多硫酸酯化糖苷类及其盐的制作方法
专利名称：多硫酸酯化糖苷类及其盐的制作方法
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发明领域本发明涉及糖苷类、其盐以及含有这些糖苷类作为活性组分的药物组合物。此外，本发明提供了预防、治疗或缓解哺乳动物气道急性和慢性炎症病症-包括哮喘和与哮喘相关的病理情况的症状的方法。
相关领域的概况炎症是为多级级联过程，其中的任意部分可都以为可能的治疗干预的对象。简言之，炎症需要免疫活性细胞(例如嗜酸性细胞、肥大细胞、活化的T-淋巴细胞)浸润入损伤部位，其中它们与居留细胞一起释放生物活性介体物质(例如组胺、蛋白酶、细胞因子和趋化因子的宿主)，增加邻近血管的渗透性，吸引和刺激旁观细胞。血管渗透性改变导致在损伤部位形成流体渗出物，随后反应性白细胞及其最终的流出物进一步流入受损区域(就综述而言，参见，Trowbridge和Emling，InflammationA Review of the ProcessQuintessence Pub.Co.，1997)。居留细胞(释放的介体刺激的平滑肌和上皮细胞或成纤维细胞)分泌胶原蛋白和粘液并且增殖建立了病理性改变的扩散(例如气道堵塞)并且促使它们发展。
炎症与各种肺部疾病相关，包括例如内源性或外源性支气管哮喘、任何炎性肺病、急性或慢性支气管炎、慢性支气管炎继发性肺部炎性反应、慢性阻塞性肺部疾病、肺纤维化以及白细胞起作用的任意肺病，包括，但不限于特发性肺纤维化和任意其它自身免疫性肺病。哮喘为影响肺的大和小气道的最常见形式的肺部炎症之一。它对5％-10％的人群产生影响，据估计每年导致2700万患者就诊，6百万人丧失工作日和9050万个活动受限日。哮喘的发病率和死亡率正在全世界范围内增长(Plaut和Zimmerman，″过敏性和超敏反应机制″-Fundamental Immunology，3rdEd.，Paul(ed.)，Raven Press，NewYork，NY，在1399页(1993))。
已经断定常规的抗-哮喘治疗应严格避开所有引发性变应原(这本身是难以实现的)，并且治疗方案应基于具有不利副作用和最适度以下的药代动力学特性的药物活性剂。用于治疗支气管痉挛的β2-肾上腺素能激动剂对气道炎症或支气管高反应性没有作用(Palmer等，NewEngl.J.Med.3311314(1994))。此外，β2-肾上腺素能激动剂的定期或延长应用与哮喘难以控制、对变应原的气道高反应性增加和支气管收缩保护作用下降相关(Bhagat等，Chest 1081235(1995))。此外，因减量调节β2-肾上腺素能受体而怀疑长期单独使用β2-肾上腺素能药可恶化支气管高反应性。茶碱(抗-哮喘甲基黄嘌呤)的特征在于其吸收度和清除率的显著可变性。皮质类固醇对儿童具有毒性，而在成年患者中相对安全，从而导致肾上腺抑制以及骨密度生长下降(Woolock等，am.Respir.Crit.Care Med.1531481(1996))。如果仅在发作前给予，那么用于预防哮喘发作的色甘酸钠可有效预防哮喘反应(Volcheck等，Postgrad Med.104(3)127(1998))。抗组胺类可临时预防或抑制哮喘发作，特别是在儿童中的哮喘发作，但通常仅为部分有效的，因为组胺类仅为许多炎症相关介体之一(Cuss，″抗哮喘药物的药理学″-Asthma as an Inflammatory Disease.O′Byrne，Ed.，Dekker，Inc.，New York，在199页上(1990))和O′Byrne，″气道炎症和哮喘″-Asthma as an Inflammatory Disease，O′Byrne，Ed.，Dekker，Inc.，New York，NY，143(1990))。
因此，目前的药物形式存在许多缺陷。一般而言，常用的活性剂具有相对短的作用期限并且在抗原攻击发生后给药时可能部分或完全无效。此外，由于与使用诸如β2-肾上腺素能激动剂和皮质类固醇这类活性剂相关的严重不良作用，使用这类活性剂的治疗安全范围相对较窄，并且必须谨慎监测使用这类活性剂的患者(例如，参见WO94/06783、WO 99/06025、美国专利US 5,690,910和US 5,980,865)。在吸入皮质类固醇近期的临床研究中，仅在疗法的第一年后在5-11岁哮喘儿童的气道功能中发生暂时的改善，在接下来的3年内退化至使用安慰剂观察到的水平(“儿童哮喘控制程序研究组”-N.Engl.J.Med.，3431054(2000))。这种退化可以最好地解释为发生在对皮质类固醇呈顽固性的气道中的重塑改变(哮喘的特性特征)(Davies，Curr.Opin.Allergy Clin.Immunol.，167(2001))。
从相关文献中已知某些多硫酸酯化(polysulfated)二糖类的混合物-具有与本发明化合物极为相近的结构并且通过下列步骤合成对作为例如肝素或硫酸肝素的这类天然产物进行亚硝酸处理，随后用硼氢化物还原且随后对部分纯化的样品进行硫酸化(US 5,690,910；US5,980,865和WO 02/083700)-在不同哮喘模型中展示出显著的抗炎作用。
发明概述本发明涉及新糖苷类和制备这类化合物的方法以及含有这类化合物的药物组合物，这类化合物具有充分定义的化学结构，具有比已知抗哮喘药更为有利的药理特性和更低的有害的副作用。本发明进一步涉及治疗需要治疗的患者的方法，包括对所述的患者给予所述新糖苷类和所述糖苷类的组合物。
发明详述根据上述事实，本发明涉及通式(I)的新多硫酸酯化糖苷类及其可能的异构体及其药物上可接受的盐 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6彼此独立地表示-H、C1-4烷基、-SO3H、硫酸化或未硫酸化糖基或硫酸化或未硫酸化二糖基-条件是R1-R6中至少一个为硫酸化或未硫酸化糖基或硫酸化或未硫酸化二糖基。术语″药物上可接受的盐″包括例如碱金属和碱土金属盐以及任意其它结合在分子个一个或多个硫酸根基团上的药物上可接受的抗衡离子或多种抗衡离子。
当所述糖醇的所有4个仲碳原子代表手性中心时，通式(I)显然包括所有可能的立体异构体(蒜糖醇、半乳糖醇、艾杜糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醇和塔罗糖醇)及其D-和L-对映体。本文的术语″异构体″包括通式(1)化合物中的所有这类化合物及其变体。
硫酸化糖基的含义可以为具有任选构型的任意的吡喃戊糖或吡喃己糖分子，其中的一个或多个羟基为O-硫酸酯和并且糖部分通过α-或β-键与糖苷配基的异头碳原子连接。未硫酸化的糖基含有所有的羟基或其被保护形式。未被保护的化合物可用作生产本文所述的硫酸化化合物的中间体。
多硫酸酯化二糖基的含义可以为具有任选构型的任意的吡喃戊糖或吡喃己糖分子，其中的羟基之一被具有任选构型的额外的吡喃戊糖或吡喃己糖分子糖基化，并且由此形成的二糖基单元的所有羟基为0-硫酸酯且糖部分通过α-或β-键与糖苷配基的异头碳连接。
戊糖类结构中包括所有可能的立体异构体(阿拉伯糖、来苏糖、核糖和木糖)及其D-和L-对映体。类似地，己糖类结构中包括所有可能的立体异构体(阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖和塔罗糖)及其D-和L-对映体。术语″异构体″包括通式(1)化合物中的所有这类化合物及其变化形式。
C1-4烷基的含义为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，优选甲基。
本发明化合物的碱金属盐表示Na、K或Li盐，而碱土金属盐优选Mg和Ca盐。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的优选组，其中R1的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基且R2-R6的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1、R2、R4、R5和R6的含义为-SO3H且R3的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1、R2、R3、R5和R6的含义为-SO3H且R4的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1和R3的含义为多硫酸酯化糖基且R2、R4、R5和R2的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1和R6的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基且R2、R3、R4和R5的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4的含义为C1-4烷基，而R2、R5和R6的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1和R6的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4的含义为C1-4烷基，而R2和R5的含义为-SO3H。
本发明通式(I)尤其优选的有代表性化合物为，但不限于如下化合物2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇九钾盐；1，2，3，4，5-五-O-硫酸酯化-6-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇七钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基)-D-甘露糖醇十六钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-半乳糖醇十二钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钠盐。
本发明通式(I)的化合物可以通过使用已知方法将其游离羟基转化成硫酸酯类由通式(II)的化合物合成 其中R7、R8、R9、R10、R11和R12彼此独立地表示氢原子、C1-4烷基、糖基或二糖基且R7-R12中至少一个为糖基或二糖基。
可以将三氧化硫或其与有机碱(例如三乙胺或吡啶)或与二甲基甲酰胺形成的加合物作用制备O-硫酸酯类的试剂。
例如，可以任选使用碱金属或碱土金属乙酸盐将通过上述方法获得的单官能酸性酯类转化成盐。转化后，可以通过冷冻干燥、沉淀或结晶获得盐。
例如，可以通过下列已知方法合成通式(II)的某些化合物，它们用作上述方法中合成本发明通式(I)化合物的原料例如，可以通过使用作为供体分子的通式(III)或(IV)的化合物和作为受体的通式(V)的化合物合成那些通式(II)的那些化合物，其中R7和R8之一表示糖基，而另一个表示氢原子，并且R9-R12的含义为氢原子 在通式(III)或(IV)的化合物中，X表示卤原子、三氯乙酰亚氨酸酯或苯硫基并且R13-R19表示脂族或芳族酯或醚基，通式(V)化合物中， R20和R21表示氢原子，R22-R25表示醚类保护基，并且在有合适的活化剂存在下进行糖基化。然后从由此获得的通式(V)的化合物(其中R22-R25表示醚类保护基)上裂解保护基，而R20和R21之一表示被保护的糖基，而另一个为氢原子。
按照另一种方法，通式(V)的化合物用作上述反应中的受体，其中R20和R22表示氢原子，而R21、R23、R24和R25表示醚类保护基，然后从由此获得的通式(V)的化合物上裂解保护基-其中R21、R23、R24和R25为醚类保护基，R20表示被保护的糖基且R22为氢原子。
例如，可以通过按照方法b)进行糖基化，但使用过量的供体分子合成那些通式(II)的化合物，其中R7和R9表示糖基，而R8、R10、R11和R12表示氢原子，并且从由此获得的一般通式(V)的化合物上裂解保护基-其中R20和R22表示被保护的糖基且R21、R23、R24和R25表示醚类保护基。
例如，可以通过使用作为供体分子的通式(VI)或(VII)的化合物合和作为受体的通式(V)的化合物合成那些通式(II)的那些化合物，其中R7和R8之一表示二糖基，而另一个表示氢原子，并且R9-R12的表示氢原子
在通式(VI)或(VII)的化合物中，X表示卤原子、三氯乙酰亚氨酸酯或苯硫基并且R26-R32表示脂族或芳族酯或醚基，通式(V)化合物中R20和R21表示氢原子，R22-R25表示醚类保护基，并且在有合适的活化剂存在下进行糖基化。然后从由此获得的通式(V)的化合物(其中R22-R25表示醚类保护基)上裂解保护基，而R20和R21之一表示被保护的糖基，而另一个为氢原子。
例如，可以通过使用通式(V)的化合物合成那些通式(II)的化合物，其中R7表示二糖基，在上述反应中作为受体的通式(V)的化合物中，R20和R25为氢原子，R21和R24表示酯类保护基，而R22和R23为醚类保护基，然后从由此获得的通式(V)的化合物上裂解保护基-其中R21和R24表示酯类保护基，而R22和R23表示醚类保护基，R20表示被保护的二糖基且R25为氢原子。
例如，可以通过使用过量的作为供体分子的通式(VI)或(VII)的化合物和作为受体的通式(V)的化合物合成那些通式(II)的化合物，其中R7和R12表示二糖基，并且R8-R11表示氢原子，在通式(VI)或(VII)的化合物中，X表示卤原子、三氯乙酰亚氨酸酯或苯硫基，并且R26-R32表示脂族或芳族酯或醚基，在通式(V)的化合物中，R20和R25表示氢原子，R21和R24表示酯类保护基，而R22和R23为醚类保护基，并且在有合适的活化剂存在下进行糖基化。然后从由此获得的通式(V)的化合物上裂解保护基，其中R21和R24表示酯类保护基，R22和R23表示醚类保护基，而R20和R25为被保护的二糖基。
在上述糖基化反应中，可以将汞或银盐、二乙基醚合三氟化硼、N-碘代琥珀酰亚胺和三氟甲磺酸或后两者的混合物用作活化剂。
可以通过酸水解或在就醚类和缩醛类而言在有催化剂存在下的还原对保护基进行裂解，而就酯类的情况而言，可以使用Zemplén法(碱催化的转酯化)或在有碱存在下的水解。
用于描述的缩写和表述Ac＝乙酰基Bz＝苯甲酰基
Me＝甲基Ph＝苯基NIS＝N-碘代琥珀酰亚胺TfOH＝三氟甲磺酸作为本说明书中使用的，除非另有清楚地陈述，否则单数形式″一种(a)″、″一种(an)″和″该(the)″也特别包括该术语意旨的复数形式。例如，所谓″一种调节剂″包括多种调节剂的混合物。
作为本说明书中使用的，无论是在过渡性的术语，还是在权利要求的整体中，术语″包括(comprise(s))″和″包括(comprising)″应解释为具有开放式的含义。即，该术语应解释为与术语″至少具有″或″至少包括″同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包括″意旨至少包括所述的步骤，但可以包括额外的步骤的方法。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语″包括″意旨化合物或组合物至少包括所述的特征或成分，但也可以包括额外的特征或成分。
本文所用的术语″约″意旨近似、大约在一定区间内或在其左右。当术语″约″与数值范围联用时，它可以通过延伸所述数值的上下边界而改变该范围。一般而言，本文所用的术语″约″可以在高于和低于所述数值20％变量之间改变。
除非另有陈述，否则，本文所用的措词″或″以″包含″性的“和/或”含义使用″而不是以″排除″性″任一/或″含义使用。
本文所用的术语″治疗(treating)″或″治疗(treatment)″用于表示减少、缓解、预防、抑制疾病症状的发生和/或逆转疾病症状。本发明方法和组合物治疗的疾病包括任意特征在于或包括气道急性和慢性炎性病症。因此，术语″炎性病症″或″气道炎性病症″包括任意炎性肺病，包括哮喘、内源性或外源性支气管哮喘、急慢性支气管炎、过敏性鼻炎、慢性支气管炎继发性肺部炎症结构反应、慢性阻塞性肺部疾病、肺纤维化。本发明还用于肺部疾病，其中白细胞和气道再塑可能起作用，包括，但不限于特发性肺纤维化和任意其它自身免疫性肺病。
所谓″哮喘″意旨过敏性来源的疾病，其症状包括伴随喘鸣的连续性或阵发性用力呼吸、胸内压迫感和经常性的咳嗽或喘发作。所谓″哮喘-相关病理情况″意旨症状实际上主要为与支气管痉挛相关的炎症的疾病。因此，哮喘和哮喘-相关病理情况的特征在于如下症状，包括因平滑肌不同程度收缩(痉挛)导致的气道狭窄，粘膜水肿，包括上气道粘膜水肿和支气管和和细支气管腔内的粘液。″哮喘-相关病理情况″的非限制性的有代表性的实例包括特征在于气道高反应性的非-哮喘性疾病(例如慢性支气管炎、肺气肿、囊性纤维化和呼吸性窘迫)。
本文教导的组合物和方法针对哮喘举例说明。然而，本发明不应限于这种特定的肺病。哮喘提供了已经广泛研究的优点并且提供了用于评价本发明的几种可接受的模型。已知致敏和变应原攻击产生对各种激动剂的气道高反应性。因此，称作致痉剂的乙酰胆碱能够在变应原攻击后诱导获自处死动物气管的组织中肌细胞比获自对照组动物更显著地收缩(已经致敏以便引起气道高反应性)(例如，参见Tokuoka等，Br.J.Pharmacol 1341580(2001)；Nakata等，Int.Immunol.13329(2001)；Emala和Hirshman，Monogr.Allergy 3335(1996))。
哮喘最突出的特征在于支气管痉挛或气道狭窄。哮喘患者具有突出的大和小气道平滑肌收缩、粘液产生增加和炎症增加(Plaut和Zimmerman，文献同上)。哮喘中炎症反应以被粘膜覆盖的组织为典型并且特征在于血管舒张、血浆渗出、诸如中性白细胞、单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和嗜酸性细胞这类炎症细胞募集至炎症部位和居留组织细胞(例如肥大细胞或气道上皮细胞)或迁移炎症细胞释放炎症介体(Hogg，″哮喘的病理学″-Asthma as an Inflammatory Disease.O′Byrne(ed.)，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY，在1页上，(1990))。哮喘可以由各种原因引起，诸如过敏反应、感染继发性反应、工业或职业性暴露、某些化学品或药物摄取、锻炼(Hargreave等，J.Allergy Clin.Immunol.831013(1986))。
还发现本发明通式(I)的化合物可有效减少支气管上皮细胞的粘液产生并且抑制生长因子介导的平滑肌细胞增殖。
气道抗原和非抗原性刺激物可以诱导支气管高反应性增加(AHR)，即更严重型哮喘的标志。变应原诱导的哮喘中的晚期反应和持续高反应性与白细胞，且特别是嗜酸性细胞募集至发炎的肺组织相关(Abraham等，Am.Rev.Respir.Dis.1381565(1988))。嗜酸性细胞释放几种炎症介体，包括15-HETE、白细胞三烯C4、PAF、阳离子蛋白、嗜酸性细胞过氧化物酶。
术语″抗原″和″变应原″可以互换使用，以便描述诸如可以诱导过敏反应和/或诱导患有哮喘的个体的哮喘症状的粉尘或花粉这类分子。因此，使变应原或抗原″攻击的″哮喘个体接触足量的变应原或抗原，以便诱导哮喘反应。发现本发明通式(I)的化合物可有效治疗卵清蛋白致敏和抗原攻击后的AHR。
本发明通式(I)化合物在不同生物模型中的生物活性证实如下模型1对离体气道高反应性局部给予多硫酸酯化糖苷类的作用检验气道炎症可以导致支气管高反应性，其为哮喘的特性特征。
通过在第1天时皮下注射0.5ml OA/Al(OH)3凝胶混合物(2mg OA+10g Al(OH)3/100ml盐水)，随后在第14和21天时给予皮下注射(10mg OA+10g Al(OH)3/100ml盐水)主动使棕色挪威(BN)大鼠对卵清蛋白(OA)致敏。在第28天时，在抗原攻击前2小时动物经气管内接受实施例4中所述的化合物(0.01；0.1或1.0mg/kg剂量)。通过吸入雾化卵清蛋白进行抗原攻击(给予在TSE吸入系统中的1％抗原溶液1小时)。抗原攻击后48小时处死动物，其中将气管移至器官浴槽。使剖离的气管平衡30分钟，之后确定对乙酰胆碱(Ach)的气管致痉响应曲线。
正如表1中所示，当在抗原攻击后48小时测定对致痉剂的反应时，对该模型中致敏动物的卵清蛋白攻击产生对乙酰胆碱的显著气管高反应性。0.01mg/kg剂量的实施例4中所述的化合物使这种升高几乎返回至对照组水平。
表1抗原攻击和用实施例4化合物的气管内预治疗对乙酰胆碱在BN-大鼠中产生的气管收缩的作用
*-logM乙酰胆碱(Ach)，与对照组相比产生50％收缩(平均值±SEM)**在最大Ach浓度下与对照组相比的收缩(平均值+SEM)模型2多硫酸酯化糖苷类对变应原刺激的气道上皮细胞粘液产生的作用检验在致敏的动物中，抗原攻击导致气道上皮细胞产生粘液，其为过敏性哮喘的特性特征。
在抗原攻击前2小时，使用模型1中所述类似的方案经气管内用不同(0.01-1.0mg/kg)剂量的实施例4中所述的化合物处理致敏的BN大鼠。在攻击后48小时收集肺并且固定在8％磷酸盐缓冲的甲醛中。然后处理样品以便进行常规的组织化学检查。用过碘酸-希夫(PAS)试剂染色5μm厚度的切片并且使用苏木精-曙红进行复染。在整个制备过程中以400x的放大倍数对切片上气道的上皮细胞各自进行计数。将PAS(+)[产生粘液]上皮细胞的数量表示为占总上皮细胞数量的比例。
正如表2中所示，变应原攻击刺激了气道上皮细胞粘液产生(对照组与攻击组)。所述化合物显著减少了PAS(+)，即在施加较高剂量时产生粘液的细胞的数量。
表2抗原攻击和用实施例4化合物的气管内治疗对变应原诱导的BN大鼠气道上皮细胞粘液产生的作用
*-占总细胞数量百分比的PAS(+)细胞数量(平均值±SEM)模型3.
多硫酸酯化糖苷类对哮喘性肺组织中发生的血管周围水肿的作用的检验。
在致敏动物中，作为发生炎症过程的结果，抗原攻击增加了血管渗透性，导致脉管系统周围血浆渗出(excudation)。
