花生高油酸材料的快速鉴定方法

xiaoxiao2020-7-23  7

【知识产权代理】【专利服务】Tel:18215660330

专利名称:花生高油酸材料的快速鉴定方法
技术领域
本发明涉及一种花生高油酸材料的鉴定方法。
背景技术
花生高油酸育种是花生遗传改良研究的重要方向。高油酸花生具有提升花生及其 制品的营养价值和延长货架寿命的双重作用,油酸被认为是平衡油脂营养及化学稳定性矛 盾的首选脂肪酸。目前,测定花生中油酸含量的标准方法是气相色谱法,但操作复杂、样品 测试费用昂贵、对设备要求较高,一般的花生育种单位尚未配备气相色谱仪,不具备开展大 规模脂肪酸测定的设备和技术条件,限制了花生高油酸育种的研究进展。

发明内容
本发明旨在于提供一种操作简单、成本低的花生高油酸材料的快速鉴定方法。为了实现上述目的,本发明的技术方案是花生高油酸材料的快速鉴定方法,其特 征在于它包括如下步骤1)花生油的提取选择油酸质量含量不同花生待测样品24份,对不同花生待测样 品分别进行编号,将24份花生待测样品分别取0. 5克装入各自对应的2mL离心管中,用玻 棒分别捣碎24份花生待测样品,并且每一离心管中加入1. OmL的石油醚,振荡,室温下静置 3 4小时后,lOOOOg离心5分钟,将24份上清液各自转移到新的1. 5mL离心管中,将新的 离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚,得到24份花生油;2)24份花生待测样品的折光指数的测定①使用折光仪(数字式折光仪或手持 式折光仪)分别测定24份花生油各自的环境温度下的折光指数用移液器吸取第一份花 生油20 yL,滴加到棱镜表面,盖上棱镜盖,读取第一份花生油的折光指数和环境温度;依 此类推,分别读24份花生油的折光指数和环境温度;②将环境温度下测定的折光指数校 正为标准温度下的折光指数,标准温度为25°C,标准温度下折光指数的换算公式nD25 = nDx+0. 00038X (X_25),其中nD25为25°C下的折光指数,nDx是环境温度为X时的折光指 数;得到24份花生待测样品各自的标准温度下的折光指数;3) 24份花生待测样品的油酸质量含量的测定将步骤1)所得24份花生油各提取 5P L,利用气相色谱仪按照国家标准GB/T 17377-1998的方法测定各自的油酸质量含量, 得到24份花生待测样品各自的油酸质量含量;4)油酸含量与折光指数标准曲线的建立根据24份花生待测样品各自的油酸 质量含量和标准温度下的折光指数,建立油酸质量含量与折光指数的标准曲线方程Y = -9104.6XX+13424,X表示25°C条件下测定的样品折光指数,Y表示样品的油酸质量含量 (%);5)花生高油酸材料的准确以油酸质量含量> 70%作为花生高油酸材料的标准, 根据步骤4)可知,标准温度下的折光指数< 1.4667,能作为花生高油酸材料的判断标准;6)未知花生材料是否属于花生高油酸材料的判定①未知花生材料取0. 5克装入2mL离心管中,用玻棒捣碎,离心管中加入1. OmL的石油醚,振荡,室温下静置3 4小时后,IOOOOg离心5分钟,将离心管中的上清液转移到新的1.5mL离心管中,将新的离心管敞口置 于通风橱以挥干石油醚,得到未知花生材料的花生油;②未知花生材料的折光指数的测定使用折光仪(数字式折光仪或手持式折光 仪)测定未知花生材料的花生油的折光指数用移液器吸取未知花生材料的花生油20 30 μ L,滴加到棱镜表面,盖上棱镜盖,读取未知花生材料的花生油的折光指数和环境温度; 将环境温度下测定的折光指数校正为标准温度下的折光指数,标准温度下折光指数的换算 公式nD25 = nDx+0. 00038X (X_25),其中nD25为25°C下的折光指数,nDx是环境温度为X 时的折光指数;得到未知花生材料标准温度下的折光指数;③若未知花生材料标准温度下的折光指数< 1. 4667,则未知花生材料属于花生高 油酸材料;如果未知花生材料标准温度下的折光指数> 1.4667,则未知花生材料不属于花 生高油酸材料。将未知花生材料标准温度下的折光指数代入=Y1 = -9104. 