一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法
专利名称：一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，采用有机溶剂提取，
活性炭脱色和硅胶柱分离纯化等工序制备东北贯众素的方法。
背景技术：
东北贯众素，又名绵马贯众素，是一种四环间苯三酚衍生物。 英文名称Dryocrassin ; 分子式C43H48016 ; 分子量820. 83 ;
分子结构式
物理性质为黄色结晶(丙酮)，熔点201-203 °C (也有报道207-214 °C 、 215-218°C );难溶于水，可溶于苯，乙醚，四氯化碳，戊醇，丙酮，冰醋酸等多数有机溶剂及 碱性水溶液。 东北贯众素是绵马贯众抗疟活性及抗肿瘤活性的主要有效成分，有研究证明其具 有抗日本血吸虫作用。 绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨(东北贯众)Dryopteris
crassirhizomaNakai的干燥根茎及叶柄残基。呈倒卵形，上端钝圆或截形，下端较尖，表面
黄棕色至黑褐色，密被排列整齐的叶柄残基及鳞片，并有弯曲的须根。具有清热解毒、驱虫
的功效，用于虫积腹痛、疮疡。其炭品止血，用于崩漏。主要化学成分为东北贯众素、绵马酸
类、黄绵马酸类以及微量白绵马素、粗蕨素、绵马三萜、鞣质、挥发油、树脂等。 目前还未见有关于东北贯众素提取纯化工艺的相关研究。吴寿全等发表了《绵马
贯众化学成分研究I》，提取分离得到了东北贯众素单体，但此方法只适合实验室。王海宁等
优选出适合分离绵马贯众中东北贯众素的大孔树脂为匿130，并对优选出的大孔树脂分离
绵马贯众时的工艺条件和参数进行研究，但是东北贯众素水溶性很差，大孔树脂分离难度
较大，不易操作。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法， 该法能有效提取高纯度产品，便于工业化操作。
本发明是采用以下技术方案实现的
将原料粉碎，加入乙醇溶液和氢氧化钙，加热提取2-3次，合并提取液滤过调节pH5-7，回收乙醇至浓度30-50%，放置8-12小时，滤出沉淀物，氯仿溶解加活性炭加热脱色，滤后注入硅胶柱，先用4-6柱体积甲醇洗去杂质，再用乙酸乙酯洗脱，TLC监测，收集洗脱液，减压回收洗脱剂；用丙酮溶解结晶，滤出低温干燥即得产品。 所述的提取条件乙醇浓縮度80_90%，用量为物料的5-7倍，氢氧化钙和物料比1 : 1000-2 : IOOO，温度50-75。C，提取时间1-3小时。 所述活性炭脱色条件为活性炭为767针剂活性炭，加入量为溶液体积量的1_2%，回流脱色1-2小时。 所述硅胶柱分离条件硅胶用量为沉淀物的15-20倍，4-6柱体积甲醇洗去杂质。
所述重结晶条件丙酮加热饱和溶解粗晶，冷却静置析晶，结晶2-3次。
综上所述，本发明存在以下优点 1)碱醇提取，试剂损耗少，低浓度乙醇结晶除杂效果好；
2)767针剂活性炭脱色效果好，硅胶柱洗脱试剂单一易回收。 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式
下述实施例中东北贯众素的监测采用薄层色谱法(参照马国祥等"薄层色谱扫描法测定7种贯众中东北贯众素及绵马酸ABA的含量")
薄层色谱条件 薄层板制备取硅胶G10g，加磷酸氢二钠-柠檬酸的缓冲液(pH二7)10ml，维生素C100mg及0. 5% CMC-Na溶液20ml，调匀，铺在20cmX20cm的薄层板上，晾干，于50。C活化2h。 展开剂正己烷-氯仿-甲醇(30 : 15 : 1); 先将点上样的板放在展开缸中饱和2h后，展开，展距为18cm，0. 3X固兰B盐的
50%乙醇溶液为显色剂，多次喷雾，晾干后，于4(TC条件下显色，保持lh显色完全。 下述实施例中东北贯众素的检测采用高效液相色谱法(参照肖国君等"HPLC测定
绵马贯众中绵马贯众素的含量") 高效液相色谱条件色谱柱VP-ODS (4. 6mmX 150mm， 5 ii m); 流动相乙腈_氯仿_异丙醇-0. 3 %磷酸-0. 1 %十二烷基硫酸钠
(50 ! 10 ! 35 ! 10 D ; 流速1. OmL min—1 ; 检测波长286nm ; 柱温25。C。
