作为nmda受体拮抗剂的吲哚－2－甲脒衍生物的制作方法
专利名称：作为nmda受体拮抗剂的吲哚－2－甲脒衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及为NMDA受体拮抗剂或为制备其中间体的新吲哚-2-甲脒衍生物。
背景技术：
N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体是在中枢神经系统广泛表达的配体门控的阳离子通道。NMDA受体参与神经元的进化和塑性变化。由谷氨酸，NMDA受体的天然配体过度活化NMDA受体可以引起细胞的钙超载。这触发了改变细胞功能并最终可导致神经元的死亡的细胞内级联事件。[TINS，10，299-302(1987)]。NMDA受体拮抗剂可用于治疗许多伴随谷氨酸过度释放引起的疾病。
NMDA受体是由至少一个NR1亚单位与一个或多个的四NR2亚单位(NR2A-D)构成的异聚体。最近，报道了NR3A和NR3B。由不同的NR2亚单位构成的NMDA受体在CNS中的空间分布和药理学敏感性是不同的。由于其限制性分布(在前脑和脊髓的胶状质中密度最高)这些亚单位中特别令人感兴趣的是NR2B亚单位。这种亚型的选择性化合物是可得的并且已经证明在中风[stroke，28，2244-2251(1997)]，创伤性脑损伤[Brain Res.，792，291-298(1998)]，帕金森病[Exp.Neurol.，163，239-243(2000)]，神经性和炎性疼痛[Neuropharmacology，38，611-623(1999)]的动物模型中是有效的。此外，NMDA受体的NR2B亚型选择性拮抗剂预期比NMDA受体非选择性拮抗剂具有更有利的副作用曲线。当在临床试验中研究时以减少神经性疼痛的剂量NR2B选择性化合物CP-101，606具有良好的耐受性并且没有非选择性拮抗剂不需要的作用特征，即致幻觉反应，幻觉，烦躁不安(CN.Sang，等.ProgramNo.814.9.2003 Abstract Viewer/Itinerary Planner.Washington，DCSociety for Neuroscience，2003.Online)。
NR2B亚型的选择性NMDA拮抗作用可以使用特异性结合，并且作用于含有受体NR2B亚单位的变构调节部位的化合物来实现。可以通过使用特定的放射性配体例如[3H]-Ro 25，6981[J.Neurochem.，70，2147-2155(1998)]进行置换(结合)研究来描述此结合部位的特性。
式(I)的羧酸脒衍生物的相近结构的类似物根据文献是未知的，尽管在以下的出版物中描述了一些作为NR2B亚型选择性NMDA拮抗剂的不同的甲脒衍生物在专利第WO 200198262号和Bioorg.Med.Chem.Letters，13，693-696.(2003)中描述了肉桂脒。
专利号第 WO 200067751中和Bioorg.Med.Chem.Letters，13，693-696.(2003)以及Bioorg.Med.Chem.Letters，13，697-700.描述了苯甲脒。
发明概述令人惊讶地发现了本发明式(I)的新的吲哚-2-甲脒衍生物是大鼠皮层神经元NMDA受体的功能性拮抗剂，其IC50小于1微摩尔。由于它们在10微摩时对包含NR2A亚单位的NMDA受体无效，这种作用归因于它们对包含NR2B的受体的抑制作用。因此，相信它们是NR2B亚型的特异性NMDA拮抗剂，并具有治疗用途。
发明详述因此，本发明首先涉及式(I)的新吲哚-2-甲脒衍生物 -其中含义为X是氢或卤素原子，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，三氟甲基，
Y，V和Z独立地为氢原子或卤素原子，羟基，氰基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷基磺酰胺基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷酰基酰胺基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，或在特定的情况下，相邻的V和Z基团与一个或多个相同或不同的另外的杂原子和-CH＝和/或-CH2-基形成任选取代的4-7元的同环-或杂环，优选苯，二氧戊环，A，B和C独立地为取代的碳原子或它们之一为氮原子，及其盐。
本发明的进一步的目的是生产式(I)吲哚-2-甲脒衍生物和制造含这些化合物的药剂的方法，以及使用这些化合物治疗的方法，即给治疗的哺乳动物-包括人-施用有效量(amount)/数量(amounts)的如本发明式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物或药剂。
本发明式(I)的新的吲哚-2-甲脒衍生物是高效和选择性的NMDA受体拮抗剂，而且大部分化合物是选择性的NR2B亚型NMDA受体的拮抗剂。
根据本发明，式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物通过使式(II)的甲亚胺酸(carboximidic acid)烷基酯的盐 -其中X的含义如权利要求1所给出，Anion表示一个阴离子的等价物，R是C1-C4烷基-与式(III)的芳烷基胺反应来合成 -其中A，B，C，Y，V，Z的含义如前式(I)所给出，然后在特定的情况下，将所得的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-A，B，C，Y，V，Z的含义如前式(I)所给出-通过已知方法通过引入新的取代基和/或修饰或除去存在的基团，和/或通过成盐和/或将化合物从盐中游离而转变成另外的式(I)化合物。
本发明的化合物可容易地在碱存在下在适宜的温度在反应惰性溶剂中通过使适当的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐与适当的芳烷基胺反应来制备。这些反应的典型溶剂是乙醇，甲醇，二氯甲烷，二氯乙烷，四氢呋喃。
所需的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐(例如乙酯)可方便地通过Pinner反应来制备，即通过使相应的腈与醇的饱和盐酸溶液反应来制备。甲亚胺酸烷基酯盐酸盐反应物制备所需的腈反应物通过使相应的酰胺与磷酰氯反应来制备。酰胺按照众所周知的方法通过使相应的酰基氯酰胺化来制备。酰基氯通过适宜的羧酸与亚硫酰氯反应制备，后者通常作为反应物以及溶剂。在式(II)化合物和式(III)化合物的反应中，所应用的的碱是摩尔过量的式(III)芳烷基胺试剂。必要的反应时间是1-24h，优选6h。优选的反应温度为大约20℃至大约30℃。反应混合物通过柱色谱法使用Kieselgel60(Merck)作为吸附剂和适当洗脱液进行纯化。使用盐酸将适宜的级分酸化并浓缩得到纯化产物的盐酸盐。通过HPLC-MS法测定产物的性质和量。
制备式(II)的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐反应物所需的1H-吲哚-2-羧酸和式(III)的苯偶酰胺可商购获得。
