一种白茅根提取物的用途及制备方法

专利名称：：一种白茅根提取物的用途及制备方法
技术领域：
：本发明涉及了一种具有抗肿瘤(抗癌)作用的中药，从白茅根提取的化合物中制备具有抗肿瘤(抗癌)作用的提取物的方法。
背景技术：
：白茅根为禾本禾斗植物白茅(ImperatacylindricalBcauv.Var.major(Nees)C.E.Hubb.)的干燥根茎，又名兰根，地筋，白花茅根，茅草根，甜草根等，其根色白，呈竹节状，春秋两季采挖，洗净，晾干，除去须根及膜质叶鞘，捆成小把，广泛分布于全国各地，资源丰富。白茅根始载于《神农本草经》，自古以来即被我国人民视为具有止血、消炎、利尿作用而加以利用，国内外部分地区早已开始了对白茅根资源的开发利用。白茅根是一味重要的中医传统常用中药，已经被载入1995年、2000年和2005年版；《中华人民共和国药典》。白茅根味甘，性寒，归肺、胃、膀胱经，具有凉血止血、清热利尿之功效。用于治疗热病烦渴，吐血、尿血、热淋涩痛、小便不利、水肿和黄疸等症。有人分析白茅根的主要化学成分是以糖类和三萜类化合物为主，到目前为止已确定白茅根中含有大量的单糖、低聚糖和多糖，并且确定了9个五环三萜类化合物.以芦竹素和白茅素等羊齿烷，包括羊齿烯醇型及乔木萜烷型三萜类化合物为主，异乔木萜醇，乔木萜醇，西米杜鹃醇，乔木萜醇甲醚，乔木萜酮，木栓酮.有文献报道白茅根还含有内酯、甘露醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖，草酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸，大量的钾盐，2谷甾醇、油菜甾醇、豆甾醇以及木犀草啶.近年来，人们对白茅根进行了多方面的研究，发现白茅根煎剂中有一些抗菌活性成分，对弗氏，宋内氏痢疾杆菌有明显的抑菌作用。在传统中医中药学研究中，均采用白茅根治疗血热吐血、衄血、尿血及急性肾炎等症。在临床应用上，白茅根则主要用于治疗急性传染性肝炎，主要症状大多在10天内消失，未见副作用.另据报道，白茅根对提高乙型肝炎表面抗原阳性的转阴率有显著效果。近年来公开文献报道了一些白茅根化学成分及药理作用的研究内容，例如王明雷，王素贤，孙启时在《沈阳药科大学学报》发表了"白茅根化学及药理研究进展"的文章，本文对白茅根的化学和药理研究进展进行了综述，包括自该中药中分得一些重要的化学成分如三萜类化合物、内酯、甾醇及有机酸等，以及有关其止血、利尿、抗菌和抗肝炎等活性研允。吕世静，黄槐莲，袁汉尧等在《中国新药杂志》发表了"白茅根多糖对人T淋巴细胞免疫调节效应的研究"的文章，研究白茅根多糖对经植物血凝素诱导的人外周血T淋巴细胞增殖与细胞周期的影响，以MTT比色法及流式细胞术检测。结果证明白茅根多糖对植物血凝素诱导的正常人外周血T淋巴细胞增殖有显著的促进作用(P<0.05)，并能促进细胞从Gl期进入S期。结论白茅根多糖具有调节人外周血T淋巴细胞免疫功能的效应。泰山医学院药学院的孙立彦、山东师范大学生命科学院的高允生、赵遵田等在《中国医院药学杂志》研究了白茅根多糖对小鼠耐缺氧作用的影响。方法超声提取RIP。60只小鼠随机分为6组，分别灌胃给予生理盐水、普萘洛尔和不同剂量的白茅根多糖，观察小鼠缺氧存活时间和耗氧量。结果灌胃给予白茅根多糖50，100，200，400mg'kg—工和普萘洛尔20mgkg—、使小鼠05min的耗氧量分别降低2.48%，23.14%，10.74%，5.79%和28.93%，510min的耗氧量分别降低21.13%，16.90%，38.73%和9.86%。灌胃给予氯化钠注射液、普萘洛尔20mg.kg—1和白茅根多糖50，100，200，400mg*kg—、小鼠缺氧30min存活率分别为0，0，20%，10%，50%，20%。普萘洛尔组、白茅根多糖200mgkg—1和400mgkg—1组，小鼠的缺氧存活时间分别延长33.16%，37.31%和35.23%。结论白茅根多糖能明显增强实验小鼠的耐缺氧作用。
