用于经膜治疗和预防中耳炎的方法
专利名称：用于经膜治疗和预防中耳炎的方法
技术领域：
本发明涉及治疗中耳炎(中耳感染)的非侵入性方法。更具体地，本发明涉及将用于治疗中耳炎的药物给予到中耳的方法，这通过给予所述药物穿过鼓膜(tympanic membrane)(鼓膜(eardrum))实施。
背景技术：
每年有数百万儿童受到中耳炎，即，中耳感染的侵袭。虽然成人也易受到中耳感染，但儿童特别地处于风险中，因为他们的耳道相对短，更容易受到炎症的接近。随后流体可以在鼓膜(鼓膜)后驻留，这可以引起严重的疼痛，以及为微生物提供在其中繁殖的有利环境。
鼓膜是阻止药物引入中耳的难以逾越的屏障，因此，开处方用于治疗中耳感染的抗生素几乎总是被经口服用。然而，许多细菌和病毒可以引起中耳感染，并且常常不可能区分哪种细菌或病毒是特定感染(particular infection)的原因或者其对口服抗生素的治疗是否敏感。进一步地，口服给予的抗生素对中耳的影响可以被药物的全身分布减弱，这也使得患者处于与全身输送有关的副作用的风险中(例如，女性(雌性)患者中的酵母感染)。
遭受反复感染的儿童可能需要手术以便减轻鼓膜上的流体压力。在更加严重的情况下，可以在鼓膜内设置引流管。所述管本身不预防感染的再发生(相反，它们可以作为其它病原体进入中耳的管道)，但是它们可以减轻压力并降低流体在鼓膜后驻留的程度。所述管也为抗生素直接进入中耳提供了潜在的管道；例如，通过施用几滴抗生素并使得它们流入引流管。然而，此方法是侵入性的并且是疼痛的，这表明了对将抗生素引入中耳的其它途径的强烈需求。
发明概述 令人惊奇地，发现药物可以通过经膜输送被直接引入中耳。根据本发明，药物被提供为施用于鼓膜(eardrum(鼓膜))的经膜载体组合物的活性成分，例如能够输送药剂穿过鼓膜的基于脂质的乳剂、脂囊泡、脂质体(liposomes)、脂质体(liosomes)、胶束(micelles)、转移体(transferomes)和聚合物载体。
优选的药物是用于治疗或预防中耳炎(中耳感染)及其后遗症的那些药物。本发明特别适合输送药物如抗生素或抗病毒药(取决于存在的感染源)、抗真菌药和抗炎药或其它止痛药。为了预防慢性复发的中耳感染，本发明方法也可以在活动性感染(active infection)之间应用，以便向中耳输送预防性药剂。
上述本发明概述不是限制性的，从下面对优选实施方式的祥述以及权利要求书来看，本发明的其它特征和优势将是明显的。
发明祥述A.经膜治疗中耳炎的方法 本发明提供了治疗和预防中耳炎的方法，其通过给予经膜载体组合物中的用于预防或治疗中耳感染及其后遗症的药物而实施。本发明源自惊人的发现在合适的载体中，药物可以输送穿过鼓膜而不必刺破该膜(例如，通过插入管或注射)。
“经膜给予(transmembrane administration)是指，将能够穿过鼓膜的本发明经膜载体组合物施用在鼓膜的外耳侧，以便输送药物到中耳。因此，本发明提供了通过向被感染个体的鼓膜经膜给予药物来预防和/或治疗中耳感染及其后遗症的方法。
经膜给予如下实现例如，通过用于向鼓膜施用药物组合物的任何医学上可接受的方式，向鼓膜施用本发明的经膜载体组合物；例如，通过插入无针注射器或滴管进入耳道，向鼓膜施用载体组合物。按照需要反复给予，以便达到所给予抗生素化合物的治疗上有效的剂量水平；例如，由0.3％w/w抗生素组成的5-10滴经膜载体组合物可以每日输送两次，来治疗被侵袭儿童的中耳炎。
本领域普通技术人员熟悉并且能够容易地选择适于被遵循以便治疗特定感染的给药方案。所选择的给药方案将取决于用于输送和应用根据本发明提供的特定载体和药物的已确立的临床方案。在一个实施方式中，药物以基于脂质的载体中的至少约0.3％w/w的浓度被提供。
所述组合物优选地被给予，经膜载体组合物本身作为载体；但是在许多实施方式中，经膜载体可以在载体胶或其它合适载体中给予。
B.用于本发明的基于脂质的载体 虽然本发明不受到有关这种输送行为机制的任何理论的限制，目前认为，适于经膜输送药物的载体是能够与鼓膜中的富含脂质的通道相互作用(例如，范德华相互作用)并且也可能进入所述通道的载体。因此，目前优选的经膜载体是基于脂质的那些载体，如脂质乳剂(包括微乳剂和水包油乳剂)，以及脂囊泡，如脂质体(liposomes)、脂质体(liosomes)、胶束和转移体(超柔性脂囊泡)。当前优选基于磷脂的制剂，特别是本发明中有用的非囊泡制剂。
同样，不应用其作用机制的任何理论来限制本发明，也观察到，经膜输送在感染的急性阶段最有效，其中由于中耳的压力增加，鼓膜向外凸出(即，进入外耳)，这是急性中耳感染的症状特征。凸出表明，流体已经在鼓膜后驻留。本发明基于脂质的载体在鼓膜相反侧上的引入可以产生渗透压差，其有助于药物的经膜运输，或是从基于脂质的载体运输，或是与基于脂质的载体共同运输。
最优选地，脂囊泡经膜组合物是柔性的，这在于它们不包括立体稳定成分，如胆固醇(虽然立体上稳定的囊泡可以用于共同给予药物进入外耳，如下文其它处进一步论述)。进一步地，根据本发明输送的药物优选地在脂相(lipid phase)中携带(例如，在脂质体的脂质双层中)而不是在水相中携带(例如，在脂质体的核心中)。因此，脂溶性药物(通常以比在水相中分散的水溶性药物更高的浓度，在囊泡的脂质双层中提供)是优选的，虽然其对于本发明应用不是必需的。
制备液体乳剂和囊泡的方法是本领域公知的，因此在此仅简要概括本发明中应用的经膜载体组合物的目前最优选的实施方式，不带有立体稳定剂并且几乎不加入或不加入粘度增强剂而制备的脂质体。
“脂质体(liposome)”是指球形囊泡，被规则的脂质双层限定并且包绕水相。脂质体的脂质双层通常由天然或合成磷脂构成，但是也可以由非磷脂构成。脂质体的脂质双层是规则的双层，意味着脂质分子的“头”和“尾”结构被彼此邻接地排列。
本发明中应用的脂质体可以是单层的(具有一个脂质双层)或更优选地是多层的。“多层”的脂质体具有多个层或膜。这种类型的脂质体具有携带脂质双层之间的水性流体的多层脂质双层。多层脂质体具有至少两层脂质。
优选的脂质体是本文所述的脂质体，和共同待审并共同拥有的美国专利申请序列号10/366,584中的脂质体，所述专利申请于2003年2月12日提交，其公开内容以整体并入本文作为参考。然而，本领域普通技术人员会知道，可以应用其它脂质体制剂，包括磷脂酰化合物，如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂类、脑苷脂和神经节苷脂。特别有用的是二酰基磷脂酰甘油，其中脂质部分含有14-18个碳原子，特别是16-18个碳原子，并且是饱和的。例证性磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。这些脂质在本发明的非囊泡经膜载体组合物中也有用。
本发明中应用的脂质体和脂囊泡的大小可以不同——如果存在不同——但是这种囊泡在每批制备物中优选大小一致。脂质体可以达到20μm、25μm或者甚至30μm。但是在优选的实施方式中，约95％的脂质体的直径是从约0.5μm至约10μm。在一个实施方式中，根据本文所述的方法制备的优选组合物中，至少80％的脂质体是约0.5μm至约5μm。鉴于此，术语“约”包括所述值的或上或下5％的范围。脂质体的实际直径是下文的冷却曲线和长度和搅拌或旋涡水合的强度的函数，当这些过程用在脂质体制造中时。在其它实施方式中，脂质体可以是多层状的脂质体，其中单个较大脂质体封入一个或多个较小的脂质体。
根据本领域公知方式制造的传统脂质体可以用在本发明中，但是本发明的优选脂质体不包括现有技术脂质体中发现的脂溶性防腐剂(参见，例如，美国专利号4,761,288和4,897,269，均授予Mezei，均以整体并入本文作为参考)。相反，如共同待审的美国专利申请号10/366584(以整体并入本文)所描述的，本发明的脂质体应用水溶性防腐剂，其可以作为抗微生物剂发挥作用，优选地是苯索铵盐(benzethonium salt)，如苯索氯铵(benzethonium chloride)。
