用于抗流感的疫苗组合物的制作方法
专利名称：用于抗流感的疫苗组合物的制作方法
用于抗流感的疫苗组合物本发明涉及疫苗组合物，特别是用于抗流感。人和禽流感是在每个季节都广泛传播的大流行病，并且具有高水平的死亡率和治病率。在属于正黏病毒科的包膜RNA病毒的流感病毒中，流感到主要病因是甲型流感病毒。 甲型流感病毒可以通过其表面蛋白血凝素(H)和神经氨酸酶(N)的抗原性质被进一步区分为亚型。至今已经鉴定到15种H和9种N亚型。今天在动物中发现了许多这些亚型的组合，但从1918年至今只有Hl、H2、H3、m和N2在人群中建立了稳定的谱系。甲型流感病毒具有高自然突变率，并且频繁改变其抗原性质，这是通过随时间的抗原性漂移(antigenic drift)(即是说通过由病毒聚合物插入的随机点突变，翻译成各自蛋白质地氨基酸序列中的改变)或者通过被称为抗原性转变(antigenic shift)与其他病毒亚型的突然重组(当宿主同时感染2种不同的流感病毒株时)。用于抵抗疾病的主要策略是用灭活的或者活的减毒疫苗进行疫苗接种。已经开发了针对流感的多种疫苗，例如季节性的流感疫苗由Sanofi-Pasteur 商业化的 Fluzone 、Vaxigrip 、Mutagrip 禾π imovax Gripe ,由 GlaxoSmithKline 商业化的Fluarix 、Gripovax 和FluLaval ,由 MedImmune 商业化的FlllMist ,由 CSL Biotechnologies 商业化的Afluria 或者由 Novartis 商
感疫苗，例如Celvapan (Baxter)、Daronrix 、Pandemrix 和Prepandrix
(GlaxoSmithKline Biologicals)，Focetria 禾口Optaflll (Novartis Vaccines and Diagnostics)，IDflu 和Intanza (Sanofi Pasteur)。然而，可用的疫苗只在短期内有活性并且只是针对特定的病毒株类型(血凝素类)。抗性病毒变体的出现和不良反应产生了对流感病毒感染的改进预防的需要，特别是同时预防不同的流感病毒株的感染。令人惊奇的是，本发明人发现了使用半乳糖神经酰胺的衍生物作为流感疫苗中的佐剂增加了疫苗组合物的效力。特别是，他们显示了这样的化合物增加了同种型转换(增加IgGh和IgG2b的产生)并且意想不到地诱导了针对流感表面抗原的细胞毒性T淋巴细胞的激活，特别是Thl激活，而现在的流感疫苗主要增加IgG的产生。另外，本发明人令人惊奇地显示了使用半乳糖神经酰胺的衍生物作为流感疫苗中的佐剂诱导了交叉保护，即它们增加了针对不同于用于制作流感疫苗的病毒株的感染病毒株的疫苗组合物的效力。本发明因此涉及疫苗组合物，其包括-至少一种针对流感的预防性活性试剂，所述针对流感的预防性活性试剂针任选地包括佐剂，和-至少一种佐剂，所述佐剂是半乳糖神经酰胺的衍生物。 在本发明的上下文中，“疫苗组合物”或“疫苗”指在施用给受试者时，诱导细胞和 /或体液免疫应答的组合物。 “受试者”在本文中是指动物，例如脊椎动物或者哺乳动物，优选地是非人或者人哺乳动物。脊椎动物的实例包括鸟和家禽，特别是鸡。非人哺乳动物的实例包括啮齿类、马、猪和灵长类。最优选地，受试者是人。在本发明的上下文中，“流感”或“流行性感冒”指由正黏病毒科的RNA病毒(称为流感病毒)引起的鸟和哺乳动物的感染性疾病。在人中，该疾病的常见症状是间冷间热、咽喉痛、肌肉疼痛、剧烈头痛、咳嗽、虚弱和全身不适。在更严重的情况下，流感导致肺炎，这是致命的，特别是在低龄儿童和老人中尤其危险。流感可以通过咳嗽或者喷嚏产生包含病毒的气雾而由空气从受感染的哺乳动物传播，或者通过鸟的遗留物从受感染的鸟传播。流感还可以通过唾液、鼻腔分泌物、粪便和血液传播。感染还可以通过于这些体液或者被感染的表面接触而发生。在本发明的上下文中，“流感病毒”指流感的致病因子。其是一种包膜RNA病毒， 具有由8个单链负RNA节段组成的分段基因组，属于正黏病毒科。根据本发明的流感病毒包括3个亚型甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒。这些亚型基于在2个病毒结构蛋白-基质蛋白M2和核蛋白中的抗原性差异。