一种补肾益脑胶囊的制备方法及应用
一种补肾益脑胶囊的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种补肾益脑胶囊的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 补肾益脑胶囊记载于国家药品食品监督管理局标准，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁 48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎 37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g，作为原料药制成，以上十六味，五 味子（压碎）、补骨脂、川芎、当归提取挥发油，提取后的药液滤过备用；药渣加60%乙醇回 流提取3小时，滤过，药渣再加80%乙醇加热回流提取3小时，滤过，合并二次提取液，回收 乙醇，浓缩，备用；玄参、远志、麦冬、酸枣仁、枸杞子、熟地黄、牛膝加水煎煮三次，每次1.5 小时，合并煎液，滤过，备用。将上述各提取液合并，浓缩至相对密度为1. 30 (80°C)的清膏； 将人参、鹿茸、茯苓、山药粉碎成细粉，朱砂水飞或粉碎成极细粉，拌入稠膏内，混匀，低温干 燥，粉碎，过筛，用乙醇制粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密闭2小时，装入胶囊，制成100粒，即 得。滋肾益气，补血生精，用于气血两亏，阳虚气弱，心跳气短，失眠健忘，遗精盗汗，腰腿酸 软，耳聋耳鸣。
[0003] 现有技术中，尚未有补肾益脑胶囊在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采 用水提取等方法，工艺粗糙、复杂、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响 了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种补肾益脑胶囊的制备 方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤 U937增殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种补肾益脑胶囊的制备方法，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯 苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药 48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取红 参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五 味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g药材加入到C02 超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力 15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临界萃 取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0008] 所述补肾益脑胶囊的制备方法，所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积 百分比为5%。
[0009] 所述补肾益脑胶囊的制备方法，所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度 40°C，C02 流量 2ml/g生药?min，萃取时间 160min。
[0010] 所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用，补肾 益脑胶囊由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、 麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂 13g作为原料药制成，取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜 制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞 子39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百 分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药?min，萃取时间 150-180min，得超临界萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0011] 所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用，其特 征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分 比为5%。
[0012] 所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用，其特 征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02 流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
[0013] 现有技术中，补肾益脑胶囊每粒0. 5g，口服，一次4~5粒，一日3次，采用本发明 制备成的补肾益脑胶囊每粒〇.5g，但含有的药材量比原来多，在具有更多活性成分的条件 下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0015] 实施例1 :取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制 远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川考37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子 39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为4%，萃取压力30MPa，温度30°C，C02流量3ml/g生药.min,萃取时间150min，得超临界 萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0016] 实施例2 :取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制 远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川考37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子 39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为6%，萃取压力15MPa，温度50°C，C02流量lml/g生药.min,萃取时间180min，得超临界 萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0017] 实施例3 :取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制 远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川考37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子 39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为5%，萃取压力25MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药.min,萃取时间160min，得超临界 萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0018] 实施例4 :补肾益脑胶囊抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖的实验研宄资料
[0019] 1实验材料
[0020]I. 1实验用细胞株：人组织细胞淋巴瘤U937,南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0021] 1. 2实验药物：研宄药物：本发明补肾益脑胶囊：按实施例3方法制备。药液储液： 称取IOOmg补肾益脑胶囊内容物，混悬于5ml无水乙醇中，0. 2ym滤器过滤，500yIdoff 管分装，-20°C存储，同时0. 2ym滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0022]L3实验试剂：DMEM(GIBCO公司C at.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot.No. 1088387)Jrypsin(AMRESC0公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批号：2009/10);PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycinSulfate(AMRESO)公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp批号：0793);PBS(实验室自配）；
[0023] 1. 4实验器材：莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检 测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏 净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579);精 密移液器（法国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S); 全自动高压灭菌锅（日本SANK)公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密 实验设备公司型号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号： 2001);低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0. 2ym滤器（MILLIP0RE型号： SLGP033RB) ;10cm培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移 液管、Tips若干。
[0024] 2实验方法：
[0025]1)U937 细胞用DMEM+10%FBS于 37°C、5%C02 进行常规培养（10cm培养皿）， 当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25 %胰蛋白 酶-0. 04%EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其 转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X104个/ml。2)将细胞种入96孔 培养板中，每孔加入细胞悬液180y1，培养板放入细胞培养箱中（37°C，5%C02)常规培养。 3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入补肾益脑胶囊溶液，继续培养24h。4) 24h 后加入20yIMTT溶液（5mg/ml，即0. 5%MTT)，继续培养4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用 吸水纸轻轻拍干，每孔加入200y1二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶 解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底（不加细胞，只加培 养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个 复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率（％) = (对照孔OD值-给药 孔OD值）/对照孔OD值X100%。实验重复3次。
