用于治疗癌症的新抗体的制作方法
专利名称：用于治疗癌症的新抗体的制作方法
用于治疗癌症的新抗体背景技术
本发明涉及新抗体，特别是鼠源的单克隆抗体，其为嵌合的和人源化的，并且 能够抑制肿瘤的生长，还涉及编码这些抗体的氨基酸和核酸序列。根据特别的方面，本 发明涉及新抗体、衍生的化合物或功能性片段，它们能够抑制肿瘤细胞的增殖。本发明 还包括这些抗体作为用于预防性和/或治疗性治疗癌症的药物的用途以及在癌症诊断方 法或试剂盒中的用途。最后，本发明包括含有与例如抗癌试剂和/或抗体有关的这样的 抗体或与毒素偶联的这样的抗体的产品和/或组合物，以及其在预防和/或治疗某些癌症 中的用途。
CD151，还称为PETA-3或SFA-1，是属于四旋蛋白(tetraspanin)家族的膜蛋白 (Boucheix 禾Π Rubinstdn，2001，Cell Mol.Life Sci.58, 1189-1205 ； Hemler，2001，J.Cell Biol.155, 1103-1107)。在人类中，CD151具有253个氨基酸且包括4个膜片段和2个细 胞外结构域ECl (18个氨基酸，序列[40-57])和EC2 (109个氨基酸，序列[113-221])，其 还称为细胞外环。但是需要注意的是，在核苷酸序列中，迄今已经有两个CD151的变体 被鉴定，即分别在位置395和409上具有核苷酸A和C的一个[Fitter等人，1995，Blood 86(4), 1348-1355],以及在相同的位置上具有核苷酸G和T而不是核苷酸A和C的另一 个[Has^awa等人，1996，J.Virol.70 (5), 3258_3沈3]。结果是在肽序列中可以观察到突 变，即分别在位置132和137上的残基K(Lys)和P(Pro)至残基R(Arg)和S 的突 变[Fitter 等人，1995，Blood 86 (4), 1348_i;355/Has^awa 等人，1996，J.Virol.70 (5)， 3258-3263]。
CD151 在许多癌症中如例如肺癌[Tokuhara 等人，2001，Clin.Cancer Res.7, 4109-4114],结肠癌[Hashida 等人，2OO3，Br.J.Cancer 89, 158-167],前列腺癌[Ang 等 人，2004，Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev.13, 1717-1721]或胰腺癌[Gesierich 等人， 2005，Clin.Cancer Res.ll，沘40_2852]中过表达。
使用不表达CD151的敲除小鼠以及使用抗CD151抗体和siRNA从而在体外 阻断CD151在各种类型细胞中的功能和表达已经显示CD151参与一些与癌症相关的 现象，如细胞粘附(Nishiuchi 等人，2005，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102, 1939-1944 ； Winterwood 等人，2006，Mol.Biol.Cell 17，2707-2721)、细胞运动性(Kohno 等人， 2002，Int.J.Cancer 97，336-343)、细胞迁移(Yauch 等人，1998，Mol.Biol.Cell 9， 2751-2765 ； Testa 等人，1999，Cancer Res.59, 3812-3820; Penas 等人，2000，J.Invest. Dermatol. 114, 1126-1135 ； Klosek 等人，2005，Biochem.Biophys.Res.Commun.336， 408-416)、细胞侵入(Kohno 等人，2002，Int.J.Cancer 97，336-343 ； Shiomi 等人， 2005，Lab.Invest.85，1489-1506 ； Hong 等人，2006，J.Biol.Chem.281, 24279-24292)和 血管发生(Yanez-Μο 等人，1998，J.Cell Biol.141, 791-804 ； Sincock 等人，1999，J.Cell Sci.112, 833-844 ； Takeda 等人，2007，Blood 109，1524-1532)。
四旋蛋白的一个显著性质是其自我之间形成连接以及还与大量的其它表面分子 形成连接从而形成有结构的大分子复合物的能力。在这些复合物中，每个四旋蛋白与一个或多个表面分子特异性结合，因此形成由四旋蛋白和伴侣分子组成的一级复合物。四 旋蛋白能够构成质膜的特殊微结构域，其可以自微结构域募集其伴侣分子，所述伴侣分 子可以是功能上偶联的。一套涉及四旋蛋白的相互作用被称为“四旋蛋白网络”或“四 旋蛋白网”。
CD151在细胞表面上与各种膜蛋白相互作用。特别地，已经鉴定了高度稳定的 与层粘连蛋白受体整合素的复合物，更特别地与整合素α3β1或α6β4(其优选的配体 是层粘连蛋白5)的复合物，其对某些去污剂有抗性(Yauch等人，1998，Mol.Biol.Cell 9，2751-2765 ； Lammerding 等人，2003，Proc.Natl.Acad.Sci USA 100，7616-7621)。 这种连接涉及CD151的细胞外结构域和整合素。位于EC2环中的CD151的序列 QRD[194-196]是非常重要的，其原因在于由于该位点突变引起的连接造成某些整合素的 相互作用的缺失(Kazarov等人，2002，J.Cell Biol.158, 1299-1309)。另外已经在肿瘤 细胞中鉴定了 CD151/整合素α 6 β 4/C-Met(HGF受体)的功能性三元复合物(Klosek等 人，2005，Biochem.Biophys.Res.Commun.336，408-416)。用干扰 RNA 处理细胞引起的 CD151表达的抑制引起对由HGF引起的细胞生长和迁移的抑制。
在特定细胞中的CD151和其它四旋蛋白之间的相互作用(对于形成四旋蛋白网 络是必须的)被认为依赖于CD151的膜和细胞质区，因为已经显示EC2环的删除不破坏 CD151 和其它四旋蛋白的连接(Berditchevski，2001，J.Cell Sci. 114，4143-4151)。
CD151能够通过调节各种信号途径如例如经过与PI4激酶的连接的磷酸肌醇途 径(Yauch 等人，1998，Mol.Biol.Cell 9，2751-2765)，经过 FAK、Src> p38_MAPK 和 JNK 的磷酸化的 c-Jun 信号途径(Hong 等人，2006，J.Biol.Chem.281, 24279-24292)，由 PKC 磷酸化整合素(Zhang 等人，2001，J.Biol.Chem.276, 25005-25013)以及 Rho 家族的 GTRise的激活(Shigeta等人，2003，J.Cell Biol. 163，165-176)调节细胞粘附、迁移和侵 入的现象。
细胞间嗜同性类型的相互作用也是细胞运动性增加和金属蛋白酶MMP-9表 达增加的原因(Hong 等人，2006，J.Biol.Chem.281, 24279-24292) 这些细胞间 CD151-CD151相互作用通过FAK、Src> p38_MAPK和JNK的磷酸化带来c_Jun的激活。
尽管对CD151蛋白有兴趣，至今产生了两个治疗目的的抗体，即单克隆抗体 50-6和SFA1.2B4。这两个抗体有相当的活性。虽然它们在动物模型中确实抑制转移的 体内形成，但是已经确定其在体内对肿瘤生长无作用。
针对CD151的单克隆抗体50-6 (IgGl同种型)通过用人表皮样癌HEp_3细胞的 消减免疫法在小鼠中产生CTesta等人，1999，Cancer Res.59, 3812-3820)。
抗体50-6能够在由bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)引起的绒毛膜尿囊膜新血 管形成的模型中在体外抑制人宫颈癌HeLa细胞(经转染从而过表达CD151)和HEp_3细 胞的迁移和血管生成。在体内其可以抑制由两个鸡胚模型中接种HEp-3细胞带来的转移 CTesta等人，1999，Cancer Res.59, 3812-3820)。在这些模型中，抗体50-6的抑制活性 通过测定肺提取物中的蛋白huPA(人尿激酶型纤溶酶原激活剂)的活性而确定。根据作 者，这一分析反应了人细胞在肺中的存在。分析后，由抗体50-6带来的转移(HEp-3细 胞向鸡胚肺中的扩散)的减少通过与对照抗体比较，在所谓的“自发转移”模型中被估 计为74% (其中先接种细胞，接着注射抗体)，在所谓的“实验转移”模型中被估计为57% (其中细胞和抗体一起接种)。根据作者，在体内观察到的抗体50-6的抗肿瘤性质似 乎与细胞抑制或细胞毒效应无关，因为抗体对HEp-3细胞的体外增殖未显示出有效应。
产生抗体50-6的杂交瘤可以在ATCC获得，编号为CRL_2696(杂交瘤最初在编 号 50-6[PTA-227]下保存)。
抗CD151单克隆抗体SFA1.2B4(IgGl同种型)在通过腹腔内途径用转染了人 CD151基因的NIH 3T3细胞免疫后在小鼠中产生(Hasegawa等人，1996，J.Virol.70, 3258-3263)。抗体SFA1.2B4能够在体外抑制各种人肿瘤细胞系的细胞侵入和迁移(Kohno 等人，2002，Int.J.Cancer 97，336-343)。其在体内抑制经转染而过表达CD151的结肠 癌RPMI14788和纤维肉瘤HT1080细胞系引起的肺转移(Kohno等人，2002，Int.J.Cancer 97， 336-343)。
其它鼠抗CD151抗体已经在文献中有描述，如例如单克隆抗体14A2H1 (Ashman 等人，1991，Br.J.Haematol.79, 263-270 ； Roberts 等人，1995，Br.J.Haematol.89, 853-860)、TS151 和 TS151RXSerra 等人，1999，Biochem.J.340, 103-111; Geary 等人， 2001，Tissue Antigens 58，141-153 ； Charrin 等人，J.Biol.Chem.276，14329-14337; Chometon等人，2006，Exp.Cell Res.312，983-985)。对那些各种的抗体没有体内抗肿瘤 活性的描述。
几个实验研究显示了四旋蛋白通过作为转移的抑制子或促进子起作用在转移的 形成中有主要作用。因此，转染四旋蛋白如CD9、CD63或CD82减少了癌系的转移潜 能。相反，表达四旋蛋白CD151和Co_(^9似乎产生相反的效果。因此这两种四旋蛋白 被认为是转移的促进子。这些结果与各种临床研究一致，所述研究显示在许多癌症中 (乳腺癌、肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、黑色素瘤，…)， 当有转移时，CD9和CD82在原发肿瘤中表达较低，并且其表达的降低预测了较低的存活 率。在肺癌中，与当只有这两种抗原中的一种表达降低时相比，CD9和CD82表达的联 合降低与更大的转移潜能相关。
几个以往的研究显示过表达CD151与某些癌症如肺癌、结肠癌和前列腺癌的侵 占性相关，并且其可以被认为是不良预后的一个因素(Tokuhara等人，2001，Clin.Cancer Res.7，4109-4114 ； Hashida 等人，2003，Br.J.Cancer 89，158-167 ； Ang 等人，2004， Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev. 13, 1717-1721)。在这些病例中，与那些具有不表达 CD151的肿瘤的患者相比，事实上在那些具有表达CD151的肿瘤的患者中平均存活率降 低。
通过转染相应基因而产生的CD151在各种人肿瘤系(HeLa、RPMI14788、 A172、HT1080)中的过表达造成经转染细胞的运动性、迁移和侵入的增加CTesta等人， 1999，Cancer Res.59, 3812-3820; Kohno 等人，2002，Int.J.Cancer 97，336-343)。这些 现象在存在抗CD151抗体时得到抑制。
根据第一个方面，本发明涉及分离的抗体，或一个其衍生的化合物或功能性片 段，其能够与CD151蛋白结合，所述抗体的特征在于其含有至少一个选自序列SEQ ID No. 1-6, 17-22，33-35，43-48，59-63，69-73，79-81 或 85-89 的 CDR 的 CDR 或至 少一个其序列与序列 SEQ ID No.1-6，17-22，33-35，43-48，59-63，69-73，79-81 或 85-89(在最佳比对后)具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性的CDR。
根据本发明的抗体的“功能性片段”被理解为特别地是指抗体片段如Fv， scFv(sc 代表“单链”)，Fab，F(ab' )2，Fab'或 scFv-Fc 片段或双特异抗体(diabody)或任何其半衰期增加的片段。这样的功能性片段将在本说明书的下文中详细描述。
根据本发明的抗体的“衍生的化合物”被理解为特别地是指结合蛋白质，其含 有肽框架或“骨架”和至少一个原始抗体的CDR以便保持其识别能力。这样的衍生的 化合物对本领域技术人员是熟知的，并将在本说明书中的下文更详细地描述。
更优选地，根据本发明，本发明包括抗体，其衍生的化合物或其功能性片段， 其特别是嵌合的或人源化的，通过遗传重组或通过化学合成获得。
根据优选的具体实施方案，根据本发明，抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段的特征在于其由单克隆抗体组成。
