香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法
专利名称：香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物反应调节剂抗肿瘤药物香菇多糖冻干制剂及其制备方法。
香菇中含蛋白质、杂多糖和香菇多糖等多种成分。香菇多糖(Lentinan)是日本学者千原吴郎从香菇子实体中提取、分离、纯化的一种多糖，其一级结构是β-(1-3)葡萄糖为主链，β-(1-6)葡萄糖为侧链的葡聚糖。香菇多糖是一种生物反应调节剂，对多种肿瘤有强的抑制作用，对化学诱癌剂病毒诱癌剂有预防效果，特别是对于手术后微转移有效，同时给药剂量小，副作用小，使用安全。1985年日本厚生省批准香菇多糖作为抗肿瘤新药上市。我国1988年开始进口日本味之素的香菇多糖，并用于临床。日本进口的香菇多糖冻干剂的配方为香菇多糖、右旋糖酐和甘露醇。右旋糖酐为发酵产物，作为药用临床上已发现其有过敏性休克导致死亡的案例多起。
本发明的目的是提供一种不含会产生不良反应的成份的冻干制剂，该制剂成本低，疗效与日本进口的一样。
本发明的目的是提供一种制备不含会产生不良反应的成份的冻干制剂的制备方法。
本发明的技术方案是一种抗肿瘤的香菇多糖冻干剂，其特征在于是以下述重量配比药物为原料香菇多糖0.50～1.40份，一种冻干赋形剂50～140份，优选的药物配比是香菇多糖0.95～1.20份，一种冻干赋形剂100份；所述冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖，优选的冻干赋形剂是甘露醇。
本发明的技术方案还包括一种抗肿瘤的香菇多糖冻干剂的制备方法。
本发明的香菇多糖的提取、分离、纯化方法系参考Nature 1965，222，687-8。
本发明香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖0.50～1.40份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂50～140份混合，分装入瓶，冻干后，封口。优选的药物配比是取香菇多糖0.95～1.20份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂100份混合，分装入瓶，冻干后，封口。
所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。较好的冻干赋形剂是甘露醇。
所述冻干剂的制备方法，其特征在于碱液为0.5～1.0摩尔浓度的氢氧化钠。中和用的酸液为0.5～1.0摩尔浓度的盐酸，中和至PH为6.0～8.0。
香菇多糖与冻干赋形剂混匀后，过滤，除菌，测含量，灌装于安瓿或西林瓶中，冻干，封口或压盖，检漏或轧盖，贴标签。全部在符合GMP车间进行。
香菇多糖冻干粉针剂手术前使用或化疗前使用，1mg/次，每周两次；或2m/次，每周一次。用时溶于250mg生理盐水或葡萄糖液中，静脉滴注。治疗癌性胸腹水患者，腔内注射4～8mg/次。具体病例应遵医嘱。
本发明的香菇多糖冻干剂疗效确切，制剂稳定，由于不含可能引起过敏的右旋糖酐，所以临床使用更安全。而且，由于注射用香菇多糖冻干粉针剂不含右旋糖酐，所用含量测定方法无需先进行特殊装置的柱层析分离去右旋糖酐，可以直接采用蒽酮硫酸法，使含量检测更准确、简便。
1．本发明产品的分子量、分子式、化学结构式(1)分子量测定经高效凝胶渗透色谱，采用普适校正曲线方法测定分子量大多在50～70万。
(2)分子式经微量元素分析结果表明，分子式为(C5H10O5)n(3)化学结构式经化学反应结合光谱分析法，香菇多糖的一级结构如下
2．制剂稳定性考察结果与结论本发明产品经高(40℃、60℃、80℃)、高湿(RH92.5％、RH75％、25℃)及光照(4000Lx)等影响因素试验后，外观性状、澄明度、PH值、含量及无菌检查均符合要求。
本发明产品加速试验(40℃ RH75％)3个月的考察结果，外观性状、澄明度、PH值、含量、杂质及无菌检查均符合要求。
本发明产品在室温留样考察1、3、5、12、18、24个月，经定期取样检查各项项目均符合要求。故本品有效期可定为两年。