在抗原攻击前2小时，使用模型1中所述类似的方案经气管内用不同(0.01-1.0mg/kg)剂量的实施例4中所述的化合物处理致敏的BN大鼠。在攻击后48小时收集肺并且固定在8％磷酸盐缓冲的甲醛中。然后处理样品以便进行常规的组织化学检查。用过碘酸-希夫(PAS)试剂染色5μm厚度的切片并且使用苏木精-曙红进行复染。在5μm切片上，测定脉管系统(vasculare)周围结缔组织的面积并且表示为占相应血管自身面积的比例。
正如表3中所示，变应原攻击导致脉管系统周围水肿，其程度甚至在最小剂量的检验化合物下也得到显著下降。
表3抗原攻击和用实施例4化合物的气管内治疗对BN大鼠发生水肿程度的作用
*-相对于脉管系统面积的水肿面积(平均值±SEM)模型4.
多硫酸酯化糖苷类的IP-3受体的拮抗作用依赖于化学结构的本发明糖苷类在微粒体膜制备物中抑制肌醇-1，4，5-三磷酸(IP3)与其受体结合。当IP3为在活化不同细胞中起显著作用的信使分子时，干扰这种功能可以解释这些多硫酸酯化糖苷类的抗-哮喘作用。
使用大鼠小脑膜制品，按照Worley等(JBC 262，12132，1987)所述测定多硫酸酯化糖苷类的IP3拮抗剂作用。正如表4中所示，实施例1-16中所述的所有化合物均具有不同的IP3拮抗剂活性。
表4多硫酸酯化糖苷类的IP-3受体拮抗作用
预计本发明的药物组合物可用于可以得益于本发明方法的任意的哺乳动物。在这类哺乳动物中位于最前列的是人，不过，本发明并不限于此，并且可应用于兽医应用。因此，本发明″哺乳动物″或″需要的哺乳动物″包括人和非人类的哺乳动物，特别是家养动物，包括，但不限于猫、狗和马。
术语″治疗有效量″用于表示以有效实现所寻求的治疗效果的剂量治疗。此外，本领域技术人员理解可以通过细调和/或通过给予一种以上本发明的化合物或通过给予本发明的化合物与另一种抗哮喘化合物(例如皮质类固醇)来降低或增加本发明化合物的治疗有效量。本发明由此提供了使给药/治疗适合于对指定哺乳动物而言具有特异性的特定紧急策略的方法。正如下文实施例中解释的，例如，可以根据经验，通过以相对低量开始并且在评价有益作用的同时逐步增加易于测定治疗有效量。与评价本发明治疗方法的治疗作用的临床改变包括特征症状和哮喘以及相关病理情况(例如呼吸困难、喘鸣、咳嗽、支气管超敏反应气道重塑)的减少和肺功能测试的改善。这些基于患者的症状和临床医师的观察结果。
本文所用的可变数值范围的描述意旨可以使用等于该范围内的任意值的变量实施本发明。因此，就内在分散的变量而言，该变量可以等于所述数值范围内的任意整数值，包括该范围的端点。类似地，就内在连续的变量而言，该变量可以等于所述数值范围的任意实际值，包括该范围的端点。作为实例，就内在分散的变量而言，描述为具有0-2之间的值的变量可以为0、1或2，并且就内在连续的变量而言，可以为0.0、0.1、0.01、0.001或任意其它实际值。
例如，就通过吸入的局部给药而言，当进行全身给药(例如口服给药)时，考虑的治疗有效量约为0.1μg/kg/天-约1000μg/kg/天。在本发明的一个实施方案中，当进行全身给药时，治疗有效量约为0.5μg/kg/天-约200μg/kg/天。
其剂型和给药频率取决于本领域技术人员为获得在指定哺乳动物中的如上所述的治疗有效量所通常考虑的常规因素。因此，执业医生会考虑所治疗的疾病、所给予的本发明的特定化合物、给药途径和其它临床因素，诸如年龄、体重和哺乳动物病情以及便利性和患者的依从性。
本领域技术人员理解本发明化合物的给药次数将会根据患者与患者的不同，基于在任意指定时间时该患者的特定医学情况的不同而改变。
当施用(诸如用于治疗例如哮喘)时，可以在哺乳动物接触抗原前，同时或之后给予本发明该方面的化合物。此外，与接触抗原相关的本发明化合物的定时给药根据哺乳动物与哺乳动物的不同而改变，这取决于特定情况。本领域技术人员会通过谨慎监测患者，同时改变本发明化合物的定时给药和/或给药次序使给药最优化。因此，可以理解哺乳动物并不是需患有肺部炎症才能得益于本发明。可以对易于发生哮喘和/或哮喘-相关病理情况的个体预防性给予本发明的化合物。例如，可以基于每天和/或在准备去花粉丰富的地区(例如花园)前对花粉过敏个体给予本发明化合物(例如通过口服给药)。同样，可以对仅具有哮喘发作家族史的个体预防性给予本发明的化合物，以便预防或抑制这类哮喘发作的可能发生。
基于上述事实，本发明还提供了治疗哺乳动物气道急性和慢性炎性病症，包括哮喘和哮喘-相关病理情况的方法。该方法包括对需要这类治疗的哺乳动物给予治疗有效量的通式(I)的化合物。
可以使用任意众所周知的药物上可接受的载体，包括稀释剂和赋形剂最优化配制本发明的化合物(参见Remington′s PharmaceuticalSciences，18thEd.，Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA 1990和RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams&Wilkins，1995)。尽管用于生产本发明组合物的药物上可接受载体/媒介物的类型根据组合物对哺乳动物的给药方式的不同而改变，但是药物上可接受的载体一般为生理惰性的并且是无毒性的。本发明的组合物制剂可以含有一种以上类型的本发明化合物以及任意其它用于治疗所治疗的特定肺部炎症的药物活性组分。这类化合物可以包括，但不限于β-肾上腺素受体(andrenoceptor)拮抗剂沙丁胺醇、间羟异丙肾上腺素(metaproteranol)、左沙丁胺醇、吡布特罗、沙美特罗、比托特罗；糖皮质类固醇倍氯米松、曲安西龙、氟尼缩松、布地奈德、氟替卡松；白细胞三烯-受体拮抗剂；和白细胞三烯合成抑制剂扎鲁司特、孟鲁司特、齐留通(zileutin)；其它抗-哮喘药色甘酸钠、奈多罗米、茶碱；抗胆碱能药ipatropium、氧托胺(oxitropium)、噻托胺(tiotropium)；H1受体拮抗剂抗组胺药苯海拉明(diphenydramine)、美吡拉敏、异丙嗪、氯雷他定(loratidine)、氯环嗪、氯苯脒(chlorophemiramine)、非索非那定和肾上腺皮质类固醇。
可以通过标准途径(例如口服、吸入、直肠、局部，包括口含和舌下，或非肠道，包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、透皮和气管内)给予本发明的组合物。此外，可以按照本领域中标准的方法加入聚合物以便缓释指定化合物。
适合于通过吸入给药的制剂包括可以通过本领域中公知的吸入装置配药的制剂。这类制剂可以包括载体，诸如粉末和气溶胶。本发明包括适合于喷雾和支气管内使用的液体和粉末组合物或通过调配计量剂量的气溶胶装置(″MDI″)给药的气溶胶组合物。所关注的特别优选的装置描述在美国专利US 5,447,150中。
可以在含水药物上可接受的吸入剂媒介物，诸如，例如等渗盐水或制菌水和其它类型的本领域众所周知的媒介物中配制活性组分。可以通过泵或挤压驱动的喷雾配药器或通过任意其它常用装置给予溶液，所述的任意其它常用装置用于产生所需剂量的吸入患者肺部的液体组合物或使其成为可能。
作为解释，含有本发明抗炎化合物的粉末组合物包括将活性组分与乳糖或支气管内给药可接受的其它惰性粉末充分混合的药物上可接受的粉末制剂。可以通过配药器，包括，但不限于气溶胶配药器给予粉末组合物或将其包装在可破裂胶囊中，患者可以将其插入刺破胶囊并且以稳态流吹出的装置。
用于本发明主题的方法的气溶胶制剂包括抛射剂、表面活性剂和共溶剂并且可以将这些制剂填充入通过合适的计量阀封闭的常用气溶胶容器。
为了口服给药，可以将本发明的抗炎组合物制成分散单位，诸如各自含有作为粉末或颗粒的预定量活性组分胶囊、胶囊形片剂、软胶囊、扁囊剂、丸剂或片剂；在含水液体或非水液体中的溶液或混悬液；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂；和大丸剂等。或者，可以通过液体溶液、混悬液或酏剂、粉末、锭剂、微粉化颗粒和渗透递药系统给予本发明所有方面的组合物。
适用于鼻部给药的本发明组合物制剂(其中载体为固体)包括具有例如在20-500微米范围的颗粒大小的粗粉，可以将该制剂以给予鼻吸药的方式给药，即通过从保持接近鼻部的粉末容器经鼻道快速吸入的方式给药。例如通过鼻腔喷雾剂、气溶胶或作为滴鼻剂给药的载体为液体的合适的制剂包括本发明化合物的水或油溶液。半液体制剂，诸如鼻凝胶剂也是合适的。
适合于非肠道给药的组合物制剂包括含水和非水无菌注射溶液，它们可以含有抗氧化剂、稳定剂、缓冲剂、制菌剂和使得制剂与指定接受者血液等渗的溶质；和可以包括悬浮剂和增稠剂的含水和非水无菌混悬液。
通过下列实施例来解释用于合成一般通式(IA)、(IB)和(IC)化合物的方法，它们是本发明一般通式(I)化合物的具有确定立体化学的代表。
用作实施例中原料化合物的通式VIII、IX、XIV、XVIII、XIX、XX、XXI、XXIV、XXIX、XXXIII、XXXVII、XLIII、XLV、XLVII、IL、LIII、LVII和LXI的化合物为通式(II)的立体化学具体定义的异构体纯的代表。其化学结构如下所示
用于合成通式(II)的新原料的通式XI、XII、XIII、XV、XVI、XVII、XXII、XXIII、XXV、XXVI、XXVII、XXVIII、XXXI、XXXII、XXXIV、XXXV、XXXVI、XXXVIII、XLI、XLII、XLIV、XLVI、XLVIII、LI、LII、LV、LVI、LVIII、LIX和LX的化合物为通式(V)的立体化学具体定义的异构体纯的代表。其化学结构如下所示
用于糖基化反应的供体分子为商购的，例如通式(X)的化合物 或可以通过公知方法合成(参见实验部分)，例如，通式(XXX)、(L)和(LIV)的化合物 通过薄层色谱法，使用硅胶(DC-Alufolien Kieselgel 60 F254，Merck，Darmstadt)和下列溶剂混合物测定指定实施例中的Rf值
(A)乙酸乙酯-己烷1∶1(B)乙酸乙酯-己烷1∶2(C)乙酸乙酯-己烷2∶1(D)乙酸乙酯-己烷3∶1(E)乙酸乙酯-甲醇1∶1(F)乙酸乙酯-甲醇3∶1(G)乙酸乙酯-甲醇5∶1用UV光或通过用0.1M KMnO4-1M H2SO4的1∶1混合物喷板，随后加热至200℃检测斑点。用Kieselgel 60进行柱色谱法。在20℃下测定旋光度。使用Bruker Avance 500MHz分光计，应用Me4Si作为内标记录NMR光谱。质子的归属基于COSY、2D和选择性1D TOCSY以及选择性1D NOESY实验。13C光谱的多重性获自DEPT实验。通过HMQC和HMBC实验观察鉴定的质子与质子化碳之间的连接性。
就在有吡啶存在下进行的酰化反应而言，″常用的操作″意旨如果在将反应混合物倾入冰-水后产物不结晶，那么用有机溶剂萃取它，用水、1M冰-冷硫酸水溶液洗涤有机层至持久呈酸性，用水、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥，过滤并且在真空中蒸发溶剂。
例如，通过下列方法合成通式(XIV)化合物的原料步骤a)2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XI)在室温下向搅拌的27g(0.1mol)2，4-O-亚苄基-D-葡萄糖醇(L.Vargha，Ber.68(1935)18-24)在150ml二甲基甲酰胺中的混悬液中加入20ml(0.26mol)2，2-二甲氧基丙烷和100mg对-甲苯磺酸。在搅拌10分钟后，获得澄清溶液并且在1小时后加入1ml三乙胺。浓缩该反应混合物，将残余物溶于氯仿，过滤出不溶性原料，浓缩滤液并且使残余物从200ml苯中重结晶而得到14g(45％)标题化合物。Mp.178℃，Rf0.4(溶剂C)。
步骤b)1-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XII)向上述步骤中获得的3.1g(10mmol)通式(XI)的产物在50ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入4.5g(11mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和3g(12mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用100ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到2.7g(42％)标题化合物，Rf0.7，[α]D+5°(c1，氯仿)。
步骤c)1-O-(β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XIII)在室温下向上述步骤中获得的4.1g通式(XII)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂G)而得到2.2g(73％)标题化合物，Rf0.6，[α]D-8°(c1，氯仿)。
步骤d)1-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇(XIV)向搅拌的上述步骤中获得的3g通式(XIII)的产物在80ml甲醇中的溶液中加入3ml水、1ml乙酸和2g 10％Pd/C催化剂并且在大气压下氢化该混合物。当按照TLC检测反应完全(～4小时)时，过滤出催化剂，将残余物溶于20ml 0.05M硫酸并且在60℃下搅拌90分钟。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤，浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.9g(86％)标题化合物，Rf0.1(溶剂E)，[α]D-105°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XVIII)的原料步骤a)2，4-O-亚苄基-1-O-苯甲酰基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XV)在-20℃下，向搅拌的3.1g(10mmol)2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(L.Vargha，Ber.68(1935)18-24和1377-1384)在10ml吡啶中的溶液中滴加1.3ml(11mmol)苯甲酰氯。将该反应混合物在该温度下搅拌15分钟并且在室温下搅拌30分钟，然后按照常规操作步骤进行后处理。通过柱色谱法纯化在浓缩有机相后获得的残余物(溶剂B)而得到2.5g(60％)标题化合物，为无色糖浆状物。Rf0.6，[α]D-24°(c1，氯仿)。
步骤b)3-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-1-O-苯甲酰基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XVI)向搅拌的上述步骤中获得的2.5g(6mmol)通式(XV)的产物在20ml乙腈中的溶液中加入5g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入2.5g(6mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和1.6g(6.5mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用40ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂A)而得到2.45g(55％)标题化合物，Rf0.5，[α]D-4°(c1，氯仿)。
步骤c)3-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇(XVIII)在室温下，向上述步骤中获得的4.46g(6mmol)式(XVI)的产物在20ml甲醇中的溶液中加入0.2ml 2M在甲醇中的甲醇钠。1小时后，当按照TLC检测脱酰基反应完全时，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将含有脱酰化产物(XVII)和苯甲酸甲酯的残余物溶于50ml甲醇，加入3ml水、1ml乙酸和2g10％Pd/C催化剂并且在大气压下氢化该混合物。当按照TLC检测反应完全(～15小时)时，过滤出催化剂，浓缩滤液，将残余物溶于氯仿和水的混合物并且分离。向水相中加入1.5ml硫酸并且在60℃下搅拌1小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤，浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到2g(97％)标题化合物，为吸湿性粉末，将其不经进一步纯化用于下一步。[α]D-14°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXIV)的原料步骤a)1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XXII)向6.2g(20mmol)2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XI)在200ml乙腈中的溶液中加入24g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入18g(44mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和12g(48mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用400ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。使残余物从150ml甲醇中重结晶而得到1.8g(9.3％)标题化合物，Mp.168-170℃，Rf0.7(溶剂C)，[α]D-5°(c1，氯仿)。
步骤b)1，3-双-O-(β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XXIII)在室温下，向上述步骤中获得的2.65g通式(XXII)的产物在30ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M在甲醇中的甲醇钠。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液而得到1.7g(97％)标题化合物，Rf0.3(溶剂F)。[α]D-8°(c1，水)。
步骤c)1，3-双-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇(XXIV)向搅拌的上述步骤中获得的1.7g通式(XXIII)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入加入3ml水、1ml乙酸和1g 10％Pd/C催化剂并且在大气压下氢化该混合物。当按照TLC检测反应完全(～4小时)时，过滤出催化剂，浓缩滤液，将残余物溶于20ml 0.05M硫酸并且在60℃下搅拌90分钟。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤，浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.25g(92％)标题化合物。Rf0.1(溶剂E)，[α]D-20°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXIX)的原料
步骤a)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-1，6-二-O-三苯甲基-D-甘露糖醇(XXV)在室温下向搅拌的11.1g(50mmol)3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(T.Horváth和L.Vargha，Carbohydr.Res.，16(1971)253-259)在50ml吡啶中的溶液中加入33.4g(120mmol)三苯甲基氯。2天后，向低于20℃的反应混合物中滴加14ml苯甲酰氯。2小时后，将该反应混合物倾入冰-水，从沉淀的糖浆状物中滗析水并且使残余物从400ml乙醇结晶。过滤出结晶物质，用乙醇洗涤并且干燥。使由此获得的产物从2.5-倍乙酸乙酯中重结晶而得到36.1g(79％)标题化合物。Mp.165-167℃，[α]D+7°(c1，氯仿)。
步骤b)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXVI)向上述步骤中获得的30g(33mmol)通式(XXV)的产物在300ml二噁烷中的溶液中加入50ml 0.1M硫酸并且将该溶液在90℃下搅拌6小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂A)并且使获得的粗产物从乙醚-己烷中重结晶而得到3.3g(23.6％)标题化合物。Mp.97-99℃，Rf0.45，[α]D-20°(c1氯仿)。
步骤c)1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXVII)向3g(7mmol)通式(XXVI)的产物在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.5g(16mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和4.4g(18mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)并且将获得的粗产物从乙醇中重结晶而得到2.75g(36％)标题化合物。Mp.193-195℃，Rf0.4，[α]D-28°(c1，氯仿)。
