具有选择性雌激素活性的15β－取代的类固醇的制作方法
专利名称：具有选择性雌激素活性的15β－取代的类固醇的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有选择性雌激素活性的15β-取代的类固醇化合物、包含所述化合物的药物组合物，所述化合物用于治疗，和涉及所述化合物制备用于雌激素受体关联性疾病的治疗或预防或用于其他雌激素受体关联性生理状况的调节或治疗或预防的药剂的用途。
背景技术：
多年以来，对雌激素受体具有亲和力的化合物已广泛地用于治疗许多医疗病症。因为雌激素受体的组织分布广泛，因此雌激素受体的配体的治疗性功用非常重要。特别地，其用途已涉及避孕以及预防或治疗●更年期不适热潮红、盗汗和情绪不稳；●由于骨质疏松症、骨关节炎、低血钙症、高血钙症、佩吉特氏病、骨软化症、骨钙质缺乏、多发性骨髓瘤引起的骨丢失；●骨折；●尿失禁、泌尿生殖道萎缩、阴道和皮肤萎缩、痤疮、黑素瘤、多毛症；●良性乳腺疾病、乳腺癌、男子女性型乳房；和●心血管疾病、高胆固醇水平、高LDL水平、凝血疾病、再狭窄、血管平滑肌细胞增殖。
然而，尽管可用于减轻雌激素受体关联性病症的化合物，特别是类固醇的长期可利用性，但仍存在对新的经济的、有效的和安全的药物疗法的需要。
具有雌激素活性的化合物目前在妇女中用作治疗围绝经期和/或绝经后(更年期)不适和骨质疏松症的药剂。然而，对于具有完整子宫的妇女，不能将这些非选择性雌激素，例如共轭马雌激素、17β-雌二醇和17α-乙炔基-17β-雌二醇作为处方药用于长期治疗(＞3个月)，因为这些化合物诱导高度的子宫内膜增生(卵泡期样变化)，导致出血、子宫内膜增生和/或子宫内膜癌。一般的临床实践将这些非选择性雌激素和孕激素化合物结合使用，即众所周知的减少子宫内膜刺激和将卵泡期样子宫内膜转变成黄体期样和/或萎缩性子宫内膜的方法。不幸的是，向该疗法中加入孕激素化合物增加了乳腺癌的风险，这在最近的妇女健康启动项目(WHI)的研究(参见Writing Group for the Women′sHealth Initiative Investigators.Risks and benefits of estrogenplus progestin in healthy postmenopausal womenprincipalresults from The Women′s Health Initiative randomizedcontrolled trial.JAMA 2002；288321-333)中得到证实。
在发现两种截然不同的雌激素受体亚类(称作ERα和ERβ)后，现存在发现亚类选择性雌激素受体配体的可能性。因为所述两种亚类在人组织中具有不同的分布，因此这些亚类选择性化合物可提供具有最小副作用的雌激素受体关联性病症的有效疗法或预防。
发明内容
现已发现，系列15β-取代的类固醇衍生物是对雌激素受体α-亚类具有较高水平的功能选择性的潜在的类固醇。本发明提供了式I的化合物 其中，
R1是H、C1-5烷基、C1-12酰基、二-(C1-5烷基)氨基羰基、(C1-5烷基)氧羰基或氨磺酰基，R2是H、C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基、任选地其各自可用卤素取代，R3是C1-2烷基、乙烯基或乙炔基，任选地其各自可用卤素取代，和R4是H或C1-12酰基。
其中R1和/或R4不是氢的类固醇是所谓的前体药物。
术语C1-5烷基，如式I的定义中所用的，表示具有1-5个碳原子的分枝的或未分枝的烷基。这些基团的示例是甲基、乙基、异丙基、叔丁基和戊基。类似地，术语C1-3烷基和C1-2烷基分别是指具有1-3个和1-2个碳原子的(分枝的或未分枝的)烷基。
术语C2-3烯基表示具有2-3个碳原子和一个双键的分枝的或未分枝的烯基。这些基团的示例包括乙烯基和丙-2-烯基。
术语C2-3炔基代表具有2-3个碳原子和一个三键的炔基。这些基团的示例包括乙炔基和丙炔基。
术语C1-12酰基表示从具有1-12个碳原子的羧酸衍生的酰基。酰基可包含可以是分枝的、未分枝的、饱和的或不饱和的烃。这些基团的示例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丙烯酰基、新戊酰基、庚酰基、癸酰基和十一酰基。C1-12酰基的定义也包括从二羧酸衍生的基团如半苹果酰基、半琥珀酰基和半戊二酰基。
二-(C1-5烷基)氨基羰基的示例是二甲基氨甲酰基。
(C1-5烷基)氧羰基的示例是乙氧羰基。
卤素可以是一个或多个卤素原子，例如一个或多个氯或氟原子。
在本发明的一个实施方案中，R2是C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，任选地其各自可用卤素取代。
在另一个实施方案中，R1和R4都是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H、C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，R3是C1-2烷基、乙烯基或乙炔基，R4是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H或任选地用卤素取代的C1-3烷基，R3是任选地用卤素取代的C1-2烷基，R4是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H或C1-3烷基，R3是C1-2烷基，R4是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H或C1-2烷基，R3是甲基，R4是H。
在另一个实施方案中，化合物是7α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔-3，17β-二醇。
