中和抗甲型流感病毒抗体及其用途的制作方法
专利名称：中和抗甲型流感病毒抗体及其用途的制作方法
中和抗甲型流感病毒抗体及其用途本专利申请要求分别于2008年7月25日和2009年5月27日提交的美国临时专利申请第61/083，838号和61/181，582号的优先权，上述专利申请公开的全文援引加入本文，如同在本文中记载一样。
背景技术：
据认为，对甲型流感病毒的中和抗体应答对于给定的病毒亚型是特异性的。有16 种通过血凝素(HA)定义的甲型流感亚型。16种HA(H1-H16)可被分为两组。组1由HI、 H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13 和 H16 亚型组成，组 2 包括 H3、H4、H7、H10、H14 和 H15 亚型。尽管所有的亚型病毒都存在于鸟类，但主要是H1、H2和H3在人类中引发疾病。H5、H7 和H9亚型在人类中引起偶发性严重感染并可能引起新的大流行。Hl和H3病毒不断地进化形成新的变体，这种现象被称为抗原漂移。由此，应答过去的病毒而产生的抗体对于新的漂移病毒保护性很差或没有保护性。其结果是每年必须要制备新疫苗用于抵抗预计要出现的 Hl和H3病毒，这个过程很昂贵且并不总是奏效。这同样适用于H5流感疫苗的制备。还不清楚基于越南和印度尼西亚甲型流感病毒分离体的现有H5疫苗是否能抵抗未来的流行性 H5病毒。由于这些原因，非常希望拥有诱导能够中和所有甲型流感病毒亚型及其每年的变体(2006年，由Gerhard等人进行了综述)的广谱中和抗体的疫苗。此外，广谱中和异亚型抗体也可用在预防和治疗中。已经表征了识别甲型流感病毒的抗体。M2的抗体(只在被感染细胞上表达而不在感染性病毒上表达的一种不变的小蛋白)已经显示出一些体内保护效果，这些保护效果可能是通过用NK细胞或胞毒性T细胞靶向感染的细胞加以破坏来实现的。但是，HA是中和抗体的首要目标。它包括约500个氨基酸的大胞外域，该胞外域被源自宿主的酶裂解以产生通过二硫键连接的两个多肽。较大的N-末端片段(HAl，320至330个氨基酸)形成包含受体结合位点和大部分被病毒中和抗体识别的决定簇的膜远端球状域。较小的C-末端部分(HA2，约180个氨基酸)形成将球状域锚定在细胞或病毒膜的茎状结构。亚型之间的序列同源性的程度，在HAl多肽(亚型之间34%至59%的同源性)中比在HA2多肽(51%至 80%的同源性)中小。最保守的区是裂解位点周围的序列，特别是HA2N-末端的11个氨基酸，被命名为融合肽，它在所有的甲型流感病毒亚型中均是保守的。这个区的一部分以表面环暴露在HA前体分子(HAO)中，但是当HAO裂解为HA1/HA2时，则变得不可接近。总之，在不同的HA亚型之中，特别是在HA1-HA2连接区和在HA2区中都有保守区。但是，这些区对于中和抗体可能是不易接近的。在确认中和一种以上甲型流感病毒的亚型的抗体中只取得了有限的成功，并且其中和宽度窄和其效力低。Okimo等人用流感病毒A/0kuda/57(H2N2)免疫小鼠并分离了单克隆抗体(C179)，该单克隆抗体(C179)结合HA2中的保守构象表位并在动物模型中在体外和体内中和组1的H2、H1和H5亚型甲型流感病毒(Okuno等人，1993 ；Smirnov等人，1999 ； Smirnov 等人，2000)。
最近，Gioia等人描述了在接种了传统季节性流感疫苗的某些个体的血清中有 H5m病毒中和抗体的存在(Gioia等人，2008)。作者认为中和活性可能是来自神经氨酸酶 (Ni)的抗体。可是没有分离出单克隆抗体，也没有表征靶表位。目前尚不清楚血清抗体是否中和其它的甲流病毒亚型。尽管经过了数十年的研究，但是还没有投入市场的广谱中和或抑制甲型流感病毒感染或缓解由甲型流感病毒引发的疾病的抗体。因此，需要鉴定新的抵御多种甲型流感病毒亚型的抗体。
发明内容
本发明部分地基于从接种了季节性流感疫苗的个体中分离出结合至HA并中和一种以上甲型流感病毒亚型感染的自然产生的人单克隆抗体以及本发明的抗体结合的新型表位。因此，在本发明的一个方面中，本发明包括一种中和一种以上选自组1和组2亚型的甲型流感病毒亚型的感染的抗体及其抗原结合片段。在本发明的一个实施方案中，本发明包括中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型感染的抗体或其抗原结合片段。在本发明的另一个实施方案中，本发明包括一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个互补决定区(⑶R)序列，该序列与SEQ ID NO :1-6或 17-22中的任一个有至少95%的序列同一性，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本发明的又一个实施方案中，本发明包括具有SEQ ID NO :1或SEQ ID N0:17的氨基酸序列的重链⑶Rl ；具有SEQ ID NO :2或SEQ ID NO 18的氨基酸序列的重链⑶R2 ； 和具有SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 19的氨基酸序列的重链⑶R3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本发明的另一个实施方案中，本发明包括抗体或其抗原结合片段，其包含具有 SEQ ID NO :4 或 SEQ ID NO 20 的氨基酸序列的轻链 CDRl、具有 SEQ ID NO :5 或 SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的轻链⑶R2和具有SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链 CDR3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本发明的又一个实施方案中，本发明包括一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO 14的氨基酸序列的轻链可变区；或包含含SEQ ID NO :33的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO 14 的氨基酸序列的轻链可变区；或包含含SEQ ID NO : 的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO 30的氨基酸序列的轻链可变区；或包含含SEQ ID NO 35的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO :30的氨基酸序列的轻链可变区，并且其中所述抗体中和甲型流感病毒。 本发明进一步包括一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是FI6变体1或FI6变体2。