治疗肿瘤性疾病药物(例如,氯丙嗪和喷他脒)的联合应用的制作方法
专利名称：治疗肿瘤性疾病药物(例如,氯丙嗪和喷他脒)的联合应用的制作方法
技术领域：
本发明背景本发明涉及肿瘤性疾病如癌症的治疗。
癌症是一种以异常细胞的失控性增长为标志的疾病。这些异常细胞不再执行正常细胞的功能，并且它们挤出并破坏健康组织。
肺癌在男性和女性中是最常见的癌症相关性死因。在最常见的发生于男性和女性的癌症中，它居于第二位；预计仅2000年一年中美国新发肺癌病例将超过164000人。在美国男性肺癌病例发病率降低的同时，女性发病率却持续增长。肺癌可以是致命性的，根据美国肺学会预测，2000年死于肺癌的美国人预计为156900人。
根据细胞在显微镜下形态，原发性肺癌被分成两种主要类型，非小细胞肺癌和小细胞肺癌。非小细胞肺癌(鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌)向其它器官的扩散一般比小细胞肺癌慢。小细胞肺癌是较少见的类型，约占全部肺癌的20％。
其它癌症包括脑癌、乳房癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肾癌、白血病、肝癌、淋巴癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌和子宫癌。同肺癌一样，这些癌症有时以化疗方法治疗。
目前使用或临床试验中的化疗药物包括紫杉醇、多西紫杉醇、他莫昔芬、维诺瑞平、吉西他宾、顺铂、依托泊甙、拓扑替康、伊利替康、阿那曲唑、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、氟达拉宾、环磷酰胺、gentuzumab、卡铂、干扰素和阿霉素。最常用的抗癌药是紫杉醇，其可单独使用或与其它化疗药如5-FU、阿霉素、维诺瑞平、环磷酰胺、及顺铂等联合使用。
本发明概述我们发现抗精神病药氯丙嗪和抗原虫药喷他脒联合使用可表现出确切的抗癌细胞增殖活性。这些药物各自的结构和功能类似物是已知的，并且这些类似物中的任何一个均可以用于本发明的抗增殖联合用药中。氯丙嗪和喷他脒的代谢物也是已知的。这些代谢物中有不少具有其母体化合物之一项或一项以上的生物学活性，并且相应地，也可以用于本发明的抗增殖联合用药中。因此，本发明的特征是治疗患有癌症或其它肿瘤病的患者的方法，其通过同时或在14天内分别给予患者以足以抑制肿瘤生长的剂量的氯丙嗪和喷他脒进行。
两种化合物优选在十天内分别给予，更优选在五天内分别给予，最优选在二十四小时内分别给予或甚至同时给予。如下文所述，根据本发明之任何一种方法治疗的癌症可以是肺癌(鳞状细胞癌、腺癌或大细胞癌)、脑癌、乳癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肾癌、白血病、肝癌、淋巴癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌或子宫癌。
在一个相关方面，本发明还以治疗肿瘤(如癌症)患者的方法为特征。在这种方法中，对患者给予(a)选自丙氯拉嗪、奋乃静、甲哌啶嗪、左美丙嗪、乙酰丙嗪、乙酰哌非纳嗪、培拉嗪、丙酰异丙嗪、putaperazine、硫乙哌丙嗪、甲氧丙嗪、chlorfenethazine、氰甲丙嗪、奋乃静庚酸脂(perphenazine，enanthate)、norchlorpromazine、三氟拉嗪、甲硫哒嗪(或上述任何一个的盐)，以及多巴胺D2拮抗剂(例如，止呕灵、哌迷清、螺哌隆、普罗吩胺、克立波必利、安非他酮和长安静)的第一种化合物；和(b)选自普罗帕脒、丁氧苯脒(butamidine)、庚氧苯脒(heptamidine)、壬氧苯脒(nonamidine)、司替巴脒、羟茋巴脒、二脒那秦、苯甲脒、4，4’-(五亚甲基二氧基)二-，二盐酸盐、氧二苯脒、双溴丙脒、1，3-双(4-脒基-2-甲氧基苯氧基)丙烷、氧二苯脒和双脒苯脲(或上述任何一个的盐)的第二种化合物。此外，第二种化合物可以是喷他脒的功能类似物，例如纺锤菌素、偏端霉素、博来霉素、放线菌素D或柔红霉素。所述第一种和第二种化合物优选同时或在14天内分别用足以抑制肿瘤生长的剂量给予。
在另一个相关的方面，本发明还以通过给予下列化合物而治疗肿瘤(如癌症)患者的方法为特征a)具有结构式(I)的第一种化合物 其中R2选自一组包括以下的基团 R10选自一组包括以下的基团
R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9相互独立，分别是H、F、OH、OCF3或OCH3；且W是选自一组包括以下的基团 以及b)具有结构式(II)的第二种化合物
其中Y和Z相互独立，分别是O或N；R11和R12相互独主，分别是H、OH、Cl、Br、OCH3、OCF3、NO2或NH2；n是2至6的整数，包括2和6；且R13，和R14相互独立，分别位于邻位或对位并选自一组包括以下的基团 其中将所述第一种和第二种化合物用足以抑制肿瘤生长的剂量同时或在14天内分别给予。
在上述任何一种治疗中，作为药物联合之一部分的各个化合物优选作为药用组合物的一部分给予患者，其组合物还包括药学上可接受的载体。氯丙嗪优选以10至2500毫克的剂量给予，而喷他脒优选以1至1000毫克的剂量给予。优选给药方式包括静脉内、肌内、吸入和口服给药。
本发明之抗增殖药物联合可以是药用制剂盒的一部分。优选将氯丙嗪和喷他脒以各自的剂量在一起或单独配制。
本领域内人员应当理解在配制时这些化合物的盐也是有用的。例如，如本说明书所述，喷他脒的羟乙基磺酸盐在与氯丙嗪联合时显示出协同的抗增殖活性。其它喷他脒的盐包括铂盐、二盐酸盐及二甲基磺酸盐(参见，例如，Mongiardo等，Lancet 2108，1989)。类似地，氯丙嗪的盐包括，例如，盐酸盐和马来酸盐。
本发明还以鉴别有益于治疗肿瘤患者的化合物的方法为特征。该方法所包括的步骤是使(i)喷他脒或氯丙嗪以及(ii)侯选化合物与体外癌细胞接触，然后检测其癌细胞是否比(a)与喷他脒或氯丙嗪接触但不与侯选化合物接触的癌细胞，以及(b)与侯选化合物接触但不与氯丙嗪或喷他脒接触的癌细胞的生长更加缓慢。一种侯选化合物，当与氯丙嗪或喷他脒联合使用时，减少细胞增殖，但在没有氯丙嗪或喷他脒存在时没有作用，这种化合物则是有益于治疗肿瘤患者的化合物。
联合治疗可以在进行化疗的任何地点提供在家中、医生诊所、医务所、医院门诊部或医院。治疗通常在医院开始，以使医生能够仔细观察治疗效果并作出任何必要的调整。联合治疗的疗程取决于所治疗的癌症种类、患者的年龄和病情、患者疾病的程度和类型以及患者身体对治疗的反应情况。药物可以按不同的间期给予(例如，每天、每周或每月)并且给予各药物可以单独决定。可以给予包括间歇期的不连续的循环联合治疗，以使患者身体有机会构建新的健康细胞并恢复其体力。
根据癌症类型及其发展程度，该联合治疗可以用于治疗癌症减缓癌症扩散、减缓癌的生长、杀灭或捕获可能已经从原发肿瘤中扩散到身体其它部位的癌细胞、减轻癌所致的症状或预防首发部位的癌症。联合治疗还可以通过清除导致疼痛和不适的癌细胞而帮助人们生活得更好。
本发明的其它特征和优势可以显而易见于下文之详细描述以及权利要求书中。
本发明详述我们发现抗精神病药氯丙嗪与抗原虫药喷他脒联合应用能显示出明确的抗癌细胞增殖活性。显示最大的抗癌细胞增殖活性的浓度对正常细胞无毒性。因此，这种药物联合法有益于治疗癌症及其它肿瘤。
根据已知的氯丙嗪及其类似物和代谢物之间，以及喷他脒及其类似物和代谢物之间的共同的已知特性，结构上相关的化合物有可能可以替代本发明之抗增殖联合用药中的氯丙嗪和/或喷他脒。下文提供涉及各药物及其类似物和代谢物的资料。
吩噻嗪类在本发明抗增殖药物联合疗法中有用的吩噻嗪类是具有通式(I)的化合物 其中R2选自一组包括以下的基团R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9相互独立，分别是H、OH、F、OCF3或OCH3；W选自一组包括以下的基团 且R10选自一组包括以下的基团
在优选化合物中，R2为Cl；R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9分别为H或F。更优选的R1、R4、R5、R6和R9分别为H。
处方中最常见的吩噻嗪类药物是氯丙嗪，其具有下列结构 目前可以获得下列剂型的氯丙嗪片剂、胶囊、栓剂、口服浓缩液和糖浆剂以及注射用制剂。
被认为是氯丙嗪之类似物的吩噻嗪类包括氟非那嗪、甲哌氯丙嗪、甲硫哒嗪和三氟拉嗪。这些药物中有许多与氯丙嗪一样具有抗精神病和镇吐活性。
吩噻嗪被认为是通过干扰大脑的中边缘叶和延髓化学感受器激发区的中枢多巴胺能通路而呈现其抗精神病和镇吐作用。与基底神经节中的多巴胺能通路的相互作用导致了锥体外副作用。尽管经常被称为多巴胺阻断剂，但是代表这些药物抗精神病活性的准确的多巴胺能干扰机制尚未确认。氯丙嗪具有很强的α-肾上腺素能阻断活性，并且能够导致直立性低血压。氯丙嗪还具有温和的抗胆碱能活性，其特征为偶尔的口干、目昏、尿潴留以及便秘。由于对垂体和下丘脑多巴胺受体的阻断作用，氯丙嗪能增加催乳素分泌。
氯丙嗪易于从胃肠道中吸收。其生物利用度由于显著的肝脏首过代谢而不稳定。浓缩液可以比片剂具有更高的生物利用度。未发现食物对生物利用度的一致的影响。肌内注射给药避免了大部分的首过作用，因而达到更高的血浆浓度。其起效通常在肌内注射给药后15至30分钟及口服给药后30至60分钟。氯丙嗪直肠内给药所需起效时间通常长于氯丙嗪口服给药。
氯丙嗪代谢物由于氯丙嗪经过广泛的代谢转化而成为可能具有治疗活性的大量代谢产物，因此这些代谢产物有可能取代本发明之抗增殖药物联合疗法中的氯丙嗪。氯丙嗪代谢产生的产物有，例如，N-氧化脱甲基反应生成相应的伯和仲胺，芳氧化生成酚，N-氧化生成N-氧化物，S-氧化生成亚砜或砜，氨丙基侧链氧化脱氨基反应生成吩噻嗪母核，以及酚羟基基团及叔胺基团的糖醛酸化反应生成葡萄糖醛酸的季铵盐。
用于本发明之抗增殖药物联合的氯丙嗪代谢产物的其它实例中，吩噻嗪的3、7和8位可以分别独立地被羟基或甲氧基基团取代。
喷他脒喷他脒目前被用于治疗肺炎肺囊虫、杜氏利什曼虫、布氏锥体虫、冈比亚椎虫及罗得西亚锥虫感染。喷他脒的结构为 其可以被制成注射或吸入制剂。对于注射剂，喷他脒以无热原的、冻干产品形式包装。在重新制成溶液后，其通过肌内或静脉内注射给药。
羟乙基磺酸喷他脒是一种可溶于水和甘油而不溶于乙醚、丙酮和氯仿的白色、结晶性粉末。其化学命名为4，4’-二脒基-二苯氧基戊烷二(β-羟基乙磺酸盐)。其分子式为C23H36N4O10S2，分子量为592.68。
喷他脒的作用方式尚不完全清楚。体外动物组织及原生动物oncopelti短膜虫(Crithidia oncopelti)实验表明该药干扰细胞核代谢，对DNA、RNA、磷脂及蛋白质的合成产生抑制作用。
