用于检测潜血的方法和装置的制作方法
专利名称：用于检测潜血的方法和装置的制作方法
技术领域：
本发明总体涉及对来自消化(GI)道的样品的潜血的检测。尤其是，本发明提供一 种用于检测转铁蛋白的装置和方法，或备选地，使用GI样品同时检测血红蛋白和转铁蛋白 的装置和方法。本发明的方法为GI出血的诊断提供基础，并为来自上GI道和下GI道的出 血的鉴别诊断提供基础。
背景技术：
大便潜血(FOB)对于监控来自消化(GI)系统的出血是非常好的指示物。由于一 些大肠息肉可能需要几年的转变成结直肠癌，检测出血的大肠息肉是一种有效的在早期甄 别结直肠癌的方法。为50岁或更年长的人进行甄别在粪便样品中的潜血的过程，已经将结 直肠癌的发生率降低了 20%，将死亡率降低了 30%。当前可用的FOB测试包括检测在粪便样品中的血红蛋白代谢物的化学测试。该测 试使用可氧化的底物(例如愈创树脂)，该底物在有过氧化物和血红蛋白出现时产生有色 产物。由于大多数动物的血红素分子、植物成分和常见的维生素也能催化过氧化氢反应，所 以饮食控制对于这种类型的化学测试的特异性是关键的。严格的饮食控制产生了严重的患 者的遵守问题。平均地说，低于10%的遵守率并不是罕见的。此外，化学测试一般具有有限 的灵敏度。例如，使用愈创树脂作为底物的FOB测试的测试灵敏度为50 μ g/ml，而改进的版 本的测试灵敏度为20 μ g/ml。已开发了一种对血红蛋白的三明治免疫测定，与化学测试相比，其提供更高的测 试灵敏度及特异性。对于这种免疫测定，对饮食控制的需要也可以不用。血红蛋白是易分解的蛋白；它在人的GI系统中会迅速降解。在收集了粪便样品之 后，在运输和储存期间，血红蛋白也容易遭受降解。所有这些样品的降解问题都会影响血红 蛋白化验的测试精度。转铁蛋白是另一种用于检测大便潜血的生物标记。在正常人的血液中，转铁蛋白 和血红蛋白的含量分别是3mg/ml和150mg/ml。另一方面，在粪便样品中血红蛋白对转铁 蛋白的比大约是5，这远低于在血液中的比(大约是50)。这一观测数据表明在GI道中转 铁蛋白大约比血红蛋白要稳定10倍以上。已经有报告提出特定疾病可以影响转铁蛋白在 血液和粪便样品中的水平，影响的程度到了仅基于转铁蛋白的FOB测试可能产生假阴性结 果。用于检测血红蛋白和转铁蛋白两者的组合测试可以提高测试灵敏度，并且不牺牲测试 的特异性。发展FOB化验的另一个挑战是目前在市场上很少有自动分析仪能处理粪便样品。 因此期望和需要一种快速的现场FOB测试。
发明内容
本发明提供一种免疫测定方法和装置，其能够检测来自整个GI系统的出血，并且 能够支持对上GI出血和下GI出血的鉴别诊断。本发明的免疫测定涉及使用GI样品，对转铁蛋白的单独测定，或者备选地，对血红蛋白和转铁蛋白的同时检测。在一个方面中，本发明提供一种检测上GI道样品中的转铁蛋白的方法，以帮助诊 断来自上GI道的出血。上GI样品包括呕吐物或者从例如胃收集到的物质。在另一方面中，本发明提供一种同时检测粪便样品中的血红蛋白和转铁蛋白的方 法，以帮助诊断来自GI道的出血，以及区分在上GI道的出血和在下GI道的出血。在一个实施例中，本发明提供一种用于检测大便潜血的方法，其检测在粪便样品 中的转铁蛋白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与各自的预定值相比 较，从而确定潜血是否出现在所述样品中。在特定实施例中，当所述转铁蛋白和血红蛋白两者测试都是阳性时，或者换句话 说当在粪便样品中的转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预定值并且在样品中的血红蛋白的量 也高于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自下GI道。在另一实施例中，当转铁蛋白测试为阳性而血红蛋白测试为阴性时，换句话说，当 样品中的转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预定值而样品中的血红蛋白的量低于血红蛋白的 预定值时，检测结果表示出血来自上GI道。在又一实施例中，如果使用粪便样品而转铁蛋白和血红蛋白两者的测试均为阴 性，这种结果表示在整个GI道中无出血。根据本发明，可以通过多种化验来实现对转铁蛋白和血红蛋白的检测。在一个实 施例中，通过三明治免疫测定实现该检测，所述三明治免疫测定使用互补的抗-转铁蛋白 抗体对和互补的抗_血红蛋白抗体对。在特定实施例中，使用横向流动三明治免疫测定装置实现对转铁蛋白和血红蛋白 的检测。在一个实施例中，适于用在本发明中的横向流动装置包括测试条。所述测试条包 含固体支撑件、测试膜放置在该支撑件的顶部上。在测试膜的上表面是固定反应物的区域， 包括包含两个单独的位置的测试区，一个位置固定有抗_转铁蛋白抗体，另一个位置固定 有抗-血红蛋白抗体；及控制位置，控制抗体(例如山羊抗_鼠抗体)固定在该控制位置。 另外，测试条包含样品垫、结合垫以及吸收垫。样品垫放置成与结合垫的上游接触，而结合 垫又放置成与测试膜的端部接触。吸收垫放置在测试膜的另一端部的顶部。结合垫包含标 记抗_转铁蛋白抗体和标记抗_血红蛋白抗体，并被放置在测试区的上游。优选地，测试膜 由硝酸纤维素制成；所述标记抗_转铁蛋白抗体和所述标记抗_血红蛋白抗体均是结合到 金颗粒的抗体。在另一实施例中，适于用在本发明中的横向流动装置包含两个测试条，一个用于 测试转铁蛋白而另一个用于测试血红蛋白。在另一个方面，本发明提供一种横向流动免疫测定装置，用于对样品中的转铁蛋 白和血红蛋白同时进行检测。所述样品可以是GI样品或者体液的样品。
图1为粪便样品收集装置。该装置包含小螺帽、具有棒的大些的帽以及具有存储 缓冲液的小瓶。使用者将拧开大些的帽，用来自小瓶中的刷子，在不同位置刺几次粪便样 品；将刷子插回到具有存储缓冲液的小瓶并拧紧螺丝。收集在刷子上的粪便样品然后将被再悬浮到存储缓冲液中并准备用于测试。当测试操作者收到小瓶时，该操作者仅需要拧开 小帽，并将样品溶液直接挤到测试装置上。图2为用于转铁蛋白和血红蛋白的组合三明治免疫测定的测试膜的顶视图。测试 条包括吸收垫(1)、硝酸纤维素膜(2)、控制线(3)、分别针对转铁蛋白和血红蛋白的两个测 试线⑷；表示最大液体水平的标线⑶以及样品垫(6)。图3示出同一测试条的横截面，其中物品7是塑料背衬，物品5是在标记物 (label)下面的金抗体结合(conjugate)垫。图4示出在粪便样品中出现血时的阳性结果的三种可能的形式。图5示出组合测试的阴性结果。图6示出当缺乏有色的控制线时，测试结果是无效的。
