手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法
手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药手掌参抗肿瘤提取物及其组合物 的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗脑胶质瘤、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺 癌、乳腺癌、宫颈癌等恶性肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 手掌参拉丁名Gymnadeniaconopsea(L. )R.Br?，又称手参、掌参、手儿参、佛手 参，为兰科植物手参或粗脉手参的块根。青藏高原稀有药材，生长在海拔3000-4000米高山 灌木丛中，因为外形像手掌而得名。生于海拔265-4700米的山坡林下、草地或砾石滩草丛 中。干燥块茎形如手掌，指状分裂，通常4~6裂不等，稍扁，长2. 5~3. 5厘米，径2~2. 5 厘米，表面皱缩，淡黄色，有时茎痕周围有1褐色环。
[0003] 手掌参的全草含挥发油6%，内有甲基香醛，向日葵素。块根中含粘液质、淀粉、蛋白 质、糖分、草酸钙、无机盐。性平味甘，止咳平喘；益肾健脾；理气和血；止痛。治肺虚咳喘， 虚劳消瘦，神经衰弱，久泻，失血，带下，乳少，慢性肝炎。手参地下茎的水提取物对兔、犬有 利尿作用，但剂量过大反能降低尿量。对蛙下肢血管呈收缩作用，对小鼠的全身状态则呈 抑制作用。
[0004] 本发明在深入地研宄手掌参的抗癌活性时意外地发现，手掌参除了具有诱导白血 病细胞凋亡的功效外，亦具有很好的脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、 胰腺癌等恶性肿瘤的预防及治疗作用，该活性提取物及其组合物有望应用到多种癌症的预 防和治疗上。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题是提供一种手掌参提取物。
[0006] 本发明还提供了以手掌参提取物为主要活性成分的组合物。
[0007] 本发明同时提供了手掌参提取物及其组合物的制备和应用。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药手掌参经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2)柱分离，上样后的硅胶 柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇，比例见表1)，各二氯甲烷-甲 醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性， 意外地发现先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比)洗脱，继用二氯 甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱，洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混 合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提 取物，而其他比例的洗脱组分，不具有抗肿瘤活性。特别地，优选为先用二氯甲烷-甲醇混 合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂 (二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明抗肿瘤活性 的提取物。抗肿瘤活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离 开。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图1，TLC分析 条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1)。显色方法：香草醛浓硫 酸显色。
[0009] 具体，发现过程如下： 1、手掌参经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药手掌参20g，经100ml水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0215B0. 2076g，二氯甲烷-甲醇系统洗脱。
[0010] 2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药手掌参20g，经100ml水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0215B0. 2076g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶0. 6g，空白 硅胶5g，玻璃柱内径I. 5cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱(条件见表1)，柱体积11ml，每个 梯度洗脱100ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱提取物，TLC分析结果见图2,，图3。图2的TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统： 二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1)。显色方法：香草醛浓硫酸显色。图3的TLC分析条件： GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1)。显色方法：香草醛浓硫酸显色。
[0011]
3、抗肿瘤活性筛选方法和结果 1)实验条件a)细胞株信息 大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。
[0012] b)药品及试剂 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培养 液稀释至所需浓度（DMSO彡1 %。）。
[0013] RPMIMedium1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研宄所。Trypsin1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0014] c)仪器 CO2培养箱（SANYO,日本） 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司） 倒置生物显微镜(重庆光电仪器有限公司） 低/高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂） 电子天平(奥豪斯仪器有限公司） 酶标仪(伯乐生命医学产品有限公司） 立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂） 鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂） PH计（SART0RIUS，德国） 2) 实验方法和过程 大鼠脑胶质瘤细胞C6以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。各 组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12h，观察细胞汇合率 约为40%，加药，浓度均为100yg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组（培 养基+细胞；含〇. 1%DMS0培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药物24小时 后，加入20y1四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴盐 (3_ (4, 5-dimethyl_2thiazolyl) _2，5-diphenyl-tetrazoliumbromide，MTT)，继续培养 4 小时。完全弃去上清液，加入IOOylDMS0,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD 值。
[0015] 抑制率（IR) =(A对照一A试验）/(A对照一A空白）X100% 3) 实验结果 表2
结果发现： 本发明最优方案为：维吾尔药手掌参经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上 样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱，继用 二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶 剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到的高活性提 取物，即为该抗肿瘤的提取物。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图 1〇
[0016] 4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研宄 1)提取溶剂的种类研宄 分别用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取，并测试提取物对MCF7细胞的抗肿瘤活性，结果如下： 表3
研宄结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0017] 2)提取溶剂的用量研宄 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取，并测试提取物对MCF7 细胞的的抗肿瘤活性，结果如下： 表4
提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。