6XXJ13424中,可得到 未知花生材料的油酸质量含量(%);其中,X1表示未知花生材料标准温度下的折光指数,Y1 表示未知花生材料的油酸质量含量(%)。本发明利用的基本原理是植物油中碳链长度和饱和度不同的脂肪酸其折光指数 存在差异;花生油的油酸含量越高,其折光指数愈低,二者在一定范围内呈线性关系。发明 的技术路线是利用油酸质量含量差异较大的一批花生材料,提取花生油(油脂),分别测 定油酸质量含量(气相色谱法)和花生油的折光指数,建立油酸质量含量与折光指数的线 性关系和标准曲线方程。以油酸质量含量> 70%作为花生高油酸材料的标准,也就是标准 温度(25°C )下的折光指数< 1. 4667,能作为花生高油酸材料的判断标准;测定未知花生材 料的折光指数,未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数< 1. 4667,则未知花生材料属 于花生高油酸材料(如图2所示);并利用方程换算出油酸质量含量,达到以折光指数法间 接测定油酸含量的目的,在花生高油酸育种实践中具有重要利用价值。本发明的有益效果是1、操作简单、成本低。只需测定未知花生材料的折光指数,换算成标准温度下折光 指数,若未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数< 1. 4667,则未知花生材料属于花生 高油酸材料;并且本发明可以在较为简单的实验条件下有效鉴定花生高油酸材料,尤其适 合对育种材料作批量筛选,操作简单,分析测试费用降低90%以上,鉴定成本低廉。2、本发明可在较为简单的实验条件下高通量地筛选花生高油酸材料,尤其适合在 高油酸育种中的早期世代进行单株筛选,能够利用半粒种子进行鉴定,剩下的半粒种子可 以继续种植。通过与标准方法的比较,本发明提供的方法鉴定结果可靠性高达95%以上。


图1是本发明以花生材料的油酸含量(气相色谱测定)和折光指数建立的标准曲 线方程图,相关系数为R2 = 0. 9911。图2为本发明的基本原理示意图。
具体实施例方式为了更好地理解本发明,下面结合实例进一步阐明本发明的内容,但本发明不仅 仅局限于下面的实施例。本发明测定的对象包括花生单粒、单株混合或株系混合种子。由于折光指数的测 定仅需花生油20 y L即可,因此花生油的提取可在1. 5mL离心管内批量操作,以下仅以单粒花 生种子为材料说明发明的具体步骤,单株花生和株系样品的鉴定方法仅需缩小样本即可。实施例1 花生高油酸材料的快速鉴定方法,它包括如下步骤1)花生待测样品的制备取健康饱满的花生种子作为供试材料,取单粒花生种子 从中部横切,不含胚的部分用于鉴定,含胚部分保留到下年种植;如果鉴定单株花生,可将 整株的花生种子在远胚轴端切去1/5,混合后待测,含胚部分留待下年种植;花生油的提取选择油酸质量含量在35. 91% 82. 37%之间不同花生待测样品 24份(具体见表1),对不同花生待测样品分别进行编号,将24份花生待测样品分别取0. 5 克装入各自对应的2mL离心管中(即离心管为相应的24个,每一个离心管装一份花生待测 样品),用玻棒分别捣碎24份花生待测样品,并且每一离心管中加入1. OmL的石油醚(沸程 60-90°C ),剧烈振荡,室温下静置3 4小时后,10000g离心5分钟,将24份上清液各自转 移到新的1. 5mL离心管中(即24个新的离心管),将新的离心管敞口置于通风橱以挥干石 油醚(需要6-7小时,60-70°C水浴能大大缩短石油醚的挥干时间),得到24份花生油;2) 24份花生待测样品的折光指数的测定①使用数字式折光仪(ATAG0公司生产, PAL-BX/RI,或称数字式折射仪)分别测定24份花生油各自的环境温度下的折光指数用 移液器吸取第一份花生油20 u L,滴加到棱镜表面,盖上棱镜盖,读取第一份花生油的折光 指数和环境温度;依此类推,分别读24份花生油的折光指数和环境温度;②将环境温度下 测定的折光指数校正为标准温度(25°C )下的折光指数,标准温度下折光指数的换算公式 nD25 = nDx+0. 