一种延缓慢性肾功能衰竭的药物组合物的制作方法
专利名称：一种延缓慢性肾功能衰竭的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗和/或预防慢性肾功能衰减的药物，具体说是延缓慢性肾功能衰竭的药物组合物。又名“芪茸保元汤”。
因此，对于有效而且低费用的预防和治疗肾功能衰减的药物存在着迫切的需求。
发明人根据中医理论和现代医学研究，结合多年临床经验，从数千年浩瀚的中药中有依据地精心筛选出十几种中药组成方剂，应用于临床和动物实验，结果发现本发明药物可显著改善慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平、血清尿素氮水平、血红蛋白水平及增加血红细胞数量；提高小鼠的抗疲劳及免疫功能；改善慢性肾功能不全小鼠的体重、肾重量、血清Cr和BUN；以及改善小鼠的由慢性肾功能衰减诱发的贫血，并由此完成了本发明。
本发明的药物组合物包括按重量份计的以下原料黄芪10-150鹿茸1-10 大黄5-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 佩兰0-60车前子0-60水蛭0-20 牡蛎10-60山楂0-30 神曲0-30 麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
根据本发明的一个优选实施方案，本发明的药物组合物包括黄芪15-120鹿茸1.5-8大黄6-25白术15-100山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参15-90牡蛎10-60
车前子0-60水蛭0-15佩兰0-60山楂0-30 神曲0-30麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
其中牡蛎优选用生牡蛎，山楂优选用焦山楂，神曲优选用焦神曲，麦芽优选用焦麦芽。
根据本发明的进一步优选实施方案，本发明的药物组合物包括黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 生牡蛎10-60车前子10-60 水蛭5-15 佩兰10-60。
本方案适合用于慢性肾衰水肿较甚者。
根据本发明的另一个进一步优选的实施方案，本发明的药物组合物包括黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 生牡蛎10-60焦神曲10-30 焦麦芽10-30 焦山楂10-30甘草6-10 大枣5-20本方案适合用于慢性肾衰消化道症状如纳差、呕呃等较为突出者。
方中含有黄芪、鹿茸、大黄等主要成分，具有补益脾肾，温养精血，疏泄浊毒的功效，从而培植元气，调畅气机，达到保护肾脏，改善肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程与发展的作用，故命名为芪茸保元汤。该方主要治疗脾肾气(阳)虚型和阴阳两虚型，兼有湿浊、血瘀证的慢性肾功能衰竭。
本处方属临床经验方。方中首选黄芪、鹿茸、大黄为主药。黄芪补益脾气，以资生血之源；鹿茸血肉有情之品，峻补肾阳，生精益髓；大黄通腑泄浊排毒以治标；三药合用补脾益肾，降浊排毒。白术、山芋、锁阳、当归、丹参为辅药。白术健脾益气，燥湿行水，增强运化功能，助黄芪以益气健脾，使之补气而不滞；山芋既能补肾阳，有能补肾阴；锁阳补肾阳，益精血；三药既助鹿茸温补肾阳，又补肾阴，益精血，使之阴阳双补，精血自生；当归、丹参养血活血，配以黄芪既阴生阳长，气旺血生，又活血祛瘀，疏通血脉。佩兰、车前子、水蛭、生牡蛎、焦山楂、焦神曲、焦麦芽、大枣、甘草为佐使药。佩兰芳化湿浊、车前子有较强的利水渗湿作用，同黄芪、白术相配，使湿去脾健；水蛭破血逐瘀，利水道，加强当归、丹参、佩兰、车前子的药物疗效；生牡蛎化痰软坚除湿，偏走下窍(精窍、尿窍)；焦三仙健胃消食降逆；大枣、甘草甘平健脾和胃、同黄芪、白术，共成益气健脾，养心安神之功，又能缓和药性，调和诸药。
本发明的药物组合物可以制成任何一种适合于临床常用的剂型，例如丸剂、散剂、胶囊、口服液、浓缩丸剂、颗粒制剂等。
例如，将本发明组合物制成口服液制剂的方法是取所述原料，用水煎2次，取2次的上层液体，包装即可。
例如，将本发明组合物制成散剂的方法是取所述原料，清洗，晾干，粉碎，过筛，再装袋。
需要说明的是，本发明的组合物还可以含有其它任选成分，例如改善慢性肾衰病人相应症状的中药原料；同时本发明的药物组合物也可以与治疗慢性肾衰的西药一起应用制成中西药复方制剂。因此在本发明组合物的基础上增加一味或多味中药原料，或者将本发明组合物与西药制成的复方制剂也属于本发明保护的范围。这些任选成分的量一般在本发明组合物总量的50％以下，优选20％以下。
实验一芪茸保元汤延缓慢性肾功能衰竭疗效观察于1997年10月至2000年10月，为了客观评价芪茸保元汤的疗效及安全性，发明人对240例慢性肾功能衰竭(CRF)患者进行了全面系统的临床观察。
1、一般资料本临床观察病例均系我院门诊及部分住院病人，共240例，中药治疗组120例，中、西药对照组各60例。其中中药治疗组男52例，女68例，年龄最大83岁，最小23岁，平均年龄60.68岁，病程最短一个月，最长八年；中药对照组男26例，女34例，年龄最大82岁，最小20岁，平均年龄56.83岁，病程最短一个月，最长四年；西药对照组男25例，女35例，年龄最大79岁，最小22岁，平均年龄58.92岁，病程最短二个月，最长七年。原发病中，慢性肾小球肾炎67例，高血压肾病64例，糖尿病肾病36例，多囊肾5例，肾盂肾炎5例，其它疾病19例，病因不明者44例。
2、诊断标准(1)西医诊断标准参照1992年安徽太平肾脏病会议上制定的慢性肾衰诊断标准及分期中的I-III期。
(2)中医辩证分型标准参照1986年第二界全国中医肾病学术会议讨论修改的辩证分型方案中脾肾气(阳)虚和阴阳两虚型。
3、治疗方法(1)中药治疗组芪茸保元汤内服，每日4次，每次25ml；(2)中药对照组尿毒清冲剂，温开水冲服，每日4次，每次5g；(3)西药对照组包醛氧化淀粉，温开水冲服，每日3次，每次5g；(4)疗程两个月为一个疗程。治疗期间除对证治疗(如高血压、心衰等)外，均停用其它药物或治疗手段。
4、结果分析(1)疗效判定标准(参照1987年全国肾衰保守疗法专题学术会议拟定的标准)显效①症状减轻或消失；②内生肌酐清除率增加≥30％；③血肌酐降低≥30％。
以上①项必备，②、③具备一项，即可判定。
有效①症状减轻或消失；②内生肌酐清除率增加≥20％；③血肌酐降低≥20％。
④治疗前后以血肌酐的对数或倒数，用直线回归方程分析，其斜率有明显意义者。
以上①项必备，其它具备1项，即可判定。
无效不符合显效和有效判断条件者。
(2)疗效分析1)疗效对比见表1表1三组疗效对比
各组间进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，尤其显效率前者明显优于后者；中药治疗组与西药对照组相比，具有极显著性差异(P＜0.001)。
2)不同分期肾功能衰竭疗效分析见表2
表2不同分期肾功能衰竭疗效对比
各组同期病例疗效进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比，I期、II期无显著性差异，III期有极显著性差异(P＜0.001)。中药治疗组与西药对照组相比，三期均有极显著性差异(P＜0.01)。3)症状疗效分析见表3