鉴于此，“防腐剂(preservative)”是指被加入经膜载体组合物的成分，其防止微生物在制剂中大量生长和繁殖。进一步地，“水溶性(water soluble)”是指，成分在水中有超过100μg/ml(或0.01％)的水溶解度。在其它实施方式中，成分可以在水中有超过1mg/ml(0.1％)的溶解度。
然而，其它水溶性防腐剂在本发明中也有用，如苯甲酸和benzylkonium salts如benzylkonium chloride。出人意料地发现，为了得到稳定的脂质体，对防腐剂的选择是重要的，因为脂溶性防腐剂由于微生物生长可以弱化脂质体的结构并且使之去稳定，产生具有低粘度的不稳定组合物。其它水溶性防腐剂可以被应用；并被有利地选择，以便在组合物的pH下是有活性的。
在本发明的优选实施方式中，应用的脂质体也包含维生素E作为脂溶性抗氧化剂。抗氧化剂起游离自由基清除剂的作用，协助脂质体达到最大的稳定性。甲基纤维素或其它粘度增强剂包含在欲施用于皮肤的经膜载体组合物中，目的是获得足够的粘度和避免流体组合物。在一个最优选实施方式中，本组合物包括作为抗氧化剂的维生素E，并且包括2％w/w以下或1.5％以下或1.0％以下或0.5％以下或0.25％以下的粘度增强剂。
更优选地，所述组合物不包含任何甲基纤维素或任何其它粘度增强剂，使得活性药物化合物的经膜渗透达到最佳。在一个实施方式中，至少50％的维生素E存在于脂质体的脂质双层中。在其它实施方式中，至少70％或80％或90％或95％的维生素E存在于脂质体的脂质双层中。
“粘度增强剂(viscosity enhancing agents)”意味着加入组合物以便增加粘度的试剂。在25℃，粘度增强剂会增加组合物的粘度至少10,000厘泊。粘度增强剂包括但不限于甲基纤维素、褐藻酸、明胶、阿拉伯树胶(阿拉伯胶(gum Arabic))卡波姆和十六醇十八醇混合物。不认为磷脂是此定义内的粘度增强剂。与不存在粘度增强剂相比，粘度增强剂会增强粘度至少10,000厘泊，在其它实施方式中，与组合物中不存在粘度增强剂相比，粘度增强剂会增强粘度20,000或30,000厘泊(达到高如40,000或50,000厘泊)。
因此，在多种实施方式中，本发明的优选经膜载体组合物含有2％w/w以下或1％以下，或0.5％以下或甚至0％的粘度增强剂。例如，在多种实施方式中，组合物含有这些量以下的有机或无机盐，如盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐、氢溴酸盐、或氢碘酸盐。组合物也优选含有2％w/w以下或1％以下或甚至0％的溴化钾、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸钾、碘化钾、硝酸钾、溴化锂、氯化锂、碘化锂、硝酸锂、硫酸锂、溴化铵、氯化铵、碳酸铵、碳酸氢铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、碘化铵、硝酸铵、硫酸铵、溴化钠、碳酸钠、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硝酸钠、磷酸钠和硫酸钠。
在经膜载体组合物中优选以2％w/w以下或1％以下或甚至0％存在的其它盐包括链烷醇胺氯化物、硫酸盐、磷酸盐、苯甲酸盐、醋酸盐、水杨酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、葡萄糖酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐、丙酸盐、抗坏血酸盐、扁桃酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、三乙醇铵氯化物、三乙醇铵磷酸二氢盐、三乙醇铵硫酸盐、苯甲酸钠、苯甲酸钾、苯甲酸铵、乙酸钠、乙酸钾、乙酸铵、水杨酸钠、水杨酸钾、水杨酸铵、草酸钠、草酸钾、草酸铵、邻苯二甲酸钠、邻苯二甲酸钾、邻苯二甲酸铵、葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、葡萄糖酸铵、1-萘磺酸铵、2-萘磺酸钾、2-萘磺酸铵、2-萘磺酸钠、酒石酸钾、马来酸钠、马来酸钾、丙二酸钠、琥珀酸钠、延胡索酸钠、丙酸钠、三乙醇铵丙酸盐、抗坏血酸钠、三乙醇铵抗坏血酸盐、抗坏血酸钾、扁桃酸钠、苹果酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸钾、和三乙醇铵柠檬酸盐。
在多种实施方式中，用于本发明的经膜载体组合物具有至少10,000厘泊或至少20,000厘泊或至少30,000厘泊或至少40,000厘泊或至少50,000厘泊或至少60,000厘泊或至少70,000厘泊的粘度，均在58℃下，不存在任何甲基纤维素或其它粘度增强剂。由于配制物中不存在甲基纤维素和其它粘度增强剂，经膜渗透性被大大增加。在一个实施方式中，油醇可以被加入以增强药物的经膜渗透性，所述油醇在组合物中，但存在于脂质体的外部。
不希望受到任何特定理论的限制，认为，为这些特定脂质体提供稳定性的是水溶性防腐剂和脂溶性抗氧化剂的组合。这使得脂质体稳定并且也具有高度粘性。尽管经膜载体组合物含有非常少的粘度增强剂或不含有粘度增强剂，高度粘性也是可能的。认为粘度增强剂损害活性化合物的跨皮肤运动。在给予该活性化合物中，本组合物提供了最大程度的皮肤渗透性的优越性质，同时保持足够的粘度。
如果脂质体是基于磷脂的囊泡，优选的脂质将是phospholipon 9OH，其从大豆卵磷脂中得到并纯化，化学名是1，2-二酰基-5N-甘油-3-磷脂酰胆碱。其为最少90％磷脂酰胆碱并且被充分氢化。但普通技术人员会知道，其它脂质也可以用在本发明中。例如，磷脂酰胆碱可以是低纯度的，或者可以含有其它脂质或载体物质如，例如，丙二醇/乙醇、中等链甘油三酯、油/乙醇、磷脂酸、胆固醇和磷脂酰肌醇。磷脂可以是任何天然或合成磷脂，例如，磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、溶血磷脂、卵磷脂或大豆磷脂或它们的组合。磷脂可以是加盐或脱盐的、氢化或部分氢化的、天然的、合成的或半合成的。商业上可得到的磷脂的例子包括但不限于卵磷脂P 123(Pfanstiehl，Waukegen，IL)、Lipoid E80(Lipoid，Ludwigshafen，Germany)；和氢化大豆磷脂Phospholipon 80H、80G、90H和100H(Nattermann，Munich，Germany)和99％纯的大豆磷脂酰胆碱(Avanti Polar Lipids，Alabaster，AL)。
任选地，脱水的醇和丙二醇可以用作脂相的共溶剂，维生素E乙酸盐可以作为抗氧化剂被包含。在多种实施方式中，其它脂质或脂质类似物质用在本发明中，如神经酰胺、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、三亚油精和类似化合物。非磷脂也可以用在本发明中。例如，有用的非磷脂物质包括形成脂囊泡的聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸醚、二乙醇胺、长链酰胺、长链酰基氨基酸酰胺、长链酰胺、聚氧乙烯山梨聚糖油酸盐、聚氧乙烯单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、及其混合物、类似物和衍生物。囊泡也可以包括类固醇，和电荷产生剂。优选的类固醇包括胆固醇、氢化可的松及其混合物、类似物和衍生物。优选的负电荷产生物质是油酸、联十六烷基磷酸盐、棕榈酸、十六烷基硫酸盐、视黄酸、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸和它们的混合物。为了在需要时给囊泡提供净正电荷，可以应用长链胺例如硬脂胺或油胺，长链吡啶化合物例如十六烷基氯化吡啶，季铵化合物或这些物质的混合物，只要液体囊泡可以携带足够量的水相即可。