“单克隆抗体”被理解为由一群基本上同质的抗体衍生的抗体。更特别地， 除了几个可能的可以天然产生的突变和可以以最小量存在的突变以外，一群中的单个抗 体是相同的。换句话说，单克隆抗体由只有一个细胞克隆增殖产生的同质抗体组成(例 如，杂交瘤、转染了编码同质抗体的DNA分子的真核宿主细胞、转染了编码同质抗体的 DNA分子的原核宿主细胞等)并且通常其特征为一类和同类和亚类的重链和仅一种类型 的轻链。单克隆抗体是高度特异性的并且针对单一抗原。另外，与通常含有不同的针 对不同决定簇或表位的抗体的多克隆抗体制备相反，每个单克隆抗体针对抗原的单一表 位。
本文中必须理解的是本发明不涉及天然形式的抗体，就是说，其不是从其天然 环境中取得而是可能通过从天然来源起始的纯化而分离或获得，否则通过遗传重组或通 过化学合成而获得，并且因此其可以含有非天然的氨基酸如下文所述。
更特别地，根据本发明的第一个具体实施方案，描述了第一个抗体，其特征在 于其含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ IDNo. 1或59的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.l或59具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3是序列SEQ ID No.3的或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No.3具有至 少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.4或61具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.5或62的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.5或62具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.6或63的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.6或63具有至少80%同一性的序列。
根据本发明的第二个具体实施方案，描述了第二个抗体，其特征在于其含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ ID No. 17或69的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No. 17或69具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自序列SEQ ID No.18或70的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.18或70具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3是序列SEQ ID No. 19或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No. 19具有至 少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.20或71的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.20或71具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.21或72的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.21或72具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.22或73的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.22或73具有至少80%同一性的序列。
根据本发明的进一步的第三个具体实施方案，描述了第三个抗体，其特征在于 其含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ ID No.33或79的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.33或79具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3的序列是SEQ ID No.3或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No.3具有至 少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.4或61具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.34或80的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.34或80具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.35或81的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.35或81具有至少80%同一性的序列。
最后，根据本发明的最后的具体实施方案，描述了第四个抗体，其特征在于其 含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ ID No.43或85的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.43或85具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自序列SEQ ID No.44或86的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.44或86具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3的序列是SEQ ID No.45或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No.45具有 至少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.46或87的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.46或87具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.47或88的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.47或88具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.48或89的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.48或89具有至少80%同一性的序列。
以通常的方式在此回顾CDR区或CDR被理解为表示免疫球蛋白的重链和轻链 的高度可变区。有3个重链CDR和3个轻链CDR。本文中使用的术语CDR或CDRs是 指，根据特别的情况，那些区中的一个或那些区中的多个或实际上全部(其含有大多数 氨基酸残基)负责抗体对抗原或其识别的表位的结合亲和力。
根据第一个方法，CDR可以根据IMGT系统定义。定义了 IMGT独特的编号 系统以便比较可变结构域，不论什么抗原、链类型或物种[Lefranc M.-P.，Immunology Today 18，509(1997) ； Lefranc M-P., The Immunologist, 7，132-136(1999) ； Lefranc, Μ.-P., Pommie, C.，Ruiz, M., Giudicelli, V.，Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.and Lefranc, Dev.Comp.Immunol., 27, 55-77(2003)]。 在这一编 号系统中，保守的氨基酸总是维持在相同的位置，如半胱氨酸23 (第一个CYS)、色氨 酸41 (保守的TRP)、疏水氨基酸89、半胱氨酸104(第二个CYS)、苯丙氨酸或色氨酸 118 (J-PHE或TRP)。因此IMGT独特的编号系统提供了标准的骨架区(FR1-IMGT 位 置 1 至洸，FR2-IMGT 位置 39 至 55，FR3-IMGT 位置 66 至 104 和 FR4_IMGT 位置 118至128)以及互补决定区或CDR(CDR1_IMGT 位置27至38，CDR2-IMGT 位置56 至65和CDR3-IMGT 位置105至117)的界定。因为“孔”或“空”代表空闲位置， 根据IMGT的CDR的长度成为关键的信息。IMGT系统用于2D图像表示，其然后被称 为 IMGT 珍珠项链[Ruiz，Μ.和 Lefranc，M.-R，Immunogenetics，53，857-883(2002)； Kaas, Q.和Lefranc，M.-P., CurrentBioinformatics, 2，21-30(2007)],用于3D结构被称 为 IMGT/3D 结构 _DB[Kaas，Q.，Ruiz, Μ.和 Lefranc，M.-P., T cell receptor and MHC structural data.Nucl.Acids.Res., 32，D208—D210 (2004)]。
根据该第一方法，根据本发明的第一个抗体或一个其衍生的化合物或功能性片 段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.l、2和3的 CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.l、2禾Π 3具 有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别选自 序列SEQ ID Nos.4、5禾Π 6的CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR，或在最佳比对后 与序列SEQIDNos.4、5和6具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.lASVEYYGTSL
SEQ ID No.2EAS
SEQ ID No.3QQSRKAPYT
SEQ ID No.4GFTFSTYT
SEQ ID No.5ISSGGGTT
SEQ ID No.6ATPRIGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.l、2和3的三个CDR(根据IMGT 定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.l、2和3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
以同样优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.4、5和6的三个CDR (根据IMGT定义)， 或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.4、5和6具有至少80%，优选85%，90%, 95%和 98%的同一性。
根据该相同的方法，根据本发明的第二个抗体，或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.17、18和 19的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.17、18 和19具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个 分别选自序列 SEQ ID Nos.20、21 和 22 的 CDR-Hl、CDR-H2 禾口 CDR-H3 的 CDR，或 在最佳比对后与序列SEQIDNos.20、21和22具有至少80%，优选85%，90%, 95%和 98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No. 17 ATPRIGTGFAY
SEQ ID No. 18 SAS
SEQ ID No. 19 QQYSSNPT
SEQ ID No.20 GFTLSTSGMG
SEQ ID No.21 IYWDDDK
SEQ ID No.22 ARRDHYGDYSYAMDY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQIDNos.17、18和19的三个CDR(根 据IMGT定义)，或在最佳比对后与序列SEQIDNos.17、18和19具有至少80 %，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.20、21和22的三个CDR(根据IMGT定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.20、21和22具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