表3症状疗效对比
中药治疗组与其余各组间Ridit分析*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0014)不同证型慢性肾功能衰竭的疗效比较通过临床观察，中药治疗组脾肾气虚型44例，脾肾阳虚型75例，阴阳两虚型1例；中药对照组脾肾气虚型28例，脾肾阳虚型32例，无阴阳两虚型。结果显示中药治疗组脾肾气虚型总有效率33.33％(40/120)，脾肾阳虚型总有效率51.67％(62/120)，阴阳两虚型总有效率0.83％(1/120)；中药对照组脾肾气虚型总有效率39.99％(24/60)，脾肾阳虚型总有效率31.67％(19/60)。两组疗效经X2检验脾肾气虚型无明显差异(P＞0.05)；而脾肾阳虚型总有效率中药治疗组明显优于中药对照组，有显著性差异(P＜0.01)。见表4
表4不同证型慢性肾功能衰竭的疗效比较
5)对血肌肝(Scr)、尿素氮(BUN)的影响见表5、6表5芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
表6芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血清尿素氮水平的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
6)对血Hg、Rbc见表7、8表7芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血红蛋白水平的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
表8芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血红细胞数量的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
5、随访观察(1)药物副反应随访过程中除病人表现稀软便，次数增多外，未发现其它明显毒副作用及不良反应。
(2)药物对慢性肾功能衰竭者转归的影响对芪茸保元汤中药治疗组80例患者进行一年以上远期疗效追踪观察，结果发现，凡坚持服用此药者，病情均平稳，临床症状不同程度改善或缓解，生活质量明显提高，各种检验指标未见上升趋势。17例Scr值已恢复到正常水平的I期病人，在停药后或间断服药的情况下未出现反复。
结论通过对芪茸保元汤的临床观察，我们认为芪茸保元汤无任何毒副作用，能提高免疫功能，具有对抗肾损害，维护和改善肾功能，从而提高患者生活质量和生存能力，较好地稳定肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程，值得深入探讨。
1、研究补益脾肾、温养精血、泄浊排毒对慢性肾功能衰竭整体调节作用中医认为肾为先天之本，主水，主气化，为调节机体水液代谢的重要器官。若肾脏虚衰，除本身的功能失调以外，必然累及其他脏器，首先是脾脏，因脾为后天之本，主运化水谷精微和水湿，脾主运化的功能有赖于肾阳的温煦。如肾阳不足，不能温煦脾阳而致脾肾阳虚。脾阳不振不能腐熟水谷，肾所藏之精得不到水谷精微的不断充养，致气血不足，而出现贫血证；脾肾虚衰，气化不及，升清降浊的功能受到破坏，不能及时疏导、转输、运化水液及毒物，因而造成湿浊、热毒和瘀血潴留，同时全身脏器功能失常，气机失调，致使“邪气”及机体废物(代谢产物)不能排除体外。因而形成了因虚致实，虚中夹实的复杂综合征候群。温补脾肾阳气，增强气化功能，疏泄体内浊毒，调畅机体气机，是治疗CRF的重要一环，。通过芪茸保元汤补益脾肾、温养精血、泄浊排毒对人体和模型动物的整体调节作用，使之收到较好效果，从而进一步论证了肾乃“先天之本”，脾乃“后天之本”理论的重要作用。
2、芪茸保元汤对CRF的作用机理芪茸保元汤方中主要药物黄芪补益脾气，以资生血之源；当归养血活血，两药和用则阴生阳长，气旺血生；鹿茸血肉有情之品，峻补肾阳，生精益髓；山芋即能补肾阴，又能补肾阳，两药同用阴阳双补，精髓自生；大黄通腑泄浊排毒以治标证。现代药理研究表明黄芪具有提高免疫功能、增强网状内皮系统的吞噬功能、促进代谢和利尿作用；当归有抗凝及抑制纤维组织增生的作用，从而改善肾脏微循环；鹿茸能促进红细胞、血红蛋白、网状红细胞新生；大黄除具有抗凝、消炎、免疫调节和血液流变学方面的作用外，对肾脏本身的研究包括抑制尿素氮合成、缓解残存肾高代谢、抑制肾小球细胞和小管上皮细胞的增生、拮抗促肾因子刺激系膜细胞增殖的作用以及调节脂质代谢紊乱的效应。诸药合用共奏补益脾肾、温养精血、泄浊排毒的功效，从而培植元气、调畅气机、疏泄浊毒，达到改善肾功能，延缓CRF的进程与发展的作用。
3、对芪茸保元汤的疗效评价临床观察各组间进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，其中显效率前者优于后者；中药治疗组与西药对照组相比，具有极显著性差异(P＜0.001)。各组同期病例疗效进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比，I期、II期无显著性差异，III期有极显著性差异(P＜0.001)，说明芪茸保元汤对CRF各期均有效；中药治疗组与西药对照组相比，三期均有极显著性差异(P＜0.01)。中药治疗组与其余各组间症状疗效进行Ridit分析有极显著性差异(P＜0.01)。中药治疗组与中药对照组不同证型CRF的疗效比较，经X2检验，脾肾气虚型无明显差异(P＞0.05)；而脾肾阳虚型总有效率中药治疗组明显优于中药对照组，有显著性差异(P＜0.01)。对慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平、血清尿素氮水平、血红蛋白水平及血红细胞数量的影响均进行t检验，芪茸保元汤与中、西药对照组间，除对中药对照组BUN和中、西药对照组血红细胞数量的影响无明显差异外，其余各组均有显著性差异(p＜0.05和p＜0.01)；各组治疗前后进行配对t检验，中药治疗组有显著性差异(P＜0.01)，其余各组均无明显差异。
总之，我们认为该药疗效确切，使用安全，用于治疗慢性肾功能衰竭具有良好的前景。实验二芪茸保元汤对小鼠抗疲劳及免疫功能的影响芪茸保元汤是由首都医科大学宣武医院中药制剂室生产的。方中含有黄芪、鹿茸、山芋、当归等主要成分。诸药合用共奏补益脾肾，温养精血的功效，从而培植元气，调畅气机，疏泄浊毒，达到改善肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程与发展的作用。经多年临床验证对各种肾衰病人有良好的疗效。为验证其疗效，给临床用药提供药理学依据，发明人对芪茸保元汤进行了基础药效学的实验研究。
1实验材料动物清洁级昆明雌、雄性小鼠，体重22±2g，中国药品生物制品检定所提供。
药品芪茸保元汤(每毫升含生药2.3g)，批号，9807091，由首都医科大学宣武医院中药制剂室提供。
试剂明胶，Na2CO3，印度墨汁均由北京市化学试剂公司提供。
仪器751分光光度计，上海光学仪器厂生产。
2实验方法及结果2.1芪茸保元汤对小鼠抗疲劳能力的影响(参考后面所列文献1)选取雌雄性小鼠随机分为正常照组、芪茸保元汤小剂量组(17.3g生药/kg)和大剂量组(51.8g生药/kg)，每组10只动物，连续灌胃给药2周，实验当天灌胃1小时后进行实验。实验在一水深30cm，直径20cm圆形玻璃缸中进行，水温20±0.5℃。实验时在小鼠尾部系一体重10％重物，置于水中后立即计时，当小鼠头部沉入水面10秒钟不能浮出水面即为体力耗竭，即刻计时为小鼠游泳时间。
