生物活性提高的白藜芦醇制剂的制作方法
专利名称：生物活性提高的白藜芦醇制剂的制作方法
生物活性提高的白藜芦醇制剂
背景技术：
类黄酮(Flavonoids)在整个自然界中十分丰富，并且在植物和动物中发挥广泛的生物学活性。目前认为自然界中存在超过4000种类黄酮。这些化合物是多种花木在秋季出现的颜色的主要来源。类黄酮存在于水果、蔬菜、坚果、种子、药草、香料、茎、花以及红酒和茶中，并且在人的饮食中定期食用。根据其取代基，可以将这些化合物分为黄烷醇类、 花青素类、黄酮类(flavones)、黄烷酮类和查耳酮类。类黄酮的一些生物学活性包括抗炎、抗病毒、抗真菌、抗细菌、雌激素、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤发生、抗血栓形成、保肝和抗增殖医学性质。已进行研究并发现有可能作为治疗剂的一些主要类黄酮为来自绿茶和可可的类黄酮或黄烷醇类，如表没食子儿茶素没食子酸酯(印igallocatechin gallate)、表没食子儿茶素(印igallocatechin)、表儿茶素(印icatechin)、儿茶素(catechin)禾口表儿茶素没食子酸酯(印icatechin gallate)，来自葡萄的类黄酮，如白藜芦醇(3，5，4，_三羟基芪(3,5,4' -trihydroxystilbene))，来自大豆的，如染料木黄酮(genistein)和大豆黄酮 (diadzein)，和槲皮素(quercetin)，其最丰富的来源为洋葱。特别感兴趣的是至少在体外和在某些动物模型中反式白藜芦醇以及可能与长寿有关的某些基因的相关研究。已经将白藜芦醇以及另一些类黄酮和黄烷醇类鉴别为在低微摩尔浓度下通过它们对多种细胞机制的干扰作用起效的癌症化学预防剂，这些干扰作用如(1)抑制前致癌物的代谢活化，(2)致癌物-解毒酶的诱导和(3)通过抑制炎症信号和血管生成来抑制肿瘤生长。在乳腺癌(MCF-7)、结肠癌(HT-29)和卵巢癌(A-2780)细胞中体外测试了白藜芦醇及其它类黄酮的抗增殖和细胞毒性作用。白藜芦醇以剂量依赖性方式抑制MCF-7和A-2780 细胞的增殖。类黄酮如白藜芦醇可以通过抑制环加氧酶(组成型C0X-1和诱导型C0X-2) 从而抑制内源前列腺素的合成来作为有效的抗炎剂。与白藜芦醇有关的大部分研究是用反式白藜芦醇进行的。最近，纯反式白藜芦醇已经可商购。为了使任何治疗性分子物质通过胃肠道输送，进入血液并最终到达体内器官和细胞，所述分子必须在肠液的水相中是可溶的。如果不溶解，药物将作为块状粉尘通过胃肠道。类黄酮如白藜芦醇在水中几乎是不溶的，并且经口给药的动物药物动力学研究证明了极低的生物利用度。同样，使用以活性儿茶素标准化的绿茶提取物的人体研究证明了极低的吸收，通常在动物或人的研究中经口给药小于1%。事实上，在一个研究中，在经口食用绿茶提取物后在人中所测定的血浆茶儿茶素浓度比体外系统中显示发挥生物学活性的浓度低5-50倍。反式白藜芦醇的动物药物动力学研究也表明在经口给药后在血浆中不到 1-2%。在人中，经口施用多达4g后，在血浆中未发现槲皮素。多种类黄酮是亲脂的或脂溶性的，并且在水中的溶解度极低(疏水的)。红酒中仅含有少量的白藜芦醇。例如，酒中的白藜芦醇可以在0. 2至5. 8毫克/升。白藜芦醇是疏水的或者不溶于水的，并且因此在水中或在如果汁或软饮料的含水饮料中是不溶的。由于白藜芦醇的多种所需性质，获得用于体内给药的水溶性更强的白藜芦醇制剂和/或生物利用度提高的白藜芦醇制剂将是有利的。本发明解决了本领域中的这些及其它问题。
发明内容
在一个方面，本发明提供了水溶性制剂，其包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂。在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗癌症、肥胖、糖尿病、 心血管疾病、血脂异常、年龄相关黄斑变性(例如与年龄相关黄斑变性有关的失明)、高胆固醇或视网膜病(例如糖尿病性视网膜病)的方法。所述方法包括向所述对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗VEGF介导的疾病状态的方法。所述方法包括向所述对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在另一个方面，本发明提供了提高白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐在对象中的生物利用度的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。可将表面活性剂-白藜芦醇混合物施用给所述对象，从而提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的生物利用度。在另一个方面，本发明提供了在水中溶解白藜芦醇的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物与水合并，从而将白藜芦醇溶解到水中。发明详述I.定义本文所使用的缩写具有它们在化学和生物领域中的常规含义。根据本文所述化合物上存在的特定取代基部分，术语“可药用盐”意在包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明的制剂含有相对酸性的官能团时，通过将这类化合物的中性形式与足够量的所需碱(纯化合物或在适合的惰性溶剂中)接触可获得碱加成盐。可药用碱加成盐的实例包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或者类似的盐。当本发明的制剂含有相对碱性的官能团时，通过将这些化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯化合物或在适合的惰性溶剂中)接触可获得酸加成盐。可药用酸加成盐的实例包括来源于无机酸的那些，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等，以及来源于相对无毒的有机酸的盐，所述有机酸如醋酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括如精氨酸盐等的氨基酸盐和如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的有机酸的盐(参见，例如，Berge等人，“Pharmaceutical Salts，，，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些特定制剂含有允许化合物转化为碱加成盐或酸加成盐的碱性和酸性官能团。优选地，通过将所述盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生所述化合物的中性形式。所述化合物的母体形式在某些物理性质方面(如极性溶剂中的溶解度) 不同于多种盐的形式。除了盐的形式外，本发明提供了前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药是在生理条件下易于经历化学变化以提供本发明制剂的那些化合物。另外，可在离体环境中通过化学或生物化学方法将前药转化为本发明的制剂。例如，当放置在具有适合的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药可缓慢地转化为本发明的制剂。本发明的某些制剂可以非溶剂化形式和包括水化形式在内的溶剂化形式存在。一般地，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且涵盖在本发明的范围内。本发明的某些制剂可以多晶或无定形存在。一般地，对于本发明所考虑的用途，所有物理形式均是等同的并且在本发明的范围内。本发明的某些制剂具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋物、非对映异构体、互变异构体、几何异构体和各个异构体均涵盖在本发明的范围内。本发明的制剂不包含那些在本领域中已知过于不稳定而不能合成和/或分离的那些化合物。本发明的制剂还可含有构成这些化合物的一种或多种原子的非天然比例的原子同位素。例如，可以用放射性同位素放射性标记所述化合物，如(例如)氚(3H)、 碘-125 (125I)或碳-14(14C)。无论是否具有放射性，本发明制剂的所有同位素变化均涵盖在本发明的范围内。如本文所使用的，“白藜芦醇(resveratrol)”包括来源于如葡萄皮、红酒的天然来源或如虎杖(P. cuspidatum)或五角决明(C. quinquangulata)的其它植物来源的白藜芦醇，或者以98%的反式-白藜芦醇形式通过合成产生的白藜芦醇，其可商购自Sigma Chemical Co.，St. Louis, Mo.。可以通过分级分离和进一步的柱色谱生产高浓度的植物提取物直至提取物可含有两种异构体混合物形式的高达99%浓度的白藜芦醇。如本文所使用的，“反式白藜芦醇”通常也可以被称为反式_3，5，4'-三羟基芪(trans-3，5， 4' -trihydroxystilbene) ,3,4'，5-芪三醇(3，4'，5-stilbenetriol)、(E)-5-(对羟基苯乙烯基)间苯二酚，以及CAS号501-36-0。术语“治疗”是指创伤、病理或病况的治疗或改善中任何成功的迹象，其包括任何客观或主观参数，如减轻；缓解；症状减弱或使患者更耐受创伤、病理或病况；减缓恶化或衰弱速度；使恶化终点不太虚弱；改善患者的身体或精神状态。症状的治疗或改善可以是基于客观或主观参数的；其包括体检、神经精神病学检查和/或精神病学评价的结果。例如，通过降低意识或认知障碍发生率，本发明的方法成功治疗了患者的谵妄(delirium)。如本文所使用的，术语“癌症”是指哺乳动物中存在的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，其包括白血病、癌和肉瘤。示例性的癌症包括脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、肝癌、肾癌、肺癌、非小细胞肺癌、黑素瘤、间皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宫癌和成神经管细胞瘤。其它实例包括霍奇金病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s Lymphoma)、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多、原发性巨球蛋白血症、原发性脑瘤、癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌瘤、泌尿膀胱癌、恶化前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、成神经细胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌和外分泌胰腺赘生物和前列腺癌。术语“白血病”广泛地表示造血器官的进行性恶性疾病并且通常以血液和骨髓中白血球及其前体的异常增殖和发育为特征。在临床上，一般根据以下方面对白血病分类 (1)疾病的持续时间和特性-急性或慢性；(2)所涉及的细胞类型骨髓细胞(髓性)、淋巴细胞(淋巴性)或单核细胞；和(3)血液中异常细胞数目的增加或不增加-白血病性或非白血病性(亚白血病)。P388白血病模型被广泛接受用于预测体内抗白血病活性。据信在P388测定中测试为阳性的化合物，无论所治疗的白血病类型如何，一般都将表现出一定水平的体内抗白血病活性。因此，本发明包括治疗白血病的方法，以及优选地，包括治疗下列的方法急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性前髓细胞性白血病、成人T细胞性白血病、非白血性白血病、白血性白血病、嗜碱细胞性白血病、母细胞性白血病、牛白血病、慢性髓细胞性白血病、皮肤白血病(leukemia cutis)、胚胎白血病(embryonal leukemia)、嗜酸细胞性白血病、葛氏白血病(Gross’ leukemia)、毛细胞白血病、原始血细胞性白血病、成血细胞性白血病、组织细胞性白血病、干细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病 (lymphatic leukemia)、成淋巴细胞性白血病(lymphoblastic leukemia)、淋巴细胞性白血病(lymphocytic leukemia)、淋巴性白血病(lymphogenous leukemia)、淋巴细胞白血病(lymphoid leukemia)、淋巴肉瘤细胞性白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞型白血病、 小原粒型白血病、单核细胞性白血病、成髓细胞性白血病(myeloblastic leukemia)、髓细胞性白血病、骨髓性粒细胞性白血病、粒-单核细胞性白血病、内格利型白血病(Naegeli leukemia)、浆细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病、前髓细胞性白血病、里德尔氏细胞性白血病(Rieder cell leukemia)、希林氏性白血病(Schiling，s leukemia)、干细胞性白血病、亚白血病性白血病和未分化细胞性白血病。术语“肉瘤”泛指由如胚性结缔组织的物质组成的肿瘤并且一般是由嵌入到原纤维或均质物质中的紧密堆积的细胞构成。可治疗的肉瘤包括软骨肉瘤(chondrosarcoma)、 纤维肉瘤(fibrosarcoma)、淋巴肉瘤(lymphosarcoma)、黑素肉瘤(melanosarcoma)、粘液肉瘤(myxosarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、艾伯内西氏肉瘤(Abemethy，s sarcoma)、 脂肉瘤(adipose sarcoma)、脂肪肉瘤(Iiposarcoma)、软组织腺泡状肉瘤(alveolar soft part sarcoma)、成釉细胞肉瘤(ameloblastic sarcoma)、葡萄状肉瘤(botryoid sarcoma)、绿色肉瘤(chloroma sarcoma)、绒毛膜癌(chorio carcinoma)、胚胎性癌肉瘤(embryonal sarcoma)、韦尔姆斯氏瘤肉瘤(Wilms' tumor sarcoma)、子宫内膜肉瘤(endometrial sarcoma)、间质性肉瘤(stromal sarcoma)、尤因氏肉瘤(Ewing' s sarcoma)、筋膜肉瘤(fascial sarcoma)、成纤维细胞肉瘤(fibroblastic sarcoma)、巨细胞肉瘤(giant cell sarcoma)、绿色瘤(granulocytic sarcoma)、霍奇金肉瘤(Hodgkin's sarcoma)、皮肤特发性多发性色素沉着出血性肉瘤(idiopathic multiple pigmented hemorrhagic sarcoma)、B 细胞免疫母细胞肉瘤(immunoblastic sarcoma of B cells)、 淋巴瘤、T细胞免疫母细胞肉瘤(immunoblastic sarcoma of T cells)、延森氏肉瘤 (Jensen，s sarcoma)、卡波氏肉瘤(Kaposi，s sarcoma)、枯否氏细胞肉瘤(Kupfer cell sarcoma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、白血病性肉瘤(Ieukosarcoma)、恶性间叶瘤肉瘤 (malignant mesenchymoma sarcoma)、骨膜夕卜肉瘤(parosteal sarcoma)、网状细胞肉瘤(reticulocytic sarcoma)、鲁其Jf 氏肉瘤(Rous sarcoma)、菜液囊性肉瘤(serocystic sarcoma)、滑膜肉瘤(synovial sarcoma)禾口毛细血管扩张性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。