聚合物、抗血管生成剂和靶向部分的缀合物及其在治疗骨相关血管生成状况中的用途的制作方法
专利名称：聚合物、抗血管生成剂和靶向部分的缀合物及其在治疗骨相关血管生成状况中的用途的制作方法
聚合物、抗血管生成剂和靶向部分的缀合物及其在治疗骨 相关血管生成状况中的用途政府利益的声明
本发明是在由国立卫生研究院授予的GM069847下，由政府支持做出的。政府享有本发 明的一些权利。发明领域和背景
在某些实施方案中，本发明涉及化学缀合物及其在治疗和诊断中的用途，更特别地，但 非排他性地，涉及聚合物、抗血管生成剂和靶向部分的化学缀合物，其用于例如治疗和监测 骨相关疾病和病症比如骨癌和骨转移。骨肉瘤是原发性骨癌的最常见类型，归类为其中肿瘤直接产生缺损的类骨质(未 成熟骨)的恶性间质肿瘤。其是一种最通常在长骨的干骺端出现的血管多且非常有害的恶 性肿瘤。在过去的二十年中，由侵袭性化疗与根治性外科切除术组成的综合治疗已经成为 骨肉瘤控制的主要方式，目前没有出现转移性疾病的患者中50%至70%获得了 5年存活率。 提出了一些策略，比如基于免疫的治疗、肿瘤抑制剂或自杀基因治疗或通常不用于骨肉瘤 的抗癌药[Quan 等人，Cancer Metastasis Rev 2006; 10: 707-713]。然而，仍然有三分之 一的患者死于这一毁灭性的癌症，对于患有不能切除的疾病的患者，没有治愈性全身治疗。前列腺癌是工业化国家中最常见的男性癌症，并且是男性癌症死亡的第二个主要 原因。这些患者的死亡不是由于原发肿瘤生长，而是由于向生命器官的转移引起的并发症。 前列腺癌主要转移到骨骼，但是其它器官部位也受到影响，包括肺、肝和肾上腺。乳腺癌通常也转移到骨骼。在患有晚期转移性疾病的患者中，骨转移的发病率为约70 %。骨转移与相当大量 的骨胳病症(skeletal morbidity)相关，包括严重的骨痛、病理性骨折、脊髓或神经根压迫 和恶性肿瘤的高血钙症。化疗剂、激素剥夺(hormonal deprivation)和二膦酸盐是晚期转 移性疾病的常见治疗方式。然而，随时间逝去，疾病发展至标准治疗不能控制该恶性肿瘤的 阶段和进一步发展至高度化疗耐受性状态的阶段。肿瘤发展和转移高度取决于新血管供应的氧和营养物，所述新血管的形成受到 肿瘤本身及其环境的刺激。抗血管生成治疗剂与常规治疗的组合对于骨肉瘤控制和降 低转移的危险具有极大的可能性。血管生成抑制剂，比如TNP-470[Folkman，J. Apmis 2004; 112: 496-507]，其无毒的N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物-缀 合形式，caplostatin[Satchi-Fainaro 等人，Cancer Cell 2005; 7: 251-261],和 Avastin [Hurwitz 等人，N Engl J Med 2004; 350: 2335-2342]作为新形态的抗癌药出 现。目前存在八种批准的具有公认抗血管生成性质的抗癌治疗剂。这些试剂中断参 与肿瘤血管生成和生长的关键性细胞信号传导途径，其可以分成两个主要的种类(1)单 克隆抗体，针对特定的促血管生成因子和/或其受体；(Avastin，Erbitux, Vectibix, Herceptin)和(2)多种促血管生成生长因子受体的小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKIs) (Tarveca, Nexavar, Sutent)。mT0R(雷帕霉素的哺乳动物靶点)的抑制剂代表第三个较小
7种类的抗血管生成治疗剂，具有只有一个批准的试剂(Torisel)。另外，至少两种其它批准 的抗血管生成剂可以经由还未完全理解的机制间接地抑制血管生成(Velcade，Celgene) 0第一种FDA批准的血管生成抑制剂贝伐单抗(Avastin，Genentech)，一种血管内 皮生长因子(VEGF)的单克隆抗体，最近被批准与标准常规化疗联合用于转移性结肠癌治疗。阻断血管生成的最大类型的药物是靶向VEGF受体(VEGFR)的多靶点酪氨酸激 酶抑制剂(TKIs)。这些药物比如 sunitinib (Sutent, Pfizer)、Sorafenib (Nexavar, Bayer/Onyx Pharmaceuticals)禾口 Erlotinib (Tarveca, Gennentech/OSI/Roche)具有攻 击多个靶点、方便口服给药和经济有效的优点。虽然这些药物显示出有希望的功效，它们的 使用受到缺少靶特异性的限制，其导致预想不到的毒性[Cabebe等人，Curr Treat Options Oncol 2007; 8:15—27]。因此，寻求与或不与其它抗肿瘤剂使用的新靶向血管生成抑制剂。这一努力的主 要障碍是不能确定治疗效果、缺乏肿瘤血管生成的可靠代用品标记物和参与肿瘤血管生成 的多个宿主细胞和恶性细胞之间相互作用的复杂性，其可能限制单个抗血管生成剂的使 用。另一个显著的障碍是大多数临床使用的抗癌和抗血管生成药物是小分子，其显示出在 血流中半衰期短和总清除率高。这些低分子量药物快速扩散到健康组织中，并均勻地分布 在体内。因此，相对少量的药物到达靶部位，治疗的功效低且副作用严重。TNP-470是一种烟曲霉素的低分子量合成类似物，其在体外能够选择性地抑制内 皮生长。在临床试验中，发现在患有转移性癌症的许多患者中，当与常规化疗组合使用时， 该药物减缓肿瘤生长，显示出有希望的功效。然而，在肿瘤消退所需的剂量下，许多患者经 历神经毒性。由于其剂量限制性神经毒性，对于使用TNP-470本身，没有进行进一步的临床 研究。已经推断出应当利用TNP-470与靶向肿瘤组织的试剂的临床应用，以便增加其部位 特异性和减少副作用。水溶性聚合物比如N-(2_羟丙基)甲基丙烯酰胺共聚物(HPMA)是生物相容的、 非免疫原性的且无毒的载体，其能够特定地递送到肿瘤组织中[Satchi-Fainaro等人，Nat Med 2004; 10: 255-261]。这些大分子不会扩散通过正常血管，而是因为提高渗透和滞留 (EPR)效应，其选择性地聚集在肿瘤部位。在许多实体瘤中，对于大分子试剂和脂质，观察 到经由高渗透性(hyperpermeable)新血管系统的被动扩散和定位在肿瘤间质的这一现象。 抗癌药物比如TNP-470与共聚物比如HPMA的缀合将能够将这些药物选择性地靶向至肿瘤 组织，因此减少了副作用。而且，与游离药物相比，通过将细胞暴露于循环中的缀合药物较 长的时间，这样的共聚物_药物缀合物将限制穿过血脑屏障，延长药物的循环半衰期，因而 抑制肿瘤内皮细胞和上皮细胞的生长。