药物组合物及其用途的制作方法

xiaoxiao2020-7-23  5

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专利名称:药物组合物及其用途的制作方法
技术领域
本发明涉及中药领域,具体地涉及药物组合物及其用途。更具体地,本发明提供了药物组合物、药物组合物在制备药物中的用途、制备药物的方法、药物以及对药物组合物或药物进行检测的方法。
背景技术
人乳头瘤病毒(Human papilloma virus, HPV)广泛存在于自然界,具有高度的组织和宿主特异性,是ー类可致人类皮肤和粘膜异常增生、引起宿主组织疣状病变以及乳头状瘤的DNA病毒。目前已发现至少120种不同的HPV亚型,其中大约50余种亚型可感染生殖道粘膜,19余种被证实与宫颈癌密切相关。根据HPV亚型与生殖道恶性肿瘤的关系,将HPV分为低危型和高危型。其中HPV 6、11、42、43、44、53、81等属于低危型,HPV16、18、26、 31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82 等属于高危型,上述不同型别的 HPV 感染能够导致宫颈或外生殖器或肛周或皮肤的局部病变,包括由HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)、宫颈癌;由 HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的疣病,如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣;以及由HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病。尖锐湿抚(Condyloma acuminatum, CA)是感染HPV引起的增生性疾病。这种疣表现为与众不同的乳头状或鸡冠样肿瘤,在我国,其发病率仅次于非淋菌性尿道炎和淋病,占性传播疾病的第3位。感染尖锐湿疣一般不会立即发病,有较长时间的潜伏期,一般为3周至8个月不等,平均为3个月。尖鋭湿疣属于祖国医学“疣”的范畴,俗称“瘊子”。中医并无尖鋭湿疣病名,但有相似之症,如“瘙瘊”、“臊瘊”等。中医认为其病因病机主要是气血失和,腠理失密,加之恣情纵欲,房事不洁,湿热内蕴,外感邪毒,湿热淫毒与气血搏结,日久蕴结肌肤,下注前后ニ阴而发为本病。目前治疗因HPV引起的尖鋭湿疣的主要方法有手术切除、电烙、冷冻、激光治疗等。普通的治疗药物有普达菲伦脂、5-氟尿嘧啶、鬼臼毒素、咪喹莫特等。然而,由于尖锐湿疣宿主免疫抑制、正常皮肤潜伏感染以及亚临床感染等原因,目前的治疗手段非100%有效,且治疗后有20% 50%的复发可能性。而且上述手术方法会给患者带来极大的痛苦,而一般药物方法也存在一定局限性及毒副作用,因此治疗效果还不满意。CIN根据细胞异常的程度分为3级CIN I、CIN II、CINIII。CIN I级相当于轻度非典型增生,异常增生的细胞仅限于上皮层下1/3 ;CIN II级相当于中度非典型增生,异常增生的细胞限于上皮层的下2/3 ;CIN III级相当于重度不典型增生和原位癌,细胞异型性明显,异常增生的细胞占据上皮层的2/3以上或达全层。目前认为,从CIN发展到宫颈癌,是ー个较长时间(大约10年)连续发展的过程。这个连续发展的过程的截断至关重要,积极地治疗癌前病变,可以阻断病程,预防宫颈癌的发生。人类是HPV的唯一宿主,因而无法在体外和动物模型中进行培养扩增实验,这使得预防或治疗HPV感染的药物研发受到极大限制,造成在全世界范围内尚无疗效确切的预防和治疗HPV感染的药物,虽然国外已经研制了能够预防HPV16U8亚型感染的疫苗,但是其存在以下缺陷仅能用于9-24岁无性生活未感染HPV16、18的女性,并且对16、18亚型之外的其他亚型感染无预防和治疗作用。目前,对治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变疾病的药物,仍有待进ー步研究和改进。

发明内容
本发明是基于发明人的下列发现而完成的近几十年来,利用中医药治疗女性生殖道HPV感染取得了一定的成效,但使用的大多是多味中药组成的复方,成分复杂,目前仍没有成分简单、疗效确切的药物组合物应用 于临床来预防或治疗HPV感染以及其诱发的良性或恶性病变,特别是针对致湿疣的低危型HPV感染,以及致宫颈癌前病变及宫颈癌的高危型HPV感染。中药金荞麦微辛、涩、凉,归肺经,主要功效为清热解毒、排脓祛瘀,可用于肺痈吐脓、肺热喘咳、乳蛾肿痛等病症。现代研究表明,金荞麦具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗突变等药理作用。金荞麦具有抗癌作用的活性成分是ー类原花色素缩合性单宁物质的混合物(简称金荞麦c),其主要由表儿茶素及其ニ聚体组成,包含表儿茶素、原花色素B2、原花色素Cl等成分。中药秦皮苦、涩、寒,归肝、胆、大肠经,主要功效为清热燥湿、收涩止痢、止带、明目,可用于湿热泻痢、赤白带下、目赤肿痛、目生翳膜等症。现代研究表明,秦皮具有抗炎、抗病原微生物、抗肿瘤、抗氧化等药理作用。秦皮的主要有效成分为香豆素类化合物,包括秦皮甲素、秦皮こ素、秦皮苷和秦皮素等成分。目前国内外有关中药金荞麦与秦皮药物组合物在制备治疗HPV感染的药物中的应用未见报道。本发明g在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。本发明提供了ー种可以有效地用于治疗HPV感染的药物组合物及其用途,该药物组合物可用于制备治疗由HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌;由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的疣病,如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣;以及由HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病的药物。根据本发明的ー个方面,本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例,该药物组合物包括金荞麦提取物和秦皮提取物,所述金荞麦提取物为金荞麦的醇提取物,所述秦皮提取物是秦皮的醇提取物。利用该药物组合物,能够有效地治疗HPV感染引起的疾病,能够对HPV感染引起的宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌、女阴上皮内瘤变,扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖鋭湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣及皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病进行有效地治疗。