具体实施例方式本发明提供一种三明治免疫测定方法和装置，其能检测来自整个GI系统的出血， 并且能够支持对上GI出血和下GI出血的鉴别诊断。该免疫测定包括对转铁蛋白的单独的 检测，或备选地，对转铁蛋白和血红蛋白的同时检测。本发明的免疫测定能够利用被怀疑包 含潜血的GI样品以及体液样品。本发明至少部分地基于对作为潜血标记转铁蛋白和血红蛋白之间在稳定性上的 差异的认识。在大多数上GI出血情况中，血红蛋白被来自胃、肠和细菌的胃酸和蛋白酶彻 底破坏。另一方面，转铁蛋白则能够通过GI道的通路而存活下来。在导致本发明的测试中， 已经发现在临床诊断为遭受上GI紊乱的患者中，在粪便样品以及吐出物和从上GI收集的 液体样品中，转铁蛋白测试为阳性而血红蛋白测试为阴性。另外，已经发现在粪便样品中血 红蛋白测试为阳性且转铁蛋白测试也为阳性的情况中，患者临床诊断为遭受下GI紊乱。因此，在一个实施例中，本发明提供一种检测在上GI样品中的转铁蛋白的方法， 以帮助诊断来自上GI道的出血。在另一实施例中，本发明提供一种同时检测在粪便样品中 的血红蛋白和转铁蛋白的方法，以帮助诊断来自整个GI道的出血，以及区分上GI道中的出 血和下GI道中的出血。在又一实施例中，提供测试装置用于执行本发明的方法。术语“上GI道”指的是GI道的上部并包括口、咽、食管、胃和十二指肠。另一方 面，“下GI道”指的是GI道的下部并由肠、结肠、直肠和肛门组成。尽管可以应用至对来自 GI道的任何部分的出血的诊断，当前提出的要求保护的方法对来自上GI道的出血的诊断 是特别有用的，而目前没有能用于临床环境中的可靠的基于试纸(strip)的粪便测试。术语“GI样品”指的是从GI道排出或分泌的固体或液体物质的样品或收集物，例 如粪便和呕吐物(上GI样品)，以及从GI道收集的固体或液体物质，例如从胃取出的胃物 质(也是上GI样品)。在用于免疫测定中之前，收集到的原始材料典型地悬浮或稀释在缓 冲液(例如盐溶液)中。“粪便样品”意思是指排便后收集到的样品，典型地其随后被与溶液混合，其适于 用在免疫测定中。术语“诊断”应被理解为指对与上或下GI道有关的出血的可能性的确定。例如， 当在粪便样品中转铁蛋白测试为阳性而血红蛋白测试为阴性时，则出血很可能是来自上GI 道。当在粪便样品中血红蛋白和转铁蛋白两者均测试为“阳性”时，则出血很可能是来自下GI道。也可以基于在粪便样品中的血红蛋白对转铁蛋白的相对比来作出诊断-比值越高 (或者比值越接近血液中的比值)，则越可能是测试对象具有下GI道出血。反之，比值越低， 测试对象越可能具有上GI道出血。术语“阳性”和“阴性”分别指的是测试分析物的数值高于或低于预定值(基础或 阈值浓度)。上述术语也可以分别指示一种可检测的或可见的信号的出现或未出现。对一种分析物来说，“预定值”指的是在正常个体中分析物的基础或阈值浓度；如 果分析物的数值显著高于这一预定值，则表示异常，例如出血。对一种分析的预定值可能依 赖于化验形式、在化验中所使用的特定试剂(例如，使用的特殊抗体)而不同，但可以由本 领域技术人员通过评估正常个体中该分析物相对于包含已知量的分析物的控制样品的浓 度而被确定和设定。根据本发明，在GI样品中的血红蛋白和转铁蛋白可以通过使用对血红蛋白和转 铁蛋白有特异性的抗体的多种免疫测定而被检测到。“抗体”意思是指单克隆或多克隆抗体。既可以使用全长的抗体分子，也可以使用 全长抗体的抗原结合片段。在特定实施例中，通过使用三明治免疫测定来实现检测，该检测涉及使用对要 检测的分析物有特异性的一对抗体。在该对中的抗体彼此互补，就是说所述抗体结合到 分析物的不同表位并允许形成三明治型复合物抗体1-分析物-抗体2。典型地，该抗 体对的一个抗体被固定在固体材料上(也被称为“俘获抗体”)，例如，固定在硝酸纤维素 膜、微型滴定板、或珠粒上，而该对中的另一抗体与标记物(label)或信号生成物相结合 (conjugate) 0为了完成测定，包含分析物的样品与抗体结合物(conjugate)混合，以形成 反应混合物，然后该反应混合物被施加到所述固体材料上，允许俘获抗体俘获形成在分析 物和抗体结合物之间的复合物。备选地，包含分析物的样品被施加到固体材料上并且被结 合在该固体材料上的俘获抗体俘获。然后加入结合抗体以形成在俘获抗体、分析物和结合 抗体之间的三明治复合物。未结合的材料被冲洗掉，信号显示出来并被读取，无论是目视还 是使用仪器。根据本发明，抗体能结合到“标记物”、“信号生成物”或“信号产生元件”(因此也 称为“标记抗体”)，其指的是一种实体，该实体可呈现为多种不同形式酶及其在底物上的 获得效果、胶质金属颗粒，以及加入染料的乳胶，及染料颗粒。酶可以在底物上反应而产生 例如通过颜色的吸收(例如紫外线、可见光、红外线)，或者通过荧光可感觉到的产物。在本发明的一个实施例中，使用金属颗粒作为信号生成物，其可以用钼、金、银、硒 或铜或者任何展现出特征颜色的金属化合物制成。适合用在本发明中的金属颗粒可以用常 规的方法来制备。例如在Nature自然241 =20-22(1973)中，Frens描述了金溶胶颗粒的 制备。另外，所述金属颗粒可以是金属或金属化合物或者涂覆有金属或金属化合物的聚合 体核，如美国专利4，313，734中所描述的那样。在优选实施例中，金属颗粒是尺寸在5nm到IOOnm范围内的金颗粒，优选其尺寸在 8nm到60nm的范围内，最好在IOnm到40nm的范围内。可以使用常规技术将期望的抗体偶联(couple)到金属颗粒上，包括但不限于共 价偶联和疏水键合。另外，可以使用生物素/链霉抗生物素蛋白连接将抗体结合到颗粒上。另外，其他的适合用于产生与抗体结合的颗粒的固相颗粒包括，例如有色乳胶颗粒、碳黑以及染料颗粒。在另一特定实施例中，通过使用横向流动免疫测定实现对血红蛋白和转铁蛋白的 检测。在图2-3中示出表明这种测定的操作的装置。免疫测定横向流动测试装置一般包括具有背衬支撑件7的测试条，背衬支撑件7 可以由塑料、纸板或其他任何硬材料，优选由塑料材料制成。在背衬支撑件7的上面是测试 膜2，优选由硝酸纤维素膜制成，可以粘附在支撑件7上。在测试膜2的上表面上是合适的 试剂要粘附的区域，包括包含两个单独的测试位置的测试区域4，抗-转铁蛋白抗体固定在 一个位置而抗-血红蛋白抗体固定在另一位置。