还根据该相同的方法，根据本发明的第三个抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID No.33、2和3 的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.33、2和 3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别 选自序列SEQIDNo.4、34和35的CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR，或在最佳比 对后与序列SEQIDNo.4、；34和；35具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一 性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.33 ASVDYYGTSL
SEQ ID No.34 ISSGGVTT
SEQ ID No.35 TSPRTGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQIDNos.33、2和3的三个CDR (根据IMGT 定义)，或在最佳比对后与序列SEQIDNos.33、2和3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.4、34和35的三个CDR(根据IMGT定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.4、；34和35具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
最后，还根据该相同的方法，根据本发明的第四个和最后的抗体或一个其衍生 的化合物或功能性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.43、44和45的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列 SEQIDNos.43、44和45具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所 述重链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.46、47和48的CDR-H1、CDR-H2和 CDR-H3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.46、47和48具有至少80%，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID Νο.43 ENVGTY
SEQ ID Νο.44 GAS
SEQ ID Νο.45 GQTYSFPYT
SEQ ID Νο.46 GYTFTSSS
SEQ ID Νο.47 IHPNSGNT
SEQ ID Νο.48 ARARSFYYAMDC
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.43、44和45的三个CDR(根 据IMGT定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.43、44和45具有至少80 %，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.46、47和48的三个CDR(根据IMGT定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.46、47和48具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
根据第二个方法，CDR可以根据Kabat等人的常规方法定义(Kabat等人， Sequences of proteins of immunological interest,第五版本，U.S.Department of Health and Human Services, NIH, 1991，和以后版本)。
根据该第一个方法，根据本发明的第一个抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.59、60和3 的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.59、60和 3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别选自序列 SEQ ID Nos.61、62 和 63 的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 的 CDR，或在最佳 比对后与序列SEQIDNos.61、62和63具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.59 RASASVEYYGTSLMH
SEQ ID No.60 EASNVES
SEQIDNo.61 STYTMS
SEQ ID No.62 YISSGGGTTYYPDTVKG
SEQ ID No.63 PRIGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQIDNos.59、60和3的三个CDR(根据Kabat 定义)，或在最佳比对后与序列SEQIDNos.59、60和3具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.61、62和63的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.61、62和63具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
根据该相同的方法，根据本发明的第二个抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.69、70和19 的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.69、70和 19具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别 选自序列 SEQ ID Nos.71、72 和 73 的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 的 CDR，或在最佳 比对后与序列SEQIDNos.71、72和73具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的 同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.69 KASQNVGIAVA
SEQ ID No.70 SASNRYT
SEQIDNo.71 STSGMGVS
SEQ ID No.72 HIYWDDDKRYNPSLKS
SEQ ID No.73 RDHYGDYSYAMDY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.69、70和19的三个CDR(根 据Kabat定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.69、70和19具有至少80%，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.71、72和73的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.71、72和73具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
还根据该相同的方法，根据本发明的第三个抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.79、60和 3的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.79、60 和3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分 别选自序列 SEQIDNos.61、80 和 81 的 CDR-Hl、CDR-H2 禾口 CDR-H3 的 CDR，或在最 佳比对后与序列SEQ ID Nos.100、101和102具有至少80%，优选85%，90%, 95%和 98%的同一性。
为更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID Νο.79 ASVDYYGTSL
SEQ ID Νο.80 YISSGGVTTYYPDTIKG
SEQIDNo.81 PRTGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.79、60和3的三个CDR(根据Kabat 定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.79、60和3具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.61、80和81的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.61、80和81具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
最后，还根据该相同的方法，根据本发明的第四个和最后的抗体或一个其衍生 的化合物或功能性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自SEQ ID No.85、86和45的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ IDNos.85、86和45具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重 链含有至少一个分别选自SEQ ID Nos.87、88和89的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3 的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.87、88和89具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.85 KASENVGTYVS
SEQ ID No.86 GASNRYTGVPD
SEQ ID No.87 TSSSMH
SEQ ID No.88 EIHPNSGNTNNNEKFKG
SEQ ID No.89 ARSFYYAMDC
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ IDNos.85、86和45的三个CDR(根据 Kabat定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.85、86和45具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID No.87、88和89的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.87、88和89具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
在本说明书中，术语“多肽”、“多肽序列”、“肽”和“与抗体化合物结合的蛋白质或其序列”是可以互换的。
本文中必须理解的是本发明不涉及天然形式的抗体，就是说，其不是从其天然 环境中获得的，而是可以通过从天然来源起始的纯化而被分离或获得，否则通过遗传重 组或通过化学合成而获得，并且因此其可以含有将在下文中描述的非天然的氨基酸。
两个核酸或氨基酸序列之间的“百分比同一性”被本发明理解为是指两个被 比较的序列之间相同的核苷酸或氨基酸残基的百分比，其在最好比对后获得(最佳比 对)，该百分比是纯统计学的并且两个序列之间的差别在其整个长度上是随机分布的。 两个核酸或氨基酸序列之间的序列比较在其被最佳比对后通过比较那些序列而常规进 行，可能的是所述比较一个片段接一个片段地进行或通过“比较窗口”的方法进行。 用于比较的序列的最佳比对除了可以手工进行外，还可以通过以下方式进行Smith和 Waterman (1981)的局部同源算法[Ad.App.Math.2 482], Neddleman 和 Wunsch (1970)的 局部同源算法[J.Mol.Biol.48 443], Pearson和Lipman (1988)的相似性搜索方法[Proc. Natl.Acad.Sci.USA 85 2444],或应用那些算法的计算机软件(the Wisconsin Genetics 软件 包中的 GAP, BESTFIT, FASTA和 TFASTA，Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI,或通过比较软件 BLASTN 或 BLAST P)。
两个核酸或氨基酸序列之间的百分比同一性通过比较两个最佳比对序列而确 定，其中所述比对序列中待比较的核酸或氨基酸序列可以含有相对于那两个序列之间最 佳比对的参考序列的添加或删除。百分比同一性通过确定两个序列之间相同的核苷酸或 氨基酸残基的相同位置的数目而计算，以相同位置的数目除以比较窗口中位置的总数目 并将获得的结果乘以100从而获得这两个序列之间的百分比同一性。