芪茸保元汤大剂量对小鼠有显著提高抗疲劳能力的作用，结果见表9，10所示表9芪茸保元汤对雄性小鼠抗疲劳能力的影响
各给药组与对照组t检验，以下各表相同表10芪茸保元汤对雌性小鼠抗疲劳能力的影响
2.2芪茸保元汤对小鼠血流中惰性碳粒吞噬能力的影响(参考后面所列文献2)按以上剂量连续灌胃给药3周，每组8只。实验当天给药1小时后，尾静脉按0.1ml/10g注入稀释墨汁，分别于30秒及6分钟时眼眶取血25微升，加入2毫升0.1％Na2CO3中。以正常鼠25微升血，加入2毫升0.1％Na2CO3所得液体校零，675nm比色，得到每只小鼠30秒及6分钟时眼眶取血所得溶液的OD值。动物取血后处死，称取肝、脾重量。按以下公式计算吞噬指数αK＝(1gC1-1gC2)/(T1-T2)α=(W/WLS)3K]]>式中C为血中碳粒浓度，T为时间，W为体重，WLS为肝脾合重。
芪茸保元汤大剂量对雄性小鼠有显著提高网状内皮系统的吞噬功能，结果见表11，12所示表11芪茸保元汤对雄性小鼠血流中惰性碳粒吞噬系数的影响
表12芪茸保元汤对雌性小鼠血流中惰性碳粒吞噬指数的影响
2.3芪茸保元汤急性毒性试验(参考后面所列文献3)芪茸保元合剂加热浓缩(每毫升含生药5.75g)。健康小鼠30只，雌雄各半，给药前1天称重，并禁食，不禁水过夜。次日实验，每只小鼠每次口服灌胃受试物0.25ml/10g，1日内给予2次，间隔5小时，每日剂量为287.5g生药/kg。给药后即刻观察动物反应，动物外观，四肢活动，摄食，饮水，排泄等，连续观察七天，称取体重。其中雄性大鼠有7只给药次日出现黑色稀便，雌性11只，2日后均转为正常。
结果小鼠口服灌胃芪茸保元汤287.2g生药/kg(相当人用量的125倍)，全部健康存活，体重增加，肉眼观察未见明显毒性反应，仅部分动物出现黑色稀变，2日后均转为正常。
3讨论慢性肾功能衰竭是由于肾脏排泄功能障碍，体内代谢产物蓄积，导致机体功能紊乱，其中体能下降，免疫功能降低是造成生存期缩短的重要因素之一，但现代治疗往往忽略这个方面。而中医认为本病的病机为脾肾阳气虚衰，气化不及，升清降浊功能破坏导致水液毒物潴留。因此温补脾肾为其大法，本方以黄芪、鹿茸为君，保元汤为佐使，共奏温肾益气助阳之功，其中黄芪现代药理研究表明具有提高免疫功能、促进代谢和利尿作用(参考后面所列文献4)，因此该方可能补充了现代治疗之不足。
本研究通过小鼠负重游泳实验表明，芪茸保元汤大剂量能显著提高雌雄小鼠抗疲劳能力。碳粒廓清实验表明，芪茸保元汤大剂量对雄性小鼠有显著提高网状内皮系统的吞噬功能，而对雌性小鼠的作用不显著，可能因为雌激素对网状内皮系统吞噬活性有一定影响。芪茸保元汤小鼠经口给药急性毒性试验结果，日最大耐受量为287.5g生药/kg(相当于人日用量125倍)无毒性作用。
因此，根据本项研究认为芪茸保元汤能提高免疫功能，增强体质，从而达到延缓肾功能衰竭，提高患者生活质量的作用。实验三芪茸保元汤对慢性肾功能衰竭治疗作用的实验研究发明人根据中医理论和现代医学研究，结合多年临床经验研制了治疗慢性肾功能不全的方剂—芪茸保元汤。为验证其疗效，给临床用药提供药理学依据，研究了芪茸保元汤对慢性肾功能不全小鼠模型的治疗作用。
1实验材料1.1动物清洁级昆明雄性小鼠，体重22±2g，中国药品生物制品检定所提供。
1.2药品芪茸保元汤(每毫升含生药2.47g)，由首都医科大学宣武医院中药制剂室提供，主要成分为黄芪、鹿茸、山萸、当归。腺嘌呤(Adenine)由上海东风生物生物技术有限公司提供。
1.3仪器7150型自动生化分析仪，购自日本日立公司。
2实验方法
2.1造模方法随机取雄性小鼠60只分别在第1天、第3天和第5天，按250mg/kg灌胃给予腺嘌呤，造成慢性肾功能不全动物模型，动物死亡约20％。随机取雄性小鼠12只给予蒸馏水，为正常对照组(参考后面所列文献5)。
2.2分组与给药将上述造模动物随机分为模型组、芪茸保元汤小剂量组(13.9g生药/kg)和大剂量组(27.8g生药/kg)，对照组仍为上述正常对照组。芪茸保元汤各剂量组每天灌胃给药1次，连续给药1个月，对照与模型组给予蒸馏水。在给药的1个月期间，每周给予腺嘌呤(250mg/kg)1次，持续造成肾损害，用以观察药物的治疗作用。
2.3测定指标 给药1各月后，各组动物均称取体重，眼眶取血分离血清，取双肾脏称平均重量。血清由自动生化分析仪测定Cr与BUN含量。
2实验结果结果表明，模型组体重显著低于对照组P＜0.001，芪茸保元汤各组体重均较模型组高，毛色等一般状况均较模型组好，大剂量组与模型组体重有显著性差异(P＜0.05＝。模型组肾重量显著低于对照组P＜0.001，各给药组与模型组无显著性差异。模型组血清Cr与BUN含量均显著高于对照组P＜0.001，芪茸保元汤各组Cr与BUN含量均较模型组显著降低P＜0.05，见表13。
表13芪茸保元汤对慢性肾功能不全小鼠体重、肾重量及血清Cr与BUN含量的影响
模型组与其余各组间进行t检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013讨论慢性肾功能衰竭是由于肾脏排泄功能障碍，体内代谢产物蓄积，导致机体功能紊乱，生活质量下降，如病情进一步发展，最终至肾功能衰竭。中医认为本病的病机为脾肾阳气虚衰，气化不及，升清降浊功能破坏导致水液毒物潴留。因此温补脾肾为其大法，本方以黄芪、鹿茸为君，保元汤为佐使，诸药合用共奏补益脾肾，温养精血的功效，从而培植元气，调畅气机，疏泄浊毒，达到改善肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程与发展的作用。
本研究采用腺嘌呤致慢性肾功能不全小鼠模型研究了该药的治疗作用。腺嘌呤灌胃后，通过机体代谢，成为2，8-二羟基嘌呤沉积于肾小管，引起肾损伤(参见后面所列文献6和7)。本研究首先给腺嘌呤3次，造成动物肾脏的基础损害，然后在治疗期间每周给腺嘌呤1次，继续造成肾损害，来模拟临床慢性肾功能不全的自然过程。研究发现芪茸保元汤具有对抗肾损害，维护功能，降低血清中Cr与BUN含量，增加模型动物的体重，改善机体一般状况作用。因此该药用于治疗慢性肾功能不全具有良好的前景。
实验四芪茸保元汤对慢性肾功能衰竭诱发贫血治疗作用的实验研究发明人根据中医理论和现代医学研究，结合多年临床经验研制了治疗慢性肾功能衰竭的方剂—芪茸保元汤。为验证其疗效，给临床用药提供药理学依据，通过动物实验研究了芪茸保元汤对慢性肾功能不全所致肾性贫血的治疗作用。
1实验材料1.1动物清洁级昆明雄性小鼠，体重22±2g，中国药品生物制品检定所提供。
1.2药品芪茸保元汤(每毫升含生药2.47g)，由首都医科大学宣武医院中药制剂室提供。腺嘌呤(Adenine)由上海东风生物生物技术有限公司提供。
1.3仪器7150型自动生化分析仪，购自日本日立公司，HCP 5220型血细胞自动分析仪，购自法国HYCEL公司。
2实验方法2.1造模方法随机取雄性小鼠80只分别在第1天、第3天和第5天，按250mg/kg灌胃给予腺嘌呤，造成慢性肾功能不全动物模型，动物死亡约20％。随机取雄性小鼠12只给予蒸馏水，为正常对照组(参见后面所列文献5)。