测试膜还具有控制区3，该控制区具有固定 到其上的控制抗体。测试条还包括用于施加稀释的样品到测试条上的样品位置，以及在样品位置下游 的结合位置。一般，有吸收力的样品垫6被放在样品位置，并且被放置成与在结合位置的结 合垫5接触。结合垫典型地被放在测试膜2的一个端部的顶部上并且与该端部直接接触， 并且包含与一个信号产生元件结合的抗-转铁蛋白抗体以及同样与一个信号产生元件结 合的抗-血红蛋白抗体。在测试膜2的另一端以及在测试膜的顶部上，放置了吸收垫1。当 GI样品被施加到样品垫6时，样品会朝向吸收垫1迁移并且被转移至测试膜2。在特定实施例中，结合位置是包含与抗转铁蛋白抗体相结合的金颗粒以及与抗血 红蛋白抗体相结合的金颗粒的垫。可以如上所述制备与抗体相结合的金颗粒，优选其尺寸 在5nm到IOOnm的范围内，更优选地是在8nm到60nm的范围内，最好在IOnm到40nm的范 围内。如上所述，也可以使用其他金属(例如钼、银、硒和铜)来制造与抗体结合的金属 颗粒。另外，其他的适合用于产生与抗体结合的颗粒的固相颗粒包括，例如有色乳胶颗粒、 碳黑以及染料颗粒。在一个实施例中，金抗体结合物在吸收性的垫5上沉积并干燥，该吸收性的垫5放 在样品垫6的下游样品被施加处。在可选实施例中，与期望的抗体结合的金颗粒直接在邻 近样品垫6且位于样品垫6的下游的测试膜2的端部上干燥和沉积。在图2-3中示出的横向流动免疫测定装置也可以包括壳体，其中放置测试条。该 壳体可以采用多种不同形式，其允许样品施加到样品垫上，并允许样品沿测试膜通过横向 流动迁移，以及允许观察发生在测试和控制区中的结果。图2-5示出测试条的组装件，用于基于三明治免疫测定对转铁蛋白和血红蛋白同 时进行检测。GI样品被施加到样品垫6上，而在样品中的液体由于毛细作用而朝向吸收垫 1迁移。当液体样品到达金结合垫5时，在金结合垫5内的金-抗转铁蛋白结合物和金-抗 血红蛋白结合物重新悬浮在该液体中，而获得的复合物，即，金-抗转铁蛋白-转铁蛋白和 金_抗血红蛋白_血红蛋白然后移动到膜2上。当包含该复合物的液体样品到达测试区4 时，它会和固定在它们各自的测试线上的抗转铁蛋白和抗血红蛋白抗体反应。在没有特定 分析物的情况下，不会形成三明治复合物，即，金结合的抗体-分析物_固定的抗体，因此如 图5所示测试线区4将保持无色。在有分析物存在时，将如图4所示在它们的特定的测试 线上形成三明治复合物。当金-抗体结合物(其总是多于出现在样品中的抗原(转铁蛋白 和血红蛋白))沿着膜向下移动并且到达控制线3时，固定的山羊-抗-鼠IgG将与金-抗 体结合物反应而在控制器3中形成彩色线。控制区作为指示物以确定装置的液体移动。如图6所示，没有有色的控制线表示失败的测试。应该注意到，图2-5仅仅是本发明的一种用于同时检测转铁蛋白和血红蛋白的测 试装置的示例，并非要限制本发明。例如，本领域技术人员可以容易地想到在测试区域4内 的两个位置也可以沿横向流动方向的同一位置分开布置(例如并列)。此外，测试装置可以 做成是包含两个单独的测试条，一个用于测试血红蛋白(包括样品垫、金结合垫、只包含抗 血红蛋白抗体的测试区域，及控制区域)，另一个用于测试转铁蛋白(包括样品垫、金结合 垫、只包含抗转铁蛋白抗体的测试区域，及控制区域)。用这样的装置，根据需要和测试的环 境，使用者也可以选择仅仅施加样品到两个测试条中的一个。还通过下面的例子阐明本发明，这些示例不应以任何方式解释为对本发明的范围 进行限制。在本公开中使用的术语和表述被用做描述的术语而非限制，并且在使用这些术 语和表述时无意排除所示和所描述的特征的任何等同替代或者其一部分。应该理解，可以 在本发明的范围内进行各种修改。通过引用，在本公开中提到的所有公开文献合并于此。示例 1制备对血红蛋白和转铁蛋白的单克隆抗体BALB/c鼠用纯化的人血红蛋白免疫处理三个月的时间以诱发抗体的产生。当抗血 清效价到达期望的水平以后，处死老鼠。使用分离的脾细胞用于与SP20株系细胞进行杂交 瘤细胞融合。一对杂交瘤细胞系，HblOEllG12和Hb2HllD12，被分离并用于从BALB/c小鼠 生产腹水流体。然后从腹水流体中提纯出抗血红蛋白抗体，并用在用于检测血红蛋白的三 明治免疫测定中。遵照类似的过程来生产抗转铁蛋白抗体。一对匹配的杂交瘤细胞系，TF31E5G1和 TF32A2G1，被分离和用在用于检测转铁蛋白的三明治免疫测定中。示例 2制备金颗粒和抗体结合物抗体结合的金颗粒被选作在横向流动免疫测定中的检测装置。通过在混合物的沸 点用柠檬酸钠还原氯化金，来制备胶态金颗粒溶液。在制备金-抗体结合物中使用的是粉 色到紫色的胶态金溶液，其金颗粒的尺寸在10到40nm左右。在接近抗体的pi值的pH值 下，使用成对抗体中的一个来包被金颗粒。使用BSA和PEG来封闭在金颗粒上的剩余的结 合位置，以清洗和浓缩结合的金-抗体溶液。垫，通常是由玻璃纤维或人造丝制成的垫，被 浸没到结合的金_抗体溶液中，并随后被干燥，从而金_抗体结合物沉积在该垫中。示例 3测试线和控制线选择平均孔尺寸为大约5到20 μ m的硝酸纤维素膜作为测试膜。选定的抗体在指 定的测试线区固定在该膜上。控制线区也包括在测试膜中以确定测试的物理性能，在那里 固定山羊-抗-鼠-IgG抗体。示例 4测试条的组装件和性能图2-3示出测试条的组装件，用于基于三明治免疫测定对转铁蛋白和血红蛋白同 时进行检测。示例 5
转铁蛋白的检测在粪便样品收集器中的稀释缓冲液溶液(典型地是PBS缓冲液)被掺入(spike) (补入转铁蛋白)成分别具有10、20、40、50、75和lOOng/ml的最终转铁蛋白浓度。来自正 常个体的三个随机的粪便样品被收集并且被插入到包含掺入转铁蛋白的缓冲液溶液的收 集装置中。使用图2-3中所示的测试装置来测试这三个样品。结果如表1所示。所有的转 铁蛋白水平在边界值30ng/ml以上的样品溶液显示阳性信号，而所有的转铁蛋白在该边界 值以下的样品显示阴性结果。表 权利要求
