前列腺素E<sub>2</sub>结合蛋白及其用途的制作方法
专利名称：前列腺素E<sub>2</sub>结合蛋白及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及对脂质代谢产物例如前列腺素E2 (PGE2)特异的结合蛋白及其组合物， 例如抗体和抗原结合部分，以及制备、表征和在疾病预防、诊断和治疗中使用其的方法。
背景技术：
生物学活性脂质例如前列腺素(PG)、血栓烷(TX)、白三烯(LT)和1-磷酸-鞘氨醇在 各种病症的病因学中起关键生理学作用。(Wymann，MP和Schneiter R，Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 9 (2):162-76 (2008))。在炎症过程中，细胞磷脂酶特别是磷脂酶A2和C被 激活，并且使细胞膜磷脂降解为花生四烯酸(AA)。AA通过2个主要途径进行代谢一一环加 氧酶(COX)和脂肪加氧酶(LO)途径。COX途径产生前列腺素(POT2、PGE2、PGF2a、前列腺环素 或PGI2、和血栓烷A2或TXA2)。LO途径具有2个分支；5-L0途径产生白三烯(例如，LTA4、 LTB4、LTC4、LTD4、LTE4和LTF4)，并且15-L0途径产生脂氧素(例如，LXA4、LXB4)。前列腺 素类例如前列腺素(PG)、血栓烷(TX)和白三烯(LT)具有各种生理活性用于维持体内的局 部稳态(The Pharmacological Basis of Therapeutics, Gilman,等人编，第 7 版，第 660 页，Macmillan Publishing Co.，New York (1985))。COX 的产物 PG G2/ PG H2 通过组织 特异性异构酶的作用转换为特定PGs，以产生PGI2、TXA2, POT2、PGE2和PGF2a。Pk的生物 学功能通过组织特异性细胞表面视紫红质样7次跨膜G蛋白偶联受体(GPCRs)介导。每种 PG的精确生理学/病理学作用由细胞背景、受体表达谱、配体亲和力和与信号转导途径的 差别偶联决定(Haluska 等人，Annu. Rev. Pharm. Tox. 10213 (1989);Prostanoids and their Receptors. In Comprehensive Medicinal Chemistry,第 643 页，Pergamon Press, Oxford (1990))。P(is —般在vasomotricity调节、睡眠/清醒周期、肠分泌、脂解、肾小 球过滤、肥大细胞脱颗粒作用、神经传递、血小板聚集、leuteolysis、子宫肌层收缩和分娩、 炎症和关节炎、动脉导管开放、细胞生长和分化、和免疫应答调节中起广泛多样的生理学作 用。在病理生理学上，PGs已牵涉各种疾病，包括疼痛和炎症、癌症、神经学疾病、心血管疾 病和高血压。前列腺素氏斤6氏)是前列腺素类家族成员。PG&广泛参与胃肠道收缩和松弛、胃酸 分泌、平滑肌松弛和神经递质释放。已鉴定了关于PGE2的4种亚型受体，包括EP1、EP2、EP3 和 EP4 (Negishi，M.等人，J. Lipid Mediators Cell Signalling，12:379-391 (1995)), 其各自涉及不同的信号转导途径。PGE2是AA代谢的COX途径的主要产物。它是在关节中合成的主要PG，并且在关节 炎炎症和发病机理中起重要作用。已鉴定了 5种PG&合酶。(Smith札，Am. J. Physiol. 263 (2 Pt 2) :F181-91 (1992))。在这 5 种中，膜 PGE 合酶(mPGES)-1 看起来是负责 PGE2生产的关键PG&转换酶。相对于其他PGE合酶，MPGES-I显示出最高催化活性，并且与C0X-1 和/或C0X-2结合起作用，以将PGH2转换为PGE20使用mPGES-1 KO小鼠(Kamei，D.，等人， J. Biol. Chem.，279 (32) :33684-95 (2004) ;Trebino，C. Ε·，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100 (15):9044-9 (2003)、特异性 PGE2 受体同种型 KO 小鼠(McCoy，J. Μ.，等人 J. Clin. Invest.，110 (5) :651-8 (2002) ；Majima, Μ.，等人 Trends Pharmacol. Sci.， 24 (10) :524-9 (2003)；和 Amano，H.，等人，J. Exp. Med. , 197 (2) :221-32 (2003);和抗 PGE2 特异性抗体(Portanova，J. P.，等人，J. Exp. Med.，184 (3) :883-91 (1996) ；Zhang, Y.，等人，J. Pharmacol. Exp. Ther.，沘3 (3): 1069-75 (1997)的研究暗示 PGE2 在类风湿 性关节炎(RA)、疼痛和炎症以及癌症发展的动物模型中起主要作用。在不存在mPGES-Ι的 情况下，C0X-1、C0X-2和其他PGE2合酶的水平保持相对不变。与野生型小鼠比较，mPGES-1 KO小鼠是存活、能育且正常发育的。然而，它们显示出在PG&生产的基础水平中以及在用 各种免疫刺激攻击后来自巨噬细胞的PG&生产中的急剧减少。此外，TXA2的生产增加。 mPGES-1 KO小鼠显示关节炎发展的发生率和严重性减少，并且在各种模型中显示针对疼痛 和炎症的抗性。几个实验室已独立产生了各种EP受体同种型KO小鼠。这些小鼠是存活、 能育且正常发育的。使用特异性EP同种型KO小鼠的研究证实PGE2的各种功能经由特异性 EP同种型介导。例如，EP4同种型的缺乏明确影响小鼠中关节炎发展的严重性，而EP3的缺 乏通过调节经由基质细胞的VEGF生产和血管发生来影响肿瘤发展和进展。前列腺素生物合成和代谢中的缺陷目前被认为在自身免疫和炎性病症的病因学 中起重要作用。例如，与来自未受影响受试者的滑膜组织比较，来自患有类风湿性关节炎的 患者的滑膜组织产生更大量的PGE2和前列腺素F2a(PGF2a )(Blotman,F.，等人，Rev. Rhum. Mai. 0steoartic,46 (4) :243-7 (1979))。相似地，在显示出食物耐受不良继发的全身性 和胃肠道症状的患者中出现PGF2a的合成增加。因此，摄入特定食物继发的偏头痛 可以是2-系列前列腺素合成增加的结果。多发性硬化也与前列腺素PGE1和PGE2正常水平 中的不平衡相关。生殖的许多方面例如生殖力、妊娠和分娩可以通过前列腺素调节。前列 腺素还在生殖生理学中起主要作用。过量前列腺素合成促使痛经和生产，这可以通过静脉 内施用前列腺素或通过插入前列腺素阴道栓进行诱导。(Wang L.等人，Occup. Environ. Med. 61 (12) :1021-1026 (2004))。PG&的过量合成也在生殖病症中起主要作用，例如不 育、反复流产、先兆子痫和子痫。因此存在关于对于PG&特异性的抗体的需要，所述抗体阻 断或调节其生物学功能，可以用于预防和治疗与PGE2过量生产相关的疾病，以及诊断目的。高度特异性、高亲和力(Kd为约300pM)抗PGE2 mAb一一 2B5的产生已得到报道。 (Mnich SJ，等人 J. Immunol. 155 (9) :4437-44 (1995))。2B5 相对于吲哚美辛 C0X-1, 2 抑制剂的功效在小鼠中疼痛和炎症以及在大鼠中佐剂诱发性关节炎的动物模型中进行测 定。(Portanova JP 等人，J. Exp. Med. 184 (3) :883-91 (1996))。这些研究明确显示 2B5在减少疼痛和炎症以及关节炎严重性方面与吲哚美辛一样有效，暗示PGE2是这些动物 模型中AA代谢的C0X-1，2途径中的关键参与者。通过COX抑制剂抑制泛-PG生产已是数十年来充分确定的治疗策略。COX的2种 同种型C0X-1和C0X-2是已知的，其各自由不同基因编码。2种同种型执行基本上相同的 催化反应，并且具有相似的三级结构(Garavito RM，等人，Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 32:183-206 (2003))。C0X-1在几乎所有组织中组成性表达，并且被认为在很大程度上负责正常“看家”功能，例如胃细胞保护和稳态。相比之下，C0X-2在特定组织中组 成性表达，并且可在炎症和癌症部位高度诱导。因此，C0X-2介导的PG生产被认为在炎症 和癌症部位起重要作用。传统非类固醇消炎药(NSAIDs)例如阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬) 抑制2种COX同种型。这些化合物是对于疼痛、类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎(OA)和心 血管疾病最广泛使用的药物，并且目前考虑用于预防结肠癌和AD。传统NSAIDs的主要障碍 是在高危群体中的胃和肾不利事件，这被认为是由于C0X-1的抑制。因此，第二代NSAIDs， C0X-2选择性抑制剂(例如，塞来考昔，西乐葆；罗非昔布，万络；伐地考昔，Bextra)，被认为 具有更佳的治疗谱。这种假设已导致其广泛用于疼痛、RA和OA。自从在1999年批准第一 种C0X-2抑制剂后，在2004年C0X-2抑制剂的组合销售是约US $ 50亿。然而，近期某些 C0X-2选择性抑制剂撤出市场，并且处于FDA审查下，由于关于特定C0X-2抑制剂在高危患 者中的心血管副作用。与COX抑制剂相关的阻碍可能由于其抑制所有P(iS的能力而引起，并 且特别是由于其差别干扰PGI2和TXA2生产的能力而引起，所述PGI2和TXA2在维持心血管 稳态中起重要作用(Martinez-Gonzcilez J.等人，Curr. Pharm. Des. 13 (22):2215-2227 (2007))。COX抑制可能使得更多的AA对于LO途径可用，因此增加白三烯和脂氧素生产，这 可能促成COX抑制相关不利效应。使用C0X-1和/或C0X-2敲除小鼠以及C0X-1和C0X-2 特异性抑制剂的近期研究也暗示关于2种COX同种型的生理学作用的假设可能是不正确 的。(Loftin，C. D.，等人 Prostaglandins Other Lipid Mediat. 68-69:177—85 (2002))。 这些研究暗示C0X-1和C0X-2在供应PGs以维持组织稳态中都起重要作用，并且2种同种 型可能促成疾病发展，例如疼痛、炎症和癌症。因此，用特异性抗体阻断C0X-1和C0X-2途 径下游的有害PGE2看起来是用于治疗特定人疾病的有吸引力的方法。
重要生物学活性前列腺素的另一个例子是PGD2。PGD2是在免疫攻击后由肥大 细胞生产的花生四烯酸的主要环加氧酶产物(Lewis，等人，J. Immunol. 129:1627-1631 (1982))。活化肥大细胞，PGD2的主要来源，是在病状中驱动变应性应答中的关键参与物 (player)之一，所述病状例如哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎、变应性皮炎和其他疾病 (Brightling，等人，Clin. Exp. Allergy 33:550-556(2003))0 近期研究已显示 PGD2 通过 2种不同的G蛋白偶联受体(GPCRs)发挥其作用一一在各种人组织中表达的T辅助2型细胞 (CRTH2)上表达的D-前列腺素类受体(DP)和化学吸引剂受体-同源分子。PGD2/CRTH2系统 介导嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和Th2细胞的趋化性，这涉及变应性炎症的诱导(Ulven T 等人，Curr. Top. Med. Chem. 6 (13) :1427-1444 (2006))。PGD2 的许多作用通过其对 D型前列腺素(“DP”)受体的作用而介导，所述DP受体是在上皮和平滑肌上表达的G蛋白偶 联受体。在哮喘中，呼吸上皮长久以来已被认为是驱动疾病发展的炎性细胞因子和趋化因 子的关键来源(Holgate，等人，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 162:113-117 (2000))。 在哮喘的实验鼠模型中，DP受体在抗原攻击后在气道上皮上急剧上调(Matsuoka，等人， Science观7:2013-2017(2000))。DP受体涉及人变应性鼻炎，特征在于喷嚏、痒、rhinorea 和鼻充血症状的常见变应性疾病。DP拮抗剂已显示在减轻许多物种中的变应性鼻炎症 状中有效，并且更具体而言已显示抑制抗原诱导的鼻充血，变应性鼻炎中表现最多的症状 (Jones，等人，Am. J. Resp. Crit. Care Med. 167:A218 (2003) ;Arimura，等人，S-5751. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298 (2) :411-9 (2001))。DP 拮抗剂在变应性结膜炎和变应 性皮炎的实验模型中也是有效的(Arimura等人，S-5751. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298(2) :411-9 (2001) Jorisu，等人，Bioorg. & Med. Chem. 12:5361-5378 (2004))。因此 也存在关于对于PGD2特异性的抗体的需要，并且阻断或调节其生物学功能因此可以用于预 防和治疗与POT2过量生产相关的疾病。1-磷酸鞘氨醇(SlP)是诱导许多细胞效应的生物学活性脂质的另一个例子，包括 导致血小板聚集、细胞增殖、细胞形态、肿瘤细胞侵袭、内皮细胞趋化性和内皮细胞体外血 管发生的那些。SlP受体因此是用于治疗应用例如伤口愈合和肿瘤生长抑制的良好靶。SlP 部分经由命名为SlPl、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5 (以前分别被称为EDG-U EDG-5、EDG-3、 EDG-6和EDG-8)的一组G蛋白偶联受体给细胞发信号。这些受体与关于结构相关溶血磷脂 酸(LPA)的 3 种其他受体(LPA1、LPA2 和 LPA3(以前为 EDG_2、EDG_4 和 EDG-7))共享 50-55% 氨基酸和簇同一性。(Ishii，I.等人，Mol. Pharmacol. 58 (5) :895-902 (2000))。当配 体与那种受体结合时，在G蛋白偶联受体(GPCR)中诱导构象转变，促使在结合的G蛋白的 α-亚单位上的⑶P由GTP替换和G蛋白后续释放到细胞质内。α-亚单位随后与β Υ-亚 单位解离，并且每个亚单位随后可以与效应蛋白质结合，这激活第二信使，导致细胞应答。 最后，在G蛋白上的GTP水解为GDP，并且G蛋白的亚单位彼此再次结合，并且随后与受体再 次结合。扩增在一般GPCR途径中起主要作用。一种配体与一种受体的结合导致许多G蛋 白的活化，各自能够与许多效应蛋白质结合，导致扩增的细胞应答。SlP受体成为良好的药 物靶，因为个别受体是组织和应答特异性的。SlP受体的组织特异性是重要的，因为开发对 于一种受体选择性的激动剂或拮抗剂使细胞应答集中于包含那种受体的组织，限制不希望 有的副作用。SlP受体的应答特异性也是重要的，因为它允许开发起始或抑制特定细胞应答 而不影响其他应答的激动剂或拮抗剂。例如，SlP受体的应答特异性可以允许起始血小板 聚集而不影响细胞形态的SlP模拟物。SlP作为鞘氨醇的代谢产物在其与鞘氨醇激酶的反应中形成，并且大量贮存于血 小板聚集体中，其中存在高水平的鞘氨醇激酶且不存在鞘氨醇裂解酶。SlP在血小板聚集过 程中释放，在血清中累积，并且也在恶性腹水中发现。SlP生物降解最可能经由通过磷酸外 切水解酶(ectophosphohydrolases)水解而进行，特别是1_磷酸-鞘氨醇磷酸水解酶。因 此存在关于对于SlP特异性的抗体的需要，用于通过阻断其与受体的相互作用或稳定SlP 且增强其生物效应来调节其生物学功能，用于在预防或治疗自身免疫疾病、炎性疾病和癌 症中使用。由于PGE2在各种人病症中的作用，已设计了抑制或对抗PGE2活性的治疗策略。特 别地，适合于递送给人的治疗抗体仍未得到报道，所述治疗抗体与PGE2结合且中和PGE2。 本领域存在关于能够结合且中和PGE2的改良抗体的需要。发明概述
本发明涉及对脂质代谢产物例如前列腺素E2 (PGE2)特异的结合蛋白。本发明的PGE2 结合蛋白包括但不限于能够结合PGE2的抗体、抗原结合片段、和具有各种支架的抗原结合 片段。本发明的一个方面涉及能够结合PG&的结合蛋白。在一个实施方案中，本发明的 结合蛋白具有中和、稳定、拮抗和/或激动活性。在另一个实施方案中，结合蛋白能够调节 PGE2的生物学功能。例如，结合蛋白能够至少部分中和PGE2。在本发明的一个方面，结合蛋白能够结合PGE2，并且阻止？6氏与一种或更多种PGE2受体(例如，EP1、EP2、EP3和EP4)结合。在本发明的一个实施方案中，结合蛋白能够结 合PGE2,并且阻止PGE2与EP1、EP2、EP3和EP4受体结合。本发明提供了制备、表征且使用PGE2结合蛋白作为单一疗法或作为与其他治疗剂 的组合疗法的方法；以及在预防和/或治疗由PGE2介导的疾病中的方法，所述疾病例如自 身免疫和炎性疾病，例如类风湿性关节炎、Crohn氏病、骨关节炎、AMD、淋巴结病、溶血性贫 血、紫癜、强直性脊柱炎、多发性硬化、糖尿病、癌症、疼痛、骨丢失/恢复、atherosclelotic 病、生殖病症和其他疾病。本发明的结合蛋白还可以用于此种疾病的诊断中。在本发明的一个实施方案中，结合蛋白是结合PGE2的分离的抗体或其抗原结合片 段。此种结合可以在基于生物素化PG& WELISA测定中加以证实，其中EC5tl选自约1χ10_6 -约 1χ1(Γ7 Μ、约 lxl(T7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 10, Μ、约 1x10, -约1Χ10_" Μ、和约10_"-约10_12Μ。在另一个实施方案中，结合蛋白与PG&的结合在基 于3H标记的PGE2的放射免疫测定中加以证实，其中Kd选自约lxlO—6 -约lxlO—7 Μ、约lxlO—7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 1(T1QM、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 10_"-约10_12。在另一个实施方案中，结合蛋白与结合在FLIPR中加以证实，其中 通过其受体ΕΡ4介导的导的钙流入通过结合蛋白与PGE2的结合加以抑制，其中IC5tl 选自约 1χ1(Γ6 -约 1χ1(Γ7 Μ、约 1x10"-约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 10, Μ、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 1(Γ"-约 1(Γ12。在一个实施方案中，在基于FACS的受体结合测定中，抗体抑制生物素化PGE2与细 胞表面上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受体结合，或在基于ELISA的受体结合测定中，抗体抑 制生物素化PGE2与使用受体表达细胞制备的膜制剂上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受体结 合，其中 IC5tl 为约 1χ1(Γ6 -约 1x10" Μ、约 1χ1(Γ7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、 约 10_9 -约 10_10Μ、约 IxlO"10 -约 IxlO"11 M 和约 10—11 -约 10_12，或在基于 3H PGE2 的放 射免疫测定中，抗体抑制3H- PGE2与细胞表面或膜制剂上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受体 结合，其中 IC50 为约 IxlO"6 -约 1x10" Μ、约 1x10"-约 IxlO"8 Μ、约 IxlO"8 -约 IxlO"9 Μ、约 1(Γ9 -约 10, Μ、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 1(Γ"-约 1(Γ12，和 / 或在 ΕΡ4 介导 的FLIPR测定中，抗体抑制PGE2诱导的钙流入，其中IC5。为1x10—6 -约1χ10_7 Μ、约lxlO-7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 1(T1QM、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 10_"-约10_12。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合PGE2,并且在基于细胞表面 的受体结合测定中，或在基于放射免疫测定的受体结合测定中，在100 ηΜ的浓度下使PGE2 与其受体中的至少一种的结合抑制约70-100%。在一个实施方案中，抗体是19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、LlU L21、2B5_7. 0、 2B5-8. 0或2B5-9. 0或其变体。在一个实施方案中，变体是人源化变体，例如Hu2B5. Pl或 Hu2B5. P2。