术语“黑素瘤”用于表示由皮肤及其它器官的黑素细胞系统引起的肿瘤。可治疗的黑素瘤包括，例如，肢端着色斑性黑素瘤(acrallentiginous melanoma)、无黑色素性恶性黑素瘤(amelanotic melanoma)、良性幼年型黑素瘤(benign juvenile melanoma)、克罗德曼氏黑素瘤(Cloudman，s melanoma)、S91黑素瘤、哈-帕二氏黑素瘤(Harding-Passey melanoma)、幼年型黑素瘤(juvenile melanoma)、恶性小疲(lentigo maligna melanoma)、 恶性黑素瘤、结节性黑素瘤(nodular melanoma)、甲床黑瘤(subungal melanoma)和浅表扩展性黑素瘤(superficial spreading melanoma)。 术语“癌(carcinoma) ”是指由倾向于浸润周围组织并引起转移的上皮细胞组成的恶性新生物。可治疗的示例性癌包括，例如，腺泡癌(acinar carcinoma)、腺泡癌(acinous carcinoma)、囊性腺样癌(adenocystic carcinoma)、腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma)、腺癌(carcinoma adenomatosum)、肾上腺皮质癌(carcinoma of adrenal cortex)、月市t包· (alveolar carcinoma)、月市t包细 (alveolar cell carcinoma)、^ 细胞癌(basal cell carcinoma)、基底细胞癌(carcinoma basocellulare)、类基底细胞癌(basaloid carcinoma)、基底鳞状上皮细胞癌(basosquamous cell carcinoma)、细支气管月市泡癌(bronchioalveolar carcinoma)、细支气管癌(bronchiolar carcinoma)、 支气管癌(bronchogenic carcinoma)、髓样癌(cerebriform carcinoma)、胆管细胞癌(cholangioceIlular carcinoma)、绒毛膜癌(chorionic carcinoma)、胶样癌 (colloid carcinoma)、粉剌癌(comedo carcinoma)、子宫体癌(corpus carcinoma)、蹄状癌(cribriform carcinoma)、胸廓癌(carcinoma en cuirasse)、皮肤癌(carcinoma cutaneum) λ tt Ifi(cylindrical carcinoma) λ tt Ifi(cylindrical cell carcinoma)、食管癌(duct carcinoma)、食管癌(carcinoma durum)、胚性癌(embryonal carcinoma)、髓样癌(encephaloid carcinoma)、表皮样癌(epiermoid carcinoma)、腺样上皮癌(carcinoma epitheliale adenoides)、夕卜植癌(exophytic carcinoma)、馈疡癌(carcinoma ex ulcere)、纤维癌(carcinoma fibrosum)、胶样癌(gelatiniforni carcinoma)、胶样癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌(giant cell carcinoma)、 巨细胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、粒层细胞癌(granulosa cell carcinoma)、毛基底细胞癌(hair-matrix carcinoma)、多血癌 (hematoid carcinoma)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)、许特莱氏细胞腺癌 (Hurthle cell carcinoma)、玻璃质癌(hyaline carcinoma)、肾细胞癌(hypemephroid carcinoma)、幼稚型胚胎性癌(infantile embryonal carcinoma)、原位癌(carcinoma in situ)、表皮内癌(intraepidermal carcinoma)、上皮内癌(intraepithelial carcinoma)、 克氏癌(Krompecherr s carcinoma)、库尔契茨基细胞癌(Kulchitzky-cell carcinoma)、 大细胞癌(large-cell carcinoma)、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、月旨瘤癌(lipomatous carcinoma)、淋巴上皮癌(lymphoepithelial carcinoma)、髓样癌(carcinoma medullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、漂色素癌(melanotic carcinoma)、髓样癌(carcinoma molle)、粘液癌(mucinous carcinoma)、 粘液癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌(carcinoma mucocellulare)、粘表皮癌(mucoepidermoid carcinoma)、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌(carcinoma myxomatodes)、鼻口因癌(nasopharyngeal carcinoma)、燕麦细胞癌(oat cell carcinoma)、骨化性癌(carcinoma ossificans)、骨化性癌(osteoid carcinoma)、乳头状癌(papillary carcinoma)、门脉周癌(periportal carcinoma)、侵入前癌(preinvasive carcinoma)、棘细胞癌(prickle cell carcinoma)、脑样癌(pultaceous carcinoma)、肾细胞癌(renal cell carcinoma of kidney)、|C备细胞癌(reserve cell carcinoma)、肉瘤样癌(carcinoma sarcomatodes)、施奈德氏癌 (schneiderian carcinoma)、硬癌(scirrhous carcinoma)、阴囊癌(carcinoma scroti)、 ￡口戒细胞癌(signet-ring cell carcinoma)、单纯癌(carcinoma simplex)、小细胞癌 (small-cell carcinoma)、马铃薯状癌(solanoid carcinoma)、球状细胞癌(spheroidal cell carcinoma)、梭细胞癌(spindle cell carcinoma)、梭细胞癌(carcinoma spongiosum)、麟状癌(squamous carcinoma)、麟状上皮癌(squamous cell carcinoma)、 绳捆癌(string carcinoma)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌(transitional cell carcinoma)、结节性皮癌(carcinoma tuberosum)、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、抚状癌(verrucous carcinoma)禾口绒毛状癌(carcinoma villosum)。术语“抗肿瘤”表示抑制或防止癌症的生长。“抑制或防止癌症的生长”包括与不使用给定疗法或治疗相比，降低癌症的生长。用于确定化合物是否抗肿瘤的细胞毒性测定在癌症疗法领域中是熟知的并且对于多种癌是可用的。如本文所使用的，“复合疗法”或“辅助疗法”表示结合本发明制剂对需要药物的患者进行治疗或者对所述患者施用用于疾病的另一种药物。这种复合疗法可以是顺序疗法， 其中先用一种药物治疗患者然后再用另一种药物治疗，或者同时施用两种药物。本发明包括使用本发明水溶性制剂的复合疗法或辅助疗法。“患者”是指哺乳动物对象，包括人。如本文所使用的，术语“湿性年龄相关黄斑变性(wet age-related macular degeneration, AMD) ”是指眼部病况或疾病，其中在视网膜上发生损伤性新血管生长和渗漏，并且如果不进行治疗则可以导致失明。AMD是造成年龄相关性失明的主要原因。如本文所用的，术语“糖尿病性视网膜病”是指与糖尿病有关的眼科疾病。糖尿病可以对向视网膜供血的血管造成损害，并且这可以导致血管渗漏或破裂，从而刺激异常新生血管的生长。糖尿病性视网膜病是造成糖尿病患者失明的主要原因，并且仅在美国就影响了超过400万成年人。如本文所使用的，与含有白藜芦醇的溶液有关的术语“澄清水溶液”表示不含未溶解白藜芦醇的可见颗粒的含水溶液(例如，饮料)。在一些实施方案中，澄清水溶液不是分散系，也不是悬浮液，并且在静置1小时或以上仍保持澄清。澄清水溶液为饮料时，食用前可能不需要摇晃该澄清水溶液。II.水溶性制剂已发现非离子型表面活性剂可以用于提高白藜芦醇、白藜芦醇代谢物及其盐(例如，可药用盐)的溶解度和/或生物利用度。因此，非离子型表面活性剂可用于形成含有白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐的水溶性制剂。在一些实施方案中，白藜芦醇为反式白藜芦醇、反式白藜芦醇或其盐。在另一些实施方案中，白藜芦醇为反式白藜芦醇。在一个方面，本发明提供了水溶性制剂，其包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂。在一些实施方案中，所述水溶性制剂在水中不包含植物油悬浮液或可见的大胶束(肉眼可见的胶束)。在另一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含醇(例如，白藜芦醇不是先溶于醇，然后再加入水中的)。
如本文所使用的，“非离子型表面活性剂”是在中性溶液(例如，中性水溶液)中趋向于不电离(即不带电)的表面活性剂。有用的非离子型表面活性剂包括例如非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；非离子水溶性聚乙二醇单或双脂肪酸酯；非离子水溶性失水山梨醇脂肪酸酯(例如，失水山梨醇单油酸酯，如斯潘80和吐温20 (聚乙二醇20 失水山梨醇单油酸酯))；聚乙二醇化甘油酯(polyglycolyzed glyceride)；非离子水溶性三嵌段共聚物(例如，聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)/聚(环氧乙烷)三嵌段共聚物，如泊洛沙姆406(普朗尼克F-127)及其衍生物。非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯的实例包括丙二醇二辛酸酯/ 二癸酸酯(例如，MIGLY0L 840)、中链甘油单酯和甘油二酯(例如，CAPMUL和IMWIT0R 72)、 中链甘油三酯(例如，辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯，如LAVRAFAC、MIGLY0L 810或812、 CR0DAM0L GTCC-PN和S0FTIS0N 378)、长链甘油单酯(例如，如PECEOL的甘油单油酸酯和如MAISINE的甘油单亚油酸酯)，聚乙二醇蓖麻油(例如，聚乙二醇甘油蓖麻酸酯 (macrogolglycerol ricinoleate)、聚乙二酉享甘油轻基硬月旨酸酉旨(macrogolglycerol hydroxystearate)、聚乙二醇十六十八烷基醚)和其衍生物。非离子水溶性聚乙二醇单或双脂肪酸酯包括d-α -生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、聚乙二醇66012-羟基硬脂酸酯(S0LUT0L HS 15)、聚乙二醇油酸酯和硬脂酸酯 (例如，PEG 400单硬脂酸酯和PEG 1750单硬脂酸酯)和其衍生物。聚乙二醇甘油酯(polyglycolyzed glyceride)包括聚氧乙烯油酸甘油酯、聚氧乙烯亚油酸甘油酯、聚氧乙烯辛酸/癸酸甘油酯和其衍生物。具体实例包括LABRAFIL M-1944CS、LABRAFIL M-2125CS、LABRAS0L、S0FTIGEN 和 GELUCIRE。在一些实施方案中，非离子型表面活性剂为聚乙二醇蓖麻油或其衍生物。可以通过将蓖麻油或氢化蓖麻油与不同量的环氧乙烷反应来合成有效的聚乙二醇蓖麻油。聚乙二醇甘油蓖麻酸酯是83%的相对疏水性成分和17%的相对亲水性成分的混合物。相对疏水性部分的主要成分是甘油聚乙二醇蓖麻酸酯，而相对亲水性部分的主要成分是聚乙二醇和聚氧乙基甘油醚。聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯是约75%的相对疏水性成分的混合物，其中相对疏水性成分的主要部分为甘油聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯。在一些实施方案中，所述水溶性制剂包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐和聚乙二醇蓖麻油以形成透明的水溶性制剂。如本文所公开的，“透明的水溶性制剂”是指肉眼可以清楚地看透的制剂，并且任选地它是有颜色的。在一些实施方案中，透明的水溶性制剂不含肉眼可见的颗粒(例如，未溶解的白藜芦醇颗粒)。在某些实施方案中，光可以透射透明的水溶性制剂而不发生扩散或散射。因此，在一些实施方案中，透明的水溶性制剂不是不透明的、浑浊的或乳白色的。本文所公开的透明的水溶性制剂不包括在如玉米油的植物油中的乳白色乳液或悬浮液。透明的水溶性制剂通常也不是通过首先将白藜芦醇溶解在醇中然后再与水混合所形成的。在一些实施方案中，所述水溶性制剂是非醇制剂。如本文所使用的，“非醇”制剂是不包含(或仅包含痕量的)甲醇、乙醇、丙醇或丁醇的制剂。在另一些实施方案中，所述制剂不包含(或仅包含痕量的)乙醇。在一些实施方案中，所述制剂是无非质子溶剂的制剂。如本文所使用的，术语“无非质子溶剂的(non-aprotic solvated) ”表示不含或仅含痕量的水溶性非质子溶剂。水溶性非质子溶剂是水溶性的非表面活性剂溶剂，其中氢原子未键合至氧或氮，因此不能贡献氢键。在一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含(或仅包含痕量的)极性非质子溶剂。 极性非质子溶剂是其分子表现出分子偶极矩但其氢原子未键合至氧或氮原子的非质子溶剂。极性非质子溶剂的实例包括醛、酮、二甲基亚砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)。在另一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含(或仅包含痕量的)二甲基亚砜。因此，在一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含DMS0。在一个相关实施方案中，所述水溶性制剂不包含 DMSO或乙醇。在另一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含(或仅包含痕量的)非极性非质子溶剂。非极性非质子溶剂是其分子表现出约为零的分子偶极的非质子溶剂。实例包括烃类， 如烷烃、烯烃和炔烃。本发明的水溶性制剂包括溶解在水中的制剂(即，水性制剂)。在一些实施方案中，当加入到水中时，水溶性制剂形成透明的水溶性制剂。