此药的药代动力学也所知甚少。在7名每日以4mg/kg喷他脒肌内注射10至12天治疗的患者中，血浆浓度在0.3和0.5μg/mL之间。直至停止治疗后六至八周，患者持续在尿液中排出含量逐渐减低的喷他脒。
喷他脒的组织分布研究是对小鼠单剂量腹腔注射喷他脒10mg/kg。其浓度在肾脏中最高，其次是在肝脏中。在小鼠中，喷他脒以原药排泄，主要通过肾脏而部分从粪便排泄。尿液和粪便排泄量的比值(4∶1)在整个实验阶段中恒定。
喷他脒类似物芳族双脒化合物可以替代本发明之抗增殖药物联合疗法中的喷他脒。芳族双脒化合物如普罗帕脒、丁氧苯脒、庚氧苯脒和壬氧苯脒在它们呈现抗病原体或DNA结合特性方面与喷他脒具有相同的性质。其它类似物(例如，司替巴脒及司替巴脒的吲哚类似物、羟茋巴脒、二脒那秦、苯甲脒、4，4’-(五亚甲基二氧基)二-，二盐酸盐、氧二苯脒、双溴丙脒、1，3-双(4-脒基-2-甲氧基苯氧基)丙烷(DAMP)、纺锤菌素、偏端霉素、氧二苯脒、双脒苯脲、博来霉素、放线菌素D及柔红霉素)也显示出类似于喷他脒的那些特性。当这些化合物与氯丙嗪(或氯丙嗪之类似物或代谢物)联合给药时可能具有抗增殖活性。
举例来说，优选类似物如式(II)所示。
其中Y和Z相互独立，分别是O或N；R11和R12相互独立，分别是H、OH、Cl、Br、OCH3、OCF3、NO2或NH2；而n是2至6的整数，包括2和6；且R13和R14相互独立，分别位于间位或对位，选自一组包括以下的基团 其它类似物包括司替巴脒(G-1)及羟茋巴脒(G-2)以及它们的吲哚类似物(例如，G-3)。
各脒基部分可以被上述D-2、D-3、D-4或D-5所示基团之一所替代。如氯丙嗪和喷他脒的情形一样，司替巴脒及其相关化合物的盐在本发明的方法中也是有用的。优选的盐包括，例如，二盐酸盐和甲磺酸盐。
喷他脒代谢物喷他脒代谢物也有用于本发明之抗增殖药物联合疗法中。喷他脒在体内被迅速代谢成至少七种主要代谢物。这些代谢物中有些与喷他脒具有一项或一项以上的相同活性。喷他脒的某些代谢物在与氯丙嗪或其类似物联合用药时可能显示出抗增殖活性。
七种喷他脒代谢物表示如下
治疗本发明之化合物联合用药有益于肿瘤治疗。联合治疗可以单独或与其它治疗(例如，手术、放疗、化学疗法、生物疗法)结合进行。此外，具有较高的肿瘤发病危险的人(例如，具有遗传倾向者和先前患有肿瘤者)可以接受预防性治疗以抑制或减缓肿瘤发生。
各组分的给药剂量和频次可以分别控制。例如，一种化合物可能每天口服给药三次，期间第二种药物则可能每天肌内给药一次。还可将这些化合物一起制成制剂，使得两种组分一次给予。下文叙述剂型及剂量。
药用组合物制剂可以用任何合适的方式，给予联合用药的每个化合物而使得与其它化合物联合的该化合物在到达靶区域时产生特定的抗肿瘤作用的浓度。该化合物可以以任何合适的剂量存在于任何合适的载体物质中，其通常占组合物总重量的1-95％。可以以适合于口服、肠道外(例如，静脉内、肌肉内)、直肠、皮内、鼻腔、阴道、吸入、皮肤(贴片)或眼部给药途径的剂型，提供该组合物。由此，其组合物的剂型可以是例如，片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、包括水凝胶的凝胶剂、糊剂、软膏剂、乳膏剂、膏药、浸液、释药装置、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入剂、喷雾剂或气雾剂。药用组合物可按照常规制药准则配制(见，例如，RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，A.R.Gennaro主编(第19版)，1995，Mack Publishing Company，Easton，P.A.及Encyclopedia ofPharmaceutical Technology，J Swarbrick和J.C.Boylan主编，1988-1999，Marcel Dekker，New York)。
本发明的药用组合物可以被配制成给药时几乎即刻释放或在给药后的任何预定时间或时间段释放活性化合物的剂型。后一种类型的组合物被统称为控释制剂，其包括(i)在延长的时间段内建立基本恒定的体内药物浓度的制剂；(ii)在预定的滞后时间点之后确立延长的时间段内的基本恒定的体内药物浓度的制剂；(iii)通过保持体内相对恒定、有效的药物水平以保持在预定时间段内的药物作用，同时使所伴有的与活性药物血浆水平波动(锯齿形动力学图形)相关的副作用最小化的制剂；(iv)通过，例如，将控释制剂放置于特定的病变组织或器官附近或之中而使药物作用定位的制剂；以及(v)通过采用载体或化学衍生物而将药物释放于特定类型靶细胞中的药物靶向作用制剂。
以化合物的控释剂型给药的特别优选的情况是化合物，在单用或联用时，具有以下特点的情况，(i)狭窄的治疗指数(即，产生副作用或毒性作用的血浆浓度与产生治疗作用的血浆浓度之间的差异很小；通常，治疗指数，TI，被定义为半数致死量(LD50)与半数有效量(ED50)的比值)；(ii)窄短的胃肠道吸收部位；或(iii)很短的生物半衰期而需要每天多次给药以保持治疗水平的血浆水平。
可以运用多种方法的任何一种以获得控释制剂，在该制剂中所讨论的化合物的释放速率超过其代谢速率。在一个实例中，通过适当选择各种制剂参数和成分而获得控制性释放，其包括，例如，各种类型的控释组合物及包衣。因此，可将该药物与合适的赋形剂配制成药用组合物，在其对器官给药时，以控制性方式释放活性物质。实例包括单一或多单位剂量的片剂或胶囊组合物、油溶液、混悬剂、乳剂、微囊、微球、纳米粒、贴剂及脂质体。
口服使用的固体剂型口服用药的制剂包括含有与药学上可接受的无毒赋形剂混合的活性成分的片剂。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、淀粉(包括马铃薯淀粉)、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；制粒或崩解剂(例如，纤维素衍生物，包括微晶纤维素、淀粉(如马铃薯淀粉)、交联羧甲基纤维素钠、藻酸盐、或藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预凝胶化淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助流剂和抗粘剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石粉)。其它药学上可接受的赋形剂可以是着色剂、矫味剂、塑性剂、湿润剂、缓冲剂等等。
片剂可以无包衣或者用已知技术将它们包衣，任选在胃肠道内延缓崩解和吸收并由此获得更长时间段内的持续作用。可采用包衣以使以预定方式(例如，以获得控释制剂为目的)释放活性药物或可采用包衣以使直到通过胃部之后才释放药物(肠溶包衣)。包衣可以是糖包衣，薄膜包衣(例如，基于羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)，或肠溶包衣(例如，基于异丁烯酸共聚物、邻苯二甲酸醋酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、醋酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、聚醋酸邻苯二甲酸乙烯酯、虫胶和/或乙基纤维素)。此外，可以采用延时材料如，举例来说，单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
固体片剂组合物可以包括适合预防组合物之有害化学变化的包衣，(例如，活性药物释放之前的化学降解)。可以用类似于上述Encyclopedia of Pharmaceutical Technology中所描述的方法对固体剂型进行包衣。
两种药物可以混合于片剂中，或者可以分开。在一种实例中，第一种药物包含在片剂内部，而第二种药物在其外部，使得大部分的第二种药物的释放先于第一种药物的释放。
用于口服的制剂也可为咀嚼片或硬明胶胶囊，其中将活性成分与惰性固体稀释剂混合(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或白陶土)或软明胶胶囊，其中将活性成分与水或油性介质混合，例如，花生油、液体石蜡或橄榄油。粉末剂及颗粒剂可以采用上述片剂及胶囊项下的组分，按照常规方法，采用，例如，混合机、流化床设备或喷雾干燥设备制备。
控释口服剂型可将用于口服的控释组合物例如，制备成通过控制活性药物的溶解和/或扩散而释放活性药物的组合物。
控制释溶解或扩散的释放可以通过将化合物的片剂、胶囊、丸剂或颗粒制剂进行适当包衣实现，或者通过将所涉及的化合物与合适的基质混合实现。
控释包衣可以包括一种或一种以上的上述包衣材料和/或，例如，虫胶、蜂蜡、glycowax、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、十八烷醇、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、棕榈酰硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、dl-聚合乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、异丁烯酸甲酯、2-羟基异丁烯酸酯、异丁烯酸水凝胶、1，3-丁二醇、乙二醇异丁烯酸酯和/或聚乙二醇。在控释基质制剂中，所述基质材料也可以包括，例如，水合甲基纤维素、巴西棕榈蜡和十八烷醇、卡巴浦尔934、聚硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-异丁烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或卤代碳氟化合物。
含有一种或一种以上的要求联合用药的化合物的控释组合物也可以是漂浮片剂或胶囊剂型(即，一种片剂或胶囊剂，其在口服给药时，在一定的时间段内漂浮于胃内容物之上)。化合物的漂浮片剂制剂可以通过将药物与赋形剂及20％-75％w/w的水胶体，例如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素及羟丙基甲基纤维素，混合制粒制备。然后可以将所得颗粒压制成片剂。该片剂在与胃液接触时，环其表面形成基本不透水的凝胶屏障。此凝胶屏障参与维持较之更小的密度，因而使得片剂保持漂浮于胃液中。
口服给药的液体适合于通过加水制备的水溶性混悬液的粉末剂、可分散性粉末剂或颗粒剂是常用的口服给药剂型。混悬液制剂是将所述活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或一种以上的防腐剂混合。合适的分散剂或湿润剂有，例如，天然产物磷脂(例如，卵磷脂或环氧乙烷与脂肪酸、长链脂肪醇或脂肪酸的部分酯化产物的缩合物)和己糖醇或脱水己糖醇(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯等等)。合适的悬浮剂有，例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、藻酸钠等等。