例如，可能使用的BLAST 程序 “BLAST 2 sequences”(Tatusova 等人，“Blast 2sequences-a new tool for comparing protein and nucleotide sequences”，FEMS Microbiol Lett. 174 247-250)可以从网站 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 上获得，使 用的参数是以那些缺省值给出的(特别是参数“开放空隙罚分” 5，和“延伸空隙罚 分” 2;选择的阵距是例如程序所建议的“BLOSUM62”阵距)，比较的两个序列之 间的百分比同一性直接由程序计算得出。
由于氨基酸序列具有与参考氨基酸序列至少80%，优选85%、90%, 95%和 98%的同一性，优选的是具有相对于参考序列的某些修饰特别是至少一个氨基酸的删 除、添加或置换、截短或延伸的序列。在一个或多个连续或不连续的氨基酸的置换情况 下，优选的是被置换的氨基酸由“同等的”氨基酸替代的置换。本文中的表述“同等的 氨基酸”是指任何能够被基本结构中的一个氨基酸置换，但不会根本地改变相应抗体的 生物学活性的氨基酸，如将在下文中特别是在实施例中描述的。
这些同等的氨基酸可以基于其与被置换的氨基酸的结构同源性而确定或基于各 种可以产生的抗体之间的比较性生物学活性的测试结果而确定。
通过非限制性实施例的方式，下面的表1回顾了能够实施而不引起相应的经修 饰抗体的生物学活性根本改变的置换可能性，在相同条件下当然可行的反向置换。
表 权利要求
1.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No.l或59的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQID No.l或59具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3的序列是SEQ ID No.3,或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.3具有 至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQID No.4或61具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.5或62的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.5或62具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.6或63的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.6或63具有至少80%同一性的序列。
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有含 有氨基酸序列SEQ ID No.7的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.8的序列。
3.2008年2月22日在1-3920号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物保 藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
4.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No. 17或69的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No. 17或69具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.18或70的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.18或70具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3的序列是SEQ ID No.19,或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No. 19具 有至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.20或71的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.20或71具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.21或72的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.21或72具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.22或73的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.22或73具有至少80%同一性的序列。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有 含有氨基酸序列SEQ ID No.23的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.24的序 列。
6.2008年2月22日在1-3921号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物保 藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
7.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No.33或79的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.33或79具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3是序列SEQ ID No.3的，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.3具有 至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQID No.4或61具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.34或80的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.34或80具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.35或81的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.35或81具有至少80%同一性的序列。
8.根据权利要求7所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有 含有氨基酸序列SEQ ID No.36的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.37的序 列。
9.2008年2月21日在1-3918号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物保 藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
10.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No.43或85的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.43或85具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.44或86的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.44或86具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3是序列SEQ ID No.45的，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.45具 有至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.46或87的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.46或87具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.47或88的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.47或88具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.48或89的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.48或89具有至少80%同一性的序列。
11.根据权利要求10所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有 含有氨基酸序列SEQ ID No.49的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.50的序 列。
12.2008年2月21日在1-3919号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物 保藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
13.分离的核酸，其特征在于其选自下列核酸a)编码根据权利要求1、2、4、5、7、8、10或11中一项所述的抗体或一个其衍生的 化合物或功能性片段的DNA或RNA核酸；b)与a)中定义的核酸互补的核酸；C)能够与核酸序列 SEQ ID No.9-16、25-32、38-42、51-58、64-68、74-78、 82-84、90-94、98-100或104-106中的至少一个或与在最佳比对后与所述序列具有至少 80%,优选85%、90%, 95%和98%同一性的序列在高度严谨条件下杂交的至少18个核 苷酸的核酸。
14.含有根据权利要求13所述的核酸的载体。
15.含有根据权利要求14所述的载体的细胞宿主。
16.含有根据权利要求15所述的细胞的除了人类以外的转基因动物。
17.产生根据权利要求1、2、4、5、7、8、10或11中的一项所述的抗体或一个其衍 生的化合物或功能性片段的方法，其特征在于其含有下列步骤a)在合适的培养基中和在合适的培养条件下培养根据权利要求15所述的细胞；和b)回收从培养基中或从所述培养的细胞中因此产生的所述抗体或其功能性片段。
18.能够通过根据权利要求17所述的方法获得的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段。
19.组合物，其含有作为活性成分的化合物，所述化合物由根据权利要求1、2、4、5、7、8、10、11或18中的一项所述的抗体或一个其功能性片段或通过根据权利要求3、6、9或12所述的杂交瘤产生的抗体或一个其功能性片段组成。
20.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于其另外含有作为同时、分开或时间交 错使用的组合产物的抗体、细胞毒剂/细胞生长抑制剂、细胞毒素或放射性元素。
21.根据权利要求19或20中的一项所述的作为药物的组合物。
22.根据权利要求1、2、4、5、7、8、10、11或18中的一项所述的抗体或一个其功 能性片段或通过根据权利要求3、6、9或12所述的杂交瘤产生的抗体或一个其功能性片 段和/或根据权利要求19至21中的任一项所述的组合物在制备预期用于预防或治疗癌症 的药物中的用途。
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于所述癌症是选自前列腺癌、肺癌、结肠 癌、乳腺癌或胰腺癌的癌症。
24.具有过表达或低表达CD151蛋白的疾病的体外诊断方法，所述方法从被怀疑有 CD151蛋白异常存在的生物样品开始，其特征在于将所述生物样品与根据权利要求1、 2、4、5、7、8、10、11或18中的一项所述的抗体或通过根据权利要求3、6、9或12所 述的杂交瘤产生的抗体接触，所述抗体可以在适当的地方被标记。
全文摘要
本发明涉及可以特异性结合至人CD151蛋白的新抗体，特别是鼠源的单克隆抗体、嵌合抗体和人源化抗体以及编码所述抗体的氨基酸和核酸序列。本发明涉及所述抗体作为用于预防性和/或治疗性治疗癌症的药物的用途以及所述抗体在用于诊断与过表达CD151蛋白相关疾病的方法或试剂盒中的用途。本发明还涉及含有与抗癌抗体和/或试剂结合的这样的抗体或与毒素和/或放射性元素偶联的这样的抗体的产物和/或组合物，以及其用于预防和/或治疗某些癌症的用途。
文档编号A61K39/395GK102027014SQ200980116997
公开日2011年4月20日 申请日期2009年4月8日 优先权日2008年4月11日
发明者J-F·奥乌 申请人:皮埃尔法布雷医药公司
用于治疗癌症的新抗体背景技术