在本发明的另一个实施方案中，本发明包括一种抗体或其抗原结合片段，其中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的感染，其中所述抗体或其片段被永生B细胞克隆表达。在另一个方面，本发明包括一种含有编码本发明的抗体或抗体片段的多核苷酸的核酸分子。在另一个方面，本发明包括一种含有本发明的核酸分子的载体或表达本发明的抗体或其抗原结合片段的细胞。在又一个方面，本发明包括含有结合本发明的抗体或其抗原结合片段的表位的分离的或纯化的免疫原性多肽。本发明进一步包括一种药物组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的核酸分子、含有本发明的核酸分子的载体、表达本发明的抗体或抗体片段的细胞、或本发明的免疫原性多肽以及药学可接受的稀释剂或载体(carrier)。本发明还包括一种药物组合物，其含有第一抗体或其抗原结合片段以及第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体是本发明的抗体，第二抗体是能中和甲型流感病毒感染的抗体或其抗原结合片段。本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的核酸、含本发明的核酸的载体、表达本发明的载体的细胞、包含结合本发明的抗体或抗体片段的表位的分离的或纯化的免疫原性多肽、或本发明的药物组合物(i)在制备治疗甲型流感病毒感染的药物中；(ii)在疫苗中； 或(iii)在甲型流感病毒感染的诊断中的用途也预期包括在本发明的范围之内。进一步， 本发明的抗体或其抗原结合片段在通过检测抗甲型流感病毒疫苗的抗原是否含有正确构象的特异表位来监测所述疫苗的质量中的用途也预期包括在本发明的范围之内。在另一方面，本发明包括一种减少甲型流感病毒感染或降低甲型流感病毒感染风险的方法，其包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的抗体或其抗原结合抗体片段。在另一方面，本发明包括一种特异性地结合本发明的抗体或其抗原结合片段的表位，其用于⑴治疗中；(ii)制备治疗甲型流感病毒感染的药物；(iii)作为疫苗；或(iv) 筛选能中和甲型流感病毒感染的配体。发明详述本发明部分地基于从接种了季节性甲型流感疫苗的个体中发现和分离能广谱中和不同甲型流感病毒亚型的自然产生的人抗体以及本发明的抗体结合的新型表位。希望得到这些抗体，因为只要一种或少数几种抗体就可以中和不同的甲型流感病毒亚型。此外，被这些抗体识别的表位可以是能够诱导广谱抗不同亚型的季节性和候选流行分离体的疫苗的一部分。因此，在一方面，本发明提供了一种能中和至少两种组1和组2亚型中的甲型流感病毒的抗体和其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明提供了一种中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的感染的抗体或其抗原结合片段。在本发明的另一方面，本发明提供了一种对不同的甲型流感病毒亚型的HA具有广谱特异性的中和抗体和其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段特异性地结合在两种或两种以上选自组1和组2的甲型流感病毒亚型之中是保守的HA 的茎区的表位。在另一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段特异性地结合包含SEQ ID NO 37、38、39或40的任一个的氨基酸序列的多肽。人单克隆抗体、分泌本发明的抗体的永生B细胞克隆或转染的宿主细胞、以及编码本发明的抗体的核酸也包括在本发明的范围之内。如本文所用，术语“抗原结合片段”、“片段”和“抗体片段”可以互换地使用，是指本发明的保持抗体的抗原结合活性的抗体的任何片段。示例性的抗体片段包括但不限于单链抗体、Fab、Fab，、F(ab，)2,Fv或scFv。如本文所用，术语“抗体”包括抗体和其抗原结合片段。如本文所用，术语“广谱特异性”用来指能结合和/或中和甲型流感病毒的一或多种组1亚型和一或多种组2亚型的本发明的抗体或抗原结合片段。
如本文所用，“中和抗体”是指一种能中和，即防止、抑制、减少、阻碍或干扰病原体引发和/或持续宿主内的感染的能力的抗体。术语“中和抗体”和“中和…抗体”在本文中可以互换地使用。如本文所述，这些抗体可单独使用，或作为预防剂或治疗剂在合适的制剂中结合使用，作为诊断工具或制备工具与活性接种疫苗配合使用。本发明的抗体或抗原结合片段中和一或多种组1(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、 H13、和H16以及它们的变体)的甲型流感病毒和一或多种组2 (H3、H4、H7、H10、H14和H15 以及它们的变体)的甲型流感病毒。在一个实施方案中，示例性的组1亚型包括H1、H2、H5、 H6和H9，示例性的组2亚型包括H3和H7。本发明的抗体和抗体片段能够中和甲型流感病毒亚型的各种组合。在一个实施方案中，抗体能中和甲型流感病毒Hl和H3亚型、或H2和H3亚型、或H3和H5亚型、或H3和 H9亚型、或Hl和H7亚型、或H2和H7亚型，或H5和H7亚型、或H7和H9亚型。在另一个实施方案中，本发明的抗体和抗体片段能中和甲型流感病毒H1、H2和H3 亚型、或H1、H3和H5亚型、或H1、H3和H9亚型、或H2、H3和H5亚型、或H2、H3和H9亚型、 或H3、H5和H9亚型，或H1、H2和H7亚型、或H1、H5和H7亚型，或H1、H7和H9亚型、或H2、 H5和H7亚型、或H2、H7和H9亚型、或H5、H7和H9亚型、或Hl、H3和H7亚型、或H2、H3和 H7亚型、或H3、H5和H7亚型、或H3、H7和H9亚型。在又一个实施方案中，抗体能中和甲型流感病毒HI、H2、H3和H7亚型、或HI、H3、 H5禾口 H7亚型、或HI、H3、H7禾口 H9亚型、或H2、H3、H5禾口 H7亚型、禾口 H2、H3、H7禾口 H9亚型、 或H3、H5、H7和H9亚型或HI、H2、H3和H5亚型、或HI、H2、H3和H9亚型、或HI、H3、H5和 H9亚型、或H2、H3、H5和H9亚型、或HI、H2、H5和H7亚型、或HI、H2、H7和H9亚型、或HI、 H5、H7禾口 H9亚型、或H2、H5、H7禾口 H9亚型。在又一实施方案中，本发明的抗体可以中和甲型流感病毒HI、H2、H3、H5和H7亚型、或 HI、H2、H3、H7 和 H9 亚型、或 HI、H3、H5、H7 和 H9 亚型、或 H2、H3、H5、H7 和 H9 亚型、 或 H1、H2、H3、H5 和 H9 亚型、或 HI、H2、H5、H7 和 H9 亚型、或 HI、H2、H3、H5、H7 和 H9 亚型。