在另一个实施方案中，R1是H、C1-5烷基或C1-12酰基，R2是H或C1-3烷基，R3是C1-2烷基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H、C1-5烷基或C1-12酰基，R2是C1-3烷基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H、C1-5烷基或C1-12酰基，R2是C1-3乙基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H或C1-12酰基，R2是H或C1-3烷基，R3是C1-12烷基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H或C1-12酰基，R2是H或C1-3烷基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H或C1-12酰基，R2是乙基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
可按照普通有机化学领域内和特别是类固醇化学领域内的熟知的方法合成本发明的化合物。参见，例如，Fried，J.和Edwards，J.A.，“Organic Reactions in Steroid Chemistry，’第I和II卷，vanNostrand Reinhold Company，New York，1972；和C.Djerassi，‘Steroid Reactions，’Holden-Day，Inc.，San Francisco，1963。
在方案I中描述了用于制备下面的实施例中描述的化合物的一般合成方法。本领域技术人员可容易地变更该方案。
方案1 在4个步骤中合成底物A，即方案I中所示的合成方法的原材料。首先，有机金属种类(例如，铜酸盐)至C17-被保护的雌-4，6-二烯-3-酮的共轭加成提供了所需的7α-取代的雌-4-烯-3-酮。可在合成的该阶段或偶尔在更后的阶段通过层析或结晶作用容易地除去形成的少量7β-异构体。通过使用例如，卤化/脱卤化方法容易地芳香化7α-取代的雌烯酮(estrenones)，形成7α-雌酮，该物质在C3上烷化和在C17上去保护后提供了底物A。
在使用例如二醋酸钯氧化甲硅烷基烯醇醚B后获得α，β-不饱和酮C。然后使用有机金属种类例如二烷基铜酸盐对C进行迈克尔加成反应，提供了加合物D。然后在使用例如三氟化硼二甲基硫化物复合物对甲基雌酮D去保护后，提供了酚E，将该物质以例如甲硅烷基醚F的形式重新保护。然后，将例如乙炔化锂加成至酮F以提供加成物G，之后使用例如四丁基氟化铵除去甲硅烷基醚保护基团可提供想要的产物H。
通过本领域内熟知的方法，例如通过在碱存在的情况下使用羧基酰基氯进行酰化作用或通过在偶联剂例如二环己基碳二亚胺等存在的情况下使用羧酸进行酰化作用，然后在化合物G的情况下除去甲硅烷基醚保护性基团，可容易地从这些化合物获得化合物G或H的游离羟基的衍生物(前体药物)。
发现式I的化合物对雌激素受体α-亚类具有一致更好的选择性和具有高雌激素α-受体效能，即具有等于或高于1.0％的效能(相对于具有大约4×10-11M的EC50的17β-雌二醇，按定义，100％的效能)，所述式I的化合物具有权利要求1中定义的基团，其中R1和R4是氢。这样的化合物是雌激素α-受体的激动剂，其对雌激素β-受体的活性至少低10倍，和/或其是雌激素β-受体的部分激动剂，具有等于或低于由17β-雌二醇诱导的最大激活作用的60％的功效。这导致对雌激素α-受体的高功能选择性，即选择性地激活雌激素α-受体同时不激活或仅部分激活雌激素β-受体。
其中R1和/或R4不是氢的式I的类固醇是前体药物，该前体药物不必满足上述定义。这些前体药物通过体内的代谢过程被转变成其中R1和R4是氢的化合物，该化合物满足所述定义。
此外，本发明的选择性(雌激素的)配体令人吃惊地不诱导高度子宫内膜增生(卵泡期样改变)，从而可用作围绝经期和/或绝经后(更年期)不适和骨质疏松症的(长期)治疗和/或预防的药物而不用加入孕激素化合物。
本发明化合物的选择性雌激素受体的激活特征使其适合用于治疗。
本发明还涉及使用式I的化合物生产药物，所述药物用于雌激素受体关联性疾病的治疗或预防或用于其他雌激素受体关联性生理状况的调节或治疗或预防。
在其他方面，本发明涉及使用式I的化合物生产用于激素代替疗法或激素疗法的药物的用途。这些用途在妇女中特别适合用于围绝经期和/或绝经后(更年期)不适和骨质疏松症的适应症。
在其他方面，本发明涉及使用式I的化合物生产用于避孕的药物。为了该目的，可将施用本发明的化合物作为治疗方案的部分，该方案也包括施用合适量的结合孕激素。这些方案在避孕领域内是熟知的。
合适剂型的生产大大地有助于本发明化合物的施用。因此本发明也涉及包含和可药用赋形剂混合的本发明的化合物的药物组合物或剂型，所述赋形剂是例如Gennaro等人，RemmingtonThe Science andPractice of Pharmacy，第20版，Lippincott，Williams and Wilkins，2000；特别参见第5部分pharmaceutical manufacturing中描述的赋形剂。合适的赋形剂描述于例如Handbook of Pha rmaceuticalExcipients，第2版；Editors A.Wade和P.J.Weller，AmericanPharmaceutical Association，Washington，The PharmaceuticalPress，London，1994。可将本发明的化合物和药物可接受赋形剂的混合物压制成固体剂量单位，例如片剂，或压制成胶囊剂或栓剂。通过药学合适的液体，所述化合物也可用作以溶液、混悬剂、乳剂形式存在的注射制剂，或用作喷雾剂，例如鼻或口腔喷雾剂。为了制备剂量单位例如，片剂，涉及常规添加剂例如充填剂、着色剂、聚合粘合剂等的使用。一般地，可使用任何可药用添加剂。也可在移植物、阴道环、贴剂、凝胶或用于立即释放和/或持续释放的任何其他制剂中包含本发明的化合物。
制备和施用药物组合物所用的合适的充填剂包括乳糖、淀粉、纤维素和其衍生物等、或以合适的量使用的其混合物。
本发明的剂量在雌激素化合物的正常数量级之内，例如每次施用0.01至100mg，更优选地0.1至10mg的数量级之内。
具体实施例方式
在下列实施例中举例说明本发明
方案11 实施例17α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔-3，17β-二醇(8)的制备(参见方案II)。
7α-乙基-3-甲氧基-雌-1，3，5(10)，15-四烯-17-酮(3)的制备。
以类似于EP 0869132 A1中描述的方法(参见实施例I和方案I，化合物1-5)从17β-17-(乙酰氧基)-雌-4，6-二烯-3-酮和溴化乙基镁制备7α-乙基-3-甲氧基雌酮1。