试验方案重组NMDA受体的表达为了证明我们化合物的NR2B选择性，我们在稳定表达具有NR1(-3)/NR2A亚单位组成的重组NMDA受体的细胞株上对它们进行测试。使用阳离子脂质介导的转染方法将亚克隆至可诱导的哺乳动物表达载体的人NR1(-3)和NR2A亚单位的cDNAs引入缺乏NMDA受体的HEK293细胞中[Biotechniques，1997May；22(5)982-7；Neurochemistry International，43，19-29.(2003)]。使用对新霉素和潮霉素的耐药性来筛选具有载体和单克隆细胞株的克隆，由对NMDA暴露产生最高应答的克隆来建立。在荧光钙测量中测试了化合物对NMDA诱发的细胞溶质钙浓度升高的抑制作用。在加入诱导剂后48-72h进行研究。在诱导过程中还存在氯胺酮(500μM)以防止细胞毒性。
使用荧光平板读数器测量大鼠皮层细胞培养基的细胞内钙浓度来评定NMDA拮抗剂的体外效能细胞内钙的测量在源于17天大的Charles River大鼠胚胎的原代新生皮层细胞培养物上进行(新生皮层细胞培养物的制备详见Johnson，M.I.；Bunge，R.P.(1992)Primary cell cultures ofperipheral and central neurons and glia.InProtocols for NeuralCell Culture，edsFedoroff，S.，Richardson A.，The Humana PressInc.，51-75)。分离后，将细胞加到标准的96-孔微量培养板上，在37℃95％空气-5％CO2气氛中保持培养直到进行钙测量。
3-7天后将该培养物用于体外的细胞内的钙测量。在测试前使细胞装载荧光Ca2+-敏感染料，Fluo-4/AM(2-2.5μM)。通过用于测量的溶液(140mM NaCl，5mM KCl，2mM CaCl2，5mM HEPES，5mM HEPES-Na，20mM葡萄糖，10μM甘氨酸，pH＝7.4)洗涤细胞两次来停止装载。洗涤后将测试化合物加入在上述溶液的细胞中(90μl/孔)。使用荧光平板读数器进行细胞内钙的测量Fluo-4-荧光的升高，因此细胞内钙浓度是由应用40μM NMDA所诱导的。在不同浓度的化合物存在下通过测量钙升高的减少来评价测试化合物的抑制效能。
使用由至少三个独立实验获得的数据计算剂量-反应曲线和IC50值。化合物在单一浓度点的抑制效能表示为NMDA反应的抑制百分数。S形的浓度-抑制曲线与数据相吻合并且IC50值确定为产生由该化合物所引起的半数最大抑制作用的浓度。
在表1中列出了本发明大部分有效化合物在该试验中测定的NR2B拮抗剂效能。表2给出了作为参照化合物的选择性NR2B拮抗剂CI-1041和非选择性NMDA受体拮抗剂MK-801的结果。
表1通过荧光法在皮层细胞或表达NR1-3/NR2A亚单位的细胞上测定的化合物的NMDA拮抗剂活性
表2通过荧光法在皮层细胞或表达NR1-3/NR2A亚单位的细胞上测定的参照化合物的NMDA拮抗剂活性
参照化合物如下CI-10416-{2-[4-(4-氟-苯甲基)-哌啶-1-基]-乙烷亚磺酰基}-3H-苯并唑-2-酮Co 1012441-[2-(4-羟苯氧基)乙基]-4-羟基-4-(4-甲基苯甲基)哌啶
EMD 958856-[3-(4-氟苯甲基)哌啶-1-基]丙酰]-2，3-二氢-苯并唑-2-酮CP-101，606(1S，2S)-1-(4-羟苯基)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-1-丙醇Co-1111031-[2-(4-羟基苯氧基)乙基]-4-(4-氟苯甲基)哌啶Ro 256981R-(R*，S*)-1-(4-羟苯基)-2-甲基-3-[4-(苯基甲基)哌啶-1-基]-1-丙醇。
艾芬地尔赤-2-(4-苯甲基哌啶子基)-1-(4-羟苯基)-1-丙醇MK-801(+)-5-甲基-10，11-二氢-5H-二苯并[a，d]环庚烯-5，10-亚胺有利地可以使用在NR2B部位作用的NMDA拮抗剂治疗的疾病，如Loftis最近的综述[Pharmacology&Therapeutics，9755-85(2003)]，包括精神分裂症，帕金森病，亨廷顿病，由缺氧和局部缺血引起的兴奋性中毒，癫痫发作，药物滥用，和疼痛，特别是任何原因的神经性，炎性和内脏的疼痛[Eur.J.Pharmacol，429，71-78(2001)]。
由于与非选择性NMDA拮抗剂相比它们具有减少副作用的倾向，NR2B选择性拮抗剂可用于NMDA拮抗剂有效的疾病，例如肌萎缩性侧索硬化[Neurol.Res.，21309-12(1999)]，例如酒精，阿片样物质或可卡因戒断综合征[Drag and alcohol depend.，59，1-15(2000)]，肌痉挛[Neurosci.Lett.，73，143-148(1987)]，不同起因的痴呆[ExpertOpin.Investig.Drugs，9，1397-406(2000)]，焦虑，抑郁，偏头疼，低血糖，视网膜的变性疾病(例如CMV视网膜炎)，青光眼，哮喘，耳鸣，听力损失[Drug News Perspect，11，523-569(1998)和WO.00/00197国际专利申请]。
因此，有利地有效量的本发明的化合物可用于治疗大脑或脊髓的创伤性损伤，阿片类物质治疗疼痛的耐受和/或依赖，耐受性的发展，滥用潜力的减少和滥用药物例如乙醇，阿片样物质或可卡因的戒断综合征，局部缺血性CNS疾病，慢性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病，帕金森病，亨廷顿病，疼痛和慢性疼痛状态，例如神经性疼痛。
本发明的化合物以及它们药学上可接受的盐可以以此或适宜的药物组合物形式使用。这些组合物(药物)可以是固体，液体或半液体形式并且可加入实践中通常使用的药物助剂和辅助材料，例如载体，赋形剂，稀释剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，pH-和渗透压-调节剂，调味剂，或芳香剂，以及增进配方或供应配方的添加剂。
在特定情形下起到治疗作用所需要的剂量可根据以下情况在大范围内改变并满足个体需要，这取决于疾病的阶段，所治疗患者的状况和体重，以及患者对活性成分的敏感性，施用途径和治疗天数。活性成分的实际使用剂量可以由熟悉患者所接受治疗的知识领域的主治医生来安全地确定。
包含根据本发明活性成分的药物组合物的一个剂量单元通常包含0.01至100mg的活性成分，当然在一些组合物中活性成分的量超过了上文定义的上限或下限。
药物组合物的固体形式可以是例如片剂，糖衣片，胶囊，丸剂或用于注射剂制备的冻干粉末安瓿剂。液体组合物是可注射和可输注的组合物，液体药物，充填液和滴剂。半液体组合物可以是软膏，香脂，乳膏，振摇混合物和栓剂。
为了施用简单，如果药物组合物所包括的剂量单元含施用一次或几次或施用其二分之一或三分之一或四分之一的量的活性成分，是适合的。这样的剂量单元是例如片剂，该片剂能够用促进其对分或四分的凹槽来粉碎以利于准确施用需要量的活性成分。