[0026] 3实验结果：MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对 U937细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在lOmg/ml时该差异具有显著性（P〈0. 01)，当剂 量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0027] 表1补肾益脑胶囊对人组织细胞淋巴瘤U937增殖抑制影响研宄（X土SD)
[0028]
[0029]注：与对照组比较，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0030] 4实验结论：补肾益脑胶囊可以抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖，减少人组织细 胞淋巴瘤U937的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种补肾益脑胶囊的制备方法，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓 48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、 补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组 成：取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬 48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g药材加入 到〇)2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取 压力15-30MPa，温度30-50°C，CO2流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临 界萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。2. 根据权利要求1所述补肾益脑胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹 带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。3. 根据权利要求1所述补肾益脑胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的 萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。4. 根据权利要求1所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中 的应用，其特征在于补肾益脑胶囊由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、 玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补 骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g，作为原料药制成，制备方法为：取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁 48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎 37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g药材加入到0)2超临界萃取器中，乙醇作 为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C， CO2流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀 粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。5. 根据权利要求4所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中 的应用，其特征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂 的体积百分比为5%。6. 根据权利要求4所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中 的应用，其特征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述〇)2超临界萃取的萃取压力20MPa，温 度40°C，CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体提供一种补肾益脑胶囊的制备方法，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K33/28, A61K35/32, A61P35/00, A61K36/8968, A61K9/48
【公开号】CN104906351
【申请号】CN201510345509
【发明人】李洋
【申请人】南京华宽信息咨询中心
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月22日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种补肾益脑胶囊的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 补肾益脑胶囊记载于国家药品食品监督管理局标准，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁 48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎 37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g，作为原料药制成，以上十六味，五 味子（压碎）、补骨脂、川芎、当归提取挥发油，提取后的药液滤过备用；药渣加60%乙醇回 流提取3小时，滤过，药渣再加80%乙醇加热回流提取3小时，滤过，合并二次提取液，回收 乙醇，浓缩，备用；玄参、远志、麦冬、酸枣仁、枸杞子、熟地黄、牛膝加水煎煮三次，每次1.5 小时，合并煎液，滤过，备用。将上述各提取液合并，浓缩至相对密度为1. 30 (80°C)的清膏； 将人参、鹿茸、茯苓、山药粉碎成细粉，朱砂水飞或粉碎成极细粉，拌入稠膏内，混匀，低温干 燥，粉碎，过筛，用乙醇制粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密闭2小时，装入胶囊，制成100粒，即 得。滋肾益气，补血生精，用于气血两亏，阳虚气弱，心跳气短，失眠健忘，遗精盗汗，腰腿酸 软，耳聋耳鸣。
[0003] 现有技术中，尚未有补肾益脑胶囊在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采 用水提取等方法，工艺粗糙、复杂、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响 了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种补肾益脑胶囊的制备 方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤 U937增殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种补肾益脑胶囊的制备方法，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯 苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药 48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取红 参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五 味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g药材加入到C02 超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力 15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临界萃 取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0008] 所述补肾益脑胶囊的制备方法，所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积 百分比为5%。
[0009] 所述补肾益脑胶囊的制备方法，所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度 40°C，C02 流量 2ml/g生药?min，萃取时间 160min。
[0010] 所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用，补肾 益脑胶囊由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、 麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂 13g作为原料药制成，取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜 制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞 子39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百 分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药?min，萃取时间 150-180min，得超临界萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0011] 所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用，其特 征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分 比为5%。
[0012] 所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用，其特 征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02 流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