其它脂质体制剂，包括非磷脂脂质体，可以用在本发明中。对于一般参照，1998年8月2日出版的授予Mezei的美国专利号4,761,288中公开的多相脂质体药物输送系统(其公开内容并入本文，使容易参考)，是本发明中能够应用的脂质体组合物的示范性代表。为了用作经膜载体，将脂质体(或本发明中应用的其它脂囊泡)修饰为立体稳定囊泡，或提供用于靶向，或提供给囊泡(或应用的其它基于脂质的载体)缓慢释放性质，可以干扰组合物的经膜活性，从而不被优选。
本发明中优选应用的经膜载体组合物是“稳定的”，意味着它们可以被存储至少6个月，1年，或2年，而不改变组合物的化学性质或物理性质。
对可以并入本发明中应用的基于脂质的载体的化合物数目没有理论上的限制。然而，如本领域普通技术人员所知，在具有相对高的脂质水含量的脂质体组合物中，包封效率通常较高，在脂相中携带的脂溶性药物通常以比水相中携带的水溶性药物高的浓度提供。
例如，两种或更多种成分可以包封在同一囊泡中，或者如果各种活性化合物是不相容的，则化合物可以被分别包封，并且经膜载体组合物组合在一起以便提供具有两种或更多种适应症的组合物，或者用多种活性化合物治疗单个适应症的组合物。
通过给予经膜载体组合物同时治疗中耳和耳道(例如，治疗前者的感染和减轻后者的肿胀)也是可能的，所述组合物包括第一组用于治疗中耳的一种或多种活性化合物，其包封在囊泡中，和第二组用于治疗耳道的一种或多种活性化合物，其以未包封形式分散在周围的水相中。包封的第一组化合物会跨过鼓膜进入中耳；未包封的第二组化合物不会如此。
共同给予也可以如下实施，例如，以缓慢释放形式给予第二组化合物，如在制造以便抵抗降解的脂质体中。本领域普通技术人员熟悉完成此目标的制造方法，所述方法包括而不是限制于向脂相中加入胆固醇(参见，例如，美国专利号6,352,716，并入本文作为参考，作为为此目的向脂相中加入胆固醇的方法的示例)和在脂质体制造中应用粘度增强剂(如甲基纤维素)。
这种相对不溶的脂囊泡较不适于输送药物穿过鼓膜，但是替代地，可以被期望在输送之处保持缓慢释放含有第二组(或又一组)化合物的药物进入耳道(例如，治疗其中的炎症，或提供止痛剂)。这种囊泡也可以具有有助于治疗或控制外耳感染速率的抗感染性质或其它性质；例如，如果有效的抗感染剂十六烷基三甲基溴化铵被用作囊泡中的正电荷产生物质，就会提供第二种优势。在此实施方式中，随着每一囊泡损坏(deteriorate)，其作为延迟释放的杀菌剂载体而发挥作用。
C.用于治疗和预防中耳炎的有用药物 “药物(medicament)”意味着用于治疗和/或预防中耳感染及其后遗症以及相关的疼痛和炎症的任何生物活性化合物。鉴于此，特别优选的药物是用于治疗或预防哺乳动物，特别是人中耳感染的抗生素。根据感染的严重程度及其原因，这种抗生素包括而不是限制于，阿莫西林(和其它青霉素类)、环丙沙星(和其它喹诺酮类抗生素，如氧氟沙星)、克拉维酸(和其它β-内酰胺酶抑制剂)、头孢克洛(和其它头孢菌素类，如头孢克肟)、阿奇霉素(和其它大环内酯类抗生素如克拉霉素)、和磺胺二甲基异唑(以及其它磺胺类药物，如磺胺甲基异唑)。在本发明中有用的抗生素中，当前优选环丙沙星。
磺胺二甲基异唑和阿莫西林是也被接受用于预防复发性中耳感染的主要的抗生素。广谱抗生素如阿莫西林和环丙沙星特别优选用于治疗中耳感染，特别是在怀疑患有抗生素抗性感染的人中。
用于共同给予或独立于抗生素治疗应用的有用的抗炎化合物包括口服给予中有时效率较差或相当耐受的那些化合物；例如，非类固醇抗炎化合物如萘普生、酮洛芬、塞来考昔(celecoxib)和吲哚美辛。在临床需要时，抗病毒化合物如阿昔洛韦，可以代替抗生素化合物，或作为它们的辅助物而被给予，如许多抗真菌组分。也可以通过向鼓膜施用本发明的经膜载体组合物，给予用于治疗和预防中耳感染及其后遗症的其它药物。
在一些实施方式中，本发明的经膜载体组合物含有一种以上的药物。例如，CLAMOXYL和AUGMENTIN都是口服给予的联合制剂组合物，通常被开处方用于治疗中耳炎。每一组合物含有两种活性抗生素成分，阿莫西林和克拉维酸。提供这种多药剂的经膜载体组合物是特别优选用于适当的适应症。
实施例1示范性制剂A 此部分提供了制备含环丙沙星的本发明经膜载体组合物的原材料的示例。所述经膜载体组合物包括脂质体，并且含有具有列出的w/w百分比的下列成分。
PHOSPHOLIPON90H 5.00或更低醇，脱水，USP(美国药典) 5.00或更低丙二醇，USP 5.00维生素E乙酸盐1.00苯索氯铵 0.02环丙沙星 0.30或按需要提供治疗剂量纯水 76.98或更多实施例2制造制剂A的示范性方法 本部分提供了如何制造含环丙沙星的本发明经膜载体组合物的示例。
水相。本方法优选地用两个带套的不锈钢旋涡水合舱(chamber)实施。在两个舱中的较大一个中，缓慢混合纯水和苯索氯铵，以避免泡沫或表面气泡的形成。施加热，达到水相的目标温度50℃±2℃。覆盖所述舱以防止水蒸发，并配备底部舱门(port)和阀门，以便调节物质流出该容器。
脂相。第二个不锈钢带套混合容器紧靠第一容器而应用。在此第二舱中，首先缓慢混合脱水的醇和丙二醇，以避免泡沫或表面气泡的形成。启动上面的混合器，施加热，达到58±2℃，目标是58℃。当溶液达到目标温度时，加入环丙沙星并充分溶解。随后加入PHOSPHOLIPON90H和维生素E乙酸盐，并与脂相混合，直至溶解/熔解。在整个过程中，在舱上使用覆盖物，以防止醇蒸发。
脂相的水合。打开舱的底部舱门上的阀门，调节来自两个容器的液流。水相和油相流动并且在管路调节三通管(in-line regulatingtee)处会合，分散泵将两相吸(pull)在一起。混合物通过60网孔(每平方英寸的孔限数)分散筛循环，以便优化脂相的水合。随后将混合物引到舱顶，整个过程通过泵循环，返回舱，用时10分钟。
冷却相。循环之后，使舱套冷却，同时持续缓慢混合，直至产物温度为28℃，结束过程。物质的混合优选地足够快，以便彻底混合而不引起表面泡沫或气泡的形成。冷却过程优选缓慢，每小时冷却约6℃是最优选的。
实施例3应用示范性制剂治疗中耳炎 为了治疗感染个体的中耳感染及其后遗症，通过经膜给予鼓膜，将根据本发明的含药物脂质体给予患者。药物是在中耳感染的预防和/或治疗中有用的药物，是抗生素、抗病毒药或止痛药，如非类固醇抗炎药。
经膜给予是通过例如，用无针注射器或适于医学插入耳道的其它器械将本发明的经膜载体组合物施用于鼓膜而实现的。如需要，反复给予，以获得所给予抗生素化合物的治疗有效剂量水平。疼痛可以通过以相同的一般方式给予含止痛和/或抗炎剂的本发明经膜载体组合物而被治疗。
基于用于通过原位鼓膜引流管将抗生素引入中耳的目前方案，实施例1中所描述的示范性制剂的合适的给药方案为对于12岁以下的儿童是5滴/日两次，12岁或更年长的儿童是10滴/日两次。
针对中耳感染复发的预防性治疗可以以相同的方式提供，其中利用含预防有效的抗生素或其它药物的本发明经膜载体组合物。
本发明已经被充分描述，其实施通过下文的实施例示例。这些实施例对实施本发明的方法和可以从而得到的结果是代表性的，不是穷尽的。
实施例4中耳炎的动物(南美洲栗鼠)模型 南美洲栗鼠(Chinchilla lange)是理想地适于作为研究治疗人类中耳炎的效应的动物种类。毛丝鼠科(Chinchillas)是小的，具有与人非常相似的听觉能力，具有与人耳蜗相似的带有膜结构的耳蜗，在长期试验中不表现出老年性耳聋，并且缺乏对天然发生的中耳感染的易感性，而这些对豚鼠和兔子来说是普遍的。参见，例如，Hajek DM，Yuan Z，Quartey MK，Giebink GS.，Otitis MediaThe Chinchilla Model，inZak O，Sande M，editors，Handbook of Animal Models of Infection，SanDiego，CAAcademic Press(1999)，389-403页，其内容并入本文作为参考，以便说明其性质和此动物模型在本领域中的认可度。