肠道外组合物所述药用组合物还可以通过注射、滴注或植入(静脉内、肌内、皮下等)剂型、制剂或通过含有常规、无毒的药学上可接受的载体或辅料的合适的给药装置或植入剂而进行肠道外给药。此组合物的制剂与制备为药物制剂领域内技术人员所熟知。具体的制剂可以见于上述Remington；The Science and Practise of Pharmacy。
肠道外使用的组合物可以以单位剂量形式(例如，单剂量安瓿)存在，或者存在于含有几个剂量的小瓶中，并且可以加入合适防腐剂(参见下文)。这些组合物的剂型可以是溶液、混悬液、乳剂、输液装置或植入给药装置，或者其可以作为在使用前以水或其它合适的溶媒重新配制的干粉剂。除活性药物外，组合物可以含有合适的肠道外可接受的载体和/或赋形剂。可将这些活性成分配制成控释微球、微囊、纳米颗粒、脂质体等等。此外，这些组合物可以包括悬浮剂、助溶剂、稳定剂、pH调节剂和/或分散剂。
如上文所述，本发明的药用组合物可以是适合无菌注射的剂型。为制备这样的组合物，将合适的活性药物溶解或悬浮于一种肠道外可接受的液体溶媒中。在这些可接受的溶媒和溶剂中，可以采用的是水，通过加入适量盐酸、氢氧化钠或合适的缓冲液而调节至合适的pH值的水，1，3-丁二醇，林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。这些液体制剂还可以含有一种或一种以上的防腐剂(例如，对羟基苯甲酸的甲酯、乙酯或正丙酯)。在其化合物之一仅微溶或少量溶解于水的情况下，可以添加增溶剂或助溶剂，或者其溶剂可以含有10-60％w/w的丙二醇等。
肠道外控释组合物肠道外控释组合物可以是水溶性混悬液、微球、微囊、磁化微球、油性溶液、油性混悬液或乳化液。或者，可将所述活性药物结合到生物相容性载体、脂质体、纳米颗粒、植入剂或输液装置中。
用于制备微球和/或微囊的材料有，例如，可生物降解/可生物溶蚀的聚合物如polyglactin、聚(氰基丙烯酸酯异丁酯)、聚(2-羟乙基-L-谷氨酰胺)以及聚(乳酸)。
制备肠道外控释制剂时可以采用的可生物降解的载体有碳氢化合物(例如，右旋糖酐)、蛋白质(例如，白蛋白)、脂蛋白或抗体。
用于植入剂的材料可以是非生物降解的(例如，聚合二甲基硅氧烷)或可生物降解的(例如，聚(己内酯)、聚(乳酸)、聚(羟基乙酸)或聚(原酸酯))。
直肠组合物对于直肠内应用，组合物合适的剂型包括栓剂(乳化或混悬型)及直肠用明胶胶囊(溶液或悬浮液)。在典型的栓剂制剂中，其活性药物结合于合适的药学上可接受的栓剂基质如可可脂、酯化脂肪酸、甘油酸化明胶以及多种水溶性或分散性基质如聚乙二醇和聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。可以结合多种添加剂、促进剂或表面活性剂。
吸入组合物对于吸入给药，典型剂型包括鼻腔喷雾剂和气雾剂。在典型的鼻腔制剂中，活性成分被溶解或扩散于合适的溶媒中。其药学上可接受的溶媒及赋形剂(以及存在于该组合物中的其它药学上可接受的物质如稀释剂、促进剂、矫味剂及防腐剂)以药物制剂领域内技术人员所理解的方式，根据常规制药方法选择。
经皮及局部给药组合物所述药用组合物还可以以包括常规无毒的药学上可接受的载体及赋形剂(包括微球和脂质体)的剂型或制剂形式对皮肤局部用药，以供经皮吸收。这些制剂包括乳膏、软膏、洗剂、擦剂、凝胶、水凝胶、溶液、混悬剂、膏药、喷雾剂、糊剂、硬膏剂以及其它类型的透皮释药系统。所述药学上可接受的载体或赋形剂可以包括乳化剂、抗氧剂、缓冲剂、防腐剂、湿润剂、透皮促进剂、螯合剂、凝胶形成剂、软膏基质、芳香剂和皮肤保护剂。
乳化剂的实例有天然树胶(例如，阿拉伯胶或黄蓍树胶)及天然磷脂(例如，大豆卵磷脂和去水山梨糖醇单油酸酯衍生物)。抗氧剂的实例有丁基化羟基茴香醚(BHA)、抗坏血酸及其衍生物、生育酚及其衍生物、丁基化羟基茴香醚和半胱氨酸。防腐剂的实例有对羟基苯甲酸酯类，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯以及苯扎氯铵。湿润剂的实例有甘油、丙二醇、山梨糖醇和尿素。透皮促进剂的实例有丙二醇、DMSO、三乙醇胺、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、2-吡咯烷酮及其衍生物、四氢糠醇、及Azone.RTM。螯合剂的实例有EDTA钠、柠檬酸及磷酸。凝胶形成剂的实例有卡巴浦尔、纤维素衍生物、皂土、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮。软膏基质的实例有蜂蜡、石蜡、鲸蜡素、植物油、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇脂肪酸酯与环氧乙烷之间的缩合物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(吐温))。
上述皮肤局部给药之药用组合物还可以与所治疗的身体部位之上或附近的局部给药相联系。可将这些组合物直接应用于或引进到相关的身体入口(例如，直肠、尿道、阴道或口腔之入口)。应可通过特定的释药装置途径如包扎物或替换膏药、药垫、纱布、绷带或其它形式的合适的弹性材料，应用这些组合物。
控释经皮及局部给药组合物提供控制药物释放及透皮渗透速率的方法有数种，包括膜调制系统、粘附扩散控制系统、基质分散型系统及微型储库系统。控释经皮和/或局部给药组合物可以采用上述方法之合适的混合物获得。
在膜调制系统中，存放活性药物的储库完全包封于由药物不能透过的薄层，如金属塑压薄层，以及控速聚合物膜如微孔或无孔聚合物膜(例如，乙烯乙酸乙烯酯共聚物)所制成的窄浅隔层中。其活性化合物仅允许通过控速聚合物膜释放。在药物储库中，活性药物可以分散于固体聚合物基质中或混悬于粘性液体介质如聚硅酮流质中。在该聚合物膜外表面，应用一种粘附性聚合物薄层以实现透皮系统与皮肤表面的紧密接触。所述粘附性聚合物优选是与活性药物相容的低过敏性聚合物。
在粘附扩散控制系统中，活性药物储库的形成是通过将活性药物直接分散于粘附性聚合物中，然后将含有活性药物的粘附物涂布到药物实际不能透过的金属塑压的背衬薄层上，以形成一层薄的药物储库层来进行。基质分散型系统的特征是活性药物储库的形成是通过将活性药物彻底均匀地分布于亲水性或亲脂性的聚合物基质中，然后将含有药物的聚合物模制成为具有非常清晰的表面与厚度的圆片。将粘附性聚合物沿圆片四周涂布以形成粘附条带。
在微型储库系统中，活性药物储库的形成首先是将固体药物混悬于水溶性聚合物的水溶液中，然后将药物混悬液分散于亲脂性聚合物中以形成大量的储药微球进行。
剂量所要求的药物联合的各化合物的剂量取决于几种因素，包括给药方法、所治疗的疾病、疾病的严重性、是治疗还是预防疾病以及被治疗的患者的年龄、体重和健康。
这些化合物的优选给药剂量约为每天0.1-30mg/kg体重，更优选的剂量约为每天0.5-15mg/kg体重。如上文所述，所讨论的化合物可以以片剂、胶囊剂、酏剂或糖浆剂形式口服给药，或以栓剂形式直肠给药。进行化合物的肠道外给药的合适剂型是生理盐水溶液或将化合物结合于脂质体中的形式。当化合物自身溶解性不足以溶解时，可以应用助溶剂如乙醇。为达到说明之目的，下文说明氯丙嗪和喷他脒的剂量。本领域内的技术人员应当理解如果氯丙嗪或喷他脒被第二种药物替代，则其确切剂量可以通过检测该化合物在细胞增殖试验中的药效以及它在人体中的毒性而确定。
口服给药对于采用口服进行全身给药的氯丙嗪，其剂量通常是在一天至一年、甚至是患者之一生中，每次给药剂量约为1mg至1000mg(优选约5mg至500mg，且更优选约10mg至300mg)，每天给药1至10次(优选每天给药1至5次)，因为本发明之联合用药的作用主要为细胞抑制剂而不是细胞毒性剂，并且所表现的毒性低，慢性、长期给药可能适合于许多病例。必要时，最高剂量可为每天8g。
对于喷他脒，其剂量通常是在一天至一年，与氯丙嗪类似，甚至是患者一生中，每次给予约0.1mg至300mg的剂量(优选约1mg至100mg)，每天给药1至4次。给药也可以按周期给予，因而有一段喷他脒不给药的期间。这段期间可以大约是，例如，一天、一周、一个月、或一年或更长。
直肠给药对于采用直肠给药用于预防疾病的组合物，化合物剂量通常优选有一定程度的增加。因此，氯丙嗪的剂量通常是每次给药剂量约为5-2000mg(优选10mg至1000mg，更优选25mg至500mg)，每天给药1至4次。疗程与所述口服给药相同。喷他脒的剂量与所述的喷他脒口服给药剂量一致。
肠道外给药对于静脉内或肌内给药的氯丙嗪，推荐剂量约为每天0.1mg/kg至100mg/kg体重，优选剂量约1mg/kg至约25mg/kg，而最优选剂量约1mg/kg至约10mg/kg。喷他脒给药剂量约为0.1mg/kg至约20mg/kg，优选剂量为约0.5mg/kg至约10mg/kg，而更优选剂量为约1mg/kg至约4mg/kg。
各化合物通常每天给药直至约6-12个月或更长。一个化合物给药可能需要1至3个小时的时间，这段时间可以延长至持续24小时或更长。如口服给药所述，可以存在约一天至一年或更长的时段，期间不予给服至少一种药物。
吸入给药对于吸入给药，氯丙嗪约以每天1mg至1000mg的剂量给药，且优选每天约10mg至500mg的剂量。对于喷他脒，以每天约10mg至1000mg的剂量，且优选以约30mg至600mg的剂量给药。
经皮给药对于任一化合物的局部给药，通常优选以约1mg至约5g的剂量，每天1至10次给药一周至12个月。
下列实施例是对本发明的说明。它们不以任何方式对本发明构成任何限制。
实施例1制备氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒稀释矩阵用二甲基亚砜(DMSO)配制浓度分别为的11.25mM和6.74mM氯丙嗪和羟乙磺酸喷他脒(Sigma目录号分别为C8138和P0547)的储存液。用含有10％胎牛血清(FBS)、200mM L-谷氨酰胺及1％抗生素/抗菌素溶液的Dulbecco’s改进的Eagle培养基(DMEM)(Gibcol1995-040)配制各化合物的8倍浓度储存液(128μM)。用DMEM从该溶液中配制2倍稀释液系列。该系列提供从64μM到240nM范围内的9个浓度及一个0M浓度。制备该化合物的混合物矩阵是采用16通道移液器(Finnpipette)，以氯丙嗪的系列稀释液按列填充384-孔板(第一列32μM；第二列16μM；第三列8μM；第四列4μM；第五列2μM；第六列1μM；第七列500nM；第八列250nM；第九列125nM；及第十列无化合物)，并按行填充喷他脒系列稀释液(第一列32μM；第二列16μM；第三列8μM；第四列4μM；第五列2μM；第六列1μM；第七列500nM；第八列250nM；第九列125nM；及第十列无化合物)。此化合物混合板提供将被转移到检测板的4倍浓度的各化合物。因此，该稀释矩阵含有100种不同的点--81个孔存在不同量的氯丙嗪和喷他脒，以及每个化合物各有10个系列稀释点(2-倍)。
