含巴西蜡的沃尼妙林注射液的制作方法
含巴西蜡的沃尼妙林注射液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽药制剂制备技术，设及用己西蜡（又称己西栋桐蜡）或己西蜡和单 油酸甘油醋为缓释介质，制备含盐酸沃巧妙林或含沃巧妙林酸式盐和沃巧妙林碱的兽用长 效注射液。
【背景技术】
[0002] 盐酸沃巧妙林是沃巧妙林碱的盐酸盐，是动物专用的半合成抗菌药物，具有抗菌 谱广、活性高、毒副作用低、不易产生耐药性、残留低等特点，主要用于防治猪、牛、羊及家禽 的支原体病和革兰氏阳性菌的感染。现阶段已市售的含盐酸沃巧妙林的制剂仅有经过包被 (埋）的口服固体制剂，还没有盐酸沃巧妙林注射剂和沃巧妙林碱及其制剂上市。
[0003] 有关含沃巧妙林碱或含盐酸沃巧妙林的注射剂，专利公开的有溶液型油质注射液 (CN102119919B、CN1409631A)，有乳剂和纳米乳剂（CN101756899A、CN101947203A)，有 脂质体新剂型（CN101744799B)，有W泊洛沙姆407为载体制备的油悬剂（201410005517. 幻，还有W聚己二醇为载体制备的油悬剂，W及W己酸异了酸庶糖醋为介质制备的油悬剂。
[0004] 本发明制剂的制备技术不同与已公开的技术。本发明是W己西蜡或己西蜡和单油 酸甘油醋作为缓解材料，来制备含沃巧妙林的长效注射剂。
【发明内容】
[0005] 本发明制剂外观为乳胶状，在每升制剂中包含W下组分：
[0006] a.盐酸沃巧妙林150-180g，b.己西蜡2. 5-llg，C.体积比为4. 5比3比3. 3比1 的S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己醇加至1升。在所述的每升注射液中还包 含单油酸甘油醋100-150ml。
[0007] 在制备W上所述的每升制剂时，还可加入2水巧樣酸钢 咕&化3〇7 . 2&0) 13. 0-31. 2g，或加入 10 7长碳酸钢（化2〇)3 ? 10&0) 19. 0-31. 9g。加入的巧 樣酸钢或碳酸钢会与盐酸沃巧妙林反应，使沃巧妙林的盐酸盐转化为沃巧妙林碱或转化为 巧樣酸盐，由此所制备的制剂，其活性成份为盐酸沃巧妙林和沃巧妙林碱或沃巧妙林巧樣 酸盐与沃巧妙林碱的组合物，所制备的每升制剂包含沃巧妙林碱和沃巧妙林酸式盐（盐酸 盐或巧樣酸盐）150-180g，己西蜡2. 5-llg，单油酸甘油醋100-150ml，体积比为4. 5比3比 3. 3比1的S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己醇加至1升。
[000引在W上所述的每升制剂中还包含0. 1-0. 3g抗氧剂，选择的抗氧剂包括叔了 基-4-哲基茵香離炬HA)、二了基哲基甲苯炬HT)、没食子酸丙醋（PG)或叔了基对苯二酪 (TBH曲中的一种或一种W上任何比例的混合物。
[0009] 本发明制剂的制备可采用多种不同的操作过程来完成，选择的制备过程如下：
[0010] 制备方法a;
[0011] 取己西蜡粉与S己酸甘油醋和苯甲醇节醋混合，在90-95°C溶解后，在揽拌下降至 室温；取盐酸沃巧妙林用1,2-丙二醇和己醇溶解；将含己西蜡的液体与含盐酸沃巧妙林的 液体混合，加或不加入单油酸甘油醋，加或不加入抗氧剂，过高剪切均质机，即得本制剂。
[0012] 制备方法b;
[0013] 取己西蜡粉与S己酸甘油醋和苯甲醇节醋混合，于90-95°C溶解后，在揽拌条件下 降至室温，得含己西蜡的液体；取盐酸沃巧妙林，用1，2-丙二醇和己醇溶解，之后加入2水 巧樣酸钢细粉或10水碳酸钢细粉，研磨60-90分钟后，加入含己西蜡的液体和单油酸甘油 醋，加入或不加入抗氧剂，用高速剪切式均质机处理10-20分钟，即得含沃巧妙林碱和沃巧 妙林酸式盐（盐酸盐或巧樣酸盐）的注射剂。
[0014] 制备方法b的制备特点；通过改变碳酸钢或巧樣酸钢的加入量可W调整制剂中沃 巧妙林碱与盐酸沃巧妙林，或沃巧妙林碱与沃巧妙林巧樣酸盐的含量比例。在制备过程中， 10水碳酸钢的加入量应W使1/2-2/3量的盐酸沃巧妙林转化为沃巧妙林碱为适宜；2水巧 樣酸钢的加入量应W使1/3量的盐酸沃巧妙林转化为巧樣酸盐，2/3量的盐酸沃巧妙林转 化为沃巧妙林碱为适宜。
[0015] 制剂中沃巧妙林碱与沃巧妙林酸式盐（盐酸盐或巧樣酸盐）的含量比例和临床使 用时的给药剂量对药效的持续时间长短和速释效果有明显的影响。提高制剂中沃巧妙林碱 与沃巧妙林酸式盐的含量比值和提高给药剂量，可延长有效血药浓度的维持时间，该与沃 巧妙林碱水溶性差油溶性好，因此，从注射部位扩展速度缓慢有密切关系。对于W治疗作用 为主的抗菌药物而言，为了有利于重症感染动物的治疗，在考虑制剂的长效作用同时，更不 可忽视制剂的速释作用，因此，在确定沃巧妙林碱与沃巧妙林酸式盐在制剂中的含量比例 时，应W保证制剂速效作用为前提。本发明优选的制剂其活性成份包含沃巧妙林碱和沃巧 妙林酸式盐两组分，从而使制剂既有速释效果还有长效作用。
[0016] 制剂中己醇或1,2-丙二醇的含量越多，药物从注射部位扩展速度越快；在制剂中 加入己西蜡，即有稳定性作用，还具有减缓沃巧妙林（包括其盐的形式或碱的形式）扩展速 度的作用；当己西蜡与单油酸甘油醋组合使用时，制剂的缓释作用明显加强（见实施例5)。 因此，通过调整制剂中沃巧妙林碱与沃巧妙林酸式盐的含量比例，或调整制剂中己醇和1， 2-丙二醇的含量，或调整己西蜡的含量，或调整己西蜡和单油酸甘油醋的含量，都可有效的 改变制剂的速释效果和长效作用。W上该些都是本发明制剂在制备技术方面的特点。