为了建立和评价动物模型，对每一南美洲栗鼠接种流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)，直接接种到每个耳的中耳，以100cfu的浓度、以0.2mL体积经鼓泡(transbullar)注射。在开始研究之前，给予每一南美洲栗鼠耳镜检查。本发明组合物或对照口服阿莫西林剂量起始于细菌接种后约48小时。给予所有动物丁丙诺啡(Buprenorphine)，0.05mg/kg，日两次皮下给予，用于在研究期间止痛。
在给药终了(细菌接种后8天)，处死每一动物，用盐水洗涤其耳道并检测。具体地，收集来自每一南美洲栗鼠的中耳的样品。对每个试验程序，一个耳部样品被培养过夜。样品铺板后大约24小时，对其进行计数，记录集落形成单位(cfu)。
实施例5南美洲栗鼠模型的中耳炎治疗(脂质体脂质) 通过管饲，向3只南美洲栗鼠经口给予阳性对照物(阿莫西林)，每日两次，持续6日，相隔约8小时。向2组南美洲栗鼠给予2、4或6滴氧氟沙星0.3％脂质体制剂或环丙沙星0.3％脂质体制剂，每组3只南美洲栗鼠，作为这些动物的最大可行剂量。
每组的结果(3只非怀孕雌性动物/组)如下未治疗动物活动性感染在6天后仍存在。
对照动物阿莫西林，20mg/kg BID，持续6日。在6天后，所有动物不存在活动性感染。
根据本发明方法治疗的动物环丙沙星，4滴BID，持续6日。在6天后，所有动物不存在活动性感染。
氧氟沙星，2滴BID，持续6日。在6天后，2只动物仍然存在活动性感染；第3只动物不存在活动性感染。
氧氟沙星，4滴BID，持续6日。在6天后，1只动物仍然存在活动性感染；另2只动物不存在活动性感染。
实施例6南美栗鼠模型中的中耳炎治疗(非脂质体脂质) 应用脂质体脂质和非脂质体脂质中的环丙沙星制剂，遵照实施例5描述的方案，得到下列结果
这些结果表明了本发明在治疗相关动物模型的中耳感染中的效应，被治疗动物有剂量依赖性。
本文示例性描述的发明可以在本文末具体公开的任何要素或多个要素、限制或多个限制不存在的情况下实施。所应用的术语和表述被用作描述性术语而不是限制性术语，并且不意图于在使用这些术语和表述时排除显示和描述的特征或其部分的任何等同物，而是认识到在要求保护的发明范围内各种修改是可能的。因此，应该理解，尽管本发明通过优选的实施方案和任选的特征被具体地公开，但本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变化，而这些修改和变化被认为包含在本发明的范围之内，如所附权利要求所限定的。
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在本文中，本发明已以宽范的和一般性的方式被描述。落入该概括性公开内容中的每一较窄的种类和亚类也形成本发明的一部分。这包括发明的这样的概括性描述，其带有附加条件或从该类中除去任何主题的负限定，不论删除的该物质是否在本文中被具体地叙述。其它实施方式在下面的权利要求书中列出。
此外，当本发明的特征或方面针对马库什组而描述时，本领域技术人员将会知道，本发明因而也针对该马库什组的任何单独成员或亚组成员而描述。
权利要求
1.治疗或预防中耳感染及其后遗症的方法，通过向其经膜给予药物实施，所述方法包括向鼓膜外表面施用经膜载体组合物，所述经膜载体组合物包括用于治疗或预防中耳感染及其后遗症的药物。
2.治疗或预防中耳感染及其后遗症的方法，通过向其经膜给予药物实施，所述方法包括向鼓膜外表面施用非立体稳定的经膜载体组合物，所述经膜载体组合物包括用于治疗或预防中耳感染及其后遗症的药物。
3.根据权利要求1的方法，其中所述经膜载体是脂囊泡。
4.根据权利要求2的方法，其中所述非立体稳定的经膜载体选自由脂质体(liposomes)、胶束(micelles)、脂质体(liosomes)、类脂质体(niosomes)和转移体(transferomes)组成的脂囊泡组。
5.根据权利要求5的方法，其中所述非立体稳定的经膜载体是脂质体。
6.根据权利要求1或2的方法，其中所述经膜载体组合物是脂质体，包括水溶性防腐剂，和脂溶性抗氧化剂；其中至少75％的所述脂质体的直径是约0.5μm至约10μm；并且其中所述组合物的粘度是至少20,000厘泊并且含有2％w/w以下的粘度增强剂。
7.根据权利要求1的方法，其中所述药物是抗生素。
8.根据权利要求2的方法，其中所述药物是抗生素。
9.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素选自喹诺酮类抗生素、青霉素类抗生素、大环内酯类抗生素、头孢菌素类抗生素、磺胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂。
10.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括环丙沙星，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
11.权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括氧氟沙星，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
12.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括磺胺二甲基异唑，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
13.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括阿莫西林，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
14.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素以组合物的0.3％w/w的浓度被提供。
15.根据权利要求1的方法，其中所述药物是抗病毒药。
16.根据权利要求2的方法，其中所述药物是抗病毒药。
17.根据权利要求16或17的方法，其中所述抗病毒药是阿昔洛韦。
18.根据权利要求1或2的方法，还包括给予药物以治疗外耳的疼痛、感染或炎症。
19.根据权利要求19的方法，其中治疗所述外耳的疼痛、感染或炎症的所述药物被提供在立体稳定的脂囊泡中。
20.根据权利要求20的方法，其中所述立体稳定的脂囊泡是脂质体。
21.根据权利要求22的方法，其中所述脂质体用胆固醇稳定。
22.根据权利要求19的方法，其中所述药物选自塞来考昔、萘普生、吲哚美辛、酮洛芬、葡萄糖胺、甲磺酰基甲烷、孕烯醇酮、S-腺苷甲硫氨酸、及其中任何两种或多种的组合。
23.根据权利要求20的方法，其中所述药物选自塞来考昔、萘普生、吲哚美辛、酮洛芬、葡萄糖胺、甲磺酰基甲烷、孕烯醇酮、S-腺苷甲硫氨酸、及其中任何两种或多种的组合。
24.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述经膜载体组合物在中耳感染的急性期被施用于鼓膜。
全文摘要
用于治疗和预防中耳感染的方法，通过将含药物的经膜载体组合物如脂质体和其它脂囊泡经膜给予到鼓膜而实施。也可以共同给予用于治疗外耳疼痛、炎症或感染的药物。如果脂质体或其它脂囊泡被用于经膜给予，它们通常不是立体上稳定的。根据本发明方法输送的药物包括，在中耳感染及其后遗症的治疗和/或预防中有用的抗生素、抗病毒药、抗真菌药和抗炎药。
文档编号A61K31/00GK101031282SQ200580029360
公开日2007年9月5日 申请日期2005年9月2日 优先权日2004年9月3日
发明者W·R·坎贝尔 申请人:皮埃蒙特医药品有限公司
技术领域：
本发明涉及治疗中耳炎(中耳感染)的非侵入性方法。更具体地，本发明涉及将用于治疗中耳炎的药物给予到中耳的方法，这通过给予所述药物穿过鼓膜(tympanic membrane)(鼓膜(eardrum))实施。
背景技术：