实施例2抗增殖活性检测采用A549溴代脱氧尿苷(BrdU)细胞印迹法检测所述化合物稀释矩阵。采用多头滴管(Labsystems)，将45微升含有A549肺腺癌细胞(ATCC#CCL-185)的混悬液植入无菌处理的白色不透明聚苯乙烯384孔板(NalgeNunc#164610)中，使其密度为每孔3000个细胞。将15微升的混合矩阵中的4倍浓度的化合物加入到含有细胞的培养板的每个孔中。采用16通道移液器(Finnpipette)转移混合矩阵中的化合物。此外，在每个培养板上紫杉醇(终浓度4.6μM)、鬼臼毒素(9.6μM)和阿的平(8.5μM)对照孔。各实验均以3块平行板进行。
37℃下孵育48小时后，每孔以10μM浓度的加入BrdU。16小时后，吸出培养基，并在室温下加入70％乙醇和磷酸缓冲液(PBS)，将细胞固定1小时。吸出固定液，每孔加入含吐温20(聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)的2N HCl，将培养板在室温下孵育20分钟。以2N NaOH中和HCl，将细胞用Hank氏平衡盐溶液(HBSS)洗涤两遍，再用含0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.1％吐温20的PBS洗涤一遍。弃去洗涤溶液，将小鼠抗-BrdU初级抗体(PharMingen#555627)按1∶1000稀释于含BSA、吐温20以及1∶2000稀释的二级抗体(Amersham # NA931)的PBS中。该二级抗体识别小鼠抗体并与山葵过氧化物酶(HRP)结合。孵育1小时后，移去抗体溶液，将细胞用PBS洗涤一遍。PBS洗涤后，向每个孔中加入HRP底物(其含有鲁米诺、过氧化氢以及促进剂如对碘苯酚)。采用LJL分析仪检测培养板。所有抽吸以及以PBS及HBSS洗涤均采用TECAN Power Washer 384进行。各个孔的发光量代表在这个孔中发生的DNA合成量。光线减弱表明该化合物的抗增殖活性。
将氯丙嗪/喷他脒稀释矩阵中各个位置的荧光除以仅用DMSO溶媒处理的A549细胞的荧光值，得到氯丙嗪/喷他脒稀释矩阵中各个位置的抗增殖比值。也计算紫杉醇、鬼臼毒素及阿的平的抗增殖比值，并用于比较。
表-抗增殖比值喷他脒浓度(μM)
在4.0μM下，单用羟乙磺酸喷他脒产生的抗增殖比值为3.9，在浓度加倍到8.0μM时，该比值上升到4.9。四微摩尔的氯丙嗪产生2.9的比值，并且该比值在浓度加倍到8.0μM时没有进一步增加。当4.0μM的喷他脒与4.0μM氯丙嗪联合进行实验(两种化合物总量为8.0μM)时，抗增殖比值达到了9.7。
在另一项分析中，单一化合物的强度受到另一个化合物存在的影响。喷他脒单用时所达到的最大抗增殖比值为4.9(在8.0μM下)，而这个值可见于在1μM喷他脒与低到125nM的氯丙嗪联合应用时，使达到此作用所需的两种药物总量显著减少。
我们证实氯丙嗪与羟乙磺酸喷他脒联合使用可阻止A549细胞生长而不是杀死它们。将A549细胞植入6-孔板中，并以各4μM的药物处理72小时。更换培养基，将细胞培养7天(以一种培养基更换)，此时对细胞计数并测定活性。未处理细胞在7天后已经生长至融合，而氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒处理的细胞没有生长，但却保持接近其植入时的密度。此外，氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒处理的细胞中的95％仍然有活性，仅比未处理细胞有少量减少。
这种联合用药对于正常的肺成纤维细胞(MRC9)活性有很小或没有影响。下文叙述的对照实验证明了这一点。将MRC9细胞植入384孔板以融合。加入氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒矩阵之稀释液以获得一系列交叠的两倍稀释的12×12矩阵，各化合物的最大剂量为16μM。将细胞与化合物孵育48小时，其后将6μL的Alamar Blue活性染料加入到各个孔中。将细胞与染料再孵育4小时。被还原的染料的数量采用Analyst AD通过荧光测定。无荧光(氧化的)形式的染料被活细胞还原成荧光形式。因此，没加化合物的孔与加入了化合物的孔之间的荧光比值与化合物导致的细胞死亡量成比例。在这项实验中，直至各药物浓度达到16μM时，仍没有毒性作用。而在低浓度时即发现其抗增殖作用。
采用其它癌细胞系可以类似地证明用A549细胞证实的抗增殖作用，例如MCF7乳腺癌、PA-1卵巢畸胎癌、HT29结肠直肠腺癌、H1299大细胞癌、U-2OS骨癌、U-373MG成胶质细胞瘤、Hep-3B肝细胞癌、BT-549乳腺癌、T-24膀胱癌、C-33A宫颈癌、HT-3转移性宫颈癌、SiHa宫颈鳞状细胞癌、CaSKi表皮样宫颈癌、NCI-H292粘液表皮样肺癌、NCI-2030、非小细胞肺癌、HeLa、宫颈上皮腺癌、KB口腔上皮腺癌、HT1080上皮纤维肉瘤、Saos-2上皮性骨癌、PC3上皮性前列腺癌、SW480结肠直肠癌、CCL-228及MS-751表皮样宫颈癌细胞系。可以通过采用如NHLF肺成纤维细胞、NHDF表皮成纤维细胞、HMEC乳腺上皮细胞、PrEC前列腺上皮细胞、HRE肾上皮细胞、NHBE支气管上皮细胞、CoSmC结肠平滑肌细胞、CoEC结肠内皮细胞、NHEK表皮角质细胞以及骨髓细胞，试验其特异性。
其它实施方案上述说明书提及的全部文献和专利均结合到本说明书中作参考。本发明所述方法和系统在不脱离本发明之范围和实质下的多种调整和变化对于本领域内的技术人员是显而易见的。尽管本发明已经描述了相关的具体的优选实施方案，但应当理解本发明之权利要求不应当受到这些特定实施方案的限制。事实上，为分子生物学或相关领域内的技术人员所显而易见的对进行本发明的所述方法的调整均在本发明的范围之内。
权利要求
1.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括将足以抑制所述肿瘤生长的量的氯丙嗪和喷他脒同时或在14天内分别给予所述患者。
2.权利要求1的方法，其中氯丙嗪和喷他脒在十天内分别给予。
3.权利要求2的方法，其中氯丙嗪和喷他脒在五天内分别给予。
4.权利要求3的方法，其中氯丙嗪和喷他脒在二十四小时内分别给予。
5.权利要求1的方法，其中所述肿瘤是癌症。
6.权利要求5的方法，其中所述癌症是肺癌。
7.权利要求6的方法，其中所述肺癌选自鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌。
8.权利要求5的方法，其中所述癌症选自脑癌、乳癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肾癌、白血病、肝癌、淋巴癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌和子宫癌。
9.权利要求1的方法，其中氯丙嗪和喷他脒通过静脉内、肌内、吸入、直肠或口服给予所述患者。
10.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括给予所述患者(a)第一种化合物，其选自丙氯拉嗪、奋乃静、甲哌啶嗪、左美丙嗪、乙酰丙嗪、乙酰哌非纳嗪、培拉嗪、丙酰异丙嗪、putaperazine、硫乙哌丙嗪、甲氧丙嗪、chlorfenethazine、氰甲丙嗪、奋乃静庚酸脂、三氟拉嗪、硫利达嗪和norchlorpromazine；和(b)第二种化合物，其选自普罗帕脒、丁氧苯脒、庚氧苯脒、壬氧苯脒、司替巴脒、羟茋巴脒、二脒那秦、苯甲脒、4，4’-(五亚甲基二氧基)二-，二盐酸盐、氧二苯脒、双溴丙脒、1，3-双(4-脒基-2-甲氧基苯氧基)丙烷、纺锤菌素、偏端霉素、氧二苯脒，双脒苯脲、博来霉素、放线菌素D和柔红霉素；其中所述第一种和第二种化合物同时或在14天内分别给予，其中所述第一种和第二种化合物以足以抑制所述肿瘤生长的量给予。
11.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括给予所述患者a)具有式(I)的第一种化合物 其中R2选自一组包括以下的基团 R10选自包括以下的基团 R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的每一个独立为H、OH、F、OCF3或OCH3；且W是选自包括以下的基团 以及b)具有式(II)的第二种化合物 其中Y和Z相互独立，各自为O或N；R11，和R12相互独立，各自为H、Cl、Br、OH、OCH3、OCF3、NO2及NH2；n是2至6的整数，包括2和6；且R13和R14各自独立选自包括以下的基团 其中所述第一种和第二种化合物以足以抑制所述肿瘤生长的量同时或在14天内分别给予。
12.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括给予所述患者一种药用组合物，它包括(i)共同降低所述肿瘤细胞增殖的剂量的氯丙嗪和喷他脒，及(ii)药学上可接受的载体。
13.权利要求12的方法，其中氯丙嗪以10至2500毫克的剂量给予和喷他脒以1至1000毫克的剂量给予。
14.权利要求12的方法，其中所述组合物通过静脉内、肌内、吸入、直肠或口服给予所述患者。
15.一种包括氯丙嗪、喷他脒以及药学上可接受的载体的药用组合物，其中氯丙嗪、喷他脒的存在量是，当一起给予肿瘤患者时，能减少所述肿瘤的细胞增殖的量。
16.权利要求15的组合物，其中氯丙嗪的剂量为10至2500毫克，而喷他脒的剂量为1至1000毫克。
17.权利要求15的组合物，其中所述组合物被配制成通过静脉内、肌内、直肠吸入或口服给予患者的制剂。
18.一种包括氯丙嗪和喷他脒的药用制剂盒。
19.权利要求18的药用制剂盒，其中氯丙嗪和喷他脒以各自的剂量分别配制。
20.权利要求18的药用制剂盒，其中氯丙嗪和喷他脒以各自的剂量在一起配制。
全文摘要
本发明以治疗癌症或其它肿瘤患者的方法为特征，其分别以足以抑制肿瘤生长的剂量同时或在14天内分别对患者给予(i)氯丙嗪或其代谢物或类似物；以及(ii)喷他脒或其代谢物或类似物。
文档编号A61K31/54GK1484525SQ01821723
公开日2004年3月24日 申请日期2001年10月30日 优先权日2000年11月6日