片剂可以用酸溶层包衣以确保在离开胃之后释放活性成分内容物。这样的片剂包肠溶衣。通过将活性成分装入胶囊也能得到类似的效果。
口服施用的药物组合物可以包括例如作为赋形剂的乳糖或淀粉，作为粘合剂或粒化剂的羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮或淀粉糊。加入作为崩解剂的马铃薯淀粉或微晶纤维素，但也可使用超支链淀粉或甲醛酪蛋白。滑石、胶体硅酸、硬脂精、硬脂酸钙或硬脂酸镁可用作抗粘着剂或滑润剂。
片剂可以例如通过湿法制粒后压制来制备。在适当的设备中用粘合剂水溶液、醇溶液或醇水溶液将混合的活性成分和赋形剂以及在特定情况下部分崩解剂制粒，然后将颗粒干燥。将其他崩解剂、滑润剂和抗粘着剂加入在干燥的颗粒中，并将混合物压制成片剂。在特定情况下，制备的片剂具有等分槽以便于施用。
片剂可由活性成分和适当的助剂的混合物通过压制直接制备。在特定情况下，片剂可用通常在制药实践中使用的添加剂例如稳定剂、调味剂、着色剂，例如糖、纤维素衍生物(甲基纤维素或乙基纤维素、羧甲基纤维素钠等)、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙、碳酸钙、食用着色剂、食用酒精(food lace)、芳香剂、氧化铁颜料等涂敷。在胶囊剂情况中，将活性成分和适当的助剂的混合物装在胶囊中。
液体口服组合物，例如悬浮液、糖浆剂、酏剂，可通过用水、二醇、油、醇、着色剂和调味剂进行制备。
为直肠施用，将组合物配制成栓剂或灌肠剂。栓剂除活性成分外可含称为前栓动物脂的载体。载体可以是植物油，例如氢化植物油、C12-C18脂肪酸甘油三酯(优选商品名为Witepsol的载体)。将活性成分与熔化的前栓动物脂均匀混合并模制成栓剂。
为胃肠外施用，将组合物配制成注射液。为制备注射液，将活性成分溶解在蒸馏水和/或不同的有机溶剂中，例如乙二醇醚，在特定条件下，存在增溶剂例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、单油酸酯或单硬脂酸酯(Tween 20，Tween 60，Tween 80)。注射液还可包括不同的助剂，例如保存剂例如乙二胺四乙酸盐，以及pH调节剂和缓冲液和特定条件下的局部麻醉药如利多卡因。在装入安瓿前将含本发明活性成分的注射液过滤，在装入后将其灭菌。
如果活性成分吸湿，那么通过冻干可使其稳定。
下列实施例举例说明本发明，对本发明无任何限制。
表征方法通过与质量选择性检测器相连的高效液相色谱使用具有Microplate Sampler的HP1100二元梯度色谱系统(Agilent，Waldbronn)，由Chemstation软件控制来对本发明的化合物进行表征。使用HP二极管阵列检测器在225和240nm获得UV光谱。所有的试验使用装备有电喷射离子化源的HP MSD(Agilent，Waldbronn)单一四极光谱仪来确定结构。
合成产物溶解于1ml DMSO中(Aldrich，德国)。使用DMSO将100μl的各种溶液稀释至1000μl体积。在由Supelco(Bellefonte，Pennsylvania)获得的Discovery RP C-16 Amide，5cm×4.6mm×5μm柱上使用1ml/分钟的流速进行分析色谱试验以进行定性。获得的化合物由它们K′值(纯度，容量因子)表征。K′因子由下式进行计算k′＝(tR-t0)/t0其中k′＝容量因子，tR＝保留时间和t0＝洗脱液保留时间洗脱液A是包含0.1％水的三氟乙酸(TFA)(Sigma，德国)，洗脱液B是包含0.1％TFA和5％洗脱液A的95％乙腈(Merck，德国)。使用梯度洗脱，由100％的洗脱液A开始在5分钟内变化到100％的洗脱液B。
通过以下的非限制性实施例对根据我们发明的方法进行详细说明实施例1N-苯甲基-1H-吲哚-2-甲脒盐酸盐1a)1H-吲哚-2-羧酸酰胺将10.0g(62mmol)1H-吲哚-2-羧酸(Aldrich)，10.0ml(76mmol)亚硫酰氯，100ml氯仿和1滴二甲基甲酰胺的混合物回流2h。反应混合物冷却至20℃，倾入100ml 25％的氨溶液和100g冰的混合物中，然后搅拌2h。滤出沉淀产物并用水洗涤得到8.96g(90％)的标题化合物。Mp.231-232℃。
1b)1H-吲哚-2-腈将8.96g(56mmol)1H-吲哚-2-羧酸酰胺，26.0ml(279mmol)磷酰氯和230ml氯仿的混合物回流2h。反应混合物冷却至20℃，倾入100ml水中并搅拌1h。分离有机层后经过硫酸钠干燥并浓缩。通过柱色谱法使用Kieselgel60(Merck)作为吸附剂和己烷∶乙酸乙酯＝4∶1做为洗脱剂对残留物进行纯化，得到5.28g(66.4％)的标题化合物。Mp.94-95℃。
1c)1H-吲哚-2-甲亚胺酸乙基酯盐酸盐将2.23g(15.7mmol)的1H-吲哚-2-腈加入20ml的饱和盐酸的乙醇溶液中。反应混合物在20℃搅拌2h，然后浓缩并使用醚对残留物进行结晶得到3.1g(82％)的标题化合物。Mp.170℃。
1d)N-苯甲基-1H-吲哚-2-甲脒盐酸盐将28.2mg(0.15mmol)1H-吲哚-2-甲亚胺酸乙基酯盐酸盐的1ml乙醇溶液加至32.1mg(0.3mmol)苯甲胺的1ml乙醇溶液中。反应混合物在室温下搅拌6h，然后浓缩。通过柱色谱法使用Kieselgel60(Merck)作为吸附剂和甲苯∶甲醇＝4∶1作为洗脱剂对残留物进行纯化。使用盐酸对包含产物的级分进行酸化并浓缩。通过上文所述HPLC-MS法测定产物的性质和量。K′＝2.46。
表3包括了取代的1H-吲哚-2-甲亚胺酸乙酯盐酸盐衍生物，其是根据实施例1所述方法由相应的1H-吲哚-2-羧酸制备的代表性的(I)化合物，并且使用以上表征方法进行表征。
表3
使用的芳烷基胺衍生物为商购产品。
实施例2药物组合物的制备a)片剂将0.01-50％的式(I)的活性成分，15-50％的乳糖，15-50％的马铃薯淀粉，5-15％的聚乙烯吡咯烷酮，1-5％的滑石粉，0.01-3％的硬脂酸镁，1-3％的胶体二氧化硅和2-7％的过支链淀粉混合，然后通过湿法制粒并压制成片剂。
b)糖衣片，薄膜包衣片将按照上述方法制备的片剂用由肠或胃溶薄膜组成的，或由糖或滑石粉组成的层包衣。糖衣片用蜂蜡和carnuba腊的混合物抛光。
c)胶囊将0.01-50％的式(I)活性成分，1-5％的十二烷基硫酸钠，15-50％的淀粉，15-50％的乳糖，1-3％的胶体二氧化硅和0.01-3％的硬脂酸镁充分混合，将混合物过筛并填充至硬明胶胶囊中。
d)混悬液成分0.01-15％的式(I)活性成分，0.1-2％的氢氧化钠，0.1-3％的柠檬酸，0.05-0.2％的尼泊金(4-羟基苯甲酸甲酯钠)，0.005-0.02％的对羟基苯甲酸丙酯，0.01-0.5％的卡波普(聚丙烯酸)，0.1-5％的96％乙醇，0.1-1％的矫味剂，20-70％的山梨醇(70％水溶液)和30-50％的蒸馏水。
在剧烈搅拌下，按小份将卡波普加至在20ml蒸馏水中的尼泊金和枸橼酸溶液中，并将溶液放置10-12h。然后在搅拌下加入在1ml蒸馏水中的氢氧化钠，山梨醇水溶液并最终加入乙醇覆盆子香精。往载体中按小份加入活性成分并使用浸渍匀浆机悬浮。最后用蒸馏水将该悬浮剂加至所需最终体积，且将该悬浮糖浆过胶体研磨设备。