另外,发明人发现,该药物组合物可以有效地抑制HPVE7基因(在本文中有时也简单称为“E7基因”)的表达。并且进一步发现利用该药物组合物还能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。此外,发明人惊奇地发现,该药物组合物能够治疗炎症。根据本发明的实施例,炎症的类型并不受特别限制。在本发明的实施例中,采用ニ甲苯处理的小鼠作为炎症的动物模型,证明了本发明药物组合物能够有效治疗炎症。ニ甲苯处理的小鼠是医药领域中公知认可的炎症的动物模型,关于其应用的具体实例,可以參见湖北中医学院学报,2005年第7卷第3期,31-33页(关于接触性皮炎);辽宁中医杂志,2010年第37卷增刊,第227-230页(关于宫颈炎);辽宁中医杂志,2009年第36卷第7期,第1193-1194页(关于肺炎)。广东药学院学报,2009年6月,25 (3),第295-298页(关于鼻炎),在此通过參照将这些文献并入本文。根据本发明的实施例,本发明的药物组合物包含金荞麦提取物和秦皮提取物作为活性成分,其中金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为O. 5 3 :1,优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I 2 :1,最优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I. 4 I。根据本发明的实施例,从金荞麦制备金荞麦提取物即金荞麦的醇提取物的方法,并不受特别限制。根据本发明的实施例,金荞麦提取物是通过下列步骤制备的将金荞麦进行加醇提取,以便获得金荞麦提取液;以及 将金荞麦提取液进行纯化、干燥,以便获得金荞麦提取物。根据本发明的实施例,将金荞麦进行加醇提取可以进一歩包括将金荞麦用8-12倍重量的30-60%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取2-3次,每次O. 5-2小吋,并合并提取液,以便获得金荞麦提取液,优选地,将金荞麦用8倍重量的50%こ醇,在 50-70摄氏度下回流提取3次,毎次I小吋,并合并提取液,以便获得金荞麦提取液。根据本发明的实施例,将金荞麦提取液进行纯化、干燥可以进一歩包括首先,将金荞麦提取液进行过滤,以便获得金荞麦提取液滤液。其次,利用非极性大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化,以便获得经过纯化的金荞麦提取液。根据本发明的具体示例,利用非极性大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化,可以进一歩包括将金荞麦提取液滤液上样至DlOl大孔吸附树脂;使用除杂洗脱剂进行除杂;以及使用洗脱溶剂进行洗脱,以便获得经过纯化的金荞麦提取液。其中,所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为O. 02-0. 20g/ml优选O. 08g/ml,所述金荞麦提取滤液的最大上样量为O. 2-1. Og/ml优选O. 48g/ml,其上样速度为O. 5-4柱体积/小时优选2柱体积/小时;除杂洗脱剂为水,其洗脱流速为3-6柱体积/小时优选4柱体积/小时;洗脱溶剂为60-90%こ醇优选70%こ醇,该洗脱溶剂的洗脱速度为1-3柱体积/小时优选2柱体积/小时。然后,将经过纯化的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥,以便获得金荞麦提取物,其中减压浓缩是在50-60摄氏度下进行的。根据本发明的实施例,从秦皮制备秦皮提取物即秦皮的醇提取物的方法,并不受特别限制。根据本发明的实施例,秦皮提取物是通过下列步骤制备的将秦皮进行加醇提取,以便获得秦皮提取液;以及将秦皮提取液进行纯化、干燥,以便获得秦皮提取物。根据本发明的实施例,将秦皮进行加醇提取可以进一歩包括将秦皮用8-14倍重量的70-100%乙醇,回流提取2-3次,每次O. 5-2小吋,并合并提取液,以便获得秦皮提取液,优选地,将秦皮用12倍重量的80%こ醇,在60摄氏度下回流提取3次,毎次I小吋,并合并提取液,以便获得秦皮提取液。根据本发明的实施例,将秦皮提取液进行纯化、干燥可以进一歩包括将秦皮提取液在60摄氏度下减压干燥,并用1-5倍重量蒸馏水优选3倍重量蒸馏水进行溶解;过滤除去不溶于水的杂质并回收滤液;以及将该滤液减压浓缩、真空干燥,以便获得秦皮提取物。根据本发明的实施例,本发明的药物组合物可以进一歩包括药学上可接受的辅料,从而可以使得药物组合物能够呈现适于给药的形式。优选本发明的药物组合物可以呈选自胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、□服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂以及喷雾剂的至少ー种的形式,根据本发明的具体示例,优选,药物组合物呈泡腾片、软膏、栓剂及凝胶剂的形式。由此,可以方便使得本发明的药物组合物适于为对象进行给药。进ー步,本发明的药物组合物,是以有效量的金荞麦和秦皮为原料,加入药学上可接受的辅料,按照常规エ艺,制成临床可接受的中药制剂,如制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒齐U、ロ服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂或喷雾剂。进ー步,本发明的药物组合物,是以有效量的金荞麦提取物和秦皮提取物为原料,加入药学上可接受的辅料,按照常规エ艺,制成临床可接受的中药制剂,如制成胶囊剂、丸齐U、片剂、颗粒剂、ロ服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂或喷雾剂。根据本发明的实施例,优选金荞麦提取物和秦皮提取物的重量比例为O. 5 3 :1,优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I 2 :1,最优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I. 4 :1。具体地,根据本发明实施例的药物组合物可以由以下方法制备 取金荞麦药材,利用8-12倍重量的30%_60%こ醇,在50_70°C下回流提取2_3次,毎次O. 5-2小时,必要时,可以在醇提取前对金荞麦药材进行粉碎。