在-60℃下向LDA溶液[通过在-50℃下向THF(15ml)中的二异丙胺(2.1ml)中加入1.6M正丁基锂的庚烷溶液(4.7ml)制备的]逐滴加入THF(3ml)中的7α-乙基-3-甲氧基雌酮1(1g)的溶液。在-60℃搅拌混合物半小时，然后用三甲基硅烷基氯(2ml)进行处理。将该反应混合物在半小时内加温至0℃，然后倒入10％NH4Cl水溶液(100ml)中，用乙酸乙酯萃取。洗涤，干燥(Na2SO4)，然后浓缩，提供了用于下一阶段而无需进一步纯化的粗制硅烯醇盐(silylenolate)2(1.1g)。
向乙腈(15ml)中的粗制硅烯醇盐2，(1.1g)溶液中加入Pd(OAc)2(750mg)。将混合物在回流的情况下加热15分钟。然后加入水和乙酸乙酯，将该有机混合物通过Celite过滤，将产物萃取至乙酸乙酯中。将所分离的有机物质通过短硅土柱，使用庚烷/乙酸乙酯进行洗脱来纯化，产生无色油状的化合物3(710mg)。Rf(1)0.47，Rf(2)0.80，Rf(3)0.46，洗脱剂庚烷/乙酸乙酯8/2。NMR(CDCl3)，δ7.58(1H)，7.21(1H)，6.74(1H)，6.66(1H)，3.79(3H，CH3O)，1.11(s，3H，18-CH3)，1.00(t，3H，乙基)。
7α-乙基-15β-甲基-3-甲氧基-雌-1，3，5(10)-三烯-17-酮(4)的制备。
向干THF(5ml)中的溶液3，(300mg)中加入无水Cu(OAc)2(100mg)。在-70℃下搅拌混合物2分钟，然后逐滴加入溴化甲基镁(1M于THF中，5ml)。在半小时内将反应物加温至0℃，通过加入10％含水NH4Cl溶液终止反应。用乙酸乙酯萃取产物，然后使用庚烷/乙酸乙酯作为洗脱剂，通过在硅凝胶上层析来纯化产物，以提供白色固体状的4(280mg)，熔点m.p.120-122℃；NMR(CDCl3)δ 7.22(1H)，6.73(1H)，6.65(1H)，3.79(1H)，1.20(3H，s，18CH3)，0.98，0.96(6H，2t，7α-和15β-乙基)。
7α-乙基-15β-甲基-3-[(三甲基甲硅烷基)氧]-雌-1，3，5(10)-三烯-17-酮的制备
(6)向二氯甲烷(1ml)中的4(270mg)的溶液加入BF3.DMS复合物(800μl)。搅拌混合物1.5小时，然后倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。用醚/庚烷(1/1)研磨所得的残留物以提供淡玫瑰红的无定形固体状的5，(250mg)；Rf0.27(庚烷/乙酸乙酯8/2)。将所述物质溶解在DMF(3ml)中，加入咪唑(300mg)，然后加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物。在室温下搅拌2小时后，完成甲硅烷基化。通过加入冰水终止反应，然后用乙酸乙酯萃取产物。在短硅土柱(庚烷/乙酸乙酯9/1)上的层析纯化产生了稠无色油状的6(220mg)；Rf0.60(庚烷/乙酸乙酯8/2)。NMR(CDCl3)δ7.12(1H)，6.62(1H)，6.18(1H)，1.03(s，3H，18-CH3)，0.98(s，9H，叔丁基甲硅烷基)，0.97，0.95(2 t，6H，7α-和15β-乙基)，0.20(s，6H，CH3-甲硅烷基醚)。
7α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔3，17β-二醇(8)的制备。
通过在-60℃下向干THF(6ml)中的1，2-二溴乙烯(300μl)中逐滴加入正丁基锂(1.6M于己烷中，5ml)来产生乙炔化锂溶液。在搅拌20分钟后，加入THF(2ml)中的6(220mg)的溶液，移走冷却设备，在0℃下搅拌反应1小时。然后加入5％NH4Cl(50ml)，然后用乙酸乙酯进行萃取。在将粗制产物通过短硅土柱(用庚烷/乙酸乙酯8/2洗脱)后，获得以基本上纯的形式存在的白色泡沫状的化合物7(180mg)；Rf0.28(庚烷/乙酸乙酯8/2)，Rf原料，0.48。NMR(CDCl3)δ7.14(1H)，6.62(1H)，6.57(1H，2.60，乙炔)，0.99(s，12H，18-CH3和叔丁基甲硅烷基)，0.95和0.86(2xt，3H，乙基)，0.20(s，6H，二甲基甲硅烷基)。
向THF(1ml)中的7(180mg)的溶液加入TBAF(1M于THF中，0.7ml)。搅拌混合物15分钟，然后倒入10％含水NH4Cl(20ml)中。用乙酸乙酯萃取产物并使用庚烷/乙酸乙酯7/3作为洗脱剂，将其通过短硅土柱，产生无定形材料8(120mg)。NMR(DMSO D6)δ8.89(s，酚的OH)，7.08(1H)，6.5(1H)，6.43(1H)，5.34(s，1H，17-OH)，0.84(s，3H，18-CH3)，0.80和0.90(2xt，6H，15β-和7α-乙基)。
实施例23-新戊酰氧-7α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔17β-醇(9a)的制备将化合物8(300mg)溶解在嘧啶(10ml)中。逐滴加入新戊酰氯(1.5当量)。2小时后，用水终止反应混合物。浓缩反应混合物，重新溶解于乙酸乙酯，用含水碳酸氢钠和水进行萃取。干燥(Na2SO4)和浓缩有机层。通过在硅凝胶上进行层析(庚烷-乙酸乙酯(1∶0-＞4∶1)纯化残留物，产生纯9a(347mg)。NMR(CDCl3)δ1.35(s，9H，新戊酰基)，1.08(d，3H，15β-Me)，1.02(s，3H，18-Me)，0.94(t，3H，7-乙基)。
以相似的方式，但分别使用N，N-二甲氨基甲酰氯和乙氧碳酰氯制备化合物9b(289mg；NMR(CDCl3)δ3.0和3.08(2xs，6H，NMe2)1.08(d，3H，15β-Me)，1.02(s，3H，18-Me)，0.93(t，3H，7-乙基))和9c(283mg；NMR(CDCl3)δ4.32(q，2H，OCH2CH3)，1.38(d，3H，OCH2CH3)，1.08(d，3H，15β-Me)，1.02(s，3H，18-Me)，0.93(t，3H，7-乙基))。