【具体实施方式】
[0017] 实施例1、制备含己西蜡的盐酸沃巧妙林注射液
[001引取盐酸沃巧妙林15g，用1,2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解，得 粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取己西蜡粉0. 66g与S己酸甘油醋27ml和苯甲酸节醋18ml混 合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将含己西蜡的液体与 盐酸沃巧妙林溶液混合，并加入0. 02gTB册，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含己西蜡 的盐酸沃巧妙林注射液。
[0019] 实施例2、制备含己西蜡和单油酸甘油醋的盐酸沃巧妙林注射液
[0020] 取15g盐酸沃巧妙林，用1,2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解， 得粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取0. 66g己西蜡粉与27mlS己酸甘油醋和18ml苯甲酸节醋 混合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将含己西蜡的液体 与盐酸沃巧妙林溶液混合，并加入0. 02gTB册和10ml单油酸甘油醋，用高剪切均质机处理 10-20分钟，得含己西蜡和单油酸甘油醋的盐酸沃巧妙林注射液。
[0021] 实施例3、制备含沃巧妙林巧樣酸盐和沃巧妙林碱的注射液 [002引取15g盐酸沃巧妙林，用1，2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解，得 粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取0. 66g己西蜡粉与27mlS己酸甘油醋和18ml苯甲酸节醋混 合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将粘稠的盐酸沃巧妙 林溶液与2水巧樣酸钢2. 56g混合，研磨70-90分钟后，加入含己西蜡的液体和10ml单油 酸甘油醋、0. 02gTB册，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含沃巧妙林巧樣酸盐和沃巧妙 林碱的注射液。分析结果显示，加入的巧樣酸钢与盐酸沃巧妙林反应，形成氯化钢、沃巧妙 林的巧樣酸盐和沃巧妙林碱。由于沃巧妙林碱与巧樣酸是W等摩尔量成盐，因此，反应生成 的沃巧妙林碱约1/3量转化为巧樣酸盐，2/3量仍W游离碱形式存在。
[0023] 实施例4、制备含盐酸沃巧妙林和沃巧妙林碱的注射液
[0024] 取15g盐酸沃巧妙林，用1,2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解，得 粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取0. 66g己西蜡粉与27mlS己酸甘油醋和18ml苯甲酸节醋混 合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将粘稠的盐酸沃巧妙 林溶液与10水碳酸钢2. 67g混合，研磨70-90分钟后，加入含己西蜡的液体和10ml单油酸 甘油醋、0. 02gTB册，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含盐酸沃巧妙林和沃巧妙林碱的 注射液（制剂中盐酸沃巧妙林与沃巧妙林碱的重量比约为1 : 2)。
[0025] 实施例5、对比制剂与实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂和实施例4制剂 在绵羊体内的血药浓度测定
[0026] 1、对比制剂
[0027] 对比制剂a;
[002引取纯度99. 0%盐酸沃巧妙林，用S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己醇 (4.5 : 3 : 3.3 : 1，体积比），在揽拌条件下溶解，制备成含17%盐酸沃巧妙林（重量/ 体积比）的注射液。用时现配制。
[0029] 对比制剂b;
[0030] 取纯度99. 0%的盐酸沃巧妙林，用S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己 醇（4.5 : 3 : 3.3 : 1，体积比），在揽拌条件下溶解，之后加入单油酸甘油醋，混匀，制备 成含10%单油酸甘油醋和17%盐酸沃巧妙林的注射液。用时现配制。
[0031] 2、实验动物、给药和采血