优选地，根据本发明的流感病毒是甲型流感病毒。更优选地，所述流感病毒选自111附、!11拟、!12拟、!13附、!13拟、!15附和!17町病毒株。 更具体地，本领域技术人员已知，流感可以是季节性的或者大流行性的。季节性流感通常是由于确定的病毒株并且得到世界卫生组织建议。现在(2009年)，引起季节性流感的流通流感病毒株是特定的H1N1、H3N2和乙型流感病毒株。在过去，H2N2流感病毒株也导致季节性流感。直到2008年，大流行性流感例如是由于Hmi或者H7N7流感病毒株。在本文中使用的“预防性活性试剂”是指易于诱导针对流感病毒感染的免疫应答的生物体的化合物。适用于针对流感的预防性活性试剂的实例包括多肽、多核苷酸、碳水化合物部分、糖蛋白、完整的流感病毒、裂开的流感病毒。优选地，根据本发明的至少一种针对流感的预防性活性试剂选自活的非减毒流感病毒；活的减毒流感病毒；杀死的或灭活的流感病毒；流感病毒抗原例如流感病毒的亚基，来自流感病毒的重组多肽或蛋白质；来自流感病毒的cDNA或重组的流感病毒。优选地，根据本发明的至少一种针对流感的预防性活性试剂包含至少一种甲型流感病毒株和至少一种乙型流感病毒株，并且任选地其他甲型流感病毒株或丙型流感病毒株。如本文使用的，“活的非减毒流感病毒”指活的包膜RNA病毒，其具有由8个单链负 RNA节段组成的分段基因组，并且属于正黏病毒科。如本文使用的，“活的减毒流感病毒”指显示天然的弱毒力的活流感病毒株。活的减毒流感病毒包括冷适应的和温度敏感的流感病毒株。获得活的减毒病毒的方法是本领域技术人员已知的，并且包括在鸡蛋中连续传代直到获得突变体，该突变体已经丧失其致病能力(Hilleman (2002) Vaccine 20:3068-3087)。如本文使用的，“杀死的流感病毒”或“灭活的流感病毒”指通过已知方法获得的已经被杀死的流感病毒，最常见的方法是在受精的鸡蛋中培养病毒，纯化并使其灭活，例如通过使用去污剂进行处理。如本文使用的，“流感病毒的亚基”指来自所述流感病毒的核酸、多肽、蛋白质或者这些的混合物。具体地，流感病毒的亚基是所述流感病毒的蛋白质，其选自血凝素、神经酰胺酶、核蛋白、Ml、M2、NSl、NS2 (NEP)、PA、PBl、PB1-F2和PB2。优选地，根据本发明，流感病毒的亚基是血凝素和/或神经酰胺酶。
优选地，根据本发明的流感病毒起源于动物宿主，特别是哺乳动物或者鸟。更优选地，流感病毒的宿主选自人、马和鸟。在本发明的上下文中，“佐剂”是指增加或改良预防性活性试剂的免疫原性效力的物质。如本文使用的，表达“半乳糖神经酰胺的衍生物”指示半乳糖神经酰胺类，例如 α -半乳糖神经酰胺，以及其更具体的衍生物。优选地，根据本发明的半乳糖神经酰胺的衍生物是半乳糖神经酰胺的NKT细胞激活衍生物。如本文使用的，“半乳糖神经酰胺的NKT细胞激活衍生物”指如下半乳糖神经酰胺的衍生物，其导致(i) 一旦与⑶Id递呈刺激性抗原接触，NKT细胞分泌Thl和Th2细胞因子，例如IFN-Y、IL-4、IL-2、IL-10、IL-13、GM-CSF或TNF-α、或这些细胞因子的组合，或 ( )上调用于激活的T细胞的细胞表面标记例如CD69的表达，或(iii)B细胞激活或(iv) 下调NKT细胞表面上的T细胞受体(TCR)。优选地，根据本发明的佐剂是具有下式(V)的化合物
权利要求
1.疫苗组合物，其包括-至少一种针对流感的预防性活性试剂，和 -至少一种佐剂，所述佐剂是半乳糖神经酰胺的衍生物。
2.根据权利要求1的疫苗组合物，其中至少一种针对流感的预防性活性试剂选自活的非减毒流感病毒、活的减毒流感病毒、杀死的或灭活的流感病毒、流感病毒的亚基、来自流感病毒的重组的多肽或蛋白质、来自流感病毒的cDNA或重组流感病毒。
3.根据权利要求2的疫苗组合物，其中流感病毒的亚基是血凝素。
4.根据权利要求2或3的疫苗组合物，其中流感病毒的宿主选自人、马和鸟。
5.根据权利要求2-4中任一项的疫苗组合物，其中流感病毒选自H1N1、H1N2、H2N2、 H3N1、H3N2、H5N1 和 H7N7 病毒株。
6.根据权利要求1-5中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是具有下式(V)的化合物