在另一个实施方案中，除了中和甲型流感病毒H6亚型外，本发明的抗体和抗原结合片段还中和一或多种上述组合。本发明的抗体和抗原结合片段具有高中和能力。中和50%甲型流感病毒所需要的本发明的抗体浓度可例如为约50 μ g/ml或更低。在一个实施方案中，中和50%甲型流感病毒所需要的本发明的抗体浓度是约 50、45、40、35、30、25、20、17· 5、15、12· 5、11、10、9、8、7、 6、5、4. 5、4、3. 5、3、2. 5、2、1. 5或约1 μ g/ml或更低。在另一个实施方案中，中和50%甲型流感病毒所需要的本发明的抗体浓度是约0. 9,0. 8,0. 75,0. 7,0. 65,0. 6,0. 55,0. 5,0. 45、 0. 4、0· 35、0· 3、0· 25、0· 2、0· 15、0· U0. 075、0· 05、0· 04、0· 03、0. 02,0. 0U0. 008,0. 006、 0. 004,0. 003,0. 002或约0. 001 μ g/ml或更低。这意味着仅需低浓度的抗体来中和50%的甲型流感病毒。可使用本领域技术人员已知的标准中和试验来测定特异性和中和能力。本发明的抗体本发明提供了一种对于HA具有特定广谱特异性且中和一或多种组1的甲型流感病毒亚型或一或多种组2的甲型流感病毒亚型的抗体。本发明的抗体结合在选自组1和组 2的两或多种甲型流感病毒亚型之中是保守的HA的区中的表位。在一个实施方案中，本发明提供了一种抗体如分离的抗体或纯化的抗体，其特异
8性地结合组1和组2的甲型流感病毒亚型的在HA的茎区中的保守表位并干扰病毒的复制和扩散。本发明还提供了一种抗体如分离的抗体或纯化的抗体，其特异性地结合组1和组 2的亚型的在HA的茎区的保守表位并抑制病毒进入细胞。不受任何理论的约束，在一个示例性实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段结合到在甲型流感病毒的茎区中的保守表位并通过干扰融合步骤来抑制病毒进入细胞。蛋白的表位或抗原决定簇对应于由抗体的结合位点(或互补位)特异性地识别的分子的那些部分。因此，表位是需要互补性互补位来进行操作性识别的相关实体。在蛋白的不同变体中保守的表位是指相同的互补位能通过接触这些分子的相同部分而特异性地识别这些不同的变体。本发明的抗体可以是单克隆的诸如人单克隆抗体或重组抗体。本发明还提供了本发明的抗体片段，尤其是保留了抗体抗原结合活性的片段。尽管在某些地方，说明书包括权利要求书明确指出是抗原结合片段、抗体片段、抗体的变体和/或衍生物，但是应当理解， 术语“抗体”或“本发明的抗体”包括所有的抗体类别，即抗原结合片段、抗体片段、抗体的变体和衍生物。在一个实施方案中，本发明的抗体和抗体片段中和组1和组2的两或更多种甲型流感病毒亚型的组合。示例性甲型流感病毒亚型包括但不限于H5m(A/ Vietnam/1203/04)、HlNl (A/New Caledonia/20/99)、HlNl(A/Salomon Island/3/2006)、 H3N2 (A/ffyoming/3/03)以及 H9N2 (A/chicken/Hong Kong/G9/97)。在另一个实施方案中， 抗体中和和/或特异于3、4、5、6、7或更多的组1和组2甲型流感病毒亚型的组合。在示例性实施方案中，本发明包括一种对甲型流感病毒亚型Hl和H3(例如Hmi 和H3N2)或HI、H3、H5和H9 (例如HlNl、H3N2、H5N1和H9N2)是特异性的抗体或其抗体片段。在另一个实施方案中，抗体或其抗体片段对H1、H3、H5、H7和H9 (例如H1N1、H3N2、H5N1、 H7NUH7N7.H9N2)是特异性的。在本申请的前面部分提供了其它的甲型流感病毒的亚型的示例性组合。本发明的示例性抗体的重链可变区(Vh)和轻链可变区的氨基酸序列的SEQ ID序列号以及编码它们的核酸序列的SEQ ID序列号列于表1。表1.示例性甲型流感病毒中和抗体的Vh和\多肽和多核苷酸的SEQ ID序列号
权利要求
1.一种中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的感染的抗体或其抗原结合片段。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体特异性地结合血凝素的茎区中的表位，并且其中所述表位在两种或更多种选自组1和组2的甲型流感病毒亚型之中是保守的。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段结合包含SEQ ID NO 37、38、39或40任一个的氨基酸序列的多肽。
4.如权利要求1、2或3所述的抗体，其中中和50%甲型流感病毒所需的所述抗体浓度 ^ 20 μ g/ml或更低。
5.如权利要求1、2或3所述的抗体，其中中和50%甲型流感病毒所需的所述抗体浓度 ^ 4 μ g/ml或更低。
6.如权利要求1、2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述组1亚型是H1、H2、H5 或H9。
7.如权利要求1、2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述组2亚型是H3或H7。
8.如权利要求1、2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段中和三种、四种、五种或更多种甲型流感病毒亚型的感染。
9.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体中和以下甲型流感病毒亚型的感染(i)Hl和H3 ； (ii)Hl和H7 ； (iii)H3和H5 ； (iv)H3和H9 ； (v)H5 和 H7 ； (vi)H7 和 H9 ； (vii)Hl、H3、H5 和 H7 ；或(viii)Hl、H3、H5、H7和 H9。
10.一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个互补决定区(OTR)序列，所述互补决定区序列与SEQ ID NO 1-6或17-22中的任一个均有至少95%的序列同一性，其中所述抗体中和甲型流感病毒。
11.一种抗体或其抗原结合片段，其包含具有SEQ ID NO :1或SEQ ID N0:17的氨基酸序列的重链⑶Rl、具有SEQ ID NO :2或SEQ ID NO 18的氨基酸序列的重链⑶R2、以及具有SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 19的氨基酸序列的重链⑶R3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。