[0018] 3)干燥方法的研宄 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抗 肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、 鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对MCF7细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最 优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0019] 表 5
优选地，手掌参抗肿瘤提取物的制备方法为： 维吾尔药手掌参经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先 用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用二 氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲 烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥， 得到的高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。以上条件最优为先用二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比)洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二 氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积。其中， 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、水、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙 醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50倍 (重量/体积比)。
[0020] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0021] 5.手掌参抗肿瘤有效提取物(洗脱液为100 :1时干燥后所得的提取物）的抗肿瘤 活性研宄 利用各种肿瘤细胞，如乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等 恶性肿瘤细胞株，分别测试手掌参抗肿瘤提取物的抗肿瘤活性，IC5tl结果如下： 表6
因此，我们发现，手掌参抗肿瘤提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种肿瘤如脑胶质 瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤细胞株的预防及治疗。
[0022] 6、手掌参抗肿瘤有效提取物的组合物及其制备方法研宄 1)固体分散体 处方 手掌参提取物 20g 聚乙烯吡咯烷酮 80g 固体分散100g制备方法： 称取手掌参提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比分别 放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至手掌参提取物和载体完全溶解，转入旋蒸仪 中除去溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得手掌参提取物PVP包合物。
[0023] 2)环糊精包合物 处方： 手掌参提取物 20g 0 -环糊精 80g 包合物100g制备方法： 将0-环糊精与1-5倍水研匀，加手掌参提取物（水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0024] 3)分散片处方： 手掌参提取物 1〇〇 十>烷基硫酸纳 1 预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交联聚维酮 10 微晶纤维素 10 微分硅胶 0. 3 滑石粉 1 100片 制备方法： 1. 手掌参提取物淀粉分散体的制备，精密称取手掌参提取物，加入适量的十二烷基硫 酸钠，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温度下蒸干，粉 碎，过100目筛； 2. 称取处方量，手掌参提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉，用70%乙醇做湿 润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘箱烘干45min， 16目筛整粒，加入 滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0025] 7、手掌参抗肿瘤有效提取物的检测方法研宄 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示手掌参抗肿瘤有效提取物的特 征。见图1 具体条件为：色谱条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1，显 色方法：香草醛浓硫酸显色。
[0026]
【附图说明】： 图1手掌参C6抑制活性提取物的TLC色谱图； 图2手掌参得到的化学组分的TLC色谱图； 图3手掌参得到的化学组分的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0027] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0028] 实施例1 : 取维吾尔药手掌参20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比)洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗 脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，得到的高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。经 测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=77. 0yg/mL。
[0029] 实施例2 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC5(I=80. 0yg/mL。
[0030] 实施例3 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL石油醚超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC50=72.0yg/mL〇
[0031] 实施例4: 取维吾尔药手掌参20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC5(I=73. 0yg/mL。
[0032] 实施例5 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC5(I=69. 0yg/mL。
[0033] 实施例6 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲 醇，100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体 积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性 为IC5(I=58. 0yg/mL。
[0034] 实施例7 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1 :1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混 合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂 (二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲 烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经 测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=79. 0yg/mL。
[0035] 实施例8 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1 :1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混 合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂 (二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲 烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经 测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=54. 0yg/mL。
[0036] 实施例9 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90 :10)超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲 醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，1〇〇:〇,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯 甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。 经测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=66. 0yg/mL。
[0037] 实施例10:固体分散体 称取手掌参提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比分别 放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，磁力搅拌器搅拌至手掌参提取物和载体完全溶解， 充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得手掌参提取物PVP 包合物。