Satchi-Fainaro等人在WO 03/086382中已经描述了通过将抗血管生成试剂比 如TNP-470缀合至HPMA获得的有利特征的一个实例。该专利申请教导了水溶性聚合物和 TNP-470的缀合物及其作为抗肿瘤剂的用途，特别是其作为TNP-470进入肿瘤血管的载体 的用途，及其对于TNP-470神经毒性的作用。根据WO 03/086382的教导，与单独的TNP-470 相比，一个示例性的这种缀合物HPMA-(TNP-470)缀合物(caplostatin)显示出较好的抗癌 活性和降低水平的毒性。WO 03/086382进一步提出结合靶向配体比如R⑶或抗体。HPMA-TNP-470缀合物用于治疗血管生成相关状况的用途还描述在WO 03/086178中。通过将抗肿瘤药物缀合至水溶性聚合物获得活性增加而毒性减少的另一个实例 列出在美国专利No. 6，884，817中。Meerum Terwogt等人已经描述了一种紫杉醇的HPMA共聚物缀合物[Anticancer drugs 2001; 12 315-323]。该缀合物旨在改善药物溶解性和提供紫杉醇的控制释放。在该 缀合物中，紫杉醇经由酯键连接HPMA共聚物，因此，通过酯键的非组织特异性水解或酶(酯 酶)降解从聚合物中释放，从而诱导通常观察到的紫杉醇毒性。二膦酸盐(BPs)比如阿仑膦酸盐是具有类似于无机焦磷酸(PPi)的化学结构的化 合物，无机焦磷酸是一种内源性的骨矿化调节剂。一些二膦酸盐被证实作为临床病症比如 骨质疏松症、骨的佩吉特病、骨髓瘤、和骨转移的有效治疗剂。二膦酸盐比如唑来膦酸显示 出抑制血管生成[Wood 等人，J Pharmacol Exp Ther 2002; 302: 1055-1061]。在生理条 件下显示出对骨矿物的强亲和力、低毒性和抗血管生成活性的二膦酸盐的药代动力学特征 对于靶向至限制于骨组织的肿瘤是有利的。阿仑膦酸盐被认为对于治疗骨相关疾病和癌症伴随的高血钙症有效。在几种体 内癌症模型中，其显示出具有通过几个不同机制的抗癌作用[Tuomela等人，2008，BMC Cancer 8:81; Molinuevo 等人，2007， Eur J Pharmacol 562:28—33; Hashimoto 等人， 2005，Cancer Res 65: 540-545]。另外，发现阿仑膦酸盐具有抗血管生成活性，其通过 如下方式⑴在卵巢癌症模型中，抑制VEGF诱导的Rho活化[Hashimoto等人，2007， Biochem Biphys Res Commun 354: 478-484]，(ii)在甲羟戊酸途径中，抑制焦磷酸法 呢酯合酶[Russell RG 2007, Pediatrics 119 Suppl 2: S150-162]；和(iii)在骨 肉瘤细胞系中，调节MMP-2表达的细胞水平[Cheng等人，2004，Pediatr Blood Cancer 42;410-415]。其它的骨靶向试剂是天门冬氨酸的寡聚肽。Wang等人描述了荧光素标记的骨靶向 模型缀合物，用于在HPMA共聚物上载有1 %负载量的D-Asp8的检测目的[Wang等人，2003 Bioconjug Chem 14:853-859]。在体外和体内测试了该缀合物的骨靶向潜能，发现其在骨 组织中选择性地聚集[Wang等人，2006，Mol Pharm 3:717-725]。WO 2004/062588教导了用于骨靶向药物递送的水溶性聚合缀合物，其具有改善的 药代动力学参数和较好的负载药物的水溶解性。该申请教导的聚合药物递送系统是基于骨 靶向药物比如阿仑膦酸盐和D-Asp8与骨相关治疗剂组合的羟丙基甲基丙烯酰胺(HPMA)缀 合物。阿仑膦酸盐和D-Asp8在HPMA共聚物上的负载量分别是0.494 mmol/gram和0. 762 mmol/gram。PK2 (FCE28069)是一种HPMA共聚物-多柔比星-半乳糖胺缀合物，其设计作为 肝细胞癌或继发性肝病的治疗剂。[Seymour等人，Journal of Clinical Oncology 2002; 20:1668-1676]。多柔比星是一种在生理溶液中具有有限溶解度的蒽环类抗生素，并且是一 种熟知的抗肿瘤药物。半乳糖胺结合肝脏的无唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，因此充当特定的 肝靶向部分。这些组分经由酶可生物降解的连接基连接HPMA聚合物，其允许在肝脏内释放 游离的多柔比星，因而升高了其作用部位的药物浓度。所述酶可降解的连接基是四肽间隔 基(Gly-Phe-Leu-Gly)，设计由溶酶体组织蛋白酶切割。0，hare 等人，[Journal of Drug Targeting 1993; 1:217-229]合成了包含多柔比星和作为黑素瘤特异性靶向部分的促黑素细胞激素(MSH)的HPMA共聚物。多柔比星和 促黑素细胞激素都经由酶可生物降解的连接基连接HPMA聚合物。Hruby 等人，[Journal of Applied Polymer Science 2006; 101: 3192 - 3201] 基于生物相容性HPMA共聚物制备合成了新的聚合药物递送系统，该系统设计用于骨靶向 和抗肿瘤，所述相容性HPMA共聚物包含羟基二膦酸盐靶向部分和模型药物放疗剂1251、显 影剂mIn或抗癌药物多柔比星。在HPMA共聚物上负载的羟基二膦酸盐的百分数在1. 3-4 mol %范围之内。发明简述
在获得抗肿瘤活性的剂量下，用于治疗骨相关癌症及其它血管生成相关状况的目前已 知试剂的特征在于毒性高，其限制了它们的应用。在改良目前已知的抗血管生成剂的模式， 以便能够获得更高治疗效果和降低的副作用水平的探索中，本发明人设计并成功地制备和 实践了 N-(2-羟丙基)_甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物、TNP-470和骨靶向试剂阿仑膦酸盐 (ALN)的新的聚合缀合物，其中所述TNP-470和阿仑膦酸盐分子经由可生物降解的连接基 缀合至HPMA聚合主链的主链单元，在该HPMA聚合主链上负载的阿仑膦酸盐的百分数高于 目前已知的阿仑膦酸盐聚合物缀合物(例如，大于聚合缀合物的3 mol %)。本发明人进一步设计并成功地实践了制备本文描述的缀合物的新方法，同时获得 了阿仑膦酸盐在聚合物中的高负载量以及该聚合物的均勻尺寸分布，即低多分散性。该方 法可以在30°C下，以控制的方式有利地进行。本发明人设计并成功地制备和实践了聚合物(例如N-(2_羟丙基)甲基丙烯酰胺 (HPMA)共聚物)、抗血管生成剂(例如TNP-470)和骨靶向试剂D-Asp8的新缀合物。