3．临床试验(1)Ⅱ期临床试验临床试验由国家指定医疗单位采取双盲、随机方法进行二期临床试验，对各类癌症患者240例采用联合化疗加安慰剂(冻干粉针剂)作为对照组以及联合化疗加香菇多糖作为试验组的试验结果表明，试验组108例，CR+PR 67例，总有效率62％，对照组104例，CR+PR 44例，总有效率43.2％，两者相比，P值＜0.01，其中胃癌试验组总有效率56.6％，对照组19.4％，P值＜0.01，非小细胞肺癌试验组总有效率33.3％，对照组11.5％，P值＜0.05。试验组治疗前后淋巴细胞转化率，NK细胞活性和T4/T8比值均显著高于对照治疗前后的变化，P＜0.01。初步试用香菇多糖治疗癌性胸腹水的有效率(13/17)76.5％的结果近似。
(2)Ⅲ期临床试验在中华医学会组织领导下，由中山医科大学肿瘤医院作为负责单位，全国40余家医院参加了三期临床，进一步考察了香菇多糖临床疗效及不良反应，完成可评价指标病列1106例，包括全身用药1047例和胸腹水59病例。
①并用化疗试验组(565例)总有效率41.1％，对照组(301例)25.2％，两组有显著性差异(P＜0.01)，其中胃癌、NSCLC(非小细胞肺癌)的总有效率试验明显高于对照组(P＜0.01)。NSCLC的化疗增效作用在此之前未见临床报道日本昧之素公司同类产品有此作用(参见查新报告)。
②胸腹水共59例，总有效率52.5％。
③本试验同时观察了患者细胞免疫功能的变化，结果显示试验三项指标
④活动状态(PS)全组1647例，并用化疗试验组(565例)治疗后28.5％病人PS有改善(治疗后比治疗前有显著性差异P＜0.01)，而对照组仅6.6％的病人有改善(治疗后比治疗前无差异P＞0.05)，试验组与对照组比较有显著差异(P＜0.01)。
⑤减轻化、放疗毒副反应并用化疗、术后并用化疗血WBC.P下降发生率，试验组明显低于对照组(P＜0.01)，胃肠毒性、肝功能损害试验组亦低于对照组(P＜0.01)，恶心呕吐的发生率试验组明显低于对照组(P＜0.01)。在此之前未见临床报道日本味之素公司同类产品有此作用。
⑥不良反应在所有全身应用香菇多糖的1121例病人中有2例出现颜面潮红，1例胸闷，共计3例，占0.27％，减慢滴注速度或停药后短期内恢复。日本香菇多糖Lentinan Ⅱ、Ⅲ期临床试验计469例，不良反应发生32例，占6.8％。
实施例1取注射用香菇多糖原料1.15克(纯度98％)，加30ml 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加1M盐酸中和，至pH6.8～7.0，加市售20％甘露醇注射液600毫升(连云港东风制药厂生产)，搅拌均匀，再加注射用水至2000毫升，除菌过滤，测含量，分装，2ml/瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，贴标签。使用剂量静脉滴注1mg/次，每周二次；腔内注射4mg或8mg/次。使用方法用2ml注射用水振摇溶解，加入250ml生理盐水或5％葡萄糖注射液中，静脉滴注；腔内注射用20ml生理盐水溶解4mg或8mg香菇多糖，直接注入患者胸腔或腹腔。
实施例2取注射用香菇多糖5.5克，在搅拌下分次溶于0.8M氢氧化钠溶液300毫升，使其完全溶解，然后慢慢加入0.8M盐酸中和，调pH至7.0～7.2。取市售注射用甘露醇500克，加适量注射用水加热溶解，加0.1％W/V注射用活性炭于85℃加热15分钟，冷却至60℃时用3号砂芯滤棒过滤，滤液中加入香菇多糖溶液，补充注射用水至20000毫升，然后用滤膜进行除菌过滤，测含量，灌封于安瓿中，每瓶2毫升至冻干箱中进行冻干，出箱后封口，检漏，贴标签即得。液，补充注射用水至20000毫升，然后用滤膜进行除菌过滤，测含量，灌封于安瓿中，每瓶2毫升至冻干箱中进行冻干，出箱后封口，检漏，贴标签即得。
含量测定采用经典的蒽酮硫酸法。
权利要求
1．一种抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于以下述重量配比药物为原料香菇多糖0.50～1.40份，一种冻干赋形剂50～140份。
2．根据权利要求1所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于以下述重量配比药物为原料香菇多糖0.95～1.20份，一种冻干赋形剂100份