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2,并且在 角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪水肿模型中，使爪水肿抑制约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70^^80^^90%或100%。在一个特定实施方案中，在角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪 水肿模型中，抗体使爪水肿抑制超过约10%。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2，并且 在啮齿类动物胶原诱导的关节炎模型中，使爪肿胀或平均关节炎得分抑制约10 %、20 %、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在一个特定实施方案中，在啮齿类动物胶 原诱导的关节炎模型中，抗体使爪肿胀或平均关节炎得分抑制超过10%。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2,并且在 角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪水肿模型中，使爪水肿抑制约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70^^80^^90%或100%。在一个特定实施方案中，在角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪 水肿模型中，抗体使爪水肿抑制超过约10%。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2，并且 在啮齿类动物胶原诱导的关节炎模型中，使爪肿胀或平均关节炎得分抑制约10 %、20 %、 30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或100 %。在一个特定实施方案中，在啮齿类动物胶 原诱导的关节炎模型中，抗体使爪肿胀或平均关节炎得分抑制超过10%。在另一个实施方案中，如通过放射免疫测定测量的，本发明的结合蛋白对于PGE2 具有至多约KT3s-1 ；至多约IO-4s-1 ；至多约IO-5s-1 ；或至多约IO-fV1的解离速率(off rate) 常数(k。ff)。优选地，如通过放射免疫测定测量的，本发明的结合蛋白对于PG&具有约ΙΟ、—1 -约ΙΟ、-1 ；约ΙΟ-、-1 -约ΙΟ、-1 ；或约ΙΟ、-1 -约ΙΟΥ1的解离速率常数(k。ff)。在另一个实施方案中，通过放射免疫测定测定的，本发明的结合蛋白对于？6氏具 有至多约1(Γ6 M ；至多约1(Γ7 M ；至多约1(Γ8 M ；至多约1(Γ9 M ；至多约10, M ；至多约10_" Μ;至多约10_12 Μ;或至多10_13Μ的解离常数(KD)。优选地，本发明的结合蛋白对于？6氏具 有约 10" M -约 1(Γ8 M ；约 1(Γ8 M -约 1(Γ9 M ；约 1(Γ9 M -约 1(T1Q M ；约 10,-约 1(Γ" M;约10—11 M -约10_12 M;或约10_12 - M约10_13 M的解离常数(KD)。本发明的一个方面提 供了针对本发明的至少一种PGE2结合蛋白的至少一种PGE2抗独特型抗体。抗独特型抗体 包括包含分子的任何蛋白质或肽，所述分子包括免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不 限于重或轻链或其配体结合部分的至少一个互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或 轻链恒定区、构架区，或；其任何部分，其可以掺入本发明的结合蛋白内。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合前列腺素 E2，并且在基于细胞表面的受体结合测定中，其中IC5tl选自约lxl0_6 - IxlO-7 MUxlO-7 -IxlO"8 MUxlO"8 - IxlO"9 MUO"9 - IO-10MUxIO"10 - IxlO"11 M 和 1(Γ" - 1(Γ12Μ，或在基于 ELISA 的受体结合测定中，其中 IC5。选自约 1χ1(Γ6 - IxlO"7 MUxlO"7 - IxlO"8 MUxlO"8 -IxlO"9 MUO"9 - 1(Γ10Μ、1χ1(Γ10 - IxlO"11 M 禾口 1(Γ" - 1(Γ12 Μ，抑制前列腺素 E2 与 El、Ε2、 E3和E4受体中的至少一种结合。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合前列腺素&，并且在基于细胞 表面的受体结合测定中或在基于3H-PGE2的放射免疫测定中，使用表达El、E2、E3和E4受 体中的至少一种的细胞，或表达E1、E2、E3和E4受体中的至少一种的细胞膜制剂，在约100 nM的浓度下使前列腺素E2与El、E2、E3和E4受体中的至少一种的结合抑制约70-100%。 在一个实施方案中，抗体选自 19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、Lll、L21、2B5_7. 0、2B5_8. 0 和2B5-9.0。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段能够调节前列腺素氏的生物学功 能，例如中和前列腺素E2。抗体或其抗原结合片段选自免疫球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合 抗体、CDR移植的抗体、人源化抗体、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、二硫化物连接的Fv、scFv、单 结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双特异性抗体。在一个实施方案中， 抗体或其抗原结合片段是人源化抗体。在另一个实施方案中，抗体选自Hu2B5.Pl和Hu2B5.P20本发明还提供了药物组合物，其包括抗体或其抗原结合片段、和药学可接受的载体。在 一个实施方案中，药物组合物进一步包括至少一种另外治疗剂用于治疗其中前列腺素E2活 性是有害的病症。在另一个方面，本发明提供了生成与前列腺素氏结合的抗体或其片段的方法，其 包括用前列腺素甲状腺球蛋白免疫接种非人动物，收集包含抗前列腺素氏抗体的体液 或器官，并且分离抗前列腺素E2抗体的步骤。在另一个方面，本发明提供了包括抗原结合结构域的人源化抗体，能够结合前列 腺素E2,包括包含选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一个⑶R区。在另一个实施 方案中，本发明提供了包括抗原结合结构域的人源化抗体，所述抗原结合结构域包括包含 氨基酸序列的至少一个⑶R区，所述氨基酸序列与选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列至 少约60 %、至少约65 %、至少约70 %、至少约75 %、至少约80 %、至少约85 %、至少约90 %、 至少约95%或至少约98%同源。在一个实施方案中，人源化抗体包括选自SEQ ID NOs 78、 79、80和81的氨基酸序列。在一个方面，本发明的结合蛋白能够结合PGE2，所述抗 原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个CDR 在另一个实施方案中，本发明提供了包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段， 所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个⑶R :SEQ ID NOs :6、7、8、 10、11、12、14、15、16、18、19、20、22、23、26、27、28、30、31、32、34、35、37、38 和 39。在另一个 实施方案中，结合蛋白或其片段包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括包含选自 下述的氨基酸序列的至少一个VH区SEQ ID NOs :5、13、21、25、33、40、42和44。在另外一 个实施方案中，结合蛋白或其片段包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括包含选 自下述的氨基酸序列的至少一个VL区SEQ ID NOs :9、17、M、29、36、41、43和45。在另外 一个实施方案中，结合蛋白或其片段包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括包含 选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一个⑶R区。在一个实施方案中，结合蛋白包括例如选自VH⑶R组的至少3个⑶Rs，所述VH CDR组选自 SEQ ID NOs :6、7禾口 8 ；SEQ ID NOs :14、15和 16 ；SEQ ID NOs :14、22和 23、SEQ ID N0s:26、27 和 28 和 32 ；SEQ ID N0s:26、34 和 35 ；禾口 SEQ ID N0s:54、55 和 56。在另 一个实施方案中，所述至少3个⑶Rs选自VL⑶R组，所述VL⑶R组选自SEQ ID NOs 10、 11 禾口 12 ；SEQ ID NOs :17、18 禾口 19 ；SEQ ID NOs :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NOs :37、38 禾口 39 ； SEQ ID N0s:42、43和44 ；和SEQ ID N0s:57、58和59。在另外一个实施方案中，所述至少 3个⑶Rs包括具有SEQ ID NOs :54、55和56的氨基酸序列的VH⑶R组，和/或具有SEQ ID NOs 57,58和59的氨基酸序列的VL CDR组。在另一个实施方案中，结合蛋白包括至少2个可变结构域⑶R组，例如选自SEQ ID N0s:6、7、8 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs 14、15、16 和 SEQ ID NOs :18,19,20 ；SEQ ID NOs :14、22、23 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs :26、27、28 和 SEQ ID NOs 30、31、32;和 SEQ ID NOs :26、34、35 和 SEQ ID NOs :37、38、39。在另一个实施方案中，本发明的结合蛋白包括具有选自下述的氨基酸序列的2个 可变结构域:SEQ ID NO:5禾口 SEQ ID N0:9 ；SEQ ID NO: 13禾口 SEQ ID NO: 17 ；SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:24 ；SEQ ID N0:25 禾口 SEQ ID NO:29 ；SEQ ID N0:33 禾口 SEQ ID N0:36 ；SEQ ID N0:40和 SEQ ID N0:41 ；SEQ ID N0:42和 SEQ ID N0:43 ；和 SEQ ID N0:44和 SEQ ID N0:45。在另一个实施方案中，所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID N0:60禾口 SEQ ID N0:61 ；SEQ ID N0:62禾口 SEQ ID NO:63 ；SEQ ID N0:64禾口 SEQ ID N0:65 ； SEQ ID N0:66和 SEQ ID N0:67 ；SEQ ID N0:68和 SEQ ID N0:69 ；SEQ ID N0:70和 SEQ ID N0:71 ；SEQ ID N0:72和 SEQ ID N0:73 ；SEQ ID N0:74和 SEQ ID N0:75 ；和 SEQ ID N0:76 和SEQ ID N0:77。在另一个实施方案中，所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列 SEQ ID N0:78 和 SEQ ID N0:79;和 SEQ ID N0:80 和 SEQ ID N0:81。在另一个方面，本发明提供了与前列腺素氏结合的人源化抗体或其片段，所述人 源化抗体包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个VH区SEQ ID NOs :60、62、64、66、 68、70、72、74、76、78和80。在另一个实施方案中，人源化抗体或其片段包括包含选自下述 的氨基酸序列的至少一个 VL 区SEQ ID NOs 61 63、65、67、69、71、73、75、77、79 和 81。在 另外一个实施方案中，所述至少一个VH区或至少一个VL区包括包含至少一个氨基酸置换 的人受体构架序列，其中所述构架序列的氨基酸序列与人受体构架序列的序列至少65%相 同。例如，人受体构架可以包括在关键残基上的至少一个构架氨基酸置换，所述关键残基 选自与CDR相邻的残基、糖基化位点残基、罕见残基、能够与前列腺素&相互作用的残基、 能够与CDR相互作用的残基、典型残基、在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基、在 Vernier区内的残基、和在Chothia限定的可变重链⑶Rl和Kabat限定的第一个重链构架 之间重叠的区域中的残基。在另一个实施方案中，结合蛋白进一步包括人受体构架。在本发明的一个实施方案中，人重链和轻链受体序列选自表7和表8中所述的序 列(实施例4. 2. 1)。其他人重链和轻链受体序列是本领域众所周知的，并且适合于与本发明 一起使用。在一个实施方案中，结合蛋白是能够结合PGE2的CDR移植的抗体或其抗原结合 部分。在另一个实施方案中，结合蛋白是能够结合PGE2的人源化抗体或其抗原结合部分。 在一个实施方案中，CDR移植的抗体或人源化抗体或其抗原结合部分包括此处公开的一个 或更多个CDRs，例如3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、或6个或更多个CDRs。在 另一个实施方案中，CDR移植的抗体或人源化抗体或其抗原结合部分包括人受体构架。所 述人受体构架可以是人免疫球蛋白的任何受体构架。在一个特定实施方案中，人受体构架 是此处公开的人受体构架中的任何一个。在一个实施方案中，将CDRs掺入人受体构架的 人抗体可变结构域内。在一个实施方案中，人抗体可变结构域是共有人可变结构域。在另 一个实施方案中，人受体构架包括在关键残基上的至少一个构架区氨基酸置换，其中所述 关键残基选自与CDR相邻的残基；糖基化位点残基；罕见残基；能够与PGE2相互作用的残 基；能够与CDR相互作用的残基；典型残基；在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基； 在Vernier区内的残基；和在Chothia限定的可变重链⑶Rl和Kabat限定的第一个重链 构架之间重叠的区域中的残基。在一个实施方案中，人受体构架人受体构架包括至少一个构架区氨基酸置换，其中所述构架的氨基酸序列与所述人受体构架的序列至少65%相同， 并且包括与所述人受体构架相同的至少70个氨基酸残基。在一个实施方案中，在关键残基 上的构架区氨基酸置换选自在重链可变区中在位置48上的M (人)至I (小鼠)、在位置68 上的V (人)至A (小鼠)、在位置70上的M (人)至L (小鼠)、和在位置72上的T (人)至V (小鼠)；以及在轻链可变区中在位置2上的I (人)至V (小鼠)、和在位置3上的V (人)至 L (小鼠)。在另一个方面，本发明提供了包括结合蛋白中的任何一种和接头多肽和/或免疫 球蛋白恒定结构域的抗体构建体。在一个实施方案中，抗体构建体选自免疫球蛋白分子、单 克隆抗体、嵌合抗体、⑶R移植的抗体、人源化抗体、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、二硫化物连接 的Fv、SCFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双特异性抗体。在一 个实施方案中，抗体构建体包括选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域人IgM恒定结构 域、人IgGl恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人 IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域。在一个实施方案中，抗体构建体包括具有选自下述 的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定结构域=SEQ ID NO. :1 ；SEQ ID NO. :2 ；SEQ ID NO. :3 ；SEQ ID NO. :4 ；和 SEQ ID NO. :5。在另一个实施方案中，本发明提供了包括抗PGE2抗体构建体和选自下述的试剂 的抗PGE2抗体缀合物免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒性剂。在一个实施方案中， 所述试剂是选自下述的显像剂放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性 标记和生物素。在另一个实施方案中，显像剂是例如选自下述的放射性标记3H、14C、35S、9°Y、 99TC、mIn、125I、131I、mLU、166H0和153Sm。在另一个实施方案中，所述试剂是选自下述的治疗 或细胞毒性剂抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂 剂、蒽环类、毒素和细胞凋亡剂。在另一个实施方案中，结合蛋白是糖基化的。在一个特定实施方案中，PGE2结合 蛋白具有人糖基化模式。在另一个实施方案中，PGE2结合蛋白、抗体构建体或抗体缀合物是结晶的(例如， 作为晶体存在)。在一个实施方案中，晶体是无载体的药学控释晶体。在另一个实施方案中， 结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物具有比其可溶性对应物更长的体内半衰 期。在另一个实施方案中，结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物在结晶化后保 留生物学活性。本发明的一个方面涉及包括能够PGE2的结合蛋白的DVD结合蛋白。优选地， DVD结合蛋白能够结合2个PGE2结合位点或结合PGE2和第二种靶。第二种靶选自
CSFI (MCSf C'SF2(GM-CSF), CSB lGCSFi, FGFZ tl-N I, IFNpL IFNy.组胺和组胺受体权利要求
1.一种包括抗原结合结构域的CDR移植的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合 PGE2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个CDR GYTFT'KYWl,G (SHQ ID NO: Μι. DIYPGYDYTHYNEKFKD {SEQ ID NO; 55).SDGSSTY <SE0 ID NO 56), TSSONtVHSKCNTYLF (SEQ ID NO: 57),KVSNRFSG (SEQ ID、0: 5X). FQVSHVPVT (SEQ 1L> NO: 59>。
2.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够调节前列腺素E2的生物学 功能。
3.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够中和前列腺素E2。
4.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够阻止前列腺素E2与前列腺 素氏受体EPl的结合。
5.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够阻止前列腺素E2与选自 EP1、EP2、EP3和EP4的至少一种前列腺素&受体的结合。
6.权利要求1的结合蛋白，其中使用ELISA测定，所述结合蛋白或其片段以选自下述 的 EC5tl 结合前列腺素 E2 约 IxlO-6 -约 1x10" M、约 1x10"-约 1χ1(Γ8 M、约 1χ1(Γ8 -约 IxlO"9 M、约 1(Γ9 -约 1(T1Q Μ、约 lxl(T1Q -约 1χ1(Γ" M、和约 1(Γ"-约 1(Γ12 Μ。
7.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段在ΕΡ4受体介导的FLira测定 中抑制通过前列腺素E2与前列腺素E2受体ΕΡ4诱导的钙流入，其中IC5tl选自约1χ10_6 -约 IxlO-7 Μ、约 1χ1(Γ7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 1(T1CI Μ、约 1x10, -约 1χ1(Γ" M 和约 1(Γ"-约 1(Γ12 Μ。
8.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段已经亲和力成熟。