并合并提取液,然后于60°C下减压浓缩至无醇味,再添加O. 5-1. 5倍药材重量的水充分溶解,然后抽滤获得滤液,备用,接着利用非极性大孔吸附树脂将滤液分离纯化,其中金荞麦提取液滤液的上样浓度为O. 02-0. 20g/ml优选O. 08g/ml,所述金荞麦提取滤液的最大上样量为O. 2-1. Og/ml优选O. 48g/ml,上样速度为O. 5-4柱体积/小时,吸附4小时后,先用4_8个柱体积的水洗脱除杂,其洗脱流速为3-6柱体积/小时,再用6-10个柱体积的60%-90%こ醇洗脱,其洗脱流速为1-3柱体积/小时,然后回收こ醇洗脱部分,于50-60°C下减压浓缩干燥,然后真空干燥、粉碎,得金荞麦提取物;取秦皮药材,利用8-14倍重量的70%-100%こ醇,在60°C下回流提取2_3次,每次O. 5-2小时,必要时,可以在醇提取前对秦皮药材进行粉碎。并合并提取液,然后于60°C下减压回收、干燥,再添加1-5倍药材重量的的蒸馏水充分溶解,然后过滤去除不溶于水的杂质,以便获得滤液,将滤液减压浓缩干燥,然后真空干燥,得秦皮提取物;以及将金荞麦提取物和秦皮提取物混合,然后添加药学上可接受的辅料,按照常规方法制成胶囊剂、丸剤、片剂、颗粒剂、□服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂或喷雾剂。根据本发明的实施例,优选金荞麦提取物和秦皮提取物的重量比例为O. 5 3 :1,优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I 2 :1,最优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I. 4 :1。由此,发明人通过艰苦的实验,又对上述制备金荞麦提取物和秦皮提取物的方法进行了优化,获得了优化的制备金荞麦提取物和秦皮提取物的方法。根据本发明的ー些实施例,发明人以紫外分光光度法測定的金荞麦提取液中金荞麦c的含量为指标,采用正交试验方法,对影响将金荞麦进行加醇提取的因素进行分析,优化了金荞麦提取的エ艺。根据本发明的具体示例,发明人以紫外分光光度法測定的金荞麦中金荞麦c的含量为指标,采用单因素试验法,对影响利用非极性大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化的步骤的主要因素进行了分析,对金荞麦纯化的エ艺进行优化。根据本发明的一些实施例,发明人以高效液相色谱法测定的秦皮中秦皮甲素和秦皮こ素的总含量为指标,采用正交试验方法,对影响将秦皮进行加醇提取的エ艺进行分析,对秦皮提取的エ艺进行了优化。根据本发明的具体示例,发明人以高效液相色谱法测定的秦皮中秦皮甲素和秦皮こ素的总含量为指标,采用单因素试验法,对用于溶解并除杂的蒸馏水的重量进行分析,对秦皮纯化的エ艺进行了优化。本发明的制备金荞麦提取物和秦皮提取物的方法,即金荞麦、秦皮提取纯化工艺,简便易行,分析速度快,且节省成本。具体地,根据本发明的实施例,优选地,药物组合物可以由以下方法制备取金荞麦药材,利用8倍重量的50%こ醇,在60°C下回流提取3次,每次I小吋,必要时,可以在醇提取前对金荞麦药材进行粉碎。并合并提取液,然后于60°C下减压浓缩至无醇味,再添加I倍药材重量的水充分溶解,然后抽滤获得滤液,备用,接着利用DlOl大孔吸附树脂将滤液分离纯化,其中滤液的上样浓度选择每毫升滤液相当于O. OSg金荞麦提 取物,最大上样量为树脂吸附的每毫升滤液相当于O. 48g金荞麦提取物,上样速度为2柱体积/小吋,吸附4小时后,先用6个柱体积的水洗脱除杂,其洗脱流速为4柱体积/小时,再用8个柱体积的70%こ醇洗脱,其洗脱流速为2柱体积/小时,然后回收こ醇洗脱部分,于60°C下减压浓缩干燥,然后真空干燥、粉碎,得金荞麦提取物;取秦皮药材,利用12倍重量的80%こ醇,在60°C下回流提取3次,每次I小吋,必要时,可以在醇提取前对秦皮药材进行粉碎。并合并提取液,然后于60°C下减压回收、干燥,再添加3倍药材重量的的蒸馏水充分溶解,然后过滤去除不溶于水的杂质,以便获得滤液,将滤液减压浓缩干燥,然后真空干燥,得秦皮提取物;以及将金荞麦提取物和秦皮提取物混合,然后添加药学上可接受的辅料,按照常规方法制成胶囊剂、丸剤、片剂、颗粒剂、□服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂或喷雾剂。此外,根据本发明的实施例,制备药物组合物时,金荞麦与秦皮药材,即用于制备金荞麦和秦皮提取物的原材料的组成可以为金荞麦40-200重量份;秦皮20-100重量份。根据本发明的具体示例,优选金荞麦与秦皮药材的重量配比为金荞麦40重量份;秦皮20重量份,更优选地,金荞麦与秦皮药材的重量配比为金荞麦150重量份;秦皮67重量份,最优选地,金荞麦与秦皮药材的重量配比为金荞麦200重量份;秦皮100重量份。进ー步,根据本发明的实施例,通过将金荞麦和秦皮这两种中药以不同的比例进行组合,制备药物组合物进行药效学试验,发明人惊奇地发现,本发明的药物组合物对HPV感染有较显著的治疗作用,尤其是针对低危型HPV亚型感染引起的尖锐湿疣和高危型HPV亚型感染引起的宫颈癌前病变。此外,发明人惊奇地发现,该药物组合物能够治疗炎症,其中,部分药效学试验的结果如下根据本发明的实施例,利用金荞麦提取物、秦皮提取物和本发明的药物组合物分别对因ニ甲苯导致肿胀的小鼠耳廓进行给药实验,实验结果显示本发明的药物组合物对ニ甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有显著性抑制作用,表明药物组合物具有显著抗炎作用,并且药物组合物的抗炎作用明显高于単独使用金荞麦提取物或者秦皮提取物的效果,从而证明了金荞麦提取物与秦皮提取物进行组合,具有协同效应。根据本发明的实施例,以ΙΟΟμΜ的阿昔洛韦为阳性对照,生理盐水为空白对照,利用金荞麦提取物、秦皮提取物和本发明的药物组合物对HPV-DNA进行给药实验,由实验结果,发明人惊奇地发现,本发明的药物组合物对HPV-DNA有明显的破坏作用,并且无论是単独使用金荞麦提取物或者秦皮提取物,还是使用药物组合物,其抗HPV病毒的作用均要强于ΙΟΟμΜ的阿昔洛韦,但使用药物组合物比単独使用金荞麦提取物或者秦皮提取物对HPV病毒的杀灭作用更强,证明了金荞麦提取物与秦皮提取物进行组合,具有协同效应。根据本发明的实施例,以阿昔洛韦为阳性对照,利用本发明的药物组合物对HeLa细胞进行给药实验,由实验结果,发明人惊奇地发现,与阳性对照阿昔洛韦相比,药物组合物对HeLa细胞HPV病毒Ε7基因表达的抑制作用明显,表明本发明的药物组合物能够有效地治疗由HPV感染引起的疾病,如由HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌;由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的疣病,如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣;以及由HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病。