7.根据权利要求1-6中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是具有下式(I)的化合物
8.根据权利要求1-7中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是下式(II)的化合物PBS-57
9.根据权利要求1-7中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是下式(III)的化合物PBS-96
10.根据权利要求1-7中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是下式(IV)的化合物PBS-14
11.根据权利要求1-10中任一项的疫苗组合物，其中至少一种针对流感的预防性活性试剂包括佐剂。
12.根据权利要求1-11中任一项的疫苗组合物，用于预防或治疗流感。
13.根据权利要求12的疫苗组合物，其中流感是源于流感病毒的第一病毒株，并且至少一种针对流感的预防性活性试剂选自流感病毒的第二病毒株的活的非减毒流感病毒、活的减毒流感病毒、杀死的或灭活的流感病毒、流感病毒的亚基、重组的多肽或蛋白质、cDNA或重组流感病毒。
14.治疗或预防个体中流感的方法，包括对所述个体施用预防或治疗有效量的权利要求1-11中任一项限定的疫苗组合物施用给所述受试者。
15.权利要求14的方法，其中流感是源于流感病毒的第一病毒株，并且至少一种针对流感的预防性活性试剂选自流感病毒的第二病毒株的活的非减毒流感病毒、活的减毒流感病毒、杀死的或灭活的流感病毒、流感病毒的亚基、重组的多肽或蛋白质、cDNA或重组流感病毒。
全文摘要
本发明涉及疫苗组合物，其包括至少一种针对流感的预防性活性试剂，和至少一种佐剂，所述佐剂是半乳糖神经酰胺的衍生物，用于治疗流感。
文档编号A61K39/145GK102215864SQ200980143383
公开日2011年10月12日 申请日期2009年10月5日 优先权日2008年10月8日
发明者樊尚·塞拉 申请人:威蒂赛尔公司, 樊尚·塞拉
用于抗流感的疫苗组合物本发明涉及疫苗组合物，特别是用于抗流感。人和禽流感是在每个季节都广泛传播的大流行病，并且具有高水平的死亡率和治病率。在属于正黏病毒科的包膜RNA病毒的流感病毒中，流感到主要病因是甲型流感病毒。 甲型流感病毒可以通过其表面蛋白血凝素(H)和神经氨酸酶(N)的抗原性质被进一步区分为亚型。至今已经鉴定到15种H和9种N亚型。今天在动物中发现了许多这些亚型的组合，但从1918年至今只有Hl、H2、H3、m和N2在人群中建立了稳定的谱系。甲型流感病毒具有高自然突变率，并且频繁改变其抗原性质，这是通过随时间的抗原性漂移(antigenic drift)(即是说通过由病毒聚合物插入的随机点突变，翻译成各自蛋白质地氨基酸序列中的改变)或者通过被称为抗原性转变(antigenic shift)与其他病毒亚型的突然重组(当宿主同时感染2种不同的流感病毒株时)。用于抵抗疾病的主要策略是用灭活的或者活的减毒疫苗进行疫苗接种。已经开发了针对流感的多种疫苗，例如季节性的流感疫苗由Sanofi-Pasteur 商业化的 Fluzone 、Vaxigrip 、Mutagrip 禾π imovax Gripe ,由 GlaxoSmithKline 商业化的Fluarix 、Gripovax 和FluLaval ,由 MedImmune 商业化的FlllMist ,由 CSL Biotechnologies 商业化的Afluria 或者由 Novartis 商
感疫苗，例如Celvapan (Baxter)、Daronrix 、Pandemrix 和Prepandrix