在一些实施方案中，所述水溶性制剂基本上是由白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂组成的。在水溶性制剂“基本上是由”白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂“组成”时， 该制剂包含白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐、非离子型表面活性剂和任选地在本领域中广泛已知可用于营养品制剂中的其它成分，如防腐剂、增味剂、缓冲剂、水等。“基本上由”白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐“组成”的水溶性制剂不包含将破坏所述制剂的新颖性和创造性的成分。在一些实施方案中，所述水溶性制剂是用水溶解的制剂。如本文所使用的，“用水溶解的制剂”包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐、非离子型表面活性剂和水(例如，含水液体)，但是不包含有机溶剂(例如，乙醇)。在一些实施方案中，用水溶解的制剂是透明的水溶性制剂。III.方法在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗癌症、肥胖、糖尿病、 心血管疾病、血脂异常、年龄相关黄斑变性(例如，与年龄相关黄斑变性有关的失明)、高胆固醇或视网膜病(例如，糖尿病性视网膜病)的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。上文详细定义了术语“癌症”。在一些实施方案中，提供了在需要降胆固醇疗法的对象中降低胆固醇的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。胆固醇的降低可以是总胆固醇的降低或者低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)的降低。在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗VEGF介导的疾病状态的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在一些实施方案中，提供了降低需要这种治疗的对象的视网膜中VEGF介导的血管通透性和/或异常血管生长的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在另一些实施方案中，提供了在需要这种治疗的对象中治疗年龄相关黄斑变性的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。
在另一些实施方案中，提供了在需要这种治疗的对象中治疗糖尿病性黄斑水肿的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)是对血管内皮细胞特异的扩散性蛋白，并且在血管生理性和病理性生长的调控中起到重要作用。VEGF促进动脉、静脉和淋巴中存在的血管内皮细胞的生长，但是它还具有引起血管渗漏的能力。这种提高通透性的活性是该分子与其它病理状态之间的联系。例如，VEGF在大多数人肿瘤中表达并且在肿瘤血管生成和转移中起到关键作用。另外，VEGF直接参与导致癌、与年龄相关黄斑变性(包括湿性年龄相关黄斑变性)有关的失明和视网膜病(如糖尿病性视网膜病 /糖尿病性黄斑水肿)的病理过程。因此，在一些实施方案中，提供了降低VEGF活性的方法。出于研究的目的，可通过将VEGF与本发明的水溶性制剂接触以体外或原位进行所述方法。作为替代地，通过向对象施用有效量的本发明水溶性制剂可降低该对象中VEGF的活性。可在如K0P2. 16内皮细胞的适合细胞系中或者使用其它技术如Miles测定来体外测量VEGF抑制。在另一个方面，本发明提供了提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物在对象中的生物利用度的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。可将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物施用给对象，从而提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的生物利用度。与不使用非离子型表面活性剂的白藜芦醇的生物利用度相比，其生物利用度得到提高。在另一个方面，本发明提供了将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐溶解在水中的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物与水合并，从而将白藜芦醇溶解到水中。可任选地加热该溶液以提高溶解度。通常，选择加热温度以避免白藜芦醇和/或非离子型表面活性剂的化学分解。在一些实施方案中，所得溶液是如上所述的水溶性制剂或透明的水溶性制剂。例如，所得溶液可以是作为没有肉眼可见颗粒的极其澄清溶液的水溶性制剂。对象是使用本发明方法之一进行治疗的生物体。在一些实施方案中，所述对象是哺乳动物对象，如人或家畜。本发明水溶性制剂的有效量是足以实现如治疗对象(例如，人对象)中特定疾病状态的本发明方法的预定目的的量。IV.剂量和剂型将足以治疗疾病(例如，通过调节VEGF、C0X、细胞增殖)的白藜芦醇的量定义为 “治疗有效剂量”。对于该用途有效的剂量时间表和量(即“剂量方案”)将取决于多个因素，其包括疾病或病况的阶段、疾病或病况的严重程度、患者的一般健康状况、患者的身体状态、年龄等。在计算患者的剂量方案时，还考虑了施用模式。剂量方案还考虑了本领域熟知的药物动力学参数，即吸收率、生物利用度、新陈代谢、清除等(参见，例如，Hidalgo-Aragones (1996) J Steroid Biochem. MoI. Biol. 58 611-617 ；Groning (1996)Pharmazie 51 :337-341 ；Fotherby (1996)Contraception 54 59-69 ； Johnson (1995)J. Pharm. Sci. 84 :1144-1146 ；Rohatagi (1995)Pharmazie 50 610-613 ；Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24 :103-108 ；最新版的 Remington ‘ s，如上所述)。当前技术水平允许临床医师确定每位个体患者和所治疗的疾病或病况的剂量方案。根据患者所需和耐受的剂量和频率，可以单次或多次施用白藜芦醇制剂。所述制剂应提供足够量的活性剂以有效地治疗疾病状态。特别是与经口施用相比将药物施用到解剖学封闭位点从而进入血液、体腔或器官腔时，可以使用较低的剂量。在局部施用中可以使用明显较高的剂量。制备可胃肠外施用的白藜芦醇制剂的实际方法将是本领域技术人员已知的或显而易见的，并且在如上述Remington' s的出版物中进行了更详细地说明。另请参见 Nieman, "Receptor Mediated Antisteroid Action，，，Agarwal 等人主编，De Gruyter, New York(1987)。在一些实施方案中，白藜芦醇以至少Iwt %、5wt %、IOwt %、20wt%、25wt%、 30wt %,35wt %,45wt %,45wt %或50wt %的浓度存在于所述水溶性制剂中。在另一些实施方案中，白藜芦醇以(按重量计)0. 01%、0. 1%、1%至80%、5%至50%、10%至35%或 20%至25%的浓度存在于所述水溶性制剂中。白藜芦醇还可以0. 5至250mg/3. 3液量盎斯或约25mg/ml的浓度存在(例如，存在于饮料制剂中)。在另一些实施方案中，白藜芦醇以 0. 01mg/ml至50mg/ml的浓度存在。对于实现完全透明的溶液来说，存在最大浓度。使用聚乙二醇40蓖麻油(polyoxyl 40castor oil)(即聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯)作为表面活性剂的高于20%的白藜芦醇浓度将不再能够在水中获得完全透明的溶液。因此，对于白藜芦醇或反式白藜芦醇来说，在所述表面活性剂中的浓度范围将为0. 至20%，或0.01到 20mg/ml，优选的浓度为约20mg/ml。这表示白藜芦醇与表面活性剂的比值为1 5。在一些浓缩制剂(例如，软胶囊制剂)中，白藜芦醇可为约1至50mg/ml，或约20mg/ml或至少 lmg/ml 存在。在另一些实施方案中，所述水溶性饮料制剂中存在至少0. 5mgUmg,2mg,3mg,4mg, 5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg 或 Ig 的白藜声醇。在另一些实施方案中，在所述水溶性饮料制剂中存在0. Img至2g、0. 5mg至lg、lmg至500mg、 Img 至 100mg、lmg 至 50mg、lmg 至 IOmg 或 Img 至 5mg 的白藜声醇。在一些实施方案中，所述水溶性制剂是药物组合物的形式。所述药物组合物可包含白藜芦醇或白藜芦醇代谢物、非离子型表面活性剂和可药用赋形剂。在可接受载体中配制包含本发明白藜芦醇的药物组合物后，可将其放置在适当的容器中并标记出用于治疗适应症。对于白藜芦醇的施用，该标记将包含例如有关施用的量、频率和方法的说明。在一个实施方案中，本发明提供了治疗人谵妄的试剂盒，其包含白藜芦醇和教导白藜芦醇的适应症、施用剂量和时间表的说明性材料。任何适合的剂型可用于施用本发明水溶性制剂，如经口、胃肠外和局部剂型 (topical dosage form)。经口制剂包括适合于患者摄入的片剂、丸剂、粉剂、糖锭剂、胶囊 (例如，软胶囊)、液剂、锭剂、凝胶剂、糖浆、浆液、饮料、悬液等。本发明的制剂还可以通过注射施用，即静脉内注射、肌内注射、皮内注射、皮下注射、十二指肠内注射或腹膜内注射。 另外，本文所述的制剂可以通过吸入施用，例如鼻内。另外，本发明的制剂可以透皮施用。 还可以通过眼内、阴道内和直肠内途径施用制剂，其包括栓剂、吹入剂、粉剂和气雾剂制剂 (例如，类固醇吸入剂，参见 Rohatagi, J. Clin. Pharmacol. 35 :1187-1193,1995 ；Tjwa,Ann.Allergy Asthma Immunol. 75 107-111，1995)。因此，本文所述的制剂可适于经口施用。对于从本发明制剂制备药物组合物来说，可药用载体可以是固体或液体的。固体制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其还可以用作稀释剂、调味剂、粘结剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在科学和专利文献中很好地说明了制剂和施用技术的详细内容，参见例如，最新版的Remington' s Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton PA( “Remington' s，，)。适合的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉(来自玉米、 小麦、水稻、马铃薯或其它植物)、明胶、黄蓍胶、低熔蜡、可可脂、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、 纤维素(如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠)和树胶(包括阿拉伯胶和黄蓍胶(tragacanth))以及蛋白质，如明胶和胶原。如果需要，可以加入崩解剂或共增溶剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，如海藻酸钠。在粉剂中，载体是磨碎的固体，它与磨碎的活性成分组成混合物。在片剂中，活性成分与具有必要粘结性能的载体以适合的比例混合并压制成所需的形状和尺寸。糖锭的芯与合适包衣如浓缩糖溶液一起提供，所述包衣还可含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆(carbopol gel)、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料加入到片剂或糖锭涂层中以用于产品识别或描述活性化合物的量(即剂量)。例如，也可使用由明胶制成的推入配合胶囊以及由明胶和如甘油或山梨糖醇的涂层制成的密封软胶囊来经口使用本发明的药物制剂。推入配合胶囊可以含有与例如乳糖或淀粉的填充剂或粘结剂、如滑石或硬脂酸镁的润滑剂以及任选的稳定剂相混合的白藜芦醇。在软胶囊中，可将白藜芦醇溶解或悬浮在适合的液体中，如含有或不含稳定剂的脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。为了制备栓剂，首先将低熔蜡例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物熔化并通过搅拌将活性成分均勻地分散在其中。然后，将熔融的均勻混合物注入到适当尺寸的模具中，使其冷却从而固化。液态制剂包括溶液、悬液、饮料和乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。对于胃肠外注射，可在聚乙二醇水溶液中将液体制剂配成溶液。可通过将活性成分溶解在水中并根据需要加入适合的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备适于经口使用的水溶液和饮料。可通过将磨碎的活性成分与下列物质在水中分散来制备适于经口使用的水悬液，所述物质包括粘性材料，如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；和分散剂或润湿剂，如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七烷乙烯氧基十六烷醇)、环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。水悬液还可含有一种或多种防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。可调节制剂的渗透压。本发明还包括固态制剂，其设计在使用之前转化为用于经口施用的液态制剂。该类液态形式包括溶液、悬液和乳液。除了活性成分外，这些制剂可以含有着色剂、调味剂、稳定齐 、缓冲齐 、人工和天然甜味齐 、分散剂、增稠剂、增溶剂等。可以通过将白藜芦醇悬浮在如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油的植物油中或悬浮在如液体石蜡的矿物油中或悬浮在这些油剂的混合物中来配制油悬液。油悬液可以含有增稠剂，如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂以提供适口的经口制剂，如甘油、山梨醇或蔗糖。可以通过加入如抗坏血酸的抗氧化剂来保存这些制剂。作为可注射油剂载体的实例，请参见Minto，J. Pharmacol. Exp. Ther. 281 =93-102,1997。本发明的制剂还可为水包油乳液的形式。油相可以是如上所述的植物油或矿物油或这些的混合物。适合的乳化剂包括如阿拉伯树胶和黄蓍胶的天然存在的树胶、如大豆卵磷脂的天然存在的磷脂，如失水山梨醇单油酸酯的来源于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯以及如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯的这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物。乳液还可以含有甜味剂和调味剂，如配制成糖浆和酏剂制剂。这类制剂还可以含有镇痛剂、防腐剂或着色剂。可透皮递送、通过局部途径递送本发明的制剂，将本发明制剂配制成敷药棒、溶液、悬液、乳液、凝胶、乳膏、软膏、糊剂、胶冻、涂料、粉剂和气雾剂。