e)栓剂对每种栓剂，将0.01-15％的式(I)活性成分和1-20％的乳糖充分混合，然后将50-95％的栓剂前动物脂肪(例如Witepsol 4)熔化并冷却至35℃，用匀化器将活性成分和乳糖的混合物在其中混合。将所得混合物冷却塑模。
f)冻干粉安瓿组合物以注射用双蒸水制成5％的甘露醇或乳糖水溶液，将该溶液过滤以获得灭菌溶液。0.01-5％式(I)活性成分的水溶液也以注射用双蒸水制成，并将此溶液过滤以获得灭菌溶液。在无菌条件下将这两种溶液混合，在安瓿中装入1ml，将安瓿内容物冻干，且将安瓿在氮气下密封。在施用前，将安瓿内容物溶解在灭菌水或0.9％(生理的)灭菌氯化钠水溶液中。
权利要求
1.式(I)新吲哚-2-甲脒衍生物 -其中含义为X是氢或卤素原子，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，三氟甲基，Y，V和Z独立地为氢原子或卤素原子，羟基，氰基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷基磺酰胺基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷酰基酰胺基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，或在特定的情况下，相邻的V和Z基团与一个或多个相同或不同的另外的杂原子和-CH＝和/或-CH2-基形成任选取代的4-7元的同环-或杂环，优选苯，二氧戊环，A，B和C独立地为-CH＝基团或它们之一为氮原子，及其盐。
2.属于权利要求1的范围的下组的吲哚-2-甲脒衍生物的化合物N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2-乙氧基-苯甲基)-1H-吲哚-2-甲脒，N-(3-甲氧基-苯甲基)-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2-乙氧基-苯甲基)-5-氟-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-5-氟-1H-吲哚-2-甲脒，及其盐。
3.含有有效量的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z含义如权利要求1所给出-或其盐作为活性成分和实践中通常使用的辅助材料，例如载体，赋形剂，稀释剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，pH-和渗透压-调节剂，调味剂，或芳香剂，以及增进配方或供应配方的添加剂的药物组合物。
4.制备式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物的方法-其中A，B，C，X，Y，V，Z含义如权利要求1所给出-其特征在于使式(II)的甲亚胺酸烷基酯的盐 -其中X的含义如权利要求1所给出，Anion表示一个阴离子的等价物，R是C1-C4烷基-与式(III)的芳烷基胺反应 -其中A，B，C，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出，然后在特定的情况下，将所得的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-A，B，C，X，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出-通过已知方法通过引入新的取代基和/或修饰或除去存在的基团，和/或通过成盐和/或将化合物从盐中游离而转变成另外的式(I)化合物。
5.如权利要求4的方法，其特征在于使式(II)的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐-其中X和R含义如权利要求1所列出并且Anion表示Cl-离子-和式(III)的芳烷基胺-其中A，B，C，Y，V，Z含义如权利要求1所列出-在碱的存在下反应。
6.如权利要求4的方法，其特征在于在烷醇中在过量的式(III)的芳烷基胺-其中A，B，C，Y，V，Z含义如权利要求1所列出-存在的情况下使式(II)的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐-其中X和R含义如权利要求1所列出并且Anion表示Cl-离子-和式(III)的芳烷基胺-其中A，B，C，Y，V，Z含义如权利要求1所列出-反应。
7.制备具有NR2B选择性NMDA受体拮抗剂作用的药物组合物的方法，其特征在于将式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z的含义如式(I)所给出-或其药学上可接受的盐作为活性成分和实践中通常使用的辅助材料，例如载体，赋形剂，稀释剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，pH-和渗透压-调节剂，调味剂，或芳香剂，以及增进配方或供应配方的添加剂混合。
8.治疗和缓解哺乳动物-包括人-的以下疾病-大脑或脊髓的创伤性损伤，与人免疫缺陷病毒(HIV)相关的神经元损伤，肌萎缩性侧索硬化，阿片类物质治疗疼痛的耐受和/或依赖，滥用药物例如乙醇，阿片样物质或可卡因的戒断综合征，局部缺血性CNS疾病，慢性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病，疼痛和慢性疼痛状态，例如神经性疼痛或癌症相关疼痛，癫痫，焦虑，抑郁，偏头疼，精神病，肌肉痉挛，不同原因的痴呆，低血糖，视网膜的变性疾病，青光眼，哮喘，耳鸣，氨基糖苷抗生素诱发的听力损失的症状的方法，其特征在于如此给所治疗的哺乳动物施用有效量/数量的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出-或其旋光对映体或外消旋化合物或药学上可接受的盐或将其与在药学上通常应用的载体，填充剂等组合使用。
9.式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出-或其旋光对映体或外消旋化合物或药学上可接受的盐制备用于治疗和缓解哺乳动物，包括人的以下疾病症状的药物的用途，疾病包括大脑或脊髓的创伤性损伤，与人免疫缺陷病毒(HIV)相关的神经元损伤，肌萎缩性侧索硬化，阿片类物质治疗疼痛的耐受和/或依赖，滥用药物例如乙醇，阿片样物质或可卡因的戒断综合征，局部缺血性CNS疾病，慢性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病，疼痛和慢性疼痛状态，例如神经性疼痛或癌症相关疼痛，癫痫，焦虑，抑郁，偏头疼，精神病，肌肉痉挛，不同原因的痴呆，低血糖，视网膜的变性疾病，青光眼，哮喘，耳鸣，氨基糖苷抗生素诱发的听力损失。
全文摘要
本发明首先涉及式(I)的新吲哚－2－甲脒衍生物。－其中含义为X是氢或卤素原子，C
文档编号A61K31/405GK1989103SQ200580024765
