用于分析波生坦及相关物质的hplc方法以及这些物质作为参比标准和标记的用途的制作方法
专利名称：用于分析波生坦及相关物质的hplc方法以及这些物质作为参比标准和标记的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于分析药品物质波生坦和相关物质的新型HPLC方法、以及所述物质作为参比标准和标记的用途。
背景技术：
为确保医药产品的上市许可，制造商必须向合适的注册机构提交详细证明，以证实该产品适合向市场发放。因此必须使注册机构相信该产品对于人类给药是可接受的，且待上市的特定药物组合物在发放之时没有杂质并具有可接受的储存稳定性。向注册机构提交的文件必须包括分析数据，该分析数据表明在制造时活性药物成分(API)中没有杂质、或存在可接受水平的杂质，并表明药物组合物的储存稳定性是可接受的。API及药物组合物中的可能杂质包括残留量的合成前体(中间体)、合成API过程中产生的副产品、残留溶剂、API的异构体(如几何异构体、非对映异构体或对映异构体)、合成API或制备药物组合物所使用的材料中存在的污染物、以及未识别的不定物质(adventitious substances)。在储存期间可能出现的其它杂质包括API的降解物 (degradants)，如水解或氧化形成的那些降解物。卫生部门具有非常严格的标准，生产商必须证明他们的产品相对无杂质或杂质在可接受的限度内，这些标准对于生产的每批药物产品是可再现的(可重复使用的)。为证明API或药物组合物安全有效所需的测试包括纯度化验、相关物质测试、含量均勻度测试和溶出度测试。化验测试确定与已知纯度的标准相比时测试产品的纯度，而相关物质测试则用来对产品中存在的所有杂质进行定量。含量均勻度测试确保批量产品如片剂含有均勻含量的API，而溶出度测试则确保每批产品具有一致的API溶出度和释放。选择用于分析API或药物组合物(如片剂和胶囊剂)的技术通常为连接检测器的高效液相色谱(HPLC)。检测器包括UV-可见检测器或质谱(MQ检测器。API和存在的杂质(如果有的话)在HPLC固定相上得以分离，并通过所述检测器进行检测和定量。HPLC是一种色谱分离技术，其中，高压泵迫使所分析的物质或混合物连同液体溶剂一流动相(也称为洗脱剂)-通过含有固定相的分离柱。HPLC分析可在等度(isocratic)或梯度模式下进行。在等度模式下，流动相组分始终恒定。梯度HPLC分离是伴随一段时间内组成流动相的两种或多种溶剂的百分比逐渐改变而进行的。溶剂的改变由混合器控制，在溶剂通过柱之前，混合器将其混合以产生流动相。如果物质与固定相强烈地相互作用，那么其在柱中保留相对较长的时间，而与固定相不那么强烈地相互作用的物质则更快地从柱中洗脱出来。取决于相互作用的强度，分析物的各种成分在不同时间(称为保留时间)出现在分离柱的末端，在那里借助于合适的检测器如UV检测器对它们进行检测和定量。
波生坦(bosentan)属于一类高度取代的嘧啶，其用于通过阻断内皮素 (endothelin)的作用来治疗肺动脉高血压。波生坦，具有式⑴所示的化学结构，分子量为551. 615，其分子式为C27H29N5O6S15 波生坦是一种白色至淡黄白色(yellowish white)粉末，易溶于乙腈。
权利要求
1.化合物A，具有化学名N-[6-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-5_羟基-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
2.化合物B，具有化学名N-[6-(乙烯-1-氧基)-5_羟基-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
3.化合物C，具有化学名N-[6-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-5-(2_甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
4.化合物D，具有化学名N-[6-羟基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
5.化合物E，具有化学名N-[6-(乙烯-1-氧基)-5-(2_甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，为分离形式。
7.根据权利要求6所述的化合物，其为基本上纯的形式。
