例3 : 原料药配方为： 连翘252g金银花280g板蓝根252g大黄55g广藿香65g绵马贯众280g红景天65g薄荷脑8g麻黄65g苦杏仁80g 鱼腥草252g甘草80g石膏252g。
[0039]制备方法为： (1) 按照上述处方称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用9倍量90%的乙醇提取2次，第一次1小时，第二次3 小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏 仁煎煮2次，第一次2. 5小时，第二次0. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿 香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 12的清膏，加乙醇，调节至醇浓 度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合 并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1. 19的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（4)所得干膏粉，按常规 制剂方法制成丸剂即得。
【主权项】
1. 一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成肺损伤药物中的应用，其特征在于由下列重 量份的原料药制成： 连翘252-280金银花252-280板蓝根252-280大黄50-55 广藿香65-85绵马贯众252-280红景天65-85 薄荷脑6_8 麻黄65-85 苦杏仁65-85 鱼腥草252-280 甘草65_85 石膏 252-280。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成： 连翘252 金银花280板蓝根252大黄55广藿香65 绵马贯众280红景天65薄荷脑8麻黄65 苦杏仁80 鱼渥草252 甘草 80石骨 252。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成： 连翘280 金银花252板蓝根280大黄50广藿香80 绵马贯众252红景天80薄荷脑6麻黄80 苦杏仁65 鱼渥草280 甘草 65石骨 280。4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成： 连翘255 金银花255板蓝根255大黄51广藿香85 绵马贯众255红景天85薄荷脑7. 5麻黄85苦杏仁85 鱼渥草255 甘草85 石骨255。5. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物的活性成分由以 下步骤制成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁，煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后的 滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 步骤（4)所得干膏粉、步骤（2)所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成 分。6. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述药物剂型为胶囊剂、片剂、散 齐IJ、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于药物胶囊剂的制备方法是由以下步骤制 成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁、煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后 的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入胶囊，即得。8. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于：所述中药组合物在制备降低炎 性因子、纤维化相关因子或凋亡相关基因的表达药物中的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述炎性因子分别为IL-I0、IL-6 、TNF-a;纤维化相关因子分别为COLlAl、[email protected]、LN;凋亡相关基因分别为BAX、 Caspase-3〇
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成的肺损伤药物中的应用，属于中药应用领域。该中药组合物是由连翘、金银花、麻黄、苦杏仁等药味组成，对于细颗粒造成的肺损伤具有很好的治疗作用。
【IPC分类】A61K31/045, A61P11/00, A61K33/06, A61K36/78
【公开号】CN104906237
【申请号】CN201410094890
【发明人】魏聪, 贾振华, 王宏涛
【申请人】河北以岭医药研究院有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年3月15日
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药应用领域，具体涉及一种中药组合物的新用途。
【背景技术】
[0002] 细颗粒又称PM2. 5、细颗粒物、细粒。细颗粒指环境空气中空气动力学当量直径小 于等于2.5微米的颗粒物。它能较长时间悬浮于空气中，其在空气中含量浓度越高，就代 表空气污染越严重。虽然PM2. 5只是地球大气成分中含量很少的组分，但它对空气质量和 能见度等有重要的影响。与较粗的大气颗粒物相比，PM2. 5粒径小，面积大，活性强，易附带 有毒、有害物质(例如，重金属、微生物等)，且在大气中的停留时间长、输送距离远，因而对 人体健康和大气环境质量的影响更大。