公开日2007年6月27日 申请日期2005年7月21日 优先权日2004年7月29日
发明者I·博尔扎, C·霍瓦特, S·福尔考什, J·纳吉, S·科洛科 申请人:匈牙利吉瑞大药厂
技术领域：
本发明涉及为NMDA受体拮抗剂或为制备其中间体的新吲哚-2-甲脒衍生物。
背景技术：
N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体是在中枢神经系统广泛表达的配体门控的阳离子通道。NMDA受体参与神经元的进化和塑性变化。由谷氨酸，NMDA受体的天然配体过度活化NMDA受体可以引起细胞的钙超载。这触发了改变细胞功能并最终可导致神经元的死亡的细胞内级联事件。[TINS，10，299-302(1987)]。NMDA受体拮抗剂可用于治疗许多伴随谷氨酸过度释放引起的疾病。
NMDA受体是由至少一个NR1亚单位与一个或多个的四NR2亚单位(NR2A-D)构成的异聚体。最近，报道了NR3A和NR3B。由不同的NR2亚单位构成的NMDA受体在CNS中的空间分布和药理学敏感性是不同的。由于其限制性分布(在前脑和脊髓的胶状质中密度最高)这些亚单位中特别令人感兴趣的是NR2B亚单位。这种亚型的选择性化合物是可得的并且已经证明在中风[stroke，28，2244-2251(1997)]，创伤性脑损伤[Brain Res.，792，291-298(1998)]，帕金森病[Exp.Neurol.，163，239-243(2000)]，神经性和炎性疼痛[Neuropharmacology，38，611-623(1999)]的动物模型中是有效的。此外，NMDA受体的NR2B亚型选择性拮抗剂预期比NMDA受体非选择性拮抗剂具有更有利的副作用曲线。当在临床试验中研究时以减少神经性疼痛的剂量NR2B选择性化合物CP-101，606具有良好的耐受性并且没有非选择性拮抗剂不需要的作用特征，即致幻觉反应，幻觉，烦躁不安(CN.Sang，等.ProgramNo.814.9.2003 Abstract Viewer/Itinerary Planner.Washington，DCSociety for Neuroscience，2003.Online)。
NR2B亚型的选择性NMDA拮抗作用可以使用特异性结合，并且作用于含有受体NR2B亚单位的变构调节部位的化合物来实现。可以通过使用特定的放射性配体例如[3H]-Ro 25，6981[J.Neurochem.，70，2147-2155(1998)]进行置换(结合)研究来描述此结合部位的特性。
式(I)的羧酸脒衍生物的相近结构的类似物根据文献是未知的，尽管在以下的出版物中描述了一些作为NR2B亚型选择性NMDA拮抗剂的不同的甲脒衍生物在专利第WO 200198262号和Bioorg.Med.Chem.Letters，13，693-696.(2003)中描述了肉桂脒。
专利号第 WO 200067751中和Bioorg.Med.Chem.Letters，13，693-696.(2003)以及Bioorg.Med.Chem.Letters，13，697-700.描述了苯甲脒。
发明概述令人惊讶地发现了本发明式(I)的新的吲哚-2-甲脒衍生物是大鼠皮层神经元NMDA受体的功能性拮抗剂，其IC50小于1微摩尔。由于它们在10微摩时对包含NR2A亚单位的NMDA受体无效，这种作用归因于它们对包含NR2B的受体的抑制作用。因此，相信它们是NR2B亚型的特异性NMDA拮抗剂，并具有治疗用途。
发明详述因此，本发明首先涉及式(I)的新吲哚-2-甲脒衍生物 -其中含义为X是氢或卤素原子，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，三氟甲基，
Y，V和Z独立地为氢原子或卤素原子，羟基，氰基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷基磺酰胺基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷酰基酰胺基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，或在特定的情况下，相邻的V和Z基团与一个或多个相同或不同的另外的杂原子和-CH＝和/或-CH2-基形成任选取代的4-7元的同环-或杂环，优选苯，二氧戊环，A，B和C独立地为取代的碳原子或它们之一为氮原子，及其盐。
本发明的进一步的目的是生产式(I)吲哚-2-甲脒衍生物和制造含这些化合物的药剂的方法，以及使用这些化合物治疗的方法，即给治疗的哺乳动物-包括人-施用有效量(amount)/数量(amounts)的如本发明式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物或药剂。
本发明式(I)的新的吲哚-2-甲脒衍生物是高效和选择性的NMDA受体拮抗剂，而且大部分化合物是选择性的NR2B亚型NMDA受体的拮抗剂。
根据本发明，式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物通过使式(II)的甲亚胺酸(carboximidic acid)烷基酯的盐 -其中X的含义如权利要求1所给出，Anion表示一个阴离子的等价物，R是C1-C4烷基-与式(III)的芳烷基胺反应来合成 -其中A，B，C，Y，V，Z的含义如前式(I)所给出，然后在特定的情况下，将所得的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-A，B，C，Y，V，Z的含义如前式(I)所给出-通过已知方法通过引入新的取代基和/或修饰或除去存在的基团，和/或通过成盐和/或将化合物从盐中游离而转变成另外的式(I)化合物。
本发明的化合物可容易地在碱存在下在适宜的温度在反应惰性溶剂中通过使适当的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐与适当的芳烷基胺反应来制备。这些反应的典型溶剂是乙醇，甲醇，二氯甲烷，二氯乙烷，四氢呋喃。
所需的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐(例如乙酯)可方便地通过Pinner反应来制备，即通过使相应的腈与醇的饱和盐酸溶液反应来制备。甲亚胺酸烷基酯盐酸盐反应物制备所需的腈反应物通过使相应的酰胺与磷酰氯反应来制备。酰胺按照众所周知的方法通过使相应的酰基氯酰胺化来制备。酰基氯通过适宜的羧酸与亚硫酰氯反应制备，后者通常作为反应物以及溶剂。在式(II)化合物和式(III)化合物的反应中，所应用的的碱是摩尔过量的式(III)芳烷基胺试剂。必要的反应时间是1-24h，优选6h。优选的反应温度为大约20℃至大约30℃。反应混合物通过柱色谱法使用Kieselgel60(Merck)作为吸附剂和适当洗脱液进行纯化。使用盐酸将适宜的级分酸化并浓缩得到纯化产物的盐酸盐。通过HPLC-MS法测定产物的性质和量。
制备式(II)的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐反应物所需的1H-吲哚-2-羧酸和式(III)的苯偶酰胺可商购获得。