[0032] W绵羊为实验动物，选8只体重在24-30公斤的健康圈养绵羊，试验分6次，每次 试验8只绵羊均注射同一种试验药剂，不同药剂的给药时间间隔为10天（每次试验的间隔 时间），给药剂量均为17mg/kgb.W.，采用臀部肌内注射给药。每次给药前均采空白血样，本 试验目的是比较6种不同制剂的速释与缓释效果，不做系统的药代动力学参数分析，因此， 仅在给药后0. 5、1. 5、3、12、24、48、72、96小时采血，每次从每只羊的颈静脉准确取血7ml， 将同一时间采集的8只羊的血样置于同一支含有肝素钢的100ml离屯、管中，混匀，350化/ min离屯、10分钟，分离血浆，-18°C冰箱保存，待检测。
[0033] 3、血浆样品处理及检测
[0034] (1)样品处理：
[0035]准确吸取血浆样品30ml，加45ml甲醇，振荡5分钟，12000r/min离屯、15min，弃沉 淀，将上清液转移到250ml茄形蒸馈瓶中，55°C、-0.Im化条件下旋蒸，去净甲醇，加入正己 烧-己酸己醋（1 :l)30ml和0. 5%碳酸钢溶液10ml，充分振荡15min，4500-5000r/min离 屯、5min，转移有机相（上层）至鸡屯、瓶中，55°C、-0.ImPa条件下旋蒸，除净有机溶剂。往 鸡屯、瓶中加0. 1 %酒石酸溶液3ml，充分溶解后，过已平衡好的SPE小柱值ikma公司产品， bondElute300mg/6ml)，用甲醇洗脱，洗脱液在45°C下用氮气吹干，残留物用0. 5ml流动 相复溶，过0. 45ym滤膜，进行HPLC分析。
[0036] (2)检测方法与检测结果
[0037] 用岛津高效液相色谱仪检测血浆中沃巧妙林浓度（ng/ml)。色谱柱为WelchroiiT Ci8, 5ym4. 6x250mm;流动相；A相为己膳，B相为抑2. 5的磯酸盐缓冲液，A相/B相= 1 ; 1 (v/v)，柱温25°C;流速；Iml/min;检测波长；210nm;进样体积；100y1。血浆中沃巧 妙林浓度（ng/ml)的检测结果见表1。
[003引表1、绵羊注射实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂、实施例4制剂和对比 制剂的血药浓度（ng/ml)测定结果
[0039] 实施例6、实施例3制剂在绵羊体内的血药浓度测定
[0040] 1、实验动物、给药和采血
[0041] 选15只体重在24-29公斤的圈养健康绵羊，分成3组，每组5只。经臀部肌内注 射实施例4制剂，给药剂量分别为lOmg/kgb.W. ;20mg/kgb.W. ;30mg/kgb.W.。在给药后 0. 5、1. 5、3、12、24、48、72、96小时采血，每次从羊颈静脉准确取血10ml，将同一组同一时间 采集的血样置于同一支含有肝素钢的100ml离屯、管中，混匀，350化/min离屯、10分钟，分离 血浆，-18°C存放。
[0042] 2、血浆样品处理及检测
[0043] 血浆样品处理和检测方法同实施例5,检测结果见表2。
[0044] 表2、绵羊注射实施例3制剂的血药浓度（ng/ml)_^
[0045] 从表1数据中可见；（1)己西蜡具有减缓盐酸沃巧妙林释放速度的作用(见实施 例1制剂和对比制剂的测定数据）。专利CN86105087C曾公开了用己西蜡和植物油为缓释 材料制备含牛生长激素的注射给药制剂，在该制剂中己西蜡需达到5%W上浓度时，才具有 较好的缓释作用，该时的制剂已呈半固体状态。（2)单油酸甘油醋与己西蜡组合使用，缓释 作用更好（见实施例2制剂的测定数据）。专利CN201510118056. 1中描述了W己西蜡和 单油酸甘油醋为缓释载体制备含抗寄生虫药物的长效注射剂。近些年的研究显示，单油酸 甘油醋具有在体内吸收水份（体液）达到35%的平衡含量后发生相变的特征（由层流状 转化为高粘度的立方相），因此，人们利用它的该一特性，W它作为缓释材料来开发原位胶 凝长效注射剂，有关该方面的研究，公开的专利很多，并且W单油酸甘油醋为载体的原位胶 凝注射剂已有商品上市。众多的研究结果表明，制剂中单油酸甘油醋的浓度要达到30%W 上时才对药物的释放具有较好的减缓作用。本发明试验结果显示，当单油酸甘油醋与己西 蜡组合使用时，其在制剂中的浓度大于6%时，就有明显的限制药物扩展速度的作用。（3) 按一定比例将沃巧妙林的酸式盐和沃巧妙林碱组合使用，与仅含有盐酸沃巧妙林的制剂比 较，其后期血药浓度明显偏高（见实施例3和实施例4制剂的测定数据），并且该制剂在给 药后很快达到较高水平的血药浓度。本制剂的该一特点与专利CN1409631A公开的制剂不 同，试验显示，当制剂中仅含有沃巧妙林碱时，给药后初期的血药浓度偏低（W苯甲酸节醋 和十四烧酸异丙醋为介质时，0. 5-3小时的血药浓度为378-8^ng/ml)。给药后初期有一个 适当高的血药浓度，有利于重症感染动物的治疗。从表2所示的测定数据可见；（1)给药剂 量越大，有效血药浓度维持时间越长，本剂的该一特点提示我们，可在注射时通过调整给药 剂量来改变药效的维持时间。（2)在给药12小时后释药速度明显平稳，我们认为在12小时 W后的血药浓度维持可能主要是依赖于沃巧妙林碱的缓慢释放作用。
[0046] 实施例7、实施例1制剂至实施例4制剂的稳定性试验
[0047] 本试验重点考察了实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂、实施例4制剂在 25-28°C存放6个月，其制剂沃巧妙林含量变化。采用HPLC法测定制剂中沃巧妙林的含量。 测定结果示于表3。