[0013] 现有技术中，补肾益脑胶囊每粒0. 5g，口服，一次4~5粒，一日3次，采用本发明 制备成的补肾益脑胶囊每粒〇.5g，但含有的药材量比原来多，在具有更多活性成分的条件 下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0015] 实施例1 :取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制 远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川考37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子 39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为4%，萃取压力30MPa，温度30°C，C02流量3ml/g生药.min,萃取时间150min，得超临界 萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0016] 实施例2 :取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制 远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川考37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子 39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为6%，萃取压力15MPa，温度50°C，C02流量lml/g生药.min,萃取时间180min，得超临界 萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0017] 实施例3 :取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制 远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川考37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子 39g药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为5%，萃取压力25MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药.min,萃取时间160min，得超临界 萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。
[0018] 实施例4 :补肾益脑胶囊抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖的实验研宄资料
[0019] 1实验材料
[0020]I. 1实验用细胞株：人组织细胞淋巴瘤U937,南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0021] 1. 2实验药物：研宄药物：本发明补肾益脑胶囊：按实施例3方法制备。药液储液： 称取IOOmg补肾益脑胶囊内容物，混悬于5ml无水乙醇中，0. 2ym滤器过滤，500yIdoff 管分装，-20°C存储，同时0. 2ym滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0022]L3实验试剂：DMEM(GIBCO公司C at.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot.No. 1088387)Jrypsin(AMRESC0公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批号：2009/10);PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycinSulfate(AMRESO)公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp批号：0793);PBS(实验室自配）；
[0023] 1. 4实验器材：莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检 测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏 净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579);精 密移液器（法国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S); 全自动高压灭菌锅（日本SANK)公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密 实验设备公司型号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号： 2001);低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0. 2ym滤器（MILLIP0RE型号： SLGP033RB) ;10cm培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移 液管、Tips若干。
[0024] 2实验方法：
[0025]1)U937 细胞用DMEM+10%FBS于 37°C、5%C02 进行常规培养（10cm培养皿）， 当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25 %胰蛋白 酶-0. 04%EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其 转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X104个/ml。2)将细胞种入96孔 培养板中，每孔加入细胞悬液180y1，培养板放入细胞培养箱中（37°C，5%C02)常规培养。 3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入补肾益脑胶囊溶液，继续培养24h。4) 24h 后加入20yIMTT溶液（5mg/ml，即0. 5%MTT)，继续培养4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用 吸水纸轻轻拍干，每孔加入200y1二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶 解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底（不加细胞，只加培 养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个 复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率（％) = (对照孔OD值-给药 孔OD值）/对照孔OD值X100%。实验重复3次。
[0026] 3实验结果：MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对 U937细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在lOmg/ml时该差异具有显著性（P〈0. 01)，当剂 量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0027] 表1补肾益脑胶囊对人组织细胞淋巴瘤U937增殖抑制影响研宄（X土SD)
[0028]
[0029]注：与对照组比较，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0030] 4实验结论：补肾益脑胶囊可以抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖，减少人组织细 胞淋巴瘤U937的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种补肾益脑胶囊的制备方法，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓 48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、 补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组 成：取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬 48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g药材加入 到〇)2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取 压力15-30MPa，温度30-50°C，CO2流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临 界萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。2. 根据权利要求1所述补肾益脑胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹 带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。3. 根据权利要求1所述补肾益脑胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的 萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。4. 根据权利要求1所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中 的应用，其特征在于补肾益脑胶囊由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、 玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补 骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g，作为原料药制成，制备方法为：取红参50g、鹿茸8g、酸枣仁 48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎 37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g药材加入到0)2超临界萃取器中，乙醇作 为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C， CO2流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎，加朱砂13g、淀 粉20g，制粒，灌胶囊，每粒0. 5g。5. 根据权利要求4所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中 的应用，其特征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂 的体积百分比为5%。6. 根据权利要求4所述补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中 的应用，其特征在于补肾益脑胶囊的制备方法中所述〇)2超临界萃取的萃取压力20MPa，温 度40°C，CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体提供一种补肾益脑胶囊的制备方法，由红参50g、鹿茸8g、酸枣仁48g、熟地黄103g、茯苓48g、玄参37g、蜜制远志48g、麦冬48g、五味子37g、当归48g、川芎37g、牛膝37g、山药48g、补骨脂37g、枸杞子39g、朱砂13g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了补肾益脑胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K33/28, A61K35/32, A61P35/00, A61K36/8968, A61K9/48
【公开号】CN104906351
【申请号】CN201510345509
【发明人】李洋
【申请人】南京华宽信息咨询中心
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月22日
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