8.根据权利要求6或7所述的化合物，其具有高于约90%的纯度。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，用于在测试波生坦或含有波生坦的药物剂型的样品纯度中作为参比标记或作为参比标准而使用。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物在测试波生坦或含有波生坦的药物剂型的样品纯度中作为参比标记或作为参比标准的用途。
11.一种用于测试波生坦样品纯度的色谱方法，所述方法包括通过利用根据权利要求9或10所述的参比标记或参比标准来测定所述样品中化合物A-E中任何一种或多种的存在。
12.—种色谱方法，包含流动相和固定相，用于在含有波生坦的样品中通过测定化合物 A-E中任何一种或多种的存在来测试波生坦样品的纯度，所述方法包括(a)将波生坦或含有波生坦的剂型的样品溶解在溶剂中以制备样品溶液；(b)将根据权利要求1-9中任一项所述的化合物A-E中的任何一种或多种的样品溶解在溶剂中以制备参比标记溶液；(c)对所述样品溶液和所述参比溶液实施色谱技术；以及(d)通过参照所述参比溶液中存在的已知化合物的存在，测定所述样品中化合物A-E 中任何一种或多种的存在。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述方法为HPLC方法或梯度HPLC方法。
14.根据权利要求11-13中任一项所述的方法，其中，使用的所述固定相为(a)反相；和/或(b)辛基硅烷硅胶或十八烷基硅烷硅胶
15.根据权利要求11-14中任一项所述的方法，其中，所述流动相包含缓冲液(A)和有机溶剂(B)的组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述缓冲液(A)(a)为含水缓冲液；和/或(b)为磷酸盐、醋酸盐、甲酸盐或三氟乙酸或它们的混合物的水溶液；和/或(c)为醋酸盐水溶液；和/或(d)为醋酸铵水溶液；和/或(e)为醋酸铵水溶液，其中，醋酸铵的浓度为0.OlM至1. 0M。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中，所述有机溶剂(B)(a)为极性质子溶剂或偶极非质子溶剂；和/或(b)选自包括甲醇、乙腈、丙醇或异丙醇或它们的混合物的组中；和/或(c)包含乙腈或甲醇或它们的混合物。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中，所述流动相包含醋酸铵(A)和乙腈(B)的组合。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的方法，其中，所述流动相包含以下梯度设计
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述流动相包含(a)醋酸铵，作为所述缓冲液(A)；和/或(b)乙腈，作为所述有机溶剂(B)。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的方法，其中，所述缓冲液(A)的pH为约2至6。
22.根据权利要求11-21中任一项所述的方法，其中，所述色谱法在约15-40°C的温度下进行。
23.根据权利要求11-22中任一项所述的方法，用于(a)检测化合物A-E中的一种或多种；和/或(b)检测并定量化合物A-E中的一种或多种；和/或(c)以单次操作检测并定量化合物A-E中的一种或多种。
24.根据权利要求11-23中任一项所述的方法，其中，待测试的波生坦样品为(a)波生坦API；或(b)含有波生坦的剂型；或(c)波生坦盐和/或溶剂化物；或(d)含有波生坦盐和/或溶剂化物的剂型。
25.根据权利要求Il-M中任一项所述的方法，其中，被测试的所述波生坦用于药物组合物中。
26.波生坦，其已被实施根据权利要求11-25中任一项所述的方法。
27.根据权利要求沈所述的波生坦，其基本上没有如权利要求1-5中所限定的化合物 A-E中的一种、两种、三种、四种或全部五种。
28.波生坦，其基本上没有如权利要求1-5中所限定的化合物A-E中的一种、两种、三种、四种或全部五种。
29.一种药物组合物，含有根据权利要求沈-28中任一项所述的波生坦。
全文摘要
本发明涉及一种用于分析药品物质波生坦和相关物质的新型HPLC方法，本发明还涉及所述物质作为参比标准和标记的用途。
文档编号A61K31/505GK102272108SQ200980153433
公开日2011年12月7日 申请日期2009年11月2日 优先权日2008年11月3日
发明者库马 埃拉·科特斯瓦拉·萨蒂亚·维贾雅, 阿维纳什·普拉巴卡·尼卡姆 申请人:基因里克斯(英国)有限公司
技术领域：