根据本发明的某些实施方案的一个方面，提供一种包括具有连接在其上的 TNP-470和阿仑膦酸盐的N- (2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)-衍生聚合主链的缀合物，其中阿 仑膦酸盐在该聚合物中的负载量大于3 mol %。根据本发明的某些实施方案，阿仑膦酸盐在所述聚合物中的负载量为大于5 mol%。根据本发明的某些实施方案，阿仑膦酸盐在所述聚合物中的负载量为约7 mol %。根据本发明的某些实施方案，TNP-470和阿仑膦酸盐中至少一种经由连接基连接 至所述聚合物。根据本发明的某些实施方案，TNP-470和阿仑膦酸盐中每种都经由连接基连接至 所述聚合物。根据本发明的某些实施方案，所述连接基是可生物降解的连接基。根据本发明的某些实施方案，所述可生物降解的连接基选自PH-敏感性连接基和 酶可切割的连接基。根据本发明的某些实施方案，所述可生物降解的连接基是酶可切割的连接基。根据本发明的某些实施方案，所述酶可切割的连接基为由在肿瘤组织中表达的酶 切割的。根据本发明的某些实施方案，所述酶可切割的连接基为由在肿瘤组织中过表达的 的酶切割的。根据本发明的某些实施方案，所述酶选自组织蛋白酶B、组织蛋白酶K、组织蛋白酶D、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、legumain, MMP-2和MMP-9。根据本发明的某些实施方案，所述酶是组织蛋白酶K。根据本发明的某些实施方案，所述连接基包括含有2至10个氨基酸残基的寡聚肽基团。根据本发明的某些实施方案，所述寡聚肽是-[Gly-Gly-Pro-Nle]-。根据本发明的某些实施方案，TNP-470经由间隔基连接所述聚合物或所述连接基。根据本发明的某些实施方案，所述间隔基具有式G-(CH2)n-K,其中η为1至4的整 数，G和K各自独立地选自ΝΗ、0和S。根据本发明的某些实施方案，G和K各自为ΝΗ，η为2。根据本发明的某些实施方案，阿仑膦酸盐经由包括_ [Gly-Gly-Pro-Nle]-的连 接基连接至所述聚合物。根据本发明的某些实施方案，所述缀合物具有如本文描述的通式II。根据本发明的某些实施方案，所述缀合物具有结构
根据本发明的某些实施方案，χ为等于70-99. 9的整数，y和w各自独立地为等于 0.01-15的整数。根据本发明的某些实施方案，所述缀合物进一步包括标记试剂。根据本发明的某些实施方案，所述标记试剂选自荧光剂、放射性试剂、磁性试剂、 生色团、生物发光剂、化学发光剂、发磷光的试剂和重金属簇。根据本发明的某些实施方案，所述标记试剂是异硫氰酸荧光素。这样的缀合物具有例如下述结构
权利要求
1.聚合缀合物，包括具有连接在其上的TNP-470和阿仑膦酸盐的(N-(2-羟丙基)甲基 丙烯酰胺)聚合主链，其中所述阿仑膦酸盐在聚合缀合物中的负载量大于3 mol %。
2.权利要求1的聚合缀合物，其中所述聚合主链包括多个甲基丙烯酰胺主链单元，而 所述TNP-470连接至所述主链单元的一部分，所述阿仑膦酸盐连接至所述主链单元的另一 部分。
3.权利要求1和2中任一项的缀合物，其中所述阿仑膦酸盐的所述负载量大于5mol%。
4.权利要求3的缀合物，其中所述阿仑膦酸盐的所述负载量为约7mol %。
5.权利要求1和2中任一项的缀合物，其中所述TNP-470和所述阿仑膦酸盐中至少一 个经由连接基连接至所述聚合主链。
6.权利要求5的缀合物，其中所述连接基为可生物降解的连接基。
7.权利要求6的缀合物，其中所述可生物降解的连接基为酶可切割的连接基。
8.权利要求7的缀合物，其中所述酶可切割的连接基被组织蛋白酶K切割。
9.权利要求8的缀合物，其中所述连接基包括-[Gly-Gly-Pro-Nle]-寡聚肽。
10.权利要求1-9中任一项的缀合物，其中所述TNP-470经由间隔基连接所述聚合主链 或所述连接基。
11.权利要求1-10中任一项的缀合物，其具有通式II B为所述TNP-470 ； D为所述阿仑膦酸盐；所述L1和L2的每个都独立地为所述连接基；
12.权利要求11的缀合物，其具有结构
13.权利要求11和12中任一项的缀合物，其中χ为具有使得x/(x+y+w)乘以100在70至99. 9范围内的值的整数； y为具有使得y/(x+y+ )乘以100在0. 01至15范围内的值的整数；和 w为具有使得w/(X+y+w)乘以100在5至20范围内的值的整数。
14.权利要求1-13中任一项的缀合物，其进一步包括连接在其上的标记试剂。
15.权利要求14的缀合物，其中所述标记试剂为异硫氰酸荧光素。
16.权利要求15的缀合物，其具有结构
17.权利要求1-16中任一项的缀合物，其具有的多分散指数为1至1.4。
18.权利要求1-17中任一项的缀合物，其具有的平均尺寸分布低于150nm。
19.药物组合物，其包括作为活性成分的权利要求1-18中任一项的缀合物和可药用载体。
20.权利要求19的药物组合物，其包装在包装材料中，并且在所述包装材料中或其上 的印刷中被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
21.权利要求19的药物组合物，其中所述缀合物包括标记试剂，所述组合物包装在包 装材料中，并且在所述包装材料中或其上的印刷中被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
22.—种治疗需要其的受试者中的骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者 给药治疗有效量的权利要求1-18中任一项的缀合物。
23.—种监测受试者中骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括 向受试者给药权利要求14-18中任一项的缀合物；和使用成像技术监测缀合物在身体或其部分内的分布。
24.权利要求1-18中任一项的缀合物作为药物的用途。
25.权利要求1-18中任一项的缀合物在制备用于治疗骨相关疾病或病症的药物中的 用途。
26.权利要求14-18中任一项的缀合物作为诊断试剂的用途。
27.权利要求14-18中任一项的缀合物在制备用于监测骨相关疾病或病症的诊断试剂 中的用途。
28.权利要求1-18中任一项的化合物，被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
29.权利要求14-18中任一项的化合物，被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
30.权利要求20、22、23、25和27-29中任一项的化合物、方法、用途或组合物，其中所述 疾病或病症与血管生成相关。