每年有数百万儿童受到中耳炎，即，中耳感染的侵袭。虽然成人也易受到中耳感染，但儿童特别地处于风险中，因为他们的耳道相对短，更容易受到炎症的接近。随后流体可以在鼓膜(鼓膜)后驻留，这可以引起严重的疼痛，以及为微生物提供在其中繁殖的有利环境。
鼓膜是阻止药物引入中耳的难以逾越的屏障，因此，开处方用于治疗中耳感染的抗生素几乎总是被经口服用。然而，许多细菌和病毒可以引起中耳感染，并且常常不可能区分哪种细菌或病毒是特定感染(particular infection)的原因或者其对口服抗生素的治疗是否敏感。进一步地，口服给予的抗生素对中耳的影响可以被药物的全身分布减弱，这也使得患者处于与全身输送有关的副作用的风险中(例如，女性(雌性)患者中的酵母感染)。
遭受反复感染的儿童可能需要手术以便减轻鼓膜上的流体压力。在更加严重的情况下，可以在鼓膜内设置引流管。所述管本身不预防感染的再发生(相反，它们可以作为其它病原体进入中耳的管道)，但是它们可以减轻压力并降低流体在鼓膜后驻留的程度。所述管也为抗生素直接进入中耳提供了潜在的管道；例如，通过施用几滴抗生素并使得它们流入引流管。然而，此方法是侵入性的并且是疼痛的，这表明了对将抗生素引入中耳的其它途径的强烈需求。
发明概述 令人惊奇地，发现药物可以通过经膜输送被直接引入中耳。根据本发明，药物被提供为施用于鼓膜(eardrum(鼓膜))的经膜载体组合物的活性成分，例如能够输送药剂穿过鼓膜的基于脂质的乳剂、脂囊泡、脂质体(liposomes)、脂质体(liosomes)、胶束(micelles)、转移体(transferomes)和聚合物载体。
优选的药物是用于治疗或预防中耳炎(中耳感染)及其后遗症的那些药物。本发明特别适合输送药物如抗生素或抗病毒药(取决于存在的感染源)、抗真菌药和抗炎药或其它止痛药。为了预防慢性复发的中耳感染，本发明方法也可以在活动性感染(active infection)之间应用，以便向中耳输送预防性药剂。
上述本发明概述不是限制性的，从下面对优选实施方式的祥述以及权利要求书来看，本发明的其它特征和优势将是明显的。
发明祥述A.经膜治疗中耳炎的方法 本发明提供了治疗和预防中耳炎的方法，其通过给予经膜载体组合物中的用于预防或治疗中耳感染及其后遗症的药物而实施。本发明源自惊人的发现在合适的载体中，药物可以输送穿过鼓膜而不必刺破该膜(例如，通过插入管或注射)。
“经膜给予(transmembrane administration)是指，将能够穿过鼓膜的本发明经膜载体组合物施用在鼓膜的外耳侧，以便输送药物到中耳。因此，本发明提供了通过向被感染个体的鼓膜经膜给予药物来预防和/或治疗中耳感染及其后遗症的方法。
经膜给予如下实现例如，通过用于向鼓膜施用药物组合物的任何医学上可接受的方式，向鼓膜施用本发明的经膜载体组合物；例如，通过插入无针注射器或滴管进入耳道，向鼓膜施用载体组合物。按照需要反复给予，以便达到所给予抗生素化合物的治疗上有效的剂量水平；例如，由0.3％w/w抗生素组成的5-10滴经膜载体组合物可以每日输送两次，来治疗被侵袭儿童的中耳炎。
本领域普通技术人员熟悉并且能够容易地选择适于被遵循以便治疗特定感染的给药方案。所选择的给药方案将取决于用于输送和应用根据本发明提供的特定载体和药物的已确立的临床方案。在一个实施方式中，药物以基于脂质的载体中的至少约0.3％w/w的浓度被提供。
所述组合物优选地被给予，经膜载体组合物本身作为载体；但是在许多实施方式中，经膜载体可以在载体胶或其它合适载体中给予。
B.用于本发明的基于脂质的载体 虽然本发明不受到有关这种输送行为机制的任何理论的限制，目前认为，适于经膜输送药物的载体是能够与鼓膜中的富含脂质的通道相互作用(例如，范德华相互作用)并且也可能进入所述通道的载体。因此，目前优选的经膜载体是基于脂质的那些载体，如脂质乳剂(包括微乳剂和水包油乳剂)，以及脂囊泡，如脂质体(liposomes)、脂质体(liosomes)、胶束和转移体(超柔性脂囊泡)。当前优选基于磷脂的制剂，特别是本发明中有用的非囊泡制剂。
同样，不应用其作用机制的任何理论来限制本发明，也观察到，经膜输送在感染的急性阶段最有效，其中由于中耳的压力增加，鼓膜向外凸出(即，进入外耳)，这是急性中耳感染的症状特征。凸出表明，流体已经在鼓膜后驻留。本发明基于脂质的载体在鼓膜相反侧上的引入可以产生渗透压差，其有助于药物的经膜运输，或是从基于脂质的载体运输，或是与基于脂质的载体共同运输。
最优选地，脂囊泡经膜组合物是柔性的，这在于它们不包括立体稳定成分，如胆固醇(虽然立体上稳定的囊泡可以用于共同给予药物进入外耳，如下文其它处进一步论述)。进一步地，根据本发明输送的药物优选地在脂相(lipid phase)中携带(例如，在脂质体的脂质双层中)而不是在水相中携带(例如，在脂质体的核心中)。因此，脂溶性药物(通常以比在水相中分散的水溶性药物更高的浓度，在囊泡的脂质双层中提供)是优选的，虽然其对于本发明应用不是必需的。
制备液体乳剂和囊泡的方法是本领域公知的，因此在此仅简要概括本发明中应用的经膜载体组合物的目前最优选的实施方式，不带有立体稳定剂并且几乎不加入或不加入粘度增强剂而制备的脂质体。
“脂质体(liposome)”是指球形囊泡，被规则的脂质双层限定并且包绕水相。脂质体的脂质双层通常由天然或合成磷脂构成，但是也可以由非磷脂构成。脂质体的脂质双层是规则的双层，意味着脂质分子的“头”和“尾”结构被彼此邻接地排列。
本发明中应用的脂质体可以是单层的(具有一个脂质双层)或更优选地是多层的。“多层”的脂质体具有多个层或膜。这种类型的脂质体具有携带脂质双层之间的水性流体的多层脂质双层。多层脂质体具有至少两层脂质。
优选的脂质体是本文所述的脂质体，和共同待审并共同拥有的美国专利申请序列号10/366,584中的脂质体，所述专利申请于2003年2月12日提交，其公开内容以整体并入本文作为参考。然而，本领域普通技术人员会知道，可以应用其它脂质体制剂，包括磷脂酰化合物，如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂类、脑苷脂和神经节苷脂。特别有用的是二酰基磷脂酰甘油，其中脂质部分含有14-18个碳原子，特别是16-18个碳原子，并且是饱和的。例证性磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。这些脂质在本发明的非囊泡经膜载体组合物中也有用。
本发明中应用的脂质体和脂囊泡的大小可以不同——如果存在不同——但是这种囊泡在每批制备物中优选大小一致。脂质体可以达到20μm、25μm或者甚至30μm。但是在优选的实施方式中，约95％的脂质体的直径是从约0.5μm至约10μm。在一个实施方式中，根据本文所述的方法制备的优选组合物中，至少80％的脂质体是约0.5μm至约5μm。鉴于此，术语“约”包括所述值的或上或下5％的范围。脂质体的实际直径是下文的冷却曲线和长度和搅拌或旋涡水合的强度的函数，当这些过程用在脂质体制造中时。在其它实施方式中，脂质体可以是多层状的脂质体，其中单个较大脂质体封入一个或多个较小的脂质体。
根据本领域公知方式制造的传统脂质体可以用在本发明中，但是本发明的优选脂质体不包括现有技术脂质体中发现的脂溶性防腐剂(参见，例如，美国专利号4,761,288和4,897,269，均授予Mezei，均以整体并入本文作为参考)。相反，如共同待审的美国专利申请号10/366584(以整体并入本文)所描述的，本发明的脂质体应用水溶性防腐剂，其可以作为抗微生物剂发挥作用，优选地是苯索铵盐(benzethonium salt)，如苯索氯铵(benzethonium chloride)。
鉴于此，“防腐剂(preservative)”是指被加入经膜载体组合物的成分，其防止微生物在制剂中大量生长和繁殖。进一步地，“水溶性(water soluble)”是指，成分在水中有超过100μg/ml(或0.01％)的水溶解度。在其它实施方式中，成分可以在水中有超过1mg/ml(0.1％)的溶解度。