一种用于检测来自GI道的出血的方法，包括检测在GI样品中的转铁蛋白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与转铁蛋白和血红蛋白的各自的预定值相比较，由此确定来自GI道的出血。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述GI样品是粪便样品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值并且所述血红蛋白的量也高于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自下GI道。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值而所述血红蛋白的量低于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自上GI道。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述GI样品是呕吐物样品或者从胃收集 的液体样品。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值时，检测结果表示出血来自上GI道。
7.—种检测上GI出血的方法，包括检测在上GI样品中的转铁蛋白，以及将高于预定值 的转铁蛋白的量确定为来自上GI道出血的表示。
8.一种鉴别诊断来自上GI道和下GI道的出血的方法，包括检测粪便样品中的转铁蛋 白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与转铁蛋白和血红蛋白的各自的 预定值相比较，由此对来自上GI道和下GI道的出血作出鉴别诊断。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，当转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预定值 并且血红蛋白的量也高于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自下GI道。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值而所述血红蛋白的量低于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自上GI道。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过三明治免疫测定实现对转铁蛋白和 血红蛋白的检测。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用横向流动免疫测定装置实现对转铁 蛋白和血红蛋白的检测。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述装置包括测试条，所述测试条包括(1)用于施加GI样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体和标记抗-血红蛋白 抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括两个单独的位置，一个固定有 抗_转铁蛋白抗体，另一个被标记地固定有抗_血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述装置包括两个测试条，其中第一测 试条包括(1)用于施加GI样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处固定抗-转铁蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置；及 其中第二条包括(1)用于施加GI样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-血红蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处 固定抗-血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述测试条包括由硝酸纤维素制 成的测试膜。
16.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述标记抗_转铁蛋白抗体和所 述标记抗_血红蛋白抗体均是结合到金颗粒的抗体。
17.一种横向流动免疫测定装置，用于对样品中的转铁蛋白和血红蛋白同时进行检测， 包括测试条，所述测试条包括(1)用于施加所述粪便样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体和标记抗-血红蛋白 抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括两个单独的位置，一个固定有 抗_转铁蛋白抗体，另一个被标记地固定有抗_血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
18.一种横向流动免疫测定装置，用于对样品中的转铁蛋白和血红蛋白同时进行检测， 包括两个测试条，其中第一条包括(1)用于施加样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处 固定抗-转铁蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置；及 其中第二条包括(1)用于施加样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-血红蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处 固定抗-血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
19.根据权利要求17或18所述的装置，其特征在于，所述测试条包括由硝酸纤维素制 成的测试膜。
20.根据权利要求17或18所述的装置，其特征在于，所述标记抗-转铁蛋白抗体和所述标记 抗-血红蛋白抗体均是结合到金颗粒的抗体。
全文摘要
本发明主要涉及潜血的检测。尤其是，本发明提供对粪便样品中的转铁蛋白和血红蛋白进行同时检测的装置和方法，其允许对粪便样品中的潜血有更敏感的诊断，以及对上GI道和下GI道出血的鉴别诊断。
文档编号G01N33/543GK101965515SQ200880123614
公开日2011年2月2日 申请日期2008年9月5日 优先权日2007年10月30日