[0048] 表3、制剂稳定性试验_
[0049] 表中数值为制剂中沃巧妙林减少量（按碱的形式计算）占制剂初始量（0天含量） 的百分比。表中数值显示，实施例1制剂至实施例4制剂在25-28C存放6个月，制剂中沃 巧妙林（碱）的减少量仅占制剂初始量（0天含量）的0. 56-0. 92%，说明本发明制剂稳定。
【主权项】
1. 一种含沃尼妙林的注射液，其特征在于在每升注射液中包含以下各组分： a. 盐酸沃尼妙林150_180g b. 巴西蜡 2-llg c. 体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加 至1升。2. 按权利要求1所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含60-150ml单油 酸甘油酯。3. 按权利要求2所述的注射液，其特征在于在制备所述的每1升注射液过程中，加入 2水柠檬酸钠13. 0-31. 2g，或加入10水碳酸钠19. 0-31. 9g，加入的柠檬酸钠或碳酸钠会 与盐酸沃尼妙林发生反应，由此所制备的每升注射液包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐 150-180g，巴西蜡2. 5-llg，单油酸甘油酯60-150ml;体积比为4. 5比3比3. 3比1的三乙 酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升；所述的沃尼妙林酸式盐为盐酸沃尼 妙林或沃尼妙林柠檬酸盐。4. 按权利要求1-3任意一项所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含 〇. 1-0. 3g抗氧剂，选择的抗氧剂包括叔丁基-4-羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙 酯或叔丁基对苯二酚中的一种或一种以上任何比例的混合物。5. 按权利要求4所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含以下各组分： a. 盐酸沃尼妙林 180g b. 巴西蜡 6. 6-7. 26g c. 叔丁基对苯二酷0. 2g d. 体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加 至1升。6. 按权利要求4所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含以下各组分： a. 盐酸沃尼妙林 180g b. 巴西蜡 6. 6-7. 26g c. 单油酸甘油醋 100mL d. 叔丁基对苯二酷0. 2g e. 体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加 至1升。7. 按权利要求6所述的注射液，其特征在于在制备所述的每升注射液过程中加入 2水柠檬酸钠21. 9-31. 2g，由此所制备的每升注射液中包含沃尼妙林柠檬酸盐和沃尼 妙林碱180g、巴西蜡6. 6-7. 26g、单油酸甘油酯100ml、叔丁基对苯二酚0. 2g、体积比为 4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。8. 按权利要求6所述的注射液，其特征在于在制备所述的每升注射液过程中加入10水 碳酸钠22. 8-31. 9g，由此所制备的每升注射液中包含盐酸沃尼妙林和沃尼妙林碱180g、巴 西蜡6.6-7. 26g、单油酸甘油酯100ml、叔丁基对苯二酚0.2g、体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1 的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。
【专利摘要】本发明是一种外观为乳胶状的含巴西蜡的沃尼妙林注射液，在每升注射液中包含盐酸沃尼妙林150-180g、巴西蜡2.5-11g、体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。在每升注射液中还包含单油酸甘油酯100-150ml。在制备以上所述的每升注射液时，还可加入2水柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)13.0-31.2g，或加入10水碳酸钠(Na2CO3·10H2O)19.0-31.9g。加入的柠檬酸钠或碳酸钠会与盐酸沃尼妙林发生反应，由此所制备的每升注射液中包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐(盐酸盐或柠檬酸盐)150-180g，巴西蜡2.5-11g，单油酸甘油酯100-150ml，体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。
【IPC分类】A61P31/04, A61K31/22, A61K47/10, A61K47/44, A61K47/14, A61K9/08
【公开号】CN104906590
【申请号】CN201510232770
【发明人】王玉万, 戴晓曦, 李蕾, 任雅楠, 李莹, 翁志飞, 沈力
【申请人】王玉万