12.—种抗体或其抗原结合片段，其包含具有SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :20的氨基酸序列的轻链⑶R1、具有SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 21的氨基酸序列的轻链⑶R2、以及具有SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链⑶R3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。
13.如权利要求11或12所述的抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下氨基酸序列的重链:CDRH1 为 SEQ ID NO :1、CDRH2 为 SEQ ID NO 2 和 CDRH3 为 SEQ ID NO :3 ；或 CDRHl 为 SEQ ID NO :17、CDRH2 为 SEQ ID NO 18 和 CDRH3 为 SEQ ID NO :19。
14.如权利要求11、12或13所述的抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下氨基酸序列的轻链CDRLl 为 SEQ ID NO :4、CDRL2 为 SEQ ID NO 5 和 CDRL3 为 SEQ ID NO :6 ；或CDRLl 为 SEQ ID NO 20, CDRL2 为 SEQ ID NO :21 和 CDRL3 为 SEQ ID NO :22。
15.如权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQID NO 13,33,29或35中的任一个的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的重链可变区。
16.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQID NO 14或SEQ ID NO 30的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的轻链可变区。
17.一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含有SEQ ID N0:13的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO 33的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO : 的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO :30的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO :35的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO :30的氨基酸序列的轻链可变区，并且其中所述抗体中和甲型流感病毒。
18.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是FI6变体1或FI6变体2。
19.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是人抗体、 单克隆抗体、纯化的抗体、分离的抗体、单链抗体、Fab、Fab，、F(ab' )2、Fv或scFv。
20.一种抗体或其抗原结合片段，其与如前述的权利要求中任一项所述抗体结合相同的表位，其中所述抗体或其抗原结合片段中和甲型流感病毒。
21.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗甲型流感病毒感染。
22.包含编码前述权利要求中任一项所述的核酸分子其抗原结合片段的多核苷酸的核酸分子。
23.如权利要求22所述的核酸分子，其中所述多核苷酸序列与SEQID NO :7-12,15, 16、34、23-28、31、32或36中的任一个的核酸序列至少75%相同。
24.一种包含如权利要求22或23中所述的核酸分子的载体。
25.一种细胞，其表达如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或包含如权利要求M所述的载体。
26.一种分离的或纯化的免疫原性多肽，其包含结合权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的表位。
27.一种药物组合物，其包含权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、 权利要求22或权利要求23所述的核酸、权利要求M所述的载体、权利要求25所述的细胞、 或权利要求26所述的免疫原性多肽以及药学可接受的稀释剂或载体。
28.一种药物组合物，其包含第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体是如权利要求1至21中任一项所述的抗体，并且所述第二抗体中和甲型流感病毒感染。
29.如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求22或权利要求23所述的核酸、如权利要求M所述的载体、如权利要求25所述的细胞、如权利要求 26所述的免疫原性多肽、或如权利要求27或权利要求观所述的药物组合物⑴在制备治疗甲型流感病毒感染的药物中的用途；(ii)在疫苗中的用途；或(iii)在甲型流感病毒感染的诊断中的用途。
30.如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在通过检测抗甲型流感病毒疫苗的抗原是否含有正确构象的特异性表位来监测所述疫苗的质量中的用途。
31.一种减少甲型流感病毒感染或降低甲型流感病毒感染的风险的方法，所述方法包括给对其有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
32. 一种特异性地结合如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的表位，其用于(i)治疗中；(ii)制备治疗甲型流感病毒感染的药物中；(iii)作为疫苗；或 (iv)能中和甲型流感病毒感染的配体的筛选中。
全文摘要
本发明涉及结合到血凝素并中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的抗体和其抗原结合片段。本发明还涉及编码永生B细胞和培养的单浆细胞的核酸并涉及表位，其中所述永生B细胞和培养的单浆细胞产生这样的抗体和抗体片段，所述表位结合这样的抗体和抗体片段。此外，本发明涉及抗体、抗体片段和表位在筛选方法中以及在甲型流感病毒感染的诊断、治疗和预防中的用途。
文档编号A61K39/395GK102164613SQ200980132989
公开日2011年8月24日 申请日期2009年7月27日 优先权日2008年7月25日