步骤d)1，6-双-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇(XXIX)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的2.6g(2.4mmol)通式(XXVII)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。1小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将含有通式(XXVIII)化合物的水溶液浓缩至15ml体积并且加入1.5ml 1M硫酸。将该溶液在60℃下搅拌90分钟，然后冷却并且通过离子交换树脂中和。将过滤的溶液冷冻干燥而得到1.15g(95％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-23.4°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXXIII)的原料步骤a)1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-吡喃龙胆二糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-4，5-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXI)向搅拌的1.72g(4mmol)2，5-二苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXVI，上述)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6g(8.6mmol)溴乙酰龙胆二糖(XXX)(K.Takiura，S.Honda，T.Endo，K.Kakehi.Chem.Pharm.Bull.20(1972)438-442)和4.4g(18mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液，10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂D)并且将获得的粗产物从乙醇中重结晶而得到1.3g(22％)标题化合物。Mp.＞220℃，Rf0.5，[α]D-16°(c1，氯仿)。
步骤b)1，6-双-O-(β-D-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇(XXXIII)将1.3g(0.78mmol)上述步骤中获得的式(XXXI)的产物在25ml甲醇中的溶液中加入0.25ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物在45℃下搅拌2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将含有通式(XXXII)化合物的水溶液浓缩至15ml体积并且加入1.5ml 1M硫酸。将该溶液在60℃下搅拌90分钟，然后冷却并且通过离子交换树脂中和。将过滤的溶液冷冻干燥而得到0.65g(～100％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-3.5°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXXVII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-吡喃龙胆二糖基)-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXV)向搅拌的2.4g(9.2mmol)1，23，4-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXIV)(L.F.Wiggins，J.Chem.Soc(1946)13-14)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.3g(9mmol)溴乙酰龙胆二糖(XXX)(K.Takiura，S.Honda，T.Endo，K.Kakehi.Chem.Pharm.Bull.20(1972)438-442)和2.5g(10mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液，10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到4.1g(52％)标题化合物。Rf0.4，[α]D+2°(c1，氯仿)。
步骤b)1-O-β-吡喃龙胆二糖基-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXVI)在室温下向上述步骤中获得的3.9g(4.4mmol)通式(XXXV)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M在甲醇中的甲醇钠。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂F)而得到1.6g(62％)标题化合物。Rf0.4。[α]D-5.5°(c1，水)。
步骤c)1-O-β-吡喃龙胆二糖基-D-甘露糖醇(XXXVII)将上述步骤中获得的1.4g(2.4mmol)式(XXXVI)的产物在20ml0.01M硫酸中的溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到1.15g(95％)标题化合物。[α]D-17°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式通式(XLIII)的原料步骤a)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-1，6-二-O-三苯甲基-D-甘露糖醇(XL)向搅拌的6.3g(20mmol)3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI)(J.Kuszmann，Carbohydr.Res.，71(1979)123-134)在60ml吡啶中的溶液中加入20.1g(72mmol)三苯甲基氯。将该反应混合物在室温下搅拌2天，然后向搅拌和冷却的溶液中滴加8.4ml苯甲酰氯。将该反应混合物在室温下搅拌2小时，然后倾入冰-水，用二氯甲烷萃取并且使用常规方式处理有机层。将浓缩后获得的残余物溶于150ml热乙醇，冷却，过滤沉淀的产物并且用乙醇洗涤。将由此获得的粗产物溶于40ml乙酸乙酯并且加入120ml乙醇。过滤出沉淀的产物并且用乙醇洗涤而得到20.25g(75％)标题化合物。Mp.128-130℃，[α]D+45°(c1，氯仿)。
步骤b)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI)向搅拌的上述步骤中获得的20g式(XL)的产物300ml热乙酸中的溶液中分小批加入100ml水并且将该混合物在80-90℃下搅拌30分钟。在冷却后，过滤出沉淀的三苯甲醇并且用氯仿萃取滤液。用水、5％碳酸氢钠水溶液、水洗涤有机层，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂E)而得到7.0g(75.5％)标题化合物，为糖浆状物。Rf0.2，[α]D+33°(c1，氯仿)。
步骤c)
1-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，5，6-三-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLII)向搅拌的上述步骤中获得的6.3g(15mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI)在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.2g(15mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和4.2g(16mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。将残余物溶于50ml吡啶并且在室温下向搅拌的溶液中滴加4ml苯甲酰氯。2小时后，将该反应混合物倾入冰-水，用二氯甲烷萃取并且使用常规方式处理。通过柱色谱法纯化浓缩时获得的残余物(溶剂A)而得到3.5g(27％)标题化合物，为糖浆状物。Rf0.6，[α]D0°(c1，氯仿)。
步骤d)1-O-(β-D-吡喃葡糖基)-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLIII)向搅拌的上述步骤中获得的3.3g(2.87mmol)通式(XLII)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物回流2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至20ml体积并且冷冻干燥而得到1.4g(97％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D+10°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XLV)的原料步骤a)1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLIV)向搅拌的3.34g(8mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI，如上所述)在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入8.2g(20mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和5.5g(22mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)并从乙醇重结晶所获得的粗产物，得到3.4g(39％)标题化合物。Mp.138-140℃，Rf0.35，[α]D+38°(c1，氯仿)。
步骤b)1，6双-O-β-D-吡喃葡糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLV)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的3.1g(2.87mmol)式(XLIV)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.56g(～100％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-4°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XLVII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-吡喃龙胆二糖基)-2，5，6-三-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVI)向搅拌的5.0g(12mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI，如上所述)在70ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入8.4g(12mmol)溴乙酰龙胆二糖(XXX)(K.Takiura，S.Honda，T.Endo，K.Kakehi.Chem.Pharm.Bull.20(1972)438-442)和3.3g(12mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用140ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。将残余物溶于50ml吡啶并且在室温下向该搅拌的溶液中滴加4ml苯甲酰氯。2小时后，将该反应混合物倾入冰-水，用二氯甲烷萃取并以常规方式处理。通过柱色谱法纯化浓缩时获得的残余物(溶剂A)而得到5.2g(38％)粗产物，将其中10倍甲醇重结晶得到纯的标题化合物。Mp.166-168℃，Rf0.6，[α]D+8°(c1，氯仿)。
步骤b)1-O-β-吡喃龙胆二糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVII)向搅拌的上述步骤中获得的2.3g(2.03mmol)式(XLVI)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物回流2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至20ml体积并且冷冻干燥而得到1.05g(97％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-11°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(IL)的原料步骤a)1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-乳糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVIII)向搅拌的3.15g(7.5mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI，如上述)在100ml乙腈中的溶液中加入14g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入12g(17.25mmol)溴乙酰乳糖(C.S.Hudson，J.M.Johnson，J.Am.Chem.Soc.37(1915)1270-1275)和5g(20mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用200ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到4.2g(34％)标题化合物。Rf0.2，[α]D-1.5°(c1，氯仿)。
步骤b)1，6-双-O-β-乳糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(IL)向搅拌的上述步骤中获得的4.2g(2.4mmol)式(XLVIII)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入1.0ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物回流2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.9g(92％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D+28°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(LIII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4-三-O-乙酰基-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LI)向搅拌的3.9g(15mmo1)1，23，4-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXIV)(L.F.wiggins，J.Chem.Soc(1946)13-14)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入5g溴乙酰-D-阿拉伯糖(L)(M.Bárczai-Martos和F.K r_sy，Nature.165(1950)369)和4g(16mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到3.1g(40％)标题化合物。Rf0.5，[α]D-2°(c1，氯仿)步骤b)1-O-α-D-吡喃阿拉伯糖基-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LII)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的2.9g(5.6mmol)式(LI)的产物在30ml甲醇中的溶液中加入0.3ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂G)而得到1.3g(59％)标题化合物。Rf0.5，[α]D+8°(c1，水)。
步骤c)1-O-α-D-吡喃阿拉伯糖基-D-甘露糖醇(LIII)将上述步骤中获得的1.15g(2.92mmol)式(LII)的产物在20ml0.05M硫酸中的溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到0.9g(98％)标题化合物。[α]D-8°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(LVII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基)-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LV)向搅拌的4.2g(16mmol)1，23，4-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXIV)(L.F.wiggins，J.Chem.Soc(1946)13-14)在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.5g(19mmol)溴乙酰-D-木糖(LIV)(M.Bárczai-Martos和F.K r_sy，Nature.165(1950)369)和5.5g(22mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到4.8g(56％)标题化合物。Rf0.6，[α]D-22°(c1，氯仿)。
步骤b)1-O-β-D-吡喃木糖基-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LVI)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的4.6g(8.84mmol)式(LV)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入0.3ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂F)而得到2.2g(63％)标题化合物。Rf0.6，[α]D+1.5°(c1，水)。
步骤c)1-O-β-D-吡喃木糖基-D-甘露糖醇(LVII)将上述步骤中获得的2.0g(5.08mmol)式(LVI)的产物在20ml0.05M硫酸中的溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到1.35g(85％)标题化合物。[α]D-21.5°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(LXI)的原料
步骤a)1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，34，5-二-O-亚异丙基-半乳糖醇(LIX)向搅拌的2.62g(10mmol)2，34，5-二-O-亚异丙基-半乳糖醇(LVIII)(R.M.Honn，W.D.Maclay，CS.Hudson J.Am.Chem.Soc61(1939)2438)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入8.5g(21mmol)溴乙酰-D-葡萄藤(X)和5.0g(20mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。使残余物从5-倍乙醇中重结晶而得到而得到4.9g(53％)标题化合物。Mp.164-166℃，[α]D-25°(c1，氯仿)步骤b)1，6-双-O-(β-D-吡喃糖基)-半乳糖醇(LXI)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的4.65g(5.04mmol)式(LIX)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物(LX)溶于40ml 0.05M硫酸并且将该溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到2.5g(98％)标题化合物。[α]D-29°(c1，水)。