本发明涉及新抗体，特别是鼠源的单克隆抗体，其为嵌合的和人源化的，并且 能够抑制肿瘤的生长，还涉及编码这些抗体的氨基酸和核酸序列。根据特别的方面，本 发明涉及新抗体、衍生的化合物或功能性片段，它们能够抑制肿瘤细胞的增殖。本发明 还包括这些抗体作为用于预防性和/或治疗性治疗癌症的药物的用途以及在癌症诊断方 法或试剂盒中的用途。最后，本发明包括含有与例如抗癌试剂和/或抗体有关的这样的 抗体或与毒素偶联的这样的抗体的产品和/或组合物，以及其在预防和/或治疗某些癌症 中的用途。
CD151，还称为PETA-3或SFA-1，是属于四旋蛋白(tetraspanin)家族的膜蛋白 (Boucheix 禾Π Rubinstdn，2001，Cell Mol.Life Sci.58, 1189-1205 ； Hemler，2001，J.Cell Biol.155, 1103-1107)。在人类中，CD151具有253个氨基酸且包括4个膜片段和2个细 胞外结构域ECl (18个氨基酸，序列[40-57])和EC2 (109个氨基酸，序列[113-221])，其 还称为细胞外环。但是需要注意的是，在核苷酸序列中，迄今已经有两个CD151的变体 被鉴定，即分别在位置395和409上具有核苷酸A和C的一个[Fitter等人，1995，Blood 86(4), 1348-1355],以及在相同的位置上具有核苷酸G和T而不是核苷酸A和C的另一 个[Has^awa等人，1996，J.Virol.70 (5), 3258_3沈3]。结果是在肽序列中可以观察到突 变，即分别在位置132和137上的残基K(Lys)和P(Pro)至残基R(Arg)和S 的突 变[Fitter 等人，1995，Blood 86 (4), 1348_i;355/Has^awa 等人，1996，J.Virol.70 (5)， 3258-3263]。
CD151 在许多癌症中如例如肺癌[Tokuhara 等人，2001，Clin.Cancer Res.7, 4109-4114],结肠癌[Hashida 等人，2OO3，Br.J.Cancer 89, 158-167],前列腺癌[Ang 等 人，2004，Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev.13, 1717-1721]或胰腺癌[Gesierich 等人， 2005，Clin.Cancer Res.ll，沘40_2852]中过表达。
使用不表达CD151的敲除小鼠以及使用抗CD151抗体和siRNA从而在体外 阻断CD151在各种类型细胞中的功能和表达已经显示CD151参与一些与癌症相关的 现象，如细胞粘附(Nishiuchi 等人，2005，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102, 1939-1944 ； Winterwood 等人，2006，Mol.Biol.Cell 17，2707-2721)、细胞运动性(Kohno 等人， 2002，Int.J.Cancer 97，336-343)、细胞迁移(Yauch 等人，1998，Mol.Biol.Cell 9， 2751-2765 ； Testa 等人，1999，Cancer Res.59, 3812-3820; Penas 等人，2000，J.Invest. Dermatol. 114, 1126-1135 ； Klosek 等人，2005，Biochem.Biophys.Res.Commun.336， 408-416)、细胞侵入(Kohno 等人，2002，Int.J.Cancer 97，336-343 ； Shiomi 等人， 2005，Lab.Invest.85，1489-1506 ； Hong 等人，2006，J.Biol.Chem.281, 24279-24292)和 血管发生(Yanez-Μο 等人，1998，J.Cell Biol.141, 791-804 ； Sincock 等人，1999，J.Cell Sci.112, 833-844 ； Takeda 等人，2007，Blood 109，1524-1532)。
四旋蛋白的一个显著性质是其自我之间形成连接以及还与大量的其它表面分子 形成连接从而形成有结构的大分子复合物的能力。在这些复合物中，每个四旋蛋白与一个或多个表面分子特异性结合，因此形成由四旋蛋白和伴侣分子组成的一级复合物。四 旋蛋白能够构成质膜的特殊微结构域，其可以自微结构域募集其伴侣分子，所述伴侣分 子可以是功能上偶联的。一套涉及四旋蛋白的相互作用被称为“四旋蛋白网络”或“四 旋蛋白网”。
CD151在细胞表面上与各种膜蛋白相互作用。特别地，已经鉴定了高度稳定的 与层粘连蛋白受体整合素的复合物，更特别地与整合素α3β1或α6β4(其优选的配体 是层粘连蛋白5)的复合物，其对某些去污剂有抗性(Yauch等人，1998，Mol.Biol.Cell 9，2751-2765 ； Lammerding 等人，2003，Proc.Natl.Acad.Sci USA 100，7616-7621)。 这种连接涉及CD151的细胞外结构域和整合素。位于EC2环中的CD151的序列 QRD[194-196]是非常重要的，其原因在于由于该位点突变引起的连接造成某些整合素的 相互作用的缺失(Kazarov等人，2002，J.Cell Biol.158, 1299-1309)。另外已经在肿瘤 细胞中鉴定了 CD151/整合素α 6 β 4/C-Met(HGF受体)的功能性三元复合物(Klosek等 人，2005，Biochem.Biophys.Res.Commun.336，408-416)。用干扰 RNA 处理细胞引起的 CD151表达的抑制引起对由HGF引起的细胞生长和迁移的抑制。
在特定细胞中的CD151和其它四旋蛋白之间的相互作用(对于形成四旋蛋白网 络是必须的)被认为依赖于CD151的膜和细胞质区，因为已经显示EC2环的删除不破坏 CD151 和其它四旋蛋白的连接(Berditchevski，2001，J.Cell Sci. 114，4143-4151)。
CD151能够通过调节各种信号途径如例如经过与PI4激酶的连接的磷酸肌醇途 径(Yauch 等人，1998，Mol.Biol.Cell 9，2751-2765)，经过 FAK、Src> p38_MAPK 和 JNK 的磷酸化的 c-Jun 信号途径(Hong 等人，2006，J.Biol.Chem.281, 24279-24292)，由 PKC 磷酸化整合素(Zhang 等人，2001，J.Biol.Chem.276, 25005-25013)以及 Rho 家族的 GTRise的激活(Shigeta等人，2003，J.Cell Biol. 163，165-176)调节细胞粘附、迁移和侵 入的现象。
细胞间嗜同性类型的相互作用也是细胞运动性增加和金属蛋白酶MMP-9表 达增加的原因(Hong 等人，2006，J.Biol.Chem.281, 24279-24292) 这些细胞间 CD151-CD151相互作用通过FAK、Src> p38_MAPK和JNK的磷酸化带来c_Jun的激活。
尽管对CD151蛋白有兴趣，至今产生了两个治疗目的的抗体，即单克隆抗体 50-6和SFA1.2B4。这两个抗体有相当的活性。虽然它们在动物模型中确实抑制转移的 体内形成，但是已经确定其在体内对肿瘤生长无作用。
针对CD151的单克隆抗体50-6 (IgGl同种型)通过用人表皮样癌HEp_3细胞的 消减免疫法在小鼠中产生CTesta等人，1999，Cancer Res.59, 3812-3820)。
抗体50-6能够在由bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)引起的绒毛膜尿囊膜新血 管形成的模型中在体外抑制人宫颈癌HeLa细胞(经转染从而过表达CD151)和HEp_3细 胞的迁移和血管生成。在体内其可以抑制由两个鸡胚模型中接种HEp-3细胞带来的转移 CTesta等人，1999，Cancer Res.59, 3812-3820)。在这些模型中，抗体50-6的抑制活性 通过测定肺提取物中的蛋白huPA(人尿激酶型纤溶酶原激活剂)的活性而确定。根据作 者，这一分析反应了人细胞在肺中的存在。分析后，由抗体50-6带来的转移(HEp-3细 胞向鸡胚肺中的扩散)的减少通过与对照抗体比较，在所谓的“自发转移”模型中被估 计为74% (其中先接种细胞，接着注射抗体)，在所谓的“实验转移”模型中被估计为57% (其中细胞和抗体一起接种)。根据作者，在体内观察到的抗体50-6的抗肿瘤性质似 乎与细胞抑制或细胞毒效应无关，因为抗体对HEp-3细胞的体外增殖未显示出有效应。
产生抗体50-6的杂交瘤可以在ATCC获得，编号为CRL_2696(杂交瘤最初在编 号 50-6[PTA-227]下保存)。
抗CD151单克隆抗体SFA1.2B4(IgGl同种型)在通过腹腔内途径用转染了人 CD151基因的NIH 3T3细胞免疫后在小鼠中产生(Hasegawa等人，1996，J.Virol.70, 3258-3263)。抗体SFA1.2B4能够在体外抑制各种人肿瘤细胞系的细胞侵入和迁移(Kohno 等人，2002，Int.J.Cancer 97，336-343)。其在体内抑制经转染而过表达CD151的结肠 癌RPMI14788和纤维肉瘤HT1080细胞系引起的肺转移(Kohno等人，2002，Int.J.Cancer 97， 336-343)。
其它鼠抗CD151抗体已经在文献中有描述，如例如单克隆抗体14A2H1 (Ashman 等人，1991，Br.J.Haematol.79, 263-270 ； Roberts 等人，1995，Br.J.Haematol.89, 853-860)、TS151 和 TS151RXSerra 等人，1999，Biochem.J.340, 103-111; Geary 等人， 2001，Tissue Antigens 58，141-153 ； Charrin 等人，J.Biol.Chem.276，14329-14337; Chometon等人，2006，Exp.Cell Res.312，983-985)。对那些各种的抗体没有体内抗肿瘤 活性的描述。
几个实验研究显示了四旋蛋白通过作为转移的抑制子或促进子起作用在转移的 形成中有主要作用。因此，转染四旋蛋白如CD9、CD63或CD82减少了癌系的转移潜 能。相反，表达四旋蛋白CD151和Co_(^9似乎产生相反的效果。因此这两种四旋蛋白 被认为是转移的促进子。这些结果与各种临床研究一致，所述研究显示在许多癌症中 (乳腺癌、肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、黑色素瘤，…)， 当有转移时，CD9和CD82在原发肿瘤中表达较低，并且其表达的降低预测了较低的存活 率。在肺癌中，与当只有这两种抗原中的一种表达降低时相比，CD9和CD82表达的联 合降低与更大的转移潜能相关。
几个以往的研究显示过表达CD151与某些癌症如肺癌、结肠癌和前列腺癌的侵 占性相关，并且其可以被认为是不良预后的一个因素(Tokuhara等人，2001，Clin.Cancer Res.7，4109-4114 ； Hashida 等人，2003，Br.J.Cancer 89，158-167 ； Ang 等人，2004， Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev. 13, 1717-1721)。在这些病例中，与那些具有不表达 CD151的肿瘤的患者相比，事实上在那些具有表达CD151的肿瘤的患者中平均存活率降 低。
通过转染相应基因而产生的CD151在各种人肿瘤系(HeLa、RPMI14788、 A172、HT1080)中的过表达造成经转染细胞的运动性、迁移和侵入的增加CTesta等人， 1999，Cancer Res.59, 3812-3820; Kohno 等人，2002，Int.J.Cancer 97，336-343)。这些 现象在存在抗CD151抗体时得到抑制。
根据第一个方面，本发明涉及分离的抗体，或一个其衍生的化合物或功能性片 段，其能够与CD151蛋白结合，所述抗体的特征在于其含有至少一个选自序列SEQ ID No. 1-6, 17-22，33-35，43-48，59-63，69-73，79-81 或 85-89 的 CDR 的 CDR 或至 少一个其序列与序列 SEQ ID No.1-6，17-22，33-35，43-48，59-63，69-73，79-81 或 85-89(在最佳比对后)具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性的CDR。
根据本发明的抗体的“功能性片段”被理解为特别地是指抗体片段如Fv， scFv(sc 代表“单链”)，Fab，F(ab' )2，Fab'或 scFv-Fc 片段或双特异抗体(diabody)或任何其半衰期增加的片段。这样的功能性片段将在本说明书的下文中详细描述。
根据本发明的抗体的“衍生的化合物”被理解为特别地是指结合蛋白质，其含 有肽框架或“骨架”和至少一个原始抗体的CDR以便保持其识别能力。这样的衍生的 化合物对本领域技术人员是熟知的，并将在本说明书中的下文更详细地描述。
更优选地，根据本发明，本发明包括抗体，其衍生的化合物或其功能性片段， 其特别是嵌合的或人源化的，通过遗传重组或通过化学合成获得。
根据优选的具体实施方案，根据本发明，抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段的特征在于其由单克隆抗体组成。
“单克隆抗体”被理解为由一群基本上同质的抗体衍生的抗体。更特别地， 除了几个可能的可以天然产生的突变和可以以最小量存在的突变以外，一群中的单个抗 体是相同的。换句话说，单克隆抗体由只有一个细胞克隆增殖产生的同质抗体组成(例 如，杂交瘤、转染了编码同质抗体的DNA分子的真核宿主细胞、转染了编码同质抗体的 DNA分子的原核宿主细胞等)并且通常其特征为一类和同类和亚类的重链和仅一种类型 的轻链。单克隆抗体是高度特异性的并且针对单一抗原。另外，与通常含有不同的针 对不同决定簇或表位的抗体的多克隆抗体制备相反，每个单克隆抗体针对抗原的单一表 位。