发明者A·波里西, C·凯斯, M·A·福利, B·R·斯托克维尔, A 波里西, 斯托克维尔, 福利 申请人:康宾纳特克斯公司
技术领域：
本发明背景本发明涉及肿瘤性疾病如癌症的治疗。
癌症是一种以异常细胞的失控性增长为标志的疾病。这些异常细胞不再执行正常细胞的功能，并且它们挤出并破坏健康组织。
肺癌在男性和女性中是最常见的癌症相关性死因。在最常见的发生于男性和女性的癌症中，它居于第二位；预计仅2000年一年中美国新发肺癌病例将超过164000人。在美国男性肺癌病例发病率降低的同时，女性发病率却持续增长。肺癌可以是致命性的，根据美国肺学会预测，2000年死于肺癌的美国人预计为156900人。
根据细胞在显微镜下形态，原发性肺癌被分成两种主要类型，非小细胞肺癌和小细胞肺癌。非小细胞肺癌(鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌)向其它器官的扩散一般比小细胞肺癌慢。小细胞肺癌是较少见的类型，约占全部肺癌的20％。
其它癌症包括脑癌、乳房癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肾癌、白血病、肝癌、淋巴癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌和子宫癌。同肺癌一样，这些癌症有时以化疗方法治疗。
目前使用或临床试验中的化疗药物包括紫杉醇、多西紫杉醇、他莫昔芬、维诺瑞平、吉西他宾、顺铂、依托泊甙、拓扑替康、伊利替康、阿那曲唑、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、氟达拉宾、环磷酰胺、gentuzumab、卡铂、干扰素和阿霉素。最常用的抗癌药是紫杉醇，其可单独使用或与其它化疗药如5-FU、阿霉素、维诺瑞平、环磷酰胺、及顺铂等联合使用。
本发明概述我们发现抗精神病药氯丙嗪和抗原虫药喷他脒联合使用可表现出确切的抗癌细胞增殖活性。这些药物各自的结构和功能类似物是已知的，并且这些类似物中的任何一个均可以用于本发明的抗增殖联合用药中。氯丙嗪和喷他脒的代谢物也是已知的。这些代谢物中有不少具有其母体化合物之一项或一项以上的生物学活性，并且相应地，也可以用于本发明的抗增殖联合用药中。因此，本发明的特征是治疗患有癌症或其它肿瘤病的患者的方法，其通过同时或在14天内分别给予患者以足以抑制肿瘤生长的剂量的氯丙嗪和喷他脒进行。
两种化合物优选在十天内分别给予，更优选在五天内分别给予，最优选在二十四小时内分别给予或甚至同时给予。如下文所述，根据本发明之任何一种方法治疗的癌症可以是肺癌(鳞状细胞癌、腺癌或大细胞癌)、脑癌、乳癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肾癌、白血病、肝癌、淋巴癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌或子宫癌。
在一个相关方面，本发明还以治疗肿瘤(如癌症)患者的方法为特征。在这种方法中，对患者给予(a)选自丙氯拉嗪、奋乃静、甲哌啶嗪、左美丙嗪、乙酰丙嗪、乙酰哌非纳嗪、培拉嗪、丙酰异丙嗪、putaperazine、硫乙哌丙嗪、甲氧丙嗪、chlorfenethazine、氰甲丙嗪、奋乃静庚酸脂(perphenazine，enanthate)、norchlorpromazine、三氟拉嗪、甲硫哒嗪(或上述任何一个的盐)，以及多巴胺D2拮抗剂(例如，止呕灵、哌迷清、螺哌隆、普罗吩胺、克立波必利、安非他酮和长安静)的第一种化合物；和(b)选自普罗帕脒、丁氧苯脒(butamidine)、庚氧苯脒(heptamidine)、壬氧苯脒(nonamidine)、司替巴脒、羟茋巴脒、二脒那秦、苯甲脒、4，4’-(五亚甲基二氧基)二-，二盐酸盐、氧二苯脒、双溴丙脒、1，3-双(4-脒基-2-甲氧基苯氧基)丙烷、氧二苯脒和双脒苯脲(或上述任何一个的盐)的第二种化合物。此外，第二种化合物可以是喷他脒的功能类似物，例如纺锤菌素、偏端霉素、博来霉素、放线菌素D或柔红霉素。所述第一种和第二种化合物优选同时或在14天内分别用足以抑制肿瘤生长的剂量给予。
在另一个相关的方面，本发明还以通过给予下列化合物而治疗肿瘤(如癌症)患者的方法为特征a)具有结构式(I)的第一种化合物 其中R2选自一组包括以下的基团 R10选自一组包括以下的基团
R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9相互独立，分别是H、F、OH、OCF3或OCH3；且W是选自一组包括以下的基团 以及b)具有结构式(II)的第二种化合物
其中Y和Z相互独立，分别是O或N；R11和R12相互独主，分别是H、OH、Cl、Br、OCH3、OCF3、NO2或NH2；n是2至6的整数，包括2和6；且R13，和R14相互独立，分别位于邻位或对位并选自一组包括以下的基团 其中将所述第一种和第二种化合物用足以抑制肿瘤生长的剂量同时或在14天内分别给予。
在上述任何一种治疗中，作为药物联合之一部分的各个化合物优选作为药用组合物的一部分给予患者，其组合物还包括药学上可接受的载体。氯丙嗪优选以10至2500毫克的剂量给予，而喷他脒优选以1至1000毫克的剂量给予。优选给药方式包括静脉内、肌内、吸入和口服给药。
本发明之抗增殖药物联合可以是药用制剂盒的一部分。优选将氯丙嗪和喷他脒以各自的剂量在一起或单独配制。
本领域内人员应当理解在配制时这些化合物的盐也是有用的。例如，如本说明书所述，喷他脒的羟乙基磺酸盐在与氯丙嗪联合时显示出协同的抗增殖活性。其它喷他脒的盐包括铂盐、二盐酸盐及二甲基磺酸盐(参见，例如，Mongiardo等，Lancet 2108，1989)。类似地，氯丙嗪的盐包括，例如，盐酸盐和马来酸盐。
本发明还以鉴别有益于治疗肿瘤患者的化合物的方法为特征。该方法所包括的步骤是使(i)喷他脒或氯丙嗪以及(ii)侯选化合物与体外癌细胞接触，然后检测其癌细胞是否比(a)与喷他脒或氯丙嗪接触但不与侯选化合物接触的癌细胞，以及(b)与侯选化合物接触但不与氯丙嗪或喷他脒接触的癌细胞的生长更加缓慢。一种侯选化合物，当与氯丙嗪或喷他脒联合使用时，减少细胞增殖，但在没有氯丙嗪或喷他脒存在时没有作用，这种化合物则是有益于治疗肿瘤患者的化合物。
联合治疗可以在进行化疗的任何地点提供在家中、医生诊所、医务所、医院门诊部或医院。治疗通常在医院开始，以使医生能够仔细观察治疗效果并作出任何必要的调整。联合治疗的疗程取决于所治疗的癌症种类、患者的年龄和病情、患者疾病的程度和类型以及患者身体对治疗的反应情况。药物可以按不同的间期给予(例如，每天、每周或每月)并且给予各药物可以单独决定。可以给予包括间歇期的不连续的循环联合治疗，以使患者身体有机会构建新的健康细胞并恢复其体力。
根据癌症类型及其发展程度，该联合治疗可以用于治疗癌症减缓癌症扩散、减缓癌的生长、杀灭或捕获可能已经从原发肿瘤中扩散到身体其它部位的癌细胞、减轻癌所致的症状或预防首发部位的癌症。联合治疗还可以通过清除导致疼痛和不适的癌细胞而帮助人们生活得更好。
本发明的其它特征和优势可以显而易见于下文之详细描述以及权利要求书中。
本发明详述我们发现抗精神病药氯丙嗪与抗原虫药喷他脒联合应用能显示出明确的抗癌细胞增殖活性。显示最大的抗癌细胞增殖活性的浓度对正常细胞无毒性。因此，这种药物联合法有益于治疗癌症及其它肿瘤。
根据已知的氯丙嗪及其类似物和代谢物之间，以及喷他脒及其类似物和代谢物之间的共同的已知特性，结构上相关的化合物有可能可以替代本发明之抗增殖联合用药中的氯丙嗪和/或喷他脒。下文提供涉及各药物及其类似物和代谢物的资料。
吩噻嗪类在本发明抗增殖药物联合疗法中有用的吩噻嗪类是具有通式(I)的化合物 其中R2选自一组包括以下的基团R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9相互独立，分别是H、OH、F、OCF3或OCH3；W选自一组包括以下的基团 且R10选自一组包括以下的基团
在优选化合物中，R2为Cl；R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9分别为H或F。更优选的R1、R4、R5、R6和R9分别为H。
处方中最常见的吩噻嗪类药物是氯丙嗪，其具有下列结构 目前可以获得下列剂型的氯丙嗪片剂、胶囊、栓剂、口服浓缩液和糖浆剂以及注射用制剂。
被认为是氯丙嗪之类似物的吩噻嗪类包括氟非那嗪、甲哌氯丙嗪、甲硫哒嗪和三氟拉嗪。这些药物中有许多与氯丙嗪一样具有抗精神病和镇吐活性。
吩噻嗪被认为是通过干扰大脑的中边缘叶和延髓化学感受器激发区的中枢多巴胺能通路而呈现其抗精神病和镇吐作用。与基底神经节中的多巴胺能通路的相互作用导致了锥体外副作用。尽管经常被称为多巴胺阻断剂，但是代表这些药物抗精神病活性的准确的多巴胺能干扰机制尚未确认。氯丙嗪具有很强的α-肾上腺素能阻断活性，并且能够导致直立性低血压。氯丙嗪还具有温和的抗胆碱能活性，其特征为偶尔的口干、目昏、尿潴留以及便秘。由于对垂体和下丘脑多巴胺受体的阻断作用，氯丙嗪能增加催乳素分泌。
氯丙嗪易于从胃肠道中吸收。其生物利用度由于显著的肝脏首过代谢而不稳定。浓缩液可以比片剂具有更高的生物利用度。未发现食物对生物利用度的一致的影响。肌内注射给药避免了大部分的首过作用，因而达到更高的血浆浓度。其起效通常在肌内注射给药后15至30分钟及口服给药后30至60分钟。氯丙嗪直肠内给药所需起效时间通常长于氯丙嗪口服给药。
氯丙嗪代谢物由于氯丙嗪经过广泛的代谢转化而成为可能具有治疗活性的大量代谢产物，因此这些代谢产物有可能取代本发明之抗增殖药物联合疗法中的氯丙嗪。氯丙嗪代谢产生的产物有，例如，N-氧化脱甲基反应生成相应的伯和仲胺，芳氧化生成酚，N-氧化生成N-氧化物，S-氧化生成亚砜或砜，氨丙基侧链氧化脱氨基反应生成吩噻嗪母核，以及酚羟基基团及叔胺基团的糖醛酸化反应生成葡萄糖醛酸的季铵盐。
用于本发明之抗增殖药物联合的氯丙嗪代谢产物的其它实例中，吩噻嗪的3、7和8位可以分别独立地被羟基或甲氧基基团取代。
喷他脒喷他脒目前被用于治疗肺炎肺囊虫、杜氏利什曼虫、布氏锥体虫、冈比亚椎虫及罗得西亚锥虫感染。喷他脒的结构为 其可以被制成注射或吸入制剂。对于注射剂，喷他脒以无热原的、冻干产品形式包装。在重新制成溶液后，其通过肌内或静脉内注射给药。
羟乙基磺酸喷他脒是一种可溶于水和甘油而不溶于乙醚、丙酮和氯仿的白色、结晶性粉末。其化学命名为4，4’-二脒基-二苯氧基戊烷二(β-羟基乙磺酸盐)。其分子式为C23H36N4O10S2，分子量为592.68。
喷他脒的作用方式尚不完全清楚。体外动物组织及原生动物oncopelti短膜虫(Crithidia oncopelti)实验表明该药干扰细胞核代谢，对DNA、RNA、磷脂及蛋白质的合成产生抑制作用。