发明内容本发明的目的是确定传统中药白茅根的新药理作用——抗肿瘤(抗癌)作用，从白茅根中提取出具有抗肿瘤作用提取物的提取方法，并用这些提取物作为制备抗肿瘤(抗癌)作用药物的原料，从而更好的利用我国中草药资源，丰富中草药治疗疾病的领域。本发明通过对白茅根药材的提取物进行研究，发现白茅根提取物具有抗肿瘤(抗癌)作用，在体外的抗癌试验研究表明其提取物有良好的抗肿瘤作用。本发明的技术方案如下1、白茅根抗癌(肿瘤)提取物的制备具有抗癌作用的水提物的提取方法。本发明所述的提取方法采用通常的制药工艺和方法，均已提取物中含有抗肿瘤(抗癌)作用的成分为原则。2、体外实验，采用MTT法测定白茅根水提物对人肝癌细胞株H印G2、人大肠腺癌细胞株SW-480的生长抑制情况，为白茅根水提取物抗肿瘤(抗癌)作用的下一步研究奠定g石出。以下是实施方式—、白茅根有效物质组的提取提取前的处理先将白茅根原料粉碎，制成粗粉。提取方法将白茅根粗粉加水进行热提，合并水提液，过滤，滤液在不超过一定温度下减压浓縮，再冷冻干燥，即得到白茅根水提有效物质组。二、白茅根有效物质组的药理研究本发明通过对白茅根提取物的药理实验研究结果表明，在体外的抗癌试验中，其有良好的抗肝癌、腺癌的效果。体外抗癌作用实验——MTT法1、实验材料1.1白茅根提取物自制，临用前用二甲基亚砜助溶后除菌过滤备用1.2肿瘤细胞株肝癌细胞株H印G2、人大肠腺癌细胞株SW-480均购自于上海细胞生物研究所细胞库。1.3实验试剂溴化四氮唑蓝(MTT)，Sigma公司；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；DMEM培养基、胰酶为美国GIBCO公司；匿SO为天津市博迪化工有限公司。1.4实验仪器C02培养箱，长沙华曦电子科技有限公司；低温冰箱(-8(TC，InnovaU570)，武汉理想科学仪器有限公司；超净工作台，苏州佳宝净化工程设备有限公司；低速4离心机，北京时代北利离心机有限公司；倒置显微镜，上海万衡精密仪器有限公司；酶标仪(Sunrise)，北京东胜创新生物科技有限公司。2、实验方法2.1MTT法将细胞经胰酶消化后计数，制成6X104个/ml的细胞悬液，以100yL/孔接种于96孔板中，培养24h后，每孔加药物溶液100L，每孔总液量为200yL，每个药物浓度设5个重复孔，并设空白对照(DMEM培养液)。培养48h后，弃去原培养液，在96孔板中每孔加入100iiLDMEM培养液，再加入5mg.mL—^TT20yL，继续培养4h，弃上清液，每孔加入DMSO150iiL，振荡5min后，在酶标仪测0D49。nm值。细胞生长抑制率=(对照组OD值-试验组OD值)/对照组ODX100%。2.2统计学处理以SPSS15.0统计软件分析，两组间的均数比较采用t检验。3、实验结果MTT法测定不同提取方法得到的各白茅根提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果见表表一、白茅根提取物对肝癌细胞株H印G2的生长抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表二、白茅根提取物对人大肠腺癌细胞株SW-480的生长抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>4、结论在体外实验中，白茅根提取物对肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用。权利要求一种白茅根提取物的用途，其特征在于用白茅根提取物制备抗肿瘤和抗癌作用的药物。2.如权利要求1所述的具有抗癌作用的白茅根提取物，其特征在于包含对白茅根进行水提取得到的提取物。3.根据权利要求2所述的具有抗癌作用的提取物的应用方法，其特征在于将从白茅根中提取的有效化学物质组做成以下制剂或剂型口服给药制剂口服液、片剂、胶囊、含片、丸剂；注射给药制剂注射剂；喷雾给药制剂。4.如权利要求1所述的有效化学物质组，其特征是在治疗肝癌、大肠腺癌方面具有抗癌、抗肿瘤作用。全文摘要一种白茅根提取物的用途及制备方法，本发明公开了一种白茅根抗癌中药并从其中提取具有抗肿瘤(抗癌)作用的提取物，确定了其制备方法。白茅根提取物是以水为提取溶剂，采用热提法。用从白茅根中得到的提取物制成不同的中药制剂，具有较好的抗肝癌、大肠腺癌的作用。文档编号A61K36/88GK101732605SQ201010010030公开日2010年6月16日申请日期2010年1月6日优先权日2010年1月6日发明者卢秉久,孟宪生,康廷国,王东,王莹,郭小瑞申请人:辽宁中医药大学