2.2分组与给药将上述造模动物随机分为模型组、芪茸保元汤小剂量组(13.9g生药/kg)和大剂量组(27.8g生药/kg)，对照组仍为上述正常对照组。芪茸保元汤各剂量组每天灌胃给药1次，连续给药1个月，对照与模型组给予蒸馏水。在给药的1个月期间，每周给予腺嘌呤(250mg/kg)1次，持续造成肾损害，用以观察药物的治疗作用。
2.3测定指标 给药1各月后，各组动物均称取体重。眼眶取血，50ul抗凝，余血不抗凝，分离血清。取双肾脏称平均重量。抗凝血由血细胞自动分析仪测定红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)及平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)，血清由自动生化分析仪测定肌酐(Cr)与尿素氮(BUN)含量。
2实验结果模型组血清Cr与BUN含量均显著高于对照组P＜0.001，芪茸保元汤各组Cr与BUN含量均较模型组显著降低P＜0.05，见表14。
表14芪茸保元汤对慢性肾功能不全小鼠血清Cr与BUN含量的影响
模型组与其余各组间进行t检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001模型组RBC、HGB、HCT均显著低于对照组(P＜0.001)，芪茸保元汤各组RBC、HGB、HCT均较模型组显著升高(P＜0.05)。MCV、MCH及MCHC各组间均无显著性差异，见表15。
表15芪茸保元汤对肾性贫血小鼠红细胞计数、血红蛋白含量、红细胞比积及其相关数据的影响
模型组与其余各组间进行t检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013讨论慢性肾功能衰竭是由于肾脏排泄功能障碍，体内代谢产物蓄积，导致机体功能紊乱。贫血是其主要的继发症状，发病因素包括由于肾实质破坏导致促红素生成减少；体内潴留的毒物抑制红细胞生成，使红细胞破坏增加等因素。中医认为慢性肾功能不全的病机为脾肾阳气虚衰，气化不及，升清降浊功能破坏。因此温补脾肾，升清降浊为其大法。本方以黄芪、鹿茸为君，保元汤为佐使，诸药合用共奏补益脾肾，温养精血的功效。
本研究采用腺嘌呤致慢性肾功能不全诱发肾性贫血小鼠模型观察了该药的治疗作用。腺嘌呤灌胃后，通过机体代谢，成为2，8-二羟基嘌呤沉积于肾小管，引起肾损伤(参见后面所列文献6、7)。本研究首先给腺嘌呤3次，造成动物肾脏的基础损害，然后在治疗期间每周给腺嘌呤1次，继续造成肾损害，来模拟临床慢性肾功能不全的自然过程。结果表明模型动物血清Cr及BUN均显著升高，RBC、HGB、HCT显著低于对照组，但MCV、MCH及MCHC与对照组无显著性差异，表明该模型造成的贫血为正常细胞性贫血。芪茸保元汤具有降低血清中Cr与BUN含量，增加RBC、HGB、HCT的作用，因此该药具有改善模型动物的肾功能，对肾性贫血有较好的治疗作用。
以下结合实施例来说明本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于说明的目的，不构成对本发明的任何限制。
实施例2黄芪120g 鹿茸8g 大黄20g白术90g山芋15g锁阳15g当归15g丹参20g佩兰40g车前子40g 水蛭12g牡蛎20g焦山楂10g 焦神曲10g 焦麦芽10g大枣10g甘草10g将上述原料水煎制成口服液体制剂。
实施例3黄芪80g鹿茸6g 大黄15g白术60g山芋20g锁阳10g当归30g丹参60g佩兰30g车前子40g 水蛭10g牡蛎40g大枣10g甘草10g将上述原料水煎制成口服液体制剂。
实施例4黄芪80g鹿茸5g 大黄18g白术65g山芋20g锁阳10g当归30g丹参50g焦山楂20g焦神曲20g 焦麦芽20g 大枣10g甘草10g将上述原料水煎制成口服液体制剂。
参考文献1、宗瑞义.人参镇静抗疲劳及抗高温低温作用.生理学报，1964；(4)3242、陈奇主编.中药药理实验方法.北京人民卫生出版社，1994.7573、王北婴主编.中药新药研制与审批.北京中国中医药出版社，1995.2484、王筠默主编.中药药理学.上海上海科学技术出版社，1994.1105.郑平东，朱燕俐，丁名城，候卫国，钟念文.用腺嘌呤制作慢性肾功能衰竭动物模型中.华肾脏病杂志，1989，5(6)342-3446.Shields C.E.，et al.Investigation of nephrotoxic effects ofadenine and its metabolic product，2，8-dioxyadenine on primates(macaca irus).JClin Pharmacol.1970；103167.Lindblad G.et al.Adenine toxicityA three week intravenousstudy in dogs.Acta Pharmacol Toxicol 1973；3224权利要求
1.一种用于预防和/或治疗各种原因造成的慢性肾功能衰减的药物组合物，特征在于它包括按重量份计的以下原料黄芪10-150鹿茸1-10 大黄5-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 佩兰0-60车前子0-60水蛭0-20 牡蛎10-60山楂0-30 神曲0-30 麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
2.根据权利要求1的药物组合物，特征在于各原料的配比是黄芪15-120鹿茸1.5-8大黄6-25白术15-100山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参15-90牡蛎10-60车前子0-60水蛭0-15 佩兰0-60山楂0-30 神曲0-30 麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
3.根据权利要求1的药物组合物，特征在于各原料的配比是黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 佩兰10-60车前子10-60 水蛭5-15 生牡蛎10-60。
4.根据权利要求1的药物组合物，特征在于各原料的配比是黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 生牡蛎10-60焦神曲10-30 焦麦芽10-30 焦山楂10-30甘草6-10 大枣5-20。
5.制备权利要求1-4中任一项的药物组合物的方法，包括取所述原料水煎制成口服液体制剂。
6.根据权利要求1-4中任一项药物组合物，其特征在于它可以是任何一种适合用于临床的剂型。
7.权利要求1-4中任一项的药物组合物，其特征在于它还可以含有其它任选成分，例如一味或多味其它中药原料。
8.权利要求1-4中任一项的药物组合物，其特征在于它可以与治疗慢性肾功能衰减的西药一起应用制成中西药复方制剂。
全文摘要
本发明涉及一种治疗和/或预防慢性肾功能衰减的药物,具体说是延缓慢性肾功能衰竭的药物组合物。又名“芪茸保元汤”。本发明药物应用于临床和动物实验,结果发现可显著改善慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平、血清尿素氮水平、血红蛋白水平及增加血红细胞数量;提高小鼠的抗疲劳及免疫功能;改善慢性肾功能不全小鼠的体重、肾重量、血清Cr和BUN;以及改善小鼠的由慢性肾功能衰减诱发的贫血。
文档编号A61K35/62GK1363375SQ0210032