实施例3在体外生物测定中用重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞测定化合物对雌激素受体的激动活性，所述中国仓鼠卵巢细胞是用人雌激素受体α-(hERα-)或β-(hERβ-)、大鼠催产素促进因子(RO)和荧光素酶报告基因(LUC)稳定地共转染的细胞。受试化合物刺激通过雌激素受体hERα-或hERβ-介导的荧光素酶的转活，即雌激素激动转活的效能表示为相对于标准的雌激素17β-雌二醇的EC50的的百分比(％)(受试化合物的效能＝(17β-雌二醇的EC50/受试化合物的EC50)×100％)。功效，即通过化合物诱导的受体的最大激活作用的量，表示为相对于由标准的雌激素17β-雌二醇诱导的最大激活作用的百分比(％)(受试化合物的功效＝(受试化合物的最大激活作用/17β-雌二醇的最大激活作用)×100％)。可在De Gooyer M.E.，Deckers G.H.，SchoonenW.G.E.J.，Verheul H.A.M.和Kloosterboer H.J.，Steroids，第68卷，2003，pp.21-30中找到该方法学的更详尽描述。
将ERα/ERβ的选择性定义为ERα-效能/ERβ-效能的比率。本发明的化合物对雌激素α-受体具有激动作用，效能等于或高于1.0％(相对于17β-雌二醇)，其对雌激素β-受体的活性低至少10倍(ERα-/ERβ-的选择性等于或高于10)和/或其是雌激素β-受体的部分激动剂，功效等于或低于由17β-雌二醇诱导的最大激活作用的60％。
在每治疗组4只动物中，用受试化合物进行8周口服治疗后，由病理学家进行短尾猴子宫组织的组织病理学评价。每天一次以40μg/kg的剂量施用比较化合物X，以200μg/kg的剂量施用比较化合物Y和以40和200μg/kg的剂量施用化合物8。基于短尾猴中的正常月经周期的子宫期，在H&E染色的切片中检查下列形态学特征。
A.卵泡期样变化●松散的子宫内膜基质●直的子宫内膜腺体●子宫内膜上皮的肥大●有丝分裂像●子宫肌层的肥大●早期血管发生(萌发或早期增生)●基础分泌B.黄体期样变化●假脱膜化增大的基质细胞●子宫内膜腺体的卷曲●晚期血管发生(螺旋动脉形成)
●子宫内膜上皮细胞的空泡形成●腔内分泌C.卵巢切除的或非刺激的(萎缩性)子宫内膜●致密的子宫内膜基质●子宫内膜上皮的萎缩●子宫内膜腺体的萎缩●子宫肌层的萎缩使用下列分级标度给这些上述发现中的各发现的严重度评分●0级发现不存在●1级最低，非常少，非常小●2级轻微，少数，小●3级中度，中等数目，中等尺寸●4级显著，许多，大规模●5级大量，数量非常多，尺寸非常大对各动物进行该分级。然后就各特征计算每个处理组的平均评分。最后，根据平均个体特征计算每种类别，萎缩、卵泡或黄体期样的平均评分。化合物的有利的子宫内膜安全特征谱的特征在于较少的化合物诱导的卵泡期样活性和更多的黄体期样特征和/或萎缩性子宫内膜。
表1(体外细胞数据)和表2(体内数据)提供了化合物8和比较化合物X(17α-乙炔基-17β-雌二醇，其中R1-R4都是H的式I)和Y(17β-雌二醇)的数据。
表1
表1中所示的结果证明本发明的化合物对于雌激素受体α-亚类具有一致更好的功能选择性和高雌激素α-受体效能，即选择性地激活雌激素α-受体而不或仅部分地激活雌激素β-受体。化合物8显示23.45％的雌激素α-受体效能，其对于雌激素α-受体的选择性超过对雌激素β-受体的15.2倍，其是雌激素β-受体的部分激动剂，功效为40％。密切相关的化合物17α-乙炔基-17β-雌二醇(化合物X)和17β-雌二醇(化合物Y)对于两种雌激素受体亚类显示相同的选择性并且是雌激素β-受体的完全激动剂。
表2
本发明化合物的有利的子宫内膜安全特征谱令人惊奇，因为密切相关的化合物17α-乙炔基-17β-雌二醇和17β-雌二醇都刺激子宫内膜，如表2中通过卵泡期样活性和极少的黄体样活性的清楚的征候所显示的，从而无萎缩性子宫内膜。
实施例4雌性大鼠的性行为是激素依赖性的。在雌激素引发的雌性大鼠中，孕酮明显地增强雌性性行为或脊椎前凸行为。然而，在未接受雌激素的卵巢切除的雌性中，孕酮不能有效地诱导脊椎前凸(也参见，J.B.Becker，S.M.Breedlove and D.Crews(Eds.)，BehavioralEndocrinology，1992，pp.82-84)。
受试化合物在切除卵巢的雌性大鼠中促进孕酮诱导的脊椎前凸行为的能力通常用于证明口服施用这些化合物后的体内雌激素活性。用受试化合物预处理雌性3天，然后在第4天用结合孕激素处理。在结合孕激素处理4小时后，在雄性大鼠存在的情况下，通过计数10分钟内脊椎前凸反应的次数来测量雌性大鼠的性行为。
其中R1是新戊酰基(化合物9a)，R1是二甲基氨甲酰基(化合物9b)或R1是乙氧羰基(化合物9c)的化合物8的前体药物，在以1mg/kg.天的剂量口服后，都证明是活性雌激素化合物。
权利要求
1.式I的15β-取代的类固醇化合物 其中，R1是H、C1-5烷基、C1-12酰基、二-(C1-5烷基)氨基羰基、(C1-5烷基)氧羰基或氨磺酰基，R2是H、C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，任选地其各自可被卤素取代，R3是C1-2烷基、乙烯基或乙炔基，任选地其各自可被卤素取代，和R4是H或C1-12酰基。
2.权利要求1的化合物，其特征在于R2是C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，任选地其各自可被卤素取代。
3.权利要求1或2的化合物，其特征在于R1和R4都是H。
4.包含权利要求1-3中任一项的化合物和可药用赋形剂的药物组合物。
5.权利要求1-3中任一项的用于治疗的化合物。
6.权利要求1-3中任一项的化合物的用于生产药物的用途，所述药物用于雌激素受体关联性疾病的治疗或预防或其他雌激素受体关联性生理学状况的调节或治疗或预防。
7.权利要求6的用途，用于激素疗法的药物的生产。
8.权利要求7的用途，其特征在于所述激素疗法用于更年期不适。
9.权利要求7的用途，其特征在于所述激素疗法用于骨质疏松症。
10.权利要求6的用途，用于避孕的药物的生产。
全文摘要
本发明提供了式I的具有选择性雌激素受体活性的15β－取代的类固醇化合物其中，R
文档编号A61K31/56GK101014610SQ200580030002
公开日2007年8月8日 申请日期2005年9月5日 优先权日2004年9月8日