所述制剂还可作为微球递送以用于在体内缓释。例如，可通过以下方式施用微球 皮下缓慢释放的含药微球的皮内注射(参见Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7 =623-645, 1995)；作为生物可降解和可注射的凝胶制剂(参见，例如，Gao Pharm. Res. 12 =857-863, 1995)；或作为经口施用的微球(参见，例如，Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 49 =669-674, 1997)。透皮和皮内途径均提供数周或数月的持续递送。本发明的制剂可以盐形式提供并且可与多种酸形成，其包括但不限于盐酸、硫酸、 醋酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐更趋于在相应游离碱形式的水性或其它质子性溶剂中溶解。在另一些情况下，所述制剂可以是在lmM-50mM组氨酸、0. 1 % -2 %蔗糖、2 % -7 % 甘露醇中在4. 5-5. 5的pH范围内的冻干粉末，其在使用前与缓冲剂合并。在另一个实施方案中，本发明的制剂可用于如静脉内(IV)施用或体腔或器官腔中施用的胃肠外施用。用于施用的制剂一般将包含溶于可药用载体中的白藜芦醇溶液。在可使用的可接受载体和溶剂中有水和林格氏溶液，等渗氯化钠。另外，通常可以将无菌不挥发性油用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，其包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，同样可在可注射制剂中使用脂肪酸例如油酸。这些溶液是无菌的并且一般不含不希望的物质。这些制剂可通过常规熟知的灭菌技术进行灭菌。由于需要接近生理条件，所述制剂可含有可药用辅助物质，如PH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如醋酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些制剂中白藜芦醇的浓度可以显著不同并且根据所选的特定施用模式和患者需要其将主要基于液体体积、粘度、体重等进行选择。对于IV施用，所述制剂可以是无菌注射制剂，如无菌注射水或油悬液。可以根据已知技术，使用那些适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制这种悬液。无菌注射制剂也可以是无毒的胃肠外可接受稀释剂或溶剂(如1，3_ 丁二醇溶液)中的无菌注射溶液或悬液。在另一个实施方案中，可以通过使用脂质体递送本发明的制剂，所述脂质体与细胞膜融合或被内吞，即通过利用与脂质体相连或者直接与寡核苷酸相连的配体，所述配体结合导致内吞作用的细胞表面膜蛋白受体。通过使用脂质体，特别是在脂质体表面带有对靶细胞特异性配体时或者在优选地指向特定器官的情况下，可以将白藜芦醇、 白藜芦醇代谢物或其盐的递送在体内集中到靶细胞上。(参见，例如，Al-Muhammed,J. Microencapsul. 13 :293-306,1996 ；Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6 :698-708,1995 ； Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46 1576-1587，1989)。所述制剂可作为单位剂型施用。在这种形式中，将所述制剂再分成含有适量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有单独量的制剂，如小包装片剂、 胶囊和置于小瓶或安瓿瓶中的粉剂。另外，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或糖锭本身， 或者它可以是处于包装形式的适当数目的任何这些剂型。根据特定应用和活性成分的效力，可以改变或调节单位剂量制剂中活性成分的量。如果需要，所述组合物还可以含有其它相容的治疗剂。V.测定可以使用任何适合的方法测定目标非离子型表面活性剂溶解白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的能力。通常，将非离子型表面活性剂与白藜芦醇接触并使用震荡器或超声装置机械和/或自动地混合。可任选地加入水，例如，在白藜芦醇和/或表面活性剂处于粉末形式的情况下。可任选地加热溶液以提高溶解度。选择加热温度以避免白藜芦醇或白藜芦醇代谢物和非离子型表面活性剂的化学分解。可目视检查所得溶液中的胶体颗粒以确定白藜芦醇的溶解度。作为替代地，可过滤并分析所述溶液以确定溶解度。例如，可使用分光光度计来确定过滤溶液中存在的白藜芦醇浓度。通常，将测试溶液与含有一系列已知量的预过滤白藜芦醇溶液的阳性对照进行比较以获得标准浓度对UV/vis吸光度的曲线。作为替代地，可以使用高效液相色谱来确定溶液中白藜芦醇的量。在本领域中，高通量溶解度测定法是熟知的。通常，这些方法包括将溶液与不同量的非离子型表面活性剂、白藜芦醇和任选的其它共溶剂自动分散并混合。然后，可以使用以上所讨论的任何适合的方法来分析所得溶液以确定溶解度。例如，配备改性径迹蚀刻聚碳酸酯0. 4 μ m膜的Millipore MultiScreen Solubility filter plate 是包含过滤板和盖的一次性96孔产品组件。该装置设计用于处理100-300 μ L体积范围的水溶性样品。真空过滤设计与标准的微量滴定板真空歧管相适应。该板还设计成与在滤液收集中使用的标准96孔微量滴定接收板配合。已经开发了 MultiScreen Solubility filter plate 并且对(使用标准真空的)一致过滤流动时间、 低水相可提取化合物、高样品过滤回收率和根据执行溶解度测定的需要培育样品的能力进行了 QC测试。已经专门对水介质中溶解的有机化合物的高回收率开发了低结合膜。水相溶解度测定允许通过在Multiscreen溶解度过滤板中混合、孵育并过滤溶液以确定白藜芦醇溶解度。在使用真空过滤将滤液转移到96孔收集板中后，通过UV/Vis光谱分析以确定溶解度。另外，可以使用LC/MS或HPLC来确定化合物溶解度，特别是对于UV/ Vis吸光度较低和/或纯度较低的化合物。对于水相溶解度的定量来说，可以确定标准校准曲线并在确定水相溶解度之前对每种化合物进行分析。可通过加入浓缩药物或化合物的等分试样来制备测试溶液。在室温下，将所述溶液在带盖的96孔Multiscreen溶解度过滤板中混合1. 5小时。然后，将所述溶液真空过滤到96孔聚丙烯V形底收集板中以除去任何不溶的沉淀。一旦完成过滤，将160 μ L/孔的溶液从收集板中转移到96孔UV分析板并用40 μ L/孔的乙腈稀释。用UV/vis微孔板光谱仪在沈0-500歷对UV/Vis分析板进行扫描以确定测试化合物的吸光度谱。
因此，本领域的技术人员可测定多种非离子型表面活性剂以确定它们溶解白藜芦醇化合物的能力。本文所使用的术语和表达作为说明性术语而非限制性术语使用，这些术语和表达的使用不旨在排除所示或所述特征的等价物或其部分，应承认在本发明所主张的范围内各种修改均是可能的。此外，在不背离本发明范围的情况下，本发明任何实施方案的任何一项或多项特征可以与本发明任何其它实施方案的任何一项或多项特征组合。例如，制剂的特征等同地适用于治疗本发明所述疾病状态的方法。本文引用的所有出版物、专利和专利申请出于所有目的以其整体作为参考并入本文。VI.实施例下列实施例旨在说明本发明的某些实施方案，而不意欲限制本发明的范围。萤光黄购自Molecular Probes (Eugene，OR)。汉克斯缓冲液(Hanks buffer)以及所有其它化学品均得自Sigma-Aldrichd Louis, M0)。实施例1配制了含有非离子型表面活性剂聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯(聚乙二醇40蓖麻油)的反式白藜芦醇水溶性组合物。通过将聚乙二醇蓖麻油与粉末状合成99%反式白藜芦醇一起加热并搅拌，形成了含有溶解的反式白藜芦醇的澄清粘稠溶液(以下称为“白藜芦醇凝胶制剂”)。该白藜芦醇凝胶制剂是由聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯40(50ml)和粉末状反式白藜芦醇(3克)组成的，这表示白藜芦醇在表面活性剂中的浓度为6%。将白藜芦醇 /表面活性剂混合物缓慢加入到IOOml温水中直至形成完全透明的溶液。向其中加入0. 4g 抗坏血酸以稳定反式白藜芦醇，这是因为在先前的实验中发现如果不加抗坏血酸，则溶液很快开始变色，从深酒红色最终转变为棕色。加入抗坏血酸，该溶液保持澄清，不变色。从以上的实例可以看出，通过将水加入到白藜芦醇凝胶制剂中形成了溶解的反式白藜芦醇的水溶液(以下称为“白藜芦醇水制剂”或“水溶性饮料”)。更具体地，通过在温水中加热反式白藜芦醇凝胶制剂以形成反式白藜芦醇的“澄清水溶液”从而制备了白藜芦醇水制剂。这种白藜芦醇水制剂不具有不希望的味道。白藜芦醇水制剂是由水(100ml)、聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯40 (50ml)和粉末状98%反式白藜芦醇(3克)组成的，反式白藜芦醇在白藜芦醇水制剂中的浓度为20% (含水饮料)。通过HPLC分析了白藜芦醇水制剂并且发现含有0.2%或20mg/ml的反式白藜芦醇。实施例2将粉末状反式白藜芦醇在pH7. 4的汉克斯平衡盐溶液(IOmM HEPES和15mM葡萄糖)中的溶解度与反式白藜芦醇凝胶制剂的进行比较。将至少Img的粉末状合成反式白藜芦醇提取物或IOOmg的白藜芦醇凝胶制剂与Iml缓冲液混合以分别制备> lmg/ml的粉末状白藜芦醇提取混合物和> lmg/ml的白藜芦醇凝胶制剂混合物。使用台式漩涡搅拌器将该混合物震荡2小时，并且在室温下保持静置过夜。在漩涡搅拌并静置过夜后，将粉末状白藜芦醇提取混合物通过首先用样品饱和的0. 45μπι尼龙注射过滤器(Whatman，Cat# 6789-0404)过滤。在漩涡搅拌并静置过夜后，将白藜芦醇凝胶制剂混合物以HOOOrpm离心10分钟。 对滤液或上清液连续取样两次并且在分析前用50 50的测定缓冲液乙腈的混合物稀释 10、100 和 10000 倍。
针对在50 50的测定缓冲液乙腈的混合物中制备的标准品，使用电喷雾电离通过LC/MS/MS测定了两种混合物。标准品的浓度范围从Ι.ΟμΜ向下至3.0nM。下表1显
示了结果。表1.白藜芦醇在pH7. 4的磷酸盐缓冲液中的溶解度
权利要求
1.水溶性制剂，其包含a)白藜芦醇或白藜芦醇代谢物；和b)非离子型表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇为反式白藜芦醇。
3.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为非醇制剂。
4.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为无非质子溶剂的制剂。
5.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少0.01mg/ml的浓度存在。
6.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少lmg/ml的浓度存在。
7.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少0.01wt%的浓度存在。
8.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少20wt%的浓度存在。
9.根据权利要求1所述的制剂，其包含Img至25mg的白藜芦醇。
10.根据权利要求1所述的制剂，其包含至少IOmg的白藜芦醇。
11.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯；非离子水溶性聚乙二醇单或双脂肪酸酯；非离子水溶性失水山梨醇脂肪酸酯；聚乙二醇甘油酯；非离子水溶性三嵌段共聚物；或其衍生物。
12.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯。
13.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇40蓖麻油。
14.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇甘油蓖麻酸酯或聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯。
15.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯。
16.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为经口制剂。
17.根据权利要求16所述的制剂，其中所述经口制剂为软胶囊。
18.根据权利要求16所述的制剂，其中所述经口制剂为片剂。
19.根据权利要求16所述的制剂，其中所述经口制剂为饮料。
20.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为可注射制剂。
21.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为局部制剂。
22.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇来源于葡萄或虎杖(polygonum cuspidatum)。
23.根据权利要求1所述的制剂还包含可药用赋形剂。
24.在水中溶解白藜芦醇的方法，所述方法包括以下步骤a.将白藜芦醇与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物；和b.将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物与水合并，从而将所述白藜芦醇溶解到水中。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇40蓖麻油。
26.在需要这种治疗的对象中治疗癌症、肥胖、糖尿病、心血管疾病、血脂异常、与年龄相关黄斑变性有关的失明、高胆固醇或糖尿病性视网膜病的方法，所述方法包括对所述对象施用有效量的根据权利要求1所述的制剂。
27.在需要这种治疗的对象中治疗VEGF介导的疾病状态的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的根据权利要求1所述的制剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述疾病状态为与年龄相关黄斑变性有关的失明或糖尿病性视网膜病。
29.根据权利要求27所述的方法，其中所述疾病状态为肥胖、糖尿病、心血管疾病或血脂异常。
30.提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物在对象中的生物利用度的方法，所述方法包括将所述白藜芦醇或白藜芦醇代谢物与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂_白藜芦醇混合物的步骤。
31.根据权利要求31所述的方法，还包括向所述对象施用所述表面活性剂_白藜芦醇混合物，从而提高所述白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的生物利用度。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述白藜芦醇为反式白藜芦醇。
全文摘要
本发明公开了提高白藜芦醇水溶性和/或生物利用度的方法和制剂。所述制剂可用于治疗包括癌症在内的疾病状态。
文档编号A61K9/06GK102264348SQ200980152936
公开日2011年11月30日 申请日期2009年11月19日 优先权日2008年11月26日