[0038] 实施例11 :环糊精包合物 将0-环糊精与1-5倍水研匀，加手掌参提取物（水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0039] 实施例12 :分散片 1.称取干燥的手掌参提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70%的乙醇充分溶解， 加入水溶性淀粉与手掌参提取物（1:1 )，搅拌混合均匀，在70°C下干燥，粉碎，过100目筛， 得手掌参提取物分散体。
[0040] 精密称取处方量，手掌参提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉，用70%乙醇做 湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药手掌参提取物，其特征为维吾尔药手掌参经溶剂超声提取，提取液浓 缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗 脱，继用体积比为100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，用100:1二氯甲烷-甲醇混合溶 剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2. 如权利要求1所述维吾尔药手掌参提取物，其特征为提取物的提取用溶剂可以为甲 醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇或 95%乙醇。3. 如权利要求1所述维吾尔药手掌参提取物，其特征为维吾尔药手掌参经溶剂超声提 取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲 烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体 积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经 回收溶剂，干燥，即为该提取物。4. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，用于洗脱 的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱体积为2-50倍柱体积。5. 权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：维吾尔药手掌参经溶剂超声提取，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲 醇，100:0,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:1，体积比)洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烧-甲醇混合溶剂(二氯甲烧-甲醇，100:1，体 积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物；以上条件最优为先用二氯甲烷-甲 醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药手掌参 提取物和药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的手掌参提取物或权 利要求6所述的药物组合物。8. 如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合 物、分散片。9. 权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的 药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃 癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌或肝癌。11. 如权利要求1-5任何一项所述的手掌参提取物，其特征在于，用TLC法检测，其色谱 条件为：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1 ;显色方法：香草醛浓硫 酸显色。
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。所述的提取物通过如下方法获得：先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该抗肿瘤活性提取物。
【IPC分类】A61K36/898, A61P35/00
【公开号】CN104906371
【申请号】CN201510058748
【发明人】热娜·卡斯木, 王金辉, 黄健, 李国玉, 赵玉倩, 王小青, 马庆东, 张珂
【申请人】新疆医科大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年2月4日
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药手掌参抗肿瘤提取物及其组合物 的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗脑胶质瘤、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺 癌、乳腺癌、宫颈癌等恶性肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 手掌参拉丁名Gymnadeniaconopsea(L. )R.Br?，又称手参、掌参、手儿参、佛手 参，为兰科植物手参或粗脉手参的块根。青藏高原稀有药材，生长在海拔3000-4000米高山 灌木丛中，因为外形像手掌而得名。生于海拔265-4700米的山坡林下、草地或砾石滩草丛 中。干燥块茎形如手掌，指状分裂，通常4~6裂不等，稍扁，长2. 5~3. 5厘米，径2~2. 5 厘米，表面皱缩，淡黄色，有时茎痕周围有1褐色环。
[0003] 手掌参的全草含挥发油6%，内有甲基香醛，向日葵素。块根中含粘液质、淀粉、蛋白 质、糖分、草酸钙、无机盐。性平味甘，止咳平喘；益肾健脾；理气和血；止痛。治肺虚咳喘， 虚劳消瘦，神经衰弱，久泻，失血，带下，乳少，慢性肝炎。手参地下茎的水提取物对兔、犬有 利尿作用，但剂量过大反能降低尿量。对蛙下肢血管呈收缩作用，对小鼠的全身状态则呈 抑制作用。
[0004] 本发明在深入地研宄手掌参的抗癌活性时意外地发现，手掌参除了具有诱导白血 病细胞凋亡的功效外，亦具有很好的脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、 胰腺癌等恶性肿瘤的预防及治疗作用，该活性提取物及其组合物有望应用到多种癌症的预 防和治疗上。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题是提供一种手掌参提取物。
[0006] 本发明还提供了以手掌参提取物为主要活性成分的组合物。
[0007] 本发明同时提供了手掌参提取物及其组合物的制备和应用。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药手掌参经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2)柱分离，上样后的硅胶 柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇，比例见表1)，各二氯甲烷-甲 醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性， 意外地发现先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比)洗脱，继用二氯 甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱，洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混 合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提 取物，而其他比例的洗脱组分，不具有抗肿瘤活性。特别地，优选为先用二氯甲烷-甲醇混 合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂 (二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明抗肿瘤活性 的提取物。抗肿瘤活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离 开。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图1，TLC分析 条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1)。显色方法：香草醛浓硫 酸显色。
[0009] 具体，发现过程如下： 1、手掌参经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药手掌参20g，经100ml水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0215B0. 2076g，二氯甲烷-甲醇系统洗脱。
[0010] 2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药手掌参20g，经100ml水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0215B0. 2076g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶0. 6g，空白 硅胶5g，玻璃柱内径I. 5cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱(条件见表1)，柱体积11ml，每个 梯度洗脱100ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱提取物，TLC分析结果见图2,，图3。图2的TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统： 二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1)。显色方法：香草醛浓硫酸显色。图3的TLC分析条件： GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1)。显色方法：香草醛浓硫酸显色。