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月11日
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽药制剂制备技术，设及用己西蜡（又称己西栋桐蜡）或己西蜡和单 油酸甘油醋为缓释介质，制备含盐酸沃巧妙林或含沃巧妙林酸式盐和沃巧妙林碱的兽用长 效注射液。
【背景技术】
[0002] 盐酸沃巧妙林是沃巧妙林碱的盐酸盐，是动物专用的半合成抗菌药物，具有抗菌 谱广、活性高、毒副作用低、不易产生耐药性、残留低等特点，主要用于防治猪、牛、羊及家禽 的支原体病和革兰氏阳性菌的感染。现阶段已市售的含盐酸沃巧妙林的制剂仅有经过包被 (埋）的口服固体制剂，还没有盐酸沃巧妙林注射剂和沃巧妙林碱及其制剂上市。
[0003] 有关含沃巧妙林碱或含盐酸沃巧妙林的注射剂，专利公开的有溶液型油质注射液 (CN102119919B、CN1409631A)，有乳剂和纳米乳剂（CN101756899A、CN101947203A)，有 脂质体新剂型（CN101744799B)，有W泊洛沙姆407为载体制备的油悬剂（201410005517. 幻，还有W聚己二醇为载体制备的油悬剂，W及W己酸异了酸庶糖醋为介质制备的油悬剂。
[0004] 本发明制剂的制备技术不同与已公开的技术。本发明是W己西蜡或己西蜡和单油 酸甘油醋作为缓解材料，来制备含沃巧妙林的长效注射剂。
【发明内容】
[0005] 本发明制剂外观为乳胶状，在每升制剂中包含W下组分：
[0006] a.盐酸沃巧妙林150-180g，b.己西蜡2. 5-llg，C.体积比为4. 5比3比3. 3比1 的S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己醇加至1升。在所述的每升注射液中还包 含单油酸甘油醋100-150ml。
[0007] 在制备W上所述的每升制剂时，还可加入2水巧樣酸钢 咕&化3〇7 . 2&0) 13. 0-31. 2g，或加入 10 7长碳酸钢（化2〇)3 ? 10&0) 19. 0-31. 9g。加入的巧 樣酸钢或碳酸钢会与盐酸沃巧妙林反应，使沃巧妙林的盐酸盐转化为沃巧妙林碱或转化为 巧樣酸盐，由此所制备的制剂，其活性成份为盐酸沃巧妙林和沃巧妙林碱或沃巧妙林巧樣 酸盐与沃巧妙林碱的组合物，所制备的每升制剂包含沃巧妙林碱和沃巧妙林酸式盐（盐酸 盐或巧樣酸盐）150-180g，己西蜡2. 5-llg，单油酸甘油醋100-150ml，体积比为4. 5比3比 3. 3比1的S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己醇加至1升。
[000引在W上所述的每升制剂中还包含0. 1-0. 3g抗氧剂，选择的抗氧剂包括叔了 基-4-哲基茵香離炬HA)、二了基哲基甲苯炬HT)、没食子酸丙醋（PG)或叔了基对苯二酪 (TBH曲中的一种或一种W上任何比例的混合物。
[0009] 本发明制剂的制备可采用多种不同的操作过程来完成，选择的制备过程如下：
[0010] 制备方法a;
[0011] 取己西蜡粉与S己酸甘油醋和苯甲醇节醋混合，在90-95°C溶解后，在揽拌下降至 室温；取盐酸沃巧妙林用1,2-丙二醇和己醇溶解；将含己西蜡的液体与含盐酸沃巧妙林的 液体混合，加或不加入单油酸甘油醋，加或不加入抗氧剂，过高剪切均质机，即得本制剂。
[0012] 制备方法b;
[0013] 取己西蜡粉与S己酸甘油醋和苯甲醇节醋混合，于90-95°C溶解后，在揽拌条件下 降至室温，得含己西蜡的液体；取盐酸沃巧妙林，用1，2-丙二醇和己醇溶解，之后加入2水 巧樣酸钢细粉或10水碳酸钢细粉，研磨60-90分钟后，加入含己西蜡的液体和单油酸甘油 醋，加入或不加入抗氧剂，用高速剪切式均质机处理10-20分钟，即得含沃巧妙林碱和沃巧 妙林酸式盐（盐酸盐或巧樣酸盐）的注射剂。
[0014] 制备方法b的制备特点；通过改变碳酸钢或巧樣酸钢的加入量可W调整制剂中沃 巧妙林碱与盐酸沃巧妙林，或沃巧妙林碱与沃巧妙林巧樣酸盐的含量比例。在制备过程中， 10水碳酸钢的加入量应W使1/2-2/3量的盐酸沃巧妙林转化为沃巧妙林碱为适宜；2水巧 樣酸钢的加入量应W使1/3量的盐酸沃巧妙林转化为巧樣酸盐，2/3量的盐酸沃巧妙林转 化为沃巧妙林碱为适宜。
[0015] 制剂中沃巧妙林碱与沃巧妙林酸式盐（盐酸盐或巧樣酸盐）的含量比例和临床使 用时的给药剂量对药效的持续时间长短和速释效果有明显的影响。提高制剂中沃巧妙林碱 与沃巧妙林酸式盐的含量比值和提高给药剂量，可延长有效血药浓度的维持时间，该与沃 巧妙林碱水溶性差油溶性好，因此，从注射部位扩展速度缓慢有密切关系。对于W治疗作用 为主的抗菌药物而言，为了有利于重症感染动物的治疗，在考虑制剂的长效作用同时，更不 可忽视制剂的速释作用，因此，在确定沃巧妙林碱与沃巧妙林酸式盐在制剂中的含量比例 时，应W保证制剂速效作用为前提。本发明优选的制剂其活性成份包含沃巧妙林碱和沃巧 妙林酸式盐两组分，从而使制剂既有速释效果还有长效作用。