(GlaxoSmithKline Biologicals)，Focetria 禾口Optaflll (Novartis Vaccines and Diagnostics)，IDflu 和Intanza (Sanofi Pasteur)。然而，可用的疫苗只在短期内有活性并且只是针对特定的病毒株类型(血凝素类)。抗性病毒变体的出现和不良反应产生了对流感病毒感染的改进预防的需要，特别是同时预防不同的流感病毒株的感染。令人惊奇的是，本发明人发现了使用半乳糖神经酰胺的衍生物作为流感疫苗中的佐剂增加了疫苗组合物的效力。特别是，他们显示了这样的化合物增加了同种型转换(增加IgGh和IgG2b的产生)并且意想不到地诱导了针对流感表面抗原的细胞毒性T淋巴细胞的激活，特别是Thl激活，而现在的流感疫苗主要增加IgG的产生。另外，本发明人令人惊奇地显示了使用半乳糖神经酰胺的衍生物作为流感疫苗中的佐剂诱导了交叉保护，即它们增加了针对不同于用于制作流感疫苗的病毒株的感染病毒株的疫苗组合物的效力。本发明因此涉及疫苗组合物，其包括-至少一种针对流感的预防性活性试剂，所述针对流感的预防性活性试剂针任选地包括佐剂，和-至少一种佐剂，所述佐剂是半乳糖神经酰胺的衍生物。 在本发明的上下文中，“疫苗组合物”或“疫苗”指在施用给受试者时，诱导细胞和 /或体液免疫应答的组合物。 “受试者”在本文中是指动物，例如脊椎动物或者哺乳动物，优选地是非人或者人哺乳动物。脊椎动物的实例包括鸟和家禽，特别是鸡。非人哺乳动物的实例包括啮齿类、马、猪和灵长类。最优选地，受试者是人。在本发明的上下文中，“流感”或“流行性感冒”指由正黏病毒科的RNA病毒(称为流感病毒)引起的鸟和哺乳动物的感染性疾病。在人中，该疾病的常见症状是间冷间热、咽喉痛、肌肉疼痛、剧烈头痛、咳嗽、虚弱和全身不适。在更严重的情况下，流感导致肺炎，这是致命的，特别是在低龄儿童和老人中尤其危险。流感可以通过咳嗽或者喷嚏产生包含病毒的气雾而由空气从受感染的哺乳动物传播，或者通过鸟的遗留物从受感染的鸟传播。流感还可以通过唾液、鼻腔分泌物、粪便和血液传播。感染还可以通过于这些体液或者被感染的表面接触而发生。在本发明的上下文中，“流感病毒”指流感的致病因子。其是一种包膜RNA病毒， 具有由8个单链负RNA节段组成的分段基因组，属于正黏病毒科。根据本发明的流感病毒包括3个亚型甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒。这些亚型基于在2个病毒结构蛋白-基质蛋白M2和核蛋白中的抗原性差异。优选地，根据本发明的流感病毒是甲型流感病毒。更优选地，所述流感病毒选自111附、!11拟、!12拟、!13附、!13拟、!15附和!17町病毒株。 更具体地，本领域技术人员已知，流感可以是季节性的或者大流行性的。季节性流感通常是由于确定的病毒株并且得到世界卫生组织建议。现在(2009年)，引起季节性流感的流通流感病毒株是特定的H1N1、H3N2和乙型流感病毒株。在过去，H2N2流感病毒株也导致季节性流感。直到2008年，大流行性流感例如是由于Hmi或者H7N7流感病毒株。在本文中使用的“预防性活性试剂”是指易于诱导针对流感病毒感染的免疫应答的生物体的化合物。适用于针对流感的预防性活性试剂的实例包括多肽、多核苷酸、碳水化合物部分、糖蛋白、完整的流感病毒、裂开的流感病毒。优选地，根据本发明的至少一种针对流感的预防性活性试剂选自活的非减毒流感病毒；活的减毒流感病毒；杀死的或灭活的流感病毒；流感病毒抗原例如流感病毒的亚基，来自流感病毒的重组多肽或蛋白质；来自流感病毒的cDNA或重组的流感病毒。优选地，根据本发明的至少一种针对流感的预防性活性试剂包含至少一种甲型流感病毒株和至少一种乙型流感病毒株，并且任选地其他甲型流感病毒株或丙型流感病毒株。如本文使用的，“活的非减毒流感病毒”指活的包膜RNA病毒，其具有由8个单链负 RNA节段组成的分段基因组，并且属于正黏病毒科。如本文使用的，“活的减毒流感病毒”指显示天然的弱毒力的活流感病毒株。活的减毒流感病毒包括冷适应的和温度敏感的流感病毒株。获得活的减毒病毒的方法是本领域技术人员已知的，并且包括在鸡蛋中连续传代直到获得突变体，该突变体已经丧失其致病能力(Hilleman (2002) Vaccine 20:3068-3087)。如本文使用的，“杀死的流感病毒”或“灭活的流感病毒”指通过已知方法获得的已经被杀死的流感病毒，最常见的方法是在受精的鸡蛋中培养病毒，纯化并使其灭活，例如通过使用去污剂进行处理。如本文使用的，“流感病毒的亚基”指来自所述流感病毒的核酸、多肽、蛋白质或者这些的混合物。具体地，流感病毒的亚基是所述流感病毒的蛋白质，其选自血凝素、神经酰胺酶、核蛋白、Ml、M2、NSl、NS2 (NEP)、PA、PBl、PB1-F2和PB2。优选地，根据本发明，流感病毒的亚基是血凝素和/或神经酰胺酶。