实施例实施例12，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇九钾盐(LXII)(IA，R1＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K)，
将5.1g(48％，30mmol)三氧化硫-二甲基甲酰胺复合物悬浮于5ml无水二甲基甲酰胺中，同时搅拌，将该混合物冷却至-20℃并且逐步加入在5ml二甲基甲酰胺中的0.69g(2mmol)1-O-β-D-吡喃葡糖基-D-甘露糖醇(VIII，Lindberg，Acta Chim，Scand.7(1953)1218)，添加的速率使得保持温度低于-15℃。15分钟后，使该混合物的温度升至-5℃并且保持45分钟。此后再次将该反应混合物冷却至-20℃并且逐步加入1ml乙醇，添加的速率使得保持温度低于-15℃。然后将该反应混合物倾入搅拌和冷却(-5℃)的5g碳酸钾和40ml甲醇的溶液。过滤出沉淀并且用3×40ml甲醇洗涤。将固体残余物溶于40ml水并且用M氢氧化钾溶液将该溶液的pH调节至8，然后浓缩至20ml体积并且冷却至+4℃。过滤出晶体并且用冷水洗涤而得到2.3g(78％)标题化合物。Mp.＞220℃；[α]D+10°(c1，水)。C12H15O38S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 9.95；H 1.27；S 20.27；K 23.92。
实施例21，2，3，4，5-五-O-硫酸酯化-6-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXIII)(IB，R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用6-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(IX，M.L.Wolfrom和T.G.Gardner，J.Am Chem.Soc 65(1943)750-752)作为原料制备标题化合物(LXIII)。Mp.＞220℃，产率76％，[α]D-6°(c1，水)。C12H15O38S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 10.17；H 1.27；S 20.37；K 24.70。
实施例32，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXIV)(IB，R1＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XIV)作为原料制备标题化合物(LXIV)。Mp.＞220℃，产率90％，[α]D-3.5°(c1，水)。C12H15O38S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 10.09；H 1.35；S 20.20；K 29.70。
实施例41，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXV)(IB，R3＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用3-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XVIII)作为原料制备标题化合物(LXV)。Mp.＞220℃，产率87％，[α]D+5°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 10.10；H 1.45；S 20.31；K 24.67。
实施例51，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXVI)(IB，R4＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用4-O-α-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XIX，M.L.Wolfrom等.，J.Am.Chem.Soc.62(1940)2553；E.Dryselius等.Acta Chem.Scand.11(1957)663-667)作为原料制备标题化合物(LXVI)。Mp.＞220℃，产率73％，[α]D+40°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C9.84；H 1.40；S 19.98；K 23.99。
实施例61，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXVII)(IB，R4＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用4-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XX，M.L.Wolfrom等，J.Am.Chem.Soc.74(1952)1105)作为原料制备标题化合物(LXVII)。Mp.＞220℃，产率41％，[α]D+5°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 9.89；H 1.42；S 19.99；K 23.87。
实施例71，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXVIII)(IB，R4＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃半乳糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R5＝R6＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-葡萄糖醇(XXI，W.J.Whelan和K.Morgan，Chem.和Ind.(1955)1449-1450)作为原料制备标题化合物(LXVIII)。Mp.＞220℃，产率40％，[α]D0°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 9.99；H 1.29；S 19.88；K 23.87。
实施例82，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇十二钾盐(LXIX)(IB，R1＝R3＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，3-双-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XXIV)作为原料制备标题化合物(LXIX)。Mp.＞220℃，产率82％，[α]D-6.5°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.15；S 19.99；K 24.38。测定值C 11.01；H 1.32；S 19.07；K 23.99。
实施例92，3，4，5-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐(LXX)(IA，R1＝R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-O-β-D-吡喃葡糖基-D-甘露糖醇(XXIX)作为原料制备标题化合物(LXX)。Mp.＞220℃，产率83％，[α]D+1.5°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.14；S 19.98；K 24.35。测定值C 10.93；H 1.55；S 19.26；K 23.99。
实施例102，3，4，5-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十八钾盐(LXXI)(IA，R1＝R6＝2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-β-吡喃龙胆二糖基七钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-O-β-吡喃龙胆二糖基-D-甘露糖醇(XXXIII)作为原料制备标题化合物(LXXI)，区别在于向浓缩至20ml的极为触变的水溶液中加入20ml乙醇。然后将混合物冷却至+4℃。过滤沉淀出的产物并用乙醇洗涤。Mp.＞220℃，产率99％，[α]D+0°(c1，水)。C30H36O80S18K18计算值C 12.18；H 1.33；S 19.51；K 23.80。测定值C 11.88；H 1.65；S 19.92；K 24.16。
实施例112，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐(LXXII)(IA，R1＝2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基七钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-吡喃龙胆二糖基-D-甘露糖醇(XXXVII)作为原料制备标题化合物(LXXII)。Mp.＞220℃，产率79％，[α]D+6°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.14；S 19.98；K 24.38。测定值C 10.98；H 1.51；S 19.37；K 24.02。
实施例12
3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇七钾盐(LXXIII)(IA，R1＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-D-吡喃葡糖基-D-甘露糖醇(XLVI)作为原料制备标题化合物(LXXIII)，区别在于使用甲醇沉淀粗产物并且过滤，将其溶于水并且用1N氢氧化钾溶液将由此获得的溶液的pH调节至8。随后向该溶液中加入3ml 1N的乙酸锶水溶液，直到不再形成沉淀(SrSO4)。过滤出沉淀并且使滤液经过加载了CHELX 100树脂(钾形式)(10mL)的柱，以便除去锶离子。用蒸馏洗脱该柱，浓缩洗脱液。用乙醇处理残余物，过滤并用乙醇洗涤。Mp.＞220℃，产率94％，[α]D0°(c1，水)。C14H21O32S7K7计算值C 14.02；H 1.76；S 18.71；K 22.82。测定值C 14.06；H 2.02；S 18.31；K 22.67。
实施例133，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十钾盐(LXXIV)(IA，R1＝R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-O-β-D-吡喃葡糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVIII)作为原料制备标题化合物(LXXIV)。Mp.＞220℃，产率85％，[α]D-6.5°(c1，水)。C20H28O46S10K10计算值C 14.00；H 1.63；S 18.68；K 22.78。测定值C 13.85；H1.99；S 18.06；K 21.97。
实施例143，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十钾盐(LXXV)(IA，R1＝2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基七钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-吡喃龙胆二糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVII)作为原料制备标题化合物(LXXV)。Mp.＞220℃，产率99％，[α]D-5°(c1，水)。C20H28O46S10K10计算值C 14.00；H 1.64；S 18.68；K 22.78。测定值C 13.87；H 1.99；S 19.24；K22.43。
实施例153，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基-D-甘露糖醇十六钾盐(LXXVI)(IA，R1＝R6＝2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基七钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-吡喃乳糖基-3，4-二甲基-D-甘露糖醇(LII)作为原料制备标题化合物(LXXVI)。Mp.＞220℃，产率44％，[α]D+2°(c1，水)。C32H42O44S16K16计算值C 13.98；H1.53；S 18.65；K 22.75。测定值C 13.51；H 1.73；S 17.98；K 21.15。
实施例162，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-D-甘露糖醇八钾盐(LXXVII)(IA，R1＝2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃阿拉伯糖基三钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用1-O-α-D-吡喃阿拉伯糖基-D-甘露糖醇(LV)作为原料制备标题化合物(LXXVII)。Mp.＞220℃，产率99％，[α]D+19°(c1，水)。C11H14O34S8K8计算值C 10.49；H 1.12；S 20.36；K 24.83。测定值C 10.06；H 1.40；S 19.56；K 24.04。
实施例172，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基)-D-甘露糖醇八钾盐(LXXVIII)(IA，R1＝2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基三钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-D-吡喃木糖基-D-甘露糖醇(LVII)作为原料制备标题化合物(LXXVIII)。Mp.＞220℃，产率85％，[α]D-6°(c1，水)。C11H14O32S8K8计算值C 10.49；H 1.12；S 20.36；K 24.83。测定值C 10.05；H 1.29；S 19.98；K 14.52。
实施例182，3，4，5-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-半乳糖醇十二钾盐(LXXIX)(IC，R1＝R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-吡喃葡糖基-半乳糖醇(LXII)作为原料制备标题化合物(LXXIX)。Mp.＞220℃，产率83％，[α]D-10°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.15；S 19.99；K 24.38。测定值C 10.98；H 1.35；S 19.28；K 24.07。
实施例191，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃糖基)-D-葡萄糖醇九钠盐(LXXX)(IB，R3＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝SO3Na) 将5.1g(48％，30mmol)三氧化硫-二甲基甲酰胺复合物悬浮于5ml无水二甲基甲酰胺中，同时搅拌，将该混合物冷却至-20℃并且逐步加入在5ml二甲基甲酰胺中的0.52g(1.5mmol)3-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XVII)，添加的速率使得保持温度低于-15℃。将该混合物在5℃下搅拌1小时。此后将该混合物再次冷却至-15℃并且逐步加入1.5ml乙醇，添加的速率使得保持温度低于-10℃。然后将该反应混合物倾入搅拌和冷却(0℃)的5g乙酸钠和40ml甲醇的溶液。过滤出沉淀并且用3×40ml甲醇洗涤。将固体残余物溶于30ml水并且用1M氢氧化钠溶液将该溶液的pH调节至8，然后将3ml 1M乙酸锶溶液加入到该溶液中。30分钟后，过滤出沉淀并且用冷水洗涤。使滤液经过加载了CHELX 100树脂(钠形式)(15mL)的柱，以便除去锶离子。用蒸馏水洗脱柱并且浓缩洗脱液。用乙醇处理残余物，过滤并且用乙醇洗涤而得到1.9g(99％)标题化合物。Mp.＞220℃；[α]D+1.5°(c1，水)。C12H15O38S9Na9计算值C 11.41；H 1.20；S 22.85；Na 24.39。测定值C 11.74；H 1.57；S 22.25；Na 16.09。
等同技术方案尽管已经详细并且参照具体实施方案描述了所要求保护的本发明，但是本领域技术人员理解可以在不脱离本发明实质和范围的情况下对所要求保护的本发明进行公知改变和变型。因此，例如，本领域技术人员将会认识到或能够只是使用常规实验确定与本文所述的具体物质和操作步骤等同的大量技术方案。认为这类等同技术方案属于本发明的范围并且由包括在所附的权利要求书中。
权利要求
1.式(I)化合物或其药物上可接受的盐或异构体 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6彼此独立地表示C1-4烷基、-SO3H、多硫酸酯化糖基或多硫酸酯化二糖基-条件是R1-R6中至少一个的含义为多硫酸酯化糖基或多硫酸酯化二糖基。
2.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R2-R6表示-SO3H。
3.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1、R2、R4、R5和R6表示-SO3H，R3表示多硫酸酯化糖基或二糖基。
4.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1、R2、R3、R5和R6表示-SO3H，R4表示多硫酸酯化糖基或二糖基。
5.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1和R3表示多硫酸酯化糖基，R2、R4、R5和R6表示-SO3H。
6.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1和R6表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R2、R3、R4和R5表示-SO3H。
7.根据权利要求1的式(I)化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4表示C1-4烷基且R2、R5和R6为-SO3H。
8.式(I)化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1和R6表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4表示C1-4烷基且R2和R5为-SO3H。
9.根据权利要求1的式(I)的化合物，选自下列化合物组成的组2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇九钾盐；1，2，3，4，5-五-O-硫酸酯化-6-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇七钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基)-D-甘露糖醇十六钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-半乳糖醇十二钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钠盐。
10.药物组合物，包括如权利要求1所述的化合物及其药物上可接受的载体。
11.权利要求1的化合物在制备适合于治疗哺乳动物气道炎性病症的药物中的应用。
12.权利要求11所述的应用，用于制备适合于治疗气道过敏性炎性病症的药物。
13.权利要求12所述的应用，其中所述的气道过敏性炎性病症选自哮喘、过敏性鼻炎、内源性或外源性支气管哮喘、急性或慢性支气管炎、慢性阻塞性肺部疾病和肺纤维化。
14.一种用于治疗哺乳动物急性或慢性气道炎性病症的方法，该方法包括对有此需要的哺乳动物给予治疗有效量的权利要求1的化合物。
15.权利要求14所述的方法，其中所述的气道炎性病症为过敏性炎性病症。
16.权利要求15所述的方法，其中所述的气道过敏性炎性病症选自哮喘、过敏性鼻炎、内源性或外源性支气管哮喘、急性或慢性支气管炎、慢性阻塞性肺部疾病和肺纤维。
17.权利要求14所述的方法，其中所述的气道过敏性炎性病症选自特发性肺纤维化和自身免疫性肺病。
18.权利要求14所述的方法，包括给予作为单剂量或多剂量的所述化合物。
19.通式(II)的化合物 其中R7、R8、R9、R10、R11和R12彼此独立地表示氢原子、C1-4烷基、糖基或二糖基，R7-R12中至少一个为糖基或二糖基。
全文摘要
本发明涉及通式(I)的多硫酸酯化糖苷类、其药物上可接受的盐以及含有这些化合物作为活性组分的药物组合物。此外，本发明提供了预防、治疗或缓解哺乳动物气道急性和慢性炎性病症－包括哮喘和与哮喘相关的病理情况的症状的方法。