[0016] 制剂中己醇或1,2-丙二醇的含量越多，药物从注射部位扩展速度越快；在制剂中 加入己西蜡，即有稳定性作用，还具有减缓沃巧妙林（包括其盐的形式或碱的形式）扩展速 度的作用；当己西蜡与单油酸甘油醋组合使用时，制剂的缓释作用明显加强（见实施例5)。 因此，通过调整制剂中沃巧妙林碱与沃巧妙林酸式盐的含量比例，或调整制剂中己醇和1， 2-丙二醇的含量，或调整己西蜡的含量，或调整己西蜡和单油酸甘油醋的含量，都可有效的 改变制剂的速释效果和长效作用。W上该些都是本发明制剂在制备技术方面的特点。
【具体实施方式】
[0017] 实施例1、制备含己西蜡的盐酸沃巧妙林注射液
[001引取盐酸沃巧妙林15g，用1,2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解，得 粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取己西蜡粉0. 66g与S己酸甘油醋27ml和苯甲酸节醋18ml混 合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将含己西蜡的液体与 盐酸沃巧妙林溶液混合，并加入0. 02gTB册，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含己西蜡 的盐酸沃巧妙林注射液。
[0019] 实施例2、制备含己西蜡和单油酸甘油醋的盐酸沃巧妙林注射液
[0020] 取15g盐酸沃巧妙林，用1,2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解， 得粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取0. 66g己西蜡粉与27mlS己酸甘油醋和18ml苯甲酸节醋 混合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将含己西蜡的液体 与盐酸沃巧妙林溶液混合，并加入0. 02gTB册和10ml单油酸甘油醋，用高剪切均质机处理 10-20分钟，得含己西蜡和单油酸甘油醋的盐酸沃巧妙林注射液。
[0021] 实施例3、制备含沃巧妙林巧樣酸盐和沃巧妙林碱的注射液 [002引取15g盐酸沃巧妙林，用1，2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解，得 粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取0. 66g己西蜡粉与27mlS己酸甘油醋和18ml苯甲酸节醋混 合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将粘稠的盐酸沃巧妙 林溶液与2水巧樣酸钢2. 56g混合，研磨70-90分钟后，加入含己西蜡的液体和10ml单油 酸甘油醋、0. 02gTB册，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含沃巧妙林巧樣酸盐和沃巧妙 林碱的注射液。分析结果显示，加入的巧樣酸钢与盐酸沃巧妙林反应，形成氯化钢、沃巧妙 林的巧樣酸盐和沃巧妙林碱。由于沃巧妙林碱与巧樣酸是W等摩尔量成盐，因此，反应生成 的沃巧妙林碱约1/3量转化为巧樣酸盐，2/3量仍W游离碱形式存在。
[0023] 实施例4、制备含盐酸沃巧妙林和沃巧妙林碱的注射液
[0024] 取15g盐酸沃巧妙林，用1,2-丙二醇20ml和己醇6ml，在室温条件下揽拌溶解，得 粘稠的盐酸沃巧妙林溶液；取0. 66g己西蜡粉与27mlS己酸甘油醋和18ml苯甲酸节醋混 合，在90-95°C溶解，在揽拌下使料温降至室温，得含己西蜡的液体；将粘稠的盐酸沃巧妙 林溶液与10水碳酸钢2. 67g混合，研磨70-90分钟后，加入含己西蜡的液体和10ml单油酸 甘油醋、0. 02gTB册，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含盐酸沃巧妙林和沃巧妙林碱的 注射液（制剂中盐酸沃巧妙林与沃巧妙林碱的重量比约为1 : 2)。
[0025] 实施例5、对比制剂与实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂和实施例4制剂 在绵羊体内的血药浓度测定
[0026] 1、对比制剂
[0027] 对比制剂a;
[002引取纯度99. 0%盐酸沃巧妙林，用S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己醇 (4.5 : 3 : 3.3 : 1，体积比），在揽拌条件下溶解，制备成含17%盐酸沃巧妙林（重量/ 体积比）的注射液。用时现配制。
[0029] 对比制剂b;
[0030] 取纯度99. 0%的盐酸沃巧妙林，用S己酸甘油醋/苯甲酸节醋/I，2-丙二醇/己 醇（4.5 : 3 : 3.3 : 1，体积比），在揽拌条件下溶解，之后加入单油酸甘油醋，混匀，制备 成含10%单油酸甘油醋和17%盐酸沃巧妙林的注射液。用时现配制。
[0031] 2、实验动物、给药和采血
[0032] W绵羊为实验动物，选8只体重在24-30公斤的健康圈养绵羊，试验分6次，每次 试验8只绵羊均注射同一种试验药剂，不同药剂的给药时间间隔为10天（每次试验的间隔 时间），给药剂量均为17mg/kgb.W.，采用臀部肌内注射给药。每次给药前均采空白血样，本 试验目的是比较6种不同制剂的速释与缓释效果，不做系统的药代动力学参数分析，因此， 仅在给药后0. 5、1. 5、3、12、24、48、72、96小时采血，每次从每只羊的颈静脉准确取血7ml， 将同一时间采集的8只羊的血样置于同一支含有肝素钢的100ml离屯、管中，混匀，350化/ min离屯、10分钟，分离血浆，-18°C冰箱保存，待检测。