9.一种包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前列腺素 E2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个⑶R :SEQ ID NO:ft. s, IiK I t 12, 14, 15 16. W. R 0. 21 23. 26. 2λ S. —W, . ’’:. }4. 35, . W. 54. 5.x5S. U 59。
10.一种包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前列腺素 E2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个VH区SEQ NOs :5、 13、21、25、33、40、42 和 44。
11.一种包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前列腺素 E2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个VL区SEQ ID NOs :9、 17、24、29、36、41、43 和 45。
12.一种包括抗原结合结构域的人源化结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前 列腺素E2,所述抗原结合结构域包括包含选自SEQ ID N0s:M-59的氨基酸序列的至少一个 CDR 区。
13.权利要求9的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括至少3个⑶Rs。
14.权利要求13的结合蛋白，其中所述至少3个⑶Rs选自VH⑶R组，所述VH⑶R组 选自 SEQ ID N0s:6、7 禾口 8 ;SEQ ID NOs: 14、15 和 16 ;SEQ ID N0s:14、22 和 23、SEQ ID NOs :26,27 和 28 ；SEQ ID NOs :26、34 和 35 ；禾口 SEQ ID NOs :54、55 和 56。
15.权利要求13的结合蛋白，其中所述至少3个⑶Rs选自VL⑶R组，所述VL⑶R组 选自 SEQ ID NOs 10,11 和 12 ；SEQ ID NOs :18、19 禾口 20 ；SEQ ID NOs :30、31 和 32 ；SEQ ID NOs 37,38 和 39 ；SEQ ID NOs :57、58、59。
16.权利要求13的结合蛋白，其中所述至少3个⑶Rs包括具有SEQID N0s:54、55和 56的氨基酸序列的VH⑶R组，和/或具有SEQ ID NOs :57、58和59的氨基酸序列的VL CDR 组。
17.权利要求9的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括至少2个可变结构域⑶R组。
18.权利要求17的结合蛋白，其中所述至少2个可变结构域⑶R组选自SEQID NOs 6、7、8 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs 14、15、16 和 SEQ ID NOs :18,19,20 ；SEQ ID NOs :14、22、23 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ；SEQ ID NOs :26、27、28 和 SEQ ID NOs :30、31、32 ； SEQ ID NOs :26、34、35 和 SEQ ID NOs :37、38、39 ；和 SEQ ID NOs :54、55、56 和 SEQ ID NOs 57、58、59。
19.一种与前列腺素氏结合的人源化抗体或其片段，所述人源化抗体包括包含选自下 述的氨基酸序列的至少一个 VH 区=SEQ ID NOs :60、62、64、66、68、70、72、74、76、78 和 80。
20.一种与前列腺素氏结合的人源化抗体或其片段，所述人源化抗体包括包含选自下 述的氨基酸序列的至少一个 VL 区=SEQ ID NOs :61、63、65、67、69、71、73、75、77、79 和 81。
21.根据权利要求1的结合蛋白，其进一步包括人受体构架。
22.根据权利要求21的结合蛋白，其中所述人受体构架包括选自下述的至少一个氨基 酸序列=SEQ ID NOs :46、47、48、49、50、51、52 和 53。
23.权利要求21或22的人源化抗体，其中所述人受体构架包括选自下述的至少一个构 架区氨基酸置换在所述重链可变区中在位置48上的M (人)至I (小鼠)、在位置68上的 V (人)至A (小鼠)、在位置70上的M (人)至L (小鼠)、和在位置72上的T (人)至V (小 鼠);和在所述轻链可变区中在位置2上的I (人)至V (小鼠)、和在位置3上的V (人)至L (小鼠)。
24.权利要求19或20的人源化抗体，其中所述至少一个VH区或至少一个VL区包括包 含至少一个氨基酸置换的人受体构架序列，其中所述构架序列的氨基酸序列与所述人受体 构架 序列的序列至少65%相同。
25.权利要求23的人源化抗体，其中所述人受体构架包括在关键残基上的至少一个构 架氨基酸置换，所述关键残基选自与CDR相邻的残基、糖基化位点残基、罕见残基、能够与 前列腺素&相互作用的残基、能够与CDR相互作用的残基、典型残基、在重链可变区和轻 链可变区之间的接触残基、在Vernier区内的残基、和在Chothia限定的可变重链⑶Rl和 Kabat限定的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
26.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括2个可变结构域，其中所述2个可 变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID N0:5和SEQ ID NO:9 ；SEQ ID N0:13和SEQ ID NO: 17 ；SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO:24 ；SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 29 ；SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:36 ；SEQ ID N0:40 禾口 SEQ ID N0:41 ；SEQ ID N0:42 禾口 SEQ ID N0:43;禾口 SEQ ID N0:44 和 SEQ ID N0:45。
27.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括2个可变结构域，其中所述2个可 变结构域具有选自下述的氨基酸序列:SEQ ID N0:60和SEQ ID N0:61 ；SEQ ID N0:62禾口SEQID NO:63 ；SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO65 ；SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO67 ；SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:69 ；SEQ ID NO: 70 和 SEQ ID NO: 71 ；SEQ ID NO: 72 和 SEQ ID NO: 73 ；SEQ ID NO:74 和 SEQ ID NO:75 ；SEQ ID NO:76 和 SEQ ID NO:77 ；SEQ ID NO:78 和 SEQ ID NO:79 ； 和 SEQ ID N0:800 和 SEQ ID N0:81。
28.—种包括权利要求1的结合蛋白的抗体构建体，所述抗体构建体进一步包括接头 多肽或免疫球蛋白恒定结构域。
29.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子、二硫化物连接的 Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植的抗体、双抗体、人源化抗体、多特 异性抗体、Fab、双重特异性抗体、Fab，、双特异性抗体、F (ab，)2*Fv。
30.权利要求观的抗体构建体，其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子、二硫化物连 接的Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植的抗体、双抗体、人源化抗 体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、Fab，、双特异性抗体、F (ab，)2*Fv。
31.权利要求观的抗体构建体，其中所述结合蛋白包括选自下述的重链免疫球蛋白恒 定结构域人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgGl恒定结构域、人IgE恒定结构 域、人IgG2恒定结构域、和人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
32.权利要求观的抗体构建体，其中所述构建体包括具有选自SEQID NOs 1_4的氨基 酸序列的免疫球蛋白恒定结构域。
33.权利要求观的抗体构建体，其中所述结合蛋白具有人糖基化模式。
34.权利要求观的抗体构建体，其中所述抗体构建体是结晶抗体构建体。
35.权利要求33的抗体构建体，其中所述结晶抗体构建体是无载体的药学控释结晶抗 体构建体。
36.权利要求34的抗体构建体，其中所述抗体构建体具有比所述抗体构建体的可溶性 对应物更长的体内半衰期。
37.权利要求34的抗体构建体，其中所述抗体构建体保留生物学活性。
38.一种包括权利要求观的抗体构建体的抗体缀合物，所述抗体缀合物进一步包括选 自下述的试剂免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒性剂。
39.权利要求37的抗体缀合物，其中所述试剂是选自放射性标记、酶、荧光标记、发光 标记、生物发光标记、磁性标记和生物素的显像剂。
40.权利要求37的抗体缀合物，其中所述显像剂是选自下述的放射性标记3H、14C、35S、 90Y、99TC、mh、125I、131I、177Lu、166HO 和 153Sm0
41.权利要求37的抗体缀合物，其中所述试剂是选自下述的治疗或细胞毒性剂抗代 谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素和 细胞凋亡剂。
42.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白是结晶结合蛋白。
43.权利要求41的结合蛋白，其中所述结晶结合蛋白是无载体的药学控释结晶抗体。
44.一种分离的核酸，其编码权利要求1的结合蛋白。
45.一种分离的核酸，其编码权利要求观的抗体构建体。
46.一种载体，其包括根据权利要求43或44的分离的核酸。
47.权利要求45的载体，其中所述载体选自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pBJ禾口 pA2。
48.一种宿主细胞，其包括权利要求45的载体。
49.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
50.权利要求48的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
51.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
52.权利要求50的宿主细胞，其中所述真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞、植物细 胞和真菌细胞。
53.权利要求50的宿主细胞，其中所述真核细胞是选自哺乳动物细胞、禽类细胞和昆 虫细胞的动物细胞。
54.权利要求50的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
55.权利要求50的宿主细胞，其中所述宿主细胞是COS或HEK293。
56.权利要求50的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞。
57.权利要求55的宿主细胞，其中所述酵母细胞是酿酒酵母。
58.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是昆虫Sf9细胞。
59.一种生产能够结合前列腺素氏的蛋白质的方法，所述方法包括在足以生产能够结 合前列腺素氏的结合蛋白的条件下，在培养基中培养权利要求47的宿主细胞的步骤。
60.一种蛋白质，其根据权利要求58的方法生产。
61.一种用于释放结合蛋白的组合物，所述组合物包括(a)制剂，其中所述制剂包括根据权利要求41的结晶结合蛋白，(b)成分；和(c)至少一种聚合载体。
62.权利要求60的组合物，其中所述聚合载体是选自下述的聚合物聚丙烯酸、聚氰基 丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚羧酚酸肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟 基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚(羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、 聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、Pluronic多元醇、白 蛋白、藻酸酯、纤维素和纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫 酸化多糖、及其掺合物和/或共聚物。
63.权利要求60的组合物，其中所述成分选自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟 丙基-β -环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
64.一种用于治疗具有其中前列腺素&活性是有害的病症的哺乳动物的方法，所述方 法包括给所述哺乳动物施用有效量的权利要求60的组合物的步骤。
65.一种药物组合物，其包括权利要求1的结合蛋白和药学可接受的载体。
66.权利要求65的药物组合物，其中所述药学可接受的载体充当用于增加所述结合蛋 白吸收或分散的佐剂。
67.权利要求64的药物组合物，其中所述佐剂是透明质酸酶。
68.权利要求64的药物组合物，其进一步包括用于治疗其中前列腺素氏活性是有害的 病症的至少一种另外的治疗试剂。
69.权利要求67的药物组合物，其中所述另外的试剂选自治疗剂，显像剂、细胞毒性 剂、血管发生抑制剂、激酶抑制剂、共刺激分子阻断剂、粘附分子阻断剂、抗细胞因子抗体或其功能片段、氨甲蝶呤、环孢菌素、雷帕霉素、冊506、可检测标记或报道分子、TNF拮抗剂、抗 风湿剂、肌肉弛缓剂、麻醉药、非类固醇消炎药(NSAID)、止痛剂、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉 剂、神经肌肉阻断剂、抗微生物剂、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白质合成类固醇、促红细 胞生成素、免疫接种、免疫球蛋白、免疫抑制剂、生长激素、激素替代药物、放射性药物、抗抑 郁药、抗精神病药、刺激剂、哮喘药物治疗、β激动剂、吸入类固醇、经口类固醇、肾上腺素或 其类似物、细胞因子、和细胞因子拮抗剂。
70.一种用于减少前列腺素E2活性的方法，所述方法包括使前列腺素E2与权利要求1 的结合蛋白接触的步骤，从而使得前列腺素氏活性被减少。
71.一种用于减少患有其中前列腺素E2活性是有害的病症的人受试者中的前列腺素 E2活性的方法，所述方法包括给所述人受试者施用权利要求1的结合蛋白的步骤，从而使得 所述人受试者中的前列腺素氏活性被减少。
72.一种用于就其中前列腺素氏活性是有害的至少一种疾病或病症治疗受试者的方 法，所述方法包括给所述受试者施用权利要求1的结合蛋白的步骤，从而使得达到治疗。
73.权利要求71的方法，其中所述病症选自自身免疫疾病、炎性疾病、肿瘤、类风湿性 关节炎、变应性关节炎、格-巴二氏综合征、传染性单核细胞增多症、病毒性淋巴结病、疱疹 病毒感染、多发性硬化、脱髓鞘疾病、血液学病症、溶血性贫血、血小板减少症、内分泌学病 症、糖尿病、Addison氏病、特发性甲状旁腺机能减退、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、胶原病症、 全身性红斑狼疮、生殖病症、闭经、不育、复发性流产、子痫、头颈肿瘤、肺癌、胃癌、前列腺 癌、胰腺癌、胃肠器官疾病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、Crohn氏病、疼痛、与骨关节炎相关的 疼痛、眼病症和年龄相关黄斑变性。
74.权利要求71的方法，其中所述病症选自类风湿性关节炎、骨关节炎、青少年慢性关 节炎、脓毒性关节炎、莱姆关节炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、全身性红 斑狼疮、Crohn氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、甲状腺炎、哮喘、变应 性疾病、牛皮癣、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、与器官移植相关的急性或慢 性免疫性疾病、肉状瘤病、动脉粥样硬化、弥散性血管内凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、 肾病综合征、慢性疲乏综合征、韦格纳氏肉芽肿病、过敏性紫癜、肾显微血管炎、慢性活动性 肝炎、葡萄膜炎、脓毒性休克、中毒性休克综合征、脓毒病综合征、恶病质、传染病、寄生虫 病、获得性免疫缺陷综合征、急性横贯性脊髓炎、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏病、阿尔茨海默 氏病、中风、原发性胆汁性肝硬变、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏 病、散发性多腺性I型缺陷和多腺性II型缺陷、Schmidt氏综合征、成人(急性)呼吸窘迫 综合征、秃头、斑秃、血清反应阴性关节病、关节病、Reiter氏病、牛皮癣性关节病、溃疡性 结肠炎性关节病、肠病性滑膜炎、衣原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌相关性关节病、脊椎关节 病、动脉粥样化疾病/动脉硬化、特应性变态反应、自身免疫性大疱性疾病、寻常天疱疮、落 叶状天疱疮、类天疱疮、线性IgA疾病、自身免疫性溶血性贫血、Coombs阳性溶血性贫血、 获得性恶性贫血、青少年性恶性贫血、肌痛脑炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮肤念珠菌 病、巨细胞性动脉炎、原发性硬化性肝炎、隐原性自身免疫性肝炎、获得性免疫缺陷病综合 征、获得性免疫缺陷相关病、乙型肝炎、丙型肝炎、常见的各种免疫缺陷(常见的可变低丙种 球蛋白血症)、扩张型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、过早卵巢衰竭、纤维化肺疾病、隐原性纤 维化肺泡炎、炎症后间质性肺病、间质性肺炎、结缔组织病相关性间质性肺病、混合型结缔组织病相关性肺病、全身性硬皮病相关性间质性肺病、类风湿性关节炎相关性间质性肺病、 全身性红斑狼疮相关性肺病、皮肌炎/多肌炎相关性肺病、Sj5gren氏病相关性肺病、强直 性脊柱炎相关性肺病、脉管炎性弥散性肺病、含铁血黄素沉着病相关性肺病、药物诱导的间 质性肺病、纤维化、放射性纤维化、闭塞性细支气管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴细胞性浸润性 肺病、传染后间质性肺病、痛风性关节炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎(传统自身 免疫性或狼疮样肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗体肝炎)、自身免疫介导的低血糖、 具有黑棘皮症的B型胰岛素耐受性、甲状旁腺机能减退、与器官移植相关的急性免疫性疾 病、与器官移植相关的慢性免疫性疾病、骨关节病、原发性硬化性胆管炎、1型牛皮癣、2型 牛皮癣、特发性白细胞减少、自身免疫性嗜中性白细胞减少症、肾脏病N0S、肾小球肾炎、肾 显微血管炎、莱姆病、盘状红斑狼疮、特发性男性不育症或N0S、精子自身免疫性、多发性硬 化(所有亚型)、交感性眼炎、结缔组织病继发的肺动脉高压、Goodpasture氏综合征、结节 性多动脉炎的肺表现、急性风湿热、类风湿性脊椎炎、Still氏病、全身性硬皮病、SjSrgren 氏综合征、Takayasu氏病/动脉炎、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少症、自身 免疫性甲状腺病、甲状腺机能亢进、甲状腺肿性自身免疫性甲状腺功能减退(Hashimoto氏 病)、萎缩性自身免疫性甲状腺功能减退、原发性粘液性水肿、晶状体性葡萄膜炎、原发性血 管炎、白癜风急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬变、酒精诱导的肝损伤、胆汁郁积、特应性肝 