发明者A·兰扎韦基亚 申请人:生物医学研究所
中和抗甲型流感病毒抗体及其用途本专利申请要求分别于2008年7月25日和2009年5月27日提交的美国临时专利申请第61/083，838号和61/181，582号的优先权，上述专利申请公开的全文援引加入本文，如同在本文中记载一样。
背景技术：
据认为，对甲型流感病毒的中和抗体应答对于给定的病毒亚型是特异性的。有16 种通过血凝素(HA)定义的甲型流感亚型。16种HA(H1-H16)可被分为两组。组1由HI、 H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13 和 H16 亚型组成，组 2 包括 H3、H4、H7、H10、H14 和 H15 亚型。尽管所有的亚型病毒都存在于鸟类，但主要是H1、H2和H3在人类中引发疾病。H5、H7 和H9亚型在人类中引起偶发性严重感染并可能引起新的大流行。Hl和H3病毒不断地进化形成新的变体，这种现象被称为抗原漂移。由此，应答过去的病毒而产生的抗体对于新的漂移病毒保护性很差或没有保护性。其结果是每年必须要制备新疫苗用于抵抗预计要出现的 Hl和H3病毒，这个过程很昂贵且并不总是奏效。这同样适用于H5流感疫苗的制备。还不清楚基于越南和印度尼西亚甲型流感病毒分离体的现有H5疫苗是否能抵抗未来的流行性 H5病毒。由于这些原因，非常希望拥有诱导能够中和所有甲型流感病毒亚型及其每年的变体(2006年，由Gerhard等人进行了综述)的广谱中和抗体的疫苗。此外，广谱中和异亚型抗体也可用在预防和治疗中。已经表征了识别甲型流感病毒的抗体。M2的抗体(只在被感染细胞上表达而不在感染性病毒上表达的一种不变的小蛋白)已经显示出一些体内保护效果，这些保护效果可能是通过用NK细胞或胞毒性T细胞靶向感染的细胞加以破坏来实现的。但是，HA是中和抗体的首要目标。它包括约500个氨基酸的大胞外域，该胞外域被源自宿主的酶裂解以产生通过二硫键连接的两个多肽。较大的N-末端片段(HAl，320至330个氨基酸)形成包含受体结合位点和大部分被病毒中和抗体识别的决定簇的膜远端球状域。较小的C-末端部分(HA2，约180个氨基酸)形成将球状域锚定在细胞或病毒膜的茎状结构。亚型之间的序列同源性的程度，在HAl多肽(亚型之间34%至59%的同源性)中比在HA2多肽(51%至 80%的同源性)中小。最保守的区是裂解位点周围的序列，特别是HA2N-末端的11个氨基酸，被命名为融合肽，它在所有的甲型流感病毒亚型中均是保守的。这个区的一部分以表面环暴露在HA前体分子(HAO)中，但是当HAO裂解为HA1/HA2时，则变得不可接近。总之，在不同的HA亚型之中，特别是在HA1-HA2连接区和在HA2区中都有保守区。但是，这些区对于中和抗体可能是不易接近的。在确认中和一种以上甲型流感病毒的亚型的抗体中只取得了有限的成功，并且其中和宽度窄和其效力低。Okimo等人用流感病毒A/0kuda/57(H2N2)免疫小鼠并分离了单克隆抗体(C179)，该单克隆抗体(C179)结合HA2中的保守构象表位并在动物模型中在体外和体内中和组1的H2、H1和H5亚型甲型流感病毒(Okuno等人，1993 ；Smirnov等人，1999 ； Smirnov 等人，2000)。
最近，Gioia等人描述了在接种了传统季节性流感疫苗的某些个体的血清中有 H5m病毒中和抗体的存在(Gioia等人，2008)。作者认为中和活性可能是来自神经氨酸酶 (Ni)的抗体。可是没有分离出单克隆抗体，也没有表征靶表位。目前尚不清楚血清抗体是否中和其它的甲流病毒亚型。尽管经过了数十年的研究，但是还没有投入市场的广谱中和或抑制甲型流感病毒感染或缓解由甲型流感病毒引发的疾病的抗体。因此，需要鉴定新的抵御多种甲型流感病毒亚型的抗体。
发明内容
本发明部分地基于从接种了季节性流感疫苗的个体中分离出结合至HA并中和一种以上甲型流感病毒亚型感染的自然产生的人单克隆抗体以及本发明的抗体结合的新型表位。因此，在本发明的一个方面中，本发明包括一种中和一种以上选自组1和组2亚型的甲型流感病毒亚型的感染的抗体及其抗原结合片段。在本发明的一个实施方案中，本发明包括中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型感染的抗体或其抗原结合片段。在本发明的另一个实施方案中，本发明包括一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个互补决定区(⑶R)序列，该序列与SEQ ID NO :1-6或 17-22中的任一个有至少95%的序列同一性，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本发明的又一个实施方案中，本发明包括具有SEQ ID NO :1或SEQ ID N0:17的氨基酸序列的重链⑶Rl ；具有SEQ ID NO :2或SEQ ID NO 18的氨基酸序列的重链⑶R2 ； 和具有SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 19的氨基酸序列的重链⑶R3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本发明的另一个实施方案中，本发明包括抗体或其抗原结合片段，其包含具有 SEQ ID NO :4 或 SEQ ID NO 20 的氨基酸序列的轻链 CDRl、具有 SEQ ID NO :5 或 SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的轻链⑶R2和具有SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链 CDR3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本发明的又一个实施方案中，本发明包括一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO 14的氨基酸序列的轻链可变区；或包含含SEQ ID NO :33的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO 14 的氨基酸序列的轻链可变区；或包含含SEQ ID NO : 的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO 30的氨基酸序列的轻链可变区；或包含含SEQ ID NO 35的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO :30的氨基酸序列的轻链可变区，并且其中所述抗体中和甲型流感病毒。 本发明进一步包括一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是FI6变体1或FI6变体2。