[0033] 3、血浆样品处理及检测
[0034] (1)样品处理：
[0035]准确吸取血浆样品30ml，加45ml甲醇，振荡5分钟，12000r/min离屯、15min，弃沉 淀，将上清液转移到250ml茄形蒸馈瓶中，55°C、-0.Im化条件下旋蒸，去净甲醇，加入正己 烧-己酸己醋（1 :l)30ml和0. 5%碳酸钢溶液10ml，充分振荡15min，4500-5000r/min离 屯、5min，转移有机相（上层）至鸡屯、瓶中，55°C、-0.ImPa条件下旋蒸，除净有机溶剂。往 鸡屯、瓶中加0. 1 %酒石酸溶液3ml，充分溶解后，过已平衡好的SPE小柱值ikma公司产品， bondElute300mg/6ml)，用甲醇洗脱，洗脱液在45°C下用氮气吹干，残留物用0. 5ml流动 相复溶，过0. 45ym滤膜，进行HPLC分析。
[0036] (2)检测方法与检测结果
[0037] 用岛津高效液相色谱仪检测血浆中沃巧妙林浓度（ng/ml)。色谱柱为WelchroiiT Ci8, 5ym4. 6x250mm;流动相；A相为己膳，B相为抑2. 5的磯酸盐缓冲液，A相/B相= 1 ; 1 (v/v)，柱温25°C;流速；Iml/min;检测波长；210nm;进样体积；100y1。血浆中沃巧 妙林浓度（ng/ml)的检测结果见表1。
[003引表1、绵羊注射实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂、实施例4制剂和对比 制剂的血药浓度（ng/ml)测定结果
[0039] 实施例6、实施例3制剂在绵羊体内的血药浓度测定
[0040] 1、实验动物、给药和采血
[0041] 选15只体重在24-29公斤的圈养健康绵羊，分成3组，每组5只。经臀部肌内注 射实施例4制剂，给药剂量分别为lOmg/kgb.W. ;20mg/kgb.W. ;30mg/kgb.W.。在给药后 0. 5、1. 5、3、12、24、48、72、96小时采血，每次从羊颈静脉准确取血10ml，将同一组同一时间 采集的血样置于同一支含有肝素钢的100ml离屯、管中，混匀，350化/min离屯、10分钟，分离 血浆，-18°C存放。
[0042] 2、血浆样品处理及检测
[0043] 血浆样品处理和检测方法同实施例5,检测结果见表2。
[0044] 表2、绵羊注射实施例3制剂的血药浓度（ng/ml)_^
[0045] 从表1数据中可见；（1)己西蜡具有减缓盐酸沃巧妙林释放速度的作用(见实施 例1制剂和对比制剂的测定数据）。专利CN86105087C曾公开了用己西蜡和植物油为缓释 材料制备含牛生长激素的注射给药制剂，在该制剂中己西蜡需达到5%W上浓度时，才具有 较好的缓释作用，该时的制剂已呈半固体状态。（2)单油酸甘油醋与己西蜡组合使用，缓释 作用更好（见实施例2制剂的测定数据）。专利CN201510118056. 1中描述了W己西蜡和 单油酸甘油醋为缓释载体制备含抗寄生虫药物的长效注射剂。近些年的研究显示，单油酸 甘油醋具有在体内吸收水份（体液）达到35%的平衡含量后发生相变的特征（由层流状 转化为高粘度的立方相），因此，人们利用它的该一特性，W它作为缓释材料来开发原位胶 凝长效注射剂，有关该方面的研究，公开的专利很多，并且W单油酸甘油醋为载体的原位胶 凝注射剂已有商品上市。众多的研究结果表明，制剂中单油酸甘油醋的浓度要达到30%W 上时才对药物的释放具有较好的减缓作用。本发明试验结果显示，当单油酸甘油醋与己西 蜡组合使用时，其在制剂中的浓度大于6%时，就有明显的限制药物扩展速度的作用。（3) 按一定比例将沃巧妙林的酸式盐和沃巧妙林碱组合使用，与仅含有盐酸沃巧妙林的制剂比 较，其后期血药浓度明显偏高（见实施例3和实施例4制剂的测定数据），并且该制剂在给 药后很快达到较高水平的血药浓度。本制剂的该一特点与专利CN1409631A公开的制剂不 同，试验显示，当制剂中仅含有沃巧妙林碱时，给药后初期的血药浓度偏低（W苯甲酸节醋 和十四烧酸异丙醋为介质时，0. 5-3小时的血药浓度为378-8^ng/ml)。给药后初期有一个 适当高的血药浓度，有利于重症感染动物的治疗。从表2所示的测定数据可见；（1)给药剂 量越大，有效血药浓度维持时间越长，本剂的该一特点提示我们，可在注射时通过调整给药 剂量来改变药效的维持时间。（2)在给药12小时后释药速度明显平稳，我们认为在12小时 W后的血药浓度维持可能主要是依赖于沃巧妙林碱的缓慢释放作用。
[0046] 实施例7、实施例1制剂至实施例4制剂的稳定性试验
[0047] 本试验重点考察了实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂、实施例4制剂在 25-28°C存放6个月，其制剂沃巧妙林含量变化。采用HPLC法测定制剂中沃巧妙林的含量。 测定结果示于表3。
[0048] 表3、制剂稳定性试验_
[0049] 表中数值为制剂中沃巧妙林减少量（按碱的形式计算）占制剂初始量（0天含量） 的百分比。表中数值显示，实施例1制剂至实施例4制剂在25-28C存放6个月，制剂中沃 巧妙林（碱）的减少量仅占制剂初始量（0天含量）的0. 56-0. 92%，说明本发明制剂稳定。