其中,当药物组合物中金荞麦提取物和秦皮提取物的比例在1.4 :1时,其对HPV病毒Ε7基因的抑制作用最为明显,表明利用该配比的药物组合物对由HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌;由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的疣病,如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐 湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣;以及由HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病进行治疗,效果会最好。根据本发明的实施例,通过进行药物组合物对宫颈癌HeLa细胞的増殖抑制和诱导凋亡的试验,发明人发现,本发明的药物组合物能够显著抑制宫颈癌HeLa细胞的体外增殖,并且其对细胞的抑制效应随着培养时间的延长和药物组合物浓度的增加而增加,此外其诱导的细胞凋亡率也明显增高,并且其诱导细胞凋亡率也具有明显的时间和浓度依赖性。根据本发明的实施例,通过进行药物组合物对宫颈癌前病变(CIN)小鼠宫颈组织PCNA, EGFR和bcl_2表达的影响的试验,由试验结果,发明人惊奇地发现,本发明的药物组合物通过抑制增殖因子PCNA、EGFR和bcl-2的表达而发挥抑制宫颈上皮异型细胞增生的作用,与模型组相比具有显著差异,表明本发明的药物组合物能够用于治疗宫颈癌前病变。根据本发明的实施例,通过进行药物组合物制剂对家兔皮肤的刺激性作用的试验,发明人发现,低剂量和正常剂量多次连续给药对家兔的完整皮肤和破损皮肤均无刺激性,而高剂量组对家兔破损皮肤有中度刺激性,停药后刺激反应很快消失,表明本发明的药物组合物,在低剂量和正常剂量下对家兔皮肤无刺激性,且在高剂量下对家兔皮肤的刺激反应是轻微的,可逆的。根据本发明的实施例,为使本发明的药物组合物能够安全有效地用于治疗尖鋭湿疣和子宫颈癌前病变,发明人进行了金荞麦提取物、秦皮提取物和药物组合物的动物急性毒性试验,由试验结果,发明人发现,金荞麦提取物的半数致死量(LD5tl)为7. 85g/kg,秦皮提取物和药物组合物的最大ロ服给药剂量分别为10. 2g/kg和11. 3g/kg,由此可以推测秦皮提取物和药物组合物可能测不出半数致死量(LD5tl),表明本发明的药物组合物的急性毒性很小。由此,根据本发明的实施例,本发明的药物组合物可以用于抑制HPV E7基因的表达。此外,发明人惊奇地发现,本发明的药物组合物能够用于治疗炎症。根据本发明的ー些具体示例,本发明的药物组合物能够用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变。根据本发明的一个实施例,本发明的药物组合物能够用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变。根据本发明的另ー个实施例,本发明的药物组合物能够用于治疗或预防尖鋭湿疣。具体地,本发明的药物组合物能够用于由HPV感染引起的,如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌等宫颈疾病;由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣等疣病;以及由HPV感染引起的,如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等皮肤癌前病变。此外,发明人还发现,利用本发明实施例的药物组合物进行癌前病变和宫颈癌治疗时,前者的治疗效果优于后者。因而,优选将根据本发明实施例的药物组合物用于对宫颈癌前病变的治疗。根据本发明的又一方面,本发明提供了根据本发明实施例的药物组合物在制备药物中的用途,该药物可以用于抑制HPV E7基因的表达。此外,发明人惊奇地发现,本发明的药物能够用于治疗炎症。根据本发明的ー些具体示例,本发明的药物能够用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变。根据本发明的一个实施 例,本发明的药物能够用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变。根据本发明的另ー个实施例,本发明的药物能够用于治疗或预防尖鋭湿疣。具体地,本发明的药物能够用于由HPV感染引起的,如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌等宫颈疾病;由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣等疣病;以及由HPV感染引起的,如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等皮肤癌前病变。根据本发明的再一方面,本发明提供了ー种制备药物的方法。根据本发明的实施例,该方法包括下列步骤制备金荞麦提取物;制备秦皮提取物;以及将金荞麦提取物和秦皮提取物按照预定的重量比率进行混合,以便得到药物,其中,制备金荞麦提取物进ー步包括下列步骤将金荞麦进行加醇提取,以便获得金荞麦提取液;以及将金荞麦提取液进行纯化、干燥,以便获得金荞麦提取物。制备秦皮提取物进ー步包括下列步骤将秦皮进行加醇提取,以便获得秦皮提取液;以及将秦皮提取液进行纯化、干燥,以便获得秦皮提取物。利用上述制备药物的方法所得到的药物,能够有效地预防尖鋭湿疣、宫颈癌及宫颈癌前病变,能够对尖鋭湿疣、宫颈癌以及宫颈癌前病变进行有效地治疗。另外,发明人发现,利用该药物还能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化,并且进一步发现,该药物可以有效地抑制E7基因的表达。此外,发明人惊奇地发现,该药物能够治疗炎症。根据本发明的实施例,本发明的药物中金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为