优选地，根据本发明的流感病毒起源于动物宿主，特别是哺乳动物或者鸟。更优选地，流感病毒的宿主选自人、马和鸟。在本发明的上下文中，“佐剂”是指增加或改良预防性活性试剂的免疫原性效力的物质。如本文使用的，表达“半乳糖神经酰胺的衍生物”指示半乳糖神经酰胺类，例如 α -半乳糖神经酰胺，以及其更具体的衍生物。优选地，根据本发明的半乳糖神经酰胺的衍生物是半乳糖神经酰胺的NKT细胞激活衍生物。如本文使用的，“半乳糖神经酰胺的NKT细胞激活衍生物”指如下半乳糖神经酰胺的衍生物，其导致(i) 一旦与⑶Id递呈刺激性抗原接触，NKT细胞分泌Thl和Th2细胞因子，例如IFN-Y、IL-4、IL-2、IL-10、IL-13、GM-CSF或TNF-α、或这些细胞因子的组合，或 ( )上调用于激活的T细胞的细胞表面标记例如CD69的表达，或(iii)B细胞激活或(iv) 下调NKT细胞表面上的T细胞受体(TCR)。优选地，根据本发明的佐剂是具有下式(V)的化合物
权利要求
1.疫苗组合物，其包括-至少一种针对流感的预防性活性试剂，和 -至少一种佐剂，所述佐剂是半乳糖神经酰胺的衍生物。
2.根据权利要求1的疫苗组合物，其中至少一种针对流感的预防性活性试剂选自活的非减毒流感病毒、活的减毒流感病毒、杀死的或灭活的流感病毒、流感病毒的亚基、来自流感病毒的重组的多肽或蛋白质、来自流感病毒的cDNA或重组流感病毒。
3.根据权利要求2的疫苗组合物，其中流感病毒的亚基是血凝素。
4.根据权利要求2或3的疫苗组合物，其中流感病毒的宿主选自人、马和鸟。
5.根据权利要求2-4中任一项的疫苗组合物，其中流感病毒选自H1N1、H1N2、H2N2、 H3N1、H3N2、H5N1 和 H7N7 病毒株。
6.根据权利要求1-5中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是具有下式(V)的化合物
7.根据权利要求1-6中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是具有下式(I)的化合物
8.根据权利要求1-7中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是下式(II)的化合物PBS-57
9.根据权利要求1-7中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是下式(III)的化合物PBS-96
10.根据权利要求1-7中任一项的疫苗组合物，其中佐剂是下式(IV)的化合物PBS-14
11.根据权利要求1-10中任一项的疫苗组合物，其中至少一种针对流感的预防性活性试剂包括佐剂。
12.根据权利要求1-11中任一项的疫苗组合物，用于预防或治疗流感。
13.根据权利要求12的疫苗组合物，其中流感是源于流感病毒的第一病毒株，并且至少一种针对流感的预防性活性试剂选自流感病毒的第二病毒株的活的非减毒流感病毒、活的减毒流感病毒、杀死的或灭活的流感病毒、流感病毒的亚基、重组的多肽或蛋白质、cDNA或重组流感病毒。
14.治疗或预防个体中流感的方法，包括对所述个体施用预防或治疗有效量的权利要求1-11中任一项限定的疫苗组合物施用给所述受试者。
15.权利要求14的方法，其中流感是源于流感病毒的第一病毒株，并且至少一种针对流感的预防性活性试剂选自流感病毒的第二病毒株的活的非减毒流感病毒、活的减毒流感病毒、杀死的或灭活的流感病毒、流感病毒的亚基、重组的多肽或蛋白质、cDNA或重组流感病毒。
全文摘要
本发明涉及疫苗组合物，其包括至少一种针对流感的预防性活性试剂，和至少一种佐剂，所述佐剂是半乳糖神经酰胺的衍生物，用于治疗流感。
文档编号A61K39/145GK102215864SQ200980143383
公开日2011年10月12日 申请日期2009年10月5日 优先权日2008年10月8日
发明者樊尚·塞拉 申请人:威蒂赛尔公司, 樊尚·塞拉
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