发明者万志静, 约翰·万 申请人:约翰·万;万志静
技术领域：
本发明总体涉及对来自消化(GI)道的样品的潜血的检测。尤其是，本发明提供一 种用于检测转铁蛋白的装置和方法，或备选地，使用GI样品同时检测血红蛋白和转铁蛋白 的装置和方法。本发明的方法为GI出血的诊断提供基础，并为来自上GI道和下GI道的出 血的鉴别诊断提供基础。
背景技术：
大便潜血(FOB)对于监控来自消化(GI)系统的出血是非常好的指示物。由于一 些大肠息肉可能需要几年的转变成结直肠癌，检测出血的大肠息肉是一种有效的在早期甄 别结直肠癌的方法。为50岁或更年长的人进行甄别在粪便样品中的潜血的过程，已经将结 直肠癌的发生率降低了 20%，将死亡率降低了 30%。当前可用的FOB测试包括检测在粪便样品中的血红蛋白代谢物的化学测试。该测 试使用可氧化的底物(例如愈创树脂)，该底物在有过氧化物和血红蛋白出现时产生有色 产物。由于大多数动物的血红素分子、植物成分和常见的维生素也能催化过氧化氢反应，所 以饮食控制对于这种类型的化学测试的特异性是关键的。严格的饮食控制产生了严重的患 者的遵守问题。平均地说，低于10%的遵守率并不是罕见的。此外，化学测试一般具有有限 的灵敏度。例如，使用愈创树脂作为底物的FOB测试的测试灵敏度为50 μ g/ml，而改进的版 本的测试灵敏度为20 μ g/ml。已开发了一种对血红蛋白的三明治免疫测定，与化学测试相比，其提供更高的测 试灵敏度及特异性。对于这种免疫测定，对饮食控制的需要也可以不用。血红蛋白是易分解的蛋白；它在人的GI系统中会迅速降解。在收集了粪便样品之 后，在运输和储存期间，血红蛋白也容易遭受降解。所有这些样品的降解问题都会影响血红 蛋白化验的测试精度。转铁蛋白是另一种用于检测大便潜血的生物标记。在正常人的血液中，转铁蛋白 和血红蛋白的含量分别是3mg/ml和150mg/ml。另一方面，在粪便样品中血红蛋白对转铁 蛋白的比大约是5，这远低于在血液中的比(大约是50)。这一观测数据表明在GI道中转 铁蛋白大约比血红蛋白要稳定10倍以上。已经有报告提出特定疾病可以影响转铁蛋白在 血液和粪便样品中的水平，影响的程度到了仅基于转铁蛋白的FOB测试可能产生假阴性结 果。用于检测血红蛋白和转铁蛋白两者的组合测试可以提高测试灵敏度，并且不牺牲测试 的特异性。发展FOB化验的另一个挑战是目前在市场上很少有自动分析仪能处理粪便样品。 因此期望和需要一种快速的现场FOB测试。
发明内容
本发明提供一种免疫测定方法和装置，其能够检测来自整个GI系统的出血，并且 能够支持对上GI出血和下GI出血的鉴别诊断。本发明的免疫测定涉及使用GI样品，对转铁蛋白的单独测定，或者备选地，对血红蛋白和转铁蛋白的同时检测。在一个方面中，本发明提供一种检测上GI道样品中的转铁蛋白的方法，以帮助诊 断来自上GI道的出血。上GI样品包括呕吐物或者从例如胃收集到的物质。在另一方面中，本发明提供一种同时检测粪便样品中的血红蛋白和转铁蛋白的方 法，以帮助诊断来自GI道的出血，以及区分在上GI道的出血和在下GI道的出血。在一个实施例中，本发明提供一种用于检测大便潜血的方法，其检测在粪便样品 中的转铁蛋白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与各自的预定值相比 较，从而确定潜血是否出现在所述样品中。在特定实施例中，当所述转铁蛋白和血红蛋白两者测试都是阳性时，或者换句话 说当在粪便样品中的转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预定值并且在样品中的血红蛋白的量 也高于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自下GI道。在另一实施例中，当转铁蛋白测试为阳性而血红蛋白测试为阴性时，换句话说，当 样品中的转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预定值而样品中的血红蛋白的量低于血红蛋白的 预定值时，检测结果表示出血来自上GI道。在又一实施例中，如果使用粪便样品而转铁蛋白和血红蛋白两者的测试均为阴 性，这种结果表示在整个GI道中无出血。根据本发明，可以通过多种化验来实现对转铁蛋白和血红蛋白的检测。在一个实 施例中，通过三明治免疫测定实现该检测，所述三明治免疫测定使用互补的抗-转铁蛋白 抗体对和互补的抗_血红蛋白抗体对。在特定实施例中，使用横向流动三明治免疫测定装置实现对转铁蛋白和血红蛋白 的检测。在一个实施例中，适于用在本发明中的横向流动装置包括测试条。所述测试条包 含固体支撑件、测试膜放置在该支撑件的顶部上。在测试膜的上表面是固定反应物的区域， 包括包含两个单独的位置的测试区，一个位置固定有抗_转铁蛋白抗体，另一个位置固定 有抗-血红蛋白抗体；及控制位置，控制抗体(例如山羊抗_鼠抗体)固定在该控制位置。 另外，测试条包含样品垫、结合垫以及吸收垫。样品垫放置成与结合垫的上游接触，而结合 垫又放置成与测试膜的端部接触。吸收垫放置在测试膜的另一端部的顶部。结合垫包含标 记抗_转铁蛋白抗体和标记抗_血红蛋白抗体，并被放置在测试区的上游。优选地，测试膜 由硝酸纤维素制成；所述标记抗_转铁蛋白抗体和所述标记抗_血红蛋白抗体均是结合到 金颗粒的抗体。在另一实施例中，适于用在本发明中的横向流动装置包含两个测试条，一个用于 测试转铁蛋白而另一个用于测试血红蛋白。在另一个方面，本发明提供一种横向流动免疫测定装置，用于对样品中的转铁蛋 白和血红蛋白同时进行检测。所述样品可以是GI样品或者体液的样品。
图1为粪便样品收集装置。该装置包含小螺帽、具有棒的大些的帽以及具有存储 缓冲液的小瓶。使用者将拧开大些的帽，用来自小瓶中的刷子，在不同位置刺几次粪便样 品；将刷子插回到具有存储缓冲液的小瓶并拧紧螺丝。收集在刷子上的粪便样品然后将被再悬浮到存储缓冲液中并准备用于测试。当测试操作者收到小瓶时，该操作者仅需要拧开 小帽，并将样品溶液直接挤到测试装置上。图2为用于转铁蛋白和血红蛋白的组合三明治免疫测定的测试膜的顶视图。测试 条包括吸收垫(1)、硝酸纤维素膜(2)、控制线(3)、分别针对转铁蛋白和血红蛋白的两个测 试线⑷；表示最大液体水平的标线⑶以及样品垫(6)。图3示出同一测试条的横截面，其中物品7是塑料背衬，物品5是在标记物 (label)下面的金抗体结合(conjugate)垫。图4示出在粪便样品中出现血时的阳性结果的三种可能的形式。图5示出组合测试的阴性结果。图6示出当缺乏有色的控制线时，测试结果是无效的。