00038X (X_25),其中nD25为25°C下的折光指数,nDx是环境温度为X时的 折光指数;得到24份花生待测样品各自的标准温度(25°C )下的折光指数;3) 24份花生待测样品的油酸质量含量的测定将步骤1)所得24份花生油各提取 5P L,利用气相色谱仪按照国家标准GB/T 17377-1998的方法测定各自的油酸质量含量, 得到24份花生待测样品各自的油酸质量含量;表1用于建立线性方程的花生样品的油酸质量含量及折光指数值 4)油酸含量与折光指数标准曲线的建立根据24份花生待测样品各自的油酸质 量含量和标准温度(25°C)下的折光指数,建立油酸质量含量与折光指数的标准曲线方程 Y =-9104. 6XX+13424,X表示25°C条件下测定的样品折光指数(1.4655彡X彡1.4690), Y表示样品的油酸质量含量(% );油酸质量含量与折光指数的标准曲线图如图1所示;5)花生高油酸材料的准确花生待测样品的油酸质量含量越高,其折光指数愈 低,二者在一定范围内呈线性关系;以油酸质量含量> 70%作为花生高油酸材料的标准, 根据步骤4)可知,标准温度(25°C )下的折光指数< 1.4667,能作为花生高油酸材料的判 断标准;6)未知花生材料是否属于花生高油酸材料的判定未知花生材料的制备取健康饱满的花生种子作为供试材料,取单粒花生种子从 中部横切,不含胚的部分用于鉴定,含胚部分保留到下年种植;如果鉴定单株花生,可将整 株的花生种子在远胚轴端切去1/5,混合后待测,含胚部分留待下年种植;选取未知花生材 料样品12组,并编号;以下对每一编号的未知花生材料样品分别进行是否属于花生高油酸 材料的判定,结果见表2;①未知花生材料取0. 5克装入2mL离心管中,用玻棒捣碎,离心管中加入1. OmL的 石油醚(沸程60-90°C ),剧烈振荡,室温下静置3 4小时后,IOOOOg离心5分钟,将离心管 中的上清液转移到新的1.5mL离心管中,将新的离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚(需 要6-7小时,60-70°C水浴能大大缩短石油醚的挥干时间),得到未知花生材料的花生油;②未知花生材料的折光指数的测定折光指数的测定可以采用多种型号的数字式 或手持式简易折光仪{如使用数字式折光仪(ATAGO,PAL-BX/RI,或称数字式折射仪)},下面以日本ATAG0公司生产的Master-RI手持式折光仪为例,其他型号折光仪的使用可参照 具体的说明书进行;使用手持式折光仪测定未知花生材料的花生油的折光指数用移液器 吸取未知花生材料的花生油20 30 y L,滴加到棱镜表面,盖上棱镜盖,读取未知花生材料 的花生油的折光指数和环境温度{通过目镜读取未知花生材料的折光指数(明暗分界处, 读取刻度),利用温度计测定的环境温度};将环境温度下测定的折光指数校正为标准温度 (25°C )下的折光指数,标准温度下折光指数的换算公式nD25 = nDx+0. 00038 X (X_25),其 中nD25为25°C下的折光指数,nDx是环境温度为X时的折光指数;得到未知花生材料标准 温度(25 °C )下的折光指数;③若未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数彡1. 4667,则未知花生材料属 于花生高油酸材料;如果未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数> 1.4667,则未知 花生材料不属于花生高油酸材料;将未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数代入Yi =-9104. 6XXJ13424中,可得到未知花生材料的油酸质量含量(% );其中,Xi表示未知花 生材料标准温度(25°C )下的折光指数,表示未知花生材料的油酸质量含量(% )。通过测定未知花生材料样品的折光指数,换算成标准温度下折光指数,利用标准 曲线方程计算油酸质量百分比含量(%),并与国家标准方法测定的油酸质量含量(% )对 比,结果表明,本发明折光指数法判定高油酸材料的符合率达95%以上(表2)。表2折光指数法判定高油酸花生材料的实施效果
权利要求