病、药物诱导的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、变态反应和哮喘、B群链球菌(GBS)感染、精神 障碍(例如，抑郁和精神分裂症)、Th2型和Thl型介导的疾病、急性和慢性痛(不同形式的 疼痛)、以及癌症例如肺、乳腺、胃、膀胱、结肠、胰、卵巢、前列腺和直肠癌以及造血恶性肿 瘤(白血病和淋巴瘤)、无β脂蛋白血症、手足发绀、急性和慢性寄生或感染过程、急性白 血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞样白血病(AML)、急性或慢性细菌感染、 急性胰腺炎、急性肾功能衰竭、腺癌、心房异位搏动、AIDS痴呆复征、酒精诱导的肝炎、变应 性结膜炎、过敏性接触性皮炎、变应性鼻炎、同种异体移植物排斥、α -1-抗胰蛋白酶缺乏、 肌萎缩性侧索硬化、贫血、心绞痛、前角细胞变性、抗cd3治疗、抗磷脂综合征、抗受体超敏 反应、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、高动脉压、动脉硬化、动静脉瘘、共济失 调、心房纤维颤动(持续性或阵发性)、心房扑动、房室传导阻滞、B细胞淋巴瘤、骨移植物排 斥、骨髓移植(BMT)排斥、束支传导阻滞、Burkitt氏淋巴瘤、烧伤、心律失常、心脏震晕综 合征、心脏肿瘤、心肌病、心肺分流术炎症应答、软骨移植排斥、小脑皮质变性、小脑病症、紊 乱性或多源性房性心动过速、化学疗法相关病症、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性酒精中 毒、慢性炎性病理学、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺部疾病(C0PD)、慢性水 杨酸盐中毒、结肠直肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、接触性皮炎、肺源性心脏病、冠状动脉 疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培养物阴性脓毒病、囊性纤维化、细胞因子疗法相关病症、拳 击员痴呆、脱髓鞘病、登革出血热、皮炎、皮肤病学状况、多尿症、糖尿病、糖尿病性动脉硬化 性疾病、弥漫性Lewy小体病、扩张性充血性心肌病、基底神经节病症、中年唐氏综合征、由 阻断CNS多巴胺受体的药物诱导的药物诱导的运动障碍、药物敏感性、湿疹、脑脊髓炎、心 内膜炎、内分泌病、会厌炎、EB病毒感染、红斑性肢痛病、锥体外束和小脑病症、家族性嗜血 细胞性淋巴组织细胞增多症、胎儿胸腺移植排斥、Friedreich氏共济失调、功能性外周性 动脉病症、真菌性脓毒病、气性坏疽病、胃溃疡、肾小球肾炎、任何器官或组织的移植物排 斥、革兰氏阴性脓毒病、革兰氏阳性脓毒病、由于细胞内生物的肉芽肿、毛细胞性白血病、Hallerrorden-Spatz病、hashimoto氏甲状腺炎、枯草热、心脏移植排斥、血色素沉着症、血 液透析、溶血性尿毒性综合征/血栓溶解性血小板减少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律 失常、HIV感染/HIV神经病、何杰金氏病、运动过度性运动障碍、超敏反应、超敏感性肺炎、 高血压、运动机能减退性运动障碍、下丘脑-垂体-肾上腺轴评价、特发性Addison氏病、 特发性肺纤维化、抗体介导的细胞毒性、虚弱、婴儿型脊髓性肌萎缩、主动脉炎症、流行性感 冒a、电离辐射照射、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、缺血性再灌注损伤、缺血性中 风、青少年类风湿性关节炎、青少年脊髓性肌萎缩、卡波西氏肉瘤、肾移植排斥、军团杆菌、 利什曼病、麻风病、皮层脊髓系统损伤、脂肪水肿、肝移植排斥、淋巴水肿、疟疾、恶性淋巴 瘤、恶性组织细胞增多症、恶性黑素瘤、脑膜炎、脑膜炎球菌血症、代谢性/特发性、偏头痛、 线粒体多系统病症、混合型结缔组织病、单克隆丙种球蛋白病、多发性骨髓瘤、多系统变性 (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager 禾口 Machado-Jos印h)、重症肌无力、鸟胞内分支杆 菌、结核分支杆菌、骨髓异常增生综合征、心肌梗死、心肌缺血性病症、鼻咽癌、新生儿慢性 肺病、肾炎、肾变病、神经变性疾病、神经原性I肌萎缩、嗜中性粒细胞减少性发烧、非何杰 金淋巴瘤、腹主动脉及其分支闭塞、闭塞性动脉病症、okt3治疗、睾丸炎/附睾炎、睾丸炎/ 输精管切除术逆转操作、器官巨大症、骨质疏松症、胰移植排斥、胰癌、恶性肿瘤的瘤旁综合 征/高钙血症、甲状旁腺移植排斥、盆腔炎症性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性动脉粥 样硬化疾病、外周血管病症、腹膜炎、恶性贫血、卡氏肺囊虫性肺炎、肺炎、POEMS综合征(多 发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、和皮肤变化综合征)、灌注后综 合征、泵后综合征、MI心切开术后综合征、先兆子痫、进行性核上麻痹、原发性肺动脉高压、 放射治疗、Raynaud氏现象和疾病、Raynoud氏病、Refsum氏病、常规狭窄QRS心动过速、肾 血管性高血压、再灌注损伤、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小体型老年 性痴呆、血清反应阴性关节病、休克、镰状细胞贫血、皮肤同种异体移植物排斥、皮肤变化综 合征、小肠移植排斥、实体瘤、特殊心律失常、脊髓性共济失调、脊髓小脑变性、链球菌肌炎、 小脑结构损伤、亚急性硬化性全脑炎、晕厥、心血管系统梅毒、全身性过敏反应、全身炎症反 应综合征、全身发作性青少年类风湿性关节炎、T细胞或FAB ALL、毛细血管扩张、血栓闭塞 性脉管炎、血小板减少症、毒性、移植物、创伤/出血、III型超敏反应、IV型超敏反应、不稳 定心绞痛、尿毒症、尿脓毒病、荨麻疹、心脏瓣膜疾病、静脉曲张、血管炎、静脉疾病、静脉血 栓形成、心室纤维性颤动、病毒和真菌感染、病毒性脑炎/无菌性脑膜炎、病毒相关性噬红 细胞综合征、Wernicke-Korsakoff综合征、Wi 1 son氏病、任何器官或组织的异种移植排斥、 急性冠状动脉综合征、急性特发性多神经炎、急性炎性脱髓鞘性多发性神经根性神经病、急 性缺血、成人Mill氏病、斑秃、过敏反应、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、动脉硬化、 特应性湿疹、特应性皮炎、自身免疫性皮炎、与链球菌感染相关的自身免疫性病症、自身免 疫性肠病、自身免疫性听力丧失、自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)、自身免疫性心肌 炎、自身免疫性过早卵巢衰竭、睑炎、支气管扩张、大疱性类天疱疮、心血管病、灾变性抗磷 脂综合征、乳糜泻、颈椎关节强硬、慢性缺血、疤痕性类天疱疮、具有多发性硬化风险的临床 孤立综合征(CIS)、结膜炎、儿童期发病性精神病、慢性阻塞性肺部疾病(C0PD)、泪囊炎、皮 肌炎、糖尿病性视网膜病、糖尿病、椎间盘突出、盘脱垂、药物诱导的免疫性溶血性贫血、心 内膜炎、子宫内膜异位、眼内炎、巩膜外层炎、多形性红斑、重型多形性红斑、妊娠期类天疱 疮、格-巴二氏综合征(GBS)、枯草热、Hughes综合征、特发性帕金森氏病、特发性间质性肺炎、IgE介导的变态反应、免疫性溶血性贫血、内含体肌炎、传染性眼炎性疾病、炎性脱髓鞘 疾病、炎性心脏病、炎性肾病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎、Kussmaul病或 Kussmaul-Meier病、Landry氏麻痹、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、网状青斑、黄斑变性、 显微镜下多脉管炎、morbus bechterev、运动神经元病症、粘膜类天疱疮、多器官衰竭、重 症肌无力、脊髓异常增生综合征、心肌炎、神经根障碍、神经病、非甲非乙型肝炎、视神经炎、 骨质溶解、少关节的JRA、周围动脉闭塞性疾病(PA0D)、周围血管疾病(PVD)、外周动脉疾病 (PAD)、静脉炎、结节性多动脉炎(或结节性动脉外膜炎)、多软骨炎、风湿性多肌病、白发症、 多关节的JRA、多发性内分泌缺陷综合征、多肌炎、风湿性多肌病(PMR)、泵后综合征、原发 性帕金森综合征、前列腺炎、单纯红细胞再生障碍、原发性肾上腺机能不足、复发型视神经 脊髓炎、再狭窄、风湿性心脏病、SAPHO (滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、继发 性淀粉样变性、休克肺、巩膜炎、坐骨神经痛、继发性肾上腺机能不足、聚硅氧烷相关的结缔 组织病、Sneddon-Wilkinson皮肤病、关节强硬性脊椎炎、Stevens-Johnson综合征(SJS)、 全身性炎症应答综合征、颞动脉炎、弓形体视网膜炎、中毒性表皮坏死松解、横贯性脊髓炎、 TRAPS (肿瘤坏死因子受体，I型变态反应，II型糖尿病、荨麻疹、普通型间质性肺炎(UIP)、 脉管炎、春季结膜炎、病毒性视网膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada综合征(VKH综合征)、湿黄 斑变性和伤口愈合。
75. 一种治疗患有其中前列腺素氏是有害的病症的患者的方法，所述方法包括在第 二种试剂施用之前、同时或之后，施用权利要求1的结合蛋白的步骤，其中所述第二种试 剂选自类风湿性关节炎或青少年类风湿性关节炎药物，其选自氨甲蝶呤，来氟米特，低剂 量皮质类固醇，泼尼松，可的松，抗疟疾药物治疗，羟氯喹，金，柳氮磺胺吡啶，青霉胺，环 磷酰胺，环孢菌素，米诺环素，乙氨酚，阿司匹林，布洛芬，萘普生，塞来考昔，英夫利昔单 抗，依那西普，阿达木单抗，阿巴他赛，利妥昔单抗，阿那白滞素，靶向IL-6、IL-6R、IL-17、 IL-18、IL-23、B7. 1/B7. 2的生物制剂和经口递送试剂；选自下述的骨关节炎药物乙氨 酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、塞来考昔、类固醇、人工关节液、欣维可和海尔根；选自下 述的Crohn氏病药物阿达木单抗、azasan、安萨科、硫唑嘌呤、柳氮磺胺吡啶、布地奈德、 entocort、灭滴灵、依木兰、英夫利昔单抗、巯嘌呤、甲硝唑、protostat、巯基嘌呤、类克和柳 氮磺胺吡啶；选自下述的强直性脊柱炎药物aCetOCOt、乙酰水杨酸、acuprin 81、阿达木 单抗、aleve、双霉素钙、萘普生钠制剂、aristocort、阿司匹林、aspirtab、曲安奈德、百服 宁、buffex、凯扶兰、西乐葆、奇诺力、可的松、双氯芬酸、奥沙拉秦钠、easprin、依那西普、 吲哚美辛、茚甲新、英夫利昔单抗、萘普生、类克、曲安西龙和扶他林；选自下述的多发性硬 化药物Avonex、Azasan、硫唑嘌呤、Betaseron、Bubbli-Pred、克帕松、Cotolone、格拉默、 依木兰、干扰素β -la、干扰素β -Ib溶液、Key-Pred、Key-Pred SP、米托蒽醌、那他珠单 抗、i若ffl灵、Orapred> Orapred ODT> Pediapred> Pred-Ject-50> Predacort 50、Predalone 50、Predate-50、泼尼松龙、I^relone、利比和Tysabri ；选自下述的癌症或恶性肿瘤药物 Abraxane、亚得里亚霉素、Adruci 1、艾达乐、阿仑珠单抗、力比泰、氨基酮戊酸、阿那曲唑、阿 瑞匹坦、瑞宁得、阿诺新、Arranon、三氧化二砷、阿伐他汀(贝伐珠单抗)、阿扎胞苷、贝伐珠 单抗、贝沙罗汀、硼替佐米、Campath (阿仑珠单抗)、Camptosar (盐酸依立替康)、卡培他滨、 卡钼、西妥昔单抗、顺钼、Clafen (环磷酰胺)、氯法拉滨、Clofarex (氯法拉滨)、科罗拉(氯 法拉滨)、环磷酰胺、阿糖胞苷、Cytosar-U (阿糖胞苷)、Cytoxan (环磷酰胺)、达珂(地西他滨)、达沙替尼、地西他滨、D印oCyt (脂质体阿糖胞苷)、D印oR)am (脂质体阿糖胞苷)、盐酸 右雷佐生、多西他赛、Doxil (盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、 Dox-SL (盐酸多柔比星脂质体)、Efudex (氟尿嘧啶)、Ellence (盐酸表柔比星)、乐沙定(奥 沙利钼)、Emend (阿瑞匹坦)、盐酸表柔比星、爱必妥(西妥昔单抗)、盐酸厄洛替尼、Evacet (盐酸多柔比星脂质体)、易维特(盐酸雷洛昔芬)、依西美坦、Faslodex (氟维司群)、弗隆(来 曲唑)、Fluoroplex (氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、氟维司群、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉妥珠单 抗奥佐米星、健择(盐酸吉西他滨)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、赫赛汀(曲妥珠单抗)、和美新 (盐酸托泊替康)、甲磺酸伊马替尼、咪喹莫特、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸依立替康、伊沙匹隆、 Ixempra(伊沙匹隆)、Ke0Xifene(盐酸雷洛昔芬)、凯望斯(帕利夫明)、二甲苯磺酸拉帕替尼、 来那度胺、来曲唑、聚左旋糖(氨基酮戊酸)、LipoDoX (盐酸多柔比星脂质体)、脂质体阿糖胞 苷、Methazolastone (替莫唑胺)、Mylosar (阿扎胞苷)、麦罗塔(吉妥珠单抗奥佐米星)、纳 米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定化纳米颗粒制剂)、奈拉滨、Neosar (环磷酰胺)、Nexavar (甲苯磺酸索拉非尼)、尼洛替尼、诺瓦得士 (柠檬酸它莫西芬\0ncaspar (培门冬酶)、奥沙利 钼、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定化纳米颗粒制剂、帕利夫明、帕木单抗、Paraplat (卡钼)、伯 尔定(卡钼)、培门冬酶、培美曲塞二钠、Platinol-AQ (顺钼)、Platinol (顺钼)、盐酸雷洛昔 芬、Revlimid (来那度胺)、RituXan (利妥昔单抗)、利妥昔单抗、Sclerosol胸膜内气溶胶(滑 石)、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel (达沙替尼)、灭菌滑石粉(滑石)、Meritalc (滑石)、苹果 酸舒尼替尼、索坦(苹果酸舒尼替尼)、昔诺韦(沙立度胺)、滑石、柠檬酸它莫西芬、Tarabine PFS (阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸厄洛替尼)、Targretin (贝沙罗汀)、Tasigna (尼洛替尼)、泰 素(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、Temodar (替莫唑胺)、替莫唑胺、Temsirolimus, Thalomid (沙立度胺)、沙立度胺、Totect (盐酸右雷佐生)、盐酸托泊替康、Torisel (Temsirolimus), 曲妥珠单抗、iTrisenox (三氧化二砷)、Tykerb (二甲苯磺酸拉帕替尼)、Vectibix (帕木单 抗)、万珂(硼替佐米)、Vidaza (阿扎胞苷)、Vorinostat、希罗达(卡培他滨)、Zinecard (盐 酸右雷佐生)、唑来膦酸、Zolinza (Vorinostat)和择泰(唑来膦酸)。
76.根据权利要求74的方法，其中对所述受试者的所述施用通过选自下述的至少一种 方式肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小 脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、盆腔内、心包内、腹膜内、胸膜内、前 列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速浓注、阴 道、直肠、颊、舌下、鼻内和经皮。
77.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合前列腺 素&，并且在基于细胞表面的受体结合测定中，其中IC5tl选自约lxl0_6 - IxlO-7 MUxlO-7 -IxlO"8 MUxlO"8 - IxlO"9 MUO"9 - IO-10MUxIO"10 - IxKT11 M和 1(Γ" - 1(Γ12 Μ，或在基于 ELISA 的受体结合测定中，其中 IC5。选自约 1χ1(Γ6 - IxlO"7 MUxlO"7 - IxlO"8 MUxlO"8 -lxlO—9 M、10_9 - IO^i0MUxIO"10 - IxlO"11 M 禾Π ΙΟ—11 - 10_12 Μ，抑制所述前列腺素 E2 与 El、 E2、E3和E4受体中的至少一种结合。
78.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PGE2， 并且在选自下述的疾病模型中使PGE2活性抑制约50% 角叉菜胶诱导的爪水肿模型、角叉 菜胶诱导的痛觉过敏模型、胶原诱导的关节炎模型和佐剂诱导的关节炎模型。
79.权利要求77的抗体，其中所述抗体在选自下述的疾病模型中使PGE2活性抑制约70% 角叉菜胶诱导的爪水肿模型、角叉菜胶诱导的痛觉过敏模型、胶原诱导的关节炎模型 和佐剂诱导的关节炎模型。
80.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PGE2， 并且在选自下述的疾病模型中使炎症抑制约90% 角叉菜胶诱导的爪水肿模型、角叉菜胶 诱导的痛觉过敏模型、胶原诱导的关节炎模型和佐剂诱导的关节炎模型。
81.权利要求77的抗体，其中所述抗体是2B5。
82.—种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合前列腺 素&，并且在基于细胞表面的受体结合测定中，或在基于ELISA的受体结合测定中，在约 100 nM的浓度下使所述前列腺素E2与El、E2、E3和E4受体中的至少一种的结合抑制约 70-100%。
83.权利要求81的抗体，其中所述抗体选自19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、L11、L21、 2B5-7. 0、2B5-8. 0 和 2B5-9. 0。
84.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够调节 前列腺素E2的生物学功能。
85.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够中和 前列腺素E2。
86.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自免疫 球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合抗体、⑶R移植的抗体、人源化抗体、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、 二硫化物连接的Fv、SCFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双特异 性抗体。
87.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化 抗体。
88.—种药物组合物，其包括权利要求81的抗体或其抗原结合片段，和药学可接受的 载体。
89.权利要求87的药物组合物，其进一步包括用于治疗其中前列腺素&活性是有害的 病症的至少一种另外的治疗试剂。
90.一种生成与前列腺素氏结合的抗体或其片段的方法，所述方法包括用前列腺素 E2-甲状腺球蛋白免疫接种非人动物，收集包含抗前列腺素氏抗体的体液或器官，并且分离 抗前列腺素氏抗体的步骤。
91.一种包括抗原结合结构域的人源化抗体，所述人源化抗体能够结合前列腺素E2，所 述抗原结合结构域包括包含选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一个⑶R区。
92.一种包括抗原结合结构域的人源化抗体，所述人源化抗体能够结合前列腺素E2, 所述抗原结合结构域包括包含氨基酸序列的至少一个⑶R区，所述氨基酸序列与选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约 80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%或至少约98%同源。
全文摘要
本发明包括前列腺素E2(PGE2)结合蛋白。本发明涉及其为野生型、嵌合、CDR移植的和人源化的抗体。优选抗体对于前列腺素E2具有高亲和力，并且在体外和体内中和前列腺素E2活性。本发明的抗体可以是全长抗体或其抗原结合部分。还提供了制备方法和使用本发明的抗体的方法。本发明的抗体或抗原结合部分用于检测前列腺素E2且用于抑制前列腺素E2活性，例如在患有其中前列腺素E2活性是有害的病症的人受试者中。
文档编号A61K39/395GK102143760SQ200980134669
公开日2011年8月3日 申请日期2009年7月8日 优先权日2008年7月8日