3．根据权利要求1所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。
4．根据权利要求1所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇。
5．一种抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖0.50～1.40份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂50～140份混合，分装入瓶，冻干后，封口。
6.根据权利要求5所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于取香菇多糖0.95～1.20份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂100份混合，分装入瓶，冻干后，封口。
7.根据权利要求5所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。
8.根据权利要求5所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于冻干赋形剂是甘露醇。
9.根据权利要求5的要求所述香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于碱液为0.5～1.0摩尔浓度的氢氧化钠，酸液为0.5～1.0摩尔浓度的盐酸。
10.根据权利要求5所述香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于用酸液中和至PH为6.0～8.0。
全文摘要
本发明公开了抗肿瘤药物香菇多糖冻干粉针剂的配方及其可工业化的制备方法,配方中省去了使患者可能产生过敏的右旋糖酐。
文档编号A61K31/716GK1288729SQ0011240
公开日2001年3月28日 申请日期2000年7月19日 优先权日2000年7月19日
发明者程培元, 翁静, 方贻功, 程光 申请人:南京振中生物工程有限公司
技术领域：
本发明涉及生物反应调节剂抗肿瘤药物香菇多糖冻干制剂及其制备方法。
香菇中含蛋白质、杂多糖和香菇多糖等多种成分。香菇多糖(Lentinan)是日本学者千原吴郎从香菇子实体中提取、分离、纯化的一种多糖，其一级结构是β-(1-3)葡萄糖为主链，β-(1-6)葡萄糖为侧链的葡聚糖。香菇多糖是一种生物反应调节剂，对多种肿瘤有强的抑制作用，对化学诱癌剂病毒诱癌剂有预防效果，特别是对于手术后微转移有效，同时给药剂量小，副作用小，使用安全。1985年日本厚生省批准香菇多糖作为抗肿瘤新药上市。我国1988年开始进口日本味之素的香菇多糖，并用于临床。日本进口的香菇多糖冻干剂的配方为香菇多糖、右旋糖酐和甘露醇。右旋糖酐为发酵产物，作为药用临床上已发现其有过敏性休克导致死亡的案例多起。
本发明的目的是提供一种不含会产生不良反应的成份的冻干制剂，该制剂成本低，疗效与日本进口的一样。
本发明的目的是提供一种制备不含会产生不良反应的成份的冻干制剂的制备方法。
本发明的技术方案是一种抗肿瘤的香菇多糖冻干剂，其特征在于是以下述重量配比药物为原料香菇多糖0.50～1.40份，一种冻干赋形剂50～140份，优选的药物配比是香菇多糖0.95～1.20份，一种冻干赋形剂100份；所述冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖，优选的冻干赋形剂是甘露醇。
本发明的技术方案还包括一种抗肿瘤的香菇多糖冻干剂的制备方法。
本发明的香菇多糖的提取、分离、纯化方法系参考Nature 1965，222，687-8。
本发明香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖0.50～1.40份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂50～140份混合，分装入瓶，冻干后，封口。优选的药物配比是取香菇多糖0.95～1.20份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂100份混合，分装入瓶，冻干后，封口。