公开日2002年8月14日 申请日期2002年1月10日 优先权日2002年1月10日
发明者孙淑玲, 李斌 申请人:首都医科大学宣武医院
技术领域：
本发明涉及一种治疗和/或预防慢性肾功能衰减的药物，具体说是延缓慢性肾功能衰竭的药物组合物。又名“芪茸保元汤”。
因此，对于有效而且低费用的预防和治疗肾功能衰减的药物存在着迫切的需求。
发明人根据中医理论和现代医学研究，结合多年临床经验，从数千年浩瀚的中药中有依据地精心筛选出十几种中药组成方剂，应用于临床和动物实验，结果发现本发明药物可显著改善慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平、血清尿素氮水平、血红蛋白水平及增加血红细胞数量；提高小鼠的抗疲劳及免疫功能；改善慢性肾功能不全小鼠的体重、肾重量、血清Cr和BUN；以及改善小鼠的由慢性肾功能衰减诱发的贫血，并由此完成了本发明。
本发明的药物组合物包括按重量份计的以下原料黄芪10-150鹿茸1-10 大黄5-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 佩兰0-60车前子0-60水蛭0-20 牡蛎10-60山楂0-30 神曲0-30 麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
根据本发明的一个优选实施方案，本发明的药物组合物包括黄芪15-120鹿茸1.5-8大黄6-25白术15-100山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参15-90牡蛎10-60
车前子0-60水蛭0-15佩兰0-60山楂0-30 神曲0-30麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
其中牡蛎优选用生牡蛎，山楂优选用焦山楂，神曲优选用焦神曲，麦芽优选用焦麦芽。
根据本发明的进一步优选实施方案，本发明的药物组合物包括黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 生牡蛎10-60车前子10-60 水蛭5-15 佩兰10-60。
本方案适合用于慢性肾衰水肿较甚者。
根据本发明的另一个进一步优选的实施方案，本发明的药物组合物包括黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 生牡蛎10-60焦神曲10-30 焦麦芽10-30 焦山楂10-30甘草6-10 大枣5-20本方案适合用于慢性肾衰消化道症状如纳差、呕呃等较为突出者。
方中含有黄芪、鹿茸、大黄等主要成分，具有补益脾肾，温养精血，疏泄浊毒的功效，从而培植元气，调畅气机，达到保护肾脏，改善肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程与发展的作用，故命名为芪茸保元汤。该方主要治疗脾肾气(阳)虚型和阴阳两虚型，兼有湿浊、血瘀证的慢性肾功能衰竭。
本处方属临床经验方。方中首选黄芪、鹿茸、大黄为主药。黄芪补益脾气，以资生血之源；鹿茸血肉有情之品，峻补肾阳，生精益髓；大黄通腑泄浊排毒以治标；三药合用补脾益肾，降浊排毒。白术、山芋、锁阳、当归、丹参为辅药。白术健脾益气，燥湿行水，增强运化功能，助黄芪以益气健脾，使之补气而不滞；山芋既能补肾阳，有能补肾阴；锁阳补肾阳，益精血；三药既助鹿茸温补肾阳，又补肾阴，益精血，使之阴阳双补，精血自生；当归、丹参养血活血，配以黄芪既阴生阳长，气旺血生，又活血祛瘀，疏通血脉。佩兰、车前子、水蛭、生牡蛎、焦山楂、焦神曲、焦麦芽、大枣、甘草为佐使药。佩兰芳化湿浊、车前子有较强的利水渗湿作用，同黄芪、白术相配，使湿去脾健；水蛭破血逐瘀，利水道，加强当归、丹参、佩兰、车前子的药物疗效；生牡蛎化痰软坚除湿，偏走下窍(精窍、尿窍)；焦三仙健胃消食降逆；大枣、甘草甘平健脾和胃、同黄芪、白术，共成益气健脾，养心安神之功，又能缓和药性，调和诸药。
本发明的药物组合物可以制成任何一种适合于临床常用的剂型，例如丸剂、散剂、胶囊、口服液、浓缩丸剂、颗粒制剂等。
例如，将本发明组合物制成口服液制剂的方法是取所述原料，用水煎2次，取2次的上层液体，包装即可。
例如，将本发明组合物制成散剂的方法是取所述原料，清洗，晾干，粉碎，过筛，再装袋。
需要说明的是，本发明的组合物还可以含有其它任选成分，例如改善慢性肾衰病人相应症状的中药原料；同时本发明的药物组合物也可以与治疗慢性肾衰的西药一起应用制成中西药复方制剂。因此在本发明组合物的基础上增加一味或多味中药原料，或者将本发明组合物与西药制成的复方制剂也属于本发明保护的范围。这些任选成分的量一般在本发明组合物总量的50％以下，优选20％以下。
实验一芪茸保元汤延缓慢性肾功能衰竭疗效观察于1997年10月至2000年10月，为了客观评价芪茸保元汤的疗效及安全性，发明人对240例慢性肾功能衰竭(CRF)患者进行了全面系统的临床观察。
1、一般资料本临床观察病例均系我院门诊及部分住院病人，共240例，中药治疗组120例，中、西药对照组各60例。其中中药治疗组男52例，女68例，年龄最大83岁，最小23岁，平均年龄60.68岁，病程最短一个月，最长八年；中药对照组男26例，女34例，年龄最大82岁，最小20岁，平均年龄56.83岁，病程最短一个月，最长四年；西药对照组男25例，女35例，年龄最大79岁，最小22岁，平均年龄58.92岁，病程最短二个月，最长七年。原发病中，慢性肾小球肾炎67例，高血压肾病64例，糖尿病肾病36例，多囊肾5例，肾盂肾炎5例，其它疾病19例，病因不明者44例。
2、诊断标准(1)西医诊断标准参照1992年安徽太平肾脏病会议上制定的慢性肾衰诊断标准及分期中的I-III期。
(2)中医辩证分型标准参照1986年第二界全国中医肾病学术会议讨论修改的辩证分型方案中脾肾气(阳)虚和阴阳两虚型。
3、治疗方法(1)中药治疗组芪茸保元汤内服，每日4次，每次25ml；(2)中药对照组尿毒清冲剂，温开水冲服，每日4次，每次5g；(3)西药对照组包醛氧化淀粉，温开水冲服，每日3次，每次5g；(4)疗程两个月为一个疗程。治疗期间除对证治疗(如高血压、心衰等)外，均停用其它药物或治疗手段。
4、结果分析(1)疗效判定标准(参照1987年全国肾衰保守疗法专题学术会议拟定的标准)显效①症状减轻或消失；②内生肌酐清除率增加≥30％；③血肌酐降低≥30％。
以上①项必备，②、③具备一项，即可判定。
有效①症状减轻或消失；②内生肌酐清除率增加≥20％；③血肌酐降低≥20％。
④治疗前后以血肌酐的对数或倒数，用直线回归方程分析，其斜率有明显意义者。
以上①项必备，其它具备1项，即可判定。
无效不符合显效和有效判断条件者。
(2)疗效分析1)疗效对比见表1表1三组疗效对比
各组间进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，尤其显效率前者明显优于后者；中药治疗组与西药对照组相比，具有极显著性差异(P＜0.001)。
2)不同分期肾功能衰竭疗效分析见表2
表2不同分期肾功能衰竭疗效对比
各组同期病例疗效进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比，I期、II期无显著性差异，III期有极显著性差异(P＜0.001)。中药治疗组与西药对照组相比，三期均有极显著性差异(P＜0.01)。3)症状疗效分析见表3