本文中必须理解的是本发明不涉及天然形式的抗体，就是说，其不是从其天然 环境中取得而是可能通过从天然来源起始的纯化而分离或获得，否则通过遗传重组或通 过化学合成而获得，并且因此其可以含有非天然的氨基酸如下文所述。
更特别地，根据本发明的第一个具体实施方案，描述了第一个抗体，其特征在 于其含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ IDNo. 1或59的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.l或59具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3是序列SEQ ID No.3的或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No.3具有至 少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.4或61具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.5或62的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.5或62具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.6或63的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.6或63具有至少80%同一性的序列。
根据本发明的第二个具体实施方案，描述了第二个抗体，其特征在于其含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ ID No. 17或69的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No. 17或69具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自序列SEQ ID No.18或70的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.18或70具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3是序列SEQ ID No. 19或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No. 19具有至 少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.20或71的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.20或71具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.21或72的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.21或72具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.22或73的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.22或73具有至少80%同一性的序列。
根据本发明的进一步的第三个具体实施方案，描述了第三个抗体，其特征在于 其含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ ID No.33或79的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.33或79具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3的序列是SEQ ID No.3或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No.3具有至 少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.4或61具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.34或80的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.34或80具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.35或81的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.35或81具有至少80%同一性的序列。
最后，根据本发明的最后的具体实施方案，描述了第四个抗体，其特征在于其 含有
i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中
-CDR-Ll选自序列SEQ ID No.43或85的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.43或85具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L2选自序列SEQ ID No.44或86的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.44或86具有至少80%同一性的序列；
-CDR-L3的序列是SEQ ID No.45或至少一个在最佳比对后与SEQ ID No.45具有 至少80%同一性的序列；和/或
ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中
-CDR-Hl选自序列SEQ ID No.46或87的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.46或87具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H2选自序列SEQ ID No.47或88的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.47或88具有至少80%同一性的序列；
-CDR-H3选自序列SEQ ID No.48或89的CDR，或至少一个在最佳比对后与序 列SEQ ID No.48或89具有至少80%同一性的序列。
以通常的方式在此回顾CDR区或CDR被理解为表示免疫球蛋白的重链和轻链 的高度可变区。有3个重链CDR和3个轻链CDR。本文中使用的术语CDR或CDRs是 指，根据特别的情况，那些区中的一个或那些区中的多个或实际上全部(其含有大多数 氨基酸残基)负责抗体对抗原或其识别的表位的结合亲和力。
根据第一个方法，CDR可以根据IMGT系统定义。定义了 IMGT独特的编号 系统以便比较可变结构域，不论什么抗原、链类型或物种[Lefranc M.-P.，Immunology Today 18，509(1997) ； Lefranc M-P., The Immunologist, 7，132-136(1999) ； Lefranc, Μ.-P., Pommie, C.，Ruiz, M., Giudicelli, V.，Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.and Lefranc, Dev.Comp.Immunol., 27, 55-77(2003)]。 在这一编 号系统中，保守的氨基酸总是维持在相同的位置，如半胱氨酸23 (第一个CYS)、色氨 酸41 (保守的TRP)、疏水氨基酸89、半胱氨酸104(第二个CYS)、苯丙氨酸或色氨酸 118 (J-PHE或TRP)。因此IMGT独特的编号系统提供了标准的骨架区(FR1-IMGT 位 置 1 至洸，FR2-IMGT 位置 39 至 55，FR3-IMGT 位置 66 至 104 和 FR4_IMGT 位置 118至128)以及互补决定区或CDR(CDR1_IMGT 位置27至38，CDR2-IMGT 位置56 至65和CDR3-IMGT 位置105至117)的界定。因为“孔”或“空”代表空闲位置， 根据IMGT的CDR的长度成为关键的信息。IMGT系统用于2D图像表示，其然后被称 为 IMGT 珍珠项链[Ruiz，Μ.和 Lefranc，M.-R，Immunogenetics，53，857-883(2002)； Kaas, Q.和Lefranc，M.-P., CurrentBioinformatics, 2，21-30(2007)],用于3D结构被称 为 IMGT/3D 结构 _DB[Kaas，Q.，Ruiz, Μ.和 Lefranc，M.-P., T cell receptor and MHC structural data.Nucl.Acids.Res., 32，D208—D210 (2004)]。
根据该第一方法，根据本发明的第一个抗体或一个其衍生的化合物或功能性片 段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.l、2和3的 CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.l、2禾Π 3具 有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别选自 序列SEQ ID Nos.4、5禾Π 6的CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR，或在最佳比对后 与序列SEQIDNos.4、5和6具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.lASVEYYGTSL
SEQ ID No.2EAS
SEQ ID No.3QQSRKAPYT
SEQ ID No.4GFTFSTYT
SEQ ID No.5ISSGGGTT
SEQ ID No.6ATPRIGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.l、2和3的三个CDR(根据IMGT 定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.l、2和3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
以同样优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.4、5和6的三个CDR (根据IMGT定义)， 或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.4、5和6具有至少80%，优选85%，90%, 95%和 98%的同一性。
根据该相同的方法，根据本发明的第二个抗体，或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.17、18和 19的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.17、18 和19具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个 分别选自序列 SEQ ID Nos.20、21 和 22 的 CDR-Hl、CDR-H2 禾口 CDR-H3 的 CDR，或 在最佳比对后与序列SEQIDNos.20、21和22具有至少80%，优选85%，90%, 95%和 98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No. 17 ATPRIGTGFAY
SEQ ID No. 18 SAS
SEQ ID No. 19 QQYSSNPT
SEQ ID No.20 GFTLSTSGMG
SEQ ID No.21 IYWDDDK
SEQ ID No.22 ARRDHYGDYSYAMDY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQIDNos.17、18和19的三个CDR(根 据IMGT定义)，或在最佳比对后与序列SEQIDNos.17、18和19具有至少80 %，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.20、21和22的三个CDR(根据IMGT定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.20、21和22具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
还根据该相同的方法，根据本发明的第三个抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID No.33、2和3 的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.33、2和 3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别 选自序列SEQIDNo.4、34和35的CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR，或在最佳比 对后与序列SEQIDNo.4、；34和；35具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一 性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.33 ASVDYYGTSL