本发明涉及一种用于分析药品物质波生坦和相关物质的新型HPLC方法、以及所述物质作为参比标准和标记的用途。
背景技术：
为确保医药产品的上市许可，制造商必须向合适的注册机构提交详细证明，以证实该产品适合向市场发放。因此必须使注册机构相信该产品对于人类给药是可接受的，且待上市的特定药物组合物在发放之时没有杂质并具有可接受的储存稳定性。向注册机构提交的文件必须包括分析数据，该分析数据表明在制造时活性药物成分(API)中没有杂质、或存在可接受水平的杂质，并表明药物组合物的储存稳定性是可接受的。API及药物组合物中的可能杂质包括残留量的合成前体(中间体)、合成API过程中产生的副产品、残留溶剂、API的异构体(如几何异构体、非对映异构体或对映异构体)、合成API或制备药物组合物所使用的材料中存在的污染物、以及未识别的不定物质(adventitious substances)。在储存期间可能出现的其它杂质包括API的降解物 (degradants)，如水解或氧化形成的那些降解物。卫生部门具有非常严格的标准，生产商必须证明他们的产品相对无杂质或杂质在可接受的限度内，这些标准对于生产的每批药物产品是可再现的(可重复使用的)。为证明API或药物组合物安全有效所需的测试包括纯度化验、相关物质测试、含量均勻度测试和溶出度测试。化验测试确定与已知纯度的标准相比时测试产品的纯度，而相关物质测试则用来对产品中存在的所有杂质进行定量。含量均勻度测试确保批量产品如片剂含有均勻含量的API，而溶出度测试则确保每批产品具有一致的API溶出度和释放。选择用于分析API或药物组合物(如片剂和胶囊剂)的技术通常为连接检测器的高效液相色谱(HPLC)。检测器包括UV-可见检测器或质谱(MQ检测器。API和存在的杂质(如果有的话)在HPLC固定相上得以分离，并通过所述检测器进行检测和定量。HPLC是一种色谱分离技术，其中，高压泵迫使所分析的物质或混合物连同液体溶剂一流动相(也称为洗脱剂)-通过含有固定相的分离柱。HPLC分析可在等度(isocratic)或梯度模式下进行。在等度模式下，流动相组分始终恒定。梯度HPLC分离是伴随一段时间内组成流动相的两种或多种溶剂的百分比逐渐改变而进行的。溶剂的改变由混合器控制，在溶剂通过柱之前，混合器将其混合以产生流动相。如果物质与固定相强烈地相互作用，那么其在柱中保留相对较长的时间，而与固定相不那么强烈地相互作用的物质则更快地从柱中洗脱出来。取决于相互作用的强度，分析物的各种成分在不同时间(称为保留时间)出现在分离柱的末端，在那里借助于合适的检测器如UV检测器对它们进行检测和定量。
波生坦(bosentan)属于一类高度取代的嘧啶，其用于通过阻断内皮素 (endothelin)的作用来治疗肺动脉高血压。波生坦，具有式⑴所示的化学结构，分子量为551. 615，其分子式为C27H29N5O6S15 波生坦是一种白色至淡黄白色(yellowish white)粉末，易溶于乙腈。
权利要求
1.化合物A，具有化学名N-[6-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-5_羟基-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
2.化合物B，具有化学名N-[6-(乙烯-1-氧基)-5_羟基-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
3.化合物C，具有化学名N-[6-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-5-(2_甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
4.化合物D，具有化学名N-[6-羟基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
5.化合物E，具有化学名N-[6-(乙烯-1-氧基)-5-(2_甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)-嘧啶-4-基]-4-叔丁基苯磺酰胺，并具有以下结构
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，为分离形式。
7.根据权利要求6所述的化合物，其为基本上纯的形式。