表3症状疗效对比
中药治疗组与其余各组间Ridit分析*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0014)不同证型慢性肾功能衰竭的疗效比较通过临床观察，中药治疗组脾肾气虚型44例，脾肾阳虚型75例，阴阳两虚型1例；中药对照组脾肾气虚型28例，脾肾阳虚型32例，无阴阳两虚型。结果显示中药治疗组脾肾气虚型总有效率33.33％(40/120)，脾肾阳虚型总有效率51.67％(62/120)，阴阳两虚型总有效率0.83％(1/120)；中药对照组脾肾气虚型总有效率39.99％(24/60)，脾肾阳虚型总有效率31.67％(19/60)。两组疗效经X2检验脾肾气虚型无明显差异(P＞0.05)；而脾肾阳虚型总有效率中药治疗组明显优于中药对照组，有显著性差异(P＜0.01)。见表4
表4不同证型慢性肾功能衰竭的疗效比较
5)对血肌肝(Scr)、尿素氮(BUN)的影响见表5、6表5芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
表6芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血清尿素氮水平的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
6)对血Hg、Rbc见表7、8表7芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血红蛋白水平的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
表8芪茸保元汤中药治疗组及中、西药对照组对慢性肾功能衰竭患者血红细胞数量的影响
芪茸保元汤与其他组间进行t检验，*p＜0.05，**p＜0.01；各组治疗前后进行配对t检验，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。
5、随访观察(1)药物副反应随访过程中除病人表现稀软便，次数增多外，未发现其它明显毒副作用及不良反应。
(2)药物对慢性肾功能衰竭者转归的影响对芪茸保元汤中药治疗组80例患者进行一年以上远期疗效追踪观察，结果发现，凡坚持服用此药者，病情均平稳，临床症状不同程度改善或缓解，生活质量明显提高，各种检验指标未见上升趋势。17例Scr值已恢复到正常水平的I期病人，在停药后或间断服药的情况下未出现反复。
结论通过对芪茸保元汤的临床观察，我们认为芪茸保元汤无任何毒副作用，能提高免疫功能，具有对抗肾损害，维护和改善肾功能，从而提高患者生活质量和生存能力，较好地稳定肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程，值得深入探讨。
1、研究补益脾肾、温养精血、泄浊排毒对慢性肾功能衰竭整体调节作用中医认为肾为先天之本，主水，主气化，为调节机体水液代谢的重要器官。若肾脏虚衰，除本身的功能失调以外，必然累及其他脏器，首先是脾脏，因脾为后天之本，主运化水谷精微和水湿，脾主运化的功能有赖于肾阳的温煦。如肾阳不足，不能温煦脾阳而致脾肾阳虚。脾阳不振不能腐熟水谷，肾所藏之精得不到水谷精微的不断充养，致气血不足，而出现贫血证；脾肾虚衰，气化不及，升清降浊的功能受到破坏，不能及时疏导、转输、运化水液及毒物，因而造成湿浊、热毒和瘀血潴留，同时全身脏器功能失常，气机失调，致使“邪气”及机体废物(代谢产物)不能排除体外。因而形成了因虚致实，虚中夹实的复杂综合征候群。温补脾肾阳气，增强气化功能，疏泄体内浊毒，调畅机体气机，是治疗CRF的重要一环，。通过芪茸保元汤补益脾肾、温养精血、泄浊排毒对人体和模型动物的整体调节作用，使之收到较好效果，从而进一步论证了肾乃“先天之本”，脾乃“后天之本”理论的重要作用。
2、芪茸保元汤对CRF的作用机理芪茸保元汤方中主要药物黄芪补益脾气，以资生血之源；当归养血活血，两药和用则阴生阳长，气旺血生；鹿茸血肉有情之品，峻补肾阳，生精益髓；山芋即能补肾阴，又能补肾阳，两药同用阴阳双补，精髓自生；大黄通腑泄浊排毒以治标证。现代药理研究表明黄芪具有提高免疫功能、增强网状内皮系统的吞噬功能、促进代谢和利尿作用；当归有抗凝及抑制纤维组织增生的作用，从而改善肾脏微循环；鹿茸能促进红细胞、血红蛋白、网状红细胞新生；大黄除具有抗凝、消炎、免疫调节和血液流变学方面的作用外，对肾脏本身的研究包括抑制尿素氮合成、缓解残存肾高代谢、抑制肾小球细胞和小管上皮细胞的增生、拮抗促肾因子刺激系膜细胞增殖的作用以及调节脂质代谢紊乱的效应。诸药合用共奏补益脾肾、温养精血、泄浊排毒的功效，从而培植元气、调畅气机、疏泄浊毒，达到改善肾功能，延缓CRF的进程与发展的作用。
3、对芪茸保元汤的疗效评价临床观察各组间进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，其中显效率前者优于后者；中药治疗组与西药对照组相比，具有极显著性差异(P＜0.001)。各组同期病例疗效进行Ridit分析，中药治疗组与中药对照组相比，I期、II期无显著性差异，III期有极显著性差异(P＜0.001)，说明芪茸保元汤对CRF各期均有效；中药治疗组与西药对照组相比，三期均有极显著性差异(P＜0.01)。中药治疗组与其余各组间症状疗效进行Ridit分析有极显著性差异(P＜0.01)。中药治疗组与中药对照组不同证型CRF的疗效比较，经X2检验，脾肾气虚型无明显差异(P＞0.05)；而脾肾阳虚型总有效率中药治疗组明显优于中药对照组，有显著性差异(P＜0.01)。对慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平、血清尿素氮水平、血红蛋白水平及血红细胞数量的影响均进行t检验，芪茸保元汤与中、西药对照组间，除对中药对照组BUN和中、西药对照组血红细胞数量的影响无明显差异外，其余各组均有显著性差异(p＜0.05和p＜0.01)；各组治疗前后进行配对t检验，中药治疗组有显著性差异(P＜0.01)，其余各组均无明显差异。
总之，我们认为该药疗效确切，使用安全，用于治疗慢性肾功能衰竭具有良好的前景。实验二芪茸保元汤对小鼠抗疲劳及免疫功能的影响芪茸保元汤是由首都医科大学宣武医院中药制剂室生产的。方中含有黄芪、鹿茸、山芋、当归等主要成分。诸药合用共奏补益脾肾，温养精血的功效，从而培植元气，调畅气机，疏泄浊毒，达到改善肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程与发展的作用。经多年临床验证对各种肾衰病人有良好的疗效。为验证其疗效，给临床用药提供药理学依据，发明人对芪茸保元汤进行了基础药效学的实验研究。
1实验材料动物清洁级昆明雌、雄性小鼠，体重22±2g，中国药品生物制品检定所提供。
药品芪茸保元汤(每毫升含生药2.3g)，批号，9807091，由首都医科大学宣武医院中药制剂室提供。
试剂明胶，Na2CO3，印度墨汁均由北京市化学试剂公司提供。
仪器751分光光度计，上海光学仪器厂生产。
2实验方法及结果2.1芪茸保元汤对小鼠抗疲劳能力的影响(参考后面所列文献1)选取雌雄性小鼠随机分为正常照组、芪茸保元汤小剂量组(17.3g生药/kg)和大剂量组(51.8g生药/kg)，每组10只动物，连续灌胃给药2周，实验当天灌胃1小时后进行实验。实验在一水深30cm，直径20cm圆形玻璃缸中进行，水温20±0.5℃。实验时在小鼠尾部系一体重10％重物，置于水中后立即计时，当小鼠头部沉入水面10秒钟不能浮出水面即为体力耗竭，即刻计时为小鼠游泳时间。