发明者穆尔塔扎 A., W. 哈钦斯 C., 塔查 E., 贝朗格 E., 沈 J., C. 哈里斯 M., 朱 R-R., B. 斯泰恩 W., 谢仲明, 顾继杰 申请人:雅培制药有限公司
技术领域：
本发明涉及对脂质代谢产物例如前列腺素E2 (PGE2)特异的结合蛋白及其组合物， 例如抗体和抗原结合部分，以及制备、表征和在疾病预防、诊断和治疗中使用其的方法。
背景技术：
生物学活性脂质例如前列腺素(PG)、血栓烷(TX)、白三烯(LT)和1-磷酸-鞘氨醇在 各种病症的病因学中起关键生理学作用。(Wymann，MP和Schneiter R，Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 9 (2):162-76 (2008))。在炎症过程中，细胞磷脂酶特别是磷脂酶A2和C被 激活，并且使细胞膜磷脂降解为花生四烯酸(AA)。AA通过2个主要途径进行代谢一一环加 氧酶(COX)和脂肪加氧酶(LO)途径。COX途径产生前列腺素(POT2、PGE2、PGF2a、前列腺环素 或PGI2、和血栓烷A2或TXA2)。LO途径具有2个分支；5-L0途径产生白三烯(例如，LTA4、 LTB4、LTC4、LTD4、LTE4和LTF4)，并且15-L0途径产生脂氧素(例如，LXA4、LXB4)。前列腺 素类例如前列腺素(PG)、血栓烷(TX)和白三烯(LT)具有各种生理活性用于维持体内的局 部稳态(The Pharmacological Basis of Therapeutics, Gilman,等人编，第 7 版，第 660 页，Macmillan Publishing Co.，New York (1985))。COX 的产物 PG G2/ PG H2 通过组织 特异性异构酶的作用转换为特定PGs，以产生PGI2、TXA2, POT2、PGE2和PGF2a。Pk的生物 学功能通过组织特异性细胞表面视紫红质样7次跨膜G蛋白偶联受体(GPCRs)介导。每种 PG的精确生理学/病理学作用由细胞背景、受体表达谱、配体亲和力和与信号转导途径的 差别偶联决定(Haluska 等人，Annu. Rev. Pharm. Tox. 10213 (1989);Prostanoids and their Receptors. In Comprehensive Medicinal Chemistry,第 643 页，Pergamon Press, Oxford (1990))。P(is —般在vasomotricity调节、睡眠/清醒周期、肠分泌、脂解、肾小 球过滤、肥大细胞脱颗粒作用、神经传递、血小板聚集、leuteolysis、子宫肌层收缩和分娩、 炎症和关节炎、动脉导管开放、细胞生长和分化、和免疫应答调节中起广泛多样的生理学作 用。在病理生理学上，PGs已牵涉各种疾病，包括疼痛和炎症、癌症、神经学疾病、心血管疾 病和高血压。前列腺素氏斤6氏)是前列腺素类家族成员。PG&广泛参与胃肠道收缩和松弛、胃酸 分泌、平滑肌松弛和神经递质释放。已鉴定了关于PGE2的4种亚型受体，包括EP1、EP2、EP3 和 EP4 (Negishi，M.等人，J. Lipid Mediators Cell Signalling，12:379-391 (1995)), 其各自涉及不同的信号转导途径。PGE2是AA代谢的COX途径的主要产物。它是在关节中合成的主要PG，并且在关节 炎炎症和发病机理中起重要作用。已鉴定了 5种PG&合酶。(Smith札，Am. J. Physiol. 263 (2 Pt 2) :F181-91 (1992))。在这 5 种中，膜 PGE 合酶(mPGES)-1 看起来是负责 PGE2生产的关键PG&转换酶。相对于其他PGE合酶，MPGES-I显示出最高催化活性，并且与C0X-1 和/或C0X-2结合起作用，以将PGH2转换为PGE20使用mPGES-1 KO小鼠(Kamei，D.，等人， J. Biol. Chem.，279 (32) :33684-95 (2004) ;Trebino，C. Ε·，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100 (15):9044-9 (2003)、特异性 PGE2 受体同种型 KO 小鼠(McCoy，J. Μ.，等人 J. Clin. Invest.，110 (5) :651-8 (2002) ；Majima, Μ.，等人 Trends Pharmacol. Sci.， 24 (10) :524-9 (2003)；和 Amano，H.，等人，J. Exp. Med. , 197 (2) :221-32 (2003);和抗 PGE2 特异性抗体(Portanova，J. P.，等人，J. Exp. Med.，184 (3) :883-91 (1996) ；Zhang, Y.，等人，J. Pharmacol. Exp. Ther.，沘3 (3): 1069-75 (1997)的研究暗示 PGE2 在类风湿 性关节炎(RA)、疼痛和炎症以及癌症发展的动物模型中起主要作用。在不存在mPGES-Ι的 情况下，C0X-1、C0X-2和其他PGE2合酶的水平保持相对不变。与野生型小鼠比较，mPGES-1 KO小鼠是存活、能育且正常发育的。然而，它们显示出在PG&生产的基础水平中以及在用 各种免疫刺激攻击后来自巨噬细胞的PG&生产中的急剧减少。此外，TXA2的生产增加。 mPGES-1 KO小鼠显示关节炎发展的发生率和严重性减少，并且在各种模型中显示针对疼痛 和炎症的抗性。几个实验室已独立产生了各种EP受体同种型KO小鼠。这些小鼠是存活、 能育且正常发育的。使用特异性EP同种型KO小鼠的研究证实PGE2的各种功能经由特异性 EP同种型介导。例如，EP4同种型的缺乏明确影响小鼠中关节炎发展的严重性，而EP3的缺 乏通过调节经由基质细胞的VEGF生产和血管发生来影响肿瘤发展和进展。前列腺素生物合成和代谢中的缺陷目前被认为在自身免疫和炎性病症的病因学 中起重要作用。例如，与来自未受影响受试者的滑膜组织比较，来自患有类风湿性关节炎的 患者的滑膜组织产生更大量的PGE2和前列腺素F2a(PGF2a )(Blotman,F.，等人，Rev. Rhum. Mai. 0steoartic,46 (4) :243-7 (1979))。相似地，在显示出食物耐受不良继发的全身性 和胃肠道症状的患者中出现PGF2a的合成增加。因此，摄入特定食物继发的偏头痛 可以是2-系列前列腺素合成增加的结果。多发性硬化也与前列腺素PGE1和PGE2正常水平 中的不平衡相关。生殖的许多方面例如生殖力、妊娠和分娩可以通过前列腺素调节。前列 腺素还在生殖生理学中起主要作用。过量前列腺素合成促使痛经和生产，这可以通过静脉 内施用前列腺素或通过插入前列腺素阴道栓进行诱导。(Wang L.等人，Occup. Environ. Med. 61 (12) :1021-1026 (2004))。PG&的过量合成也在生殖病症中起主要作用，例如不 育、反复流产、先兆子痫和子痫。因此存在关于对于PG&特异性的抗体的需要，所述抗体阻 断或调节其生物学功能，可以用于预防和治疗与PGE2过量生产相关的疾病，以及诊断目的。高度特异性、高亲和力(Kd为约300pM)抗PGE2 mAb一一 2B5的产生已得到报道。 (Mnich SJ，等人 J. Immunol. 155 (9) :4437-44 (1995))。2B5 相对于吲哚美辛 C0X-1, 2 抑制剂的功效在小鼠中疼痛和炎症以及在大鼠中佐剂诱发性关节炎的动物模型中进行测 定。(Portanova JP 等人，J. Exp. Med. 184 (3) :883-91 (1996))。这些研究明确显示 2B5在减少疼痛和炎症以及关节炎严重性方面与吲哚美辛一样有效，暗示PGE2是这些动物 模型中AA代谢的C0X-1，2途径中的关键参与者。通过COX抑制剂抑制泛-PG生产已是数十年来充分确定的治疗策略。COX的2种 同种型C0X-1和C0X-2是已知的，其各自由不同基因编码。2种同种型执行基本上相同的 催化反应，并且具有相似的三级结构(Garavito RM，等人，Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 32:183-206 (2003))。C0X-1在几乎所有组织中组成性表达，并且被认为在很大程度上负责正常“看家”功能，例如胃细胞保护和稳态。相比之下，C0X-2在特定组织中组 成性表达，并且可在炎症和癌症部位高度诱导。因此，C0X-2介导的PG生产被认为在炎症 和癌症部位起重要作用。传统非类固醇消炎药(NSAIDs)例如阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬) 抑制2种COX同种型。这些化合物是对于疼痛、类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎(OA)和心 血管疾病最广泛使用的药物，并且目前考虑用于预防结肠癌和AD。传统NSAIDs的主要障碍 是在高危群体中的胃和肾不利事件，这被认为是由于C0X-1的抑制。因此，第二代NSAIDs， C0X-2选择性抑制剂(例如，塞来考昔，西乐葆；罗非昔布，万络；伐地考昔，Bextra)，被认为 具有更佳的治疗谱。这种假设已导致其广泛用于疼痛、RA和OA。自从在1999年批准第一 种C0X-2抑制剂后，在2004年C0X-2抑制剂的组合销售是约US $ 50亿。然而，近期某些 C0X-2选择性抑制剂撤出市场，并且处于FDA审查下，由于关于特定C0X-2抑制剂在高危患 者中的心血管副作用。与COX抑制剂相关的阻碍可能由于其抑制所有P(iS的能力而引起，并 且特别是由于其差别干扰PGI2和TXA2生产的能力而引起，所述PGI2和TXA2在维持心血管 稳态中起重要作用(Martinez-Gonzcilez J.等人，Curr. Pharm. Des. 13 (22):2215-2227 (2007))。COX抑制可能使得更多的AA对于LO途径可用，因此增加白三烯和脂氧素生产，这 可能促成COX抑制相关不利效应。使用C0X-1和/或C0X-2敲除小鼠以及C0X-1和C0X-2 特异性抑制剂的近期研究也暗示关于2种COX同种型的生理学作用的假设可能是不正确 的。(Loftin，C. D.，等人 Prostaglandins Other Lipid Mediat. 68-69:177—85 (2002))。 这些研究暗示C0X-1和C0X-2在供应PGs以维持组织稳态中都起重要作用，并且2种同种 型可能促成疾病发展，例如疼痛、炎症和癌症。因此，用特异性抗体阻断C0X-1和C0X-2途 径下游的有害PGE2看起来是用于治疗特定人疾病的有吸引力的方法。
重要生物学活性前列腺素的另一个例子是PGD2。PGD2是在免疫攻击后由肥大 细胞生产的花生四烯酸的主要环加氧酶产物(Lewis，等人，J. Immunol. 129:1627-1631 (1982))。活化肥大细胞，PGD2的主要来源，是在病状中驱动变应性应答中的关键参与物 (player)之一，所述病状例如哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎、变应性皮炎和其他疾病 (Brightling，等人，Clin. Exp. Allergy 33:550-556(2003))0 近期研究已显示 PGD2 通过 2种不同的G蛋白偶联受体(GPCRs)发挥其作用一一在各种人组织中表达的T辅助2型细胞 (CRTH2)上表达的D-前列腺素类受体(DP)和化学吸引剂受体-同源分子。PGD2/CRTH2系统 介导嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和Th2细胞的趋化性，这涉及变应性炎症的诱导(Ulven T 等人，Curr. Top. Med. Chem. 6 (13) :1427-1444 (2006))。PGD2 的许多作用通过其对 D型前列腺素(“DP”)受体的作用而介导，所述DP受体是在上皮和平滑肌上表达的G蛋白偶 联受体。在哮喘中，呼吸上皮长久以来已被认为是驱动疾病发展的炎性细胞因子和趋化因 子的关键来源(Holgate，等人，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 162:113-117 (2000))。 在哮喘的实验鼠模型中，DP受体在抗原攻击后在气道上皮上急剧上调(Matsuoka，等人， Science观7:2013-2017(2000))。DP受体涉及人变应性鼻炎，特征在于喷嚏、痒、rhinorea 和鼻充血症状的常见变应性疾病。DP拮抗剂已显示在减轻许多物种中的变应性鼻炎症 状中有效，并且更具体而言已显示抑制抗原诱导的鼻充血，变应性鼻炎中表现最多的症状 (Jones，等人，Am. J. Resp. Crit. Care Med. 167:A218 (2003) ;Arimura，等人，S-5751. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298 (2) :411-9 (2001))。DP 拮抗剂在变应性结膜炎和变应 性皮炎的实验模型中也是有效的(Arimura等人，S-5751. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298(2) :411-9 (2001) Jorisu，等人，Bioorg. & Med. Chem. 12:5361-5378 (2004))。因此 也存在关于对于PGD2特异性的抗体的需要，并且阻断或调节其生物学功能因此可以用于预 防和治疗与POT2过量生产相关的疾病。1-磷酸鞘氨醇(SlP)是诱导许多细胞效应的生物学活性脂质的另一个例子，包括 导致血小板聚集、细胞增殖、细胞形态、肿瘤细胞侵袭、内皮细胞趋化性和内皮细胞体外血 管发生的那些。SlP受体因此是用于治疗应用例如伤口愈合和肿瘤生长抑制的良好靶。SlP 部分经由命名为SlPl、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5 (以前分别被称为EDG-U EDG-5、EDG-3、 EDG-6和EDG-8)的一组G蛋白偶联受体给细胞发信号。这些受体与关于结构相关溶血磷脂 酸(LPA)的 3 种其他受体(LPA1、LPA2 和 LPA3(以前为 EDG_2、EDG_4 和 EDG-7))共享 50-55% 氨基酸和簇同一性。(Ishii，I.等人，Mol. Pharmacol. 58 (5) :895-902 (2000))。当配 体与那种受体结合时，在G蛋白偶联受体(GPCR)中诱导构象转变，促使在结合的G蛋白的 α-亚单位上的⑶P由GTP替换和G蛋白后续释放到细胞质内。α-亚单位随后与β Υ-亚 单位解离，并且每个亚单位随后可以与效应蛋白质结合，这激活第二信使，导致细胞应答。 最后，在G蛋白上的GTP水解为GDP，并且G蛋白的亚单位彼此再次结合，并且随后与受体再 次结合。扩增在一般GPCR途径中起主要作用。一种配体与一种受体的结合导致许多G蛋 白的活化，各自能够与许多效应蛋白质结合，导致扩增的细胞应答。SlP受体成为良好的药 物靶，因为个别受体是组织和应答特异性的。SlP受体的组织特异性是重要的，因为开发对 于一种受体选择性的激动剂或拮抗剂使细胞应答集中于包含那种受体的组织，限制不希望 有的副作用。SlP受体的应答特异性也是重要的，因为它允许开发起始或抑制特定细胞应答 而不影响其他应答的激动剂或拮抗剂。例如，SlP受体的应答特异性可以允许起始血小板 聚集而不影响细胞形态的SlP模拟物。SlP作为鞘氨醇的代谢产物在其与鞘氨醇激酶的反应中形成，并且大量贮存于血 小板聚集体中，其中存在高水平的鞘氨醇激酶且不存在鞘氨醇裂解酶。SlP在血小板聚集过 程中释放，在血清中累积，并且也在恶性腹水中发现。SlP生物降解最可能经由通过磷酸外 切水解酶(ectophosphohydrolases)水解而进行，特别是1_磷酸-鞘氨醇磷酸水解酶。因 此存在关于对于SlP特异性的抗体的需要，用于通过阻断其与受体的相互作用或稳定SlP 且增强其生物效应来调节其生物学功能，用于在预防或治疗自身免疫疾病、炎性疾病和癌 症中使用。由于PGE2在各种人病症中的作用，已设计了抑制或对抗PGE2活性的治疗策略。特 别地，适合于递送给人的治疗抗体仍未得到报道，所述治疗抗体与PGE2结合且中和PGE2。 本领域存在关于能够结合且中和PGE2的改良抗体的需要。发明概述
本发明涉及对脂质代谢产物例如前列腺素E2 (PGE2)特异的结合蛋白。本发明的PGE2 结合蛋白包括但不限于能够结合PGE2的抗体、抗原结合片段、和具有各种支架的抗原结合 片段。本发明的一个方面涉及能够结合PG&的结合蛋白。在一个实施方案中，本发明的 结合蛋白具有中和、稳定、拮抗和/或激动活性。在另一个实施方案中，结合蛋白能够调节 PGE2的生物学功能。例如，结合蛋白能够至少部分中和PGE2。在本发明的一个方面，结合蛋白能够结合PGE2，并且阻止？6氏与一种或更多种PGE2受体(例如，EP1、EP2、EP3和EP4)结合。在本发明的一个实施方案中，结合蛋白能够结 合PGE2,并且阻止PGE2与EP1、EP2、EP3和EP4受体结合。本发明提供了制备、表征且使用PGE2结合蛋白作为单一疗法或作为与其他治疗剂 的组合疗法的方法；以及在预防和/或治疗由PGE2介导的疾病中的方法，所述疾病例如自 身免疫和炎性疾病，例如类风湿性关节炎、Crohn氏病、骨关节炎、AMD、淋巴结病、溶血性贫 血、紫癜、强直性脊柱炎、多发性硬化、糖尿病、癌症、疼痛、骨丢失/恢复、atherosclelotic 病、生殖病症和其他疾病。本发明的结合蛋白还可以用于此种疾病的诊断中。在本发明的一个实施方案中，结合蛋白是结合PGE2的分离的抗体或其抗原结合片 段。此种结合可以在基于生物素化PG& WELISA测定中加以证实，其中EC5tl选自约1χ10_6 -约 1χ1(Γ7 Μ、约 lxl(T7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 10, Μ、约 1x10, -约1Χ10_" Μ、和约10_"-约10_12Μ。在另一个实施方案中，结合蛋白与PG&的结合在基 于3H标记的PGE2的放射免疫测定中加以证实，其中Kd选自约lxlO—6 -约lxlO—7 Μ、约lxlO—7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 1(T1QM、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 10_"-约10_12。在另一个实施方案中，结合蛋白与结合在FLIPR中加以证实，其中 通过其受体ΕΡ4介导的导的钙流入通过结合蛋白与PGE2的结合加以抑制，其中IC5tl 选自约 1χ1(Γ6 -约 1χ1(Γ7 Μ、约 1x10"-约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 10, Μ、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 1(Γ"-约 1(Γ12。在一个实施方案中，在基于FACS的受体结合测定中，抗体抑制生物素化PGE2与细 胞表面上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受体结合，或在基于ELISA的受体结合测定中，抗体抑 制生物素化PGE2与使用受体表达细胞制备的膜制剂上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受体结 合，其中 IC5tl 为约 1χ1(Γ6 -约 1x10" Μ、约 1χ1(Γ7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、 约 10_9 -约 10_10Μ、约 IxlO"10 -约 IxlO"11 M 和约 10—11 -约 10_12，或在基于 3H PGE2 的放 射免疫测定中，抗体抑制3H- PGE2与细胞表面或膜制剂上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受体 结合，其中 IC50 为约 IxlO"6 -约 1x10" Μ、约 1x10"-约 IxlO"8 Μ、约 IxlO"8 -约 IxlO"9 Μ、约 1(Γ9 -约 10, Μ、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 1(Γ"-约 1(Γ12，和 / 或在 ΕΡ4 介导 的FLIPR测定中，抗体抑制PGE2诱导的钙流入，其中IC5。为1x10—6 -约1χ10_7 Μ、约lxlO-7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 1(T1QM、约 1x10,-约 1χ1(Γ" M 和约 10_"-约10_12。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合PGE2,并且在基于细胞表面 的受体结合测定中，或在基于放射免疫测定的受体结合测定中，在100 ηΜ的浓度下使PGE2 与其受体中的至少一种的结合抑制约70-100%。在一个实施方案中，抗体是19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、LlU L21、2B5_7. 0、 2B5-8. 0或2B5-9. 0或其变体。在一个实施方案中，变体是人源化变体，例如Hu2B5. Pl或 Hu2B5. P2。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2,并且在 角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪水肿模型中，使爪水肿抑制约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70^^80^^90%或100%。