文档编号A61K31/045GK101014607SQ200580029844
公开日2007年8月8日 申请日期2005年8月5日 优先权日2004年8月5日
发明者J·库斯曼, I·库鲁茨, G·麦德伊斯, N·博朵尔 申请人:伊瓦克斯药品研究院有限公司
背景技术：
发明领域本发明涉及糖苷类、其盐以及含有这些糖苷类作为活性组分的药物组合物。此外，本发明提供了预防、治疗或缓解哺乳动物气道急性和慢性炎症病症-包括哮喘和与哮喘相关的病理情况的症状的方法。
相关领域的概况炎症是为多级级联过程，其中的任意部分可都以为可能的治疗干预的对象。简言之，炎症需要免疫活性细胞(例如嗜酸性细胞、肥大细胞、活化的T-淋巴细胞)浸润入损伤部位，其中它们与居留细胞一起释放生物活性介体物质(例如组胺、蛋白酶、细胞因子和趋化因子的宿主)，增加邻近血管的渗透性，吸引和刺激旁观细胞。血管渗透性改变导致在损伤部位形成流体渗出物，随后反应性白细胞及其最终的流出物进一步流入受损区域(就综述而言，参见，Trowbridge和Emling，InflammationA Review of the ProcessQuintessence Pub.Co.，1997)。居留细胞(释放的介体刺激的平滑肌和上皮细胞或成纤维细胞)分泌胶原蛋白和粘液并且增殖建立了病理性改变的扩散(例如气道堵塞)并且促使它们发展。
炎症与各种肺部疾病相关，包括例如内源性或外源性支气管哮喘、任何炎性肺病、急性或慢性支气管炎、慢性支气管炎继发性肺部炎性反应、慢性阻塞性肺部疾病、肺纤维化以及白细胞起作用的任意肺病，包括，但不限于特发性肺纤维化和任意其它自身免疫性肺病。哮喘为影响肺的大和小气道的最常见形式的肺部炎症之一。它对5％-10％的人群产生影响，据估计每年导致2700万患者就诊，6百万人丧失工作日和9050万个活动受限日。哮喘的发病率和死亡率正在全世界范围内增长(Plaut和Zimmerman，″过敏性和超敏反应机制″-Fundamental Immunology，3rdEd.，Paul(ed.)，Raven Press，NewYork，NY，在1399页(1993))。
已经断定常规的抗-哮喘治疗应严格避开所有引发性变应原(这本身是难以实现的)，并且治疗方案应基于具有不利副作用和最适度以下的药代动力学特性的药物活性剂。用于治疗支气管痉挛的β2-肾上腺素能激动剂对气道炎症或支气管高反应性没有作用(Palmer等，NewEngl.J.Med.3311314(1994))。此外，β2-肾上腺素能激动剂的定期或延长应用与哮喘难以控制、对变应原的气道高反应性增加和支气管收缩保护作用下降相关(Bhagat等，Chest 1081235(1995))。此外，因减量调节β2-肾上腺素能受体而怀疑长期单独使用β2-肾上腺素能药可恶化支气管高反应性。茶碱(抗-哮喘甲基黄嘌呤)的特征在于其吸收度和清除率的显著可变性。皮质类固醇对儿童具有毒性，而在成年患者中相对安全，从而导致肾上腺抑制以及骨密度生长下降(Woolock等，am.Respir.Crit.Care Med.1531481(1996))。如果仅在发作前给予，那么用于预防哮喘发作的色甘酸钠可有效预防哮喘反应(Volcheck等，Postgrad Med.104(3)127(1998))。抗组胺类可临时预防或抑制哮喘发作，特别是在儿童中的哮喘发作，但通常仅为部分有效的，因为组胺类仅为许多炎症相关介体之一(Cuss，″抗哮喘药物的药理学″-Asthma as an Inflammatory Disease.O′Byrne，Ed.，Dekker，Inc.，New York，在199页上(1990))和O′Byrne，″气道炎症和哮喘″-Asthma as an Inflammatory Disease，O′Byrne，Ed.，Dekker，Inc.，New York，NY，143(1990))。
因此，目前的药物形式存在许多缺陷。一般而言，常用的活性剂具有相对短的作用期限并且在抗原攻击发生后给药时可能部分或完全无效。此外，由于与使用诸如β2-肾上腺素能激动剂和皮质类固醇这类活性剂相关的严重不良作用，使用这类活性剂的治疗安全范围相对较窄，并且必须谨慎监测使用这类活性剂的患者(例如，参见WO94/06783、WO 99/06025、美国专利US 5,690,910和US 5,980,865)。在吸入皮质类固醇近期的临床研究中，仅在疗法的第一年后在5-11岁哮喘儿童的气道功能中发生暂时的改善，在接下来的3年内退化至使用安慰剂观察到的水平(“儿童哮喘控制程序研究组”-N.Engl.J.Med.，3431054(2000))。这种退化可以最好地解释为发生在对皮质类固醇呈顽固性的气道中的重塑改变(哮喘的特性特征)(Davies，Curr.Opin.Allergy Clin.Immunol.，167(2001))。
从相关文献中已知某些多硫酸酯化(polysulfated)二糖类的混合物-具有与本发明化合物极为相近的结构并且通过下列步骤合成对作为例如肝素或硫酸肝素的这类天然产物进行亚硝酸处理，随后用硼氢化物还原且随后对部分纯化的样品进行硫酸化(US 5,690,910；US5,980,865和WO 02/083700)-在不同哮喘模型中展示出显著的抗炎作用。
发明概述本发明涉及新糖苷类和制备这类化合物的方法以及含有这类化合物的药物组合物，这类化合物具有充分定义的化学结构，具有比已知抗哮喘药更为有利的药理特性和更低的有害的副作用。本发明进一步涉及治疗需要治疗的患者的方法，包括对所述的患者给予所述新糖苷类和所述糖苷类的组合物。
发明详述根据上述事实，本发明涉及通式(I)的新多硫酸酯化糖苷类及其可能的异构体及其药物上可接受的盐 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6彼此独立地表示-H、C1-4烷基、-SO3H、硫酸化或未硫酸化糖基或硫酸化或未硫酸化二糖基-条件是R1-R6中至少一个为硫酸化或未硫酸化糖基或硫酸化或未硫酸化二糖基。术语″药物上可接受的盐″包括例如碱金属和碱土金属盐以及任意其它结合在分子个一个或多个硫酸根基团上的药物上可接受的抗衡离子或多种抗衡离子。
当所述糖醇的所有4个仲碳原子代表手性中心时，通式(I)显然包括所有可能的立体异构体(蒜糖醇、半乳糖醇、艾杜糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醇和塔罗糖醇)及其D-和L-对映体。本文的术语″异构体″包括通式(1)化合物中的所有这类化合物及其变体。
硫酸化糖基的含义可以为具有任选构型的任意的吡喃戊糖或吡喃己糖分子，其中的一个或多个羟基为O-硫酸酯和并且糖部分通过α-或β-键与糖苷配基的异头碳原子连接。未硫酸化的糖基含有所有的羟基或其被保护形式。未被保护的化合物可用作生产本文所述的硫酸化化合物的中间体。
多硫酸酯化二糖基的含义可以为具有任选构型的任意的吡喃戊糖或吡喃己糖分子，其中的羟基之一被具有任选构型的额外的吡喃戊糖或吡喃己糖分子糖基化，并且由此形成的二糖基单元的所有羟基为0-硫酸酯且糖部分通过α-或β-键与糖苷配基的异头碳连接。
戊糖类结构中包括所有可能的立体异构体(阿拉伯糖、来苏糖、核糖和木糖)及其D-和L-对映体。类似地，己糖类结构中包括所有可能的立体异构体(阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖和塔罗糖)及其D-和L-对映体。术语″异构体″包括通式(1)化合物中的所有这类化合物及其变化形式。
C1-4烷基的含义为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，优选甲基。
本发明化合物的碱金属盐表示Na、K或Li盐，而碱土金属盐优选Mg和Ca盐。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的优选组，其中R1的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基且R2-R6的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1、R2、R4、R5和R6的含义为-SO3H且R3的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1、R2、R3、R5和R6的含义为-SO3H且R4的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1和R3的含义为多硫酸酯化糖基且R2、R4、R5和R2的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1和R6的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基且R2、R3、R4和R5的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4的含义为C1-4烷基，而R2、R5和R6的含义为-SO3H。
通式(I)的那些化合物及其碱金属和碱土金属盐代表本发明化合物的另一优选组，其中R1和R6的含义为多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4的含义为C1-4烷基，而R2和R5的含义为-SO3H。
本发明通式(I)尤其优选的有代表性化合物为，但不限于如下化合物2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇九钾盐；1，2，3，4，5-五-O-硫酸酯化-6-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇七钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基)-D-甘露糖醇十六钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-半乳糖醇十二钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钠盐。
本发明通式(I)的化合物可以通过使用已知方法将其游离羟基转化成硫酸酯类由通式(II)的化合物合成 其中R7、R8、R9、R10、R11和R12彼此独立地表示氢原子、C1-4烷基、糖基或二糖基且R7-R12中至少一个为糖基或二糖基。
可以将三氧化硫或其与有机碱(例如三乙胺或吡啶)或与二甲基甲酰胺形成的加合物作用制备O-硫酸酯类的试剂。
例如，可以任选使用碱金属或碱土金属乙酸盐将通过上述方法获得的单官能酸性酯类转化成盐。转化后，可以通过冷冻干燥、沉淀或结晶获得盐。
例如，可以通过下列已知方法合成通式(II)的某些化合物，它们用作上述方法中合成本发明通式(I)化合物的原料例如，可以通过使用作为供体分子的通式(III)或(IV)的化合物和作为受体的通式(V)的化合物合成那些通式(II)的那些化合物，其中R7和R8之一表示糖基，而另一个表示氢原子，并且R9-R12的含义为氢原子 在通式(III)或(IV)的化合物中，X表示卤原子、三氯乙酰亚氨酸酯或苯硫基并且R13-R19表示脂族或芳族酯或醚基，通式(V)化合物中， R20和R21表示氢原子，R22-R25表示醚类保护基，并且在有合适的活化剂存在下进行糖基化。然后从由此获得的通式(V)的化合物(其中R22-R25表示醚类保护基)上裂解保护基，而R20和R21之一表示被保护的糖基，而另一个为氢原子。
按照另一种方法，通式(V)的化合物用作上述反应中的受体，其中R20和R22表示氢原子，而R21、R23、R24和R25表示醚类保护基，然后从由此获得的通式(V)的化合物上裂解保护基-其中R21、R23、R24和R25为醚类保护基，R20表示被保护的糖基且R22为氢原子。
例如，可以通过按照方法b)进行糖基化，但使用过量的供体分子合成那些通式(II)的化合物，其中R7和R9表示糖基，而R8、R10、R11和R12表示氢原子，并且从由此获得的一般通式(V)的化合物上裂解保护基-其中R20和R22表示被保护的糖基且R21、R23、R24和R25表示醚类保护基。
例如，可以通过使用作为供体分子的通式(VI)或(VII)的化合物合和作为受体的通式(V)的化合物合成那些通式(II)的那些化合物，其中R7和R8之一表示二糖基，而另一个表示氢原子，并且R9-R12的表示氢原子
在通式(VI)或(VII)的化合物中，X表示卤原子、三氯乙酰亚氨酸酯或苯硫基并且R26-R32表示脂族或芳族酯或醚基，通式(V)化合物中R20和R21表示氢原子，R22-R25表示醚类保护基，并且在有合适的活化剂存在下进行糖基化。然后从由此获得的通式(V)的化合物(其中R22-R25表示醚类保护基)上裂解保护基，而R20和R21之一表示被保护的糖基，而另一个为氢原子。
例如，可以通过使用通式(V)的化合物合成那些通式(II)的化合物，其中R7表示二糖基，在上述反应中作为受体的通式(V)的化合物中，R20和R25为氢原子，R21和R24表示酯类保护基，而R22和R23为醚类保护基，然后从由此获得的通式(V)的化合物上裂解保护基-其中R21和R24表示酯类保护基，而R22和R23表示醚类保护基，R20表示被保护的二糖基且R25为氢原子。
例如，可以通过使用过量的作为供体分子的通式(VI)或(VII)的化合物和作为受体的通式(V)的化合物合成那些通式(II)的化合物，其中R7和R12表示二糖基，并且R8-R11表示氢原子，在通式(VI)或(VII)的化合物中，X表示卤原子、三氯乙酰亚氨酸酯或苯硫基，并且R26-R32表示脂族或芳族酯或醚基，在通式(V)的化合物中，R20和R25表示氢原子，R21和R24表示酯类保护基，而R22和R23为醚类保护基，并且在有合适的活化剂存在下进行糖基化。然后从由此获得的通式(V)的化合物上裂解保护基，其中R21和R24表示酯类保护基，R22和R23表示醚类保护基，而R20和R25为被保护的二糖基。
在上述糖基化反应中，可以将汞或银盐、二乙基醚合三氟化硼、N-碘代琥珀酰亚胺和三氟甲磺酸或后两者的混合物用作活化剂。
可以通过酸水解或在就醚类和缩醛类而言在有催化剂存在下的还原对保护基进行裂解，而就酯类的情况而言，可以使用Zemplén法(碱催化的转酯化)或在有碱存在下的水解。
用于描述的缩写和表述Ac＝乙酰基Bz＝苯甲酰基
Me＝甲基Ph＝苯基NIS＝N-碘代琥珀酰亚胺TfOH＝三氟甲磺酸作为本说明书中使用的，除非另有清楚地陈述，否则单数形式″一种(a)″、″一种(an)″和″该(the)″也特别包括该术语意旨的复数形式。例如，所谓″一种调节剂″包括多种调节剂的混合物。
作为本说明书中使用的，无论是在过渡性的术语，还是在权利要求的整体中，术语″包括(comprise(s))″和″包括(comprising)″应解释为具有开放式的含义。即，该术语应解释为与术语″至少具有″或″至少包括″同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包括″意旨至少包括所述的步骤，但可以包括额外的步骤的方法。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语″包括″意旨化合物或组合物至少包括所述的特征或成分，但也可以包括额外的特征或成分。
本文所用的术语″约″意旨近似、大约在一定区间内或在其左右。当术语″约″与数值范围联用时，它可以通过延伸所述数值的上下边界而改变该范围。一般而言，本文所用的术语″约″可以在高于和低于所述数值20％变量之间改变。
除非另有陈述，否则，本文所用的措词″或″以″包含″性的“和/或”含义使用″而不是以″排除″性″任一/或″含义使用。
本文所用的术语″治疗(treating)″或″治疗(treatment)″用于表示减少、缓解、预防、抑制疾病症状的发生和/或逆转疾病症状。本发明方法和组合物治疗的疾病包括任意特征在于或包括气道急性和慢性炎性病症。因此，术语″炎性病症″或″气道炎性病症″包括任意炎性肺病，包括哮喘、内源性或外源性支气管哮喘、急慢性支气管炎、过敏性鼻炎、慢性支气管炎继发性肺部炎症结构反应、慢性阻塞性肺部疾病、肺纤维化。本发明还用于肺部疾病，其中白细胞和气道再塑可能起作用，包括，但不限于特发性肺纤维化和任意其它自身免疫性肺病。
所谓″哮喘″意旨过敏性来源的疾病，其症状包括伴随喘鸣的连续性或阵发性用力呼吸、胸内压迫感和经常性的咳嗽或喘发作。所谓″哮喘-相关病理情况″意旨症状实际上主要为与支气管痉挛相关的炎症的疾病。因此，哮喘和哮喘-相关病理情况的特征在于如下症状，包括因平滑肌不同程度收缩(痉挛)导致的气道狭窄，粘膜水肿，包括上气道粘膜水肿和支气管和和细支气管腔内的粘液。″哮喘-相关病理情况″的非限制性的有代表性的实例包括特征在于气道高反应性的非-哮喘性疾病(例如慢性支气管炎、肺气肿、囊性纤维化和呼吸性窘迫)。
本文教导的组合物和方法针对哮喘举例说明。然而，本发明不应限于这种特定的肺病。哮喘提供了已经广泛研究的优点并且提供了用于评价本发明的几种可接受的模型。已知致敏和变应原攻击产生对各种激动剂的气道高反应性。因此，称作致痉剂的乙酰胆碱能够在变应原攻击后诱导获自处死动物气管的组织中肌细胞比获自对照组动物更显著地收缩(已经致敏以便引起气道高反应性)(例如，参见Tokuoka等，Br.J.Pharmacol 1341580(2001)；Nakata等，Int.Immunol.13329(2001)；Emala和Hirshman，Monogr.Allergy 3335(1996))。
哮喘最突出的特征在于支气管痉挛或气道狭窄。哮喘患者具有突出的大和小气道平滑肌收缩、粘液产生增加和炎症增加(Plaut和Zimmerman，文献同上)。哮喘中炎症反应以被粘膜覆盖的组织为典型并且特征在于血管舒张、血浆渗出、诸如中性白细胞、单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和嗜酸性细胞这类炎症细胞募集至炎症部位和居留组织细胞(例如肥大细胞或气道上皮细胞)或迁移炎症细胞释放炎症介体(Hogg，″哮喘的病理学″-Asthma as an Inflammatory Disease.O′Byrne(ed.)，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY，在1页上，(1990))。哮喘可以由各种原因引起，诸如过敏反应、感染继发性反应、工业或职业性暴露、某些化学品或药物摄取、锻炼(Hargreave等，J.Allergy Clin.Immunol.831013(1986))。
还发现本发明通式(I)的化合物可有效减少支气管上皮细胞的粘液产生并且抑制生长因子介导的平滑肌细胞增殖。
气道抗原和非抗原性刺激物可以诱导支气管高反应性增加(AHR)，即更严重型哮喘的标志。变应原诱导的哮喘中的晚期反应和持续高反应性与白细胞，且特别是嗜酸性细胞募集至发炎的肺组织相关(Abraham等，Am.Rev.Respir.Dis.1381565(1988))。嗜酸性细胞释放几种炎症介体，包括15-HETE、白细胞三烯C4、PAF、阳离子蛋白、嗜酸性细胞过氧化物酶。
术语″抗原″和″变应原″可以互换使用，以便描述诸如可以诱导过敏反应和/或诱导患有哮喘的个体的哮喘症状的粉尘或花粉这类分子。因此，使变应原或抗原″攻击的″哮喘个体接触足量的变应原或抗原，以便诱导哮喘反应。发现本发明通式(I)的化合物可有效治疗卵清蛋白致敏和抗原攻击后的AHR。
本发明通式(I)化合物在不同生物模型中的生物活性证实如下模型1对离体气道高反应性局部给予多硫酸酯化糖苷类的作用检验气道炎症可以导致支气管高反应性，其为哮喘的特性特征。
通过在第1天时皮下注射0.5ml OA/Al(OH)3凝胶混合物(2mg OA+10g Al(OH)3/100ml盐水)，随后在第14和21天时给予皮下注射(10mg OA+10g Al(OH)3/100ml盐水)主动使棕色挪威(BN)大鼠对卵清蛋白(OA)致敏。在第28天时，在抗原攻击前2小时动物经气管内接受实施例4中所述的化合物(0.01；0.1或1.0mg/kg剂量)。通过吸入雾化卵清蛋白进行抗原攻击(给予在TSE吸入系统中的1％抗原溶液1小时)。抗原攻击后48小时处死动物，其中将气管移至器官浴槽。使剖离的气管平衡30分钟，之后确定对乙酰胆碱(Ach)的气管致痉响应曲线。
正如表1中所示，当在抗原攻击后48小时测定对致痉剂的反应时，对该模型中致敏动物的卵清蛋白攻击产生对乙酰胆碱的显著气管高反应性。0.01mg/kg剂量的实施例4中所述的化合物使这种升高几乎返回至对照组水平。
表1抗原攻击和用实施例4化合物的气管内预治疗对乙酰胆碱在BN-大鼠中产生的气管收缩的作用
*-logM乙酰胆碱(Ach)，与对照组相比产生50％收缩(平均值±SEM)**在最大Ach浓度下与对照组相比的收缩(平均值+SEM)模型2多硫酸酯化糖苷类对变应原刺激的气道上皮细胞粘液产生的作用检验在致敏的动物中，抗原攻击导致气道上皮细胞产生粘液，其为过敏性哮喘的特性特征。
在抗原攻击前2小时，使用模型1中所述类似的方案经气管内用不同(0.01-1.0mg/kg)剂量的实施例4中所述的化合物处理致敏的BN大鼠。在攻击后48小时收集肺并且固定在8％磷酸盐缓冲的甲醛中。然后处理样品以便进行常规的组织化学检查。用过碘酸-希夫(PAS)试剂染色5μm厚度的切片并且使用苏木精-曙红进行复染。在整个制备过程中以400x的放大倍数对切片上气道的上皮细胞各自进行计数。将PAS(+)[产生粘液]上皮细胞的数量表示为占总上皮细胞数量的比例。
正如表2中所示，变应原攻击刺激了气道上皮细胞粘液产生(对照组与攻击组)。所述化合物显著减少了PAS(+)，即在施加较高剂量时产生粘液的细胞的数量。
表2抗原攻击和用实施例4化合物的气管内治疗对变应原诱导的BN大鼠气道上皮细胞粘液产生的作用
*-占总细胞数量百分比的PAS(+)细胞数量(平均值±SEM)模型3.