然而，其它水溶性防腐剂在本发明中也有用，如苯甲酸和benzylkonium salts如benzylkonium chloride。出人意料地发现，为了得到稳定的脂质体，对防腐剂的选择是重要的，因为脂溶性防腐剂由于微生物生长可以弱化脂质体的结构并且使之去稳定，产生具有低粘度的不稳定组合物。其它水溶性防腐剂可以被应用；并被有利地选择，以便在组合物的pH下是有活性的。
在本发明的优选实施方式中，应用的脂质体也包含维生素E作为脂溶性抗氧化剂。抗氧化剂起游离自由基清除剂的作用，协助脂质体达到最大的稳定性。甲基纤维素或其它粘度增强剂包含在欲施用于皮肤的经膜载体组合物中，目的是获得足够的粘度和避免流体组合物。在一个最优选实施方式中，本组合物包括作为抗氧化剂的维生素E，并且包括2％w/w以下或1.5％以下或1.0％以下或0.5％以下或0.25％以下的粘度增强剂。
更优选地，所述组合物不包含任何甲基纤维素或任何其它粘度增强剂，使得活性药物化合物的经膜渗透达到最佳。在一个实施方式中，至少50％的维生素E存在于脂质体的脂质双层中。在其它实施方式中，至少70％或80％或90％或95％的维生素E存在于脂质体的脂质双层中。
“粘度增强剂(viscosity enhancing agents)”意味着加入组合物以便增加粘度的试剂。在25℃，粘度增强剂会增加组合物的粘度至少10,000厘泊。粘度增强剂包括但不限于甲基纤维素、褐藻酸、明胶、阿拉伯树胶(阿拉伯胶(gum Arabic))卡波姆和十六醇十八醇混合物。不认为磷脂是此定义内的粘度增强剂。与不存在粘度增强剂相比，粘度增强剂会增强粘度至少10,000厘泊，在其它实施方式中，与组合物中不存在粘度增强剂相比，粘度增强剂会增强粘度20,000或30,000厘泊(达到高如40,000或50,000厘泊)。
因此，在多种实施方式中，本发明的优选经膜载体组合物含有2％w/w以下或1％以下，或0.5％以下或甚至0％的粘度增强剂。例如，在多种实施方式中，组合物含有这些量以下的有机或无机盐，如盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐、氢溴酸盐、或氢碘酸盐。组合物也优选含有2％w/w以下或1％以下或甚至0％的溴化钾、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸钾、碘化钾、硝酸钾、溴化锂、氯化锂、碘化锂、硝酸锂、硫酸锂、溴化铵、氯化铵、碳酸铵、碳酸氢铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、碘化铵、硝酸铵、硫酸铵、溴化钠、碳酸钠、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硝酸钠、磷酸钠和硫酸钠。
在经膜载体组合物中优选以2％w/w以下或1％以下或甚至0％存在的其它盐包括链烷醇胺氯化物、硫酸盐、磷酸盐、苯甲酸盐、醋酸盐、水杨酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、葡萄糖酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐、丙酸盐、抗坏血酸盐、扁桃酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、三乙醇铵氯化物、三乙醇铵磷酸二氢盐、三乙醇铵硫酸盐、苯甲酸钠、苯甲酸钾、苯甲酸铵、乙酸钠、乙酸钾、乙酸铵、水杨酸钠、水杨酸钾、水杨酸铵、草酸钠、草酸钾、草酸铵、邻苯二甲酸钠、邻苯二甲酸钾、邻苯二甲酸铵、葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、葡萄糖酸铵、1-萘磺酸铵、2-萘磺酸钾、2-萘磺酸铵、2-萘磺酸钠、酒石酸钾、马来酸钠、马来酸钾、丙二酸钠、琥珀酸钠、延胡索酸钠、丙酸钠、三乙醇铵丙酸盐、抗坏血酸钠、三乙醇铵抗坏血酸盐、抗坏血酸钾、扁桃酸钠、苹果酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸钾、和三乙醇铵柠檬酸盐。
在多种实施方式中，用于本发明的经膜载体组合物具有至少10,000厘泊或至少20,000厘泊或至少30,000厘泊或至少40,000厘泊或至少50,000厘泊或至少60,000厘泊或至少70,000厘泊的粘度，均在58℃下，不存在任何甲基纤维素或其它粘度增强剂。由于配制物中不存在甲基纤维素和其它粘度增强剂，经膜渗透性被大大增加。在一个实施方式中，油醇可以被加入以增强药物的经膜渗透性，所述油醇在组合物中，但存在于脂质体的外部。
不希望受到任何特定理论的限制，认为，为这些特定脂质体提供稳定性的是水溶性防腐剂和脂溶性抗氧化剂的组合。这使得脂质体稳定并且也具有高度粘性。尽管经膜载体组合物含有非常少的粘度增强剂或不含有粘度增强剂，高度粘性也是可能的。认为粘度增强剂损害活性化合物的跨皮肤运动。在给予该活性化合物中，本组合物提供了最大程度的皮肤渗透性的优越性质，同时保持足够的粘度。
如果脂质体是基于磷脂的囊泡，优选的脂质将是phospholipon 9OH，其从大豆卵磷脂中得到并纯化，化学名是1，2-二酰基-5N-甘油-3-磷脂酰胆碱。其为最少90％磷脂酰胆碱并且被充分氢化。但普通技术人员会知道，其它脂质也可以用在本发明中。例如，磷脂酰胆碱可以是低纯度的，或者可以含有其它脂质或载体物质如，例如，丙二醇/乙醇、中等链甘油三酯、油/乙醇、磷脂酸、胆固醇和磷脂酰肌醇。磷脂可以是任何天然或合成磷脂，例如，磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、溶血磷脂、卵磷脂或大豆磷脂或它们的组合。磷脂可以是加盐或脱盐的、氢化或部分氢化的、天然的、合成的或半合成的。商业上可得到的磷脂的例子包括但不限于卵磷脂P 123(Pfanstiehl，Waukegen，IL)、Lipoid E80(Lipoid，Ludwigshafen，Germany)；和氢化大豆磷脂Phospholipon 80H、80G、90H和100H(Nattermann，Munich，Germany)和99％纯的大豆磷脂酰胆碱(Avanti Polar Lipids，Alabaster，AL)。
任选地，脱水的醇和丙二醇可以用作脂相的共溶剂，维生素E乙酸盐可以作为抗氧化剂被包含。在多种实施方式中，其它脂质或脂质类似物质用在本发明中，如神经酰胺、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、三亚油精和类似化合物。非磷脂也可以用在本发明中。例如，有用的非磷脂物质包括形成脂囊泡的聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸醚、二乙醇胺、长链酰胺、长链酰基氨基酸酰胺、长链酰胺、聚氧乙烯山梨聚糖油酸盐、聚氧乙烯单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、及其混合物、类似物和衍生物。囊泡也可以包括类固醇，和电荷产生剂。优选的类固醇包括胆固醇、氢化可的松及其混合物、类似物和衍生物。优选的负电荷产生物质是油酸、联十六烷基磷酸盐、棕榈酸、十六烷基硫酸盐、视黄酸、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸和它们的混合物。为了在需要时给囊泡提供净正电荷，可以应用长链胺例如硬脂胺或油胺，长链吡啶化合物例如十六烷基氯化吡啶，季铵化合物或这些物质的混合物，只要液体囊泡可以携带足够量的水相即可。
其它脂质体制剂，包括非磷脂脂质体，可以用在本发明中。对于一般参照，1998年8月2日出版的授予Mezei的美国专利号4,761,288中公开的多相脂质体药物输送系统(其公开内容并入本文，使容易参考)，是本发明中能够应用的脂质体组合物的示范性代表。为了用作经膜载体，将脂质体(或本发明中应用的其它脂囊泡)修饰为立体稳定囊泡，或提供用于靶向，或提供给囊泡(或应用的其它基于脂质的载体)缓慢释放性质，可以干扰组合物的经膜活性，从而不被优选。