【主权项】
1. 一种含沃尼妙林的注射液，其特征在于在每升注射液中包含以下各组分： a. 盐酸沃尼妙林150_180g b. 巴西蜡 2-llg c. 体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加 至1升。2. 按权利要求1所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含60-150ml单油 酸甘油酯。3. 按权利要求2所述的注射液，其特征在于在制备所述的每1升注射液过程中，加入 2水柠檬酸钠13. 0-31. 2g，或加入10水碳酸钠19. 0-31. 9g，加入的柠檬酸钠或碳酸钠会 与盐酸沃尼妙林发生反应，由此所制备的每升注射液包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐 150-180g，巴西蜡2. 5-llg，单油酸甘油酯60-150ml;体积比为4. 5比3比3. 3比1的三乙 酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升；所述的沃尼妙林酸式盐为盐酸沃尼 妙林或沃尼妙林柠檬酸盐。4. 按权利要求1-3任意一项所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含 〇. 1-0. 3g抗氧剂，选择的抗氧剂包括叔丁基-4-羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙 酯或叔丁基对苯二酚中的一种或一种以上任何比例的混合物。5. 按权利要求4所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含以下各组分： a. 盐酸沃尼妙林 180g b. 巴西蜡 6. 6-7. 26g c. 叔丁基对苯二酷0. 2g d. 体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加 至1升。6. 按权利要求4所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含以下各组分： a. 盐酸沃尼妙林 180g b. 巴西蜡 6. 6-7. 26g c. 单油酸甘油醋 100mL d. 叔丁基对苯二酷0. 2g e. 体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加 至1升。7. 按权利要求6所述的注射液，其特征在于在制备所述的每升注射液过程中加入 2水柠檬酸钠21. 9-31. 2g，由此所制备的每升注射液中包含沃尼妙林柠檬酸盐和沃尼 妙林碱180g、巴西蜡6. 6-7. 26g、单油酸甘油酯100ml、叔丁基对苯二酚0. 2g、体积比为 4.5 : 3 : 3.3 : 1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。8. 按权利要求6所述的注射液，其特征在于在制备所述的每升注射液过程中加入10水 碳酸钠22. 8-31. 9g，由此所制备的每升注射液中包含盐酸沃尼妙林和沃尼妙林碱180g、巴 西蜡6.6-7. 26g、单油酸甘油酯100ml、叔丁基对苯二酚0.2g、体积比为4.5 : 3 : 3.3 : 1 的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。
【专利摘要】本发明是一种外观为乳胶状的含巴西蜡的沃尼妙林注射液，在每升注射液中包含盐酸沃尼妙林150-180g、巴西蜡2.5-11g、体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。在每升注射液中还包含单油酸甘油酯100-150ml。在制备以上所述的每升注射液时，还可加入2水柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)13.0-31.2g，或加入10水碳酸钠(Na2CO3·10H2O)19.0-31.9g。加入的柠檬酸钠或碳酸钠会与盐酸沃尼妙林发生反应，由此所制备的每升注射液中包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐(盐酸盐或柠檬酸盐)150-180g，巴西蜡2.5-11g，单油酸甘油酯100-150ml，体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。
【IPC分类】A61P31/04, A61K31/22, A61K47/10, A61K47/44, A61K47/14, A61K9/08
【公开号】CN104906590
【申请号】CN201510232770
【发明人】王玉万, 戴晓曦, 李蕾, 任雅楠, 李莹, 翁志飞, 沈力
【申请人】王玉万
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月11日
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