实施例1 : 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入70L90X乙醇和20g氢氧化钙搅拌加热至50°C ，提取两次，每次提取2小时，合并提取液滤过，盐酸调节pH至5，减压回收至乙醇浓度40%，放置12小时，滤出沉淀物lkg。氯仿回流溶解加入2% 767针剂活性炭脱色2小时，滤过，加入20kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用120L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/10，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶一次，低温干燥得产品340g，含量98. 2%。 实施例2 : 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入70L90X乙醇和10g氢氧化钙搅拌加热至75°C ，提取两次，每次提取2小时，合并提取液滤过，盐酸调节pH至7，减压回收至乙醇浓度30%，放置8小时，滤出沉淀物1. lkg。氯仿回流溶解加入1% 767针剂活性炭脱色1小时，滤过，加入18kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用72L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/15，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶一次，低温干燥得产品335g，含量98%。 实施例3 : 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入50L80X乙醇和20g氢氧化钙搅拌加热至60°C ，提取三次，每次提取1. 5小时，合并提取液滤过，硫酸调节pH至6，减压回收至乙醇浓度50%，放置10小时，滤出沉淀物1. lkg。氯仿回流溶解加入1. 5% 767针剂活性炭脱色2小时，滤过，加入19kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用100L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/8，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶两次，低温干燥得产品330g，含量98. 5%。
实施例4: 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入60L80X乙醇和10g氢氧化钙搅拌加热至70°C ，提取三次，提取时间为3、2、 1小时，合并提取液滤过，盐酸调节pH至5，减压回收至乙醇浓度50%，放置10小时，滤出沉淀物1. lkg。氯仿回流溶解加入1% 767针剂活性炭脱色l小时，滤过，加入22kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用90L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/12，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶两次，低温干燥得产品325g，含量98. 6%。
权利要求
一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，其特征在于包含以下步骤将原料粉碎，加入乙醇溶液和氢氧化钙，加热提取2-3次，合并提取液，滤过，调节pH5-7，回收乙醇至浓度30-50％，放置8-12小时，滤出沉淀物，氯仿溶解，加活性炭加热脱色，滤后注入硅胶柱，先用4-6柱体积甲醇洗去杂质，再用乙酸乙酯洗脱，TLC监测，收集洗脱液，减压回收洗脱剂；用丙酮溶解结晶，滤出低温干燥即得产品。
2. 如权利要求l所述的提纯方法，其特征在于所述的提取条件乙醇浓縮度80-90%用 量为物料的5-7倍，氢氧化钙和物料比1 : 1000，温度50-75t:，提取时间1-3小时。
3. 如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述活性炭脱色条件为活性炭为767 针剂活性炭，加入量为溶液体积量的1_2%，回流脱色1-2小时。
4. 如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述硅胶柱分离条件硅胶用量为沉淀 物的15-20倍，4-6柱体积甲醇洗去杂质。
5. 如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述重结晶条件丙酮加热饱和溶解粗 晶，冷却静置析晶，结晶2-3次。
全文摘要
本发明涉及一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，工艺以绵马贯众药材为原料，用碱醇提取，调酸，浓缩结晶，氯仿溶解，活性炭脱色，硅胶柱分离，丙酮溶解重结晶。该工艺简单可行，所得产品纯度高，成本低，所用有机溶剂回收后可重复利用。
文档编号A61K125/00GK101732365SQ201010103120