在本发明的另一个实施方案中，本发明包括一种抗体或其抗原结合片段，其中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的感染，其中所述抗体或其片段被永生B细胞克隆表达。在另一个方面，本发明包括一种含有编码本发明的抗体或抗体片段的多核苷酸的核酸分子。在另一个方面，本发明包括一种含有本发明的核酸分子的载体或表达本发明的抗体或其抗原结合片段的细胞。在又一个方面，本发明包括含有结合本发明的抗体或其抗原结合片段的表位的分离的或纯化的免疫原性多肽。本发明进一步包括一种药物组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的核酸分子、含有本发明的核酸分子的载体、表达本发明的抗体或抗体片段的细胞、或本发明的免疫原性多肽以及药学可接受的稀释剂或载体(carrier)。本发明还包括一种药物组合物，其含有第一抗体或其抗原结合片段以及第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体是本发明的抗体，第二抗体是能中和甲型流感病毒感染的抗体或其抗原结合片段。本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的核酸、含本发明的核酸的载体、表达本发明的载体的细胞、包含结合本发明的抗体或抗体片段的表位的分离的或纯化的免疫原性多肽、或本发明的药物组合物(i)在制备治疗甲型流感病毒感染的药物中；(ii)在疫苗中； 或(iii)在甲型流感病毒感染的诊断中的用途也预期包括在本发明的范围之内。进一步， 本发明的抗体或其抗原结合片段在通过检测抗甲型流感病毒疫苗的抗原是否含有正确构象的特异表位来监测所述疫苗的质量中的用途也预期包括在本发明的范围之内。在另一方面，本发明包括一种减少甲型流感病毒感染或降低甲型流感病毒感染风险的方法，其包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的抗体或其抗原结合抗体片段。在另一方面，本发明包括一种特异性地结合本发明的抗体或其抗原结合片段的表位，其用于⑴治疗中；(ii)制备治疗甲型流感病毒感染的药物；(iii)作为疫苗；或(iv) 筛选能中和甲型流感病毒感染的配体。发明详述本发明部分地基于从接种了季节性甲型流感疫苗的个体中发现和分离能广谱中和不同甲型流感病毒亚型的自然产生的人抗体以及本发明的抗体结合的新型表位。希望得到这些抗体，因为只要一种或少数几种抗体就可以中和不同的甲型流感病毒亚型。此外，被这些抗体识别的表位可以是能够诱导广谱抗不同亚型的季节性和候选流行分离体的疫苗的一部分。因此，在一方面，本发明提供了一种能中和至少两种组1和组2亚型中的甲型流感病毒的抗体和其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明提供了一种中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的感染的抗体或其抗原结合片段。在本发明的另一方面，本发明提供了一种对不同的甲型流感病毒亚型的HA具有广谱特异性的中和抗体和其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段特异性地结合在两种或两种以上选自组1和组2的甲型流感病毒亚型之中是保守的HA 的茎区的表位。在另一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段特异性地结合包含SEQ ID NO 37、38、39或40的任一个的氨基酸序列的多肽。人单克隆抗体、分泌本发明的抗体的永生B细胞克隆或转染的宿主细胞、以及编码本发明的抗体的核酸也包括在本发明的范围之内。如本文所用，术语“抗原结合片段”、“片段”和“抗体片段”可以互换地使用，是指本发明的保持抗体的抗原结合活性的抗体的任何片段。示例性的抗体片段包括但不限于单链抗体、Fab、Fab，、F(ab，)2,Fv或scFv。如本文所用，术语“抗体”包括抗体和其抗原结合片段。如本文所用，术语“广谱特异性”用来指能结合和/或中和甲型流感病毒的一或多种组1亚型和一或多种组2亚型的本发明的抗体或抗原结合片段。
如本文所用，“中和抗体”是指一种能中和，即防止、抑制、减少、阻碍或干扰病原体引发和/或持续宿主内的感染的能力的抗体。术语“中和抗体”和“中和…抗体”在本文中可以互换地使用。如本文所述，这些抗体可单独使用，或作为预防剂或治疗剂在合适的制剂中结合使用，作为诊断工具或制备工具与活性接种疫苗配合使用。本发明的抗体或抗原结合片段中和一或多种组1(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、 H13、和H16以及它们的变体)的甲型流感病毒和一或多种组2 (H3、H4、H7、H10、H14和H15 以及它们的变体)的甲型流感病毒。在一个实施方案中，示例性的组1亚型包括H1、H2、H5、 H6和H9，示例性的组2亚型包括H3和H7。本发明的抗体和抗体片段能够中和甲型流感病毒亚型的各种组合。在一个实施方案中，抗体能中和甲型流感病毒Hl和H3亚型、或H2和H3亚型、或H3和H5亚型、或H3和 H9亚型、或Hl和H7亚型、或H2和H7亚型，或H5和H7亚型、或H7和H9亚型。在另一个实施方案中，本发明的抗体和抗体片段能中和甲型流感病毒H1、H2和H3 亚型、或H1、H3和H5亚型、或H1、H3和H9亚型、或H2、H3和H5亚型、或H2、H3和H9亚型、 或H3、H5和H9亚型，或H1、H2和H7亚型、或H1、H5和H7亚型，或H1、H7和H9亚型、或H2、 H5和H7亚型、或H2、H7和H9亚型、或H5、H7和H9亚型、或Hl、H3和H7亚型、或H2、H3和 H7亚型、或H3、H5和H7亚型、或H3、H7和H9亚型。在又一个实施方案中，抗体能中和甲型流感病毒HI、H2、H3和H7亚型、或HI、H3、 H5禾口 H7亚型、或HI、H3、H7禾口 H9亚型、或H2、H3、H5禾口 H7亚型、禾口 H2、H3、H7禾口 H9亚型、 或H3、H5、H7和H9亚型或HI、H2、H3和H5亚型、或HI、H2、H3和H9亚型、或HI、H3、H5和 H9亚型、或H2、H3、H5和H9亚型、或HI、H2、H5和H7亚型、或HI、H2、H7和H9亚型、或HI、 H5、H7禾口 H9亚型、或H2、H5、H7禾口 H9亚型。在又一实施方案中，本发明的抗体可以中和甲型流感病毒HI、H2、H3、H5和H7亚型、或 HI、H2、H3、H7 和 H9 亚型、或 HI、H3、H5、H7 和 H9 亚型、或 H2、H3、H5、H7 和 H9 亚型、 或 H1、H2、H3、H5 和 H9 亚型、或 HI、H2、H5、H7 和 H9 亚型、或 HI、H2、H3、H5、H7 和 H9 亚型。