具体实施例方式本发明提供一种三明治免疫测定方法和装置，其能检测来自整个GI系统的出血， 并且能够支持对上GI出血和下GI出血的鉴别诊断。该免疫测定包括对转铁蛋白的单独的 检测，或备选地，对转铁蛋白和血红蛋白的同时检测。本发明的免疫测定能够利用被怀疑包 含潜血的GI样品以及体液样品。本发明至少部分地基于对作为潜血标记转铁蛋白和血红蛋白之间在稳定性上的 差异的认识。在大多数上GI出血情况中，血红蛋白被来自胃、肠和细菌的胃酸和蛋白酶彻 底破坏。另一方面，转铁蛋白则能够通过GI道的通路而存活下来。在导致本发明的测试中， 已经发现在临床诊断为遭受上GI紊乱的患者中，在粪便样品以及吐出物和从上GI收集的 液体样品中，转铁蛋白测试为阳性而血红蛋白测试为阴性。另外，已经发现在粪便样品中血 红蛋白测试为阳性且转铁蛋白测试也为阳性的情况中，患者临床诊断为遭受下GI紊乱。因此，在一个实施例中，本发明提供一种检测在上GI样品中的转铁蛋白的方法， 以帮助诊断来自上GI道的出血。在另一实施例中，本发明提供一种同时检测在粪便样品中 的血红蛋白和转铁蛋白的方法，以帮助诊断来自整个GI道的出血，以及区分上GI道中的出 血和下GI道中的出血。在又一实施例中，提供测试装置用于执行本发明的方法。术语“上GI道”指的是GI道的上部并包括口、咽、食管、胃和十二指肠。另一方 面，“下GI道”指的是GI道的下部并由肠、结肠、直肠和肛门组成。尽管可以应用至对来自 GI道的任何部分的出血的诊断，当前提出的要求保护的方法对来自上GI道的出血的诊断 是特别有用的，而目前没有能用于临床环境中的可靠的基于试纸(strip)的粪便测试。术语“GI样品”指的是从GI道排出或分泌的固体或液体物质的样品或收集物，例 如粪便和呕吐物(上GI样品)，以及从GI道收集的固体或液体物质，例如从胃取出的胃物 质(也是上GI样品)。在用于免疫测定中之前，收集到的原始材料典型地悬浮或稀释在缓 冲液(例如盐溶液)中。“粪便样品”意思是指排便后收集到的样品，典型地其随后被与溶液混合，其适于 用在免疫测定中。术语“诊断”应被理解为指对与上或下GI道有关的出血的可能性的确定。例如， 当在粪便样品中转铁蛋白测试为阳性而血红蛋白测试为阴性时，则出血很可能是来自上GI 道。当在粪便样品中血红蛋白和转铁蛋白两者均测试为“阳性”时，则出血很可能是来自下GI道。也可以基于在粪便样品中的血红蛋白对转铁蛋白的相对比来作出诊断-比值越高 (或者比值越接近血液中的比值)，则越可能是测试对象具有下GI道出血。反之，比值越低， 测试对象越可能具有上GI道出血。术语“阳性”和“阴性”分别指的是测试分析物的数值高于或低于预定值(基础或 阈值浓度)。上述术语也可以分别指示一种可检测的或可见的信号的出现或未出现。对一种分析物来说，“预定值”指的是在正常个体中分析物的基础或阈值浓度；如 果分析物的数值显著高于这一预定值，则表示异常，例如出血。对一种分析的预定值可能依 赖于化验形式、在化验中所使用的特定试剂(例如，使用的特殊抗体)而不同，但可以由本 领域技术人员通过评估正常个体中该分析物相对于包含已知量的分析物的控制样品的浓 度而被确定和设定。根据本发明，在GI样品中的血红蛋白和转铁蛋白可以通过使用对血红蛋白和转 铁蛋白有特异性的抗体的多种免疫测定而被检测到。“抗体”意思是指单克隆或多克隆抗体。既可以使用全长的抗体分子，也可以使用 全长抗体的抗原结合片段。在特定实施例中，通过使用三明治免疫测定来实现检测，该检测涉及使用对要 检测的分析物有特异性的一对抗体。在该对中的抗体彼此互补，就是说所述抗体结合到 分析物的不同表位并允许形成三明治型复合物抗体1-分析物-抗体2。典型地，该抗 体对的一个抗体被固定在固体材料上(也被称为“俘获抗体”)，例如，固定在硝酸纤维素 膜、微型滴定板、或珠粒上，而该对中的另一抗体与标记物(label)或信号生成物相结合 (conjugate) 0为了完成测定，包含分析物的样品与抗体结合物(conjugate)混合，以形成 反应混合物，然后该反应混合物被施加到所述固体材料上，允许俘获抗体俘获形成在分析 物和抗体结合物之间的复合物。备选地，包含分析物的样品被施加到固体材料上并且被结 合在该固体材料上的俘获抗体俘获。然后加入结合抗体以形成在俘获抗体、分析物和结合 抗体之间的三明治复合物。未结合的材料被冲洗掉，信号显示出来并被读取，无论是目视还 是使用仪器。根据本发明，抗体能结合到“标记物”、“信号生成物”或“信号产生元件”(因此也 称为“标记抗体”)，其指的是一种实体，该实体可呈现为多种不同形式酶及其在底物上的 获得效果、胶质金属颗粒，以及加入染料的乳胶，及染料颗粒。酶可以在底物上反应而产生 例如通过颜色的吸收(例如紫外线、可见光、红外线)，或者通过荧光可感觉到的产物。在本发明的一个实施例中，使用金属颗粒作为信号生成物，其可以用钼、金、银、硒 或铜或者任何展现出特征颜色的金属化合物制成。适合用在本发明中的金属颗粒可以用常 规的方法来制备。例如在Nature自然241 =20-22(1973)中，Frens描述了金溶胶颗粒的 制备。另外，所述金属颗粒可以是金属或金属化合物或者涂覆有金属或金属化合物的聚合 体核，如美国专利4，313，734中所描述的那样。在优选实施例中，金属颗粒是尺寸在5nm到IOOnm范围内的金颗粒，优选其尺寸在 8nm到60nm的范围内，最好在IOnm到40nm的范围内。可以使用常规技术将期望的抗体偶联(couple)到金属颗粒上，包括但不限于共 价偶联和疏水键合。另外，可以使用生物素/链霉抗生物素蛋白连接将抗体结合到颗粒上。另外，其他的适合用于产生与抗体结合的颗粒的固相颗粒包括，例如有色乳胶颗粒、碳黑以及染料颗粒。在另一特定实施例中，通过使用横向流动免疫测定实现对血红蛋白和转铁蛋白的 检测。在图2-3中示出表明这种测定的操作的装置。免疫测定横向流动测试装置一般包括具有背衬支撑件7的测试条，背衬支撑件7 可以由塑料、纸板或其他任何硬材料，优选由塑料材料制成。在背衬支撑件7的上面是测试 膜2，优选由硝酸纤维素膜制成，可以粘附在支撑件7上。在测试膜2的上表面上是合适的 试剂要粘附的区域，包括包含两个单独的测试位置的测试区域4，抗-转铁蛋白抗体固定在 一个位置而抗-血红蛋白抗体固定在另一位置。