试验方案重组NMDA受体的表达为了证明我们化合物的NR2B选择性，我们在稳定表达具有NR1(-3)/NR2A亚单位组成的重组NMDA受体的细胞株上对它们进行测试。使用阳离子脂质介导的转染方法将亚克隆至可诱导的哺乳动物表达载体的人NR1(-3)和NR2A亚单位的cDNAs引入缺乏NMDA受体的HEK293细胞中[Biotechniques，1997May；22(5)982-7；Neurochemistry International，43，19-29.(2003)]。使用对新霉素和潮霉素的耐药性来筛选具有载体和单克隆细胞株的克隆，由对NMDA暴露产生最高应答的克隆来建立。在荧光钙测量中测试了化合物对NMDA诱发的细胞溶质钙浓度升高的抑制作用。在加入诱导剂后48-72h进行研究。在诱导过程中还存在氯胺酮(500μM)以防止细胞毒性。
使用荧光平板读数器测量大鼠皮层细胞培养基的细胞内钙浓度来评定NMDA拮抗剂的体外效能细胞内钙的测量在源于17天大的Charles River大鼠胚胎的原代新生皮层细胞培养物上进行(新生皮层细胞培养物的制备详见Johnson，M.I.；Bunge，R.P.(1992)Primary cell cultures ofperipheral and central neurons and glia.InProtocols for NeuralCell Culture，edsFedoroff，S.，Richardson A.，The Humana PressInc.，51-75)。分离后，将细胞加到标准的96-孔微量培养板上，在37℃95％空气-5％CO2气氛中保持培养直到进行钙测量。
3-7天后将该培养物用于体外的细胞内的钙测量。在测试前使细胞装载荧光Ca2+-敏感染料，Fluo-4/AM(2-2.5μM)。通过用于测量的溶液(140mM NaCl，5mM KCl，2mM CaCl2，5mM HEPES，5mM HEPES-Na，20mM葡萄糖，10μM甘氨酸，pH＝7.4)洗涤细胞两次来停止装载。洗涤后将测试化合物加入在上述溶液的细胞中(90μl/孔)。使用荧光平板读数器进行细胞内钙的测量Fluo-4-荧光的升高，因此细胞内钙浓度是由应用40μM NMDA所诱导的。在不同浓度的化合物存在下通过测量钙升高的减少来评价测试化合物的抑制效能。
使用由至少三个独立实验获得的数据计算剂量-反应曲线和IC50值。化合物在单一浓度点的抑制效能表示为NMDA反应的抑制百分数。S形的浓度-抑制曲线与数据相吻合并且IC50值确定为产生由该化合物所引起的半数最大抑制作用的浓度。
在表1中列出了本发明大部分有效化合物在该试验中测定的NR2B拮抗剂效能。表2给出了作为参照化合物的选择性NR2B拮抗剂CI-1041和非选择性NMDA受体拮抗剂MK-801的结果。
表1通过荧光法在皮层细胞或表达NR1-3/NR2A亚单位的细胞上测定的化合物的NMDA拮抗剂活性
表2通过荧光法在皮层细胞或表达NR1-3/NR2A亚单位的细胞上测定的参照化合物的NMDA拮抗剂活性
参照化合物如下CI-10416-{2-[4-(4-氟-苯甲基)-哌啶-1-基]-乙烷亚磺酰基}-3H-苯并唑-2-酮Co 1012441-[2-(4-羟苯氧基)乙基]-4-羟基-4-(4-甲基苯甲基)哌啶
EMD 958856-[3-(4-氟苯甲基)哌啶-1-基]丙酰]-2，3-二氢-苯并唑-2-酮CP-101，606(1S，2S)-1-(4-羟苯基)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-1-丙醇Co-1111031-[2-(4-羟基苯氧基)乙基]-4-(4-氟苯甲基)哌啶Ro 256981R-(R*，S*)-1-(4-羟苯基)-2-甲基-3-[4-(苯基甲基)哌啶-1-基]-1-丙醇。
艾芬地尔赤-2-(4-苯甲基哌啶子基)-1-(4-羟苯基)-1-丙醇MK-801(+)-5-甲基-10，11-二氢-5H-二苯并[a，d]环庚烯-5，10-亚胺有利地可以使用在NR2B部位作用的NMDA拮抗剂治疗的疾病，如Loftis最近的综述[Pharmacology&Therapeutics，9755-85(2003)]，包括精神分裂症，帕金森病，亨廷顿病，由缺氧和局部缺血引起的兴奋性中毒，癫痫发作，药物滥用，和疼痛，特别是任何原因的神经性，炎性和内脏的疼痛[Eur.J.Pharmacol，429，71-78(2001)]。
由于与非选择性NMDA拮抗剂相比它们具有减少副作用的倾向，NR2B选择性拮抗剂可用于NMDA拮抗剂有效的疾病，例如肌萎缩性侧索硬化[Neurol.Res.，21309-12(1999)]，例如酒精，阿片样物质或可卡因戒断综合征[Drag and alcohol depend.，59，1-15(2000)]，肌痉挛[Neurosci.Lett.，73，143-148(1987)]，不同起因的痴呆[ExpertOpin.Investig.Drugs，9，1397-406(2000)]，焦虑，抑郁，偏头疼，低血糖，视网膜的变性疾病(例如CMV视网膜炎)，青光眼，哮喘，耳鸣，听力损失[Drug News Perspect，11，523-569(1998)和WO.00/00197国际专利申请]。
因此，有利地有效量的本发明的化合物可用于治疗大脑或脊髓的创伤性损伤，阿片类物质治疗疼痛的耐受和/或依赖，耐受性的发展，滥用潜力的减少和滥用药物例如乙醇，阿片样物质或可卡因的戒断综合征，局部缺血性CNS疾病，慢性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病，帕金森病，亨廷顿病，疼痛和慢性疼痛状态，例如神经性疼痛。
本发明的化合物以及它们药学上可接受的盐可以以此或适宜的药物组合物形式使用。这些组合物(药物)可以是固体，液体或半液体形式并且可加入实践中通常使用的药物助剂和辅助材料，例如载体，赋形剂，稀释剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，pH-和渗透压-调节剂，调味剂，或芳香剂，以及增进配方或供应配方的添加剂。
在特定情形下起到治疗作用所需要的剂量可根据以下情况在大范围内改变并满足个体需要，这取决于疾病的阶段，所治疗患者的状况和体重，以及患者对活性成分的敏感性，施用途径和治疗天数。活性成分的实际使用剂量可以由熟悉患者所接受治疗的知识领域的主治医生来安全地确定。
包含根据本发明活性成分的药物组合物的一个剂量单元通常包含0.01至100mg的活性成分，当然在一些组合物中活性成分的量超过了上文定义的上限或下限。
药物组合物的固体形式可以是例如片剂，糖衣片，胶囊，丸剂或用于注射剂制备的冻干粉末安瓿剂。液体组合物是可注射和可输注的组合物，液体药物，充填液和滴剂。半液体组合物可以是软膏，香脂，乳膏，振摇混合物和栓剂。
为了施用简单，如果药物组合物所包括的剂量单元含施用一次或几次或施用其二分之一或三分之一或四分之一的量的活性成分，是适合的。这样的剂量单元是例如片剂，该片剂能够用促进其对分或四分的凹槽来粉碎以利于准确施用需要量的活性成分。
片剂可以用酸溶层包衣以确保在离开胃之后释放活性成分内容物。这样的片剂包肠溶衣。通过将活性成分装入胶囊也能得到类似的效果。