31.权利要求30的化合物、方法、用途或组合物，其中所述疾病或病症选自骨转移和骨癌。
32.—种合成权利要求1-18中任一项的缀合物的方法，所述方法包括(a)将阿仑膦酸盐偶合至N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺单体单元，从而得到包含阿仑 膦酸盐的甲基丙烯酰胺单体单元；(b)共聚N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺单体单元，和/或((N-(2-羟丙基)甲基丙烯 酰胺)寡聚或聚合单元与所述包含阿仑膦酸盐的甲基丙烯酰胺单体单元和端接第一反应 基团的甲基丙烯酰胺单体单元，从而得到包括多个甲基丙烯酰胺主链单元的聚合主链，其 中所述主链单元的一部分具有连接在其上的阿仑膦酸盐，所述主链单元的另一部分具有所 述反应基团，所述第一反应基团能够偶合TNP-470 ；和(c)经由所述第一反应基团偶合所述TNP-470和所述聚合主链，从而得到聚合缀合物。
33.权利要求32的方法，其中所述共聚是经由可逆的加成-裂解链转移(RAFT)技术进 行的。
34.聚合缀合物，其包括具有连接在其上的抗血管生成剂和骨靶向部分的聚合主链，所 述骨靶向部分为包括2至100个天门冬氨酸残基的寡聚肽。
35.权利要求34的聚合缀合物，其中所述聚合主链包含多个主链单元，其中所述多个 主链单元的一部分具有连接在其上的所述抗血管生成剂，所述多个主链单元的另一部分具有连接在其上的所述天门冬氨酸寡聚肽。
36.权利要求34和35中任一项的缀合物，其中所述寡聚肽包括2到20个天门冬氨酸残基。
37.权利要求36的缀合物，其中所述寡聚肽包括8个天门冬氨酸残基。
38.权利要求34-37中任一项的缀合物，其中所述天门冬氨酸为D-天门冬氨酸。
39.权利要求34-38中任一项的缀合物，其中所述抗血管生成剂和所述寡聚肽的至少 一个经由连接基连接至所述聚合主链。
40.权利要求34-39中任一项的缀合物，其中所述聚合主链来源于选自下述的聚合物 葡聚糖、水溶性聚氨基酸、聚乙二醇(PEG)、聚谷氨酸(PGA)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-共-乙 醇酸(PLGA)、聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLA/PLGA)、聚(羟基烷基甲基丙烯酰胺)、 聚甘油、聚酰胺胺(PAMAM)和聚乙烯亚胺(PEI)。
41.权利要求34-39中任一项的缀合物，其中所述聚合主链来源于(N-(2-羟丙基)甲 基丙烯酰胺)。
42.权利要求34-41中任一项的缀合物，其中所述抗血管生成剂为TNP-470。
43.权利要求34-42中任一项的缀合物，其进一步包括连接在其上的标记试剂。
44.权利要求43的缀合物，其中所述标记试剂为异硫氰酸荧光素。
45.权利要求44的缀合物，其具有结构
46.药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求34-45中任一项的缀合物和可药用 载体。
47.权利要求46的药物组合物，其包装在包装材料中，并且在所述包装材料中或其上 的印刷中被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
48.权利要求46的药物组合物，其中所述缀合物包含标记试剂，所述组合物包装在包 装材料中，并且在所述包装材料中或其上的印刷中被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
49.一种治疗需要其的受试者中的骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者 给药治疗有效量的权利要求34-45中任一项的缀合物。
50.一种监测受试者中骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者给药权利要求43-45中任一项的缀合物；和使用成像技术监测缀合物在身体或其部分内的分布。
51.权利要求34-45中任一项的缀合物作为药物的用途。
52.权利要求34-45中任一项的缀合物在制备用于治疗骨相关疾病或病症的药物中的 用途。
53.权利要求43-45中任一项的缀合物作为诊断试剂的用途。
54.权利要求43-45中任一项的缀合物在制备用于监测骨相关疾病或病症的诊断试剂 中的用途。
55.权利要求34-45中任一项的缀合物，被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
56.权利要求43-45中任一项的缀合物，被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
57.权利要求47、48、49、50、52和54-56中任一项的缀合物、方法、组合物或用途，其中 所述疾病或病症与血管生成相关。
58.权利要求57的缀合物、方法、组合物或用途，其中所述疾病或病症选自骨转移和骨癌。
59.一种合成权利要求34-45中任一项的缀合物的方法，所述方法包括(a)共聚所述聚合主链的多个单体单元，其中所述多个的一部分包括端接第一反应 基团的单体单元，所述多个的另一部分包括端接第二反应基团的单体单元，从而得到包括 含有多个主链单元的聚合主链的共聚物，其中所述主链单元的一部分具有所述第一反应基 团，所述主链单元的另一部分具有所述第二反应基团，所述第一反应基团能够与所述抗血 管生成剂反应，所述第二反应基团能够与所述骨靶向部分反应；(b)经由所述第一反应基团将所述骨靶向部分偶合至所述共聚物，从而得到包含骨靶 向部分的共聚物；和(c)经由所述第二反应基团将所述抗血管生成剂偶合至所述共聚物，从而得到所述缀 合物。
60.权利要求59的方法，其中所述共聚是经由可逆的加成-裂解链转移(RAFT)技术进 行的。
全文摘要
本发明公开了具有连接在其上的TNP-470和高负载量(例如，高于3mol%)的阿仑膦酸盐(ALN)的羟丙基甲基丙烯酰胺(HPMA)衍生共聚物的缀合物和制备其的方法。本发明进一步公开了具有连接在其上的抗血管生成剂和寡聚天门冬氨酸骨靶向剂的聚合物或共聚物的缀合物及其制备方法。本发明还公开了包含这些缀合物的药物组合物及其在治疗和监测骨相关病症中的用途。
文档编号A61K31/787GK102105157SQ200980128588
公开日2011年6月22日 申请日期2009年5月21日 优先权日2008年5月22日