发明者H·J·J·鲁泽, A·G·H·埃德温, F·A·迪吉克斯 申请人:欧加农股份有限公司
技术领域：
本发明涉及具有选择性雌激素活性的15β-取代的类固醇化合物、包含所述化合物的药物组合物，所述化合物用于治疗，和涉及所述化合物制备用于雌激素受体关联性疾病的治疗或预防或用于其他雌激素受体关联性生理状况的调节或治疗或预防的药剂的用途。
背景技术：
多年以来，对雌激素受体具有亲和力的化合物已广泛地用于治疗许多医疗病症。因为雌激素受体的组织分布广泛，因此雌激素受体的配体的治疗性功用非常重要。特别地，其用途已涉及避孕以及预防或治疗●更年期不适热潮红、盗汗和情绪不稳；●由于骨质疏松症、骨关节炎、低血钙症、高血钙症、佩吉特氏病、骨软化症、骨钙质缺乏、多发性骨髓瘤引起的骨丢失；●骨折；●尿失禁、泌尿生殖道萎缩、阴道和皮肤萎缩、痤疮、黑素瘤、多毛症；●良性乳腺疾病、乳腺癌、男子女性型乳房；和●心血管疾病、高胆固醇水平、高LDL水平、凝血疾病、再狭窄、血管平滑肌细胞增殖。
然而，尽管可用于减轻雌激素受体关联性病症的化合物，特别是类固醇的长期可利用性，但仍存在对新的经济的、有效的和安全的药物疗法的需要。
具有雌激素活性的化合物目前在妇女中用作治疗围绝经期和/或绝经后(更年期)不适和骨质疏松症的药剂。然而，对于具有完整子宫的妇女，不能将这些非选择性雌激素，例如共轭马雌激素、17β-雌二醇和17α-乙炔基-17β-雌二醇作为处方药用于长期治疗(＞3个月)，因为这些化合物诱导高度的子宫内膜增生(卵泡期样变化)，导致出血、子宫内膜增生和/或子宫内膜癌。一般的临床实践将这些非选择性雌激素和孕激素化合物结合使用，即众所周知的减少子宫内膜刺激和将卵泡期样子宫内膜转变成黄体期样和/或萎缩性子宫内膜的方法。不幸的是，向该疗法中加入孕激素化合物增加了乳腺癌的风险，这在最近的妇女健康启动项目(WHI)的研究(参见Writing Group for the Women′sHealth Initiative Investigators.Risks and benefits of estrogenplus progestin in healthy postmenopausal womenprincipalresults from The Women′s Health Initiative randomizedcontrolled trial.JAMA 2002；288321-333)中得到证实。
在发现两种截然不同的雌激素受体亚类(称作ERα和ERβ)后，现存在发现亚类选择性雌激素受体配体的可能性。因为所述两种亚类在人组织中具有不同的分布，因此这些亚类选择性化合物可提供具有最小副作用的雌激素受体关联性病症的有效疗法或预防。
发明内容
现已发现，系列15β-取代的类固醇衍生物是对雌激素受体α-亚类具有较高水平的功能选择性的潜在的类固醇。本发明提供了式I的化合物 其中，
R1是H、C1-5烷基、C1-12酰基、二-(C1-5烷基)氨基羰基、(C1-5烷基)氧羰基或氨磺酰基，R2是H、C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基、任选地其各自可用卤素取代，R3是C1-2烷基、乙烯基或乙炔基，任选地其各自可用卤素取代，和R4是H或C1-12酰基。
其中R1和/或R4不是氢的类固醇是所谓的前体药物。
术语C1-5烷基，如式I的定义中所用的，表示具有1-5个碳原子的分枝的或未分枝的烷基。这些基团的示例是甲基、乙基、异丙基、叔丁基和戊基。类似地，术语C1-3烷基和C1-2烷基分别是指具有1-3个和1-2个碳原子的(分枝的或未分枝的)烷基。
术语C2-3烯基表示具有2-3个碳原子和一个双键的分枝的或未分枝的烯基。这些基团的示例包括乙烯基和丙-2-烯基。
术语C2-3炔基代表具有2-3个碳原子和一个三键的炔基。这些基团的示例包括乙炔基和丙炔基。
术语C1-12酰基表示从具有1-12个碳原子的羧酸衍生的酰基。酰基可包含可以是分枝的、未分枝的、饱和的或不饱和的烃。这些基团的示例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丙烯酰基、新戊酰基、庚酰基、癸酰基和十一酰基。C1-12酰基的定义也包括从二羧酸衍生的基团如半苹果酰基、半琥珀酰基和半戊二酰基。
二-(C1-5烷基)氨基羰基的示例是二甲基氨甲酰基。
(C1-5烷基)氧羰基的示例是乙氧羰基。
卤素可以是一个或多个卤素原子，例如一个或多个氯或氟原子。
在本发明的一个实施方案中，R2是C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，任选地其各自可用卤素取代。
在另一个实施方案中，R1和R4都是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H、C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，R3是C1-2烷基、乙烯基或乙炔基，R4是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H或任选地用卤素取代的C1-3烷基，R3是任选地用卤素取代的C1-2烷基，R4是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H或C1-3烷基，R3是C1-2烷基，R4是H。
在另一个实施方案中，R1是H，R2是H或C1-2烷基，R3是甲基，R4是H。
在另一个实施方案中，化合物是7α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔-3，17β-二醇。
在另一个实施方案中，R1是H、C1-5烷基或C1-12酰基，R2是H或C1-3烷基，R3是C1-2烷基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H、C1-5烷基或C1-12酰基，R2是C1-3烷基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H、C1-5烷基或C1-12酰基，R2是C1-3乙基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H或C1-12酰基，R2是H或C1-3烷基，R3是C1-12烷基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H或C1-12酰基，R2是H或C1-3烷基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