所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。较好的冻干赋形剂是甘露醇。
所述冻干剂的制备方法，其特征在于碱液为0.5～1.0摩尔浓度的氢氧化钠。中和用的酸液为0.5～1.0摩尔浓度的盐酸，中和至PH为6.0～8.0。
香菇多糖与冻干赋形剂混匀后，过滤，除菌，测含量，灌装于安瓿或西林瓶中，冻干，封口或压盖，检漏或轧盖，贴标签。全部在符合GMP车间进行。
香菇多糖冻干粉针剂手术前使用或化疗前使用，1mg/次，每周两次；或2m/次，每周一次。用时溶于250mg生理盐水或葡萄糖液中，静脉滴注。治疗癌性胸腹水患者，腔内注射4～8mg/次。具体病例应遵医嘱。
本发明的香菇多糖冻干剂疗效确切，制剂稳定，由于不含可能引起过敏的右旋糖酐，所以临床使用更安全。而且，由于注射用香菇多糖冻干粉针剂不含右旋糖酐，所用含量测定方法无需先进行特殊装置的柱层析分离去右旋糖酐，可以直接采用蒽酮硫酸法，使含量检测更准确、简便。
1．本发明产品的分子量、分子式、化学结构式(1)分子量测定经高效凝胶渗透色谱，采用普适校正曲线方法测定分子量大多在50～70万。
(2)分子式经微量元素分析结果表明，分子式为(C5H10O5)n(3)化学结构式经化学反应结合光谱分析法，香菇多糖的一级结构如下
2．制剂稳定性考察结果与结论本发明产品经高(40℃、60℃、80℃)、高湿(RH92.5％、RH75％、25℃)及光照(4000Lx)等影响因素试验后，外观性状、澄明度、PH值、含量及无菌检查均符合要求。
本发明产品加速试验(40℃ RH75％)3个月的考察结果，外观性状、澄明度、PH值、含量、杂质及无菌检查均符合要求。
本发明产品在室温留样考察1、3、5、12、18、24个月，经定期取样检查各项项目均符合要求。故本品有效期可定为两年。
3．临床试验(1)Ⅱ期临床试验临床试验由国家指定医疗单位采取双盲、随机方法进行二期临床试验，对各类癌症患者240例采用联合化疗加安慰剂(冻干粉针剂)作为对照组以及联合化疗加香菇多糖作为试验组的试验结果表明，试验组108例，CR+PR 67例，总有效率62％，对照组104例，CR+PR 44例，总有效率43.2％，两者相比，P值＜0.01，其中胃癌试验组总有效率56.6％，对照组19.4％，P值＜0.01，非小细胞肺癌试验组总有效率33.3％，对照组11.5％，P值＜0.05。试验组治疗前后淋巴细胞转化率，NK细胞活性和T4/T8比值均显著高于对照治疗前后的变化，P＜0.01。初步试用香菇多糖治疗癌性胸腹水的有效率(13/17)76.5％的结果近似。
(2)Ⅲ期临床试验在中华医学会组织领导下，由中山医科大学肿瘤医院作为负责单位，全国40余家医院参加了三期临床，进一步考察了香菇多糖临床疗效及不良反应，完成可评价指标病列1106例，包括全身用药1047例和胸腹水59病例。
①并用化疗试验组(565例)总有效率41.1％，对照组(301例)25.2％，两组有显著性差异(P＜0.01)，其中胃癌、NSCLC(非小细胞肺癌)的总有效率试验明显高于对照组(P＜0.01)。NSCLC的化疗增效作用在此之前未见临床报道日本昧之素公司同类产品有此作用(参见查新报告)。
②胸腹水共59例，总有效率52.5％。
③本试验同时观察了患者细胞免疫功能的变化，结果显示试验三项指标
④活动状态(PS)全组1647例，并用化疗试验组(565例)治疗后28.5％病人PS有改善(治疗后比治疗前有显著性差异P＜0.01)，而对照组仅6.6％的病人有改善(治疗后比治疗前无差异P＞0.05)，试验组与对照组比较有显著差异(P＜0.01)。
⑤减轻化、放疗毒副反应并用化疗、术后并用化疗血WBC.P下降发生率，试验组明显低于对照组(P＜0.01)，胃肠毒性、肝功能损害试验组亦低于对照组(P＜0.01)，恶心呕吐的发生率试验组明显低于对照组(P＜0.01)。在此之前未见临床报道日本味之素公司同类产品有此作用。
⑥不良反应在所有全身应用香菇多糖的1121例病人中有2例出现颜面潮红，1例胸闷，共计3例，占0.27％，减慢滴注速度或停药后短期内恢复。日本香菇多糖Lentinan Ⅱ、Ⅲ期临床试验计469例，不良反应发生32例，占6.8％。