[0003] PM2. 5进入呼吸道内表面后，与肺组织相互作用，其转归有以下几种：（1)通过 呼吸道纤毛-黏液运动排送至咽喉部，以痰液的形式排出体外或进入消化系统。（2)被肺 泡巨噬细胞吞噬后穿过肺泡壁，一部分进入淋巴系统，然后由淋巴液带到淋巴结，最后被 清除掉；另一部分长期储留肺组织中，在肺间质形成病灶。（3)某些颗粒或组分通过肺的 内呼吸换气进入血液从而到达其他器官。PM2. 5的致病机制可归纳为：（1)PM2. 5进入肺内 后，首先与肺泡巨噬细胞、肺上皮细胞作用，通过吸附的毒性成分引起肺组织生化成分改 变I以及炎症因子的释放，诱发炎症，甚至导致肺纤维化。（2)细颗粒物具有自由基活性， 细颗粒物含有的金属成分、有机成分等也能够刺激肺泡巨噬细胞产生自由基，当PM2. 5与 细胞作用后，对组织细胞造成进一步损伤。（3)PM2. 5可引起细胞增生，其化学组分或ROS 直接损害遗传物质，导致癌基因激活、抑癌基因失活、遗传物质突变。
【发明内容】
[0004] 本发明涉及一种中药组合物的新用途。本发明所述中药可以被有相同或相似功效 的中药代替，并且这些药材均可按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》进行炮制。
[0005] 本发明目的是提供一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成的肺损伤药物中的应 用，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成： 连翘252-280金银花252-280板蓝根252-280大黄50-55 广藿香65-85绵马贯众252-280红景天65-85 薄荷脑6_8 麻黄65-85 苦杏仁65-85 鱼腥草252-280 甘草65_85 石膏 252-280。
[0006] 优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成： 连翘252 金银花280板蓝根252大黄55广藿香65 绵马贯众280红景天65薄荷脑8麻黄65 苦杏仁80 鱼渥草252 甘草 80石骨 252。
[0007]或： 连翘280 金银花252板蓝根280大黄50广藿香80 绵马贯众252红景天80薄荷脑6麻黄80 苦杏仁65 鱼渥草280 甘草 65石骨 280。
[0008]或： 连翘255 金银花255板蓝根255大黄51广藿香85 绵马贯众255红景天85薄荷脑7. 5麻黄85炒苦杏仁85 鱼渥草255 甘草 85石骨 255。
[0009] 优先地，所述中药组合物所用原料药中，麻黄为蜜麻黄，苦杏仁为炒苦杏仁。
[0010] 本发明还提供了所述中药组合物的活性成分由以下步骤制成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁，煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后的 滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 步骤（4)所得干膏粉、步骤（2)所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成 分。
[0011] 本发明药物的剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶 齐IJ、喷雾剂或注射剂。
[0012] 其中胶囊剂的制备方法，是由以下步骤制成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁、煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后 的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 将步骤（4)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒； (6)将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入胶囊，即得。
[0013] 优选制备方法为： (1)按照比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次 1. 5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁 煎煮2次，第一次1. 5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提 油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓 度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合 并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料，用85%乙醇制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入胶囊，即得。
[0014] 本发明药物的其他剂型按比例称取原料药后，采用常规的制备方法制备，例如，范 碧亭《中药药剂学》（上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可 接受的常规剂型。