发明者埃里克·库茨 申请人:脂蛋白技术有限公司
生物活性提高的白藜芦醇制剂
背景技术：
类黄酮(Flavonoids)在整个自然界中十分丰富，并且在植物和动物中发挥广泛的生物学活性。目前认为自然界中存在超过4000种类黄酮。这些化合物是多种花木在秋季出现的颜色的主要来源。类黄酮存在于水果、蔬菜、坚果、种子、药草、香料、茎、花以及红酒和茶中，并且在人的饮食中定期食用。根据其取代基，可以将这些化合物分为黄烷醇类、 花青素类、黄酮类(flavones)、黄烷酮类和查耳酮类。类黄酮的一些生物学活性包括抗炎、抗病毒、抗真菌、抗细菌、雌激素、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤发生、抗血栓形成、保肝和抗增殖医学性质。已进行研究并发现有可能作为治疗剂的一些主要类黄酮为来自绿茶和可可的类黄酮或黄烷醇类，如表没食子儿茶素没食子酸酯(印igallocatechin gallate)、表没食子儿茶素(印igallocatechin)、表儿茶素(印icatechin)、儿茶素(catechin)禾口表儿茶素没食子酸酯(印icatechin gallate)，来自葡萄的类黄酮，如白藜芦醇(3，5，4，_三羟基芪(3,5,4' -trihydroxystilbene))，来自大豆的，如染料木黄酮(genistein)和大豆黄酮 (diadzein)，和槲皮素(quercetin)，其最丰富的来源为洋葱。特别感兴趣的是至少在体外和在某些动物模型中反式白藜芦醇以及可能与长寿有关的某些基因的相关研究。已经将白藜芦醇以及另一些类黄酮和黄烷醇类鉴别为在低微摩尔浓度下通过它们对多种细胞机制的干扰作用起效的癌症化学预防剂，这些干扰作用如(1)抑制前致癌物的代谢活化，(2)致癌物-解毒酶的诱导和(3)通过抑制炎症信号和血管生成来抑制肿瘤生长。在乳腺癌(MCF-7)、结肠癌(HT-29)和卵巢癌(A-2780)细胞中体外测试了白藜芦醇及其它类黄酮的抗增殖和细胞毒性作用。白藜芦醇以剂量依赖性方式抑制MCF-7和A-2780 细胞的增殖。类黄酮如白藜芦醇可以通过抑制环加氧酶(组成型C0X-1和诱导型C0X-2) 从而抑制内源前列腺素的合成来作为有效的抗炎剂。与白藜芦醇有关的大部分研究是用反式白藜芦醇进行的。最近，纯反式白藜芦醇已经可商购。为了使任何治疗性分子物质通过胃肠道输送，进入血液并最终到达体内器官和细胞，所述分子必须在肠液的水相中是可溶的。如果不溶解，药物将作为块状粉尘通过胃肠道。类黄酮如白藜芦醇在水中几乎是不溶的，并且经口给药的动物药物动力学研究证明了极低的生物利用度。同样，使用以活性儿茶素标准化的绿茶提取物的人体研究证明了极低的吸收，通常在动物或人的研究中经口给药小于1%。事实上，在一个研究中，在经口食用绿茶提取物后在人中所测定的血浆茶儿茶素浓度比体外系统中显示发挥生物学活性的浓度低5-50倍。反式白藜芦醇的动物药物动力学研究也表明在经口给药后在血浆中不到 1-2%。在人中，经口施用多达4g后，在血浆中未发现槲皮素。多种类黄酮是亲脂的或脂溶性的，并且在水中的溶解度极低(疏水的)。红酒中仅含有少量的白藜芦醇。例如，酒中的白藜芦醇可以在0. 2至5. 8毫克/升。白藜芦醇是疏水的或者不溶于水的，并且因此在水中或在如果汁或软饮料的含水饮料中是不溶的。由于白藜芦醇的多种所需性质，获得用于体内给药的水溶性更强的白藜芦醇制剂和/或生物利用度提高的白藜芦醇制剂将是有利的。本发明解决了本领域中的这些及其它问题。
发明内容
在一个方面，本发明提供了水溶性制剂，其包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂。在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗癌症、肥胖、糖尿病、 心血管疾病、血脂异常、年龄相关黄斑变性(例如与年龄相关黄斑变性有关的失明)、高胆固醇或视网膜病(例如糖尿病性视网膜病)的方法。所述方法包括向所述对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗VEGF介导的疾病状态的方法。所述方法包括向所述对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在另一个方面，本发明提供了提高白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐在对象中的生物利用度的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。可将表面活性剂-白藜芦醇混合物施用给所述对象，从而提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的生物利用度。在另一个方面，本发明提供了在水中溶解白藜芦醇的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物与水合并，从而将白藜芦醇溶解到水中。发明详述I.定义本文所使用的缩写具有它们在化学和生物领域中的常规含义。根据本文所述化合物上存在的特定取代基部分，术语“可药用盐”意在包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明的制剂含有相对酸性的官能团时，通过将这类化合物的中性形式与足够量的所需碱(纯化合物或在适合的惰性溶剂中)接触可获得碱加成盐。可药用碱加成盐的实例包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或者类似的盐。当本发明的制剂含有相对碱性的官能团时，通过将这些化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯化合物或在适合的惰性溶剂中)接触可获得酸加成盐。可药用酸加成盐的实例包括来源于无机酸的那些，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等，以及来源于相对无毒的有机酸的盐，所述有机酸如醋酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括如精氨酸盐等的氨基酸盐和如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的有机酸的盐(参见，例如，Berge等人，“Pharmaceutical Salts，，，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些特定制剂含有允许化合物转化为碱加成盐或酸加成盐的碱性和酸性官能团。优选地，通过将所述盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生所述化合物的中性形式。所述化合物的母体形式在某些物理性质方面(如极性溶剂中的溶解度) 不同于多种盐的形式。除了盐的形式外，本发明提供了前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药是在生理条件下易于经历化学变化以提供本发明制剂的那些化合物。另外，可在离体环境中通过化学或生物化学方法将前药转化为本发明的制剂。例如，当放置在具有适合的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药可缓慢地转化为本发明的制剂。本发明的某些制剂可以非溶剂化形式和包括水化形式在内的溶剂化形式存在。一般地，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且涵盖在本发明的范围内。本发明的某些制剂可以多晶或无定形存在。一般地，对于本发明所考虑的用途，所有物理形式均是等同的并且在本发明的范围内。本发明的某些制剂具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋物、非对映异构体、互变异构体、几何异构体和各个异构体均涵盖在本发明的范围内。本发明的制剂不包含那些在本领域中已知过于不稳定而不能合成和/或分离的那些化合物。本发明的制剂还可含有构成这些化合物的一种或多种原子的非天然比例的原子同位素。例如，可以用放射性同位素放射性标记所述化合物，如(例如)氚(3H)、 碘-125 (125I)或碳-14(14C)。无论是否具有放射性，本发明制剂的所有同位素变化均涵盖在本发明的范围内。如本文所使用的，“白藜芦醇(resveratrol)”包括来源于如葡萄皮、红酒的天然来源或如虎杖(P. cuspidatum)或五角决明(C. quinquangulata)的其它植物来源的白藜芦醇，或者以98%的反式-白藜芦醇形式通过合成产生的白藜芦醇，其可商购自Sigma Chemical Co.，St. Louis, Mo.。可以通过分级分离和进一步的柱色谱生产高浓度的植物提取物直至提取物可含有两种异构体混合物形式的高达99%浓度的白藜芦醇。如本文所使用的，“反式白藜芦醇”通常也可以被称为反式_3，5，4'-三羟基芪(trans-3，5， 4' -trihydroxystilbene) ,3,4'，5-芪三醇(3，4'，5-stilbenetriol)、(E)-5-(对羟基苯乙烯基)间苯二酚，以及CAS号501-36-0。术语“治疗”是指创伤、病理或病况的治疗或改善中任何成功的迹象，其包括任何客观或主观参数，如减轻；缓解；症状减弱或使患者更耐受创伤、病理或病况；减缓恶化或衰弱速度；使恶化终点不太虚弱；改善患者的身体或精神状态。症状的治疗或改善可以是基于客观或主观参数的；其包括体检、神经精神病学检查和/或精神病学评价的结果。例如，通过降低意识或认知障碍发生率，本发明的方法成功治疗了患者的谵妄(delirium)。如本文所使用的，术语“癌症”是指哺乳动物中存在的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，其包括白血病、癌和肉瘤。示例性的癌症包括脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、肝癌、肾癌、肺癌、非小细胞肺癌、黑素瘤、间皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宫癌和成神经管细胞瘤。其它实例包括霍奇金病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s Lymphoma)、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多、原发性巨球蛋白血症、原发性脑瘤、癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌瘤、泌尿膀胱癌、恶化前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、成神经细胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌和外分泌胰腺赘生物和前列腺癌。术语“白血病”广泛地表示造血器官的进行性恶性疾病并且通常以血液和骨髓中白血球及其前体的异常增殖和发育为特征。在临床上，一般根据以下方面对白血病分类 (1)疾病的持续时间和特性-急性或慢性；(2)所涉及的细胞类型骨髓细胞(髓性)、淋巴细胞(淋巴性)或单核细胞；和(3)血液中异常细胞数目的增加或不增加-白血病性或非白血病性(亚白血病)。P388白血病模型被广泛接受用于预测体内抗白血病活性。据信在P388测定中测试为阳性的化合物，无论所治疗的白血病类型如何，一般都将表现出一定水平的体内抗白血病活性。因此，本发明包括治疗白血病的方法，以及优选地，包括治疗下列的方法急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性前髓细胞性白血病、成人T细胞性白血病、非白血性白血病、白血性白血病、嗜碱细胞性白血病、母细胞性白血病、牛白血病、慢性髓细胞性白血病、皮肤白血病(leukemia cutis)、胚胎白血病(embryonal leukemia)、嗜酸细胞性白血病、葛氏白血病(Gross’ leukemia)、毛细胞白血病、原始血细胞性白血病、成血细胞性白血病、组织细胞性白血病、干细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病 (lymphatic leukemia)、成淋巴细胞性白血病(lymphoblastic leukemia)、淋巴细胞性白血病(lymphocytic leukemia)、淋巴性白血病(lymphogenous leukemia)、淋巴细胞白血病(lymphoid leukemia)、淋巴肉瘤细胞性白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞型白血病、 小原粒型白血病、单核细胞性白血病、成髓细胞性白血病(myeloblastic leukemia)、髓细胞性白血病、骨髓性粒细胞性白血病、粒-单核细胞性白血病、内格利型白血病(Naegeli leukemia)、浆细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病、前髓细胞性白血病、里德尔氏细胞性白血病(Rieder cell leukemia)、希林氏性白血病(Schiling，s leukemia)、干细胞性白血病、亚白血病性白血病和未分化细胞性白血病。术语“肉瘤”泛指由如胚性结缔组织的物质组成的肿瘤并且一般是由嵌入到原纤维或均质物质中的紧密堆积的细胞构成。可治疗的肉瘤包括软骨肉瘤(chondrosarcoma)、 纤维肉瘤(fibrosarcoma)、淋巴肉瘤(lymphosarcoma)、黑素肉瘤(melanosarcoma)、粘液肉瘤(myxosarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、艾伯内西氏肉瘤(Abemethy，s sarcoma)、 脂肉瘤(adipose sarcoma)、脂肪肉瘤(Iiposarcoma)、软组织腺泡状肉瘤(alveolar soft part sarcoma)、成釉细胞肉瘤(ameloblastic sarcoma)、葡萄状肉瘤(botryoid sarcoma)、绿色肉瘤(chloroma sarcoma)、绒毛膜癌(chorio carcinoma)、胚胎性癌肉瘤(embryonal sarcoma)、韦尔姆斯氏瘤肉瘤(Wilms' tumor sarcoma)、子宫内膜肉瘤(endometrial sarcoma)、间质性肉瘤(stromal sarcoma)、尤因氏肉瘤(Ewing' s sarcoma)、筋膜肉瘤(fascial sarcoma)、成纤维细胞肉瘤(fibroblastic sarcoma)、巨细胞肉瘤(giant cell sarcoma)、绿色瘤(granulocytic sarcoma)、霍奇金肉瘤(Hodgkin's sarcoma)、皮肤特发性多发性色素沉着出血性肉瘤(idiopathic multiple pigmented hemorrhagic sarcoma)、B 细胞免疫母细胞肉瘤(immunoblastic sarcoma of B cells)、 淋巴瘤、T细胞免疫母细胞肉瘤(immunoblastic sarcoma of T cells)、延森氏肉瘤 (Jensen，s sarcoma)、卡波氏肉瘤(Kaposi，s sarcoma)、枯否氏细胞肉瘤(Kupfer cell sarcoma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、白血病性肉瘤(Ieukosarcoma)、恶性间叶瘤肉瘤 (malignant mesenchymoma sarcoma)、骨膜夕卜肉瘤(parosteal sarcoma)、网状细胞肉瘤(reticulocytic sarcoma)、鲁其Jf 氏肉瘤(Rous sarcoma)、菜液囊性肉瘤(serocystic sarcoma)、滑膜肉瘤(synovial sarcoma)禾口毛细血管扩张性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。