测试膜还具有控制区3，该控制区具有固定 到其上的控制抗体。测试条还包括用于施加稀释的样品到测试条上的样品位置，以及在样品位置下游 的结合位置。一般，有吸收力的样品垫6被放在样品位置，并且被放置成与在结合位置的结 合垫5接触。结合垫典型地被放在测试膜2的一个端部的顶部上并且与该端部直接接触， 并且包含与一个信号产生元件结合的抗-转铁蛋白抗体以及同样与一个信号产生元件结 合的抗-血红蛋白抗体。在测试膜2的另一端以及在测试膜的顶部上，放置了吸收垫1。当 GI样品被施加到样品垫6时，样品会朝向吸收垫1迁移并且被转移至测试膜2。在特定实施例中，结合位置是包含与抗转铁蛋白抗体相结合的金颗粒以及与抗血 红蛋白抗体相结合的金颗粒的垫。可以如上所述制备与抗体相结合的金颗粒，优选其尺寸 在5nm到IOOnm的范围内，更优选地是在8nm到60nm的范围内，最好在IOnm到40nm的范 围内。如上所述，也可以使用其他金属(例如钼、银、硒和铜)来制造与抗体结合的金属 颗粒。另外，其他的适合用于产生与抗体结合的颗粒的固相颗粒包括，例如有色乳胶颗粒、 碳黑以及染料颗粒。在一个实施例中，金抗体结合物在吸收性的垫5上沉积并干燥，该吸收性的垫5放 在样品垫6的下游样品被施加处。在可选实施例中，与期望的抗体结合的金颗粒直接在邻 近样品垫6且位于样品垫6的下游的测试膜2的端部上干燥和沉积。在图2-3中示出的横向流动免疫测定装置也可以包括壳体，其中放置测试条。该 壳体可以采用多种不同形式，其允许样品施加到样品垫上，并允许样品沿测试膜通过横向 流动迁移，以及允许观察发生在测试和控制区中的结果。图2-5示出测试条的组装件，用于基于三明治免疫测定对转铁蛋白和血红蛋白同 时进行检测。GI样品被施加到样品垫6上，而在样品中的液体由于毛细作用而朝向吸收垫 1迁移。当液体样品到达金结合垫5时，在金结合垫5内的金-抗转铁蛋白结合物和金-抗 血红蛋白结合物重新悬浮在该液体中，而获得的复合物，即，金-抗转铁蛋白-转铁蛋白和 金_抗血红蛋白_血红蛋白然后移动到膜2上。当包含该复合物的液体样品到达测试区4 时，它会和固定在它们各自的测试线上的抗转铁蛋白和抗血红蛋白抗体反应。在没有特定 分析物的情况下，不会形成三明治复合物，即，金结合的抗体-分析物_固定的抗体，因此如 图5所示测试线区4将保持无色。在有分析物存在时，将如图4所示在它们的特定的测试 线上形成三明治复合物。当金-抗体结合物(其总是多于出现在样品中的抗原(转铁蛋白 和血红蛋白))沿着膜向下移动并且到达控制线3时，固定的山羊-抗-鼠IgG将与金-抗 体结合物反应而在控制器3中形成彩色线。控制区作为指示物以确定装置的液体移动。如图6所示，没有有色的控制线表示失败的测试。应该注意到，图2-5仅仅是本发明的一种用于同时检测转铁蛋白和血红蛋白的测 试装置的示例，并非要限制本发明。例如，本领域技术人员可以容易地想到在测试区域4内 的两个位置也可以沿横向流动方向的同一位置分开布置(例如并列)。此外，测试装置可以 做成是包含两个单独的测试条，一个用于测试血红蛋白(包括样品垫、金结合垫、只包含抗 血红蛋白抗体的测试区域，及控制区域)，另一个用于测试转铁蛋白(包括样品垫、金结合 垫、只包含抗转铁蛋白抗体的测试区域，及控制区域)。用这样的装置，根据需要和测试的环 境，使用者也可以选择仅仅施加样品到两个测试条中的一个。还通过下面的例子阐明本发明，这些示例不应以任何方式解释为对本发明的范围 进行限制。在本公开中使用的术语和表述被用做描述的术语而非限制，并且在使用这些术 语和表述时无意排除所示和所描述的特征的任何等同替代或者其一部分。应该理解，可以 在本发明的范围内进行各种修改。通过引用，在本公开中提到的所有公开文献合并于此。示例 1制备对血红蛋白和转铁蛋白的单克隆抗体BALB/c鼠用纯化的人血红蛋白免疫处理三个月的时间以诱发抗体的产生。当抗血 清效价到达期望的水平以后，处死老鼠。使用分离的脾细胞用于与SP20株系细胞进行杂交 瘤细胞融合。一对杂交瘤细胞系，HblOEllG12和Hb2HllD12，被分离并用于从BALB/c小鼠 生产腹水流体。然后从腹水流体中提纯出抗血红蛋白抗体，并用在用于检测血红蛋白的三 明治免疫测定中。遵照类似的过程来生产抗转铁蛋白抗体。一对匹配的杂交瘤细胞系，TF31E5G1和 TF32A2G1，被分离和用在用于检测转铁蛋白的三明治免疫测定中。示例 2制备金颗粒和抗体结合物抗体结合的金颗粒被选作在横向流动免疫测定中的检测装置。通过在混合物的沸 点用柠檬酸钠还原氯化金，来制备胶态金颗粒溶液。在制备金-抗体结合物中使用的是粉 色到紫色的胶态金溶液，其金颗粒的尺寸在10到40nm左右。在接近抗体的pi值的pH值 下，使用成对抗体中的一个来包被金颗粒。使用BSA和PEG来封闭在金颗粒上的剩余的结 合位置，以清洗和浓缩结合的金-抗体溶液。垫，通常是由玻璃纤维或人造丝制成的垫，被 浸没到结合的金_抗体溶液中，并随后被干燥，从而金_抗体结合物沉积在该垫中。示例 3测试线和控制线选择平均孔尺寸为大约5到20 μ m的硝酸纤维素膜作为测试膜。选定的抗体在指 定的测试线区固定在该膜上。控制线区也包括在测试膜中以确定测试的物理性能，在那里 固定山羊-抗-鼠-IgG抗体。示例 4测试条的组装件和性能图2-3示出测试条的组装件，用于基于三明治免疫测定对转铁蛋白和血红蛋白同 时进行检测。示例 5
转铁蛋白的检测在粪便样品收集器中的稀释缓冲液溶液(典型地是PBS缓冲液)被掺入(spike) (补入转铁蛋白)成分别具有10、20、40、50、75和lOOng/ml的最终转铁蛋白浓度。来自正 常个体的三个随机的粪便样品被收集并且被插入到包含掺入转铁蛋白的缓冲液溶液的收 集装置中。使用图2-3中所示的测试装置来测试这三个样品。结果如表1所示。所有的转 铁蛋白水平在边界值30ng/ml以上的样品溶液显示阳性信号，而所有的转铁蛋白在该边界 值以下的样品显示阴性结果。表 权利要求