芪茸保元汤大剂量对小鼠有显著提高抗疲劳能力的作用，结果见表9，10所示表9芪茸保元汤对雄性小鼠抗疲劳能力的影响
各给药组与对照组t检验，以下各表相同表10芪茸保元汤对雌性小鼠抗疲劳能力的影响
2.2芪茸保元汤对小鼠血流中惰性碳粒吞噬能力的影响(参考后面所列文献2)按以上剂量连续灌胃给药3周，每组8只。实验当天给药1小时后，尾静脉按0.1ml/10g注入稀释墨汁，分别于30秒及6分钟时眼眶取血25微升，加入2毫升0.1％Na2CO3中。以正常鼠25微升血，加入2毫升0.1％Na2CO3所得液体校零，675nm比色，得到每只小鼠30秒及6分钟时眼眶取血所得溶液的OD值。动物取血后处死，称取肝、脾重量。按以下公式计算吞噬指数αK＝(1gC1-1gC2)/(T1-T2)α=(W/WLS)3K]]>式中C为血中碳粒浓度，T为时间，W为体重，WLS为肝脾合重。
芪茸保元汤大剂量对雄性小鼠有显著提高网状内皮系统的吞噬功能，结果见表11，12所示表11芪茸保元汤对雄性小鼠血流中惰性碳粒吞噬系数的影响
表12芪茸保元汤对雌性小鼠血流中惰性碳粒吞噬指数的影响
2.3芪茸保元汤急性毒性试验(参考后面所列文献3)芪茸保元合剂加热浓缩(每毫升含生药5.75g)。健康小鼠30只，雌雄各半，给药前1天称重，并禁食，不禁水过夜。次日实验，每只小鼠每次口服灌胃受试物0.25ml/10g，1日内给予2次，间隔5小时，每日剂量为287.5g生药/kg。给药后即刻观察动物反应，动物外观，四肢活动，摄食，饮水，排泄等，连续观察七天，称取体重。其中雄性大鼠有7只给药次日出现黑色稀便，雌性11只，2日后均转为正常。
结果小鼠口服灌胃芪茸保元汤287.2g生药/kg(相当人用量的125倍)，全部健康存活，体重增加，肉眼观察未见明显毒性反应，仅部分动物出现黑色稀变，2日后均转为正常。
3讨论慢性肾功能衰竭是由于肾脏排泄功能障碍，体内代谢产物蓄积，导致机体功能紊乱，其中体能下降，免疫功能降低是造成生存期缩短的重要因素之一，但现代治疗往往忽略这个方面。而中医认为本病的病机为脾肾阳气虚衰，气化不及，升清降浊功能破坏导致水液毒物潴留。因此温补脾肾为其大法，本方以黄芪、鹿茸为君，保元汤为佐使，共奏温肾益气助阳之功，其中黄芪现代药理研究表明具有提高免疫功能、促进代谢和利尿作用(参考后面所列文献4)，因此该方可能补充了现代治疗之不足。
本研究通过小鼠负重游泳实验表明，芪茸保元汤大剂量能显著提高雌雄小鼠抗疲劳能力。碳粒廓清实验表明，芪茸保元汤大剂量对雄性小鼠有显著提高网状内皮系统的吞噬功能，而对雌性小鼠的作用不显著，可能因为雌激素对网状内皮系统吞噬活性有一定影响。芪茸保元汤小鼠经口给药急性毒性试验结果，日最大耐受量为287.5g生药/kg(相当于人日用量125倍)无毒性作用。
因此，根据本项研究认为芪茸保元汤能提高免疫功能，增强体质，从而达到延缓肾功能衰竭，提高患者生活质量的作用。实验三芪茸保元汤对慢性肾功能衰竭治疗作用的实验研究发明人根据中医理论和现代医学研究，结合多年临床经验研制了治疗慢性肾功能不全的方剂—芪茸保元汤。为验证其疗效，给临床用药提供药理学依据，研究了芪茸保元汤对慢性肾功能不全小鼠模型的治疗作用。
1实验材料1.1动物清洁级昆明雄性小鼠，体重22±2g，中国药品生物制品检定所提供。
1.2药品芪茸保元汤(每毫升含生药2.47g)，由首都医科大学宣武医院中药制剂室提供，主要成分为黄芪、鹿茸、山萸、当归。腺嘌呤(Adenine)由上海东风生物生物技术有限公司提供。
1.3仪器7150型自动生化分析仪，购自日本日立公司。
2实验方法
2.1造模方法随机取雄性小鼠60只分别在第1天、第3天和第5天，按250mg/kg灌胃给予腺嘌呤，造成慢性肾功能不全动物模型，动物死亡约20％。随机取雄性小鼠12只给予蒸馏水，为正常对照组(参考后面所列文献5)。
2.2分组与给药将上述造模动物随机分为模型组、芪茸保元汤小剂量组(13.9g生药/kg)和大剂量组(27.8g生药/kg)，对照组仍为上述正常对照组。芪茸保元汤各剂量组每天灌胃给药1次，连续给药1个月，对照与模型组给予蒸馏水。在给药的1个月期间，每周给予腺嘌呤(250mg/kg)1次，持续造成肾损害，用以观察药物的治疗作用。
2.3测定指标 给药1各月后，各组动物均称取体重，眼眶取血分离血清，取双肾脏称平均重量。血清由自动生化分析仪测定Cr与BUN含量。
2实验结果结果表明，模型组体重显著低于对照组P＜0.001，芪茸保元汤各组体重均较模型组高，毛色等一般状况均较模型组好，大剂量组与模型组体重有显著性差异(P＜0.05＝。模型组肾重量显著低于对照组P＜0.001，各给药组与模型组无显著性差异。模型组血清Cr与BUN含量均显著高于对照组P＜0.001，芪茸保元汤各组Cr与BUN含量均较模型组显著降低P＜0.05，见表13。
表13芪茸保元汤对慢性肾功能不全小鼠体重、肾重量及血清Cr与BUN含量的影响
模型组与其余各组间进行t检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013讨论慢性肾功能衰竭是由于肾脏排泄功能障碍，体内代谢产物蓄积，导致机体功能紊乱，生活质量下降，如病情进一步发展，最终至肾功能衰竭。中医认为本病的病机为脾肾阳气虚衰，气化不及，升清降浊功能破坏导致水液毒物潴留。因此温补脾肾为其大法，本方以黄芪、鹿茸为君，保元汤为佐使，诸药合用共奏补益脾肾，温养精血的功效，从而培植元气，调畅气机，疏泄浊毒，达到改善肾功能，延缓慢性肾功能衰竭的进程与发展的作用。
本研究采用腺嘌呤致慢性肾功能不全小鼠模型研究了该药的治疗作用。腺嘌呤灌胃后，通过机体代谢，成为2，8-二羟基嘌呤沉积于肾小管，引起肾损伤(参见后面所列文献6和7)。本研究首先给腺嘌呤3次，造成动物肾脏的基础损害，然后在治疗期间每周给腺嘌呤1次，继续造成肾损害，来模拟临床慢性肾功能不全的自然过程。研究发现芪茸保元汤具有对抗肾损害，维护功能，降低血清中Cr与BUN含量，增加模型动物的体重，改善机体一般状况作用。因此该药用于治疗慢性肾功能不全具有良好的前景。
实验四芪茸保元汤对慢性肾功能衰竭诱发贫血治疗作用的实验研究发明人根据中医理论和现代医学研究，结合多年临床经验研制了治疗慢性肾功能衰竭的方剂—芪茸保元汤。为验证其疗效，给临床用药提供药理学依据，通过动物实验研究了芪茸保元汤对慢性肾功能不全所致肾性贫血的治疗作用。
1实验材料1.1动物清洁级昆明雄性小鼠，体重22±2g，中国药品生物制品检定所提供。
1.2药品芪茸保元汤(每毫升含生药2.47g)，由首都医科大学宣武医院中药制剂室提供。腺嘌呤(Adenine)由上海东风生物生物技术有限公司提供。
1.3仪器7150型自动生化分析仪，购自日本日立公司，HCP 5220型血细胞自动分析仪，购自法国HYCEL公司。
2实验方法2.1造模方法随机取雄性小鼠80只分别在第1天、第3天和第5天，按250mg/kg灌胃给予腺嘌呤，造成慢性肾功能不全动物模型，动物死亡约20％。随机取雄性小鼠12只给予蒸馏水，为正常对照组(参见后面所列文献5)。
2.2分组与给药将上述造模动物随机分为模型组、芪茸保元汤小剂量组(13.9g生药/kg)和大剂量组(27.8g生药/kg)，对照组仍为上述正常对照组。芪茸保元汤各剂量组每天灌胃给药1次，连续给药1个月，对照与模型组给予蒸馏水。在给药的1个月期间，每周给予腺嘌呤(250mg/kg)1次，持续造成肾损害，用以观察药物的治疗作用。