此药的药代动力学也所知甚少。在7名每日以4mg/kg喷他脒肌内注射10至12天治疗的患者中，血浆浓度在0.3和0.5μg/mL之间。直至停止治疗后六至八周，患者持续在尿液中排出含量逐渐减低的喷他脒。
喷他脒的组织分布研究是对小鼠单剂量腹腔注射喷他脒10mg/kg。其浓度在肾脏中最高，其次是在肝脏中。在小鼠中，喷他脒以原药排泄，主要通过肾脏而部分从粪便排泄。尿液和粪便排泄量的比值(4∶1)在整个实验阶段中恒定。
喷他脒类似物芳族双脒化合物可以替代本发明之抗增殖药物联合疗法中的喷他脒。芳族双脒化合物如普罗帕脒、丁氧苯脒、庚氧苯脒和壬氧苯脒在它们呈现抗病原体或DNA结合特性方面与喷他脒具有相同的性质。其它类似物(例如，司替巴脒及司替巴脒的吲哚类似物、羟茋巴脒、二脒那秦、苯甲脒、4，4’-(五亚甲基二氧基)二-，二盐酸盐、氧二苯脒、双溴丙脒、1，3-双(4-脒基-2-甲氧基苯氧基)丙烷(DAMP)、纺锤菌素、偏端霉素、氧二苯脒、双脒苯脲、博来霉素、放线菌素D及柔红霉素)也显示出类似于喷他脒的那些特性。当这些化合物与氯丙嗪(或氯丙嗪之类似物或代谢物)联合给药时可能具有抗增殖活性。
举例来说，优选类似物如式(II)所示。
其中Y和Z相互独立，分别是O或N；R11和R12相互独立，分别是H、OH、Cl、Br、OCH3、OCF3、NO2或NH2；而n是2至6的整数，包括2和6；且R13和R14相互独立，分别位于间位或对位，选自一组包括以下的基团 其它类似物包括司替巴脒(G-1)及羟茋巴脒(G-2)以及它们的吲哚类似物(例如，G-3)。
各脒基部分可以被上述D-2、D-3、D-4或D-5所示基团之一所替代。如氯丙嗪和喷他脒的情形一样，司替巴脒及其相关化合物的盐在本发明的方法中也是有用的。优选的盐包括，例如，二盐酸盐和甲磺酸盐。
喷他脒代谢物喷他脒代谢物也有用于本发明之抗增殖药物联合疗法中。喷他脒在体内被迅速代谢成至少七种主要代谢物。这些代谢物中有些与喷他脒具有一项或一项以上的相同活性。喷他脒的某些代谢物在与氯丙嗪或其类似物联合用药时可能显示出抗增殖活性。
七种喷他脒代谢物表示如下
治疗本发明之化合物联合用药有益于肿瘤治疗。联合治疗可以单独或与其它治疗(例如，手术、放疗、化学疗法、生物疗法)结合进行。此外，具有较高的肿瘤发病危险的人(例如，具有遗传倾向者和先前患有肿瘤者)可以接受预防性治疗以抑制或减缓肿瘤发生。
各组分的给药剂量和频次可以分别控制。例如，一种化合物可能每天口服给药三次，期间第二种药物则可能每天肌内给药一次。还可将这些化合物一起制成制剂，使得两种组分一次给予。下文叙述剂型及剂量。
药用组合物制剂可以用任何合适的方式，给予联合用药的每个化合物而使得与其它化合物联合的该化合物在到达靶区域时产生特定的抗肿瘤作用的浓度。该化合物可以以任何合适的剂量存在于任何合适的载体物质中，其通常占组合物总重量的1-95％。可以以适合于口服、肠道外(例如，静脉内、肌肉内)、直肠、皮内、鼻腔、阴道、吸入、皮肤(贴片)或眼部给药途径的剂型，提供该组合物。由此，其组合物的剂型可以是例如，片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、包括水凝胶的凝胶剂、糊剂、软膏剂、乳膏剂、膏药、浸液、释药装置、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入剂、喷雾剂或气雾剂。药用组合物可按照常规制药准则配制(见，例如，RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，A.R.Gennaro主编(第19版)，1995，Mack Publishing Company，Easton，P.A.及Encyclopedia ofPharmaceutical Technology，J Swarbrick和J.C.Boylan主编，1988-1999，Marcel Dekker，New York)。
本发明的药用组合物可以被配制成给药时几乎即刻释放或在给药后的任何预定时间或时间段释放活性化合物的剂型。后一种类型的组合物被统称为控释制剂，其包括(i)在延长的时间段内建立基本恒定的体内药物浓度的制剂；(ii)在预定的滞后时间点之后确立延长的时间段内的基本恒定的体内药物浓度的制剂；(iii)通过保持体内相对恒定、有效的药物水平以保持在预定时间段内的药物作用，同时使所伴有的与活性药物血浆水平波动(锯齿形动力学图形)相关的副作用最小化的制剂；(iv)通过，例如，将控释制剂放置于特定的病变组织或器官附近或之中而使药物作用定位的制剂；以及(v)通过采用载体或化学衍生物而将药物释放于特定类型靶细胞中的药物靶向作用制剂。
以化合物的控释剂型给药的特别优选的情况是化合物，在单用或联用时，具有以下特点的情况，(i)狭窄的治疗指数(即，产生副作用或毒性作用的血浆浓度与产生治疗作用的血浆浓度之间的差异很小；通常，治疗指数，TI，被定义为半数致死量(LD50)与半数有效量(ED50)的比值)；(ii)窄短的胃肠道吸收部位；或(iii)很短的生物半衰期而需要每天多次给药以保持治疗水平的血浆水平。
可以运用多种方法的任何一种以获得控释制剂，在该制剂中所讨论的化合物的释放速率超过其代谢速率。在一个实例中，通过适当选择各种制剂参数和成分而获得控制性释放，其包括，例如，各种类型的控释组合物及包衣。因此，可将该药物与合适的赋形剂配制成药用组合物，在其对器官给药时，以控制性方式释放活性物质。实例包括单一或多单位剂量的片剂或胶囊组合物、油溶液、混悬剂、乳剂、微囊、微球、纳米粒、贴剂及脂质体。
口服使用的固体剂型口服用药的制剂包括含有与药学上可接受的无毒赋形剂混合的活性成分的片剂。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、淀粉(包括马铃薯淀粉)、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；制粒或崩解剂(例如，纤维素衍生物，包括微晶纤维素、淀粉(如马铃薯淀粉)、交联羧甲基纤维素钠、藻酸盐、或藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预凝胶化淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助流剂和抗粘剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石粉)。其它药学上可接受的赋形剂可以是着色剂、矫味剂、塑性剂、湿润剂、缓冲剂等等。
片剂可以无包衣或者用已知技术将它们包衣，任选在胃肠道内延缓崩解和吸收并由此获得更长时间段内的持续作用。可采用包衣以使以预定方式(例如，以获得控释制剂为目的)释放活性药物或可采用包衣以使直到通过胃部之后才释放药物(肠溶包衣)。包衣可以是糖包衣，薄膜包衣(例如，基于羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)，或肠溶包衣(例如，基于异丁烯酸共聚物、邻苯二甲酸醋酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、醋酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、聚醋酸邻苯二甲酸乙烯酯、虫胶和/或乙基纤维素)。此外，可以采用延时材料如，举例来说，单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
固体片剂组合物可以包括适合预防组合物之有害化学变化的包衣，(例如，活性药物释放之前的化学降解)。可以用类似于上述Encyclopedia of Pharmaceutical Technology中所描述的方法对固体剂型进行包衣。
两种药物可以混合于片剂中，或者可以分开。在一种实例中，第一种药物包含在片剂内部，而第二种药物在其外部，使得大部分的第二种药物的释放先于第一种药物的释放。
用于口服的制剂也可为咀嚼片或硬明胶胶囊，其中将活性成分与惰性固体稀释剂混合(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或白陶土)或软明胶胶囊，其中将活性成分与水或油性介质混合，例如，花生油、液体石蜡或橄榄油。粉末剂及颗粒剂可以采用上述片剂及胶囊项下的组分，按照常规方法，采用，例如，混合机、流化床设备或喷雾干燥设备制备。
控释口服剂型可将用于口服的控释组合物例如，制备成通过控制活性药物的溶解和/或扩散而释放活性药物的组合物。
控制释溶解或扩散的释放可以通过将化合物的片剂、胶囊、丸剂或颗粒制剂进行适当包衣实现，或者通过将所涉及的化合物与合适的基质混合实现。
控释包衣可以包括一种或一种以上的上述包衣材料和/或，例如，虫胶、蜂蜡、glycowax、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、十八烷醇、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、棕榈酰硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、dl-聚合乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、异丁烯酸甲酯、2-羟基异丁烯酸酯、异丁烯酸水凝胶、1，3-丁二醇、乙二醇异丁烯酸酯和/或聚乙二醇。在控释基质制剂中，所述基质材料也可以包括，例如，水合甲基纤维素、巴西棕榈蜡和十八烷醇、卡巴浦尔934、聚硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-异丁烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或卤代碳氟化合物。
含有一种或一种以上的要求联合用药的化合物的控释组合物也可以是漂浮片剂或胶囊剂型(即，一种片剂或胶囊剂，其在口服给药时，在一定的时间段内漂浮于胃内容物之上)。化合物的漂浮片剂制剂可以通过将药物与赋形剂及20％-75％w/w的水胶体，例如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素及羟丙基甲基纤维素，混合制粒制备。然后可以将所得颗粒压制成片剂。该片剂在与胃液接触时，环其表面形成基本不透水的凝胶屏障。此凝胶屏障参与维持较之更小的密度，因而使得片剂保持漂浮于胃液中。
口服给药的液体适合于通过加水制备的水溶性混悬液的粉末剂、可分散性粉末剂或颗粒剂是常用的口服给药剂型。混悬液制剂是将所述活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或一种以上的防腐剂混合。合适的分散剂或湿润剂有，例如，天然产物磷脂(例如，卵磷脂或环氧乙烷与脂肪酸、长链脂肪醇或脂肪酸的部分酯化产物的缩合物)和己糖醇或脱水己糖醇(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯等等)。合适的悬浮剂有，例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、藻酸钠等等。