本发明中优选应用的经膜载体组合物是“稳定的”，意味着它们可以被存储至少6个月，1年，或2年，而不改变组合物的化学性质或物理性质。
对可以并入本发明中应用的基于脂质的载体的化合物数目没有理论上的限制。然而，如本领域普通技术人员所知，在具有相对高的脂质水含量的脂质体组合物中，包封效率通常较高，在脂相中携带的脂溶性药物通常以比水相中携带的水溶性药物高的浓度提供。
例如，两种或更多种成分可以包封在同一囊泡中，或者如果各种活性化合物是不相容的，则化合物可以被分别包封，并且经膜载体组合物组合在一起以便提供具有两种或更多种适应症的组合物，或者用多种活性化合物治疗单个适应症的组合物。
通过给予经膜载体组合物同时治疗中耳和耳道(例如，治疗前者的感染和减轻后者的肿胀)也是可能的，所述组合物包括第一组用于治疗中耳的一种或多种活性化合物，其包封在囊泡中，和第二组用于治疗耳道的一种或多种活性化合物，其以未包封形式分散在周围的水相中。包封的第一组化合物会跨过鼓膜进入中耳；未包封的第二组化合物不会如此。
共同给予也可以如下实施，例如，以缓慢释放形式给予第二组化合物，如在制造以便抵抗降解的脂质体中。本领域普通技术人员熟悉完成此目标的制造方法，所述方法包括而不是限制于向脂相中加入胆固醇(参见，例如，美国专利号6,352,716，并入本文作为参考，作为为此目的向脂相中加入胆固醇的方法的示例)和在脂质体制造中应用粘度增强剂(如甲基纤维素)。
这种相对不溶的脂囊泡较不适于输送药物穿过鼓膜，但是替代地，可以被期望在输送之处保持缓慢释放含有第二组(或又一组)化合物的药物进入耳道(例如，治疗其中的炎症，或提供止痛剂)。这种囊泡也可以具有有助于治疗或控制外耳感染速率的抗感染性质或其它性质；例如，如果有效的抗感染剂十六烷基三甲基溴化铵被用作囊泡中的正电荷产生物质，就会提供第二种优势。在此实施方式中，随着每一囊泡损坏(deteriorate)，其作为延迟释放的杀菌剂载体而发挥作用。
C.用于治疗和预防中耳炎的有用药物 “药物(medicament)”意味着用于治疗和/或预防中耳感染及其后遗症以及相关的疼痛和炎症的任何生物活性化合物。鉴于此，特别优选的药物是用于治疗或预防哺乳动物，特别是人中耳感染的抗生素。根据感染的严重程度及其原因，这种抗生素包括而不是限制于，阿莫西林(和其它青霉素类)、环丙沙星(和其它喹诺酮类抗生素，如氧氟沙星)、克拉维酸(和其它β-内酰胺酶抑制剂)、头孢克洛(和其它头孢菌素类，如头孢克肟)、阿奇霉素(和其它大环内酯类抗生素如克拉霉素)、和磺胺二甲基异唑(以及其它磺胺类药物，如磺胺甲基异唑)。在本发明中有用的抗生素中，当前优选环丙沙星。
磺胺二甲基异唑和阿莫西林是也被接受用于预防复发性中耳感染的主要的抗生素。广谱抗生素如阿莫西林和环丙沙星特别优选用于治疗中耳感染，特别是在怀疑患有抗生素抗性感染的人中。
用于共同给予或独立于抗生素治疗应用的有用的抗炎化合物包括口服给予中有时效率较差或相当耐受的那些化合物；例如，非类固醇抗炎化合物如萘普生、酮洛芬、塞来考昔(celecoxib)和吲哚美辛。在临床需要时，抗病毒化合物如阿昔洛韦，可以代替抗生素化合物，或作为它们的辅助物而被给予，如许多抗真菌组分。也可以通过向鼓膜施用本发明的经膜载体组合物，给予用于治疗和预防中耳感染及其后遗症的其它药物。
在一些实施方式中，本发明的经膜载体组合物含有一种以上的药物。例如，CLAMOXYL和AUGMENTIN都是口服给予的联合制剂组合物，通常被开处方用于治疗中耳炎。每一组合物含有两种活性抗生素成分，阿莫西林和克拉维酸。提供这种多药剂的经膜载体组合物是特别优选用于适当的适应症。
实施例1示范性制剂A 此部分提供了制备含环丙沙星的本发明经膜载体组合物的原材料的示例。所述经膜载体组合物包括脂质体，并且含有具有列出的w/w百分比的下列成分。
PHOSPHOLIPON90H 5.00或更低醇，脱水，USP(美国药典) 5.00或更低丙二醇，USP 5.00维生素E乙酸盐1.00苯索氯铵 0.02环丙沙星 0.30或按需要提供治疗剂量纯水 76.98或更多实施例2制造制剂A的示范性方法 本部分提供了如何制造含环丙沙星的本发明经膜载体组合物的示例。
水相。本方法优选地用两个带套的不锈钢旋涡水合舱(chamber)实施。在两个舱中的较大一个中，缓慢混合纯水和苯索氯铵，以避免泡沫或表面气泡的形成。施加热，达到水相的目标温度50℃±2℃。覆盖所述舱以防止水蒸发，并配备底部舱门(port)和阀门，以便调节物质流出该容器。
脂相。第二个不锈钢带套混合容器紧靠第一容器而应用。在此第二舱中，首先缓慢混合脱水的醇和丙二醇，以避免泡沫或表面气泡的形成。启动上面的混合器，施加热，达到58±2℃，目标是58℃。当溶液达到目标温度时，加入环丙沙星并充分溶解。随后加入PHOSPHOLIPON90H和维生素E乙酸盐，并与脂相混合，直至溶解/熔解。在整个过程中，在舱上使用覆盖物，以防止醇蒸发。
脂相的水合。打开舱的底部舱门上的阀门，调节来自两个容器的液流。水相和油相流动并且在管路调节三通管(in-line regulatingtee)处会合，分散泵将两相吸(pull)在一起。混合物通过60网孔(每平方英寸的孔限数)分散筛循环，以便优化脂相的水合。随后将混合物引到舱顶，整个过程通过泵循环，返回舱，用时10分钟。
冷却相。循环之后，使舱套冷却，同时持续缓慢混合，直至产物温度为28℃，结束过程。物质的混合优选地足够快，以便彻底混合而不引起表面泡沫或气泡的形成。冷却过程优选缓慢，每小时冷却约6℃是最优选的。
实施例3应用示范性制剂治疗中耳炎 为了治疗感染个体的中耳感染及其后遗症，通过经膜给予鼓膜，将根据本发明的含药物脂质体给予患者。药物是在中耳感染的预防和/或治疗中有用的药物，是抗生素、抗病毒药或止痛药，如非类固醇抗炎药。
经膜给予是通过例如，用无针注射器或适于医学插入耳道的其它器械将本发明的经膜载体组合物施用于鼓膜而实现的。如需要，反复给予，以获得所给予抗生素化合物的治疗有效剂量水平。疼痛可以通过以相同的一般方式给予含止痛和/或抗炎剂的本发明经膜载体组合物而被治疗。
基于用于通过原位鼓膜引流管将抗生素引入中耳的目前方案，实施例1中所描述的示范性制剂的合适的给药方案为对于12岁以下的儿童是5滴/日两次，12岁或更年长的儿童是10滴/日两次。
针对中耳感染复发的预防性治疗可以以相同的方式提供，其中利用含预防有效的抗生素或其它药物的本发明经膜载体组合物。
本发明已经被充分描述，其实施通过下文的实施例示例。这些实施例对实施本发明的方法和可以从而得到的结果是代表性的，不是穷尽的。
实施例4中耳炎的动物(南美洲栗鼠)模型 南美洲栗鼠(Chinchilla lange)是理想地适于作为研究治疗人类中耳炎的效应的动物种类。毛丝鼠科(Chinchillas)是小的，具有与人非常相似的听觉能力，具有与人耳蜗相似的带有膜结构的耳蜗，在长期试验中不表现出老年性耳聋，并且缺乏对天然发生的中耳感染的易感性，而这些对豚鼠和兔子来说是普遍的。参见，例如，Hajek DM，Yuan Z，Quartey MK，Giebink GS.，Otitis MediaThe Chinchilla Model，inZak O，Sande M，editors，Handbook of Animal Models of Infection，SanDiego，CAAcademic Press(1999)，389-403页，其内容并入本文作为参考，以便说明其性质和此动物模型在本领域中的认可度。
为了建立和评价动物模型，对每一南美洲栗鼠接种流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)，直接接种到每个耳的中耳，以100cfu的浓度、以0.2mL体积经鼓泡(transbullar)注射。在开始研究之前，给予每一南美洲栗鼠耳镜检查。本发明组合物或对照口服阿莫西林剂量起始于细菌接种后约48小时。给予所有动物丁丙诺啡(Buprenorphine)，0.05mg/kg，日两次皮下给予，用于在研究期间止痛。