发明者E·塞加尔, J·科佩塞克, P·科佩克科瓦, R·萨奇-法伊纳罗, 潘怀忠 申请人:特拉维夫大学拉莫特有限公司, 犹他州大学研究基金会
聚合物、抗血管生成剂和靶向部分的缀合物及其在治疗骨 相关血管生成状况中的用途政府利益的声明
本发明是在由国立卫生研究院授予的GM069847下，由政府支持做出的。政府享有本发 明的一些权利。发明领域和背景
在某些实施方案中，本发明涉及化学缀合物及其在治疗和诊断中的用途，更特别地，但 非排他性地，涉及聚合物、抗血管生成剂和靶向部分的化学缀合物，其用于例如治疗和监测 骨相关疾病和病症比如骨癌和骨转移。骨肉瘤是原发性骨癌的最常见类型，归类为其中肿瘤直接产生缺损的类骨质(未 成熟骨)的恶性间质肿瘤。其是一种最通常在长骨的干骺端出现的血管多且非常有害的恶 性肿瘤。在过去的二十年中，由侵袭性化疗与根治性外科切除术组成的综合治疗已经成为 骨肉瘤控制的主要方式，目前没有出现转移性疾病的患者中50%至70%获得了 5年存活率。 提出了一些策略，比如基于免疫的治疗、肿瘤抑制剂或自杀基因治疗或通常不用于骨肉瘤 的抗癌药[Quan 等人，Cancer Metastasis Rev 2006; 10: 707-713]。然而，仍然有三分之 一的患者死于这一毁灭性的癌症，对于患有不能切除的疾病的患者，没有治愈性全身治疗。前列腺癌是工业化国家中最常见的男性癌症，并且是男性癌症死亡的第二个主要 原因。这些患者的死亡不是由于原发肿瘤生长，而是由于向生命器官的转移引起的并发症。 前列腺癌主要转移到骨骼，但是其它器官部位也受到影响，包括肺、肝和肾上腺。乳腺癌通常也转移到骨骼。在患有晚期转移性疾病的患者中，骨转移的发病率为约70 %。骨转移与相当大量 的骨胳病症(skeletal morbidity)相关，包括严重的骨痛、病理性骨折、脊髓或神经根压迫 和恶性肿瘤的高血钙症。化疗剂、激素剥夺(hormonal deprivation)和二膦酸盐是晚期转 移性疾病的常见治疗方式。然而，随时间逝去，疾病发展至标准治疗不能控制该恶性肿瘤的 阶段和进一步发展至高度化疗耐受性状态的阶段。肿瘤发展和转移高度取决于新血管供应的氧和营养物，所述新血管的形成受到 肿瘤本身及其环境的刺激。抗血管生成治疗剂与常规治疗的组合对于骨肉瘤控制和降 低转移的危险具有极大的可能性。血管生成抑制剂，比如TNP-470[Folkman，J. Apmis 2004; 112: 496-507]，其无毒的N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物-缀 合形式，caplostatin[Satchi-Fainaro 等人，Cancer Cell 2005; 7: 251-261],和 Avastin [Hurwitz 等人，N Engl J Med 2004; 350: 2335-2342]作为新形态的抗癌药出 现。目前存在八种批准的具有公认抗血管生成性质的抗癌治疗剂。这些试剂中断参 与肿瘤血管生成和生长的关键性细胞信号传导途径，其可以分成两个主要的种类(1)单 克隆抗体，针对特定的促血管生成因子和/或其受体；(Avastin，Erbitux, Vectibix, Herceptin)和(2)多种促血管生成生长因子受体的小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKIs) (Tarveca, Nexavar, Sutent)。mT0R(雷帕霉素的哺乳动物靶点)的抑制剂代表第三个较小
7种类的抗血管生成治疗剂，具有只有一个批准的试剂(Torisel)。另外，至少两种其它批准 的抗血管生成剂可以经由还未完全理解的机制间接地抑制血管生成(Velcade，Celgene) 0第一种FDA批准的血管生成抑制剂贝伐单抗(Avastin，Genentech)，一种血管内 皮生长因子(VEGF)的单克隆抗体，最近被批准与标准常规化疗联合用于转移性结肠癌治疗。阻断血管生成的最大类型的药物是靶向VEGF受体(VEGFR)的多靶点酪氨酸激 酶抑制剂(TKIs)。这些药物比如 sunitinib (Sutent, Pfizer)、Sorafenib (Nexavar, Bayer/Onyx Pharmaceuticals)禾口 Erlotinib (Tarveca, Gennentech/OSI/Roche)具有攻 击多个靶点、方便口服给药和经济有效的优点。虽然这些药物显示出有希望的功效，它们的 使用受到缺少靶特异性的限制，其导致预想不到的毒性[Cabebe等人，Curr Treat Options Oncol 2007; 8:15—27]。因此，寻求与或不与其它抗肿瘤剂使用的新靶向血管生成抑制剂。这一努力的主 要障碍是不能确定治疗效果、缺乏肿瘤血管生成的可靠代用品标记物和参与肿瘤血管生成 的多个宿主细胞和恶性细胞之间相互作用的复杂性，其可能限制单个抗血管生成剂的使 用。另一个显著的障碍是大多数临床使用的抗癌和抗血管生成药物是小分子，其显示出在 血流中半衰期短和总清除率高。这些低分子量药物快速扩散到健康组织中，并均勻地分布 在体内。因此，相对少量的药物到达靶部位，治疗的功效低且副作用严重。TNP-470是一种烟曲霉素的低分子量合成类似物，其在体外能够选择性地抑制内 皮生长。在临床试验中，发现在患有转移性癌症的许多患者中，当与常规化疗组合使用时， 该药物减缓肿瘤生长，显示出有希望的功效。然而，在肿瘤消退所需的剂量下，许多患者经 历神经毒性。由于其剂量限制性神经毒性，对于使用TNP-470本身，没有进行进一步的临床 研究。已经推断出应当利用TNP-470与靶向肿瘤组织的试剂的临床应用，以便增加其部位 特异性和减少副作用。水溶性聚合物比如N-(2_羟丙基)甲基丙烯酰胺共聚物(HPMA)是生物相容的、 非免疫原性的且无毒的载体，其能够特定地递送到肿瘤组织中[Satchi-Fainaro等人，Nat Med 2004; 10: 255-261]。这些大分子不会扩散通过正常血管，而是因为提高渗透和滞留 (EPR)效应，其选择性地聚集在肿瘤部位。在许多实体瘤中，对于大分子试剂和脂质，观察 到经由高渗透性(hyperpermeable)新血管系统的被动扩散和定位在肿瘤间质的这一现象。 抗癌药物比如TNP-470与共聚物比如HPMA的缀合将能够将这些药物选择性地靶向至肿瘤 组织，因此减少了副作用。而且，与游离药物相比，通过将细胞暴露于循环中的缀合药物较 长的时间，这样的共聚物_药物缀合物将限制穿过血脑屏障，延长药物的循环半衰期，因而 抑制肿瘤内皮细胞和上皮细胞的生长。Satchi-Fainaro等人在WO 03/086382中已经描述了通过将抗血管生成试剂比 如TNP-470缀合至HPMA获得的有利特征的一个实例。