在另一个实施方案中，R1是H或C1-12酰基，R2是乙基，R3是甲基，R4是H或C1-12酰基。
可按照普通有机化学领域内和特别是类固醇化学领域内的熟知的方法合成本发明的化合物。参见，例如，Fried，J.和Edwards，J.A.，“Organic Reactions in Steroid Chemistry，’第I和II卷，vanNostrand Reinhold Company，New York，1972；和C.Djerassi，‘Steroid Reactions，’Holden-Day，Inc.，San Francisco，1963。
在方案I中描述了用于制备下面的实施例中描述的化合物的一般合成方法。本领域技术人员可容易地变更该方案。
方案1 在4个步骤中合成底物A，即方案I中所示的合成方法的原材料。首先，有机金属种类(例如，铜酸盐)至C17-被保护的雌-4，6-二烯-3-酮的共轭加成提供了所需的7α-取代的雌-4-烯-3-酮。可在合成的该阶段或偶尔在更后的阶段通过层析或结晶作用容易地除去形成的少量7β-异构体。通过使用例如，卤化/脱卤化方法容易地芳香化7α-取代的雌烯酮(estrenones)，形成7α-雌酮，该物质在C3上烷化和在C17上去保护后提供了底物A。
在使用例如二醋酸钯氧化甲硅烷基烯醇醚B后获得α，β-不饱和酮C。然后使用有机金属种类例如二烷基铜酸盐对C进行迈克尔加成反应，提供了加合物D。然后在使用例如三氟化硼二甲基硫化物复合物对甲基雌酮D去保护后，提供了酚E，将该物质以例如甲硅烷基醚F的形式重新保护。然后，将例如乙炔化锂加成至酮F以提供加成物G，之后使用例如四丁基氟化铵除去甲硅烷基醚保护基团可提供想要的产物H。
通过本领域内熟知的方法，例如通过在碱存在的情况下使用羧基酰基氯进行酰化作用或通过在偶联剂例如二环己基碳二亚胺等存在的情况下使用羧酸进行酰化作用，然后在化合物G的情况下除去甲硅烷基醚保护性基团，可容易地从这些化合物获得化合物G或H的游离羟基的衍生物(前体药物)。
发现式I的化合物对雌激素受体α-亚类具有一致更好的选择性和具有高雌激素α-受体效能，即具有等于或高于1.0％的效能(相对于具有大约4×10-11M的EC50的17β-雌二醇，按定义，100％的效能)，所述式I的化合物具有权利要求1中定义的基团，其中R1和R4是氢。这样的化合物是雌激素α-受体的激动剂，其对雌激素β-受体的活性至少低10倍，和/或其是雌激素β-受体的部分激动剂，具有等于或低于由17β-雌二醇诱导的最大激活作用的60％的功效。这导致对雌激素α-受体的高功能选择性，即选择性地激活雌激素α-受体同时不激活或仅部分激活雌激素β-受体。
其中R1和/或R4不是氢的式I的类固醇是前体药物，该前体药物不必满足上述定义。这些前体药物通过体内的代谢过程被转变成其中R1和R4是氢的化合物，该化合物满足所述定义。
此外，本发明的选择性(雌激素的)配体令人吃惊地不诱导高度子宫内膜增生(卵泡期样改变)，从而可用作围绝经期和/或绝经后(更年期)不适和骨质疏松症的(长期)治疗和/或预防的药物而不用加入孕激素化合物。
本发明化合物的选择性雌激素受体的激活特征使其适合用于治疗。
本发明还涉及使用式I的化合物生产药物，所述药物用于雌激素受体关联性疾病的治疗或预防或用于其他雌激素受体关联性生理状况的调节或治疗或预防。
在其他方面，本发明涉及使用式I的化合物生产用于激素代替疗法或激素疗法的药物的用途。这些用途在妇女中特别适合用于围绝经期和/或绝经后(更年期)不适和骨质疏松症的适应症。
在其他方面，本发明涉及使用式I的化合物生产用于避孕的药物。为了该目的，可将施用本发明的化合物作为治疗方案的部分，该方案也包括施用合适量的结合孕激素。这些方案在避孕领域内是熟知的。
合适剂型的生产大大地有助于本发明化合物的施用。因此本发明也涉及包含和可药用赋形剂混合的本发明的化合物的药物组合物或剂型，所述赋形剂是例如Gennaro等人，RemmingtonThe Science andPractice of Pharmacy，第20版，Lippincott，Williams and Wilkins，2000；特别参见第5部分pharmaceutical manufacturing中描述的赋形剂。合适的赋形剂描述于例如Handbook of Pha rmaceuticalExcipients，第2版；Editors A.Wade和P.J.Weller，AmericanPharmaceutical Association，Washington，The PharmaceuticalPress，London，1994。可将本发明的化合物和药物可接受赋形剂的混合物压制成固体剂量单位，例如片剂，或压制成胶囊剂或栓剂。通过药学合适的液体，所述化合物也可用作以溶液、混悬剂、乳剂形式存在的注射制剂，或用作喷雾剂，例如鼻或口腔喷雾剂。为了制备剂量单位例如，片剂，涉及常规添加剂例如充填剂、着色剂、聚合粘合剂等的使用。一般地，可使用任何可药用添加剂。也可在移植物、阴道环、贴剂、凝胶或用于立即释放和/或持续释放的任何其他制剂中包含本发明的化合物。
制备和施用药物组合物所用的合适的充填剂包括乳糖、淀粉、纤维素和其衍生物等、或以合适的量使用的其混合物。
本发明的剂量在雌激素化合物的正常数量级之内，例如每次施用0.01至100mg，更优选地0.1至10mg的数量级之内。
具体实施例方式
在下列实施例中举例说明本发明
方案11 实施例17α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔-3，17β-二醇(8)的制备(参见方案II)。
7α-乙基-3-甲氧基-雌-1，3，5(10)，15-四烯-17-酮(3)的制备。
以类似于EP 0869132 A1中描述的方法(参见实施例I和方案I，化合物1-5)从17β-17-(乙酰氧基)-雌-4，6-二烯-3-酮和溴化乙基镁制备7α-乙基-3-甲氧基雌酮1。