在给药终了(细菌接种后8天)，处死每一动物，用盐水洗涤其耳道并检测。具体地，收集来自每一南美洲栗鼠的中耳的样品。对每个试验程序，一个耳部样品被培养过夜。样品铺板后大约24小时，对其进行计数，记录集落形成单位(cfu)。
实施例5南美洲栗鼠模型的中耳炎治疗(脂质体脂质) 通过管饲，向3只南美洲栗鼠经口给予阳性对照物(阿莫西林)，每日两次，持续6日，相隔约8小时。向2组南美洲栗鼠给予2、4或6滴氧氟沙星0.3％脂质体制剂或环丙沙星0.3％脂质体制剂，每组3只南美洲栗鼠，作为这些动物的最大可行剂量。
每组的结果(3只非怀孕雌性动物/组)如下未治疗动物活动性感染在6天后仍存在。
对照动物阿莫西林，20mg/kg BID，持续6日。在6天后，所有动物不存在活动性感染。
根据本发明方法治疗的动物环丙沙星，4滴BID，持续6日。在6天后，所有动物不存在活动性感染。
氧氟沙星，2滴BID，持续6日。在6天后，2只动物仍然存在活动性感染；第3只动物不存在活动性感染。
氧氟沙星，4滴BID，持续6日。在6天后，1只动物仍然存在活动性感染；另2只动物不存在活动性感染。
实施例6南美栗鼠模型中的中耳炎治疗(非脂质体脂质) 应用脂质体脂质和非脂质体脂质中的环丙沙星制剂，遵照实施例5描述的方案，得到下列结果
这些结果表明了本发明在治疗相关动物模型的中耳感染中的效应，被治疗动物有剂量依赖性。
本文示例性描述的发明可以在本文末具体公开的任何要素或多个要素、限制或多个限制不存在的情况下实施。所应用的术语和表述被用作描述性术语而不是限制性术语，并且不意图于在使用这些术语和表述时排除显示和描述的特征或其部分的任何等同物，而是认识到在要求保护的发明范围内各种修改是可能的。因此，应该理解，尽管本发明通过优选的实施方案和任选的特征被具体地公开，但本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变化，而这些修改和变化被认为包含在本发明的范围之内，如所附权利要求所限定的。
本文提及和引用的文章、专利和专利申请、以及其它所有文献和电子可得信息的内容，以整体并入本文作为参考，并入的程度如同指明每一个别出版物特定地和单独地以整体并入本文作为参考。申请人保留将来自任何这些文章、专利、专利申请或其它文献的任何和所有材料和信息以物理方式并入本申请的权利。
本文示例性描述的发明可以在本文未具体公开的任何要素或多个要素、限制或多个限制不存在的情况下实施。因此，例如，术语“包括”、“包含”、“含有”等将被广义而不受限制地阅读。此外，所应用的术语和表述被用作描述性术语而不是限制性术语，并且不意图于在使用这些术语和表述时排除显示和描述的特征或其部分的任何等同物，而是认识到在要求保护的发明范围内各种修改是可能的。因此，应该理解，尽管本发明通过优选的实施方案和任选的特征被具体地公开，但本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变化，而这些修改和变化被认为包含在本发明的范围之内。
在本文中，本发明已以宽范的和一般性的方式被描述。落入该概括性公开内容中的每一较窄的种类和亚类也形成本发明的一部分。这包括发明的这样的概括性描述，其带有附加条件或从该类中除去任何主题的负限定，不论删除的该物质是否在本文中被具体地叙述。其它实施方式在下面的权利要求书中列出。
此外，当本发明的特征或方面针对马库什组而描述时，本领域技术人员将会知道，本发明因而也针对该马库什组的任何单独成员或亚组成员而描述。
权利要求
1.治疗或预防中耳感染及其后遗症的方法，通过向其经膜给予药物实施，所述方法包括向鼓膜外表面施用经膜载体组合物，所述经膜载体组合物包括用于治疗或预防中耳感染及其后遗症的药物。
2.治疗或预防中耳感染及其后遗症的方法，通过向其经膜给予药物实施，所述方法包括向鼓膜外表面施用非立体稳定的经膜载体组合物，所述经膜载体组合物包括用于治疗或预防中耳感染及其后遗症的药物。
3.根据权利要求1的方法，其中所述经膜载体是脂囊泡。
4.根据权利要求2的方法，其中所述非立体稳定的经膜载体选自由脂质体(liposomes)、胶束(micelles)、脂质体(liosomes)、类脂质体(niosomes)和转移体(transferomes)组成的脂囊泡组。
5.根据权利要求5的方法，其中所述非立体稳定的经膜载体是脂质体。
6.根据权利要求1或2的方法，其中所述经膜载体组合物是脂质体，包括水溶性防腐剂，和脂溶性抗氧化剂；其中至少75％的所述脂质体的直径是约0.5μm至约10μm；并且其中所述组合物的粘度是至少20,000厘泊并且含有2％w/w以下的粘度增强剂。
7.根据权利要求1的方法，其中所述药物是抗生素。
8.根据权利要求2的方法，其中所述药物是抗生素。
9.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素选自喹诺酮类抗生素、青霉素类抗生素、大环内酯类抗生素、头孢菌素类抗生素、磺胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂。
10.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括环丙沙星，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
11.权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括氧氟沙星，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
12.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括磺胺二甲基异唑，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
13.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素包括阿莫西林，并且被给予以治疗或预防中耳感染。
14.根据权利要求8或9的方法，其中所述抗生素以组合物的0.3％w/w的浓度被提供。
15.根据权利要求1的方法，其中所述药物是抗病毒药。
16.根据权利要求2的方法，其中所述药物是抗病毒药。
17.根据权利要求16或17的方法，其中所述抗病毒药是阿昔洛韦。
18.根据权利要求1或2的方法，还包括给予药物以治疗外耳的疼痛、感染或炎症。
19.根据权利要求19的方法，其中治疗所述外耳的疼痛、感染或炎症的所述药物被提供在立体稳定的脂囊泡中。
20.根据权利要求20的方法，其中所述立体稳定的脂囊泡是脂质体。
21.根据权利要求22的方法，其中所述脂质体用胆固醇稳定。
22.根据权利要求19的方法，其中所述药物选自塞来考昔、萘普生、吲哚美辛、酮洛芬、葡萄糖胺、甲磺酰基甲烷、孕烯醇酮、S-腺苷甲硫氨酸、及其中任何两种或多种的组合。
23.根据权利要求20的方法，其中所述药物选自塞来考昔、萘普生、吲哚美辛、酮洛芬、葡萄糖胺、甲磺酰基甲烷、孕烯醇酮、S-腺苷甲硫氨酸、及其中任何两种或多种的组合。
24.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述经膜载体组合物在中耳感染的急性期被施用于鼓膜。
全文摘要
用于治疗和预防中耳感染的方法，通过将含药物的经膜载体组合物如脂质体和其它脂囊泡经膜给予到鼓膜而实施。也可以共同给予用于治疗外耳疼痛、炎症或感染的药物。如果脂质体或其它脂囊泡被用于经膜给予，它们通常不是立体上稳定的。根据本发明方法输送的药物包括，在中耳感染及其后遗症的治疗和/或预防中有用的抗生素、抗病毒药、抗真菌药和抗炎药。
文档编号A61K31/00GK101031282SQ200580029360
公开日2007年9月5日 申请日期2005年9月2日 优先权日2004年9月3日
发明者W·R·坎贝尔 申请人:皮埃蒙特医药品有限公司
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