口服施用的药物组合物可以包括例如作为赋形剂的乳糖或淀粉，作为粘合剂或粒化剂的羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮或淀粉糊。加入作为崩解剂的马铃薯淀粉或微晶纤维素，但也可使用超支链淀粉或甲醛酪蛋白。滑石、胶体硅酸、硬脂精、硬脂酸钙或硬脂酸镁可用作抗粘着剂或滑润剂。
片剂可以例如通过湿法制粒后压制来制备。在适当的设备中用粘合剂水溶液、醇溶液或醇水溶液将混合的活性成分和赋形剂以及在特定情况下部分崩解剂制粒，然后将颗粒干燥。将其他崩解剂、滑润剂和抗粘着剂加入在干燥的颗粒中，并将混合物压制成片剂。在特定情况下，制备的片剂具有等分槽以便于施用。
片剂可由活性成分和适当的助剂的混合物通过压制直接制备。在特定情况下，片剂可用通常在制药实践中使用的添加剂例如稳定剂、调味剂、着色剂，例如糖、纤维素衍生物(甲基纤维素或乙基纤维素、羧甲基纤维素钠等)、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙、碳酸钙、食用着色剂、食用酒精(food lace)、芳香剂、氧化铁颜料等涂敷。在胶囊剂情况中，将活性成分和适当的助剂的混合物装在胶囊中。
液体口服组合物，例如悬浮液、糖浆剂、酏剂，可通过用水、二醇、油、醇、着色剂和调味剂进行制备。
为直肠施用，将组合物配制成栓剂或灌肠剂。栓剂除活性成分外可含称为前栓动物脂的载体。载体可以是植物油，例如氢化植物油、C12-C18脂肪酸甘油三酯(优选商品名为Witepsol的载体)。将活性成分与熔化的前栓动物脂均匀混合并模制成栓剂。
为胃肠外施用，将组合物配制成注射液。为制备注射液，将活性成分溶解在蒸馏水和/或不同的有机溶剂中，例如乙二醇醚，在特定条件下，存在增溶剂例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、单油酸酯或单硬脂酸酯(Tween 20，Tween 60，Tween 80)。注射液还可包括不同的助剂，例如保存剂例如乙二胺四乙酸盐，以及pH调节剂和缓冲液和特定条件下的局部麻醉药如利多卡因。在装入安瓿前将含本发明活性成分的注射液过滤，在装入后将其灭菌。
如果活性成分吸湿，那么通过冻干可使其稳定。
下列实施例举例说明本发明，对本发明无任何限制。
表征方法通过与质量选择性检测器相连的高效液相色谱使用具有Microplate Sampler的HP1100二元梯度色谱系统(Agilent，Waldbronn)，由Chemstation软件控制来对本发明的化合物进行表征。使用HP二极管阵列检测器在225和240nm获得UV光谱。所有的试验使用装备有电喷射离子化源的HP MSD(Agilent，Waldbronn)单一四极光谱仪来确定结构。
合成产物溶解于1ml DMSO中(Aldrich，德国)。使用DMSO将100μl的各种溶液稀释至1000μl体积。在由Supelco(Bellefonte，Pennsylvania)获得的Discovery RP C-16 Amide，5cm×4.6mm×5μm柱上使用1ml/分钟的流速进行分析色谱试验以进行定性。获得的化合物由它们K′值(纯度，容量因子)表征。K′因子由下式进行计算k′＝(tR-t0)/t0其中k′＝容量因子，tR＝保留时间和t0＝洗脱液保留时间洗脱液A是包含0.1％水的三氟乙酸(TFA)(Sigma，德国)，洗脱液B是包含0.1％TFA和5％洗脱液A的95％乙腈(Merck，德国)。使用梯度洗脱，由100％的洗脱液A开始在5分钟内变化到100％的洗脱液B。
通过以下的非限制性实施例对根据我们发明的方法进行详细说明实施例1N-苯甲基-1H-吲哚-2-甲脒盐酸盐1a)1H-吲哚-2-羧酸酰胺将10.0g(62mmol)1H-吲哚-2-羧酸(Aldrich)，10.0ml(76mmol)亚硫酰氯，100ml氯仿和1滴二甲基甲酰胺的混合物回流2h。反应混合物冷却至20℃，倾入100ml 25％的氨溶液和100g冰的混合物中，然后搅拌2h。滤出沉淀产物并用水洗涤得到8.96g(90％)的标题化合物。Mp.231-232℃。
1b)1H-吲哚-2-腈将8.96g(56mmol)1H-吲哚-2-羧酸酰胺，26.0ml(279mmol)磷酰氯和230ml氯仿的混合物回流2h。反应混合物冷却至20℃，倾入100ml水中并搅拌1h。分离有机层后经过硫酸钠干燥并浓缩。通过柱色谱法使用Kieselgel60(Merck)作为吸附剂和己烷∶乙酸乙酯＝4∶1做为洗脱剂对残留物进行纯化，得到5.28g(66.4％)的标题化合物。Mp.94-95℃。
1c)1H-吲哚-2-甲亚胺酸乙基酯盐酸盐将2.23g(15.7mmol)的1H-吲哚-2-腈加入20ml的饱和盐酸的乙醇溶液中。反应混合物在20℃搅拌2h，然后浓缩并使用醚对残留物进行结晶得到3.1g(82％)的标题化合物。Mp.170℃。
1d)N-苯甲基-1H-吲哚-2-甲脒盐酸盐将28.2mg(0.15mmol)1H-吲哚-2-甲亚胺酸乙基酯盐酸盐的1ml乙醇溶液加至32.1mg(0.3mmol)苯甲胺的1ml乙醇溶液中。反应混合物在室温下搅拌6h，然后浓缩。通过柱色谱法使用Kieselgel60(Merck)作为吸附剂和甲苯∶甲醇＝4∶1作为洗脱剂对残留物进行纯化。使用盐酸对包含产物的级分进行酸化并浓缩。通过上文所述HPLC-MS法测定产物的性质和量。K′＝2.46。
表3包括了取代的1H-吲哚-2-甲亚胺酸乙酯盐酸盐衍生物，其是根据实施例1所述方法由相应的1H-吲哚-2-羧酸制备的代表性的(I)化合物，并且使用以上表征方法进行表征。
表3
使用的芳烷基胺衍生物为商购产品。
实施例2药物组合物的制备a)片剂将0.01-50％的式(I)的活性成分，15-50％的乳糖，15-50％的马铃薯淀粉，5-15％的聚乙烯吡咯烷酮，1-5％的滑石粉，0.01-3％的硬脂酸镁，1-3％的胶体二氧化硅和2-7％的过支链淀粉混合，然后通过湿法制粒并压制成片剂。
b)糖衣片，薄膜包衣片将按照上述方法制备的片剂用由肠或胃溶薄膜组成的，或由糖或滑石粉组成的层包衣。糖衣片用蜂蜡和carnuba腊的混合物抛光。
c)胶囊将0.01-50％的式(I)活性成分，1-5％的十二烷基硫酸钠，15-50％的淀粉，15-50％的乳糖，1-3％的胶体二氧化硅和0.01-3％的硬脂酸镁充分混合，将混合物过筛并填充至硬明胶胶囊中。
d)混悬液成分0.01-15％的式(I)活性成分，0.1-2％的氢氧化钠，0.1-3％的柠檬酸，0.05-0.2％的尼泊金(4-羟基苯甲酸甲酯钠)，0.005-0.02％的对羟基苯甲酸丙酯，0.01-0.5％的卡波普(聚丙烯酸)，0.1-5％的96％乙醇，0.1-1％的矫味剂，20-70％的山梨醇(70％水溶液)和30-50％的蒸馏水。
在剧烈搅拌下，按小份将卡波普加至在20ml蒸馏水中的尼泊金和枸橼酸溶液中，并将溶液放置10-12h。然后在搅拌下加入在1ml蒸馏水中的氢氧化钠，山梨醇水溶液并最终加入乙醇覆盆子香精。往载体中按小份加入活性成分并使用浸渍匀浆机悬浮。最后用蒸馏水将该悬浮剂加至所需最终体积，且将该悬浮糖浆过胶体研磨设备。