该专利申请教导了水溶性聚合物和 TNP-470的缀合物及其作为抗肿瘤剂的用途，特别是其作为TNP-470进入肿瘤血管的载体 的用途，及其对于TNP-470神经毒性的作用。根据WO 03/086382的教导，与单独的TNP-470 相比，一个示例性的这种缀合物HPMA-(TNP-470)缀合物(caplostatin)显示出较好的抗癌 活性和降低水平的毒性。WO 03/086382进一步提出结合靶向配体比如R⑶或抗体。HPMA-TNP-470缀合物用于治疗血管生成相关状况的用途还描述在WO 03/086178中。通过将抗肿瘤药物缀合至水溶性聚合物获得活性增加而毒性减少的另一个实例 列出在美国专利No. 6，884，817中。Meerum Terwogt等人已经描述了一种紫杉醇的HPMA共聚物缀合物[Anticancer drugs 2001; 12 315-323]。该缀合物旨在改善药物溶解性和提供紫杉醇的控制释放。在该 缀合物中，紫杉醇经由酯键连接HPMA共聚物，因此，通过酯键的非组织特异性水解或酶(酯 酶)降解从聚合物中释放，从而诱导通常观察到的紫杉醇毒性。二膦酸盐(BPs)比如阿仑膦酸盐是具有类似于无机焦磷酸(PPi)的化学结构的化 合物，无机焦磷酸是一种内源性的骨矿化调节剂。一些二膦酸盐被证实作为临床病症比如 骨质疏松症、骨的佩吉特病、骨髓瘤、和骨转移的有效治疗剂。二膦酸盐比如唑来膦酸显示 出抑制血管生成[Wood 等人，J Pharmacol Exp Ther 2002; 302: 1055-1061]。在生理条 件下显示出对骨矿物的强亲和力、低毒性和抗血管生成活性的二膦酸盐的药代动力学特征 对于靶向至限制于骨组织的肿瘤是有利的。阿仑膦酸盐被认为对于治疗骨相关疾病和癌症伴随的高血钙症有效。在几种体 内癌症模型中，其显示出具有通过几个不同机制的抗癌作用[Tuomela等人，2008，BMC Cancer 8:81; Molinuevo 等人，2007， Eur J Pharmacol 562:28—33; Hashimoto 等人， 2005，Cancer Res 65: 540-545]。另外，发现阿仑膦酸盐具有抗血管生成活性，其通过 如下方式⑴在卵巢癌症模型中，抑制VEGF诱导的Rho活化[Hashimoto等人，2007， Biochem Biphys Res Commun 354: 478-484]，(ii)在甲羟戊酸途径中，抑制焦磷酸法 呢酯合酶[Russell RG 2007, Pediatrics 119 Suppl 2: S150-162]；和(iii)在骨 肉瘤细胞系中，调节MMP-2表达的细胞水平[Cheng等人，2004，Pediatr Blood Cancer 42;410-415]。其它的骨靶向试剂是天门冬氨酸的寡聚肽。Wang等人描述了荧光素标记的骨靶向 模型缀合物，用于在HPMA共聚物上载有1 %负载量的D-Asp8的检测目的[Wang等人，2003 Bioconjug Chem 14:853-859]。在体外和体内测试了该缀合物的骨靶向潜能，发现其在骨 组织中选择性地聚集[Wang等人，2006，Mol Pharm 3:717-725]。WO 2004/062588教导了用于骨靶向药物递送的水溶性聚合缀合物，其具有改善的 药代动力学参数和较好的负载药物的水溶解性。该申请教导的聚合药物递送系统是基于骨 靶向药物比如阿仑膦酸盐和D-Asp8与骨相关治疗剂组合的羟丙基甲基丙烯酰胺(HPMA)缀 合物。阿仑膦酸盐和D-Asp8在HPMA共聚物上的负载量分别是0.494 mmol/gram和0. 762 mmol/gram。PK2 (FCE28069)是一种HPMA共聚物-多柔比星-半乳糖胺缀合物，其设计作为 肝细胞癌或继发性肝病的治疗剂。[Seymour等人，Journal of Clinical Oncology 2002; 20:1668-1676]。多柔比星是一种在生理溶液中具有有限溶解度的蒽环类抗生素，并且是一 种熟知的抗肿瘤药物。半乳糖胺结合肝脏的无唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，因此充当特定的 肝靶向部分。这些组分经由酶可生物降解的连接基连接HPMA聚合物，其允许在肝脏内释放 游离的多柔比星，因而升高了其作用部位的药物浓度。所述酶可降解的连接基是四肽间隔 基(Gly-Phe-Leu-Gly)，设计由溶酶体组织蛋白酶切割。0，hare 等人，[Journal of Drug Targeting 1993; 1:217-229]合成了包含多柔比星和作为黑素瘤特异性靶向部分的促黑素细胞激素(MSH)的HPMA共聚物。多柔比星和 促黑素细胞激素都经由酶可生物降解的连接基连接HPMA聚合物。Hruby 等人，[Journal of Applied Polymer Science 2006; 101: 3192 - 3201] 基于生物相容性HPMA共聚物制备合成了新的聚合药物递送系统，该系统设计用于骨靶向 和抗肿瘤，所述相容性HPMA共聚物包含羟基二膦酸盐靶向部分和模型药物放疗剂1251、显 影剂mIn或抗癌药物多柔比星。在HPMA共聚物上负载的羟基二膦酸盐的百分数在1. 3-4 mol %范围之内。发明简述
在获得抗肿瘤活性的剂量下，用于治疗骨相关癌症及其它血管生成相关状况的目前已 知试剂的特征在于毒性高，其限制了它们的应用。在改良目前已知的抗血管生成剂的模式， 以便能够获得更高治疗效果和降低的副作用水平的探索中，本发明人设计并成功地制备和 实践了 N-(2-羟丙基)_甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物、TNP-470和骨靶向试剂阿仑膦酸盐 (ALN)的新的聚合缀合物，其中所述TNP-470和阿仑膦酸盐分子经由可生物降解的连接基 缀合至HPMA聚合主链的主链单元，在该HPMA聚合主链上负载的阿仑膦酸盐的百分数高于 目前已知的阿仑膦酸盐聚合物缀合物(例如，大于聚合缀合物的3 mol %)。本发明人进一步设计并成功地实践了制备本文描述的缀合物的新方法，同时获得 了阿仑膦酸盐在聚合物中的高负载量以及该聚合物的均勻尺寸分布，即低多分散性。该方 法可以在30°C下，以控制的方式有利地进行。本发明人设计并成功地制备和实践了聚合物(例如N-(2_羟丙基)甲基丙烯酰胺 (HPMA)共聚物)、抗血管生成剂(例如TNP-470)和骨靶向试剂D-Asp8的新缀合物。