2.3测定指标 给药1各月后，各组动物均称取体重。眼眶取血，50ul抗凝，余血不抗凝，分离血清。取双肾脏称平均重量。抗凝血由血细胞自动分析仪测定红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)及平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)，血清由自动生化分析仪测定肌酐(Cr)与尿素氮(BUN)含量。
2实验结果模型组血清Cr与BUN含量均显著高于对照组P＜0.001，芪茸保元汤各组Cr与BUN含量均较模型组显著降低P＜0.05，见表14。
表14芪茸保元汤对慢性肾功能不全小鼠血清Cr与BUN含量的影响
模型组与其余各组间进行t检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001模型组RBC、HGB、HCT均显著低于对照组(P＜0.001)，芪茸保元汤各组RBC、HGB、HCT均较模型组显著升高(P＜0.05)。MCV、MCH及MCHC各组间均无显著性差异，见表15。
表15芪茸保元汤对肾性贫血小鼠红细胞计数、血红蛋白含量、红细胞比积及其相关数据的影响
模型组与其余各组间进行t检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013讨论慢性肾功能衰竭是由于肾脏排泄功能障碍，体内代谢产物蓄积，导致机体功能紊乱。贫血是其主要的继发症状，发病因素包括由于肾实质破坏导致促红素生成减少；体内潴留的毒物抑制红细胞生成，使红细胞破坏增加等因素。中医认为慢性肾功能不全的病机为脾肾阳气虚衰，气化不及，升清降浊功能破坏。因此温补脾肾，升清降浊为其大法。本方以黄芪、鹿茸为君，保元汤为佐使，诸药合用共奏补益脾肾，温养精血的功效。
本研究采用腺嘌呤致慢性肾功能不全诱发肾性贫血小鼠模型观察了该药的治疗作用。腺嘌呤灌胃后，通过机体代谢，成为2，8-二羟基嘌呤沉积于肾小管，引起肾损伤(参见后面所列文献6、7)。本研究首先给腺嘌呤3次，造成动物肾脏的基础损害，然后在治疗期间每周给腺嘌呤1次，继续造成肾损害，来模拟临床慢性肾功能不全的自然过程。结果表明模型动物血清Cr及BUN均显著升高，RBC、HGB、HCT显著低于对照组，但MCV、MCH及MCHC与对照组无显著性差异，表明该模型造成的贫血为正常细胞性贫血。芪茸保元汤具有降低血清中Cr与BUN含量，增加RBC、HGB、HCT的作用，因此该药具有改善模型动物的肾功能，对肾性贫血有较好的治疗作用。
以下结合实施例来说明本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于说明的目的，不构成对本发明的任何限制。
实施例2黄芪120g 鹿茸8g 大黄20g白术90g山芋15g锁阳15g当归15g丹参20g佩兰40g车前子40g 水蛭12g牡蛎20g焦山楂10g 焦神曲10g 焦麦芽10g大枣10g甘草10g将上述原料水煎制成口服液体制剂。
实施例3黄芪80g鹿茸6g 大黄15g白术60g山芋20g锁阳10g当归30g丹参60g佩兰30g车前子40g 水蛭10g牡蛎40g大枣10g甘草10g将上述原料水煎制成口服液体制剂。
实施例4黄芪80g鹿茸5g 大黄18g白术65g山芋20g锁阳10g当归30g丹参50g焦山楂20g焦神曲20g 焦麦芽20g 大枣10g甘草10g将上述原料水煎制成口服液体制剂。
参考文献1、宗瑞义.人参镇静抗疲劳及抗高温低温作用.生理学报，1964；(4)3242、陈奇主编.中药药理实验方法.北京人民卫生出版社，1994.7573、王北婴主编.中药新药研制与审批.北京中国中医药出版社，1995.2484、王筠默主编.中药药理学.上海上海科学技术出版社，1994.1105.郑平东，朱燕俐，丁名城，候卫国，钟念文.用腺嘌呤制作慢性肾功能衰竭动物模型中.华肾脏病杂志，1989，5(6)342-3446.Shields C.E.，et al.Investigation of nephrotoxic effects ofadenine and its metabolic product，2，8-dioxyadenine on primates(macaca irus).JClin Pharmacol.1970；103167.Lindblad G.et al.Adenine toxicityA three week intravenousstudy in dogs.Acta Pharmacol Toxicol 1973；3224权利要求
1.一种用于预防和/或治疗各种原因造成的慢性肾功能衰减的药物组合物，特征在于它包括按重量份计的以下原料黄芪10-150鹿茸1-10 大黄5-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 佩兰0-60车前子0-60水蛭0-20 牡蛎10-60山楂0-30 神曲0-30 麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
2.根据权利要求1的药物组合物，特征在于各原料的配比是黄芪15-120鹿茸1.5-8大黄6-25白术15-100山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参15-90牡蛎10-60车前子0-60水蛭0-15 佩兰0-60山楂0-30 神曲0-30 麦芽0-30大枣0-20 甘草0-10。
3.根据权利要求1的药物组合物，特征在于各原料的配比是黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 佩兰10-60车前子10-60 水蛭5-15 生牡蛎10-60。
4.根据权利要求1的药物组合物，特征在于各原料的配比是黄芪10-150鹿茸1-10 大黄6-30白术10-120山芋10-30锁阳6-15当归10-60 丹参10-100 生牡蛎10-60焦神曲10-30 焦麦芽10-30 焦山楂10-30甘草6-10 大枣5-20。
5.制备权利要求1-4中任一项的药物组合物的方法，包括取所述原料水煎制成口服液体制剂。
6.根据权利要求1-4中任一项药物组合物，其特征在于它可以是任何一种适合用于临床的剂型。
7.权利要求1-4中任一项的药物组合物，其特征在于它还可以含有其它任选成分，例如一味或多味其它中药原料。
8.权利要求1-4中任一项的药物组合物，其特征在于它可以与治疗慢性肾功能衰减的西药一起应用制成中西药复方制剂。
全文摘要
本发明涉及一种治疗和/或预防慢性肾功能衰减的药物,具体说是延缓慢性肾功能衰竭的药物组合物。又名“芪茸保元汤”。本发明药物应用于临床和动物实验,结果发现可显著改善慢性肾功能衰竭患者血清肌酐水平、血清尿素氮水平、血红蛋白水平及增加血红细胞数量;提高小鼠的抗疲劳及免疫功能;改善慢性肾功能不全小鼠的体重、肾重量、血清Cr和BUN;以及改善小鼠的由慢性肾功能衰减诱发的贫血。
文档编号A61K35/62GK1363375SQ0210032
公开日2002年8月14日 申请日期2002年1月10日 优先权日2002年1月10日
发明者孙淑玲, 李斌 申请人:首都医科大学宣武医院
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