在另一个实施方案中，除了中和甲型流感病毒H6亚型外，本发明的抗体和抗原结合片段还中和一或多种上述组合。本发明的抗体和抗原结合片段具有高中和能力。中和50%甲型流感病毒所需要的本发明的抗体浓度可例如为约50 μ g/ml或更低。在一个实施方案中，中和50%甲型流感病毒所需要的本发明的抗体浓度是约 50、45、40、35、30、25、20、17· 5、15、12· 5、11、10、9、8、7、 6、5、4. 5、4、3. 5、3、2. 5、2、1. 5或约1 μ g/ml或更低。在另一个实施方案中，中和50%甲型流感病毒所需要的本发明的抗体浓度是约0. 9,0. 8,0. 75,0. 7,0. 65,0. 6,0. 55,0. 5,0. 45、 0. 4、0· 35、0· 3、0· 25、0· 2、0· 15、0· U0. 075、0· 05、0· 04、0· 03、0. 02,0. 0U0. 008,0. 006、 0. 004,0. 003,0. 002或约0. 001 μ g/ml或更低。这意味着仅需低浓度的抗体来中和50%的甲型流感病毒。可使用本领域技术人员已知的标准中和试验来测定特异性和中和能力。本发明的抗体本发明提供了一种对于HA具有特定广谱特异性且中和一或多种组1的甲型流感病毒亚型或一或多种组2的甲型流感病毒亚型的抗体。本发明的抗体结合在选自组1和组 2的两或多种甲型流感病毒亚型之中是保守的HA的区中的表位。在一个实施方案中，本发明提供了一种抗体如分离的抗体或纯化的抗体，其特异
8性地结合组1和组2的甲型流感病毒亚型的在HA的茎区中的保守表位并干扰病毒的复制和扩散。本发明还提供了一种抗体如分离的抗体或纯化的抗体，其特异性地结合组1和组 2的亚型的在HA的茎区的保守表位并抑制病毒进入细胞。不受任何理论的约束，在一个示例性实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段结合到在甲型流感病毒的茎区中的保守表位并通过干扰融合步骤来抑制病毒进入细胞。蛋白的表位或抗原决定簇对应于由抗体的结合位点(或互补位)特异性地识别的分子的那些部分。因此，表位是需要互补性互补位来进行操作性识别的相关实体。在蛋白的不同变体中保守的表位是指相同的互补位能通过接触这些分子的相同部分而特异性地识别这些不同的变体。本发明的抗体可以是单克隆的诸如人单克隆抗体或重组抗体。本发明还提供了本发明的抗体片段，尤其是保留了抗体抗原结合活性的片段。尽管在某些地方，说明书包括权利要求书明确指出是抗原结合片段、抗体片段、抗体的变体和/或衍生物，但是应当理解， 术语“抗体”或“本发明的抗体”包括所有的抗体类别，即抗原结合片段、抗体片段、抗体的变体和衍生物。在一个实施方案中，本发明的抗体和抗体片段中和组1和组2的两或更多种甲型流感病毒亚型的组合。示例性甲型流感病毒亚型包括但不限于H5m(A/ Vietnam/1203/04)、HlNl (A/New Caledonia/20/99)、HlNl(A/Salomon Island/3/2006)、 H3N2 (A/ffyoming/3/03)以及 H9N2 (A/chicken/Hong Kong/G9/97)。在另一个实施方案中， 抗体中和和/或特异于3、4、5、6、7或更多的组1和组2甲型流感病毒亚型的组合。在示例性实施方案中，本发明包括一种对甲型流感病毒亚型Hl和H3(例如Hmi 和H3N2)或HI、H3、H5和H9 (例如HlNl、H3N2、H5N1和H9N2)是特异性的抗体或其抗体片段。在另一个实施方案中，抗体或其抗体片段对H1、H3、H5、H7和H9 (例如H1N1、H3N2、H5N1、 H7NUH7N7.H9N2)是特异性的。在本申请的前面部分提供了其它的甲型流感病毒的亚型的示例性组合。本发明的示例性抗体的重链可变区(Vh)和轻链可变区的氨基酸序列的SEQ ID序列号以及编码它们的核酸序列的SEQ ID序列号列于表1。表1.示例性甲型流感病毒中和抗体的Vh和\多肽和多核苷酸的SEQ ID序列号
权利要求
1.一种中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的感染的抗体或其抗原结合片段。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体特异性地结合血凝素的茎区中的表位，并且其中所述表位在两种或更多种选自组1和组2的甲型流感病毒亚型之中是保守的。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段结合包含SEQ ID NO 37、38、39或40任一个的氨基酸序列的多肽。
4.如权利要求1、2或3所述的抗体，其中中和50%甲型流感病毒所需的所述抗体浓度 ^ 20 μ g/ml或更低。
5.如权利要求1、2或3所述的抗体，其中中和50%甲型流感病毒所需的所述抗体浓度 ^ 4 μ g/ml或更低。
6.如权利要求1、2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述组1亚型是H1、H2、H5 或H9。
7.如权利要求1、2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述组2亚型是H3或H7。
8.如权利要求1、2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段中和三种、四种、五种或更多种甲型流感病毒亚型的感染。
9.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体中和以下甲型流感病毒亚型的感染(i)Hl和H3 ； (ii)Hl和H7 ； (iii)H3和H5 ； (iv)H3和H9 ； (v)H5 和 H7 ； (vi)H7 和 H9 ； (vii)Hl、H3、H5 和 H7 ；或(viii)Hl、H3、H5、H7和 H9。
10.一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个互补决定区(OTR)序列，所述互补决定区序列与SEQ ID NO 1-6或17-22中的任一个均有至少95%的序列同一性，其中所述抗体中和甲型流感病毒。
11.一种抗体或其抗原结合片段，其包含具有SEQ ID NO :1或SEQ ID N0:17的氨基酸序列的重链⑶Rl、具有SEQ ID NO :2或SEQ ID NO 18的氨基酸序列的重链⑶R2、以及具有SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 19的氨基酸序列的重链⑶R3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。
12.—种抗体或其抗原结合片段，其包含具有SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :20的氨基酸序列的轻链⑶R1、具有SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 21的氨基酸序列的轻链⑶R2、以及具有SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链⑶R3，其中所述抗体中和甲型流感病毒。