[0015] 为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充 剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、 预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、 微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲 基纤维素 钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯 吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡 咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等； 矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐 类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000,虫蜡等。为使上述剂型 能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂 学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。
[0016]所述中药组合物在制备降低IL-ie、IL-6、TNF-a因子表达的药物中的应用。
[0017] 所述中药组合物在制备抑制COLlAl、TGF-P、LN因子表达的药物中的应用的药 物中的应用。
[0018] 为证实本发明药物的疗效，用按实施例1制得的胶囊剂（以下称本发明药物)，进行 了以下试验研究： 实验例： 一材料与方法 1、实验动物及饲料：清洁级（SPF级）健康雄性Wistar大鼠48只，体重180-200g左右，全部购自河北医科大学实验动物中心。饲养于河北省人民医院动物实验室，室温 22-28 °C，每日12小时光照；供给标准动物饲料和自来水，自由取食水。所有大鼠均给予标 准适应性喂养1周后开始实验。
[0019] 2、主要试剂 IL-IP酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 IL-6酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 TNF-a酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 CRP酶联免疫检测试剂盒 BlueGene公司 丙二醛(MDA)测试盒 南京建成生物工程研究所 乳酸脱氢酶（LDH) 南京建成生物工程研究所 超氧化物歧化酶（SOD)测试盒 南京建成生物工程研究所 谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-PX)测试盒南京建成生物工程研究所 戊巴比妥钠 上海试剂采购供应站 本发明药物干膏粉 石家庄市以岭药业提供 PM2. 5颗粒物 石家庄市环境监测中心提供 3、 主要试剂的配制 PM2. 5悬液制备 将载有PM2. 5的滤膜剪成IXlcm大小，浸入蒸馏水中，经超声震荡器反复震荡，收 集洗脱液。再加入蒸馏水进行第二次超声振荡，再次收集洗脱液。两次洗脱液液体合并于 锥形瓶中，六层无菌纱布过滤，滤液即为PM2. 5悬液，真空冷冻干燥，称重后超低温冰箱保 存。用前以生理盐水配制成7. 5mg/ml的细颗粒物悬液，并经高压灭菌15min，染尘前超声 震荡15min使悬液混匀，4°C备用。
[0020] 本发明药物溶液的配制 羟甲基纤维素钠溶液的配制：羟甲基纤维素钠+蒸馏水； 20%本发明药物溶液配制：本发明药物干膏粉（10. 43g) +羟甲基纤维素钠溶液 (500ml)； 40%本发明药物溶液配制：本发明药物干膏粉（20. 87g) +羟甲基纤维素钠溶液 (500ml)； 80%本发明药物溶液配制：本发明药物干膏粉（41. 73g) +羟甲基纤维素钠溶液 (500ml)； 4、 主要仪器设备 紫外分光光度计 756MC上海精密仪器科学有限公司酶标仪 酶标仪 MultiskanMk3芬兰 电子秤 JA3003上海精科天平 恒温水浴箱 SHH.W21.420北京金北德工贸有限公司 低温离心机 EBA12R德国Hettich公司 不同取液量移液器德国Eppendorf公司 20号大鼠灌胃针 上海 16号静脉留置针针套 5、 实验方法 分组 48只清洁级健康Wistar大鼠适应性喂养1周后，随机分为6组， ① 低剂量本发明药物组(生药2g/kg) ② 中剂量本发明药物组(生药4g/kg) ③ 高剂量本发明药物组(生药8g/kg) ④PM2. 5染尘组 ⑤ 生理盐水对照组 ⑥ 空白对照组 各组分别于气管插管滴入PM2. 5或生理盐水24小时后处死，取材后测定相应指标。
[0021] 动物模型复制 本发明药物组不同剂量模型制备 不同浓度的本发明药物溶液灌胃量均为lOml/kg;气管内滴入PM2. 5溶液量为Iml/kg;首先连续灌胃给本发明药物溶液4天，第4天先称重再灌胃。灌胃后休息1小时，用3% 戊巴比妥钠（40mg/kg)腹腔注射麻醉，待麻醉显效后仰卧位固定动物于特制操作台上，经 气管插管滴入PM2. 5溶液，24小时后处死，取材后测定相应指标。
[0022] PM2. 5动物染尘组模型制备 羟甲基纤维素钠溶液灌胃量为lOml/kg;气管内滴入PM2. 5溶液量为lml/kg;首先连 续灌胃给羟甲基纤维素钠溶液4天，第4天先称重再灌胃。灌胃后休息1小时，用3%戊巴 比妥钠（40mg/kg)腹腔注射麻醉，待麻醉显效后仰卧位固定动物于特制操作台上，经气管 插管滴入PM2. 5溶液,24小时后处死,取材后测定相应指标。
[0023] 生理盐水对照组模型制备 气管内滴入生理盐水量为lml/kg;于实验开始的第4天，称重后用3%戊巴比妥钠（ 40mg/kg)腹腔注射麻醉，待麻醉显效后仰卧位固定动物于特制操作台上，经气管插管滴入 生理盐水，24小时后处死，取材后测定相应指标。