根据本发明的某些实施方案的一个方面，提供一种包括具有连接在其上的 TNP-470和阿仑膦酸盐的N- (2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)-衍生聚合主链的缀合物，其中阿 仑膦酸盐在该聚合物中的负载量大于3 mol %。根据本发明的某些实施方案，阿仑膦酸盐在所述聚合物中的负载量为大于5 mol%。根据本发明的某些实施方案，阿仑膦酸盐在所述聚合物中的负载量为约7 mol %。根据本发明的某些实施方案，TNP-470和阿仑膦酸盐中至少一种经由连接基连接 至所述聚合物。根据本发明的某些实施方案，TNP-470和阿仑膦酸盐中每种都经由连接基连接至 所述聚合物。根据本发明的某些实施方案，所述连接基是可生物降解的连接基。根据本发明的某些实施方案，所述可生物降解的连接基选自PH-敏感性连接基和 酶可切割的连接基。根据本发明的某些实施方案，所述可生物降解的连接基是酶可切割的连接基。根据本发明的某些实施方案，所述酶可切割的连接基为由在肿瘤组织中表达的酶 切割的。根据本发明的某些实施方案，所述酶可切割的连接基为由在肿瘤组织中过表达的 的酶切割的。根据本发明的某些实施方案，所述酶选自组织蛋白酶B、组织蛋白酶K、组织蛋白酶D、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、legumain, MMP-2和MMP-9。根据本发明的某些实施方案，所述酶是组织蛋白酶K。根据本发明的某些实施方案，所述连接基包括含有2至10个氨基酸残基的寡聚肽基团。根据本发明的某些实施方案，所述寡聚肽是-[Gly-Gly-Pro-Nle]-。根据本发明的某些实施方案，TNP-470经由间隔基连接所述聚合物或所述连接基。根据本发明的某些实施方案，所述间隔基具有式G-(CH2)n-K,其中η为1至4的整 数，G和K各自独立地选自ΝΗ、0和S。根据本发明的某些实施方案，G和K各自为ΝΗ，η为2。根据本发明的某些实施方案，阿仑膦酸盐经由包括_ [Gly-Gly-Pro-Nle]-的连 接基连接至所述聚合物。根据本发明的某些实施方案，所述缀合物具有如本文描述的通式II。根据本发明的某些实施方案，所述缀合物具有结构
根据本发明的某些实施方案，χ为等于70-99. 9的整数，y和w各自独立地为等于 0.01-15的整数。根据本发明的某些实施方案，所述缀合物进一步包括标记试剂。根据本发明的某些实施方案，所述标记试剂选自荧光剂、放射性试剂、磁性试剂、 生色团、生物发光剂、化学发光剂、发磷光的试剂和重金属簇。根据本发明的某些实施方案，所述标记试剂是异硫氰酸荧光素。这样的缀合物具有例如下述结构
权利要求
1.聚合缀合物，包括具有连接在其上的TNP-470和阿仑膦酸盐的(N-(2-羟丙基)甲基 丙烯酰胺)聚合主链，其中所述阿仑膦酸盐在聚合缀合物中的负载量大于3 mol %。
2.权利要求1的聚合缀合物，其中所述聚合主链包括多个甲基丙烯酰胺主链单元，而 所述TNP-470连接至所述主链单元的一部分，所述阿仑膦酸盐连接至所述主链单元的另一 部分。
3.权利要求1和2中任一项的缀合物，其中所述阿仑膦酸盐的所述负载量大于5mol%。
4.权利要求3的缀合物，其中所述阿仑膦酸盐的所述负载量为约7mol %。
5.权利要求1和2中任一项的缀合物，其中所述TNP-470和所述阿仑膦酸盐中至少一 个经由连接基连接至所述聚合主链。
6.权利要求5的缀合物，其中所述连接基为可生物降解的连接基。
7.权利要求6的缀合物，其中所述可生物降解的连接基为酶可切割的连接基。
8.权利要求7的缀合物，其中所述酶可切割的连接基被组织蛋白酶K切割。
9.权利要求8的缀合物，其中所述连接基包括-[Gly-Gly-Pro-Nle]-寡聚肽。
10.权利要求1-9中任一项的缀合物，其中所述TNP-470经由间隔基连接所述聚合主链 或所述连接基。
11.权利要求1-10中任一项的缀合物，其具有通式II B为所述TNP-470 ； D为所述阿仑膦酸盐；所述L1和L2的每个都独立地为所述连接基；
12.权利要求11的缀合物，其具有结构
13.权利要求11和12中任一项的缀合物，其中χ为具有使得x/(x+y+w)乘以100在70至99. 9范围内的值的整数； y为具有使得y/(x+y+ )乘以100在0. 01至15范围内的值的整数；和 w为具有使得w/(X+y+w)乘以100在5至20范围内的值的整数。
14.权利要求1-13中任一项的缀合物，其进一步包括连接在其上的标记试剂。
15.权利要求14的缀合物，其中所述标记试剂为异硫氰酸荧光素。
16.权利要求15的缀合物，其具有结构
17.权利要求1-16中任一项的缀合物，其具有的多分散指数为1至1.4。
18.权利要求1-17中任一项的缀合物，其具有的平均尺寸分布低于150nm。
19.药物组合物，其包括作为活性成分的权利要求1-18中任一项的缀合物和可药用载体。
20.权利要求19的药物组合物，其包装在包装材料中，并且在所述包装材料中或其上 的印刷中被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
21.权利要求19的药物组合物，其中所述缀合物包括标记试剂，所述组合物包装在包 装材料中，并且在所述包装材料中或其上的印刷中被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
22.—种治疗需要其的受试者中的骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者 给药治疗有效量的权利要求1-18中任一项的缀合物。
23.—种监测受试者中骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括 向受试者给药权利要求14-18中任一项的缀合物；和使用成像技术监测缀合物在身体或其部分内的分布。
24.权利要求1-18中任一项的缀合物作为药物的用途。
25.权利要求1-18中任一项的缀合物在制备用于治疗骨相关疾病或病症的药物中的 用途。
26.权利要求14-18中任一项的缀合物作为诊断试剂的用途。
27.权利要求14-18中任一项的缀合物在制备用于监测骨相关疾病或病症的诊断试剂 中的用途。
28.权利要求1-18中任一项的化合物，被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
29.权利要求14-18中任一项的化合物，被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
30.权利要求20、22、23、25和27-29中任一项的化合物、方法、用途或组合物，其中所述 疾病或病症与血管生成相关。