术语“黑素瘤”用于表示由皮肤及其它器官的黑素细胞系统引起的肿瘤。可治疗的黑素瘤包括，例如，肢端着色斑性黑素瘤(acrallentiginous melanoma)、无黑色素性恶性黑素瘤(amelanotic melanoma)、良性幼年型黑素瘤(benign juvenile melanoma)、克罗德曼氏黑素瘤(Cloudman，s melanoma)、S91黑素瘤、哈-帕二氏黑素瘤(Harding-Passey melanoma)、幼年型黑素瘤(juvenile melanoma)、恶性小疲(lentigo maligna melanoma)、 恶性黑素瘤、结节性黑素瘤(nodular melanoma)、甲床黑瘤(subungal melanoma)和浅表扩展性黑素瘤(superficial spreading melanoma)。 术语“癌(carcinoma) ”是指由倾向于浸润周围组织并引起转移的上皮细胞组成的恶性新生物。可治疗的示例性癌包括，例如，腺泡癌(acinar carcinoma)、腺泡癌(acinous carcinoma)、囊性腺样癌(adenocystic carcinoma)、腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma)、腺癌(carcinoma adenomatosum)、肾上腺皮质癌(carcinoma of adrenal cortex)、月市t包· (alveolar carcinoma)、月市t包细 (alveolar cell carcinoma)、^ 细胞癌(basal cell carcinoma)、基底细胞癌(carcinoma basocellulare)、类基底细胞癌(basaloid carcinoma)、基底鳞状上皮细胞癌(basosquamous cell carcinoma)、细支气管月市泡癌(bronchioalveolar carcinoma)、细支气管癌(bronchiolar carcinoma)、 支气管癌(bronchogenic carcinoma)、髓样癌(cerebriform carcinoma)、胆管细胞癌(cholangioceIlular carcinoma)、绒毛膜癌(chorionic carcinoma)、胶样癌 (colloid carcinoma)、粉剌癌(comedo carcinoma)、子宫体癌(corpus carcinoma)、蹄状癌(cribriform carcinoma)、胸廓癌(carcinoma en cuirasse)、皮肤癌(carcinoma cutaneum) λ tt Ifi(cylindrical carcinoma) λ tt Ifi(cylindrical cell carcinoma)、食管癌(duct carcinoma)、食管癌(carcinoma durum)、胚性癌(embryonal carcinoma)、髓样癌(encephaloid carcinoma)、表皮样癌(epiermoid carcinoma)、腺样上皮癌(carcinoma epitheliale adenoides)、夕卜植癌(exophytic carcinoma)、馈疡癌(carcinoma ex ulcere)、纤维癌(carcinoma fibrosum)、胶样癌(gelatiniforni carcinoma)、胶样癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌(giant cell carcinoma)、 巨细胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、粒层细胞癌(granulosa cell carcinoma)、毛基底细胞癌(hair-matrix carcinoma)、多血癌 (hematoid carcinoma)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)、许特莱氏细胞腺癌 (Hurthle cell carcinoma)、玻璃质癌(hyaline carcinoma)、肾细胞癌(hypemephroid carcinoma)、幼稚型胚胎性癌(infantile embryonal carcinoma)、原位癌(carcinoma in situ)、表皮内癌(intraepidermal carcinoma)、上皮内癌(intraepithelial carcinoma)、 克氏癌(Krompecherr s carcinoma)、库尔契茨基细胞癌(Kulchitzky-cell carcinoma)、 大细胞癌(large-cell carcinoma)、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、月旨瘤癌(lipomatous carcinoma)、淋巴上皮癌(lymphoepithelial carcinoma)、髓样癌(carcinoma medullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、漂色素癌(melanotic carcinoma)、髓样癌(carcinoma molle)、粘液癌(mucinous carcinoma)、 粘液癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌(carcinoma mucocellulare)、粘表皮癌(mucoepidermoid carcinoma)、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌(carcinoma myxomatodes)、鼻口因癌(nasopharyngeal carcinoma)、燕麦细胞癌(oat cell carcinoma)、骨化性癌(carcinoma ossificans)、骨化性癌(osteoid carcinoma)、乳头状癌(papillary carcinoma)、门脉周癌(periportal carcinoma)、侵入前癌(preinvasive carcinoma)、棘细胞癌(prickle cell carcinoma)、脑样癌(pultaceous carcinoma)、肾细胞癌(renal cell carcinoma of kidney)、|C备细胞癌(reserve cell carcinoma)、肉瘤样癌(carcinoma sarcomatodes)、施奈德氏癌 (schneiderian carcinoma)、硬癌(scirrhous carcinoma)、阴囊癌(carcinoma scroti)、 ￡口戒细胞癌(signet-ring cell carcinoma)、单纯癌(carcinoma simplex)、小细胞癌 (small-cell carcinoma)、马铃薯状癌(solanoid carcinoma)、球状细胞癌(spheroidal cell carcinoma)、梭细胞癌(spindle cell carcinoma)、梭细胞癌(carcinoma spongiosum)、麟状癌(squamous carcinoma)、麟状上皮癌(squamous cell carcinoma)、 绳捆癌(string carcinoma)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌(transitional cell carcinoma)、结节性皮癌(carcinoma tuberosum)、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、抚状癌(verrucous carcinoma)禾口绒毛状癌(carcinoma villosum)。术语“抗肿瘤”表示抑制或防止癌症的生长。“抑制或防止癌症的生长”包括与不使用给定疗法或治疗相比，降低癌症的生长。用于确定化合物是否抗肿瘤的细胞毒性测定在癌症疗法领域中是熟知的并且对于多种癌是可用的。如本文所使用的，“复合疗法”或“辅助疗法”表示结合本发明制剂对需要药物的患者进行治疗或者对所述患者施用用于疾病的另一种药物。这种复合疗法可以是顺序疗法， 其中先用一种药物治疗患者然后再用另一种药物治疗，或者同时施用两种药物。本发明包括使用本发明水溶性制剂的复合疗法或辅助疗法。“患者”是指哺乳动物对象，包括人。如本文所使用的，术语“湿性年龄相关黄斑变性(wet age-related macular degeneration, AMD) ”是指眼部病况或疾病，其中在视网膜上发生损伤性新血管生长和渗漏，并且如果不进行治疗则可以导致失明。AMD是造成年龄相关性失明的主要原因。如本文所用的，术语“糖尿病性视网膜病”是指与糖尿病有关的眼科疾病。糖尿病可以对向视网膜供血的血管造成损害，并且这可以导致血管渗漏或破裂，从而刺激异常新生血管的生长。糖尿病性视网膜病是造成糖尿病患者失明的主要原因，并且仅在美国就影响了超过400万成年人。如本文所使用的，与含有白藜芦醇的溶液有关的术语“澄清水溶液”表示不含未溶解白藜芦醇的可见颗粒的含水溶液(例如，饮料)。在一些实施方案中，澄清水溶液不是分散系，也不是悬浮液，并且在静置1小时或以上仍保持澄清。澄清水溶液为饮料时，食用前可能不需要摇晃该澄清水溶液。II.水溶性制剂已发现非离子型表面活性剂可以用于提高白藜芦醇、白藜芦醇代谢物及其盐(例如，可药用盐)的溶解度和/或生物利用度。因此，非离子型表面活性剂可用于形成含有白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐的水溶性制剂。在一些实施方案中，白藜芦醇为反式白藜芦醇、反式白藜芦醇或其盐。在另一些实施方案中，白藜芦醇为反式白藜芦醇。在一个方面，本发明提供了水溶性制剂，其包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂。在一些实施方案中，所述水溶性制剂在水中不包含植物油悬浮液或可见的大胶束(肉眼可见的胶束)。在另一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含醇(例如，白藜芦醇不是先溶于醇，然后再加入水中的)。
如本文所使用的，“非离子型表面活性剂”是在中性溶液(例如，中性水溶液)中趋向于不电离(即不带电)的表面活性剂。有用的非离子型表面活性剂包括例如非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；非离子水溶性聚乙二醇单或双脂肪酸酯；非离子水溶性失水山梨醇脂肪酸酯(例如，失水山梨醇单油酸酯，如斯潘80和吐温20 (聚乙二醇20 失水山梨醇单油酸酯))；聚乙二醇化甘油酯(polyglycolyzed glyceride)；非离子水溶性三嵌段共聚物(例如，聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)/聚(环氧乙烷)三嵌段共聚物，如泊洛沙姆406(普朗尼克F-127)及其衍生物。非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯的实例包括丙二醇二辛酸酯/ 二癸酸酯(例如，MIGLY0L 840)、中链甘油单酯和甘油二酯(例如，CAPMUL和IMWIT0R 72)、 中链甘油三酯(例如，辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯，如LAVRAFAC、MIGLY0L 810或812、 CR0DAM0L GTCC-PN和S0FTIS0N 378)、长链甘油单酯(例如，如PECEOL的甘油单油酸酯和如MAISINE的甘油单亚油酸酯)，聚乙二醇蓖麻油(例如，聚乙二醇甘油蓖麻酸酯 (macrogolglycerol ricinoleate)、聚乙二酉享甘油轻基硬月旨酸酉旨(macrogolglycerol hydroxystearate)、聚乙二醇十六十八烷基醚)和其衍生物。非离子水溶性聚乙二醇单或双脂肪酸酯包括d-α -生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、聚乙二醇66012-羟基硬脂酸酯(S0LUT0L HS 15)、聚乙二醇油酸酯和硬脂酸酯 (例如，PEG 400单硬脂酸酯和PEG 1750单硬脂酸酯)和其衍生物。聚乙二醇甘油酯(polyglycolyzed glyceride)包括聚氧乙烯油酸甘油酯、聚氧乙烯亚油酸甘油酯、聚氧乙烯辛酸/癸酸甘油酯和其衍生物。具体实例包括LABRAFIL M-1944CS、LABRAFIL M-2125CS、LABRAS0L、S0FTIGEN 和 GELUCIRE。在一些实施方案中，非离子型表面活性剂为聚乙二醇蓖麻油或其衍生物。可以通过将蓖麻油或氢化蓖麻油与不同量的环氧乙烷反应来合成有效的聚乙二醇蓖麻油。聚乙二醇甘油蓖麻酸酯是83%的相对疏水性成分和17%的相对亲水性成分的混合物。相对疏水性部分的主要成分是甘油聚乙二醇蓖麻酸酯，而相对亲水性部分的主要成分是聚乙二醇和聚氧乙基甘油醚。聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯是约75%的相对疏水性成分的混合物，其中相对疏水性成分的主要部分为甘油聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯。在一些实施方案中，所述水溶性制剂包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐和聚乙二醇蓖麻油以形成透明的水溶性制剂。如本文所公开的，“透明的水溶性制剂”是指肉眼可以清楚地看透的制剂，并且任选地它是有颜色的。在一些实施方案中，透明的水溶性制剂不含肉眼可见的颗粒(例如，未溶解的白藜芦醇颗粒)。在某些实施方案中，光可以透射透明的水溶性制剂而不发生扩散或散射。因此，在一些实施方案中，透明的水溶性制剂不是不透明的、浑浊的或乳白色的。本文所公开的透明的水溶性制剂不包括在如玉米油的植物油中的乳白色乳液或悬浮液。透明的水溶性制剂通常也不是通过首先将白藜芦醇溶解在醇中然后再与水混合所形成的。在一些实施方案中，所述水溶性制剂是非醇制剂。如本文所使用的，“非醇”制剂是不包含(或仅包含痕量的)甲醇、乙醇、丙醇或丁醇的制剂。在另一些实施方案中，所述制剂不包含(或仅包含痕量的)乙醇。在一些实施方案中，所述制剂是无非质子溶剂的制剂。如本文所使用的，术语“无非质子溶剂的(non-aprotic solvated) ”表示不含或仅含痕量的水溶性非质子溶剂。水溶性非质子溶剂是水溶性的非表面活性剂溶剂，其中氢原子未键合至氧或氮，因此不能贡献氢键。在一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含(或仅包含痕量的)极性非质子溶剂。 极性非质子溶剂是其分子表现出分子偶极矩但其氢原子未键合至氧或氮原子的非质子溶剂。极性非质子溶剂的实例包括醛、酮、二甲基亚砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)。在另一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含(或仅包含痕量的)二甲基亚砜。因此，在一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含DMS0。在一个相关实施方案中，所述水溶性制剂不包含 DMSO或乙醇。在另一些实施方案中，所述水溶性制剂不包含(或仅包含痕量的)非极性非质子溶剂。非极性非质子溶剂是其分子表现出约为零的分子偶极的非质子溶剂。实例包括烃类， 如烷烃、烯烃和炔烃。本发明的水溶性制剂包括溶解在水中的制剂(即，水性制剂)。在一些实施方案中，当加入到水中时，水溶性制剂形成透明的水溶性制剂。在一些实施方案中，所述水溶性制剂基本上是由白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂组成的。