SEQ ID No.34 ISSGGVTT
SEQ ID No.35 TSPRTGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQIDNos.33、2和3的三个CDR (根据IMGT 定义)，或在最佳比对后与序列SEQIDNos.33、2和3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.4、34和35的三个CDR(根据IMGT定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.4、；34和35具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
最后，还根据该相同的方法，根据本发明的第四个和最后的抗体或一个其衍生 的化合物或功能性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.43、44和45的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列 SEQIDNos.43、44和45具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所 述重链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.46、47和48的CDR-H1、CDR-H2和 CDR-H3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.46、47和48具有至少80%，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID Νο.43 ENVGTY
SEQ ID Νο.44 GAS
SEQ ID Νο.45 GQTYSFPYT
SEQ ID Νο.46 GYTFTSSS
SEQ ID Νο.47 IHPNSGNT
SEQ ID Νο.48 ARARSFYYAMDC
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.43、44和45的三个CDR(根 据IMGT定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.43、44和45具有至少80 %，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.46、47和48的三个CDR(根据IMGT定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.46、47和48具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
根据第二个方法，CDR可以根据Kabat等人的常规方法定义(Kabat等人， Sequences of proteins of immunological interest,第五版本，U.S.Department of Health and Human Services, NIH, 1991，和以后版本)。
根据该第一个方法，根据本发明的第一个抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.59、60和3 的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.59、60和 3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别选自序列 SEQ ID Nos.61、62 和 63 的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 的 CDR，或在最佳 比对后与序列SEQIDNos.61、62和63具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.59 RASASVEYYGTSLMH
SEQ ID No.60 EASNVES
SEQIDNo.61 STYTMS
SEQ ID No.62 YISSGGGTTYYPDTVKG
SEQ ID No.63 PRIGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQIDNos.59、60和3的三个CDR(根据Kabat 定义)，或在最佳比对后与序列SEQIDNos.59、60和3具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.61、62和63的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.61、62和63具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
根据该相同的方法，根据本发明的第二个抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.69、70和19 的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.69、70和 19具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分别 选自序列 SEQ ID Nos.71、72 和 73 的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 的 CDR，或在最佳 比对后与序列SEQIDNos.71、72和73具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的 同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.69 KASQNVGIAVA
SEQ ID No.70 SASNRYT
SEQIDNo.71 STSGMGVS
SEQ ID No.72 HIYWDDDKRYNPSLKS
SEQ ID No.73 RDHYGDYSYAMDY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能 性片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.69、70和19的三个CDR(根 据Kabat定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.69、70和19具有至少80%，优选 85%, 90%, 95%和 98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.71、72和73的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.71、72和73具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
还根据该相同的方法，根据本发明的第三个抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自序列SEQ ID Nos.79、60和 3的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.79、60 和3具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重链含有至少一个分 别选自序列 SEQIDNos.61、80 和 81 的 CDR-Hl、CDR-H2 禾口 CDR-H3 的 CDR，或在最 佳比对后与序列SEQ ID Nos.100、101和102具有至少80%，优选85%，90%, 95%和 98%的同一性。
为更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID Νο.79 ASVDYYGTSL
SEQ ID Νο.80 YISSGGVTTYYPDTIKG
SEQIDNo.81 PRTGTGFAY
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ ID Nos.79、60和3的三个CDR(根据Kabat 定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.79、60和3具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID Nos.61、80和81的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.61、80和81具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
最后，还根据该相同的方法，根据本发明的第四个和最后的抗体或一个其衍生 的化合物或功能性片段含有轻链和/或重链，所述轻链含有至少一个分别选自SEQ ID No.85、86和45的CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ IDNos.85、86和45具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性；所述重 链含有至少一个分别选自SEQ ID Nos.87、88和89的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3 的CDR，或在最佳比对后与序列SEQ ID Nos.87、88和89具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
为了更清楚，提及的蛋白质序列如下
SEQ ID No.85 KASENVGTYVS
SEQ ID No.86 GASNRYTGVPD
SEQ ID No.87 TSSSMH
SEQ ID No.88 EIHPNSGNTNNNEKFKG
SEQ ID No.89 ARSFYYAMDC
更特别地，以优选的方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段含有轻链，所述轻链含有分别为序列SEQ IDNos.85、86和45的三个CDR(根据 Kabat定义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.85、86和45具有至少80%，优选85%， 90%, 95%和98%的同一性。
以相同的优选方式，根据本发明的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段含 有重链，所述重链含有分别为序列SEQ ID No.87、88和89的三个CDR(根据Kabat定 义)，或在最佳比对后与序列SEQ ID No.87、88和89具有至少80%，优选85%，90%, 95%和98%的同一性。
在本说明书中，术语“多肽”、“多肽序列”、“肽”和“与抗体化合物结合的蛋白质或其序列”是可以互换的。
本文中必须理解的是本发明不涉及天然形式的抗体，就是说，其不是从其天然 环境中获得的，而是可以通过从天然来源起始的纯化而被分离或获得，否则通过遗传重 组或通过化学合成而获得，并且因此其可以含有将在下文中描述的非天然的氨基酸。
两个核酸或氨基酸序列之间的“百分比同一性”被本发明理解为是指两个被 比较的序列之间相同的核苷酸或氨基酸残基的百分比，其在最好比对后获得(最佳比 对)，该百分比是纯统计学的并且两个序列之间的差别在其整个长度上是随机分布的。 两个核酸或氨基酸序列之间的序列比较在其被最佳比对后通过比较那些序列而常规进 行，可能的是所述比较一个片段接一个片段地进行或通过“比较窗口”的方法进行。 用于比较的序列的最佳比对除了可以手工进行外，还可以通过以下方式进行Smith和 Waterman (1981)的局部同源算法[Ad.App.Math.2 482], Neddleman 和 Wunsch (1970)的 局部同源算法[J.Mol.Biol.48 443], Pearson和Lipman (1988)的相似性搜索方法[Proc. Natl.Acad.Sci.USA 85 2444],或应用那些算法的计算机软件(the Wisconsin Genetics 软件 包中的 GAP, BESTFIT, FASTA和 TFASTA，Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI,或通过比较软件 BLASTN 或 BLAST P)。
两个核酸或氨基酸序列之间的百分比同一性通过比较两个最佳比对序列而确 定，其中所述比对序列中待比较的核酸或氨基酸序列可以含有相对于那两个序列之间最 佳比对的参考序列的添加或删除。百分比同一性通过确定两个序列之间相同的核苷酸或 氨基酸残基的相同位置的数目而计算，以相同位置的数目除以比较窗口中位置的总数目 并将获得的结果乘以100从而获得这两个序列之间的百分比同一性。