在一个特定实施方案中，在角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪 水肿模型中，抗体使爪水肿抑制超过约10%。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2，并且 在啮齿类动物胶原诱导的关节炎模型中，使爪肿胀或平均关节炎得分抑制约10 %、20 %、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在一个特定实施方案中，在啮齿类动物胶 原诱导的关节炎模型中，抗体使爪肿胀或平均关节炎得分抑制超过10%。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2,并且在 角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪水肿模型中，使爪水肿抑制约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70^^80^^90%或100%。在一个特定实施方案中，在角叉菜胶诱导的啮齿类动物爪 水肿模型中，抗体使爪水肿抑制超过约10%。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE2，并且 在啮齿类动物胶原诱导的关节炎模型中，使爪肿胀或平均关节炎得分抑制约10 %、20 %、 30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或100 %。在一个特定实施方案中，在啮齿类动物胶 原诱导的关节炎模型中，抗体使爪肿胀或平均关节炎得分抑制超过10%。在另一个实施方案中，如通过放射免疫测定测量的，本发明的结合蛋白对于PGE2 具有至多约KT3s-1 ；至多约IO-4s-1 ；至多约IO-5s-1 ；或至多约IO-fV1的解离速率(off rate) 常数(k。ff)。优选地，如通过放射免疫测定测量的，本发明的结合蛋白对于PG&具有约ΙΟ、—1 -约ΙΟ、-1 ；约ΙΟ-、-1 -约ΙΟ、-1 ；或约ΙΟ、-1 -约ΙΟΥ1的解离速率常数(k。ff)。在另一个实施方案中，通过放射免疫测定测定的，本发明的结合蛋白对于？6氏具 有至多约1(Γ6 M ；至多约1(Γ7 M ；至多约1(Γ8 M ；至多约1(Γ9 M ；至多约10, M ；至多约10_" Μ;至多约10_12 Μ;或至多10_13Μ的解离常数(KD)。优选地，本发明的结合蛋白对于？6氏具 有约 10" M -约 1(Γ8 M ；约 1(Γ8 M -约 1(Γ9 M ；约 1(Γ9 M -约 1(T1Q M ；约 10,-约 1(Γ" M;约10—11 M -约10_12 M;或约10_12 - M约10_13 M的解离常数(KD)。本发明的一个方面提 供了针对本发明的至少一种PGE2结合蛋白的至少一种PGE2抗独特型抗体。抗独特型抗体 包括包含分子的任何蛋白质或肽，所述分子包括免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不 限于重或轻链或其配体结合部分的至少一个互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或 轻链恒定区、构架区，或；其任何部分，其可以掺入本发明的结合蛋白内。在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合前列腺素 E2，并且在基于细胞表面的受体结合测定中，其中IC5tl选自约lxl0_6 - IxlO-7 MUxlO-7 -IxlO"8 MUxlO"8 - IxlO"9 MUO"9 - IO-10MUxIO"10 - IxlO"11 M 和 1(Γ" - 1(Γ12Μ，或在基于 ELISA 的受体结合测定中，其中 IC5。选自约 1χ1(Γ6 - IxlO"7 MUxlO"7 - IxlO"8 MUxlO"8 -IxlO"9 MUO"9 - 1(Γ10Μ、1χ1(Γ10 - IxlO"11 M 禾口 1(Γ" - 1(Γ12 Μ，抑制前列腺素 E2 与 El、Ε2、 E3和E4受体中的至少一种结合。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合前列腺素&，并且在基于细胞 表面的受体结合测定中或在基于3H-PGE2的放射免疫测定中，使用表达El、E2、E3和E4受 体中的至少一种的细胞，或表达E1、E2、E3和E4受体中的至少一种的细胞膜制剂，在约100 nM的浓度下使前列腺素E2与El、E2、E3和E4受体中的至少一种的结合抑制约70-100%。 在一个实施方案中，抗体选自 19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、Lll、L21、2B5_7. 0、2B5_8. 0 和2B5-9.0。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段能够调节前列腺素氏的生物学功 能，例如中和前列腺素E2。抗体或其抗原结合片段选自免疫球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合 抗体、CDR移植的抗体、人源化抗体、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、二硫化物连接的Fv、scFv、单 结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双特异性抗体。在一个实施方案中， 抗体或其抗原结合片段是人源化抗体。在另一个实施方案中，抗体选自Hu2B5.Pl和Hu2B5.P20本发明还提供了药物组合物，其包括抗体或其抗原结合片段、和药学可接受的载体。在 一个实施方案中，药物组合物进一步包括至少一种另外治疗剂用于治疗其中前列腺素E2活 性是有害的病症。在另一个方面，本发明提供了生成与前列腺素氏结合的抗体或其片段的方法，其 包括用前列腺素甲状腺球蛋白免疫接种非人动物，收集包含抗前列腺素氏抗体的体液 或器官，并且分离抗前列腺素E2抗体的步骤。在另一个方面，本发明提供了包括抗原结合结构域的人源化抗体，能够结合前列 腺素E2,包括包含选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一个⑶R区。在另一个实施 方案中，本发明提供了包括抗原结合结构域的人源化抗体，所述抗原结合结构域包括包含 氨基酸序列的至少一个⑶R区，所述氨基酸序列与选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列至 少约60 %、至少约65 %、至少约70 %、至少约75 %、至少约80 %、至少约85 %、至少约90 %、 至少约95%或至少约98%同源。在一个实施方案中，人源化抗体包括选自SEQ ID NOs 78、 79、80和81的氨基酸序列。在一个方面，本发明的结合蛋白能够结合PGE2，所述抗 原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个CDR 在另一个实施方案中，本发明提供了包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段， 所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个⑶R :SEQ ID NOs :6、7、8、 10、11、12、14、15、16、18、19、20、22、23、26、27、28、30、31、32、34、35、37、38 和 39。在另一个 实施方案中，结合蛋白或其片段包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括包含选自 下述的氨基酸序列的至少一个VH区SEQ ID NOs :5、13、21、25、33、40、42和44。在另外一 个实施方案中，结合蛋白或其片段包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括包含选 自下述的氨基酸序列的至少一个VL区SEQ ID NOs :9、17、M、29、36、41、43和45。在另外 一个实施方案中，结合蛋白或其片段包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括包含 选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一个⑶R区。在一个实施方案中，结合蛋白包括例如选自VH⑶R组的至少3个⑶Rs，所述VH CDR组选自 SEQ ID NOs :6、7禾口 8 ；SEQ ID NOs :14、15和 16 ；SEQ ID NOs :14、22和 23、SEQ ID N0s:26、27 和 28 和 32 ；SEQ ID N0s:26、34 和 35 ；禾口 SEQ ID N0s:54、55 和 56。在另 一个实施方案中，所述至少3个⑶Rs选自VL⑶R组，所述VL⑶R组选自SEQ ID NOs 10、 11 禾口 12 ；SEQ ID NOs :17、18 禾口 19 ；SEQ ID NOs :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NOs :37、38 禾口 39 ； SEQ ID N0s:42、43和44 ；和SEQ ID N0s:57、58和59。在另外一个实施方案中，所述至少 3个⑶Rs包括具有SEQ ID NOs :54、55和56的氨基酸序列的VH⑶R组，和/或具有SEQ ID NOs 57,58和59的氨基酸序列的VL CDR组。在另一个实施方案中，结合蛋白包括至少2个可变结构域⑶R组，例如选自SEQ ID N0s:6、7、8 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs 14、15、16 和 SEQ ID NOs :18,19,20 ；SEQ ID NOs :14、22、23 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs :26、27、28 和 SEQ ID NOs 30、31、32;和 SEQ ID NOs :26、34、35 和 SEQ ID NOs :37、38、39。在另一个实施方案中，本发明的结合蛋白包括具有选自下述的氨基酸序列的2个 可变结构域:SEQ ID NO:5禾口 SEQ ID N0:9 ；SEQ ID NO: 13禾口 SEQ ID NO: 17 ；SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:24 ；SEQ ID N0:25 禾口 SEQ ID NO:29 ；SEQ ID N0:33 禾口 SEQ ID N0:36 ；SEQ ID N0:40和 SEQ ID N0:41 ；SEQ ID N0:42和 SEQ ID N0:43 ；和 SEQ ID N0:44和 SEQ ID N0:45。在另一个实施方案中，所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID N0:60禾口 SEQ ID N0:61 ；SEQ ID N0:62禾口 SEQ ID NO:63 ；SEQ ID N0:64禾口 SEQ ID N0:65 ； SEQ ID N0:66和 SEQ ID N0:67 ；SEQ ID N0:68和 SEQ ID N0:69 ；SEQ ID N0:70和 SEQ ID N0:71 ；SEQ ID N0:72和 SEQ ID N0:73 ；SEQ ID N0:74和 SEQ ID N0:75 ；和 SEQ ID N0:76 和SEQ ID N0:77。在另一个实施方案中，所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列 SEQ ID N0:78 和 SEQ ID N0:79;和 SEQ ID N0:80 和 SEQ ID N0:81。在另一个方面，本发明提供了与前列腺素氏结合的人源化抗体或其片段，所述人 源化抗体包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个VH区SEQ ID NOs :60、62、64、66、 68、70、72、74、76、78和80。在另一个实施方案中，人源化抗体或其片段包括包含选自下述 的氨基酸序列的至少一个 VL 区SEQ ID NOs 61 63、65、67、69、71、73、75、77、79 和 81。在 另外一个实施方案中，所述至少一个VH区或至少一个VL区包括包含至少一个氨基酸置换 的人受体构架序列，其中所述构架序列的氨基酸序列与人受体构架序列的序列至少65%相 同。例如，人受体构架可以包括在关键残基上的至少一个构架氨基酸置换，所述关键残基 选自与CDR相邻的残基、糖基化位点残基、罕见残基、能够与前列腺素&相互作用的残基、 能够与CDR相互作用的残基、典型残基、在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基、在 Vernier区内的残基、和在Chothia限定的可变重链⑶Rl和Kabat限定的第一个重链构架 之间重叠的区域中的残基。在另一个实施方案中，结合蛋白进一步包括人受体构架。在本发明的一个实施方案中，人重链和轻链受体序列选自表7和表8中所述的序 列(实施例4. 2. 1)。其他人重链和轻链受体序列是本领域众所周知的，并且适合于与本发明 一起使用。在一个实施方案中，结合蛋白是能够结合PGE2的CDR移植的抗体或其抗原结合 部分。在另一个实施方案中，结合蛋白是能够结合PGE2的人源化抗体或其抗原结合部分。 在一个实施方案中，CDR移植的抗体或人源化抗体或其抗原结合部分包括此处公开的一个 或更多个CDRs，例如3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、或6个或更多个CDRs。在 另一个实施方案中，CDR移植的抗体或人源化抗体或其抗原结合部分包括人受体构架。所 述人受体构架可以是人免疫球蛋白的任何受体构架。在一个特定实施方案中，人受体构架 是此处公开的人受体构架中的任何一个。在一个实施方案中，将CDRs掺入人受体构架的 人抗体可变结构域内。在一个实施方案中，人抗体可变结构域是共有人可变结构域。在另 一个实施方案中，人受体构架包括在关键残基上的至少一个构架区氨基酸置换，其中所述 关键残基选自与CDR相邻的残基；糖基化位点残基；罕见残基；能够与PGE2相互作用的残 基；能够与CDR相互作用的残基；典型残基；在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基； 在Vernier区内的残基；和在Chothia限定的可变重链⑶Rl和Kabat限定的第一个重链 构架之间重叠的区域中的残基。在一个实施方案中，人受体构架人受体构架包括至少一个构架区氨基酸置换，其中所述构架的氨基酸序列与所述人受体构架的序列至少65%相同， 并且包括与所述人受体构架相同的至少70个氨基酸残基。在一个实施方案中，在关键残基 上的构架区氨基酸置换选自在重链可变区中在位置48上的M (人)至I (小鼠)、在位置68 上的V (人)至A (小鼠)、在位置70上的M (人)至L (小鼠)、和在位置72上的T (人)至V (小鼠)；以及在轻链可变区中在位置2上的I (人)至V (小鼠)、和在位置3上的V (人)至 L (小鼠)。在另一个方面，本发明提供了包括结合蛋白中的任何一种和接头多肽和/或免疫 球蛋白恒定结构域的抗体构建体。在一个实施方案中，抗体构建体选自免疫球蛋白分子、单 克隆抗体、嵌合抗体、⑶R移植的抗体、人源化抗体、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、二硫化物连接 的Fv、SCFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双特异性抗体。在一 个实施方案中，抗体构建体包括选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域人IgM恒定结构 域、人IgGl恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人 IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域。在一个实施方案中，抗体构建体包括具有选自下述 的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定结构域=SEQ ID NO. :1 ；SEQ ID NO. :2 ；SEQ ID NO. :3 ；SEQ ID NO. :4 ；和 SEQ ID NO. :5。在另一个实施方案中，本发明提供了包括抗PGE2抗体构建体和选自下述的试剂 的抗PGE2抗体缀合物免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒性剂。在一个实施方案中， 所述试剂是选自下述的显像剂放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性 标记和生物素。在另一个实施方案中，显像剂是例如选自下述的放射性标记3H、14C、35S、9°Y、 99TC、mIn、125I、131I、mLU、166H0和153Sm。在另一个实施方案中，所述试剂是选自下述的治疗 或细胞毒性剂抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂 剂、蒽环类、毒素和细胞凋亡剂。在另一个实施方案中，结合蛋白是糖基化的。在一个特定实施方案中，PGE2结合 蛋白具有人糖基化模式。在另一个实施方案中，PGE2结合蛋白、抗体构建体或抗体缀合物是结晶的(例如， 作为晶体存在)。在一个实施方案中，晶体是无载体的药学控释晶体。在另一个实施方案中， 结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物具有比其可溶性对应物更长的体内半衰 期。在另一个实施方案中，结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物在结晶化后保 留生物学活性。本发明的一个方面涉及包括能够PGE2的结合蛋白的DVD结合蛋白。优选地， DVD结合蛋白能够结合2个PGE2结合位点或结合PGE2和第二种靶。第二种靶选自
CSFI (MCSf C'SF2(GM-CSF), CSB lGCSFi, FGFZ tl-N I, IFNpL IFNy.组胺和组胺受体权利要求
1.一种包括抗原结合结构域的CDR移植的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合 PGE2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个CDR GYTFT'KYWl,G (SHQ ID NO: Μι. DIYPGYDYTHYNEKFKD {SEQ ID NO; 55).SDGSSTY <SE0 ID NO 56), TSSONtVHSKCNTYLF (SEQ ID NO: 57),KVSNRFSG (SEQ ID、0: 5X). FQVSHVPVT (SEQ 1L> NO: 59>。
2.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够调节前列腺素E2的生物学 功能。
3.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够中和前列腺素E2。
4.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够阻止前列腺素E2与前列腺 素氏受体EPl的结合。
5.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段能够阻止前列腺素E2与选自 EP1、EP2、EP3和EP4的至少一种前列腺素&受体的结合。
6.权利要求1的结合蛋白，其中使用ELISA测定，所述结合蛋白或其片段以选自下述 的 EC5tl 结合前列腺素 E2 约 IxlO-6 -约 1x10" M、约 1x10"-约 1χ1(Γ8 M、约 1χ1(Γ8 -约 IxlO"9 M、约 1(Γ9 -约 1(T1Q Μ、约 lxl(T1Q -约 1χ1(Γ" M、和约 1(Γ"-约 1(Γ12 Μ。
7.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段在ΕΡ4受体介导的FLira测定 中抑制通过前列腺素E2与前列腺素E2受体ΕΡ4诱导的钙流入，其中IC5tl选自约1χ10_6 -约 IxlO-7 Μ、约 1χ1(Γ7 -约 1χ1(Γ8 Μ、约 lxl(T8 -约 1χ1(Γ9 Μ、约 1(Γ9 -约 1(T1CI Μ、约 1x10, -约 1χ1(Γ" M 和约 1(Γ"-约 1(Γ12 Μ。
8.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白或其片段已经亲和力成熟。
9.一种包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前列腺素 E2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个⑶R :SEQ ID NO:ft. s, IiK I t 12, 14, 15 16. W. R 0. 21 23. 26. 2λ S. —W, . ’’:. }4. 35, . W. 54. 5.x5S. U 59。