一种用于检测来自GI道的出血的方法，包括检测在GI样品中的转铁蛋白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与转铁蛋白和血红蛋白的各自的预定值相比较，由此确定来自GI道的出血。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述GI样品是粪便样品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值并且所述血红蛋白的量也高于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自下GI道。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值而所述血红蛋白的量低于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自上GI道。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述GI样品是呕吐物样品或者从胃收集 的液体样品。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值时，检测结果表示出血来自上GI道。
7.—种检测上GI出血的方法，包括检测在上GI样品中的转铁蛋白，以及将高于预定值 的转铁蛋白的量确定为来自上GI道出血的表示。
8.一种鉴别诊断来自上GI道和下GI道的出血的方法，包括检测粪便样品中的转铁蛋 白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与转铁蛋白和血红蛋白的各自的 预定值相比较，由此对来自上GI道和下GI道的出血作出鉴别诊断。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，当转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预定值 并且血红蛋白的量也高于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自下GI道。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，当所述转铁蛋白的量高于转铁蛋白的预 定值而所述血红蛋白的量低于血红蛋白的预定值时，检测结果表示出血来自上GI道。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过三明治免疫测定实现对转铁蛋白和 血红蛋白的检测。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用横向流动免疫测定装置实现对转铁 蛋白和血红蛋白的检测。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述装置包括测试条，所述测试条包括(1)用于施加GI样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体和标记抗-血红蛋白 抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括两个单独的位置，一个固定有 抗_转铁蛋白抗体，另一个被标记地固定有抗_血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述装置包括两个测试条，其中第一测 试条包括(1)用于施加GI样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处固定抗-转铁蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置；及 其中第二条包括(1)用于施加GI样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-血红蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处 固定抗-血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述测试条包括由硝酸纤维素制 成的测试膜。
16.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述标记抗_转铁蛋白抗体和所 述标记抗_血红蛋白抗体均是结合到金颗粒的抗体。
17.一种横向流动免疫测定装置，用于对样品中的转铁蛋白和血红蛋白同时进行检测， 包括测试条，所述测试条包括(1)用于施加所述粪便样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体和标记抗-血红蛋白 抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括两个单独的位置，一个固定有 抗_转铁蛋白抗体，另一个被标记地固定有抗_血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
18.一种横向流动免疫测定装置，用于对样品中的转铁蛋白和血红蛋白同时进行检测， 包括两个测试条，其中第一条包括(1)用于施加样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-转铁蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处 固定抗-转铁蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置；及 其中第二条包括(1)用于施加样品的样品位置；(2)在所述样品位置下游的结合位置，其中标记抗-血红蛋白抗体沉积在所述结合位置；(3)在所述结合位置下游的测试区，其中所述测试区包括测试位置，在所述测试位置处 固定抗-血红蛋白抗体；及(4)控制位置，控制抗体固定在该控制位置。
19.根据权利要求17或18所述的装置，其特征在于，所述测试条包括由硝酸纤维素制 成的测试膜。
20.根据权利要求17或18所述的装置，其特征在于，所述标记抗-转铁蛋白抗体和所述标记 抗-血红蛋白抗体均是结合到金颗粒的抗体。
全文摘要
本发明主要涉及潜血的检测。尤其是，本发明提供对粪便样品中的转铁蛋白和血红蛋白进行同时检测的装置和方法，其允许对粪便样品中的潜血有更敏感的诊断，以及对上GI道和下GI道出血的鉴别诊断。
文档编号G01N33/543GK101965515SQ200880123614
公开日2011年2月2日 申请日期2008年9月5日 优先权日2007年10月30日
发明者万志静, 约翰·万 申请人:约翰·万;万志静
最新回复(0)