在-60℃下向LDA溶液[通过在-50℃下向THF(15ml)中的二异丙胺(2.1ml)中加入1.6M正丁基锂的庚烷溶液(4.7ml)制备的]逐滴加入THF(3ml)中的7α-乙基-3-甲氧基雌酮1(1g)的溶液。在-60℃搅拌混合物半小时，然后用三甲基硅烷基氯(2ml)进行处理。将该反应混合物在半小时内加温至0℃，然后倒入10％NH4Cl水溶液(100ml)中，用乙酸乙酯萃取。洗涤，干燥(Na2SO4)，然后浓缩，提供了用于下一阶段而无需进一步纯化的粗制硅烯醇盐(silylenolate)2(1.1g)。
向乙腈(15ml)中的粗制硅烯醇盐2，(1.1g)溶液中加入Pd(OAc)2(750mg)。将混合物在回流的情况下加热15分钟。然后加入水和乙酸乙酯，将该有机混合物通过Celite过滤，将产物萃取至乙酸乙酯中。将所分离的有机物质通过短硅土柱，使用庚烷/乙酸乙酯进行洗脱来纯化，产生无色油状的化合物3(710mg)。Rf(1)0.47，Rf(2)0.80，Rf(3)0.46，洗脱剂庚烷/乙酸乙酯8/2。NMR(CDCl3)，δ7.58(1H)，7.21(1H)，6.74(1H)，6.66(1H)，3.79(3H，CH3O)，1.11(s，3H，18-CH3)，1.00(t，3H，乙基)。
7α-乙基-15β-甲基-3-甲氧基-雌-1，3，5(10)-三烯-17-酮(4)的制备。
向干THF(5ml)中的溶液3，(300mg)中加入无水Cu(OAc)2(100mg)。在-70℃下搅拌混合物2分钟，然后逐滴加入溴化甲基镁(1M于THF中，5ml)。在半小时内将反应物加温至0℃，通过加入10％含水NH4Cl溶液终止反应。用乙酸乙酯萃取产物，然后使用庚烷/乙酸乙酯作为洗脱剂，通过在硅凝胶上层析来纯化产物，以提供白色固体状的4(280mg)，熔点m.p.120-122℃；NMR(CDCl3)δ 7.22(1H)，6.73(1H)，6.65(1H)，3.79(1H)，1.20(3H，s，18CH3)，0.98，0.96(6H，2t，7α-和15β-乙基)。
7α-乙基-15β-甲基-3-[(三甲基甲硅烷基)氧]-雌-1，3，5(10)-三烯-17-酮的制备
(6)向二氯甲烷(1ml)中的4(270mg)的溶液加入BF3.DMS复合物(800μl)。搅拌混合物1.5小时，然后倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。用醚/庚烷(1/1)研磨所得的残留物以提供淡玫瑰红的无定形固体状的5，(250mg)；Rf0.27(庚烷/乙酸乙酯8/2)。将所述物质溶解在DMF(3ml)中，加入咪唑(300mg)，然后加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物。在室温下搅拌2小时后，完成甲硅烷基化。通过加入冰水终止反应，然后用乙酸乙酯萃取产物。在短硅土柱(庚烷/乙酸乙酯9/1)上的层析纯化产生了稠无色油状的6(220mg)；Rf0.60(庚烷/乙酸乙酯8/2)。NMR(CDCl3)δ7.12(1H)，6.62(1H)，6.18(1H)，1.03(s，3H，18-CH3)，0.98(s，9H，叔丁基甲硅烷基)，0.97，0.95(2 t，6H，7α-和15β-乙基)，0.20(s，6H，CH3-甲硅烷基醚)。
7α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔3，17β-二醇(8)的制备。
通过在-60℃下向干THF(6ml)中的1，2-二溴乙烯(300μl)中逐滴加入正丁基锂(1.6M于己烷中，5ml)来产生乙炔化锂溶液。在搅拌20分钟后，加入THF(2ml)中的6(220mg)的溶液，移走冷却设备，在0℃下搅拌反应1小时。然后加入5％NH4Cl(50ml)，然后用乙酸乙酯进行萃取。在将粗制产物通过短硅土柱(用庚烷/乙酸乙酯8/2洗脱)后，获得以基本上纯的形式存在的白色泡沫状的化合物7(180mg)；Rf0.28(庚烷/乙酸乙酯8/2)，Rf原料，0.48。NMR(CDCl3)δ7.14(1H)，6.62(1H)，6.57(1H，2.60，乙炔)，0.99(s，12H，18-CH3和叔丁基甲硅烷基)，0.95和0.86(2xt，3H，乙基)，0.20(s，6H，二甲基甲硅烷基)。
向THF(1ml)中的7(180mg)的溶液加入TBAF(1M于THF中，0.7ml)。搅拌混合物15分钟，然后倒入10％含水NH4Cl(20ml)中。用乙酸乙酯萃取产物并使用庚烷/乙酸乙酯7/3作为洗脱剂，将其通过短硅土柱，产生无定形材料8(120mg)。NMR(DMSO D6)δ8.89(s，酚的OH)，7.08(1H)，6.5(1H)，6.43(1H)，5.34(s，1H，17-OH)，0.84(s，3H，18-CH3)，0.80和0.90(2xt，6H，15β-和7α-乙基)。
实施例23-新戊酰氧-7α-乙基-15β-甲基-19-去甲-17α-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔17β-醇(9a)的制备将化合物8(300mg)溶解在嘧啶(10ml)中。逐滴加入新戊酰氯(1.5当量)。2小时后，用水终止反应混合物。浓缩反应混合物，重新溶解于乙酸乙酯，用含水碳酸氢钠和水进行萃取。干燥(Na2SO4)和浓缩有机层。通过在硅凝胶上进行层析(庚烷-乙酸乙酯(1∶0-＞4∶1)纯化残留物，产生纯9a(347mg)。NMR(CDCl3)δ1.35(s，9H，新戊酰基)，1.08(d，3H，15β-Me)，1.02(s，3H，18-Me)，0.94(t，3H，7-乙基)。
以相似的方式，但分别使用N，N-二甲氨基甲酰氯和乙氧碳酰氯制备化合物9b(289mg；NMR(CDCl3)δ3.0和3.08(2xs，6H，NMe2)1.08(d，3H，15β-Me)，1.02(s，3H，18-Me)，0.93(t，3H，7-乙基))和9c(283mg；NMR(CDCl3)δ4.32(q，2H，OCH2CH3)，1.38(d，3H，OCH2CH3)，1.08(d，3H，15β-Me)，1.02(s，3H，18-Me)，0.93(t，3H，7-乙基))。