肠道外组合物所述药用组合物还可以通过注射、滴注或植入(静脉内、肌内、皮下等)剂型、制剂或通过含有常规、无毒的药学上可接受的载体或辅料的合适的给药装置或植入剂而进行肠道外给药。此组合物的制剂与制备为药物制剂领域内技术人员所熟知。具体的制剂可以见于上述Remington；The Science and Practise of Pharmacy。
肠道外使用的组合物可以以单位剂量形式(例如，单剂量安瓿)存在，或者存在于含有几个剂量的小瓶中，并且可以加入合适防腐剂(参见下文)。这些组合物的剂型可以是溶液、混悬液、乳剂、输液装置或植入给药装置，或者其可以作为在使用前以水或其它合适的溶媒重新配制的干粉剂。除活性药物外，组合物可以含有合适的肠道外可接受的载体和/或赋形剂。可将这些活性成分配制成控释微球、微囊、纳米颗粒、脂质体等等。此外，这些组合物可以包括悬浮剂、助溶剂、稳定剂、pH调节剂和/或分散剂。
如上文所述，本发明的药用组合物可以是适合无菌注射的剂型。为制备这样的组合物，将合适的活性药物溶解或悬浮于一种肠道外可接受的液体溶媒中。在这些可接受的溶媒和溶剂中，可以采用的是水，通过加入适量盐酸、氢氧化钠或合适的缓冲液而调节至合适的pH值的水，1，3-丁二醇，林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。这些液体制剂还可以含有一种或一种以上的防腐剂(例如，对羟基苯甲酸的甲酯、乙酯或正丙酯)。在其化合物之一仅微溶或少量溶解于水的情况下，可以添加增溶剂或助溶剂，或者其溶剂可以含有10-60％w/w的丙二醇等。
肠道外控释组合物肠道外控释组合物可以是水溶性混悬液、微球、微囊、磁化微球、油性溶液、油性混悬液或乳化液。或者，可将所述活性药物结合到生物相容性载体、脂质体、纳米颗粒、植入剂或输液装置中。
用于制备微球和/或微囊的材料有，例如，可生物降解/可生物溶蚀的聚合物如polyglactin、聚(氰基丙烯酸酯异丁酯)、聚(2-羟乙基-L-谷氨酰胺)以及聚(乳酸)。
制备肠道外控释制剂时可以采用的可生物降解的载体有碳氢化合物(例如，右旋糖酐)、蛋白质(例如，白蛋白)、脂蛋白或抗体。
用于植入剂的材料可以是非生物降解的(例如，聚合二甲基硅氧烷)或可生物降解的(例如，聚(己内酯)、聚(乳酸)、聚(羟基乙酸)或聚(原酸酯))。
直肠组合物对于直肠内应用，组合物合适的剂型包括栓剂(乳化或混悬型)及直肠用明胶胶囊(溶液或悬浮液)。在典型的栓剂制剂中，其活性药物结合于合适的药学上可接受的栓剂基质如可可脂、酯化脂肪酸、甘油酸化明胶以及多种水溶性或分散性基质如聚乙二醇和聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。可以结合多种添加剂、促进剂或表面活性剂。
吸入组合物对于吸入给药，典型剂型包括鼻腔喷雾剂和气雾剂。在典型的鼻腔制剂中，活性成分被溶解或扩散于合适的溶媒中。其药学上可接受的溶媒及赋形剂(以及存在于该组合物中的其它药学上可接受的物质如稀释剂、促进剂、矫味剂及防腐剂)以药物制剂领域内技术人员所理解的方式，根据常规制药方法选择。
经皮及局部给药组合物所述药用组合物还可以以包括常规无毒的药学上可接受的载体及赋形剂(包括微球和脂质体)的剂型或制剂形式对皮肤局部用药，以供经皮吸收。这些制剂包括乳膏、软膏、洗剂、擦剂、凝胶、水凝胶、溶液、混悬剂、膏药、喷雾剂、糊剂、硬膏剂以及其它类型的透皮释药系统。所述药学上可接受的载体或赋形剂可以包括乳化剂、抗氧剂、缓冲剂、防腐剂、湿润剂、透皮促进剂、螯合剂、凝胶形成剂、软膏基质、芳香剂和皮肤保护剂。
乳化剂的实例有天然树胶(例如，阿拉伯胶或黄蓍树胶)及天然磷脂(例如，大豆卵磷脂和去水山梨糖醇单油酸酯衍生物)。抗氧剂的实例有丁基化羟基茴香醚(BHA)、抗坏血酸及其衍生物、生育酚及其衍生物、丁基化羟基茴香醚和半胱氨酸。防腐剂的实例有对羟基苯甲酸酯类，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯以及苯扎氯铵。湿润剂的实例有甘油、丙二醇、山梨糖醇和尿素。透皮促进剂的实例有丙二醇、DMSO、三乙醇胺、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、2-吡咯烷酮及其衍生物、四氢糠醇、及Azone.RTM。螯合剂的实例有EDTA钠、柠檬酸及磷酸。凝胶形成剂的实例有卡巴浦尔、纤维素衍生物、皂土、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮。软膏基质的实例有蜂蜡、石蜡、鲸蜡素、植物油、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇脂肪酸酯与环氧乙烷之间的缩合物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(吐温))。
上述皮肤局部给药之药用组合物还可以与所治疗的身体部位之上或附近的局部给药相联系。可将这些组合物直接应用于或引进到相关的身体入口(例如，直肠、尿道、阴道或口腔之入口)。应可通过特定的释药装置途径如包扎物或替换膏药、药垫、纱布、绷带或其它形式的合适的弹性材料，应用这些组合物。
控释经皮及局部给药组合物提供控制药物释放及透皮渗透速率的方法有数种，包括膜调制系统、粘附扩散控制系统、基质分散型系统及微型储库系统。控释经皮和/或局部给药组合物可以采用上述方法之合适的混合物获得。
在膜调制系统中，存放活性药物的储库完全包封于由药物不能透过的薄层，如金属塑压薄层，以及控速聚合物膜如微孔或无孔聚合物膜(例如，乙烯乙酸乙烯酯共聚物)所制成的窄浅隔层中。其活性化合物仅允许通过控速聚合物膜释放。在药物储库中，活性药物可以分散于固体聚合物基质中或混悬于粘性液体介质如聚硅酮流质中。在该聚合物膜外表面，应用一种粘附性聚合物薄层以实现透皮系统与皮肤表面的紧密接触。所述粘附性聚合物优选是与活性药物相容的低过敏性聚合物。
在粘附扩散控制系统中，活性药物储库的形成是通过将活性药物直接分散于粘附性聚合物中，然后将含有活性药物的粘附物涂布到药物实际不能透过的金属塑压的背衬薄层上，以形成一层薄的药物储库层来进行。基质分散型系统的特征是活性药物储库的形成是通过将活性药物彻底均匀地分布于亲水性或亲脂性的聚合物基质中，然后将含有药物的聚合物模制成为具有非常清晰的表面与厚度的圆片。将粘附性聚合物沿圆片四周涂布以形成粘附条带。
在微型储库系统中，活性药物储库的形成首先是将固体药物混悬于水溶性聚合物的水溶液中，然后将药物混悬液分散于亲脂性聚合物中以形成大量的储药微球进行。
剂量所要求的药物联合的各化合物的剂量取决于几种因素，包括给药方法、所治疗的疾病、疾病的严重性、是治疗还是预防疾病以及被治疗的患者的年龄、体重和健康。
这些化合物的优选给药剂量约为每天0.1-30mg/kg体重，更优选的剂量约为每天0.5-15mg/kg体重。如上文所述，所讨论的化合物可以以片剂、胶囊剂、酏剂或糖浆剂形式口服给药，或以栓剂形式直肠给药。进行化合物的肠道外给药的合适剂型是生理盐水溶液或将化合物结合于脂质体中的形式。当化合物自身溶解性不足以溶解时，可以应用助溶剂如乙醇。为达到说明之目的，下文说明氯丙嗪和喷他脒的剂量。本领域内的技术人员应当理解如果氯丙嗪或喷他脒被第二种药物替代，则其确切剂量可以通过检测该化合物在细胞增殖试验中的药效以及它在人体中的毒性而确定。
口服给药对于采用口服进行全身给药的氯丙嗪，其剂量通常是在一天至一年、甚至是患者之一生中，每次给药剂量约为1mg至1000mg(优选约5mg至500mg，且更优选约10mg至300mg)，每天给药1至10次(优选每天给药1至5次)，因为本发明之联合用药的作用主要为细胞抑制剂而不是细胞毒性剂，并且所表现的毒性低，慢性、长期给药可能适合于许多病例。必要时，最高剂量可为每天8g。
对于喷他脒，其剂量通常是在一天至一年，与氯丙嗪类似，甚至是患者一生中，每次给予约0.1mg至300mg的剂量(优选约1mg至100mg)，每天给药1至4次。给药也可以按周期给予，因而有一段喷他脒不给药的期间。这段期间可以大约是，例如，一天、一周、一个月、或一年或更长。
直肠给药对于采用直肠给药用于预防疾病的组合物，化合物剂量通常优选有一定程度的增加。因此，氯丙嗪的剂量通常是每次给药剂量约为5-2000mg(优选10mg至1000mg，更优选25mg至500mg)，每天给药1至4次。疗程与所述口服给药相同。喷他脒的剂量与所述的喷他脒口服给药剂量一致。
肠道外给药对于静脉内或肌内给药的氯丙嗪，推荐剂量约为每天0.1mg/kg至100mg/kg体重，优选剂量约1mg/kg至约25mg/kg，而最优选剂量约1mg/kg至约10mg/kg。喷他脒给药剂量约为0.1mg/kg至约20mg/kg，优选剂量为约0.5mg/kg至约10mg/kg，而更优选剂量为约1mg/kg至约4mg/kg。
各化合物通常每天给药直至约6-12个月或更长。一个化合物给药可能需要1至3个小时的时间，这段时间可以延长至持续24小时或更长。如口服给药所述，可以存在约一天至一年或更长的时段，期间不予给服至少一种药物。
吸入给药对于吸入给药，氯丙嗪约以每天1mg至1000mg的剂量给药，且优选每天约10mg至500mg的剂量。对于喷他脒，以每天约10mg至1000mg的剂量，且优选以约30mg至600mg的剂量给药。
经皮给药对于任一化合物的局部给药，通常优选以约1mg至约5g的剂量，每天1至10次给药一周至12个月。
下列实施例是对本发明的说明。它们不以任何方式对本发明构成任何限制。
实施例1制备氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒稀释矩阵用二甲基亚砜(DMSO)配制浓度分别为的11.25mM和6.74mM氯丙嗪和羟乙磺酸喷他脒(Sigma目录号分别为C8138和P0547)的储存液。用含有10％胎牛血清(FBS)、200mM L-谷氨酰胺及1％抗生素/抗菌素溶液的Dulbecco’s改进的Eagle培养基(DMEM)(Gibcol1995-040)配制各化合物的8倍浓度储存液(128μM)。用DMEM从该溶液中配制2倍稀释液系列。该系列提供从64μM到240nM范围内的9个浓度及一个0M浓度。制备该化合物的混合物矩阵是采用16通道移液器(Finnpipette)，以氯丙嗪的系列稀释液按列填充384-孔板(第一列32μM；第二列16μM；第三列8μM；第四列4μM；第五列2μM；第六列1μM；第七列500nM；第八列250nM；第九列125nM；及第十列无化合物)，并按行填充喷他脒系列稀释液(第一列32μM；第二列16μM；第三列8μM；第四列4μM；第五列2μM；第六列1μM；第七列500nM；第八列250nM；第九列125nM；及第十列无化合物)。此化合物混合板提供将被转移到检测板的4倍浓度的各化合物。因此，该稀释矩阵含有100种不同的点--81个孔存在不同量的氯丙嗪和喷他脒，以及每个化合物各有10个系列稀释点(2-倍)。