[0011]
3、抗肿瘤活性筛选方法和结果 1)实验条件a)细胞株信息 大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。
[0012] b)药品及试剂 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培养 液稀释至所需浓度（DMSO彡1 %。）。
[0013] RPMIMedium1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研宄所。Trypsin1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0014] c)仪器 CO2培养箱（SANYO,日本） 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司） 倒置生物显微镜(重庆光电仪器有限公司） 低/高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂） 电子天平(奥豪斯仪器有限公司） 酶标仪(伯乐生命医学产品有限公司） 立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂） 鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂） PH计（SART0RIUS，德国） 2) 实验方法和过程 大鼠脑胶质瘤细胞C6以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。各 组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12h，观察细胞汇合率 约为40%，加药，浓度均为100yg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组（培 养基+细胞；含〇. 1%DMS0培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药物24小时 后，加入20y1四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴盐 (3_ (4, 5-dimethyl_2thiazolyl) _2，5-diphenyl-tetrazoliumbromide，MTT)，继续培养 4 小时。完全弃去上清液，加入IOOylDMS0,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD 值。
[0015] 抑制率（IR) =(A对照一A试验）/(A对照一A空白）X100% 3) 实验结果 表2
结果发现： 本发明最优方案为：维吾尔药手掌参经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上 样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱，继用 二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶 剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到的高活性提 取物，即为该抗肿瘤的提取物。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图 1〇
[0016] 4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研宄 1)提取溶剂的种类研宄 分别用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取，并测试提取物对MCF7细胞的抗肿瘤活性，结果如下： 表3
研宄结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0017] 2)提取溶剂的用量研宄 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取，并测试提取物对MCF7 细胞的的抗肿瘤活性，结果如下： 表4
提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。
[0018] 3)干燥方法的研宄 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抗 肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、 鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对MCF7细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最 优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0019] 表 5
优选地，手掌参抗肿瘤提取物的制备方法为： 维吾尔药手掌参经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先 用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用二 氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲 烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥， 得到的高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。以上条件最优为先用二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比)洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二 氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积。其中， 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、水、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙 醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50倍 (重量/体积比)。
[0020] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0021] 5.手掌参抗肿瘤有效提取物(洗脱液为100 :1时干燥后所得的提取物）的抗肿瘤 活性研宄 利用各种肿瘤细胞，如乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等 恶性肿瘤细胞株，分别测试手掌参抗肿瘤提取物的抗肿瘤活性，IC5tl结果如下： 表6
因此，我们发现，手掌参抗肿瘤提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种肿瘤如脑胶质 瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤细胞株的预防及治疗。
[0022] 6、手掌参抗肿瘤有效提取物的组合物及其制备方法研宄 1)固体分散体 处方 手掌参提取物 20g 聚乙烯吡咯烷酮 80g 固体分散100g制备方法： 称取手掌参提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比分别 放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至手掌参提取物和载体完全溶解，转入旋蒸仪 中除去溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得手掌参提取物PVP包合物。
[0023] 2)环糊精包合物 处方： 手掌参提取物 20g 0 -环糊精 80g 包合物100g制备方法： 将0-环糊精与1-5倍水研匀，加手掌参提取物（水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0024] 3)分散片处方： 手掌参提取物 1〇〇 十>烷基硫酸纳 1 预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交联聚维酮 10 微晶纤维素 10 微分硅胶 0. 3 滑石粉 1 100片 制备方法： 1. 手掌参提取物淀粉分散体的制备，精密称取手掌参提取物，加入适量的十二烷基硫 酸钠，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温度下蒸干，粉 碎，过100目筛； 2. 称取处方量，手掌参提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉，用70%乙醇做湿 润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘箱烘干45min， 16目筛整粒，加入 滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0025] 7、手掌参抗肿瘤有效提取物的检测方法研宄 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示手掌参抗肿瘤有效提取物的特 征。见图1 具体条件为：色谱条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1，显 色方法：香草醛浓硫酸显色。
[0026]