实施例3在体外生物测定中用重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞测定化合物对雌激素受体的激动活性，所述中国仓鼠卵巢细胞是用人雌激素受体α-(hERα-)或β-(hERβ-)、大鼠催产素促进因子(RO)和荧光素酶报告基因(LUC)稳定地共转染的细胞。受试化合物刺激通过雌激素受体hERα-或hERβ-介导的荧光素酶的转活，即雌激素激动转活的效能表示为相对于标准的雌激素17β-雌二醇的EC50的的百分比(％)(受试化合物的效能＝(17β-雌二醇的EC50/受试化合物的EC50)×100％)。功效，即通过化合物诱导的受体的最大激活作用的量，表示为相对于由标准的雌激素17β-雌二醇诱导的最大激活作用的百分比(％)(受试化合物的功效＝(受试化合物的最大激活作用/17β-雌二醇的最大激活作用)×100％)。可在De Gooyer M.E.，Deckers G.H.，SchoonenW.G.E.J.，Verheul H.A.M.和Kloosterboer H.J.，Steroids，第68卷，2003，pp.21-30中找到该方法学的更详尽描述。
将ERα/ERβ的选择性定义为ERα-效能/ERβ-效能的比率。本发明的化合物对雌激素α-受体具有激动作用，效能等于或高于1.0％(相对于17β-雌二醇)，其对雌激素β-受体的活性低至少10倍(ERα-/ERβ-的选择性等于或高于10)和/或其是雌激素β-受体的部分激动剂，功效等于或低于由17β-雌二醇诱导的最大激活作用的60％。
在每治疗组4只动物中，用受试化合物进行8周口服治疗后，由病理学家进行短尾猴子宫组织的组织病理学评价。每天一次以40μg/kg的剂量施用比较化合物X，以200μg/kg的剂量施用比较化合物Y和以40和200μg/kg的剂量施用化合物8。基于短尾猴中的正常月经周期的子宫期，在H&E染色的切片中检查下列形态学特征。
A.卵泡期样变化●松散的子宫内膜基质●直的子宫内膜腺体●子宫内膜上皮的肥大●有丝分裂像●子宫肌层的肥大●早期血管发生(萌发或早期增生)●基础分泌B.黄体期样变化●假脱膜化增大的基质细胞●子宫内膜腺体的卷曲●晚期血管发生(螺旋动脉形成)
●子宫内膜上皮细胞的空泡形成●腔内分泌C.卵巢切除的或非刺激的(萎缩性)子宫内膜●致密的子宫内膜基质●子宫内膜上皮的萎缩●子宫内膜腺体的萎缩●子宫肌层的萎缩使用下列分级标度给这些上述发现中的各发现的严重度评分●0级发现不存在●1级最低，非常少，非常小●2级轻微，少数，小●3级中度，中等数目，中等尺寸●4级显著，许多，大规模●5级大量，数量非常多，尺寸非常大对各动物进行该分级。然后就各特征计算每个处理组的平均评分。最后，根据平均个体特征计算每种类别，萎缩、卵泡或黄体期样的平均评分。化合物的有利的子宫内膜安全特征谱的特征在于较少的化合物诱导的卵泡期样活性和更多的黄体期样特征和/或萎缩性子宫内膜。
表1(体外细胞数据)和表2(体内数据)提供了化合物8和比较化合物X(17α-乙炔基-17β-雌二醇，其中R1-R4都是H的式I)和Y(17β-雌二醇)的数据。
表1
表1中所示的结果证明本发明的化合物对于雌激素受体α-亚类具有一致更好的功能选择性和高雌激素α-受体效能，即选择性地激活雌激素α-受体而不或仅部分地激活雌激素β-受体。化合物8显示23.45％的雌激素α-受体效能，其对于雌激素α-受体的选择性超过对雌激素β-受体的15.2倍，其是雌激素β-受体的部分激动剂，功效为40％。密切相关的化合物17α-乙炔基-17β-雌二醇(化合物X)和17β-雌二醇(化合物Y)对于两种雌激素受体亚类显示相同的选择性并且是雌激素β-受体的完全激动剂。
表2
本发明化合物的有利的子宫内膜安全特征谱令人惊奇，因为密切相关的化合物17α-乙炔基-17β-雌二醇和17β-雌二醇都刺激子宫内膜，如表2中通过卵泡期样活性和极少的黄体样活性的清楚的征候所显示的，从而无萎缩性子宫内膜。
实施例4雌性大鼠的性行为是激素依赖性的。在雌激素引发的雌性大鼠中，孕酮明显地增强雌性性行为或脊椎前凸行为。然而，在未接受雌激素的卵巢切除的雌性中，孕酮不能有效地诱导脊椎前凸(也参见，J.B.Becker，S.M.Breedlove and D.Crews(Eds.)，BehavioralEndocrinology，1992，pp.82-84)。
受试化合物在切除卵巢的雌性大鼠中促进孕酮诱导的脊椎前凸行为的能力通常用于证明口服施用这些化合物后的体内雌激素活性。用受试化合物预处理雌性3天，然后在第4天用结合孕激素处理。在结合孕激素处理4小时后，在雄性大鼠存在的情况下，通过计数10分钟内脊椎前凸反应的次数来测量雌性大鼠的性行为。
其中R1是新戊酰基(化合物9a)，R1是二甲基氨甲酰基(化合物9b)或R1是乙氧羰基(化合物9c)的化合物8的前体药物，在以1mg/kg.天的剂量口服后，都证明是活性雌激素化合物。
权利要求
1.式I的15β-取代的类固醇化合物 其中，R1是H、C1-5烷基、C1-12酰基、二-(C1-5烷基)氨基羰基、(C1-5烷基)氧羰基或氨磺酰基，R2是H、C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，任选地其各自可被卤素取代，R3是C1-2烷基、乙烯基或乙炔基，任选地其各自可被卤素取代，和R4是H或C1-12酰基。
2.权利要求1的化合物，其特征在于R2是C1-3烷基、C2-3烯基或C2-3炔基，任选地其各自可被卤素取代。
3.权利要求1或2的化合物，其特征在于R1和R4都是H。
4.包含权利要求1-3中任一项的化合物和可药用赋形剂的药物组合物。
5.权利要求1-3中任一项的用于治疗的化合物。
6.权利要求1-3中任一项的化合物的用于生产药物的用途，所述药物用于雌激素受体关联性疾病的治疗或预防或其他雌激素受体关联性生理学状况的调节或治疗或预防。
7.权利要求6的用途，用于激素疗法的药物的生产。
8.权利要求7的用途，其特征在于所述激素疗法用于更年期不适。
9.权利要求7的用途，其特征在于所述激素疗法用于骨质疏松症。
10.权利要求6的用途，用于避孕的药物的生产。
全文摘要
本发明提供了式I的具有选择性雌激素受体活性的15β－取代的类固醇化合物其中，R
文档编号A61K31/56GK101014610SQ200580030002
公开日2007年8月8日 申请日期2005年9月5日 优先权日2004年9月8日
发明者H·J·J·鲁泽, A·G·H·埃德温, F·A·迪吉克斯 申请人:欧加农股份有限公司
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