公开日2010年6月16日 申请日期2010年2月1日 优先权日2010年2月1日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，采用有机溶剂提取，
活性炭脱色和硅胶柱分离纯化等工序制备东北贯众素的方法。
背景技术：
东北贯众素，又名绵马贯众素，是一种四环间苯三酚衍生物。 英文名称Dryocrassin ; 分子式C43H48016 ; 分子量820. 83 ;
分子结构式
物理性质为黄色结晶(丙酮)，熔点201-203 °C (也有报道207-214 °C 、 215-218°C );难溶于水，可溶于苯，乙醚，四氯化碳，戊醇，丙酮，冰醋酸等多数有机溶剂及 碱性水溶液。 东北贯众素是绵马贯众抗疟活性及抗肿瘤活性的主要有效成分，有研究证明其具 有抗日本血吸虫作用。 绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨(东北贯众)Dryopteris
crassirhizomaNakai的干燥根茎及叶柄残基。呈倒卵形，上端钝圆或截形，下端较尖，表面
黄棕色至黑褐色，密被排列整齐的叶柄残基及鳞片，并有弯曲的须根。具有清热解毒、驱虫
的功效，用于虫积腹痛、疮疡。其炭品止血，用于崩漏。主要化学成分为东北贯众素、绵马酸
类、黄绵马酸类以及微量白绵马素、粗蕨素、绵马三萜、鞣质、挥发油、树脂等。 目前还未见有关于东北贯众素提取纯化工艺的相关研究。吴寿全等发表了《绵马
贯众化学成分研究I》，提取分离得到了东北贯众素单体，但此方法只适合实验室。王海宁等
优选出适合分离绵马贯众中东北贯众素的大孔树脂为匿130，并对优选出的大孔树脂分离
绵马贯众时的工艺条件和参数进行研究，但是东北贯众素水溶性很差，大孔树脂分离难度
较大，不易操作。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法， 该法能有效提取高纯度产品，便于工业化操作。
本发明是采用以下技术方案实现的
将原料粉碎，加入乙醇溶液和氢氧化钙，加热提取2-3次，合并提取液滤过调节pH5-7，回收乙醇至浓度30-50%，放置8-12小时，滤出沉淀物，氯仿溶解加活性炭加热脱色，滤后注入硅胶柱，先用4-6柱体积甲醇洗去杂质，再用乙酸乙酯洗脱，TLC监测，收集洗脱液，减压回收洗脱剂；用丙酮溶解结晶，滤出低温干燥即得产品。 所述的提取条件乙醇浓縮度80_90%，用量为物料的5-7倍，氢氧化钙和物料比1 : 1000-2 : IOOO，温度50-75。C，提取时间1-3小时。 所述活性炭脱色条件为活性炭为767针剂活性炭，加入量为溶液体积量的1_2%，回流脱色1-2小时。 所述硅胶柱分离条件硅胶用量为沉淀物的15-20倍，4-6柱体积甲醇洗去杂质。
所述重结晶条件丙酮加热饱和溶解粗晶，冷却静置析晶，结晶2-3次。
综上所述，本发明存在以下优点 1)碱醇提取，试剂损耗少，低浓度乙醇结晶除杂效果好；
2)767针剂活性炭脱色效果好，硅胶柱洗脱试剂单一易回收。 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式
下述实施例中东北贯众素的监测采用薄层色谱法(参照马国祥等"薄层色谱扫描法测定7种贯众中东北贯众素及绵马酸ABA的含量")
薄层色谱条件 薄层板制备取硅胶G10g，加磷酸氢二钠-柠檬酸的缓冲液(pH二7)10ml，维生素C100mg及0. 5% CMC-Na溶液20ml，调匀，铺在20cmX20cm的薄层板上，晾干，于50。C活化2h。 展开剂正己烷-氯仿-甲醇(30 : 15 : 1); 先将点上样的板放在展开缸中饱和2h后，展开，展距为18cm，0. 3X固兰B盐的
50%乙醇溶液为显色剂，多次喷雾，晾干后，于4(TC条件下显色，保持lh显色完全。 下述实施例中东北贯众素的检测采用高效液相色谱法(参照肖国君等"HPLC测定
绵马贯众中绵马贯众素的含量") 高效液相色谱条件色谱柱VP-ODS (4. 6mmX 150mm， 5 ii m); 流动相乙腈_氯仿_异丙醇-0. 3 %磷酸-0. 1 %十二烷基硫酸钠
(50 ! 10 ! 35 ! 10 D ; 流速1. OmL min—1 ; 检测波长286nm ; 柱温25。C。