O.5 3 :1,优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I 2 :1,最优选金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为I. 4 :1。根据本发明的实施例,将金荞麦进行加醇提取可以进一歩包括将金荞麦用8-12倍重量的30-60%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取2-3次,每次O. 5-2小吋,并合并提取液,以便获得金荞麦提取液,优选地,将金荞麦用8倍重量的50%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取3次,毎次I小吋,并合并提取液,以便获得金荞麦提取液。根据本发明的实施例,将金荞麦提取液进行纯化、干燥可以进一歩包括首先,将金荞麦提取液进行过滤,以便获得金荞麦提取液滤液。
其次,利用非极性大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化,以便获得经过纯化的金荞麦提取液。根据本发明的具体示例,利用非极性大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化,可以进一歩包括将金荞麦提取液滤液上样至DlOl大孔吸附树脂;使用除杂洗脱剂进行除杂;以及使用洗脱溶剂进行洗脱,以便获得经过纯化的金荞麦提取液。其中,该所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为O. 02-0. 20g/ml优选O. 08g/ml,所述金荞麦提取滤液的最大上样量为O. 2-1. Og/ml优选O. 48g/ml,其上样速度为O. 5-4柱体积/小时优选2柱体积/小时;除杂洗脱剂为水,其洗脱流速为3-6柱体积/小时优选4柱体积/小时;洗脱溶剂为60-90%こ醇优选70%こ醇,该洗脱溶剂的洗脱速度为1-3柱体积/小时优选2柱体积/小吋。然后,将经过纯化的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥,以便获得金荞麦提取物,其中减压浓缩是在50-60摄氏度下进行的。根据本发明的实施例,将秦皮进行加醇提取可以进一歩包括将秦皮用8-14倍 重量的70-100%こ醇,回流提取2-3次,每次O. 5-2小吋,并合并提取液,以便获得秦皮提取液,优选地,将秦皮用12倍重量的80%こ醇,在60摄氏度下回流提取3次,每次I小吋,并合并提取液,以便获得秦皮提取液。根据本发明的实施例,将秦皮提取液进行纯化、干燥可以进一歩包括将秦皮提取液在60摄氏度下减压干燥,并用1-5倍重量蒸馏水优选3倍重量蒸馏水进行溶解;过滤除去不溶于水的杂质并回收滤液;以及将该滤液减压浓缩、真空干燥,以便获得秦皮提取物。根据本发明的实施例,本发明的药物可以进一歩包括药学上可接受的辅料,从而可以使得药物能够呈现适于给药的形式。优选本发明的药物可以呈选自胶囊剂、丸剤、片齐U、颗粒剂、□服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂以及喷雾剂的至少ー种的形式,根据本发明的具体示例,优选,使制备获得的药物呈泡腾片、软膏、栓剂及凝胶剂的形式。由此,可以方便使得根据本发明实施例的制备药物的方法制备的药物适于为对象进行给药。根据本发明的实施例,本发明制备的药物可以用于抑制HPV E7基因的表达。此外,发明人惊奇地发现,本发明的药物能够用于治疗炎症。根据本发明的ー些具体示例,本发明的药物能够用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变。根据本发明的一个实施例,本发明的药物能够用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变。根据本发明的另ー个实施例,本发明的药物能够用于治疗或预防尖鋭湿疣。具体地,本发明的药物能够用于由HPV感染引起的,如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌等宫颈疾病;由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变;以及由HPV感染引起的如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣等疣病;以及由HPV感染引起的,如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等皮肤癌前病变。根据本发明的又一方面,本发明还提供了ー种药物,其是通过上述制备药物的方法制备的。如前所述,利用该药物,能够有效地预防尖鋭湿疣、宫颈癌及宫颈癌前病变,能够对尖锐湿疣、宫颈癌以及宫颈癌前病变进行有效地治疗。另外,发明人发现,该药物还可以有效地抑制E7基因的表达。此外,发明人惊奇地发现,该药物能够治疗炎症。根据本发明的另一方面,本发明还提供了一种对根据本发明实施例的药物组合物或药物进行检测的方法。根据本发明的实施例,该方法包括确定药物组合物或药物中的有效成分含量;以及将该有效成分含量与预定的阈值进行比较。在本文中所使用的术语“有效成分”是指这样ー种化合物,该化合物的含量可以有效地反映药物组合物或者药物的有效性。根据本发明的一个实施例,有效成分为选自表儿茶素、秦皮甲素和秦皮こ素的至少ー种。利用根据本发明实施例的对本发明的药物组合物或药物进行检测的方法,能够有效地对药物组合物或药物进行检测,并且检测灵敏度、准确性高,稳定性好。根据本发明的实施例,在该方法中,针对金荞麦提取物,其有效成分为表儿茶素,阈值为至少O. 43mg,即针对金荞麦,药物组合物或者药物含金荞麦以表儿茶素计,每Ig不得少于O. 43mg。根据本发明的实施例,在该方法中,针对秦皮提取物,其有效成分为秦皮甲素和秦皮こ素,阈值为至少6. 5mg,即针对秦皮,药物组合物或者药物含秦皮以秦皮甲素和秦皮こ素计,姆Ig不得少于6. 5mg。
根据本发明的实施例,在该方法中,当特征化合物为表儿茶素时,确定药物组合物或药物中的特征化合物含量可以进一歩包括将药物组合物或药物用由氯仿、甲醇和冰醋酸组成的提取剂进行超声提取;将提取液挥发干燥,并用甲醇溶解残渣,以便获得含有表儿茶素的甲醇溶液;以及通过色谱分析,确定该含有表儿茶素的甲醇溶液中的表儿茶素含量。由此,能够方便有效地确定药物组合物或药物中的表儿茶素含量。根据本发明的实施例,在该方法中,当有效成分为秦皮甲素和秦皮こ素吋,确定药物组合物或药物中的有效成分含量可以进一歩包括将药物组合物或药物用由氯仿和甲醇组成的提取剂进行超声提取;将提取液挥发干燥,并用甲醇溶解残渣,以便获得含有秦皮甲素和秦皮こ素的甲醇溶液;以及通过色谱分析,确定含有秦皮甲素和秦皮こ素的甲醇溶液中秦皮甲素和秦皮こ素的总含量。由此,能够方便有效地确定药物组合物或药物中的秦皮甲素和秦皮こ素的总含量。根据本发明的具体实施例,对本发明的药物组合物或药物进行检测的方法可以包括如下(I)取药物组合物制剂O. 