10.一种包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前列腺素 E2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个VH区SEQ NOs :5、 13、21、25、33、40、42 和 44。
11.一种包括抗原结合结构域的结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前列腺素 E2，所述抗原结合结构域包括包含选自下述的氨基酸序列的至少一个VL区SEQ ID NOs :9、 17、24、29、36、41、43 和 45。
12.一种包括抗原结合结构域的人源化结合蛋白或其片段，所述结合蛋白能够结合前 列腺素E2,所述抗原结合结构域包括包含选自SEQ ID N0s:M-59的氨基酸序列的至少一个 CDR 区。
13.权利要求9的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括至少3个⑶Rs。
14.权利要求13的结合蛋白，其中所述至少3个⑶Rs选自VH⑶R组，所述VH⑶R组 选自 SEQ ID N0s:6、7 禾口 8 ;SEQ ID NOs: 14、15 和 16 ;SEQ ID N0s:14、22 和 23、SEQ ID NOs :26,27 和 28 ；SEQ ID NOs :26、34 和 35 ；禾口 SEQ ID NOs :54、55 和 56。
15.权利要求13的结合蛋白，其中所述至少3个⑶Rs选自VL⑶R组，所述VL⑶R组 选自 SEQ ID NOs 10,11 和 12 ；SEQ ID NOs :18、19 禾口 20 ；SEQ ID NOs :30、31 和 32 ；SEQ ID NOs 37,38 和 39 ；SEQ ID NOs :57、58、59。
16.权利要求13的结合蛋白，其中所述至少3个⑶Rs包括具有SEQID N0s:54、55和 56的氨基酸序列的VH⑶R组，和/或具有SEQ ID NOs :57、58和59的氨基酸序列的VL CDR 组。
17.权利要求9的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括至少2个可变结构域⑶R组。
18.权利要求17的结合蛋白，其中所述至少2个可变结构域⑶R组选自SEQID NOs 6、7、8 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs 14、15、16 和 SEQ ID NOs :18,19,20 ；SEQ ID NOs :14、22、23 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ；SEQ ID NOs :26、27、28 和 SEQ ID NOs :30、31、32 ； SEQ ID NOs :26、34、35 和 SEQ ID NOs :37、38、39 ；和 SEQ ID NOs :54、55、56 和 SEQ ID NOs 57、58、59。
19.一种与前列腺素氏结合的人源化抗体或其片段，所述人源化抗体包括包含选自下 述的氨基酸序列的至少一个 VH 区=SEQ ID NOs :60、62、64、66、68、70、72、74、76、78 和 80。
20.一种与前列腺素氏结合的人源化抗体或其片段，所述人源化抗体包括包含选自下 述的氨基酸序列的至少一个 VL 区=SEQ ID NOs :61、63、65、67、69、71、73、75、77、79 和 81。
21.根据权利要求1的结合蛋白，其进一步包括人受体构架。
22.根据权利要求21的结合蛋白，其中所述人受体构架包括选自下述的至少一个氨基 酸序列=SEQ ID NOs :46、47、48、49、50、51、52 和 53。
23.权利要求21或22的人源化抗体，其中所述人受体构架包括选自下述的至少一个构 架区氨基酸置换在所述重链可变区中在位置48上的M (人)至I (小鼠)、在位置68上的 V (人)至A (小鼠)、在位置70上的M (人)至L (小鼠)、和在位置72上的T (人)至V (小 鼠);和在所述轻链可变区中在位置2上的I (人)至V (小鼠)、和在位置3上的V (人)至L (小鼠)。
24.权利要求19或20的人源化抗体，其中所述至少一个VH区或至少一个VL区包括包 含至少一个氨基酸置换的人受体构架序列，其中所述构架序列的氨基酸序列与所述人受体 构架 序列的序列至少65%相同。
25.权利要求23的人源化抗体，其中所述人受体构架包括在关键残基上的至少一个构 架氨基酸置换，所述关键残基选自与CDR相邻的残基、糖基化位点残基、罕见残基、能够与 前列腺素&相互作用的残基、能够与CDR相互作用的残基、典型残基、在重链可变区和轻 链可变区之间的接触残基、在Vernier区内的残基、和在Chothia限定的可变重链⑶Rl和 Kabat限定的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
26.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括2个可变结构域，其中所述2个可 变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID N0:5和SEQ ID NO:9 ；SEQ ID N0:13和SEQ ID NO: 17 ；SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO:24 ；SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 29 ；SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:36 ；SEQ ID N0:40 禾口 SEQ ID N0:41 ；SEQ ID N0:42 禾口 SEQ ID N0:43;禾口 SEQ ID N0:44 和 SEQ ID N0:45。
27.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括2个可变结构域，其中所述2个可 变结构域具有选自下述的氨基酸序列:SEQ ID N0:60和SEQ ID N0:61 ；SEQ ID N0:62禾口SEQID NO:63 ；SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO65 ；SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO67 ；SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:69 ；SEQ ID NO: 70 和 SEQ ID NO: 71 ；SEQ ID NO: 72 和 SEQ ID NO: 73 ；SEQ ID NO:74 和 SEQ ID NO:75 ；SEQ ID NO:76 和 SEQ ID NO:77 ；SEQ ID NO:78 和 SEQ ID NO:79 ； 和 SEQ ID N0:800 和 SEQ ID N0:81。
28.—种包括权利要求1的结合蛋白的抗体构建体，所述抗体构建体进一步包括接头 多肽或免疫球蛋白恒定结构域。
29.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子、二硫化物连接的 Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植的抗体、双抗体、人源化抗体、多特 异性抗体、Fab、双重特异性抗体、Fab，、双特异性抗体、F (ab，)2*Fv。
30.权利要求观的抗体构建体，其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子、二硫化物连 接的Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植的抗体、双抗体、人源化抗 体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、Fab，、双特异性抗体、F (ab，)2*Fv。
31.权利要求观的抗体构建体，其中所述结合蛋白包括选自下述的重链免疫球蛋白恒 定结构域人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgGl恒定结构域、人IgE恒定结构 域、人IgG2恒定结构域、和人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
32.权利要求观的抗体构建体，其中所述构建体包括具有选自SEQID NOs 1_4的氨基 酸序列的免疫球蛋白恒定结构域。
33.权利要求观的抗体构建体，其中所述结合蛋白具有人糖基化模式。
34.权利要求观的抗体构建体，其中所述抗体构建体是结晶抗体构建体。
35.权利要求33的抗体构建体，其中所述结晶抗体构建体是无载体的药学控释结晶抗 体构建体。
36.权利要求34的抗体构建体，其中所述抗体构建体具有比所述抗体构建体的可溶性 对应物更长的体内半衰期。
37.权利要求34的抗体构建体，其中所述抗体构建体保留生物学活性。
38.一种包括权利要求观的抗体构建体的抗体缀合物，所述抗体缀合物进一步包括选 自下述的试剂免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒性剂。
39.权利要求37的抗体缀合物，其中所述试剂是选自放射性标记、酶、荧光标记、发光 标记、生物发光标记、磁性标记和生物素的显像剂。
40.权利要求37的抗体缀合物，其中所述显像剂是选自下述的放射性标记3H、14C、35S、 90Y、99TC、mh、125I、131I、177Lu、166HO 和 153Sm0
41.权利要求37的抗体缀合物，其中所述试剂是选自下述的治疗或细胞毒性剂抗代 谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素和 细胞凋亡剂。
42.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白是结晶结合蛋白。
43.权利要求41的结合蛋白，其中所述结晶结合蛋白是无载体的药学控释结晶抗体。
44.一种分离的核酸，其编码权利要求1的结合蛋白。
45.一种分离的核酸，其编码权利要求观的抗体构建体。
46.一种载体，其包括根据权利要求43或44的分离的核酸。
47.权利要求45的载体，其中所述载体选自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pBJ禾口 pA2。
48.一种宿主细胞，其包括权利要求45的载体。
49.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
50.权利要求48的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
51.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
52.权利要求50的宿主细胞，其中所述真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞、植物细 胞和真菌细胞。
53.权利要求50的宿主细胞，其中所述真核细胞是选自哺乳动物细胞、禽类细胞和昆 虫细胞的动物细胞。
54.权利要求50的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
55.权利要求50的宿主细胞，其中所述宿主细胞是COS或HEK293。
56.权利要求50的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞。
57.权利要求55的宿主细胞，其中所述酵母细胞是酿酒酵母。
58.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是昆虫Sf9细胞。
59.一种生产能够结合前列腺素氏的蛋白质的方法，所述方法包括在足以生产能够结 合前列腺素氏的结合蛋白的条件下，在培养基中培养权利要求47的宿主细胞的步骤。
60.一种蛋白质，其根据权利要求58的方法生产。
61.一种用于释放结合蛋白的组合物，所述组合物包括(a)制剂，其中所述制剂包括根据权利要求41的结晶结合蛋白，(b)成分；和(c)至少一种聚合载体。
62.权利要求60的组合物，其中所述聚合载体是选自下述的聚合物聚丙烯酸、聚氰基 丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚羧酚酸肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟 基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚(羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、 聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、Pluronic多元醇、白 蛋白、藻酸酯、纤维素和纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫 酸化多糖、及其掺合物和/或共聚物。
63.权利要求60的组合物，其中所述成分选自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟 丙基-β -环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
64.一种用于治疗具有其中前列腺素&活性是有害的病症的哺乳动物的方法，所述方 法包括给所述哺乳动物施用有效量的权利要求60的组合物的步骤。
65.一种药物组合物，其包括权利要求1的结合蛋白和药学可接受的载体。
66.权利要求65的药物组合物，其中所述药学可接受的载体充当用于增加所述结合蛋 白吸收或分散的佐剂。
67.权利要求64的药物组合物，其中所述佐剂是透明质酸酶。
68.权利要求64的药物组合物，其进一步包括用于治疗其中前列腺素氏活性是有害的 病症的至少一种另外的治疗试剂。
69.权利要求67的药物组合物，其中所述另外的试剂选自治疗剂，显像剂、细胞毒性 剂、血管发生抑制剂、激酶抑制剂、共刺激分子阻断剂、粘附分子阻断剂、抗细胞因子抗体或其功能片段、氨甲蝶呤、环孢菌素、雷帕霉素、冊506、可检测标记或报道分子、TNF拮抗剂、抗 风湿剂、肌肉弛缓剂、麻醉药、非类固醇消炎药(NSAID)、止痛剂、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉 剂、神经肌肉阻断剂、抗微生物剂、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白质合成类固醇、促红细 胞生成素、免疫接种、免疫球蛋白、免疫抑制剂、生长激素、激素替代药物、放射性药物、抗抑 郁药、抗精神病药、刺激剂、哮喘药物治疗、β激动剂、吸入类固醇、经口类固醇、肾上腺素或 其类似物、细胞因子、和细胞因子拮抗剂。
70.一种用于减少前列腺素E2活性的方法，所述方法包括使前列腺素E2与权利要求1 的结合蛋白接触的步骤，从而使得前列腺素氏活性被减少。
71.一种用于减少患有其中前列腺素E2活性是有害的病症的人受试者中的前列腺素 E2活性的方法，所述方法包括给所述人受试者施用权利要求1的结合蛋白的步骤，从而使得 所述人受试者中的前列腺素氏活性被减少。
72.一种用于就其中前列腺素氏活性是有害的至少一种疾病或病症治疗受试者的方 法，所述方法包括给所述受试者施用权利要求1的结合蛋白的步骤，从而使得达到治疗。
73.权利要求71的方法，其中所述病症选自自身免疫疾病、炎性疾病、肿瘤、类风湿性 关节炎、变应性关节炎、格-巴二氏综合征、传染性单核细胞增多症、病毒性淋巴结病、疱疹 病毒感染、多发性硬化、脱髓鞘疾病、血液学病症、溶血性贫血、血小板减少症、内分泌学病 症、糖尿病、Addison氏病、特发性甲状旁腺机能减退、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、胶原病症、 全身性红斑狼疮、生殖病症、闭经、不育、复发性流产、子痫、头颈肿瘤、肺癌、胃癌、前列腺 癌、胰腺癌、胃肠器官疾病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、Crohn氏病、疼痛、与骨关节炎相关的 疼痛、眼病症和年龄相关黄斑变性。
74.权利要求71的方法，其中所述病症选自类风湿性关节炎、骨关节炎、青少年慢性关 节炎、脓毒性关节炎、莱姆关节炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、全身性红 斑狼疮、Crohn氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、甲状腺炎、哮喘、变应 性疾病、牛皮癣、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、与器官移植相关的急性或慢 性免疫性疾病、肉状瘤病、动脉粥样硬化、弥散性血管内凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、 肾病综合征、慢性疲乏综合征、韦格纳氏肉芽肿病、过敏性紫癜、肾显微血管炎、慢性活动性 肝炎、葡萄膜炎、脓毒性休克、中毒性休克综合征、脓毒病综合征、恶病质、传染病、寄生虫 病、获得性免疫缺陷综合征、急性横贯性脊髓炎、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏病、阿尔茨海默 氏病、中风、原发性胆汁性肝硬变、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏 病、散发性多腺性I型缺陷和多腺性II型缺陷、Schmidt氏综合征、成人(急性)呼吸窘迫 综合征、秃头、斑秃、血清反应阴性关节病、关节病、Reiter氏病、牛皮癣性关节病、溃疡性 结肠炎性关节病、肠病性滑膜炎、衣原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌相关性关节病、脊椎关节 病、动脉粥样化疾病/动脉硬化、特应性变态反应、自身免疫性大疱性疾病、寻常天疱疮、落 叶状天疱疮、类天疱疮、线性IgA疾病、自身免疫性溶血性贫血、Coombs阳性溶血性贫血、 获得性恶性贫血、青少年性恶性贫血、肌痛脑炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮肤念珠菌 病、巨细胞性动脉炎、原发性硬化性肝炎、隐原性自身免疫性肝炎、获得性免疫缺陷病综合 征、获得性免疫缺陷相关病、乙型肝炎、丙型肝炎、常见的各种免疫缺陷(常见的可变低丙种 球蛋白血症)、扩张型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、过早卵巢衰竭、纤维化肺疾病、隐原性纤 维化肺泡炎、炎症后间质性肺病、间质性肺炎、结缔组织病相关性间质性肺病、混合型结缔组织病相关性肺病、全身性硬皮病相关性间质性肺病、类风湿性关节炎相关性间质性肺病、 全身性红斑狼疮相关性肺病、皮肌炎/多肌炎相关性肺病、Sj5gren氏病相关性肺病、强直 性脊柱炎相关性肺病、脉管炎性弥散性肺病、含铁血黄素沉着病相关性肺病、药物诱导的间 质性肺病、纤维化、放射性纤维化、闭塞性细支气管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴细胞性浸润性 肺病、传染后间质性肺病、痛风性关节炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎(传统自身 免疫性或狼疮样肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗体肝炎)、自身免疫介导的低血糖、 具有黑棘皮症的B型胰岛素耐受性、甲状旁腺机能减退、与器官移植相关的急性免疫性疾 病、与器官移植相关的慢性免疫性疾病、骨关节病、原发性硬化性胆管炎、1型牛皮癣、2型 牛皮癣、特发性白细胞减少、自身免疫性嗜中性白细胞减少症、肾脏病N0S、肾小球肾炎、肾 显微血管炎、莱姆病、盘状红斑狼疮、特发性男性不育症或N0S、精子自身免疫性、多发性硬 化(所有亚型)、交感性眼炎、结缔组织病继发的肺动脉高压、Goodpasture氏综合征、结节 性多动脉炎的肺表现、急性风湿热、类风湿性脊椎炎、Still氏病、全身性硬皮病、SjSrgren 氏综合征、Takayasu氏病/动脉炎、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少症、自身 免疫性甲状腺病、甲状腺机能亢进、甲状腺肿性自身免疫性甲状腺功能减退(Hashimoto氏 病)、萎缩性自身免疫性甲状腺功能减退、原发性粘液性水肿、晶状体性葡萄膜炎、原发性血 管炎、白癜风急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬变、酒精诱导的肝损伤、胆汁郁积、特应性肝 病、药物诱导的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、变态反应和哮喘、B群链球菌(GBS)感染、精神 障碍(例如，抑郁和精神分裂症)、Th2型和Thl型介导的疾病、急性和慢性痛(不同形式的 