实施例1 : 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入70L90X乙醇和20g氢氧化钙搅拌加热至50°C ，提取两次，每次提取2小时，合并提取液滤过，盐酸调节pH至5，减压回收至乙醇浓度40%，放置12小时，滤出沉淀物lkg。氯仿回流溶解加入2% 767针剂活性炭脱色2小时，滤过，加入20kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用120L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/10，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶一次，低温干燥得产品340g，含量98. 2%。 实施例2 : 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入70L90X乙醇和10g氢氧化钙搅拌加热至75°C ，提取两次，每次提取2小时，合并提取液滤过，盐酸调节pH至7，减压回收至乙醇浓度30%，放置8小时，滤出沉淀物1. lkg。氯仿回流溶解加入1% 767针剂活性炭脱色1小时，滤过，加入18kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用72L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/15，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶一次，低温干燥得产品335g，含量98%。 实施例3 : 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入50L80X乙醇和20g氢氧化钙搅拌加热至60°C ，提取三次，每次提取1. 5小时，合并提取液滤过，硫酸调节pH至6，减压回收至乙醇浓度50%，放置10小时，滤出沉淀物1. lkg。氯仿回流溶解加入1. 5% 767针剂活性炭脱色2小时，滤过，加入19kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用100L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/8，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶两次，低温干燥得产品330g，含量98. 5%。
实施例4: 取绵马贯众药材，粉碎，取10kg投入提取罐，加入60L80X乙醇和10g氢氧化钙搅拌加热至70°C ，提取三次，提取时间为3、2、 1小时，合并提取液滤过，盐酸调节pH至5，减压回收至乙醇浓度50%，放置10小时，滤出沉淀物1. lkg。氯仿回流溶解加入1% 767针剂活性炭脱色l小时，滤过，加入22kg硅胶中，回收氯仿，干燥后装短粗柱，先用90L甲醇冲洗杂质，再用乙酸乙酯洗脱流分，薄层检测，收集流分回收至原体积的1/12，放置结晶，滤出结晶物丙酮回流饱和溶解，冷却静置析晶，滤出结晶物再溶解结晶两次，低温干燥得产品325g，含量98. 6%。
权利要求
一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，其特征在于包含以下步骤将原料粉碎，加入乙醇溶液和氢氧化钙，加热提取2-3次，合并提取液，滤过，调节pH5-7，回收乙醇至浓度30-50％，放置8-12小时，滤出沉淀物，氯仿溶解，加活性炭加热脱色，滤后注入硅胶柱，先用4-6柱体积甲醇洗去杂质，再用乙酸乙酯洗脱，TLC监测，收集洗脱液，减压回收洗脱剂；用丙酮溶解结晶，滤出低温干燥即得产品。
2. 如权利要求l所述的提纯方法，其特征在于所述的提取条件乙醇浓縮度80-90%用 量为物料的5-7倍，氢氧化钙和物料比1 : 1000，温度50-75t:，提取时间1-3小时。
3. 如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述活性炭脱色条件为活性炭为767 针剂活性炭，加入量为溶液体积量的1_2%，回流脱色1-2小时。
4. 如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述硅胶柱分离条件硅胶用量为沉淀 物的15-20倍，4-6柱体积甲醇洗去杂质。
5. 如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述重结晶条件丙酮加热饱和溶解粗 晶，冷却静置析晶，结晶2-3次。
全文摘要
本发明涉及一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，工艺以绵马贯众药材为原料，用碱醇提取，调酸，浓缩结晶，氯仿溶解，活性炭脱色，硅胶柱分离，丙酮溶解重结晶。该工艺简单可行，所得产品纯度高，成本低，所用有机溶剂回收后可重复利用。
文档编号A61K125/00GK101732365SQ201010103120
公开日2010年6月16日 申请日期2010年2月1日 优先权日2010年2月1日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司
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