【附图说明】： 图1手掌参C6抑制活性提取物的TLC色谱图； 图2手掌参得到的化学组分的TLC色谱图； 图3手掌参得到的化学组分的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0027] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0028] 实施例1 : 取维吾尔药手掌参20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比)洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗 脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，得到的高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。经 测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=77. 0yg/mL。
[0029] 实施例2 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC5(I=80. 0yg/mL。
[0030] 实施例3 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL石油醚超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC50=72.0yg/mL〇
[0031] 实施例4: 取维吾尔药手掌参20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC5(I=73. 0yg/mL。
[0032] 实施例5 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1， 体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性为 IC5(I=69. 0yg/mL。
[0033] 实施例6 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲 醇，100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体 积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其抗肿瘤活性 为IC5(I=58. 0yg/mL。
[0034] 实施例7 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1 :1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混 合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂 (二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲 烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经 测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=79. 0yg/mL。
[0035] 实施例8 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1 :1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲醇混 合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂 (二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲 烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经 测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=54. 0yg/mL。
[0036] 实施例9 : 取维吾尔药手掌参20g，经100mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90 :10)超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱)，先用二氯甲烷-甲 醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，1〇〇:〇,体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱15倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯 甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。 经测试，其抗肿瘤活性为IC5(I=66. 0yg/mL。
[0037] 实施例10:固体分散体 称取手掌参提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比分别 放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，磁力搅拌器搅拌至手掌参提取物和载体完全溶解， 充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得手掌参提取物PVP 包合物。
[0038] 实施例11 :环糊精包合物 将0-环糊精与1-5倍水研匀，加手掌参提取物（水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0039] 实施例12 :分散片 1.称取干燥的手掌参提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70%的乙醇充分溶解， 加入水溶性淀粉与手掌参提取物（1:1 )，搅拌混合均匀，在70°C下干燥，粉碎，过100目筛， 得手掌参提取物分散体。
[0040] 精密称取处方量，手掌参提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉，用70%乙醇做 湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药手掌参提取物，其特征为维吾尔药手掌参经溶剂超声提取，提取液浓 缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗 脱，继用体积比为100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，用100:1二氯甲烷-甲醇混合溶 剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2. 如权利要求1所述维吾尔药手掌参提取物，其特征为提取物的提取用溶剂可以为甲 醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇或 95%乙醇。3. 如权利要求1所述维吾尔药手掌参提取物，其特征为维吾尔药手掌参经溶剂超声提 取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲 烷-甲醇，100:0,体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体 积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经 回收溶剂，干燥，即为该提取物。4. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，用于洗脱 的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱体积为2-50倍柱体积。5. 权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：维吾尔药手掌参经溶剂超声提取，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲 醇，100:0,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:1，体积比)洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烧-甲醇混合溶剂(二氯甲烧-甲醇，100:1，体 积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物；以上条件最优为先用二氯甲烷-甲 醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药手掌参 提取物和药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的手掌参提取物或权 利要求6所述的药物组合物。8. 如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合 物、分散片。9. 权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的 药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃 癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌或肝癌。11. 如权利要求1-5任何一项所述的手掌参提取物，其特征在于，用TLC法检测，其色谱 条件为：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1 ;显色方法：香草醛浓硫 酸显色。
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。所述的提取物通过如下方法获得：先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该抗肿瘤活性提取物。
【IPC分类】A61K36/898, A61P35/00
【公开号】CN104906371
【申请号】CN201510058748
【发明人】热娜·卡斯木, 王金辉, 黄健, 李国玉, 赵玉倩, 王小青, 马庆东, 张珂
【申请人】新疆医科大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年2月4日
最新回复(0)