2g,添加IOml体积比为1:5的氯仿-甲醇溶液,进行超声提取45分钟,其中功率250W,超声频率33KHz,然后过滤,将滤液蒸干,残渣加Iml甲醇溶解,作为供试品溶液,另取表儿茶素作为对照品,添加甲醇制成每Iml含O. Img表儿茶素的对照品溶液。采用薄层色谱法进行试验,吸取供试品溶液、对照品溶液各5 μ 1,分别点于同ー硅胶G薄层板上,以体积比为13 4 :2. 5的三氯甲烷-甲醇-こ酸作为展开剂进行展开,然后将硅胶G薄层板取出,晾干,喷以5%的香草醛-浓硫酸显色剂,于105°C下加热显色至斑点清晰,在供试品色谱中,其与对照品色谱相应的位置上,会显现出相同顔色的斑点;(2)取药物组合制剂O. 2g,添加IOml甲醇,进行超声提取45分钟,其中功率250W,超声频率33KHz,然后过滤,然后过滤,将滤液蒸干,残渣加Iml甲醇溶解,作为供试品溶液。另取秦皮甲素和秦皮こ素作为对照品,添加甲醇分别制成每Iml各含Img秦皮甲素和秦皮こ素的溶液,然后混合,作为对照品溶液。采用薄层色谱法进行试验,吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ 1,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为4 1 :0. 2的石油醚-こ酸こ酷-冰醋酸为展开剂进行展开,然后将硅胶G薄层板取出,晾干,置于紫外灯365nm波长下进行检视,在供试品色谱中,其与对照品色谱相应的位置上,会显现出相同顔色的斑点或荧光斑点;( 3 )表j L茶素的含量测定首先,以表儿茶素作为对照品,按照下列步骤制备对照品溶液精密称取适量以五氧化ニ磷为干燥剂减压干燥24小时的表儿茶素作为对照品,添加甲醇制成每Iml含O. 5mg表儿茶素的溶液,作为对照品溶液;按照下列步骤制备供试品溶液称取药物组合物制剂样品约O. 2g,置于具塞锥形瓶中,添加25ml体积比为1:5的氯仿-甲醇溶液和O. 5ml冰醋酸,然后用塞将其瓶ロ密封,称定重量,进行超声提取60min,其中功率250W,超声频率33KHz,然后放至冷却,用甲醇补足至上次称定的重量,然后进行过滤,取5ml滤液,使其挥发干燥,然后将残渣添加适量甲醇溶解,并转移至IOml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,过O. 22 μ m微孔滤膜,取滤液,作为供试品溶液。其次,对高效液相色谱仪的色谱条件与系统适用性进行调节5 μ m,250mmX4. 6mm, Dikma C18色谱柱,以体积比为13:87的こ腈-O. 1%柠檬酸水溶液作为流动 相,流速为lml/min,检测波长为279nm,柱温为25°C,以表儿茶素计算理论塔板数,其应不低于5000,其中表儿茶素峰与相近峰的分离度R大于I. 5 ;然后,采用高效液相色谱法进行表儿茶素的含量測定,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1,注入高效液相色谱仪,測定,计算,即得出对照品溶液和供试品溶液中表儿茶素的含量,其中,药物组合物每单位制剂含金荞麦量以表儿茶素(C15H14O6)计,不得少于O. 43mg,即药物组合物中含金荞麦以表儿茶素(C15H14O6)计,每Ig不得少于O. 43mg。。(4)秦皮甲素、秦皮こ素的含量測定首先,以秦皮甲素和秦皮こ素作为对照品,按照下列步骤制备对照品溶液精密称取适量以五氧化ニ磷为干燥剂减压干燥24小时的秦皮甲素和秦皮こ素作为对照品,添加甲醇制成每Iml含秦皮甲素O. lmg、秦皮こ素60 μ g的混合溶液,作为对照品溶液;按照下列步骤制备对照品溶液称取药物组合物制剂样品约O. 2g,置于具塞三角锥形瓶中,添加25ml甲醇,然后用塞将其瓶ロ密封,称定重量,进行超声提取60min,其中功率250W,超声频率33KHz,然后放至冷却,用甲醇补足至上次称定的重量,然后进行过滤,取5ml滤液,使其挥发干燥,然后将残渣添加适量甲醇溶解,并转移至IOml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,过O. 22 μ m微孔滤膜,取滤液,作为供试品溶液。其次,对高效液相色谱仪的色谱条件与系统适用性进行调节5 μ m,250mmX4. 6mm,Dikma C18色谱柱,以体积比为20:80的甲醇-O. 1%こ酸水溶液作为流动相,流速为lml/min,检测波长为334nm,柱温为25°C,以秦皮こ素计算理论塔板数,其应不低于5000 ;然后,采用高效液相色谱法进行秦皮甲素和秦皮こ素的含量測定,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1,注入高效液相色谱仪,測定,计算,即得出对照品溶液和供试品溶液中秦皮甲素和秦皮こ素的含量,其中,药物组合物制剂含秦皮以秦皮甲素(C15H16O9)和秦皮こ素(C9H6O4)的总量计,姆Ig不得少于6. 5mg0由此,对本发明的药物组合物或药物进行鉴别方法,采用薄层色谱法,以表儿茶素、秦皮甲素和秦皮こ素为对照品,可行性好,简单快捷;根据本发明实施例的对药物组合物或药物进行鉴定和检测的方法,采用高效液相色谱分析方法作为检测手段,以表儿茶素、秦皮甲素、秦皮こ素作为检测指标,能够有效地对本发明的药物组合物或药物进行检测,并且检测灵敏度高,准确性高,稳定性好。需要说明的是,本发明的药物组合物及其用途是本申请的发明人经过艰苦的创造性劳动和优化工作才完成的。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。


本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中图I :显示了根据本发明一个实施例的利用大孔树脂对金荞麦提取液进行纯化 吋,大孔树脂吸附金荞麦c的样品泄露曲线图。
具体实施例方式下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例在附图中示出,其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过參考附图描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例I :金荞麦提取物制备エ艺优化本实施例通过大量的实验,对制备金荞麦提取物的方法,即金荞麦提取物制备エ艺中的提取エ艺和纯化工艺进行了研究,筛选出优选的提取エ艺和纯化工艺,从而完成了对金荞麦提取物制备エ艺的优化。一、金荞麦提取エ艺优化采用正交试验方法,以こ醇浓度(A因素)、料液比(B因素)、提取次数(C因素)和提取时间(D因素)作为金荞麦提取エ艺优化试验的试验因素,每个因素取三个水平,編制金荞麦提取エ艺优化实验的因素水平表,见表1,然后基于表1,并根据四因素三水平正交试验表进行试验设计,得到实验设计表,见表2,然后根据实验设计表进行实验。