在水溶性制剂“基本上是由”白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐和非离子型表面活性剂“组成”时， 该制剂包含白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐、非离子型表面活性剂和任选地在本领域中广泛已知可用于营养品制剂中的其它成分，如防腐剂、增味剂、缓冲剂、水等。“基本上由”白藜芦醇(例如，反式白藜芦醇)、白藜芦醇代谢物或其盐“组成”的水溶性制剂不包含将破坏所述制剂的新颖性和创造性的成分。在一些实施方案中，所述水溶性制剂是用水溶解的制剂。如本文所使用的，“用水溶解的制剂”包含白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐、非离子型表面活性剂和水(例如，含水液体)，但是不包含有机溶剂(例如，乙醇)。在一些实施方案中，用水溶解的制剂是透明的水溶性制剂。III.方法在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗癌症、肥胖、糖尿病、 心血管疾病、血脂异常、年龄相关黄斑变性(例如，与年龄相关黄斑变性有关的失明)、高胆固醇或视网膜病(例如，糖尿病性视网膜病)的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。上文详细定义了术语“癌症”。在一些实施方案中，提供了在需要降胆固醇疗法的对象中降低胆固醇的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。胆固醇的降低可以是总胆固醇的降低或者低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)的降低。在另一个方面，本发明提供了在需要这种治疗的对象中治疗VEGF介导的疾病状态的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在一些实施方案中，提供了降低需要这种治疗的对象的视网膜中VEGF介导的血管通透性和/或异常血管生长的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。在另一些实施方案中，提供了在需要这种治疗的对象中治疗年龄相关黄斑变性的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。
在另一些实施方案中，提供了在需要这种治疗的对象中治疗糖尿病性黄斑水肿的方法。所述方法包括向对象施用有效量的本文所公开的水溶性制剂。血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)是对血管内皮细胞特异的扩散性蛋白，并且在血管生理性和病理性生长的调控中起到重要作用。VEGF促进动脉、静脉和淋巴中存在的血管内皮细胞的生长，但是它还具有引起血管渗漏的能力。这种提高通透性的活性是该分子与其它病理状态之间的联系。例如，VEGF在大多数人肿瘤中表达并且在肿瘤血管生成和转移中起到关键作用。另外，VEGF直接参与导致癌、与年龄相关黄斑变性(包括湿性年龄相关黄斑变性)有关的失明和视网膜病(如糖尿病性视网膜病 /糖尿病性黄斑水肿)的病理过程。因此，在一些实施方案中，提供了降低VEGF活性的方法。出于研究的目的，可通过将VEGF与本发明的水溶性制剂接触以体外或原位进行所述方法。作为替代地，通过向对象施用有效量的本发明水溶性制剂可降低该对象中VEGF的活性。可在如K0P2. 16内皮细胞的适合细胞系中或者使用其它技术如Miles测定来体外测量VEGF抑制。在另一个方面，本发明提供了提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物在对象中的生物利用度的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。可将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物施用给对象，从而提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的生物利用度。与不使用非离子型表面活性剂的白藜芦醇的生物利用度相比，其生物利用度得到提高。在另一个方面，本发明提供了将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐溶解在水中的方法。所述方法包括将白藜芦醇、白藜芦醇代谢物或其盐与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物。将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物与水合并，从而将白藜芦醇溶解到水中。可任选地加热该溶液以提高溶解度。通常，选择加热温度以避免白藜芦醇和/或非离子型表面活性剂的化学分解。在一些实施方案中，所得溶液是如上所述的水溶性制剂或透明的水溶性制剂。例如，所得溶液可以是作为没有肉眼可见颗粒的极其澄清溶液的水溶性制剂。对象是使用本发明方法之一进行治疗的生物体。在一些实施方案中，所述对象是哺乳动物对象，如人或家畜。本发明水溶性制剂的有效量是足以实现如治疗对象(例如，人对象)中特定疾病状态的本发明方法的预定目的的量。IV.剂量和剂型将足以治疗疾病(例如，通过调节VEGF、C0X、细胞增殖)的白藜芦醇的量定义为 “治疗有效剂量”。对于该用途有效的剂量时间表和量(即“剂量方案”)将取决于多个因素，其包括疾病或病况的阶段、疾病或病况的严重程度、患者的一般健康状况、患者的身体状态、年龄等。在计算患者的剂量方案时，还考虑了施用模式。剂量方案还考虑了本领域熟知的药物动力学参数，即吸收率、生物利用度、新陈代谢、清除等(参见，例如，Hidalgo-Aragones (1996) J Steroid Biochem. MoI. Biol. 58 611-617 ；Groning (1996)Pharmazie 51 :337-341 ；Fotherby (1996)Contraception 54 59-69 ； Johnson (1995)J. Pharm. Sci. 84 :1144-1146 ；Rohatagi (1995)Pharmazie 50 610-613 ；Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24 :103-108 ；最新版的 Remington ‘ s，如上所述)。当前技术水平允许临床医师确定每位个体患者和所治疗的疾病或病况的剂量方案。根据患者所需和耐受的剂量和频率，可以单次或多次施用白藜芦醇制剂。所述制剂应提供足够量的活性剂以有效地治疗疾病状态。特别是与经口施用相比将药物施用到解剖学封闭位点从而进入血液、体腔或器官腔时，可以使用较低的剂量。在局部施用中可以使用明显较高的剂量。制备可胃肠外施用的白藜芦醇制剂的实际方法将是本领域技术人员已知的或显而易见的，并且在如上述Remington' s的出版物中进行了更详细地说明。另请参见 Nieman, "Receptor Mediated Antisteroid Action，，，Agarwal 等人主编，De Gruyter, New York(1987)。在一些实施方案中，白藜芦醇以至少Iwt %、5wt %、IOwt %、20wt%、25wt%、 30wt %,35wt %,45wt %,45wt %或50wt %的浓度存在于所述水溶性制剂中。在另一些实施方案中，白藜芦醇以(按重量计)0. 01%、0. 1%、1%至80%、5%至50%、10%至35%或 20%至25%的浓度存在于所述水溶性制剂中。白藜芦醇还可以0. 5至250mg/3. 3液量盎斯或约25mg/ml的浓度存在(例如，存在于饮料制剂中)。在另一些实施方案中，白藜芦醇以 0. 01mg/ml至50mg/ml的浓度存在。对于实现完全透明的溶液来说，存在最大浓度。使用聚乙二醇40蓖麻油(polyoxyl 40castor oil)(即聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯)作为表面活性剂的高于20%的白藜芦醇浓度将不再能够在水中获得完全透明的溶液。因此，对于白藜芦醇或反式白藜芦醇来说，在所述表面活性剂中的浓度范围将为0. 至20%，或0.01到 20mg/ml，优选的浓度为约20mg/ml。这表示白藜芦醇与表面活性剂的比值为1 5。在一些浓缩制剂(例如，软胶囊制剂)中，白藜芦醇可为约1至50mg/ml，或约20mg/ml或至少 lmg/ml 存在。在另一些实施方案中，所述水溶性饮料制剂中存在至少0. 5mgUmg,2mg,3mg,4mg, 5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg 或 Ig 的白藜声醇。在另一些实施方案中，在所述水溶性饮料制剂中存在0. Img至2g、0. 5mg至lg、lmg至500mg、 Img 至 100mg、lmg 至 50mg、lmg 至 IOmg 或 Img 至 5mg 的白藜声醇。在一些实施方案中，所述水溶性制剂是药物组合物的形式。所述药物组合物可包含白藜芦醇或白藜芦醇代谢物、非离子型表面活性剂和可药用赋形剂。在可接受载体中配制包含本发明白藜芦醇的药物组合物后，可将其放置在适当的容器中并标记出用于治疗适应症。对于白藜芦醇的施用，该标记将包含例如有关施用的量、频率和方法的说明。在一个实施方案中，本发明提供了治疗人谵妄的试剂盒，其包含白藜芦醇和教导白藜芦醇的适应症、施用剂量和时间表的说明性材料。任何适合的剂型可用于施用本发明水溶性制剂，如经口、胃肠外和局部剂型 (topical dosage form)。经口制剂包括适合于患者摄入的片剂、丸剂、粉剂、糖锭剂、胶囊 (例如，软胶囊)、液剂、锭剂、凝胶剂、糖浆、浆液、饮料、悬液等。本发明的制剂还可以通过注射施用，即静脉内注射、肌内注射、皮内注射、皮下注射、十二指肠内注射或腹膜内注射。 另外，本文所述的制剂可以通过吸入施用，例如鼻内。另外，本发明的制剂可以透皮施用。 还可以通过眼内、阴道内和直肠内途径施用制剂，其包括栓剂、吹入剂、粉剂和气雾剂制剂 (例如，类固醇吸入剂，参见 Rohatagi, J. Clin. Pharmacol. 35 :1187-1193,1995 ；Tjwa,Ann.Allergy Asthma Immunol. 75 107-111，1995)。因此，本文所述的制剂可适于经口施用。对于从本发明制剂制备药物组合物来说，可药用载体可以是固体或液体的。固体制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其还可以用作稀释剂、调味剂、粘结剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在科学和专利文献中很好地说明了制剂和施用技术的详细内容，参见例如，最新版的Remington' s Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton PA( “Remington' s，，)。适合的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉(来自玉米、 小麦、水稻、马铃薯或其它植物)、明胶、黄蓍胶、低熔蜡、可可脂、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、 纤维素(如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠)和树胶(包括阿拉伯胶和黄蓍胶(tragacanth))以及蛋白质，如明胶和胶原。如果需要，可以加入崩解剂或共增溶剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，如海藻酸钠。在粉剂中，载体是磨碎的固体，它与磨碎的活性成分组成混合物。在片剂中，活性成分与具有必要粘结性能的载体以适合的比例混合并压制成所需的形状和尺寸。糖锭的芯与合适包衣如浓缩糖溶液一起提供，所述包衣还可含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆(carbopol gel)、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料加入到片剂或糖锭涂层中以用于产品识别或描述活性化合物的量(即剂量)。例如，也可使用由明胶制成的推入配合胶囊以及由明胶和如甘油或山梨糖醇的涂层制成的密封软胶囊来经口使用本发明的药物制剂。推入配合胶囊可以含有与例如乳糖或淀粉的填充剂或粘结剂、如滑石或硬脂酸镁的润滑剂以及任选的稳定剂相混合的白藜芦醇。在软胶囊中，可将白藜芦醇溶解或悬浮在适合的液体中，如含有或不含稳定剂的脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。为了制备栓剂，首先将低熔蜡例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物熔化并通过搅拌将活性成分均勻地分散在其中。然后，将熔融的均勻混合物注入到适当尺寸的模具中，使其冷却从而固化。液态制剂包括溶液、悬液、饮料和乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。对于胃肠外注射，可在聚乙二醇水溶液中将液体制剂配成溶液。可通过将活性成分溶解在水中并根据需要加入适合的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备适于经口使用的水溶液和饮料。可通过将磨碎的活性成分与下列物质在水中分散来制备适于经口使用的水悬液，所述物质包括粘性材料，如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；和分散剂或润湿剂，如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七烷乙烯氧基十六烷醇)、环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。水悬液还可含有一种或多种防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。可调节制剂的渗透压。本发明还包括固态制剂，其设计在使用之前转化为用于经口施用的液态制剂。该类液态形式包括溶液、悬液和乳液。除了活性成分外，这些制剂可以含有着色剂、调味剂、稳定齐 、缓冲齐 、人工和天然甜味齐 、分散剂、增稠剂、增溶剂等。可以通过将白藜芦醇悬浮在如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油的植物油中或悬浮在如液体石蜡的矿物油中或悬浮在这些油剂的混合物中来配制油悬液。油悬液可以含有增稠剂，如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂以提供适口的经口制剂，如甘油、山梨醇或蔗糖。可以通过加入如抗坏血酸的抗氧化剂来保存这些制剂。作为可注射油剂载体的实例，请参见Minto，J. Pharmacol. Exp. Ther. 281 =93-102,1997。本发明的制剂还可为水包油乳液的形式。油相可以是如上所述的植物油或矿物油或这些的混合物。适合的乳化剂包括如阿拉伯树胶和黄蓍胶的天然存在的树胶、如大豆卵磷脂的天然存在的磷脂，如失水山梨醇单油酸酯的来源于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯以及如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯的这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物。乳液还可以含有甜味剂和调味剂，如配制成糖浆和酏剂制剂。这类制剂还可以含有镇痛剂、防腐剂或着色剂。可透皮递送、通过局部途径递送本发明的制剂，将本发明制剂配制成敷药棒、溶液、悬液、乳液、凝胶、乳膏、软膏、糊剂、胶冻、涂料、粉剂和气雾剂。