多硫酸酯化糖苷类对哮喘性肺组织中发生的血管周围水肿的作用的检验。
在致敏动物中，作为发生炎症过程的结果，抗原攻击增加了血管渗透性，导致脉管系统周围血浆渗出(excudation)。
在抗原攻击前2小时，使用模型1中所述类似的方案经气管内用不同(0.01-1.0mg/kg)剂量的实施例4中所述的化合物处理致敏的BN大鼠。在攻击后48小时收集肺并且固定在8％磷酸盐缓冲的甲醛中。然后处理样品以便进行常规的组织化学检查。用过碘酸-希夫(PAS)试剂染色5μm厚度的切片并且使用苏木精-曙红进行复染。在5μm切片上，测定脉管系统(vasculare)周围结缔组织的面积并且表示为占相应血管自身面积的比例。
正如表3中所示，变应原攻击导致脉管系统周围水肿，其程度甚至在最小剂量的检验化合物下也得到显著下降。
表3抗原攻击和用实施例4化合物的气管内治疗对BN大鼠发生水肿程度的作用
*-相对于脉管系统面积的水肿面积(平均值±SEM)模型4.
多硫酸酯化糖苷类的IP-3受体的拮抗作用依赖于化学结构的本发明糖苷类在微粒体膜制备物中抑制肌醇-1，4，5-三磷酸(IP3)与其受体结合。当IP3为在活化不同细胞中起显著作用的信使分子时，干扰这种功能可以解释这些多硫酸酯化糖苷类的抗-哮喘作用。
使用大鼠小脑膜制品，按照Worley等(JBC 262，12132，1987)所述测定多硫酸酯化糖苷类的IP3拮抗剂作用。正如表4中所示，实施例1-16中所述的所有化合物均具有不同的IP3拮抗剂活性。
表4多硫酸酯化糖苷类的IP-3受体拮抗作用
预计本发明的药物组合物可用于可以得益于本发明方法的任意的哺乳动物。在这类哺乳动物中位于最前列的是人，不过，本发明并不限于此，并且可应用于兽医应用。因此，本发明″哺乳动物″或″需要的哺乳动物″包括人和非人类的哺乳动物，特别是家养动物，包括，但不限于猫、狗和马。
术语″治疗有效量″用于表示以有效实现所寻求的治疗效果的剂量治疗。此外，本领域技术人员理解可以通过细调和/或通过给予一种以上本发明的化合物或通过给予本发明的化合物与另一种抗哮喘化合物(例如皮质类固醇)来降低或增加本发明化合物的治疗有效量。本发明由此提供了使给药/治疗适合于对指定哺乳动物而言具有特异性的特定紧急策略的方法。正如下文实施例中解释的，例如，可以根据经验，通过以相对低量开始并且在评价有益作用的同时逐步增加易于测定治疗有效量。与评价本发明治疗方法的治疗作用的临床改变包括特征症状和哮喘以及相关病理情况(例如呼吸困难、喘鸣、咳嗽、支气管超敏反应气道重塑)的减少和肺功能测试的改善。这些基于患者的症状和临床医师的观察结果。
本文所用的可变数值范围的描述意旨可以使用等于该范围内的任意值的变量实施本发明。因此，就内在分散的变量而言，该变量可以等于所述数值范围内的任意整数值，包括该范围的端点。类似地，就内在连续的变量而言，该变量可以等于所述数值范围的任意实际值，包括该范围的端点。作为实例，就内在分散的变量而言，描述为具有0-2之间的值的变量可以为0、1或2，并且就内在连续的变量而言，可以为0.0、0.1、0.01、0.001或任意其它实际值。
例如，就通过吸入的局部给药而言，当进行全身给药(例如口服给药)时，考虑的治疗有效量约为0.1μg/kg/天-约1000μg/kg/天。在本发明的一个实施方案中，当进行全身给药时，治疗有效量约为0.5μg/kg/天-约200μg/kg/天。
其剂型和给药频率取决于本领域技术人员为获得在指定哺乳动物中的如上所述的治疗有效量所通常考虑的常规因素。因此，执业医生会考虑所治疗的疾病、所给予的本发明的特定化合物、给药途径和其它临床因素，诸如年龄、体重和哺乳动物病情以及便利性和患者的依从性。
本领域技术人员理解本发明化合物的给药次数将会根据患者与患者的不同，基于在任意指定时间时该患者的特定医学情况的不同而改变。
当施用(诸如用于治疗例如哮喘)时，可以在哺乳动物接触抗原前，同时或之后给予本发明该方面的化合物。此外，与接触抗原相关的本发明化合物的定时给药根据哺乳动物与哺乳动物的不同而改变，这取决于特定情况。本领域技术人员会通过谨慎监测患者，同时改变本发明化合物的定时给药和/或给药次序使给药最优化。因此，可以理解哺乳动物并不是需患有肺部炎症才能得益于本发明。可以对易于发生哮喘和/或哮喘-相关病理情况的个体预防性给予本发明的化合物。例如，可以基于每天和/或在准备去花粉丰富的地区(例如花园)前对花粉过敏个体给予本发明化合物(例如通过口服给药)。同样，可以对仅具有哮喘发作家族史的个体预防性给予本发明的化合物，以便预防或抑制这类哮喘发作的可能发生。
基于上述事实，本发明还提供了治疗哺乳动物气道急性和慢性炎性病症，包括哮喘和哮喘-相关病理情况的方法。该方法包括对需要这类治疗的哺乳动物给予治疗有效量的通式(I)的化合物。
可以使用任意众所周知的药物上可接受的载体，包括稀释剂和赋形剂最优化配制本发明的化合物(参见Remington′s PharmaceuticalSciences，18thEd.，Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA 1990和RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams&Wilkins，1995)。尽管用于生产本发明组合物的药物上可接受载体/媒介物的类型根据组合物对哺乳动物的给药方式的不同而改变，但是药物上可接受的载体一般为生理惰性的并且是无毒性的。本发明的组合物制剂可以含有一种以上类型的本发明化合物以及任意其它用于治疗所治疗的特定肺部炎症的药物活性组分。这类化合物可以包括，但不限于β-肾上腺素受体(andrenoceptor)拮抗剂沙丁胺醇、间羟异丙肾上腺素(metaproteranol)、左沙丁胺醇、吡布特罗、沙美特罗、比托特罗；糖皮质类固醇倍氯米松、曲安西龙、氟尼缩松、布地奈德、氟替卡松；白细胞三烯-受体拮抗剂；和白细胞三烯合成抑制剂扎鲁司特、孟鲁司特、齐留通(zileutin)；其它抗-哮喘药色甘酸钠、奈多罗米、茶碱；抗胆碱能药ipatropium、氧托胺(oxitropium)、噻托胺(tiotropium)；H1受体拮抗剂抗组胺药苯海拉明(diphenydramine)、美吡拉敏、异丙嗪、氯雷他定(loratidine)、氯环嗪、氯苯脒(chlorophemiramine)、非索非那定和肾上腺皮质类固醇。
可以通过标准途径(例如口服、吸入、直肠、局部，包括口含和舌下，或非肠道，包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、透皮和气管内)给予本发明的组合物。此外，可以按照本领域中标准的方法加入聚合物以便缓释指定化合物。
适合于通过吸入给药的制剂包括可以通过本领域中公知的吸入装置配药的制剂。这类制剂可以包括载体，诸如粉末和气溶胶。本发明包括适合于喷雾和支气管内使用的液体和粉末组合物或通过调配计量剂量的气溶胶装置(″MDI″)给药的气溶胶组合物。所关注的特别优选的装置描述在美国专利US 5,447,150中。
可以在含水药物上可接受的吸入剂媒介物，诸如，例如等渗盐水或制菌水和其它类型的本领域众所周知的媒介物中配制活性组分。可以通过泵或挤压驱动的喷雾配药器或通过任意其它常用装置给予溶液，所述的任意其它常用装置用于产生所需剂量的吸入患者肺部的液体组合物或使其成为可能。
作为解释，含有本发明抗炎化合物的粉末组合物包括将活性组分与乳糖或支气管内给药可接受的其它惰性粉末充分混合的药物上可接受的粉末制剂。可以通过配药器，包括，但不限于气溶胶配药器给予粉末组合物或将其包装在可破裂胶囊中，患者可以将其插入刺破胶囊并且以稳态流吹出的装置。
用于本发明主题的方法的气溶胶制剂包括抛射剂、表面活性剂和共溶剂并且可以将这些制剂填充入通过合适的计量阀封闭的常用气溶胶容器。
为了口服给药，可以将本发明的抗炎组合物制成分散单位，诸如各自含有作为粉末或颗粒的预定量活性组分胶囊、胶囊形片剂、软胶囊、扁囊剂、丸剂或片剂；在含水液体或非水液体中的溶液或混悬液；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂；和大丸剂等。或者，可以通过液体溶液、混悬液或酏剂、粉末、锭剂、微粉化颗粒和渗透递药系统给予本发明所有方面的组合物。
适用于鼻部给药的本发明组合物制剂(其中载体为固体)包括具有例如在20-500微米范围的颗粒大小的粗粉，可以将该制剂以给予鼻吸药的方式给药，即通过从保持接近鼻部的粉末容器经鼻道快速吸入的方式给药。例如通过鼻腔喷雾剂、气溶胶或作为滴鼻剂给药的载体为液体的合适的制剂包括本发明化合物的水或油溶液。半液体制剂，诸如鼻凝胶剂也是合适的。
适合于非肠道给药的组合物制剂包括含水和非水无菌注射溶液，它们可以含有抗氧化剂、稳定剂、缓冲剂、制菌剂和使得制剂与指定接受者血液等渗的溶质；和可以包括悬浮剂和增稠剂的含水和非水无菌混悬液。
通过下列实施例来解释用于合成一般通式(IA)、(IB)和(IC)化合物的方法，它们是本发明一般通式(I)化合物的具有确定立体化学的代表。
用作实施例中原料化合物的通式VIII、IX、XIV、XVIII、XIX、XX、XXI、XXIV、XXIX、XXXIII、XXXVII、XLIII、XLV、XLVII、IL、LIII、LVII和LXI的化合物为通式(II)的立体化学具体定义的异构体纯的代表。其化学结构如下所示
用于合成通式(II)的新原料的通式XI、XII、XIII、XV、XVI、XVII、XXII、XXIII、XXV、XXVI、XXVII、XXVIII、XXXI、XXXII、XXXIV、XXXV、XXXVI、XXXVIII、XLI、XLII、XLIV、XLVI、XLVIII、LI、LII、LV、LVI、LVIII、LIX和LX的化合物为通式(V)的立体化学具体定义的异构体纯的代表。其化学结构如下所示
用于糖基化反应的供体分子为商购的，例如通式(X)的化合物 或可以通过公知方法合成(参见实验部分)，例如，通式(XXX)、(L)和(LIV)的化合物 通过薄层色谱法，使用硅胶(DC-Alufolien Kieselgel 60 F254，Merck，Darmstadt)和下列溶剂混合物测定指定实施例中的Rf值
(A)乙酸乙酯-己烷1∶1(B)乙酸乙酯-己烷1∶2(C)乙酸乙酯-己烷2∶1(D)乙酸乙酯-己烷3∶1(E)乙酸乙酯-甲醇1∶1(F)乙酸乙酯-甲醇3∶1(G)乙酸乙酯-甲醇5∶1用UV光或通过用0.1M KMnO4-1M H2SO4的1∶1混合物喷板，随后加热至200℃检测斑点。用Kieselgel 60进行柱色谱法。在20℃下测定旋光度。使用Bruker Avance 500MHz分光计，应用Me4Si作为内标记录NMR光谱。质子的归属基于COSY、2D和选择性1D TOCSY以及选择性1D NOESY实验。13C光谱的多重性获自DEPT实验。通过HMQC和HMBC实验观察鉴定的质子与质子化碳之间的连接性。
就在有吡啶存在下进行的酰化反应而言，″常用的操作″意旨如果在将反应混合物倾入冰-水后产物不结晶，那么用有机溶剂萃取它，用水、1M冰-冷硫酸水溶液洗涤有机层至持久呈酸性，用水、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥，过滤并且在真空中蒸发溶剂。
例如，通过下列方法合成通式(XIV)化合物的原料步骤a)2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XI)在室温下向搅拌的27g(0.1mol)2，4-O-亚苄基-D-葡萄糖醇(L.Vargha，Ber.68(1935)18-24)在150ml二甲基甲酰胺中的混悬液中加入20ml(0.26mol)2，2-二甲氧基丙烷和100mg对-甲苯磺酸。在搅拌10分钟后，获得澄清溶液并且在1小时后加入1ml三乙胺。浓缩该反应混合物，将残余物溶于氯仿，过滤出不溶性原料，浓缩滤液并且使残余物从200ml苯中重结晶而得到14g(45％)标题化合物。Mp.178℃，Rf0.4(溶剂C)。
步骤b)1-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XII)向上述步骤中获得的3.1g(10mmol)通式(XI)的产物在50ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入4.5g(11mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和3g(12mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用100ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到2.7g(42％)标题化合物，Rf0.7，[α]D+5°(c1，氯仿)。
步骤c)1-O-(β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XIII)在室温下向上述步骤中获得的4.1g通式(XII)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂G)而得到2.2g(73％)标题化合物，Rf0.6，[α]D-8°(c1，氯仿)。
步骤d)1-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇(XIV)向搅拌的上述步骤中获得的3g通式(XIII)的产物在80ml甲醇中的溶液中加入3ml水、1ml乙酸和2g 10％Pd/C催化剂并且在大气压下氢化该混合物。当按照TLC检测反应完全(～4小时)时，过滤出催化剂，将残余物溶于20ml 0.05M硫酸并且在60℃下搅拌90分钟。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤，浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.9g(86％)标题化合物，Rf0.1(溶剂E)，[α]D-105°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XVIII)的原料步骤a)2，4-O-亚苄基-1-O-苯甲酰基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XV)在-20℃下，向搅拌的3.1g(10mmol)2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(L.Vargha，Ber.68(1935)18-24和1377-1384)在10ml吡啶中的溶液中滴加1.3ml(11mmol)苯甲酰氯。将该反应混合物在该温度下搅拌15分钟并且在室温下搅拌30分钟，然后按照常规操作步骤进行后处理。通过柱色谱法纯化在浓缩有机相后获得的残余物(溶剂B)而得到2.5g(60％)标题化合物，为无色糖浆状物。Rf0.6，[α]D-24°(c1，氯仿)。
步骤b)3-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-1-O-苯甲酰基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XVI)向搅拌的上述步骤中获得的2.5g(6mmol)通式(XV)的产物在20ml乙腈中的溶液中加入5g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入2.5g(6mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和1.6g(6.5mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用40ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂A)而得到2.45g(55％)标题化合物，Rf0.5，[α]D-4°(c1，氯仿)。
步骤c)3-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇(XVIII)在室温下，向上述步骤中获得的4.46g(6mmol)式(XVI)的产物在20ml甲醇中的溶液中加入0.2ml 2M在甲醇中的甲醇钠。1小时后，当按照TLC检测脱酰基反应完全时，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将含有脱酰化产物(XVII)和苯甲酸甲酯的残余物溶于50ml甲醇，加入3ml水、1ml乙酸和2g10％Pd/C催化剂并且在大气压下氢化该混合物。当按照TLC检测反应完全(～15小时)时，过滤出催化剂，浓缩滤液，将残余物溶于氯仿和水的混合物并且分离。向水相中加入1.5ml硫酸并且在60℃下搅拌1小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤，浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到2g(97％)标题化合物，为吸湿性粉末，将其不经进一步纯化用于下一步。[α]D-14°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXIV)的原料步骤a)1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XXII)向6.2g(20mmol)2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XI)在200ml乙腈中的溶液中加入24g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入18g(44mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和12g(48mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用400ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。使残余物从150ml甲醇中重结晶而得到1.8g(9.3％)标题化合物，Mp.168-170℃，Rf0.7(溶剂C)，[α]D-5°(c1，氯仿)。
步骤b)1，3-双-O-(β-D-吡喃葡糖基)-2，4-O-亚苄基-5，6-O-亚异丙基-D-葡萄糖醇(XXIII)在室温下，向上述步骤中获得的2.65g通式(XXII)的产物在30ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M在甲醇中的甲醇钠。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液而得到1.7g(97％)标题化合物，Rf0.3(溶剂F)。[α]D-8°(c1，水)。
步骤c)1，3-双-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇(XXIV)向搅拌的上述步骤中获得的1.7g通式(XXIII)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入加入3ml水、1ml乙酸和1g 10％Pd/C催化剂并且在大气压下氢化该混合物。当按照TLC检测反应完全(～4小时)时，过滤出催化剂，浓缩滤液，将残余物溶于20ml 0.05M硫酸并且在60℃下搅拌90分钟。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤，浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.25g(92％)标题化合物。Rf0.1(溶剂E)，[α]D-20°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXIX)的原料
步骤a)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-1，6-二-O-三苯甲基-D-甘露糖醇(XXV)在室温下向搅拌的11.1g(50mmol)3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(T.Horváth和L.Vargha，Carbohydr.Res.，16(1971)253-259)在50ml吡啶中的溶液中加入33.4g(120mmol)三苯甲基氯。2天后，向低于20℃的反应混合物中滴加14ml苯甲酰氯。2小时后，将该反应混合物倾入冰-水，从沉淀的糖浆状物中滗析水并且使残余物从400ml乙醇结晶。过滤出结晶物质，用乙醇洗涤并且干燥。使由此获得的产物从2.5-倍乙酸乙酯中重结晶而得到36.1g(79％)标题化合物。Mp.165-167℃，[α]D+7°(c1，氯仿)。
步骤b)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXVI)向上述步骤中获得的30g(33mmol)通式(XXV)的产物在300ml二噁烷中的溶液中加入50ml 0.1M硫酸并且将该溶液在90℃下搅拌6小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂A)并且使获得的粗产物从乙醚-己烷中重结晶而得到3.3g(23.6％)标题化合物。Mp.97-99℃，Rf0.45，[α]D-20°(c1氯仿)。
步骤c)1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXVII)向3g(7mmol)通式(XXVI)的产物在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.5g(16mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和4.4g(18mmol)Hg(CN)2并且将混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)并且将获得的粗产物从乙醇中重结晶而得到2.75g(36％)标题化合物。Mp.193-195℃，Rf0.4，[α]D-28°(c1，氯仿)。