具体地,将各处理均称取50g金荞麦,然后分别根据实验设计进行金荞麦提取实验,实验基本流程为将金荞麦用B料液比的A浓度的こ醇,在60摄氏度下进行C次的回流提取,每次提取时间为D小时,然后合并提取液,并将提取液过滤,合并滤液,于60°C下浓缩,真空干燥,以便获得初步提取物,然后将其称重;以表儿茶素为对照品,采用紫外分光光度法測定各处理所得的初步提取物中金荞麦c的含量,然后计算金荞麦c的提取率,以金荞麦c的提取率为指标,比较试验设计各处理的实验結果。其中,标准曲线的绘制按以下步骤进行精密称取5. 13mg干燥至恒重的表儿茶素对照品,置于IOml量瓶中,配制成O. 513mg/ml的储备液;分别精密吸取O. 1,0. 2,0. 4、I. O、I. 5,2. Oml上述储备液,置于6个IOml容量瓶中,并用50%的こ醇稀释至刻度,然后于280nm下測定吸光度;根据吸光度绘制标准曲线。可知,表儿茶素在 5. 13-102. 6mg/L 内线性关系良好(y=0. 0062x+0. 1729,R2=O. 9991)。表I金荞麦提取エ艺优化实验的因素水平表
^水平 |A乙醇浓度(%) B料液比 C提取次数 D提取时间(h)
I150] 1:8] I] I
权利要求
1.ー种药物组合物,其特征在于,包括金荞麦提取物和秦皮提取物, 其中,所述金荞麦提取物为金荞麦的醇提取物,所述秦皮提取物是秦皮的醇提取物, 任选地,所述金荞麦提取物是通过下列步骤制备的 将金荞麦进行加醇提取,以便获得金荞麦提取液;以及 将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥,以便获得所述金荞麦提取物, 任选地,所述秦皮提取物是通过下列步骤制备的 将秦皮进行加醇提取,以便获得秦皮提取液;以及 将所述秦皮提取液进行纯化、干燥,以便获得所述秦皮提取物, 任选地,根据权利要求I所述的药物组合物,其特征在于,所述金荞麦提取物与所述秦皮提取物的重量比例为O. 5-3 1, 任选地,所述金荞麦提取物与所述秦皮提取物的重量比例为1-2 1, 任选地,所述金荞麦提取物与所述秦皮提取物的重量比例为1.4 1, 任选地,将金荞麦进行加醇提取进ー步包括 将所述金荞麦用8-12倍重量的30-60%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取2_3次,每次O.5-2小吋,并合并提取液,以便获得所述金荞麦提取液, 任选地,将金荞麦进行加醇提取进ー步包括 将所述金荞麦用8倍重量的50%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取3次,每次I小吋,并合并提取液,以便获得所述金荞麦提取液, 任选地,将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥进ー步包括 将所述金荞麦提取液进行过滤,以便获得金荞麦提取液滤液; 利用非极性大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化,以便获得经过纯化的金荞麦提取液;以及 将所述经过纯化的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥,所述减压浓缩是在50-60摄氏度下进行的, 任选地,利用非极性大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化进一歩包括 将所述金荞麦提取液滤液上样至DlOl大孔吸附树脂; 使用除杂洗脱剂进行除杂;以及 使用洗脱溶剂进行洗脱,以便获得所述经过纯化的金荞麦提取液, 其中, 所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为O. 02-0. 20g/ml优选O. 08g/ml,所述金荞麦提取滤液的最大上样量为O. 2-1. Og/ml优选O. 48g/ml,所述金荞麦提取液滤液的上样速度为O.5-4柱体积/小时优选2柱体积/小时; 所述除杂洗脱剂为水,所述洗脱剂的洗脱流速为3-6柱体积/小时优选4柱体积/小时;以及 所述洗脱溶剂为60-90%こ醇优选70%こ醇,所述洗脱溶剂的洗脱速度为1-3柱体积/小时优选2柱体积/小时。
2.根据权利要求I所述的药物组合物,其特征在干, 将秦皮进行加醇提取进一步包括 将所述秦皮用8-14倍重量的70-100%こ醇,回流提取2-3次,每次O. 5-2小吋,并合并提取液,以便获得所述秦皮提取液, 任选地,将秦皮进行加醇提取进ー步包括 将所述秦皮用12倍重量的80%こ醇,在60摄氏度下回流提取3次,每次I小时,并合并提取液,以便获得所述秦皮提取液, 任选地,将所述秦皮提取液进行纯化、干燥进ー步包括 将所述秦皮提取液在60摄氏度下减压干燥,并用1-5倍重量蒸馏水优选3倍重量蒸馏水进行溶解; 过滤除去不溶于水的杂质并回收滤液;以及 将所述滤液减压浓缩、真空干燥,以便获得所述秦皮提取物, 任选地,所述药物组合物进ー步包括药学上可接受的辅料, 任选地,所述药物组合物呈选自胶囊剂、丸剤、片剂、颗粒剂、ロ服液体、内服膏剂、栓齐U、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂以及喷雾剂的至少ー种的形式, 任选地,所述片剂为泡腾片, 任选地,所述药物组合物呈软膏的形式, 任选地,所述药物组合物呈栓剂的形式, 任选地,所述药物组合物呈凝胶剂的形式, 任选地,所述药物组合物用于抑制HPV E7基因的表达, 任选地,所述药物组合物用于治疗炎症, 任选地,所述药物组合物用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变, 任选地,所述药物组合物用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变, 任选地,所述药物组合物用于治疗或预防尖鋭湿疣。
3.权利要求I或2所述的药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于抑制HPVE7基因的表达, 任选地,所述药物用于治疗炎症, 任选地,所述药物用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变, 任选地,所述药物用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变, 任选地,所述药物用于治疗或预防尖鋭湿疣。