花生高油酸材料的快速鉴定方法,其特征在于它包括如下步骤1)花生油的提取选择油酸质量含量不同花生待测样品24份,对不同花生待测样品分别进行编号,将24份花生待测样品分别取0.5克装入各自对应的2mL离心管中,用玻棒分别捣碎24份花生待测样品,并且每一离心管中加入1.0mL的石油醚,振荡,室温下静置3~4小时后,10000g离心5分钟,将24份上清液各自转移到新的1.5mL离心管中,将新的离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚,得到24份花生油;2)24份花生待测样品的折光指数的测定①使用折光仪分别测定24份花生油各自的环境温度下的折光指数用移液器吸取第一份花生油20μL,滴加到棱镜表面,盖上棱镜盖,读取第一份花生油的折光指数和环境温度;依此类推,分别读24份花生油的折光指数和环境温度;②将环境温度下测定的折光指数校正为标准温度下的折光指数,标准温度为25℃,标准温度下折光指数的换算公式nD25=nDx+0.00038×(X-25),其中nD25为25℃下的折光指数,nDx是环境温度为X时的折光指数;得到24份花生待测样品各自的标准温度下的折光指数;3)24份花生待测样品的油酸质量含量的测定将步骤1)所得24份花生油各提取5μL,利用气相色谱仪按照国家标准GB/T 17377-1998的方法测定各自的油酸质量含量,得到24份花生待测样品各自的油酸质量含量;4)油酸含量与折光指数标准曲线的建立根据24份花生待测样品各自的油酸质量含量和标准温度下的折光指数,建立油酸质量含量与折光指数的标准曲线方程Y=-9104.6×X+13424,X表示25℃条件下测定的样品折光指数,Y表示样品的油酸质量含量(%);5)花生高油酸材料的准确以油酸质量含量≥70%作为花生高油酸材料的标准,根据步骤4)可知,标准温度下的折光指数≤1.4667,能作为花生高油酸材料的判断标准;6)未知花生材料是否属于花生高油酸材料的判定①未知花生材料取0.5克装入2mL离心管中,用玻棒捣碎,离心管中加入1.0mL的石油醚,振荡,室温下静置3~4小时后,10000g离心5分钟,将离心管中的上清液转移到新的1.5mL离心管中,将新的离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚,得到未知花生材料的花生油;②未知花生材料的折光指数的测定使用折光仪测定未知花生材料的花生油的折光指数用移液器吸取未知花生材料的花生油20~30μL,滴加到棱镜表面,盖上棱镜盖,读取未知花生材料的花生油的折光指数和环境温度;将环境温度下测定的折光指数校正为标准温度下的折光指数,标准温度下折光指数的换算公式nD25=nDx+0.00038×(X-25),其中nD25为25℃下的折光指数,nDx是环境温度为X时的折光指数;得到未知花生材料标准温度下的折光指数;③若未知花生材料标准温度下的折光指数≤1.4667,则未知花生材料属于花生高油酸材料。
2.根据权利要求1所述的花生高油酸材料的快速鉴定方法,其特征在于将未知花生 材料标准温度下的折光指数代入、=-9104. 6XXJ13424中,可得到未知花生材料的油酸 质量含量(% );其中,&表示未知花生材料标准温度下的折光指数,A表示未知花生材料 的油酸质量含量(%)。
全文摘要
本发明涉及一种花生高油酸材料的鉴定方法。本发明涉及一种花生高油酸材料的快速简易鉴定方法,利用油酸质量含量差异较大的一批花生材料,提取花生油,分别测定油酸质量含量(气相色谱法)和花生油的折光指数,建立油酸质量含量与折光指数的线性关系和标准曲线方程。以油酸质量含量≥70%作为花生高油酸材料的标准,也就是标准温度(25℃)下的折光指数≤1.4667,能作为花生高油酸材料的判断标准;测定未知花生材料的折光指数,未知花生材料标准温度(25℃)下的折光指数≥1.4667,则未知花生材料属于花生高油酸材料;并利用方程换算出油酸质量含量。操作简单、成本低,本发明提供的方法鉴定结果可靠性高达95%以上。
文档编号G01N21/41GK101876636SQ200910273250
公开日2010年11月3日 申请日期2009年12月14日 优先权日2009年12月14日
发明者姜慧芳, 廖伯寿, 晏立英, 王圣玉, 雷永, 黄家权 申请人:中国农业科学院油料作物研究所

最新回复(0)