31.权利要求30的化合物、方法、用途或组合物，其中所述疾病或病症选自骨转移和骨癌。
32.—种合成权利要求1-18中任一项的缀合物的方法，所述方法包括(a)将阿仑膦酸盐偶合至N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺单体单元，从而得到包含阿仑 膦酸盐的甲基丙烯酰胺单体单元；(b)共聚N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺单体单元，和/或((N-(2-羟丙基)甲基丙烯 酰胺)寡聚或聚合单元与所述包含阿仑膦酸盐的甲基丙烯酰胺单体单元和端接第一反应 基团的甲基丙烯酰胺单体单元，从而得到包括多个甲基丙烯酰胺主链单元的聚合主链，其 中所述主链单元的一部分具有连接在其上的阿仑膦酸盐，所述主链单元的另一部分具有所 述反应基团，所述第一反应基团能够偶合TNP-470 ；和(c)经由所述第一反应基团偶合所述TNP-470和所述聚合主链，从而得到聚合缀合物。
33.权利要求32的方法，其中所述共聚是经由可逆的加成-裂解链转移(RAFT)技术进 行的。
34.聚合缀合物，其包括具有连接在其上的抗血管生成剂和骨靶向部分的聚合主链，所 述骨靶向部分为包括2至100个天门冬氨酸残基的寡聚肽。
35.权利要求34的聚合缀合物，其中所述聚合主链包含多个主链单元，其中所述多个 主链单元的一部分具有连接在其上的所述抗血管生成剂，所述多个主链单元的另一部分具有连接在其上的所述天门冬氨酸寡聚肽。
36.权利要求34和35中任一项的缀合物，其中所述寡聚肽包括2到20个天门冬氨酸残基。
37.权利要求36的缀合物，其中所述寡聚肽包括8个天门冬氨酸残基。
38.权利要求34-37中任一项的缀合物，其中所述天门冬氨酸为D-天门冬氨酸。
39.权利要求34-38中任一项的缀合物，其中所述抗血管生成剂和所述寡聚肽的至少 一个经由连接基连接至所述聚合主链。
40.权利要求34-39中任一项的缀合物，其中所述聚合主链来源于选自下述的聚合物 葡聚糖、水溶性聚氨基酸、聚乙二醇(PEG)、聚谷氨酸(PGA)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-共-乙 醇酸(PLGA)、聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLA/PLGA)、聚(羟基烷基甲基丙烯酰胺)、 聚甘油、聚酰胺胺(PAMAM)和聚乙烯亚胺(PEI)。
41.权利要求34-39中任一项的缀合物，其中所述聚合主链来源于(N-(2-羟丙基)甲 基丙烯酰胺)。
42.权利要求34-41中任一项的缀合物，其中所述抗血管生成剂为TNP-470。
43.权利要求34-42中任一项的缀合物，其进一步包括连接在其上的标记试剂。
44.权利要求43的缀合物，其中所述标记试剂为异硫氰酸荧光素。
45.权利要求44的缀合物，其具有结构
46.药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求34-45中任一项的缀合物和可药用 载体。
47.权利要求46的药物组合物，其包装在包装材料中，并且在所述包装材料中或其上 的印刷中被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
48.权利要求46的药物组合物，其中所述缀合物包含标记试剂，所述组合物包装在包 装材料中，并且在所述包装材料中或其上的印刷中被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
49.一种治疗需要其的受试者中的骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者 给药治疗有效量的权利要求34-45中任一项的缀合物。
50.一种监测受试者中骨相关疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者给药权利要求43-45中任一项的缀合物；和使用成像技术监测缀合物在身体或其部分内的分布。
51.权利要求34-45中任一项的缀合物作为药物的用途。
52.权利要求34-45中任一项的缀合物在制备用于治疗骨相关疾病或病症的药物中的 用途。
53.权利要求43-45中任一项的缀合物作为诊断试剂的用途。
54.权利要求43-45中任一项的缀合物在制备用于监测骨相关疾病或病症的诊断试剂 中的用途。
55.权利要求34-45中任一项的缀合物，被鉴定用于治疗骨相关疾病或病症。
56.权利要求43-45中任一项的缀合物，被鉴定用于监测骨相关疾病或病症。
57.权利要求47、48、49、50、52和54-56中任一项的缀合物、方法、组合物或用途，其中 所述疾病或病症与血管生成相关。
58.权利要求57的缀合物、方法、组合物或用途，其中所述疾病或病症选自骨转移和骨癌。
59.一种合成权利要求34-45中任一项的缀合物的方法，所述方法包括(a)共聚所述聚合主链的多个单体单元，其中所述多个的一部分包括端接第一反应 基团的单体单元，所述多个的另一部分包括端接第二反应基团的单体单元，从而得到包括 含有多个主链单元的聚合主链的共聚物，其中所述主链单元的一部分具有所述第一反应基 团，所述主链单元的另一部分具有所述第二反应基团，所述第一反应基团能够与所述抗血 管生成剂反应，所述第二反应基团能够与所述骨靶向部分反应；(b)经由所述第一反应基团将所述骨靶向部分偶合至所述共聚物，从而得到包含骨靶 向部分的共聚物；和(c)经由所述第二反应基团将所述抗血管生成剂偶合至所述共聚物，从而得到所述缀 合物。
60.权利要求59的方法，其中所述共聚是经由可逆的加成-裂解链转移(RAFT)技术进 行的。
全文摘要
本发明公开了具有连接在其上的TNP-470和高负载量(例如，高于3mol%)的阿仑膦酸盐(ALN)的羟丙基甲基丙烯酰胺(HPMA)衍生共聚物的缀合物和制备其的方法。本发明进一步公开了具有连接在其上的抗血管生成剂和寡聚天门冬氨酸骨靶向剂的聚合物或共聚物的缀合物及其制备方法。本发明还公开了包含这些缀合物的药物组合物及其在治疗和监测骨相关病症中的用途。
文档编号A61K31/787GK102105157SQ200980128588
公开日2011年6月22日 申请日期2009年5月21日 优先权日2008年5月22日
发明者E·塞加尔, J·科佩塞克, P·科佩克科瓦, R·萨奇-法伊纳罗, 潘怀忠 申请人:特拉维夫大学拉莫特有限公司, 犹他州大学研究基金会
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