[0024] 大鼠标本的留取及测定 各组动物于相应的时间点称重后3%戊巴比妥钠（40mg/Kg)腹腔注射麻醉。待麻醉显 效后，将大鼠固定在操作台上，暴露气管，立即打开腹腔，暴露腹主动脉，采取腹主动脉血约 4-8ml(促凝管)，常温静置10-20分钟后离心（15分钟，3000转)，取血清，小心吸取血清并 分装于干净EP管内立即转移至-80°C冰箱冻存，待测定相应指标。取血后迅速打开胸腔， 结扎右肺门，取下右肺，部分置于4%多聚甲醛溶液中固定24小时，常规石蜡包埋，切片， 用于苏木素-伊红（ffi)染色；部分固定于戊二醛，用于透射电镜观察；部分新鲜组织分装于 I. 5mlEP管中，迅速置于液氮保存，用于Westernblot检测相应指标。经气管插管缓慢注入 左肺3mlPBS液进行肺泡灌洗，回抽后再注入，反复冲洗3次后回收约2ml肺泡灌洗液，待 检测。
[0025]应用HE染色技术观察各组动物的肺脏病理改变；酶标仪测定血清和肺泡灌洗液 中IL-10、IL-6、TNF-a含量、超敏CRP;分光光度计测定血清MDA、LDH、S0D含量、GSH-PX 活力，肺泡灌洗液中MDA、LDH含量和GSH-PX活力；Westernblot技术测定肺组织(炎性 因子）IL-13、IL-6、TNFa;(氧化应激相关因子）H0-1、NRF-2、NQ0-1、；纤维化相关因子 COLlAl、TGF-P、LN;凋亡相关因子BAX、BCL-2、Caspase-3 ; 二实验结果 1、肺脏病理HE染色显示：PM2. 5染尘组肺组织水肿，肺泡间隔增厚，肺泡腔内可见渗出 物；肺组织可见大量炎性细胞浸润，以中性粒细胞为主。使用中高剂量本发明药物治疗组肺 组织炎症反应减轻，炎性细胞浸润减少。见图1-4。
[0026] 2、肺泡灌洗液中炎性因子IL-IP、IL-6、TNF-a含量空白对照组、生理盐水对照 组与PM2. 5染尘组比较，差异均有统计学意义（P< 0. 05)(见表1、图5)，提示PM2. 5气管 内滴入导致肺组织炎性反应增加。不同剂量本发明药物组大鼠肺泡灌洗液中炎性指标与 PM2. 5染尘组比较(见表2、图6)，结果显示：低、中、高剂量组IL-6水平较PM2. 5染尘 组下 降，差异有统计学意义（P< 〇. 05);提示使用本发明药物后IL-6水平下降，以高剂量组下降 最明显；中高剂量组与低剂量组比较差异有统计学意义（P< 0. 05);但中、高剂量本发明药 物组对IL-6影响差异无统计学意义（P> 0. 05)。高剂量本发明药物组TNF-a、[email protected]水 平较PM2. 5染尘组下降明显，差异有统计学意义。提示高剂量本发明药物组对PM2. 5染尘 大鼠肺脏具有保护作用。
[0027] 3、血清中的炎性因子CRP、IL-6、TNF-a含量空白对照组、生理盐水对照组与 PM2. 5染尘组比较，差异均有统计学意义（P< 0.05)(见表3、图7)。提示PM2. 5气管内滴 入导致机体炎性反应增加。不同剂量本发明药物组大鼠肺血清中炎性指标与PM2. 5染尘组 比较结果显示(表4、图8):中、高剂量组IL-6较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P < 0. 05);中高剂量组与低剂量组比较，差异有统计学意义（P< 0. 05)。各不同剂量本发明 药物组与PM2. 5染尘组比较CRP水平下降，差异有统计学意义，但各剂量组之间差异无统 计学意义（P> 0.05)。高剂量本发明药物组TNF-a与PM2. 5染尘组比较下降，差异有统计 学意义（P< 0.05);高剂量本发明药物组与低剂量本发明药物组比较TNF-a下降，差异有 统计学意义（P< 0.05)。
[0028] 4、空白对照组、生理盐水对照组与PM2. 5染尘组肺泡灌洗液中LDH、MDA、GSH-PX 测定比较，差异均有统计学意义（P< 〇. 〇1)(见表5、图9、10)。低、中、高剂量本发明药物组 肺泡灌洗液中LDH水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0.05);低、中、高剂量 本发明药物组肺泡灌洗液中MDA水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0. 05); 低、中、高剂量本发明药物组肺泡灌洗液中GSH-PX水平较PM2. 5染尘组升高，差异有统计学 意义（P< 0. 05);(见表 6,图 11、12)。
[0029] 5、大鼠血清中氧化应激指标LDH、MDA、SOD和GSH-PX含量测定，PM2. 5染尘组与 生理盐水对照组、空白对照组比较差异均有统计学意义（P< 0.05)(见表7,图13)。不同 剂量本发明药物组MDA水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0.05);高剂量 组LDH水平较PM2. 5染尘组下降，差异有统计学意义（P< 0. 05);中、高剂量组GSH-PX水 平较PM2. 5染尘组升高，差异有统计学意义（P< 0. 05) ;S0D水平较PM2. 5染尘组增高，但 差异无统计学意义（P> 0.05)(见表8,图14)。
[0030] 6、大鼠肺组织中炎症因子表达 PM2. 5染尘组肺组织中IL-IP、IL-6、TNF-a较对照组明显升高；中、高剂量本发明药 物组较PM2. 5染尘组下降。见图15、图16。图中对照为生理盐水对照。
[0031] 7、大鼠肺组织中氧化应激相关因子表达 高剂量本发明药物组较PM2. 5染尘组肺组织中H0-1、NRF-2、NQ0-1明显升高。见图17、 18。图中对照为生理盐水对照。
[0032] 8、大鼠肺组织中纤维化相关因子的表达 PM2. 5染尘组肺组织中COLlAl、TGF-P、LN较对照组明显升高，低剂量本发明药物组 较PM2. 5染毒组下降不明显，而中、高剂量本发明药物组较PM2. 5染尘组明显下降。见图 19、20。图中对照为生理盐水对照。
[0033] 9、大鼠肺组织中凋亡相关基因的表达 PM2. 5染尘组肺组织中BAX、Caspase-3基因的表达增强，中剂量本发明药物组较PM2. 5染毒组Caspase-3基因的表达下降不明显，而小、高剂量本发明药物组较PM2. 5染尘 组BAX、Caspase-3基因的表达明显下降。PM2. 5染尘组肺组织中BCL-2基因表达减少， 而小、中、高剂量组较PM2. 5染尘组BCL-2基因的表达明显增强。见图21、22，图中对照为生 理盐水对照。