4.ー种制备药物的方法,其特征在于,包括下列步骤 制备金荞麦提取物,所述金荞麦提取物是金荞麦的醇提取物; 制备秦皮提取物,所述秦皮提取物是秦皮的醇提取物;以及 将所述金荞麦提取物和所述秦皮提取物按照预定的重量比率进行混合,以便得到所述药物, 其中, 任选地,所述制备金荞麦提取物进ー步包括下列步骤 将金荞麦进行加醇提取,以便获得金荞麦提取液;以及 将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥,以便获得所述金荞麦提取物, 任选地,所述制备秦皮提取物进ー步包括下列步骤将秦皮进行加醇提取,以便获得秦皮提取液;以及 将所述秦皮提取液进行纯化、干燥,以便获得所述秦皮提取物, 任选地,所述金荞麦提取物与所述秦皮提取物的重量比例为O. 5-3 1, 任选地,所述金荞麦提取物与所述秦皮提取物的重量比例为1-2 1, 任选地,所述金荞麦提取物与所述秦皮提取物的重量比例为1.4 1, 任选地,将金荞麦进行加醇提取进ー步包括 将所述金荞麦用8-12倍重量的30-60%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取2_3次,每次O.5-2小时,并合并提取液,以便获得所述金荞麦提取液,任选地,将金荞麦进行加醇提取进ー步包括 将所述金荞麦用8倍重量的50%こ醇,在50-70摄氏度下回流提取3次,每次I小吋,并合并提取液,以便获得所述金荞麦提取液, 任选地,将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥进ー步包括 将所述金荞麦提取液进行过滤,以便获得金荞麦提取液滤液; 利用非极性大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化,以便获得经过纯化的金荞麦提取液;以及 将所述经过纯化的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥,所述减压浓缩是在50-60摄氏度下进行的, 任选地,利用非极性大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化进一歩包括 将所述金荞麦提取物滤液上样至DlOl大孔吸附树脂; 使用除杂洗脱剂进行除杂;以及 使用洗脱溶剂进行洗脱,以便获得所述经过纯化的金荞麦提取液, 其中, 所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为O. 02-0. 20g/ml优选O. 08g/ml,所述金荞麦提取滤液的最大上样量为O. 2-1. Og/ml优选O. 48g/ml,所述金荞麦提取液滤液的上样速度为O.5-4柱体积/小时优选2柱体积/小时; 所述除杂洗脱剂为水,所述洗脱剂的洗脱流速为3-6柱体积/小时优选4柱体积/小吋;以及 所述洗脱溶剂为60-90%こ醇优选70%こ醇,所述洗脱溶剂的洗脱速度为1-3柱体积/小时优选2柱体积/小时。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在干, 将秦皮进行加醇提取进一步包括 将所述秦皮用8-14倍重量的70-100%こ醇,回流提取2-3次,每次O. 5-2小吋,并合并提取液,以便获得所述秦皮提取液, 任选地,将秦皮进行加醇提取进ー步包括 将所述秦皮用12倍重量的80%こ醇,在60摄氏度下回流提取3次,每次I小时,并合并提取液,以便获得所述秦皮提取液, 任选地,将所述秦皮提取液进行纯化、干燥进ー步包括 将所述秦皮提取液在60摄氏度下减压干燥,并用1-5倍重量蒸馏水优选3倍重量蒸馏水进行溶解;过滤除去不溶于水的杂质并回收滤液;以及 将所述滤液减压浓缩、真空干燥,以便获得所述秦皮提取物, 任选地,所述预定的金荞麦提取物与秦皮提取物的重量比例为0.5-3 1,优选为1-2 1,更优选为1.4 : 1, 任选地,进ー步包括将所述药物制成选自胶囊剂、丸剤、片剂、颗粒剂、ロ服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、外用洗剂、搽剂、气雾剂以及喷雾剂的至少ー种的形式, 任选地,所述片剂为泡腾片, 任选地,所述药物呈软膏的形式, 任选地,所述药物呈栓剂的形式, 任选地,所述药物呈凝胶剂的形式, 任选地,所述药物用于抑制HPV E7基因的表达, 任选地,所述药物用于治疗炎症, 任选地,所述药物用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变, 任选地,所述药物用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变, 任选地,所述药物用于治疗或预防尖鋭湿疣。
6.ー种药物,其是根据权利要求4或5所述的方法制备的。
7.一种对权利要求I或2所述的药物组合物或权利要求6所述的药物进行检测的方法,其特征在于,包括 确定所述药物组合物或药物中有效成分的含量;以及 将所述有效成分含量与预定的阈值进行比较,其中, 所述有效成分为选自表儿茶素、秦皮甲素和秦皮こ素的至少ー种, 任选地,针对金荞麦提取物,所述有效成分为表儿茶素,所述阈值为至少O. 43mg, 任选地,针对秦皮提取物,所述有效成分为秦皮甲素和秦皮こ素,所述阈值为至少D. omg, 任选地,当所述有效成分为表儿茶素时,确定所述药物组合物或药物中的有效成分含量进ー步包括 将所述药物组合物或所述药物用由氯仿、甲醇和冰醋酸组成的提取剂进行超声提取; 将提取液挥发干燥,并用甲醇溶解残渣,以便获得含有表儿茶素的甲醇溶液;以及 通过高效液相色谱分析,确定所述含有表儿茶素的甲醇溶液中的表儿茶素含量, 任选地,当所述有效成分为秦皮甲素和秦皮こ素时,确定所述药物组合物或药物中的有效成分含量进ー步包括 将所述药物组合物或所述药物用由甲醇进行超声提取; 将提取液挥发干燥,并用甲醇溶解残渣,以便获得含有秦皮甲素和秦皮こ素的甲醇溶液;以及 通过高效液相色谱分析,确定所述含有秦皮甲素和秦皮こ素的甲醇溶液中秦皮甲素和秦皮こ素的总含量。
全文摘要
本发明涉及药物组合物及其用途。其中,该药物组合物包含金荞麦提取物和秦皮提取物,其中,该金荞麦提取物是通过下列步骤制备的将金荞麦进行加醇提取,以便获得金荞麦提取液;以及将金荞麦提取液进行纯化、干燥,以便获得金荞麦提取物,该秦皮提取物是通过下列步骤制备的将秦皮进行加醇提取,以便获得秦皮提取液;以及将秦皮提取液进行纯化、干燥,以便获得秦皮提取物。本发明的药物组合物,能够用于治疗或预防包括由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变。
文档编号G01N30/06GK102688300SQ20121008820
公开日2012年9月26日 申请日期2012年3月29日 优先权日2012年3月29日
发明者张思佳, 汪建, 牟峰, 陈顺钦, 黄伟, 黄璐 申请人:武汉华大基因科技有限公司, 武汉华大药业有限公司, 深圳华大基因科技有限公司

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