8.根据权利要求6或7所述的化合物，其具有高于约90%的纯度。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，用于在测试波生坦或含有波生坦的药物剂型的样品纯度中作为参比标记或作为参比标准而使用。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物在测试波生坦或含有波生坦的药物剂型的样品纯度中作为参比标记或作为参比标准的用途。
11.一种用于测试波生坦样品纯度的色谱方法，所述方法包括通过利用根据权利要求9或10所述的参比标记或参比标准来测定所述样品中化合物A-E中任何一种或多种的存在。
12.—种色谱方法，包含流动相和固定相，用于在含有波生坦的样品中通过测定化合物 A-E中任何一种或多种的存在来测试波生坦样品的纯度，所述方法包括(a)将波生坦或含有波生坦的剂型的样品溶解在溶剂中以制备样品溶液；(b)将根据权利要求1-9中任一项所述的化合物A-E中的任何一种或多种的样品溶解在溶剂中以制备参比标记溶液；(c)对所述样品溶液和所述参比溶液实施色谱技术；以及(d)通过参照所述参比溶液中存在的已知化合物的存在，测定所述样品中化合物A-E 中任何一种或多种的存在。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述方法为HPLC方法或梯度HPLC方法。
14.根据权利要求11-13中任一项所述的方法，其中，使用的所述固定相为(a)反相；和/或(b)辛基硅烷硅胶或十八烷基硅烷硅胶
15.根据权利要求11-14中任一项所述的方法，其中，所述流动相包含缓冲液(A)和有机溶剂(B)的组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述缓冲液(A)(a)为含水缓冲液；和/或(b)为磷酸盐、醋酸盐、甲酸盐或三氟乙酸或它们的混合物的水溶液；和/或(c)为醋酸盐水溶液；和/或(d)为醋酸铵水溶液；和/或(e)为醋酸铵水溶液，其中，醋酸铵的浓度为0.OlM至1. 0M。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中，所述有机溶剂(B)(a)为极性质子溶剂或偶极非质子溶剂；和/或(b)选自包括甲醇、乙腈、丙醇或异丙醇或它们的混合物的组中；和/或(c)包含乙腈或甲醇或它们的混合物。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中，所述流动相包含醋酸铵(A)和乙腈(B)的组合。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的方法，其中，所述流动相包含以下梯度设计
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述流动相包含(a)醋酸铵，作为所述缓冲液(A)；和/或(b)乙腈，作为所述有机溶剂(B)。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的方法，其中，所述缓冲液(A)的pH为约2至6。
22.根据权利要求11-21中任一项所述的方法，其中，所述色谱法在约15-40°C的温度下进行。
23.根据权利要求11-22中任一项所述的方法，用于(a)检测化合物A-E中的一种或多种；和/或(b)检测并定量化合物A-E中的一种或多种；和/或(c)以单次操作检测并定量化合物A-E中的一种或多种。
24.根据权利要求11-23中任一项所述的方法，其中，待测试的波生坦样品为(a)波生坦API；或(b)含有波生坦的剂型；或(c)波生坦盐和/或溶剂化物；或(d)含有波生坦盐和/或溶剂化物的剂型。
25.根据权利要求Il-M中任一项所述的方法，其中，被测试的所述波生坦用于药物组合物中。
26.波生坦，其已被实施根据权利要求11-25中任一项所述的方法。
27.根据权利要求沈所述的波生坦，其基本上没有如权利要求1-5中所限定的化合物 A-E中的一种、两种、三种、四种或全部五种。
28.波生坦，其基本上没有如权利要求1-5中所限定的化合物A-E中的一种、两种、三种、四种或全部五种。
29.一种药物组合物，含有根据权利要求沈-28中任一项所述的波生坦。
全文摘要
本发明涉及一种用于分析药品物质波生坦和相关物质的新型HPLC方法，本发明还涉及所述物质作为参比标准和标记的用途。
文档编号A61K31/505GK102272108SQ200980153433
公开日2011年12月7日 申请日期2009年11月2日 优先权日2008年11月3日
发明者库马 埃拉·科特斯瓦拉·萨蒂亚·维贾雅, 阿维纳什·普拉巴卡·尼卡姆 申请人:基因里克斯(英国)有限公司
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