[0034] 结论 本发明药物组合物可以减轻PM2. 5导致的炎性反应，减轻PM2. 5导致的氧化应激反应， 减轻PM2. 5导致的肺组织细胞凋亡，减轻对肺组织的损伤。
【附图说明】
[0035] 图1是空白对照组与生理盐水对照组肺组织病理切片图； 图2是生理盐水对照组与PM2. 5组肺组织病理切片图； 图3是PM2. 5组与药物中剂量组肺组织病理切片图； 图4是PM2. 5组与药物高剂量组肺组织病理切片图； 图5是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组肺泡灌洗液中炎性指标比较； 图6是不同剂量药物干预后对肺组织炎症指标比较； 图7是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中炎性指标比较； 图8是不同剂量药物干预后对血清炎症指标比较； 图9是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中氧化应激指标比较； 图10是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中氧化应激（MDA)指标比较； 图11是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组血清中氧化应激（LDH)指标比较； 图12是不同剂量药物干预后血清中氧化应激指标比较； 图13是空白对照组、盐水对照组及PM2. 5组肺泡灌洗液中氧化应激指标比较； 图14是不同剂量药物干预后肺泡灌洗液中氧化应激指标比较； 图15是大鼠肺组织中炎症因子表达； 图16是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中炎症因子表达； 图17是大鼠肺组织中氧化应激相关因子表达； 图18是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中氧化应激相关因子表达 图19是大鼠肺组织中纤维化相关因子表达； 图20是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中纤维化相关因子表达； 图21是大鼠肺组织中凋亡相关基因表达； 图22是不同剂量药物干预后大鼠肺组织中凋亡相关基因表达。
【具体实施方式】
[0036] 实施例1 : 原料药配方为： 连翘255g金银花255g板蓝根255g大黄51g广藿香85g 绵马贯众255g红景天85g薄荷脑7. 5g蜜麻黄85g炒苦杏仁85g鱼腥草255g甘草85g石膏255g 制备方法为： (1) 按照上述处方称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次 1. 5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁 煎煮2次，第一次1. 5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提 油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为 70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓 缩至在60°C时测定相对密度为1. 15的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入淀粉138克，用85%乙醇制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入1000粒胶囊，即 得。
[0037] 实施例2 : 原料药配方为： 连翘280g金银花252g板蓝根280g大黄50g广藿香80g绵马贯众252g红景天80g薄荷脑6g麻黄80g苦杏仁65g 鱼腥草280g甘草65g石膏280g 制备方法为： (1) 按照上述处方称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用10倍量50%的乙醇提取2次，第一次3小时，第二次 1小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏 仁煎煮2次，第一次0. 5小时，第二次2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿 香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓 度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合 并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.20的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入淀粉134克，用85%乙醇制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，按常规制 剂方法制成片剂即得。
[0038] 实施例3 : 原料药配方为： 连翘252g金银花280g板蓝根252g大黄55g广藿香65g绵马贯众280g红景天65g薄荷脑8g麻黄65g苦杏仁80g 鱼腥草252g甘草80g石膏252g。
[0039]制备方法为： (1) 按照上述处方称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液 过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用9倍量90%的乙醇提取2次，第一次1小时，第二次3 小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏 仁煎煮2次，第一次2. 5小时，第二次0. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿 香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 12的清膏，加乙醇，调节至醇浓 度为70%，冷藏放置24小时，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合 并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1. 19的清膏，喷雾干燥，得干膏粉，备用； (5) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（4)所得干膏粉，按常规 制剂方法制成丸剂即得。