e)栓剂对每种栓剂，将0.01-15％的式(I)活性成分和1-20％的乳糖充分混合，然后将50-95％的栓剂前动物脂肪(例如Witepsol 4)熔化并冷却至35℃，用匀化器将活性成分和乳糖的混合物在其中混合。将所得混合物冷却塑模。
f)冻干粉安瓿组合物以注射用双蒸水制成5％的甘露醇或乳糖水溶液，将该溶液过滤以获得灭菌溶液。0.01-5％式(I)活性成分的水溶液也以注射用双蒸水制成，并将此溶液过滤以获得灭菌溶液。在无菌条件下将这两种溶液混合，在安瓿中装入1ml，将安瓿内容物冻干，且将安瓿在氮气下密封。在施用前，将安瓿内容物溶解在灭菌水或0.9％(生理的)灭菌氯化钠水溶液中。
权利要求
1.式(I)新吲哚-2-甲脒衍生物 -其中含义为X是氢或卤素原子，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，三氟甲基，Y，V和Z独立地为氢原子或卤素原子，羟基，氰基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷基磺酰胺基，任选由一个卤素原子或多个卤素原子取代的C1-C4烷酰基酰胺基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，或在特定的情况下，相邻的V和Z基团与一个或多个相同或不同的另外的杂原子和-CH＝和/或-CH2-基形成任选取代的4-7元的同环-或杂环，优选苯，二氧戊环，A，B和C独立地为-CH＝基团或它们之一为氮原子，及其盐。
2.属于权利要求1的范围的下组的吲哚-2-甲脒衍生物的化合物N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2-乙氧基-苯甲基)-1H-吲哚-2-甲脒，N-(3-甲氧基-苯甲基)-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2-乙氧基-苯甲基)-5-氟-1H-吲哚-2-甲脒，N-(2，6-二甲氧基-苯甲基)-5-氟-1H-吲哚-2-甲脒，及其盐。
3.含有有效量的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z含义如权利要求1所给出-或其盐作为活性成分和实践中通常使用的辅助材料，例如载体，赋形剂，稀释剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，pH-和渗透压-调节剂，调味剂，或芳香剂，以及增进配方或供应配方的添加剂的药物组合物。
4.制备式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物的方法-其中A，B，C，X，Y，V，Z含义如权利要求1所给出-其特征在于使式(II)的甲亚胺酸烷基酯的盐 -其中X的含义如权利要求1所给出，Anion表示一个阴离子的等价物，R是C1-C4烷基-与式(III)的芳烷基胺反应 -其中A，B，C，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出，然后在特定的情况下，将所得的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-A，B，C，X，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出-通过已知方法通过引入新的取代基和/或修饰或除去存在的基团，和/或通过成盐和/或将化合物从盐中游离而转变成另外的式(I)化合物。
5.如权利要求4的方法，其特征在于使式(II)的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐-其中X和R含义如权利要求1所列出并且Anion表示Cl-离子-和式(III)的芳烷基胺-其中A，B，C，Y，V，Z含义如权利要求1所列出-在碱的存在下反应。
6.如权利要求4的方法，其特征在于在烷醇中在过量的式(III)的芳烷基胺-其中A，B，C，Y，V，Z含义如权利要求1所列出-存在的情况下使式(II)的甲亚胺酸烷基酯盐酸盐-其中X和R含义如权利要求1所列出并且Anion表示Cl-离子-和式(III)的芳烷基胺-其中A，B，C，Y，V，Z含义如权利要求1所列出-反应。
7.制备具有NR2B选择性NMDA受体拮抗剂作用的药物组合物的方法，其特征在于将式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z的含义如式(I)所给出-或其药学上可接受的盐作为活性成分和实践中通常使用的辅助材料，例如载体，赋形剂，稀释剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，pH-和渗透压-调节剂，调味剂，或芳香剂，以及增进配方或供应配方的添加剂混合。
8.治疗和缓解哺乳动物-包括人-的以下疾病-大脑或脊髓的创伤性损伤，与人免疫缺陷病毒(HIV)相关的神经元损伤，肌萎缩性侧索硬化，阿片类物质治疗疼痛的耐受和/或依赖，滥用药物例如乙醇，阿片样物质或可卡因的戒断综合征，局部缺血性CNS疾病，慢性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病，疼痛和慢性疼痛状态，例如神经性疼痛或癌症相关疼痛，癫痫，焦虑，抑郁，偏头疼，精神病，肌肉痉挛，不同原因的痴呆，低血糖，视网膜的变性疾病，青光眼，哮喘，耳鸣，氨基糖苷抗生素诱发的听力损失的症状的方法，其特征在于如此给所治疗的哺乳动物施用有效量/数量的式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出-或其旋光对映体或外消旋化合物或药学上可接受的盐或将其与在药学上通常应用的载体，填充剂等组合使用。
9.式(I)的吲哚-2-甲脒衍生物-其中A，B，C，X，Y，V，Z的含义如权利要求1所给出-或其旋光对映体或外消旋化合物或药学上可接受的盐制备用于治疗和缓解哺乳动物，包括人的以下疾病症状的药物的用途，疾病包括大脑或脊髓的创伤性损伤，与人免疫缺陷病毒(HIV)相关的神经元损伤，肌萎缩性侧索硬化，阿片类物质治疗疼痛的耐受和/或依赖，滥用药物例如乙醇，阿片样物质或可卡因的戒断综合征，局部缺血性CNS疾病，慢性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病，疼痛和慢性疼痛状态，例如神经性疼痛或癌症相关疼痛，癫痫，焦虑，抑郁，偏头疼，精神病，肌肉痉挛，不同原因的痴呆，低血糖，视网膜的变性疾病，青光眼，哮喘，耳鸣，氨基糖苷抗生素诱发的听力损失。
全文摘要
本发明首先涉及式(I)的新吲哚－2－甲脒衍生物。－其中含义为X是氢或卤素原子，C
文档编号A61K31/405GK1989103SQ200580024765
公开日2007年6月27日 申请日期2005年7月21日 优先权日2004年7月29日
发明者I·博尔扎, C·霍瓦特, S·福尔考什, J·纳吉, S·科洛科 申请人:匈牙利吉瑞大药厂
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