所述制剂还可作为微球递送以用于在体内缓释。例如，可通过以下方式施用微球 皮下缓慢释放的含药微球的皮内注射(参见Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7 =623-645, 1995)；作为生物可降解和可注射的凝胶制剂(参见，例如，Gao Pharm. Res. 12 =857-863, 1995)；或作为经口施用的微球(参见，例如，Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 49 =669-674, 1997)。透皮和皮内途径均提供数周或数月的持续递送。本发明的制剂可以盐形式提供并且可与多种酸形成，其包括但不限于盐酸、硫酸、 醋酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐更趋于在相应游离碱形式的水性或其它质子性溶剂中溶解。在另一些情况下，所述制剂可以是在lmM-50mM组氨酸、0. 1 % -2 %蔗糖、2 % -7 % 甘露醇中在4. 5-5. 5的pH范围内的冻干粉末，其在使用前与缓冲剂合并。在另一个实施方案中，本发明的制剂可用于如静脉内(IV)施用或体腔或器官腔中施用的胃肠外施用。用于施用的制剂一般将包含溶于可药用载体中的白藜芦醇溶液。在可使用的可接受载体和溶剂中有水和林格氏溶液，等渗氯化钠。另外，通常可以将无菌不挥发性油用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，其包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，同样可在可注射制剂中使用脂肪酸例如油酸。这些溶液是无菌的并且一般不含不希望的物质。这些制剂可通过常规熟知的灭菌技术进行灭菌。由于需要接近生理条件，所述制剂可含有可药用辅助物质，如PH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如醋酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些制剂中白藜芦醇的浓度可以显著不同并且根据所选的特定施用模式和患者需要其将主要基于液体体积、粘度、体重等进行选择。对于IV施用，所述制剂可以是无菌注射制剂，如无菌注射水或油悬液。可以根据已知技术，使用那些适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制这种悬液。无菌注射制剂也可以是无毒的胃肠外可接受稀释剂或溶剂(如1，3_ 丁二醇溶液)中的无菌注射溶液或悬液。在另一个实施方案中，可以通过使用脂质体递送本发明的制剂，所述脂质体与细胞膜融合或被内吞，即通过利用与脂质体相连或者直接与寡核苷酸相连的配体，所述配体结合导致内吞作用的细胞表面膜蛋白受体。通过使用脂质体，特别是在脂质体表面带有对靶细胞特异性配体时或者在优选地指向特定器官的情况下，可以将白藜芦醇、 白藜芦醇代谢物或其盐的递送在体内集中到靶细胞上。(参见，例如，Al-Muhammed,J. Microencapsul. 13 :293-306,1996 ；Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6 :698-708,1995 ； Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46 1576-1587，1989)。所述制剂可作为单位剂型施用。在这种形式中，将所述制剂再分成含有适量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有单独量的制剂，如小包装片剂、 胶囊和置于小瓶或安瓿瓶中的粉剂。另外，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或糖锭本身， 或者它可以是处于包装形式的适当数目的任何这些剂型。根据特定应用和活性成分的效力，可以改变或调节单位剂量制剂中活性成分的量。如果需要，所述组合物还可以含有其它相容的治疗剂。V.测定可以使用任何适合的方法测定目标非离子型表面活性剂溶解白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的能力。通常，将非离子型表面活性剂与白藜芦醇接触并使用震荡器或超声装置机械和/或自动地混合。可任选地加入水，例如，在白藜芦醇和/或表面活性剂处于粉末形式的情况下。可任选地加热溶液以提高溶解度。选择加热温度以避免白藜芦醇或白藜芦醇代谢物和非离子型表面活性剂的化学分解。可目视检查所得溶液中的胶体颗粒以确定白藜芦醇的溶解度。作为替代地，可过滤并分析所述溶液以确定溶解度。例如，可使用分光光度计来确定过滤溶液中存在的白藜芦醇浓度。通常，将测试溶液与含有一系列已知量的预过滤白藜芦醇溶液的阳性对照进行比较以获得标准浓度对UV/vis吸光度的曲线。作为替代地，可以使用高效液相色谱来确定溶液中白藜芦醇的量。在本领域中，高通量溶解度测定法是熟知的。通常，这些方法包括将溶液与不同量的非离子型表面活性剂、白藜芦醇和任选的其它共溶剂自动分散并混合。然后，可以使用以上所讨论的任何适合的方法来分析所得溶液以确定溶解度。例如，配备改性径迹蚀刻聚碳酸酯0. 4 μ m膜的Millipore MultiScreen Solubility filter plate 是包含过滤板和盖的一次性96孔产品组件。该装置设计用于处理100-300 μ L体积范围的水溶性样品。真空过滤设计与标准的微量滴定板真空歧管相适应。该板还设计成与在滤液收集中使用的标准96孔微量滴定接收板配合。已经开发了 MultiScreen Solubility filter plate 并且对(使用标准真空的)一致过滤流动时间、 低水相可提取化合物、高样品过滤回收率和根据执行溶解度测定的需要培育样品的能力进行了 QC测试。已经专门对水介质中溶解的有机化合物的高回收率开发了低结合膜。水相溶解度测定允许通过在Multiscreen溶解度过滤板中混合、孵育并过滤溶液以确定白藜芦醇溶解度。在使用真空过滤将滤液转移到96孔收集板中后，通过UV/Vis光谱分析以确定溶解度。另外，可以使用LC/MS或HPLC来确定化合物溶解度，特别是对于UV/ Vis吸光度较低和/或纯度较低的化合物。对于水相溶解度的定量来说，可以确定标准校准曲线并在确定水相溶解度之前对每种化合物进行分析。可通过加入浓缩药物或化合物的等分试样来制备测试溶液。在室温下，将所述溶液在带盖的96孔Multiscreen溶解度过滤板中混合1. 5小时。然后，将所述溶液真空过滤到96孔聚丙烯V形底收集板中以除去任何不溶的沉淀。一旦完成过滤，将160 μ L/孔的溶液从收集板中转移到96孔UV分析板并用40 μ L/孔的乙腈稀释。用UV/vis微孔板光谱仪在沈0-500歷对UV/Vis分析板进行扫描以确定测试化合物的吸光度谱。
因此，本领域的技术人员可测定多种非离子型表面活性剂以确定它们溶解白藜芦醇化合物的能力。本文所使用的术语和表达作为说明性术语而非限制性术语使用，这些术语和表达的使用不旨在排除所示或所述特征的等价物或其部分，应承认在本发明所主张的范围内各种修改均是可能的。此外，在不背离本发明范围的情况下，本发明任何实施方案的任何一项或多项特征可以与本发明任何其它实施方案的任何一项或多项特征组合。例如，制剂的特征等同地适用于治疗本发明所述疾病状态的方法。本文引用的所有出版物、专利和专利申请出于所有目的以其整体作为参考并入本文。VI.实施例下列实施例旨在说明本发明的某些实施方案，而不意欲限制本发明的范围。萤光黄购自Molecular Probes (Eugene，OR)。汉克斯缓冲液(Hanks buffer)以及所有其它化学品均得自Sigma-Aldrichd Louis, M0)。实施例1配制了含有非离子型表面活性剂聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯(聚乙二醇40蓖麻油)的反式白藜芦醇水溶性组合物。通过将聚乙二醇蓖麻油与粉末状合成99%反式白藜芦醇一起加热并搅拌，形成了含有溶解的反式白藜芦醇的澄清粘稠溶液(以下称为“白藜芦醇凝胶制剂”)。该白藜芦醇凝胶制剂是由聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯40(50ml)和粉末状反式白藜芦醇(3克)组成的，这表示白藜芦醇在表面活性剂中的浓度为6%。将白藜芦醇 /表面活性剂混合物缓慢加入到IOOml温水中直至形成完全透明的溶液。向其中加入0. 4g 抗坏血酸以稳定反式白藜芦醇，这是因为在先前的实验中发现如果不加抗坏血酸，则溶液很快开始变色，从深酒红色最终转变为棕色。加入抗坏血酸，该溶液保持澄清，不变色。从以上的实例可以看出，通过将水加入到白藜芦醇凝胶制剂中形成了溶解的反式白藜芦醇的水溶液(以下称为“白藜芦醇水制剂”或“水溶性饮料”)。更具体地，通过在温水中加热反式白藜芦醇凝胶制剂以形成反式白藜芦醇的“澄清水溶液”从而制备了白藜芦醇水制剂。这种白藜芦醇水制剂不具有不希望的味道。白藜芦醇水制剂是由水(100ml)、聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯40 (50ml)和粉末状98%反式白藜芦醇(3克)组成的，反式白藜芦醇在白藜芦醇水制剂中的浓度为20% (含水饮料)。通过HPLC分析了白藜芦醇水制剂并且发现含有0.2%或20mg/ml的反式白藜芦醇。实施例2将粉末状反式白藜芦醇在pH7. 4的汉克斯平衡盐溶液(IOmM HEPES和15mM葡萄糖)中的溶解度与反式白藜芦醇凝胶制剂的进行比较。将至少Img的粉末状合成反式白藜芦醇提取物或IOOmg的白藜芦醇凝胶制剂与Iml缓冲液混合以分别制备> lmg/ml的粉末状白藜芦醇提取混合物和> lmg/ml的白藜芦醇凝胶制剂混合物。使用台式漩涡搅拌器将该混合物震荡2小时，并且在室温下保持静置过夜。在漩涡搅拌并静置过夜后，将粉末状白藜芦醇提取混合物通过首先用样品饱和的0. 45μπι尼龙注射过滤器(Whatman，Cat# 6789-0404)过滤。在漩涡搅拌并静置过夜后，将白藜芦醇凝胶制剂混合物以HOOOrpm离心10分钟。 对滤液或上清液连续取样两次并且在分析前用50 50的测定缓冲液乙腈的混合物稀释 10、100 和 10000 倍。
针对在50 50的测定缓冲液乙腈的混合物中制备的标准品，使用电喷雾电离通过LC/MS/MS测定了两种混合物。标准品的浓度范围从Ι.ΟμΜ向下至3.0nM。下表1显
示了结果。表1.白藜芦醇在pH7. 4的磷酸盐缓冲液中的溶解度
权利要求
1.水溶性制剂，其包含a)白藜芦醇或白藜芦醇代谢物；和b)非离子型表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇为反式白藜芦醇。
3.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为非醇制剂。
4.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为无非质子溶剂的制剂。
5.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少0.01mg/ml的浓度存在。
6.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少lmg/ml的浓度存在。
7.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少0.01wt%的浓度存在。
8.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇以至少20wt%的浓度存在。
9.根据权利要求1所述的制剂，其包含Img至25mg的白藜芦醇。
10.根据权利要求1所述的制剂，其包含至少IOmg的白藜芦醇。
11.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯；非离子水溶性聚乙二醇单或双脂肪酸酯；非离子水溶性失水山梨醇脂肪酸酯；聚乙二醇甘油酯；非离子水溶性三嵌段共聚物；或其衍生物。
12.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为非离子水溶性甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯。
13.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇40蓖麻油。
14.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇甘油蓖麻酸酯或聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯。
15.根据权利要求1所述的制剂，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯。
16.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为经口制剂。
17.根据权利要求16所述的制剂，其中所述经口制剂为软胶囊。
18.根据权利要求16所述的制剂，其中所述经口制剂为片剂。
19.根据权利要求16所述的制剂，其中所述经口制剂为饮料。
20.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为可注射制剂。
21.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为局部制剂。
22.根据权利要求1所述的制剂，其中所述白藜芦醇来源于葡萄或虎杖(polygonum cuspidatum)。
23.根据权利要求1所述的制剂还包含可药用赋形剂。
24.在水中溶解白藜芦醇的方法，所述方法包括以下步骤a.将白藜芦醇与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂-白藜芦醇混合物；和b.将所述表面活性剂-白藜芦醇混合物与水合并，从而将所述白藜芦醇溶解到水中。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述非离子型表面活性剂为聚乙二醇40蓖麻油。
26.在需要这种治疗的对象中治疗癌症、肥胖、糖尿病、心血管疾病、血脂异常、与年龄相关黄斑变性有关的失明、高胆固醇或糖尿病性视网膜病的方法，所述方法包括对所述对象施用有效量的根据权利要求1所述的制剂。
27.在需要这种治疗的对象中治疗VEGF介导的疾病状态的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的根据权利要求1所述的制剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述疾病状态为与年龄相关黄斑变性有关的失明或糖尿病性视网膜病。
29.根据权利要求27所述的方法，其中所述疾病状态为肥胖、糖尿病、心血管疾病或血脂异常。
30.提高白藜芦醇或白藜芦醇代谢物在对象中的生物利用度的方法，所述方法包括将所述白藜芦醇或白藜芦醇代谢物与非离子型表面活性剂合并以形成表面活性剂_白藜芦醇混合物的步骤。
31.根据权利要求31所述的方法，还包括向所述对象施用所述表面活性剂_白藜芦醇混合物，从而提高所述白藜芦醇或白藜芦醇代谢物的生物利用度。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述白藜芦醇为反式白藜芦醇。
全文摘要
本发明公开了提高白藜芦醇水溶性和/或生物利用度的方法和制剂。所述制剂可用于治疗包括癌症在内的疾病状态。
文档编号A61K9/06GK102264348SQ200980152936
公开日2011年11月30日 申请日期2009年11月19日 优先权日2008年11月26日
发明者埃里克·库茨 申请人:脂蛋白技术有限公司
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