步骤d)1，6-双-O-(β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇(XXIX)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的2.6g(2.4mmol)通式(XXVII)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。1小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将含有通式(XXVIII)化合物的水溶液浓缩至15ml体积并且加入1.5ml 1M硫酸。将该溶液在60℃下搅拌90分钟，然后冷却并且通过离子交换树脂中和。将过滤的溶液冷冻干燥而得到1.15g(95％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-23.4°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXXIII)的原料步骤a)1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-吡喃龙胆二糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-4，5-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXI)向搅拌的1.72g(4mmol)2，5-二苯甲酰基-3，4-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXVI，上述)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6g(8.6mmol)溴乙酰龙胆二糖(XXX)(K.Takiura，S.Honda，T.Endo，K.Kakehi.Chem.Pharm.Bull.20(1972)438-442)和4.4g(18mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液，10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂D)并且将获得的粗产物从乙醇中重结晶而得到1.3g(22％)标题化合物。Mp.＞220℃，Rf0.5，[α]D-16°(c1，氯仿)。
步骤b)1，6-双-O-(β-D-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇(XXXIII)将1.3g(0.78mmol)上述步骤中获得的式(XXXI)的产物在25ml甲醇中的溶液中加入0.25ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物在45℃下搅拌2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将含有通式(XXXII)化合物的水溶液浓缩至15ml体积并且加入1.5ml 1M硫酸。将该溶液在60℃下搅拌90分钟，然后冷却并且通过离子交换树脂中和。将过滤的溶液冷冻干燥而得到0.65g(～100％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-3.5°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XXXVII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-吡喃龙胆二糖基)-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXV)向搅拌的2.4g(9.2mmol)1，23，4-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXIV)(L.F.Wiggins，J.Chem.Soc(1946)13-14)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.3g(9mmol)溴乙酰龙胆二糖(XXX)(K.Takiura，S.Honda，T.Endo，K.Kakehi.Chem.Pharm.Bull.20(1972)438-442)和2.5g(10mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液，10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到4.1g(52％)标题化合物。Rf0.4，[α]D+2°(c1，氯仿)。
步骤b)1-O-β-吡喃龙胆二糖基-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXVI)在室温下向上述步骤中获得的3.9g(4.4mmol)通式(XXXV)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M在甲醇中的甲醇钠。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂F)而得到1.6g(62％)标题化合物。Rf0.4。[α]D-5.5°(c1，水)。
步骤c)1-O-β-吡喃龙胆二糖基-D-甘露糖醇(XXXVII)将上述步骤中获得的1.4g(2.4mmol)式(XXXVI)的产物在20ml0.01M硫酸中的溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到1.15g(95％)标题化合物。[α]D-17°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式通式(XLIII)的原料步骤a)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-1，6-二-O-三苯甲基-D-甘露糖醇(XL)向搅拌的6.3g(20mmol)3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI)(J.Kuszmann，Carbohydr.Res.，71(1979)123-134)在60ml吡啶中的溶液中加入20.1g(72mmol)三苯甲基氯。将该反应混合物在室温下搅拌2天，然后向搅拌和冷却的溶液中滴加8.4ml苯甲酰氯。将该反应混合物在室温下搅拌2小时，然后倾入冰-水，用二氯甲烷萃取并且使用常规方式处理有机层。将浓缩后获得的残余物溶于150ml热乙醇，冷却，过滤沉淀的产物并且用乙醇洗涤。将由此获得的粗产物溶于40ml乙酸乙酯并且加入120ml乙醇。过滤出沉淀的产物并且用乙醇洗涤而得到20.25g(75％)标题化合物。Mp.128-130℃，[α]D+45°(c1，氯仿)。
步骤b)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI)向搅拌的上述步骤中获得的20g式(XL)的产物300ml热乙酸中的溶液中分小批加入100ml水并且将该混合物在80-90℃下搅拌30分钟。在冷却后，过滤出沉淀的三苯甲醇并且用氯仿萃取滤液。用水、5％碳酸氢钠水溶液、水洗涤有机层，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂E)而得到7.0g(75.5％)标题化合物，为糖浆状物。Rf0.2，[α]D+33°(c1，氯仿)。
步骤c)
1-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，5，6-三-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLII)向搅拌的上述步骤中获得的6.3g(15mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI)在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.2g(15mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和4.2g(16mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。将残余物溶于50ml吡啶并且在室温下向搅拌的溶液中滴加4ml苯甲酰氯。2小时后，将该反应混合物倾入冰-水，用二氯甲烷萃取并且使用常规方式处理。通过柱色谱法纯化浓缩时获得的残余物(溶剂A)而得到3.5g(27％)标题化合物，为糖浆状物。Rf0.6，[α]D0°(c1，氯仿)。
步骤d)1-O-(β-D-吡喃葡糖基)-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLIII)向搅拌的上述步骤中获得的3.3g(2.87mmol)通式(XLII)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物回流2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至20ml体积并且冷冻干燥而得到1.4g(97％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D+10°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XLV)的原料步骤a)1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLIV)向搅拌的3.34g(8mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI，如上所述)在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入8.2g(20mmol)溴乙酰-D-葡萄糖(X)和5.5g(22mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)并从乙醇重结晶所获得的粗产物，得到3.4g(39％)标题化合物。Mp.138-140℃，Rf0.35，[α]D+38°(c1，氯仿)。
步骤b)1，6双-O-β-D-吡喃葡糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLV)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的3.1g(2.87mmol)式(XLIV)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.56g(～100％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-4°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(XLVII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-吡喃龙胆二糖基)-2，5，6-三-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVI)向搅拌的5.0g(12mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI，如上所述)在70ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入8.4g(12mmol)溴乙酰龙胆二糖(XXX)(K.Takiura，S.Honda，T.Endo，K.Kakehi.Chem.Pharm.Bull.20(1972)438-442)和3.3g(12mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用140ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。将残余物溶于50ml吡啶并且在室温下向该搅拌的溶液中滴加4ml苯甲酰氯。2小时后，将该反应混合物倾入冰-水，用二氯甲烷萃取并以常规方式处理。通过柱色谱法纯化浓缩时获得的残余物(溶剂A)而得到5.2g(38％)粗产物，将其中10倍甲醇重结晶得到纯的标题化合物。Mp.166-168℃，Rf0.6，[α]D+8°(c1，氯仿)。
步骤b)1-O-β-吡喃龙胆二糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVII)向搅拌的上述步骤中获得的2.3g(2.03mmol)式(XLVI)的产物在40ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物回流2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至20ml体积并且冷冻干燥而得到1.05g(97％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D-11°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(IL)的原料步骤a)1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-乙酰基-β-乳糖基)-2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVIII)向搅拌的3.15g(7.5mmol)2，5-二-O-苯甲酰基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLI，如上述)在100ml乙腈中的溶液中加入14g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入12g(17.25mmol)溴乙酰乳糖(C.S.Hudson，J.M.Johnson，J.Am.Chem.Soc.37(1915)1270-1275)和5g(20mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用200ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到4.2g(34％)标题化合物。Rf0.2，[α]D-1.5°(c1，氯仿)。
步骤b)1，6-双-O-β-乳糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(IL)向搅拌的上述步骤中获得的4.2g(2.4mmol)式(XLVIII)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入1.0ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液并且将该反应混合物回流2小时。在冷却后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物溶于水并且用氯仿萃取以便除去苯甲酸甲酯。将该水溶液浓缩至15ml体积并且冷冻干燥而得到1.9g(92％)标题化合物，为无定形粉末。[α]D+28°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(LIII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4-三-O-乙酰基-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LI)向搅拌的3.9g(15mmo1)1，23，4-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXIV)(L.F.wiggins，J.Chem.Soc(1946)13-14)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入5g溴乙酰-D-阿拉伯糖(L)(M.Bárczai-Martos和F.K r_sy，Nature.165(1950)369)和4g(16mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到3.1g(40％)标题化合物。Rf0.5，[α]D-2°(c1，氯仿)步骤b)1-O-α-D-吡喃阿拉伯糖基-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LII)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的2.9g(5.6mmol)式(LI)的产物在30ml甲醇中的溶液中加入0.3ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂G)而得到1.3g(59％)标题化合物。Rf0.5，[α]D+8°(c1，水)。
步骤c)1-O-α-D-吡喃阿拉伯糖基-D-甘露糖醇(LIII)将上述步骤中获得的1.15g(2.92mmol)式(LII)的产物在20ml0.05M硫酸中的溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到0.9g(98％)标题化合物。[α]D-8°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(LVII)的原料步骤a)1-O-(2，3，4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基)-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LV)向搅拌的4.2g(16mmol)1，23，4-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(XXXIV)(L.F.wiggins，J.Chem.Soc(1946)13-14)在65ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入6.5g(19mmol)溴乙酰-D-木糖(LIV)(M.Bárczai-Martos和F.K r_sy，Nature.165(1950)369)和5.5g(22mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用130ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂C)而得到4.8g(56％)标题化合物。Rf0.6，[α]D-22°(c1，氯仿)。
步骤b)1-O-β-D-吡喃木糖基-3，45，6-二-O-亚异丙基-D-甘露糖醇(LVI)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的4.6g(8.84mmol)式(LV)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入0.3ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(溶剂F)而得到2.2g(63％)标题化合物。Rf0.6，[α]D+1.5°(c1，水)。
步骤c)1-O-β-D-吡喃木糖基-D-甘露糖醇(LVII)将上述步骤中获得的2.0g(5.08mmol)式(LVI)的产物在20ml0.05M硫酸中的溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到1.35g(85％)标题化合物。[α]D-21.5°(c1，水)。
例如，可以通过下列方法合成通式(LXI)的原料
步骤a)1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-2，34，5-二-O-亚异丙基-半乳糖醇(LIX)向搅拌的2.62g(10mmol)2，34，5-二-O-亚异丙基-半乳糖醇(LVIII)(R.M.Honn，W.D.Maclay，CS.Hudson J.Am.Chem.Soc61(1939)2438)在60ml乙腈中的溶液中加入7g分子筛(4_)并且将该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入8.5g(21mmol)溴乙酰-D-葡萄藤(X)和5.0g(20mmol)Hg(CN)2并且将该混合物在室温下搅拌20小时。然后过滤该反应混合物并且用120ml氯仿稀释滤液，用5％碳酸氢钠水溶液、10％溴化钾水溶液和水洗涤，干燥并且浓缩。使残余物从5-倍乙醇中重结晶而得到而得到4.9g(53％)标题化合物。Mp.164-166℃，[α]D-25°(c1，氯仿)步骤b)1，6-双-O-(β-D-吡喃糖基)-半乳糖醇(LXI)在室温下向搅拌的上述步骤中获得的4.65g(5.04mmol)式(LIX)的产物在50ml甲醇中的溶液中加入0.5ml 2M甲醇钠在甲醇中的溶液。2小时后，通过添加阳离子交换树脂除去钠离子，过滤该混合物并且浓缩滤液。将残余物(LX)溶于40ml 0.05M硫酸并且将该溶液在60℃下搅拌1.5小时。通过添加离子交换树脂中和冷却的溶液，过滤并且冷冻干燥而得到2.5g(98％)标题化合物。[α]D-29°(c1，水)。
实施例实施例12，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇九钾盐(LXII)(IA，R1＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K)，
将5.1g(48％，30mmol)三氧化硫-二甲基甲酰胺复合物悬浮于5ml无水二甲基甲酰胺中，同时搅拌，将该混合物冷却至-20℃并且逐步加入在5ml二甲基甲酰胺中的0.69g(2mmol)1-O-β-D-吡喃葡糖基-D-甘露糖醇(VIII，Lindberg，Acta Chim，Scand.7(1953)1218)，添加的速率使得保持温度低于-15℃。15分钟后，使该混合物的温度升至-5℃并且保持45分钟。此后再次将该反应混合物冷却至-20℃并且逐步加入1ml乙醇，添加的速率使得保持温度低于-15℃。然后将该反应混合物倾入搅拌和冷却(-5℃)的5g碳酸钾和40ml甲醇的溶液。过滤出沉淀并且用3×40ml甲醇洗涤。将固体残余物溶于40ml水并且用M氢氧化钾溶液将该溶液的pH调节至8，然后浓缩至20ml体积并且冷却至+4℃。过滤出晶体并且用冷水洗涤而得到2.3g(78％)标题化合物。Mp.＞220℃；[α]D+10°(c1，水)。C12H15O38S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 9.95；H 1.27；S 20.27；K 23.92。