实施例2抗增殖活性检测采用A549溴代脱氧尿苷(BrdU)细胞印迹法检测所述化合物稀释矩阵。采用多头滴管(Labsystems)，将45微升含有A549肺腺癌细胞(ATCC#CCL-185)的混悬液植入无菌处理的白色不透明聚苯乙烯384孔板(NalgeNunc#164610)中，使其密度为每孔3000个细胞。将15微升的混合矩阵中的4倍浓度的化合物加入到含有细胞的培养板的每个孔中。采用16通道移液器(Finnpipette)转移混合矩阵中的化合物。此外，在每个培养板上紫杉醇(终浓度4.6μM)、鬼臼毒素(9.6μM)和阿的平(8.5μM)对照孔。各实验均以3块平行板进行。
37℃下孵育48小时后，每孔以10μM浓度的加入BrdU。16小时后，吸出培养基，并在室温下加入70％乙醇和磷酸缓冲液(PBS)，将细胞固定1小时。吸出固定液，每孔加入含吐温20(聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)的2N HCl，将培养板在室温下孵育20分钟。以2N NaOH中和HCl，将细胞用Hank氏平衡盐溶液(HBSS)洗涤两遍，再用含0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.1％吐温20的PBS洗涤一遍。弃去洗涤溶液，将小鼠抗-BrdU初级抗体(PharMingen#555627)按1∶1000稀释于含BSA、吐温20以及1∶2000稀释的二级抗体(Amersham # NA931)的PBS中。该二级抗体识别小鼠抗体并与山葵过氧化物酶(HRP)结合。孵育1小时后，移去抗体溶液，将细胞用PBS洗涤一遍。PBS洗涤后，向每个孔中加入HRP底物(其含有鲁米诺、过氧化氢以及促进剂如对碘苯酚)。采用LJL分析仪检测培养板。所有抽吸以及以PBS及HBSS洗涤均采用TECAN Power Washer 384进行。各个孔的发光量代表在这个孔中发生的DNA合成量。光线减弱表明该化合物的抗增殖活性。
将氯丙嗪/喷他脒稀释矩阵中各个位置的荧光除以仅用DMSO溶媒处理的A549细胞的荧光值，得到氯丙嗪/喷他脒稀释矩阵中各个位置的抗增殖比值。也计算紫杉醇、鬼臼毒素及阿的平的抗增殖比值，并用于比较。
表-抗增殖比值喷他脒浓度(μM)
在4.0μM下，单用羟乙磺酸喷他脒产生的抗增殖比值为3.9，在浓度加倍到8.0μM时，该比值上升到4.9。四微摩尔的氯丙嗪产生2.9的比值，并且该比值在浓度加倍到8.0μM时没有进一步增加。当4.0μM的喷他脒与4.0μM氯丙嗪联合进行实验(两种化合物总量为8.0μM)时，抗增殖比值达到了9.7。
在另一项分析中，单一化合物的强度受到另一个化合物存在的影响。喷他脒单用时所达到的最大抗增殖比值为4.9(在8.0μM下)，而这个值可见于在1μM喷他脒与低到125nM的氯丙嗪联合应用时，使达到此作用所需的两种药物总量显著减少。
我们证实氯丙嗪与羟乙磺酸喷他脒联合使用可阻止A549细胞生长而不是杀死它们。将A549细胞植入6-孔板中，并以各4μM的药物处理72小时。更换培养基，将细胞培养7天(以一种培养基更换)，此时对细胞计数并测定活性。未处理细胞在7天后已经生长至融合，而氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒处理的细胞没有生长，但却保持接近其植入时的密度。此外，氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒处理的细胞中的95％仍然有活性，仅比未处理细胞有少量减少。
这种联合用药对于正常的肺成纤维细胞(MRC9)活性有很小或没有影响。下文叙述的对照实验证明了这一点。将MRC9细胞植入384孔板以融合。加入氯丙嗪/羟乙磺酸喷他脒矩阵之稀释液以获得一系列交叠的两倍稀释的12×12矩阵，各化合物的最大剂量为16μM。将细胞与化合物孵育48小时，其后将6μL的Alamar Blue活性染料加入到各个孔中。将细胞与染料再孵育4小时。被还原的染料的数量采用Analyst AD通过荧光测定。无荧光(氧化的)形式的染料被活细胞还原成荧光形式。因此，没加化合物的孔与加入了化合物的孔之间的荧光比值与化合物导致的细胞死亡量成比例。在这项实验中，直至各药物浓度达到16μM时，仍没有毒性作用。而在低浓度时即发现其抗增殖作用。
采用其它癌细胞系可以类似地证明用A549细胞证实的抗增殖作用，例如MCF7乳腺癌、PA-1卵巢畸胎癌、HT29结肠直肠腺癌、H1299大细胞癌、U-2OS骨癌、U-373MG成胶质细胞瘤、Hep-3B肝细胞癌、BT-549乳腺癌、T-24膀胱癌、C-33A宫颈癌、HT-3转移性宫颈癌、SiHa宫颈鳞状细胞癌、CaSKi表皮样宫颈癌、NCI-H292粘液表皮样肺癌、NCI-2030、非小细胞肺癌、HeLa、宫颈上皮腺癌、KB口腔上皮腺癌、HT1080上皮纤维肉瘤、Saos-2上皮性骨癌、PC3上皮性前列腺癌、SW480结肠直肠癌、CCL-228及MS-751表皮样宫颈癌细胞系。可以通过采用如NHLF肺成纤维细胞、NHDF表皮成纤维细胞、HMEC乳腺上皮细胞、PrEC前列腺上皮细胞、HRE肾上皮细胞、NHBE支气管上皮细胞、CoSmC结肠平滑肌细胞、CoEC结肠内皮细胞、NHEK表皮角质细胞以及骨髓细胞，试验其特异性。
其它实施方案上述说明书提及的全部文献和专利均结合到本说明书中作参考。本发明所述方法和系统在不脱离本发明之范围和实质下的多种调整和变化对于本领域内的技术人员是显而易见的。尽管本发明已经描述了相关的具体的优选实施方案，但应当理解本发明之权利要求不应当受到这些特定实施方案的限制。事实上，为分子生物学或相关领域内的技术人员所显而易见的对进行本发明的所述方法的调整均在本发明的范围之内。
权利要求
1.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括将足以抑制所述肿瘤生长的量的氯丙嗪和喷他脒同时或在14天内分别给予所述患者。
2.权利要求1的方法，其中氯丙嗪和喷他脒在十天内分别给予。
3.权利要求2的方法，其中氯丙嗪和喷他脒在五天内分别给予。
4.权利要求3的方法，其中氯丙嗪和喷他脒在二十四小时内分别给予。
5.权利要求1的方法，其中所述肿瘤是癌症。
6.权利要求5的方法，其中所述癌症是肺癌。
7.权利要求6的方法，其中所述肺癌选自鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌。
8.权利要求5的方法，其中所述癌症选自脑癌、乳癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肾癌、白血病、肝癌、淋巴癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌和子宫癌。
9.权利要求1的方法，其中氯丙嗪和喷他脒通过静脉内、肌内、吸入、直肠或口服给予所述患者。
10.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括给予所述患者(a)第一种化合物，其选自丙氯拉嗪、奋乃静、甲哌啶嗪、左美丙嗪、乙酰丙嗪、乙酰哌非纳嗪、培拉嗪、丙酰异丙嗪、putaperazine、硫乙哌丙嗪、甲氧丙嗪、chlorfenethazine、氰甲丙嗪、奋乃静庚酸脂、三氟拉嗪、硫利达嗪和norchlorpromazine；和(b)第二种化合物，其选自普罗帕脒、丁氧苯脒、庚氧苯脒、壬氧苯脒、司替巴脒、羟茋巴脒、二脒那秦、苯甲脒、4，4’-(五亚甲基二氧基)二-，二盐酸盐、氧二苯脒、双溴丙脒、1，3-双(4-脒基-2-甲氧基苯氧基)丙烷、纺锤菌素、偏端霉素、氧二苯脒，双脒苯脲、博来霉素、放线菌素D和柔红霉素；其中所述第一种和第二种化合物同时或在14天内分别给予，其中所述第一种和第二种化合物以足以抑制所述肿瘤生长的量给予。
11.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括给予所述患者a)具有式(I)的第一种化合物 其中R2选自一组包括以下的基团 R10选自包括以下的基团 R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的每一个独立为H、OH、F、OCF3或OCH3；且W是选自包括以下的基团 以及b)具有式(II)的第二种化合物 其中Y和Z相互独立，各自为O或N；R11，和R12相互独立，各自为H、Cl、Br、OH、OCH3、OCF3、NO2及NH2；n是2至6的整数，包括2和6；且R13和R14各自独立选自包括以下的基团 其中所述第一种和第二种化合物以足以抑制所述肿瘤生长的量同时或在14天内分别给予。
12.一种治疗肿瘤患者的方法，所述方法包括给予所述患者一种药用组合物，它包括(i)共同降低所述肿瘤细胞增殖的剂量的氯丙嗪和喷他脒，及(ii)药学上可接受的载体。
13.权利要求12的方法，其中氯丙嗪以10至2500毫克的剂量给予和喷他脒以1至1000毫克的剂量给予。
14.权利要求12的方法，其中所述组合物通过静脉内、肌内、吸入、直肠或口服给予所述患者。
15.一种包括氯丙嗪、喷他脒以及药学上可接受的载体的药用组合物，其中氯丙嗪、喷他脒的存在量是，当一起给予肿瘤患者时，能减少所述肿瘤的细胞增殖的量。
16.权利要求15的组合物，其中氯丙嗪的剂量为10至2500毫克，而喷他脒的剂量为1至1000毫克。
17.权利要求15的组合物，其中所述组合物被配制成通过静脉内、肌内、直肠吸入或口服给予患者的制剂。
18.一种包括氯丙嗪和喷他脒的药用制剂盒。
19.权利要求18的药用制剂盒，其中氯丙嗪和喷他脒以各自的剂量分别配制。
20.权利要求18的药用制剂盒，其中氯丙嗪和喷他脒以各自的剂量在一起配制。
全文摘要
本发明以治疗癌症或其它肿瘤患者的方法为特征，其分别以足以抑制肿瘤生长的剂量同时或在14天内分别对患者给予(i)氯丙嗪或其代谢物或类似物；以及(ii)喷他脒或其代谢物或类似物。
文档编号A61K31/54GK1484525SQ01821723
公开日2004年3月24日 申请日期2001年10月30日 优先权日2000年11月6日
发明者A·波里西, C·凯斯, M·A·福利, B·R·斯托克维尔, A 波里西, 斯托克维尔, 福利 申请人:康宾纳特克斯公司
最新回复(0)