疼痛)、以及癌症例如肺、乳腺、胃、膀胱、结肠、胰、卵巢、前列腺和直肠癌以及造血恶性肿 瘤(白血病和淋巴瘤)、无β脂蛋白血症、手足发绀、急性和慢性寄生或感染过程、急性白 血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞样白血病(AML)、急性或慢性细菌感染、 急性胰腺炎、急性肾功能衰竭、腺癌、心房异位搏动、AIDS痴呆复征、酒精诱导的肝炎、变应 性结膜炎、过敏性接触性皮炎、变应性鼻炎、同种异体移植物排斥、α -1-抗胰蛋白酶缺乏、 肌萎缩性侧索硬化、贫血、心绞痛、前角细胞变性、抗cd3治疗、抗磷脂综合征、抗受体超敏 反应、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、高动脉压、动脉硬化、动静脉瘘、共济失 调、心房纤维颤动(持续性或阵发性)、心房扑动、房室传导阻滞、B细胞淋巴瘤、骨移植物排 斥、骨髓移植(BMT)排斥、束支传导阻滞、Burkitt氏淋巴瘤、烧伤、心律失常、心脏震晕综 合征、心脏肿瘤、心肌病、心肺分流术炎症应答、软骨移植排斥、小脑皮质变性、小脑病症、紊 乱性或多源性房性心动过速、化学疗法相关病症、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性酒精中 毒、慢性炎性病理学、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺部疾病(C0PD)、慢性水 杨酸盐中毒、结肠直肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、接触性皮炎、肺源性心脏病、冠状动脉 疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培养物阴性脓毒病、囊性纤维化、细胞因子疗法相关病症、拳 击员痴呆、脱髓鞘病、登革出血热、皮炎、皮肤病学状况、多尿症、糖尿病、糖尿病性动脉硬化 性疾病、弥漫性Lewy小体病、扩张性充血性心肌病、基底神经节病症、中年唐氏综合征、由 阻断CNS多巴胺受体的药物诱导的药物诱导的运动障碍、药物敏感性、湿疹、脑脊髓炎、心 内膜炎、内分泌病、会厌炎、EB病毒感染、红斑性肢痛病、锥体外束和小脑病症、家族性嗜血 细胞性淋巴组织细胞增多症、胎儿胸腺移植排斥、Friedreich氏共济失调、功能性外周性 动脉病症、真菌性脓毒病、气性坏疽病、胃溃疡、肾小球肾炎、任何器官或组织的移植物排 斥、革兰氏阴性脓毒病、革兰氏阳性脓毒病、由于细胞内生物的肉芽肿、毛细胞性白血病、Hallerrorden-Spatz病、hashimoto氏甲状腺炎、枯草热、心脏移植排斥、血色素沉着症、血 液透析、溶血性尿毒性综合征/血栓溶解性血小板减少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律 失常、HIV感染/HIV神经病、何杰金氏病、运动过度性运动障碍、超敏反应、超敏感性肺炎、 高血压、运动机能减退性运动障碍、下丘脑-垂体-肾上腺轴评价、特发性Addison氏病、 特发性肺纤维化、抗体介导的细胞毒性、虚弱、婴儿型脊髓性肌萎缩、主动脉炎症、流行性感 冒a、电离辐射照射、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、缺血性再灌注损伤、缺血性中 风、青少年类风湿性关节炎、青少年脊髓性肌萎缩、卡波西氏肉瘤、肾移植排斥、军团杆菌、 利什曼病、麻风病、皮层脊髓系统损伤、脂肪水肿、肝移植排斥、淋巴水肿、疟疾、恶性淋巴 瘤、恶性组织细胞增多症、恶性黑素瘤、脑膜炎、脑膜炎球菌血症、代谢性/特发性、偏头痛、 线粒体多系统病症、混合型结缔组织病、单克隆丙种球蛋白病、多发性骨髓瘤、多系统变性 (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager 禾口 Machado-Jos印h)、重症肌无力、鸟胞内分支杆 菌、结核分支杆菌、骨髓异常增生综合征、心肌梗死、心肌缺血性病症、鼻咽癌、新生儿慢性 肺病、肾炎、肾变病、神经变性疾病、神经原性I肌萎缩、嗜中性粒细胞减少性发烧、非何杰 金淋巴瘤、腹主动脉及其分支闭塞、闭塞性动脉病症、okt3治疗、睾丸炎/附睾炎、睾丸炎/ 输精管切除术逆转操作、器官巨大症、骨质疏松症、胰移植排斥、胰癌、恶性肿瘤的瘤旁综合 征/高钙血症、甲状旁腺移植排斥、盆腔炎症性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性动脉粥 样硬化疾病、外周血管病症、腹膜炎、恶性贫血、卡氏肺囊虫性肺炎、肺炎、POEMS综合征(多 发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、和皮肤变化综合征)、灌注后综 合征、泵后综合征、MI心切开术后综合征、先兆子痫、进行性核上麻痹、原发性肺动脉高压、 放射治疗、Raynaud氏现象和疾病、Raynoud氏病、Refsum氏病、常规狭窄QRS心动过速、肾 血管性高血压、再灌注损伤、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小体型老年 性痴呆、血清反应阴性关节病、休克、镰状细胞贫血、皮肤同种异体移植物排斥、皮肤变化综 合征、小肠移植排斥、实体瘤、特殊心律失常、脊髓性共济失调、脊髓小脑变性、链球菌肌炎、 小脑结构损伤、亚急性硬化性全脑炎、晕厥、心血管系统梅毒、全身性过敏反应、全身炎症反 应综合征、全身发作性青少年类风湿性关节炎、T细胞或FAB ALL、毛细血管扩张、血栓闭塞 性脉管炎、血小板减少症、毒性、移植物、创伤/出血、III型超敏反应、IV型超敏反应、不稳 定心绞痛、尿毒症、尿脓毒病、荨麻疹、心脏瓣膜疾病、静脉曲张、血管炎、静脉疾病、静脉血 栓形成、心室纤维性颤动、病毒和真菌感染、病毒性脑炎/无菌性脑膜炎、病毒相关性噬红 细胞综合征、Wernicke-Korsakoff综合征、Wi 1 son氏病、任何器官或组织的异种移植排斥、 急性冠状动脉综合征、急性特发性多神经炎、急性炎性脱髓鞘性多发性神经根性神经病、急 性缺血、成人Mill氏病、斑秃、过敏反应、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、动脉硬化、 特应性湿疹、特应性皮炎、自身免疫性皮炎、与链球菌感染相关的自身免疫性病症、自身免 疫性肠病、自身免疫性听力丧失、自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)、自身免疫性心肌 炎、自身免疫性过早卵巢衰竭、睑炎、支气管扩张、大疱性类天疱疮、心血管病、灾变性抗磷 脂综合征、乳糜泻、颈椎关节强硬、慢性缺血、疤痕性类天疱疮、具有多发性硬化风险的临床 孤立综合征(CIS)、结膜炎、儿童期发病性精神病、慢性阻塞性肺部疾病(C0PD)、泪囊炎、皮 肌炎、糖尿病性视网膜病、糖尿病、椎间盘突出、盘脱垂、药物诱导的免疫性溶血性贫血、心 内膜炎、子宫内膜异位、眼内炎、巩膜外层炎、多形性红斑、重型多形性红斑、妊娠期类天疱 疮、格-巴二氏综合征(GBS)、枯草热、Hughes综合征、特发性帕金森氏病、特发性间质性肺炎、IgE介导的变态反应、免疫性溶血性贫血、内含体肌炎、传染性眼炎性疾病、炎性脱髓鞘 疾病、炎性心脏病、炎性肾病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎、Kussmaul病或 Kussmaul-Meier病、Landry氏麻痹、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、网状青斑、黄斑变性、 显微镜下多脉管炎、morbus bechterev、运动神经元病症、粘膜类天疱疮、多器官衰竭、重 症肌无力、脊髓异常增生综合征、心肌炎、神经根障碍、神经病、非甲非乙型肝炎、视神经炎、 骨质溶解、少关节的JRA、周围动脉闭塞性疾病(PA0D)、周围血管疾病(PVD)、外周动脉疾病 (PAD)、静脉炎、结节性多动脉炎(或结节性动脉外膜炎)、多软骨炎、风湿性多肌病、白发症、 多关节的JRA、多发性内分泌缺陷综合征、多肌炎、风湿性多肌病(PMR)、泵后综合征、原发 性帕金森综合征、前列腺炎、单纯红细胞再生障碍、原发性肾上腺机能不足、复发型视神经 脊髓炎、再狭窄、风湿性心脏病、SAPHO (滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、继发 性淀粉样变性、休克肺、巩膜炎、坐骨神经痛、继发性肾上腺机能不足、聚硅氧烷相关的结缔 组织病、Sneddon-Wilkinson皮肤病、关节强硬性脊椎炎、Stevens-Johnson综合征(SJS)、 全身性炎症应答综合征、颞动脉炎、弓形体视网膜炎、中毒性表皮坏死松解、横贯性脊髓炎、 TRAPS (肿瘤坏死因子受体，I型变态反应，II型糖尿病、荨麻疹、普通型间质性肺炎(UIP)、 脉管炎、春季结膜炎、病毒性视网膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada综合征(VKH综合征)、湿黄 斑变性和伤口愈合。
75. 一种治疗患有其中前列腺素氏是有害的病症的患者的方法，所述方法包括在第 二种试剂施用之前、同时或之后，施用权利要求1的结合蛋白的步骤，其中所述第二种试 剂选自类风湿性关节炎或青少年类风湿性关节炎药物，其选自氨甲蝶呤，来氟米特，低剂 量皮质类固醇，泼尼松，可的松，抗疟疾药物治疗，羟氯喹，金，柳氮磺胺吡啶，青霉胺，环 磷酰胺，环孢菌素，米诺环素，乙氨酚，阿司匹林，布洛芬，萘普生，塞来考昔，英夫利昔单 抗，依那西普，阿达木单抗，阿巴他赛，利妥昔单抗，阿那白滞素，靶向IL-6、IL-6R、IL-17、 IL-18、IL-23、B7. 1/B7. 2的生物制剂和经口递送试剂；选自下述的骨关节炎药物乙氨 酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、塞来考昔、类固醇、人工关节液、欣维可和海尔根；选自下 述的Crohn氏病药物阿达木单抗、azasan、安萨科、硫唑嘌呤、柳氮磺胺吡啶、布地奈德、 entocort、灭滴灵、依木兰、英夫利昔单抗、巯嘌呤、甲硝唑、protostat、巯基嘌呤、类克和柳 氮磺胺吡啶；选自下述的强直性脊柱炎药物aCetOCOt、乙酰水杨酸、acuprin 81、阿达木 单抗、aleve、双霉素钙、萘普生钠制剂、aristocort、阿司匹林、aspirtab、曲安奈德、百服 宁、buffex、凯扶兰、西乐葆、奇诺力、可的松、双氯芬酸、奥沙拉秦钠、easprin、依那西普、 吲哚美辛、茚甲新、英夫利昔单抗、萘普生、类克、曲安西龙和扶他林；选自下述的多发性硬 化药物Avonex、Azasan、硫唑嘌呤、Betaseron、Bubbli-Pred、克帕松、Cotolone、格拉默、 依木兰、干扰素β -la、干扰素β -Ib溶液、Key-Pred、Key-Pred SP、米托蒽醌、那他珠单 抗、i若ffl灵、Orapred> Orapred ODT> Pediapred> Pred-Ject-50> Predacort 50、Predalone 50、Predate-50、泼尼松龙、I^relone、利比和Tysabri ；选自下述的癌症或恶性肿瘤药物 Abraxane、亚得里亚霉素、Adruci 1、艾达乐、阿仑珠单抗、力比泰、氨基酮戊酸、阿那曲唑、阿 瑞匹坦、瑞宁得、阿诺新、Arranon、三氧化二砷、阿伐他汀(贝伐珠单抗)、阿扎胞苷、贝伐珠 单抗、贝沙罗汀、硼替佐米、Campath (阿仑珠单抗)、Camptosar (盐酸依立替康)、卡培他滨、 卡钼、西妥昔单抗、顺钼、Clafen (环磷酰胺)、氯法拉滨、Clofarex (氯法拉滨)、科罗拉(氯 法拉滨)、环磷酰胺、阿糖胞苷、Cytosar-U (阿糖胞苷)、Cytoxan (环磷酰胺)、达珂(地西他滨)、达沙替尼、地西他滨、D印oCyt (脂质体阿糖胞苷)、D印oR)am (脂质体阿糖胞苷)、盐酸 右雷佐生、多西他赛、Doxil (盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、 Dox-SL (盐酸多柔比星脂质体)、Efudex (氟尿嘧啶)、Ellence (盐酸表柔比星)、乐沙定(奥 沙利钼)、Emend (阿瑞匹坦)、盐酸表柔比星、爱必妥(西妥昔单抗)、盐酸厄洛替尼、Evacet (盐酸多柔比星脂质体)、易维特(盐酸雷洛昔芬)、依西美坦、Faslodex (氟维司群)、弗隆(来 曲唑)、Fluoroplex (氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、氟维司群、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉妥珠单 抗奥佐米星、健择(盐酸吉西他滨)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、赫赛汀(曲妥珠单抗)、和美新 (盐酸托泊替康)、甲磺酸伊马替尼、咪喹莫特、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸依立替康、伊沙匹隆、 Ixempra(伊沙匹隆)、Ke0Xifene(盐酸雷洛昔芬)、凯望斯(帕利夫明)、二甲苯磺酸拉帕替尼、 来那度胺、来曲唑、聚左旋糖(氨基酮戊酸)、LipoDoX (盐酸多柔比星脂质体)、脂质体阿糖胞 苷、Methazolastone (替莫唑胺)、Mylosar (阿扎胞苷)、麦罗塔(吉妥珠单抗奥佐米星)、纳 米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定化纳米颗粒制剂)、奈拉滨、Neosar (环磷酰胺)、Nexavar (甲苯磺酸索拉非尼)、尼洛替尼、诺瓦得士 (柠檬酸它莫西芬\0ncaspar (培门冬酶)、奥沙利 钼、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定化纳米颗粒制剂、帕利夫明、帕木单抗、Paraplat (卡钼)、伯 尔定(卡钼)、培门冬酶、培美曲塞二钠、Platinol-AQ (顺钼)、Platinol (顺钼)、盐酸雷洛昔 芬、Revlimid (来那度胺)、RituXan (利妥昔单抗)、利妥昔单抗、Sclerosol胸膜内气溶胶(滑 石)、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel (达沙替尼)、灭菌滑石粉(滑石)、Meritalc (滑石)、苹果 酸舒尼替尼、索坦(苹果酸舒尼替尼)、昔诺韦(沙立度胺)、滑石、柠檬酸它莫西芬、Tarabine PFS (阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸厄洛替尼)、Targretin (贝沙罗汀)、Tasigna (尼洛替尼)、泰 素(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、Temodar (替莫唑胺)、替莫唑胺、Temsirolimus, Thalomid (沙立度胺)、沙立度胺、Totect (盐酸右雷佐生)、盐酸托泊替康、Torisel (Temsirolimus), 曲妥珠单抗、iTrisenox (三氧化二砷)、Tykerb (二甲苯磺酸拉帕替尼)、Vectibix (帕木单 抗)、万珂(硼替佐米)、Vidaza (阿扎胞苷)、Vorinostat、希罗达(卡培他滨)、Zinecard (盐 酸右雷佐生)、唑来膦酸、Zolinza (Vorinostat)和择泰(唑来膦酸)。
76.根据权利要求74的方法，其中对所述受试者的所述施用通过选自下述的至少一种 方式肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小 脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、盆腔内、心包内、腹膜内、胸膜内、前 列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速浓注、阴 道、直肠、颊、舌下、鼻内和经皮。
77.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合前列腺 素&，并且在基于细胞表面的受体结合测定中，其中IC5tl选自约lxl0_6 - IxlO-7 MUxlO-7 -IxlO"8 MUxlO"8 - IxlO"9 MUO"9 - IO-10MUxIO"10 - IxKT11 M和 1(Γ" - 1(Γ12 Μ，或在基于 ELISA 的受体结合测定中，其中 IC5。选自约 1χ1(Γ6 - IxlO"7 MUxlO"7 - IxlO"8 MUxlO"8 -lxlO—9 M、10_9 - IO^i0MUxIO"10 - IxlO"11 M 禾Π ΙΟ—11 - 10_12 Μ，抑制所述前列腺素 E2 与 El、 E2、E3和E4受体中的至少一种结合。
78.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PGE2， 并且在选自下述的疾病模型中使PGE2活性抑制约50% 角叉菜胶诱导的爪水肿模型、角叉 菜胶诱导的痛觉过敏模型、胶原诱导的关节炎模型和佐剂诱导的关节炎模型。
79.权利要求77的抗体，其中所述抗体在选自下述的疾病模型中使PGE2活性抑制约70% 角叉菜胶诱导的爪水肿模型、角叉菜胶诱导的痛觉过敏模型、胶原诱导的关节炎模型 和佐剂诱导的关节炎模型。
80.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PGE2， 并且在选自下述的疾病模型中使炎症抑制约90% 角叉菜胶诱导的爪水肿模型、角叉菜胶 诱导的痛觉过敏模型、胶原诱导的关节炎模型和佐剂诱导的关节炎模型。
81.权利要求77的抗体，其中所述抗体是2B5。
82.—种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合前列腺 素&，并且在基于细胞表面的受体结合测定中，或在基于ELISA的受体结合测定中，在约 100 nM的浓度下使所述前列腺素E2与El、E2、E3和E4受体中的至少一种的结合抑制约 70-100%。
83.权利要求81的抗体，其中所述抗体选自19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、L11、L21、 2B5-7. 0、2B5-8. 0 和 2B5-9. 0。
84.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够调节 前列腺素E2的生物学功能。
85.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够中和 前列腺素E2。
86.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自免疫 球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合抗体、⑶R移植的抗体、人源化抗体、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、 二硫化物连接的Fv、SCFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双特异 性抗体。
87.权利要求81的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化 抗体。
88.—种药物组合物，其包括权利要求81的抗体或其抗原结合片段，和药学可接受的 载体。
89.权利要求87的药物组合物，其进一步包括用于治疗其中前列腺素&活性是有害的 病症的至少一种另外的治疗试剂。
90.一种生成与前列腺素氏结合的抗体或其片段的方法，所述方法包括用前列腺素 E2-甲状腺球蛋白免疫接种非人动物，收集包含抗前列腺素氏抗体的体液或器官，并且分离 抗前列腺素氏抗体的步骤。
91.一种包括抗原结合结构域的人源化抗体，所述人源化抗体能够结合前列腺素E2，所 述抗原结合结构域包括包含选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一个⑶R区。
92.一种包括抗原结合结构域的人源化抗体，所述人源化抗体能够结合前列腺素E2, 所述抗原结合结构域包括包含氨基酸序列的至少一个⑶R区，所述氨基酸序列与选自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约 80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%或至少约98%同源。
全文摘要
本发明包括前列腺素E2(PGE2)结合蛋白。本发明涉及其为野生型、嵌合、CDR移植的和人源化的抗体。优选抗体对于前列腺素E2具有高亲和力，并且在体外和体内中和前列腺素E2活性。本发明的抗体可以是全长抗体或其抗原结合部分。还提供了制备方法和使用本发明的抗体的方法。本发明的抗体或抗原结合部分用于检测前列腺素E2且用于抑制前列腺素E2活性，例如在患有其中前列腺素E2活性是有害的病症的人受试者中。
文档编号A61K39/395GK102143760SQ200980134669
公开日2011年8月3日 申请日期2009年7月8日 优先权日2008年7月8日
发明者穆尔塔扎 A., W. 哈钦斯 C., 塔查 E., 贝朗格 E., 沈 J., C. 哈里斯 M., 朱 R-R., B. 斯泰恩 W., 谢仲明, 顾继杰 申请人:雅培制药有限公司
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