【主权项】
1. 一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成肺损伤药物中的应用，其特征在于由下列重 量份的原料药制成： 连翘252-280金银花252-280板蓝根252-280大黄50-55 广藿香65-85绵马贯众252-280红景天65-85 薄荷脑6_8 麻黄65-85 苦杏仁65-85 鱼腥草252-280 甘草65_85 石膏 252-280。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成： 连翘252 金银花280板蓝根252大黄55广藿香65 绵马贯众280红景天65薄荷脑8麻黄65 苦杏仁80 鱼渥草252 甘草 80石骨 252。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成： 连翘280 金银花252板蓝根280大黄50广藿香80 绵马贯众252红景天80薄荷脑6麻黄80 苦杏仁65 鱼渥草280 甘草 65石骨 280。4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成： 连翘255 金银花255板蓝根255大黄51广藿香85 绵马贯众255红景天85薄荷脑7. 5麻黄85苦杏仁85 鱼渥草255 甘草85 石骨255。5. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物的活性成分由以 下步骤制成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁，煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后的 滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 步骤（4)所得干膏粉、步骤（2)所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成 分。6. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述药物剂型为胶囊剂、片剂、散 齐IJ、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于药物胶囊剂的制备方法是由以下步骤制 成： (1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2) 广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取 液过滤后，残渔弃去，滤液备用； (3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提 取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦 杏仁、煎煮2次，每次0. 5-2. 5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2)广藿香提油后 的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1. 10-1. 15的清膏，加乙醇，调节至醇浓度为 70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，所得滤液与步骤（3)所得醇提液合并，浓缩至在 60°C时测定相对密度为1. 15-1. 20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； (5) 将步骤（4)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒； (6) 将薄荷脑、步骤（2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（5)所得颗粒，密闭，混 匀，装入胶囊，即得。8. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于：所述中药组合物在制备降低炎 性因子、纤维化相关因子或凋亡相关基因的表达药物中的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述炎性因子分别为IL-I0、IL-6 、TNF-a;纤维化相关因子分别为COLlAl、[email protected]、LN;凋亡相关基因分别为BAX、 Caspase-3〇
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物在制备治疗细颗粒造成的肺损伤药物中的应用，属于中药应用领域。该中药组合物是由连翘、金银花、麻黄、苦杏仁等药味组成，对于细颗粒造成的肺损伤具有很好的治疗作用。
【IPC分类】A61K31/045, A61P11/00, A61K33/06, A61K36/78
【公开号】CN104906237
【申请号】CN201410094890
【发明人】魏聪, 贾振华, 王宏涛
【申请人】河北以岭医药研究院有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年3月15日
最新回复(0)