实施例21，2，3，4，5-五-O-硫酸酯化-6-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXIII)(IB，R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用6-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(IX，M.L.Wolfrom和T.G.Gardner，J.Am Chem.Soc 65(1943)750-752)作为原料制备标题化合物(LXIII)。Mp.＞220℃，产率76％，[α]D-6°(c1，水)。C12H15O38S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 10.17；H 1.27；S 20.37；K 24.70。
实施例32，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXIV)(IB，R1＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XIV)作为原料制备标题化合物(LXIV)。Mp.＞220℃，产率90％，[α]D-3.5°(c1，水)。C12H15O38S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 10.09；H 1.35；S 20.20；K 29.70。
实施例41，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXV)(IB，R3＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用3-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XVIII)作为原料制备标题化合物(LXV)。Mp.＞220℃，产率87％，[α]D+5°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 10.10；H 1.45；S 20.31；K 24.67。
实施例51，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXVI)(IB，R4＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用4-O-α-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XIX，M.L.Wolfrom等.，J.Am.Chem.Soc.62(1940)2553；E.Dryselius等.Acta Chem.Scand.11(1957)663-667)作为原料制备标题化合物(LXVI)。Mp.＞220℃，产率73％，[α]D+40°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C9.84；H 1.40；S 19.98；K 23.99。
实施例61，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXVII)(IB，R4＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用4-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XX，M.L.Wolfrom等，J.Am.Chem.Soc.74(1952)1105)作为原料制备标题化合物(LXVII)。Mp.＞220℃，产率41％，[α]D+5°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 9.89；H 1.42；S 19.99；K 23.87。
实施例71，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐(LXVIII)(IB，R4＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃半乳糖基四钾盐，R1＝R2＝R3＝R5＝R6＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-葡萄糖醇(XXI，W.J.Whelan和K.Morgan，Chem.和Ind.(1955)1449-1450)作为原料制备标题化合物(LXVIII)。Mp.＞220℃，产率40％，[α]D0°(c1，水)。C12H15O39S9K9计算值C 10.22；H 1.06；S 20.45；K 24.30。测定值C 9.99；H 1.29；S 19.88；K 23.87。
实施例82，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇十二钾盐(LXIX)(IB，R1＝R3＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，3-双-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XXIV)作为原料制备标题化合物(LXIX)。Mp.＞220℃，产率82％，[α]D-6.5°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.15；S 19.99；K 24.38。测定值C 11.01；H 1.32；S 19.07；K 23.99。
实施例92，3，4，5-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐(LXX)(IA，R1＝R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-O-β-D-吡喃葡糖基-D-甘露糖醇(XXIX)作为原料制备标题化合物(LXX)。Mp.＞220℃，产率83％，[α]D+1.5°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.14；S 19.98；K 24.35。测定值C 10.93；H 1.55；S 19.26；K 23.99。
实施例102，3，4，5-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十八钾盐(LXXI)(IA，R1＝R6＝2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-β-吡喃龙胆二糖基七钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-O-β-吡喃龙胆二糖基-D-甘露糖醇(XXXIII)作为原料制备标题化合物(LXXI)，区别在于向浓缩至20ml的极为触变的水溶液中加入20ml乙醇。然后将混合物冷却至+4℃。过滤沉淀出的产物并用乙醇洗涤。Mp.＞220℃，产率99％，[α]D+0°(c1，水)。C30H36O80S18K18计算值C 12.18；H 1.33；S 19.51；K 23.80。测定值C 11.88；H 1.65；S 19.92；K 24.16。
实施例112，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐(LXXII)(IA，R1＝2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基七钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-吡喃龙胆二糖基-D-甘露糖醇(XXXVII)作为原料制备标题化合物(LXXII)。Mp.＞220℃，产率79％，[α]D+6°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.14；S 19.98；K 24.38。测定值C 10.98；H 1.51；S 19.37；K 24.02。
实施例12
3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇七钾盐(LXXIII)(IA，R1＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-D-吡喃葡糖基-D-甘露糖醇(XLVI)作为原料制备标题化合物(LXXIII)，区别在于使用甲醇沉淀粗产物并且过滤，将其溶于水并且用1N氢氧化钾溶液将由此获得的溶液的pH调节至8。随后向该溶液中加入3ml 1N的乙酸锶水溶液，直到不再形成沉淀(SrSO4)。过滤出沉淀并且使滤液经过加载了CHELX 100树脂(钾形式)(10mL)的柱，以便除去锶离子。用蒸馏洗脱该柱，浓缩洗脱液。用乙醇处理残余物，过滤并用乙醇洗涤。Mp.＞220℃，产率94％，[α]D0°(c1，水)。C14H21O32S7K7计算值C 14.02；H 1.76；S 18.71；K 22.82。测定值C 14.06；H 2.02；S 18.31；K 22.67。
实施例133，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十钾盐(LXXIV)(IA，R1＝R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-O-β-D-吡喃葡糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVIII)作为原料制备标题化合物(LXXIV)。Mp.＞220℃，产率85％，[α]D-6.5°(c1，水)。C20H28O46S10K10计算值C 14.00；H 1.63；S 18.68；K 22.78。测定值C 13.85；H1.99；S 18.06；K 21.97。
实施例143，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十钾盐(LXXV)(IA，R1＝2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基七钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-吡喃龙胆二糖基-3，4-二-O-甲基-D-甘露糖醇(XLVII)作为原料制备标题化合物(LXXV)。Mp.＞220℃，产率99％，[α]D-5°(c1，水)。C20H28O46S10K10计算值C 14.00；H 1.64；S 18.68；K 22.78。测定值C 13.87；H 1.99；S 19.24；K22.43。
实施例153，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基-D-甘露糖醇十六钾盐(LXXVI)(IA，R1＝R6＝2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基七钾盐，R3＝R4＝Me，R2＝R5＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-吡喃乳糖基-3，4-二甲基-D-甘露糖醇(LII)作为原料制备标题化合物(LXXVI)。Mp.＞220℃，产率44％，[α]D+2°(c1，水)。C32H42O44S16K16计算值C 13.98；H1.53；S 18.65；K 22.75。测定值C 13.51；H 1.73；S 17.98；K 21.15。
实施例162，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-D-甘露糖醇八钾盐(LXXVII)(IA，R1＝2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃阿拉伯糖基三钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K)
按照实施例1中所述的方法，使用1-O-α-D-吡喃阿拉伯糖基-D-甘露糖醇(LV)作为原料制备标题化合物(LXXVII)。Mp.＞220℃，产率99％，[α]D+19°(c1，水)。C11H14O34S8K8计算值C 10.49；H 1.12；S 20.36；K 24.83。测定值C 10.06；H 1.40；S 19.56；K 24.04。
实施例172，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基)-D-甘露糖醇八钾盐(LXXVIII)(IA，R1＝2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基三钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1-O-β-D-吡喃木糖基-D-甘露糖醇(LVII)作为原料制备标题化合物(LXXVIII)。Mp.＞220℃，产率85％，[α]D-6°(c1，水)。C11H14O32S8K8计算值C 10.49；H 1.12；S 20.36；K 24.83。测定值C 10.05；H 1.29；S 19.98；K 14.52。
实施例182，3，4，5-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-半乳糖醇十二钾盐(LXXIX)(IC，R1＝R6＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R2＝R3＝R4＝R5＝SO3K) 按照实施例1中所述的方法，使用1，6-双-吡喃葡糖基-半乳糖醇(LXII)作为原料制备标题化合物(LXXIX)。Mp.＞220℃，产率83％，[α]D-10°(c1，水)。C18H22O52S12K12计算值C 11.24；H 1.15；S 19.99；K 24.38。测定值C 10.98；H 1.35；S 19.28；K 24.07。
实施例191，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃糖基)-D-葡萄糖醇九钠盐(LXXX)(IB，R3＝2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基四钾盐，R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝SO3Na) 将5.1g(48％，30mmol)三氧化硫-二甲基甲酰胺复合物悬浮于5ml无水二甲基甲酰胺中，同时搅拌，将该混合物冷却至-20℃并且逐步加入在5ml二甲基甲酰胺中的0.52g(1.5mmol)3-O-β-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖醇(XVII)，添加的速率使得保持温度低于-15℃。将该混合物在5℃下搅拌1小时。此后将该混合物再次冷却至-15℃并且逐步加入1.5ml乙醇，添加的速率使得保持温度低于-10℃。然后将该反应混合物倾入搅拌和冷却(0℃)的5g乙酸钠和40ml甲醇的溶液。过滤出沉淀并且用3×40ml甲醇洗涤。将固体残余物溶于30ml水并且用1M氢氧化钠溶液将该溶液的pH调节至8，然后将3ml 1M乙酸锶溶液加入到该溶液中。30分钟后，过滤出沉淀并且用冷水洗涤。使滤液经过加载了CHELX 100树脂(钠形式)(15mL)的柱，以便除去锶离子。用蒸馏水洗脱柱并且浓缩洗脱液。用乙醇处理残余物，过滤并且用乙醇洗涤而得到1.9g(99％)标题化合物。Mp.＞220℃；[α]D+1.5°(c1，水)。C12H15O38S9Na9计算值C 11.41；H 1.20；S 22.85；Na 24.39。测定值C 11.74；H 1.57；S 22.25；Na 16.09。
等同技术方案尽管已经详细并且参照具体实施方案描述了所要求保护的本发明，但是本领域技术人员理解可以在不脱离本发明实质和范围的情况下对所要求保护的本发明进行公知改变和变型。因此，例如，本领域技术人员将会认识到或能够只是使用常规实验确定与本文所述的具体物质和操作步骤等同的大量技术方案。认为这类等同技术方案属于本发明的范围并且由包括在所附的权利要求书中。
权利要求
1.式(I)化合物或其药物上可接受的盐或异构体 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6彼此独立地表示C1-4烷基、-SO3H、多硫酸酯化糖基或多硫酸酯化二糖基-条件是R1-R6中至少一个的含义为多硫酸酯化糖基或多硫酸酯化二糖基。
2.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R2-R6表示-SO3H。
3.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1、R2、R4、R5和R6表示-SO3H，R3表示多硫酸酯化糖基或二糖基。
4.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1、R2、R3、R5和R6表示-SO3H，R4表示多硫酸酯化糖基或二糖基。
5.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1和R3表示多硫酸酯化糖基，R2、R4、R5和R6表示-SO3H。
6.权利要求(1)所述的化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1和R6表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R2、R3、R4和R5表示-SO3H。
7.根据权利要求1的式(I)化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4表示C1-4烷基且R2、R5和R6为-SO3H。
8.式(I)化合物或其药物上可接受的盐或异构体，其中R1和R6表示多硫酸酯化糖基或二糖基，R3和R4表示C1-4烷基且R2和R5为-SO3H。
9.根据权利要求1的式(I)的化合物，选自下列化合物组成的组2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇九钾盐；1，2，3，4，5-五-O-硫酸酯化-6-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-α-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；1，2，3，5，6-五-O-硫酸酯化-4-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖醇九钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，3-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十二钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇七钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5，6-三-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-吡喃龙胆二糖基)-D-甘露糖醇十钾盐；3，4-二-O-甲基-2，5-二-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，6，2′，3′，4′，6′-七-O-硫酸酯化-β-乳糖基)-D-甘露糖醇十六钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-α-D-吡喃阿拉伯糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，3，4，5，6-五-O-硫酸酯化-1-O-(2，3，4-三-O-硫酸酯化-β-D-吡喃木糖基)-D-甘露糖醇八钾盐；2，4，5，6-四-O-硫酸酯化-1，6-双-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-半乳糖醇十二钾盐；1，2，4，5，6-五-O-硫酸酯化-3-O-(2，3，4，6-四-O-硫酸酯化-β-D-吡喃葡糖基)-D-葡萄糖醇九钠盐。
10.药物组合物，包括如权利要求1所述的化合物及其药物上可接受的载体。
11.权利要求1的化合物在制备适合于治疗哺乳动物气道炎性病症的药物中的应用。
12.权利要求11所述的应用，用于制备适合于治疗气道过敏性炎性病症的药物。
13.权利要求12所述的应用，其中所述的气道过敏性炎性病症选自哮喘、过敏性鼻炎、内源性或外源性支气管哮喘、急性或慢性支气管炎、慢性阻塞性肺部疾病和肺纤维化。
14.一种用于治疗哺乳动物急性或慢性气道炎性病症的方法，该方法包括对有此需要的哺乳动物给予治疗有效量的权利要求1的化合物。
15.权利要求14所述的方法，其中所述的气道炎性病症为过敏性炎性病症。
16.权利要求15所述的方法，其中所述的气道过敏性炎性病症选自哮喘、过敏性鼻炎、内源性或外源性支气管哮喘、急性或慢性支气管炎、慢性阻塞性肺部疾病和肺纤维。
17.权利要求14所述的方法，其中所述的气道过敏性炎性病症选自特发性肺纤维化和自身免疫性肺病。
18.权利要求14所述的方法，包括给予作为单剂量或多剂量的所述化合物。
19.通式(II)的化合物 其中R7、R8、R9、R10、R11和R12彼此独立地表示氢原子、C1-4烷基、糖基或二糖基，R7-R12中至少一个为糖基或二糖基。
全文摘要
本发明涉及通式(I)的多硫酸酯化糖苷类、其药物上可接受的盐以及含有这些化合物作为活性组分的药物组合物。此外，本发明提供了预防、治疗或缓解哺乳动物气道急性和慢性炎性病症－包括哮喘和与哮喘相关的病理情况的症状的方法。
文档编号A61K31/045GK101014607SQ200580029844
公开日2007年8月8日 申请日期2005年8月5日 优先权日2004年8月5日
发明者J·库斯曼, I·库鲁茨, G·麦德伊斯, N·博朵尔 申请人:伊瓦克斯药品研究院有限公司
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