例如，可能使用的BLAST 程序 “BLAST 2 sequences”(Tatusova 等人，“Blast 2sequences-a new tool for comparing protein and nucleotide sequences”，FEMS Microbiol Lett. 174 247-250)可以从网站 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 上获得，使 用的参数是以那些缺省值给出的(特别是参数“开放空隙罚分” 5，和“延伸空隙罚 分” 2;选择的阵距是例如程序所建议的“BLOSUM62”阵距)，比较的两个序列之 间的百分比同一性直接由程序计算得出。
由于氨基酸序列具有与参考氨基酸序列至少80%，优选85%、90%, 95%和 98%的同一性，优选的是具有相对于参考序列的某些修饰特别是至少一个氨基酸的删 除、添加或置换、截短或延伸的序列。在一个或多个连续或不连续的氨基酸的置换情况 下，优选的是被置换的氨基酸由“同等的”氨基酸替代的置换。本文中的表述“同等的 氨基酸”是指任何能够被基本结构中的一个氨基酸置换，但不会根本地改变相应抗体的 生物学活性的氨基酸，如将在下文中特别是在实施例中描述的。
这些同等的氨基酸可以基于其与被置换的氨基酸的结构同源性而确定或基于各 种可以产生的抗体之间的比较性生物学活性的测试结果而确定。
通过非限制性实施例的方式，下面的表1回顾了能够实施而不引起相应的经修 饰抗体的生物学活性根本改变的置换可能性，在相同条件下当然可行的反向置换。
表 权利要求
1.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No.l或59的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQID No.l或59具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3的序列是SEQ ID No.3,或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.3具有 至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQID No.4或61具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.5或62的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.5或62具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.6或63的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.6或63具有至少80%同一性的序列。
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有含 有氨基酸序列SEQ ID No.7的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.8的序列。
3.2008年2月22日在1-3920号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物保 藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
4.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No. 17或69的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No. 17或69具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.18或70的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.18或70具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3的序列是SEQ ID No.19,或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No. 19具 有至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.20或71的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.20或71具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.21或72的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.21或72具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.22或73的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.22或73具有至少80%同一性的序列。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有 含有氨基酸序列SEQ ID No.23的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.24的序 列。
6.2008年2月22日在1-3921号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物保 藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
7.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No.33或79的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.33或79具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.2或60的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.2或60具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3是序列SEQ ID No.3的，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.3具有 至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.4或61的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQID No.4或61具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.34或80的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.34或80具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.35或81的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.35或81具有至少80%同一性的序列。
8.根据权利要求7所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有 含有氨基酸序列SEQ ID No.36的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.37的序 列。
9.2008年2月21日在1-3918号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物保 藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
10.能够结合至CD151蛋白的分离的抗体或一个其衍生的化合物或功能性片段，其特 征在于其含有i)含有至少一个选自CDR-Ll、CDR-L2和CDR-L3的CDR的轻链，其中 -CDR-Ll选自序列SEQ ID No.43或85的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.43或85具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2选自序列SEQ ID No.44或86的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.44或86具有至少80%同一性的序列；-CDR-L3是序列SEQ ID No.45的，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.45具 有至少80%同一性的序列；和/或ii)含有至少一个选自CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3的CDR的重链，其中 -CDR-Hl选自序列SEQ ID No.46或87的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No.46或87具有至少80%同一性的序列；-CDR-H2选自序列SEQ ID No.47或88的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.47或88具有至少80%同一性的序列；-CDR-H3选自序列SEQ ID No.48或89的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列 SEQ ID No.48或89具有至少80%同一性的序列。
11.根据权利要求10所述的抗体，其特征在于其含有轻链和/或重链，所述轻链具有 含有氨基酸序列SEQ ID No.49的序列，所述重链具有含有氨基酸序列SEQ ID No.50的序 列。
12.2008年2月21日在1-3919号下保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物培养物 保藏中心CNCM的鼠杂交瘤。
13.分离的核酸，其特征在于其选自下列核酸a)编码根据权利要求1、2、4、5、7、8、10或11中一项所述的抗体或一个其衍生的 化合物或功能性片段的DNA或RNA核酸；b)与a)中定义的核酸互补的核酸；C)能够与核酸序列 SEQ ID No.9-16、25-32、38-42、51-58、64-68、74-78、 82-84、90-94、98-100或104-106中的至少一个或与在最佳比对后与所述序列具有至少 80%,优选85%、90%, 95%和98%同一性的序列在高度严谨条件下杂交的至少18个核 苷酸的核酸。
14.含有根据权利要求13所述的核酸的载体。
15.含有根据权利要求14所述的载体的细胞宿主。
16.含有根据权利要求15所述的细胞的除了人类以外的转基因动物。
17.产生根据权利要求1、2、4、5、7、8、10或11中的一项所述的抗体或一个其衍 生的化合物或功能性片段的方法，其特征在于其含有下列步骤a)在合适的培养基中和在合适的培养条件下培养根据权利要求15所述的细胞；和b)回收从培养基中或从所述培养的细胞中因此产生的所述抗体或其功能性片段。
18.能够通过根据权利要求17所述的方法获得的抗体或一个其衍生的化合物或功能性 片段。
19.组合物，其含有作为活性成分的化合物，所述化合物由根据权利要求1、2、4、5、7、8、10、11或18中的一项所述的抗体或一个其功能性片段或通过根据权利要求3、6、9或12所述的杂交瘤产生的抗体或一个其功能性片段组成。
20.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于其另外含有作为同时、分开或时间交 错使用的组合产物的抗体、细胞毒剂/细胞生长抑制剂、细胞毒素或放射性元素。
21.根据权利要求19或20中的一项所述的作为药物的组合物。
22.根据权利要求1、2、4、5、7、8、10、11或18中的一项所述的抗体或一个其功 能性片段或通过根据权利要求3、6、9或12所述的杂交瘤产生的抗体或一个其功能性片 段和/或根据权利要求19至21中的任一项所述的组合物在制备预期用于预防或治疗癌症 的药物中的用途。
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于所述癌症是选自前列腺癌、肺癌、结肠 癌、乳腺癌或胰腺癌的癌症。
24.具有过表达或低表达CD151蛋白的疾病的体外诊断方法，所述方法从被怀疑有 CD151蛋白异常存在的生物样品开始，其特征在于将所述生物样品与根据权利要求1、 2、4、5、7、8、10、11或18中的一项所述的抗体或通过根据权利要求3、6、9或12所 述的杂交瘤产生的抗体接触，所述抗体可以在适当的地方被标记。
全文摘要
本发明涉及可以特异性结合至人CD151蛋白的新抗体，特别是鼠源的单克隆抗体、嵌合抗体和人源化抗体以及编码所述抗体的氨基酸和核酸序列。本发明涉及所述抗体作为用于预防性和/或治疗性治疗癌症的药物的用途以及所述抗体在用于诊断与过表达CD151蛋白相关疾病的方法或试剂盒中的用途。本发明还涉及含有与抗癌抗体和/或试剂结合的这样的抗体或与毒素和/或放射性元素偶联的这样的抗体的产物和/或组合物，以及其用于预防和/或治疗某些癌症的用途。
文档编号A61K39/395GK102027014SQ200980116997
公开日2011年4月20日 申请日期2009年4月8日 优先权日2008年4月11日
发明者J-F·奥乌 申请人:皮埃尔法布雷医药公司
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