实施例1取注射用香菇多糖原料1.15克(纯度98％)，加30ml 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加1M盐酸中和，至pH6.8～7.0，加市售20％甘露醇注射液600毫升(连云港东风制药厂生产)，搅拌均匀，再加注射用水至2000毫升，除菌过滤，测含量，分装，2ml/瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，贴标签。使用剂量静脉滴注1mg/次，每周二次；腔内注射4mg或8mg/次。使用方法用2ml注射用水振摇溶解，加入250ml生理盐水或5％葡萄糖注射液中，静脉滴注；腔内注射用20ml生理盐水溶解4mg或8mg香菇多糖，直接注入患者胸腔或腹腔。
实施例2取注射用香菇多糖5.5克，在搅拌下分次溶于0.8M氢氧化钠溶液300毫升，使其完全溶解，然后慢慢加入0.8M盐酸中和，调pH至7.0～7.2。取市售注射用甘露醇500克，加适量注射用水加热溶解，加0.1％W/V注射用活性炭于85℃加热15分钟，冷却至60℃时用3号砂芯滤棒过滤，滤液中加入香菇多糖溶液，补充注射用水至20000毫升，然后用滤膜进行除菌过滤，测含量，灌封于安瓿中，每瓶2毫升至冻干箱中进行冻干，出箱后封口，检漏，贴标签即得。液，补充注射用水至20000毫升，然后用滤膜进行除菌过滤，测含量，灌封于安瓿中，每瓶2毫升至冻干箱中进行冻干，出箱后封口，检漏，贴标签即得。
含量测定采用经典的蒽酮硫酸法。
权利要求
1．一种抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于以下述重量配比药物为原料香菇多糖0.50～1.40份，一种冻干赋形剂50～140份。
2．根据权利要求1所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于以下述重量配比药物为原料香菇多糖0.95～1.20份，一种冻干赋形剂100份
3．根据权利要求1所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。
4．根据权利要求1所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇。
5．一种抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖0.50～1.40份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂50～140份混合，分装入瓶，冻干后，封口。
6.根据权利要求5所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于取香菇多糖0.95～1.20份，用碱液溶解，加酸液中和，再与一种冻干赋形剂100份混合，分装入瓶，冻干后，封口。
7.根据权利要求5所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。
8.根据权利要求5所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于冻干赋形剂是甘露醇。
9.根据权利要求5的要求所述香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于碱液为0.5～1.0摩尔浓度的氢氧化钠，酸液为0.5～1.0摩尔浓度的盐酸。
10.根据权利要求5所述香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于用酸液中和至PH为6.0～8.0。
全文摘要
本发明公开了抗肿瘤药物香菇多糖冻干粉针剂的配方及其可工业化的制备方法,配方中省去了使患者可能产生过敏的右旋糖酐。
文档编号A61K31/716GK1288729SQ0011240
公开日2001年3月28日 申请日期2000年7月19日 优先权日2000年7月19日
发明者程培元, 翁静, 方贻功, 程光 申请人:南京振中生物工程有限公司
最新回复(0)