13.如权利要求11或12所述的抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下氨基酸序列的重链:CDRH1 为 SEQ ID NO :1、CDRH2 为 SEQ ID NO 2 和 CDRH3 为 SEQ ID NO :3 ；或 CDRHl 为 SEQ ID NO :17、CDRH2 为 SEQ ID NO 18 和 CDRH3 为 SEQ ID NO :19。
14.如权利要求11、12或13所述的抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下氨基酸序列的轻链CDRLl 为 SEQ ID NO :4、CDRL2 为 SEQ ID NO 5 和 CDRL3 为 SEQ ID NO :6 ；或CDRLl 为 SEQ ID NO 20, CDRL2 为 SEQ ID NO :21 和 CDRL3 为 SEQ ID NO :22。
15.如权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQID NO 13,33,29或35中的任一个的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的重链可变区。
16.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQID NO 14或SEQ ID NO 30的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的轻链可变区。
17.一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含有SEQ ID N0:13的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO 33的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO : 的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO :30的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO :35的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO :30的氨基酸序列的轻链可变区，并且其中所述抗体中和甲型流感病毒。
18.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是FI6变体1或FI6变体2。
19.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是人抗体、 单克隆抗体、纯化的抗体、分离的抗体、单链抗体、Fab、Fab，、F(ab' )2、Fv或scFv。
20.一种抗体或其抗原结合片段，其与如前述的权利要求中任一项所述抗体结合相同的表位，其中所述抗体或其抗原结合片段中和甲型流感病毒。
21.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗甲型流感病毒感染。
22.包含编码前述权利要求中任一项所述的核酸分子其抗原结合片段的多核苷酸的核酸分子。
23.如权利要求22所述的核酸分子，其中所述多核苷酸序列与SEQID NO :7-12,15, 16、34、23-28、31、32或36中的任一个的核酸序列至少75%相同。
24.一种包含如权利要求22或23中所述的核酸分子的载体。
25.一种细胞，其表达如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或包含如权利要求M所述的载体。
26.一种分离的或纯化的免疫原性多肽，其包含结合权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的表位。
27.一种药物组合物，其包含权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、 权利要求22或权利要求23所述的核酸、权利要求M所述的载体、权利要求25所述的细胞、 或权利要求26所述的免疫原性多肽以及药学可接受的稀释剂或载体。
28.一种药物组合物，其包含第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体是如权利要求1至21中任一项所述的抗体，并且所述第二抗体中和甲型流感病毒感染。
29.如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求22或权利要求23所述的核酸、如权利要求M所述的载体、如权利要求25所述的细胞、如权利要求 26所述的免疫原性多肽、或如权利要求27或权利要求观所述的药物组合物⑴在制备治疗甲型流感病毒感染的药物中的用途；(ii)在疫苗中的用途；或(iii)在甲型流感病毒感染的诊断中的用途。
30.如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在通过检测抗甲型流感病毒疫苗的抗原是否含有正确构象的特异性表位来监测所述疫苗的质量中的用途。
31.一种减少甲型流感病毒感染或降低甲型流感病毒感染的风险的方法，所述方法包括给对其有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
32. 一种特异性地结合如权利要求1至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的表位，其用于(i)治疗中；(ii)制备治疗甲型流感病毒感染的药物中；(iii)作为疫苗；或 (iv)能中和甲型流感病毒感染的配体的筛选中。
全文摘要
本发明涉及结合到血凝素并中和甲型流感病毒的组1亚型和组2亚型的抗体和其抗原结合片段。本发明还涉及编码永生B细胞和培养的单浆细胞的核酸并涉及表位，其中所述永生B细胞和培养的单浆细胞产生这样的抗体和抗体片段，所述表位结合这样的抗体和抗体片段。此外，本发明涉及抗体、抗体片段和表位在筛选方法中以及在甲型流感病毒感染的诊断、治疗和预防中的用途。
文档编号A61K39/395GK102164613SQ200980132989
公开日2011年8月24日 申请日期2009年7月27日 优先权日2008年7月25日
发明者A·兰扎韦基亚 申请人:生物医学研究所
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