海胆黄多糖注射剂及其制备方法

专利名称：：海胆黄多糖注射剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及多糖，具体涉及一种多糖注射剂，尤其是属于一种具有抗肿瘤作用的海胆黄多糖制剂及其制备方法。
背景技术：
：海胆黄多糖系从光棘球海胆海胆黄中分离纯化到具有免疫活性的均一多糖组分SEP，对其理化性质进行了分析，利用化学分析和波谱技术对其结构进行鉴定，表明SEP为首次从海胆中分离到的一种结构新颖的葡聚糖。各国科学家早在七十年代初就对各类多糖进行广泛研究，发现多糖人们发现多糖对肿瘤、心血管疾病等都有一定疗效。1969年日本学者Chihara等人首次从香菇子实体的热水提取物中分离到一种具有明显的抗肿瘤活性的多糖香菇P-葡聚糖，并在Nature上报道了他们的研究成果。1978年香菇多糖进入临床应用，作为免疫调节剂和肿瘤放化疗治疗的辅助药物，效果显著。从此，关于多糖类药物的研究引起了世界各国科学家的广泛关注并逐渐成为新药研究与开发的一个热门的领域。目前，除了香菇多糖，裂褶菌多糖、云芝多糖、猪苓多糖、人参多糖、黄芪多糖等作为免疫增强剂和抗肿瘤辅助药物在临床上广泛使用。本发明产品的分子量、分子式、化学结构式(1)分子量测定采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)，以葡聚糖为标准品，绘LogMr-TR标准曲线，测定分子量约为1.95X106Da。[OOOS](2)化学结构式糖组成分析结果表明，SEP为葡聚糖；高碘酸氧化、Smith降解及甲基化分析表明，SEP含有1—4和1—6两种糖苷键和非还原末端1—，三者的比例约为8:1:l;部分酸水解结果表明SEP糖链的主链由1—4糖苷键组成；UV分析SEP不含蛋白质和核苷酸，IR结果表明SEP由a-D-吡喃葡萄糖组成的葡聚糖；NMR分析表明SEP的重复单元的结构中含1—4和1—6两种糖苷键，主链由1—4糖苷键组成，侧链由1—6糖苷键组成，糖残基为a构型。已完成的结构解析表明，海胆黄多糖的重复单元的结构为3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>经研究表明，海胆黄多糖SEP具有抗肿瘤和免疫调节的作用，能够抑制S180肉瘤的生长，并促进淋巴细胞的增殖，能够恢复环磷酰胺引起的免疫缺陷。由于海胆黄多糖水溶性较好，制成注射剂使用具有疗效好，技术要求低，成本低的特点。
发明内容本发明目的在研制成单海胆黄多糖的基础上，根据海胆黄多糖水溶液稳定性和在水中溶解度较好地性质提供一种制备成本低的可以使产品长期放置稳定的方法，制成海胆黄多糖的水针剂剂型。本发明采用下列步骤实施海胆黄多糖(原料)一溶于注射用水一NaOH调节pH至7.0_7.5—过滤除菌滤液—分装一海胆黄多糖注射液。取合格原料海胆黄多糖单组分溶于注射用水中，搅拌下缓缓加入NaOH，随时测定pH值，待pH为7.0-7.5时，中和完毕，过滤除菌，滤液分装于安瓿中，即得注射用海胆黄多糖注射液。本发明的技术方案还包括一种海胆黄多糖冻干粉针剂的制备方法。采用下列步骤实施取海胆黄多糖，溶于适量注射用水，调节pH值至7.0-7.5，加入赋形剂，注射用水调整浓度，过滤，除菌，测含量，冷冻干燥，制备成本发明海胆黄多糖冻干粉针剂。制剂稳定性考察本发明产品经高温(40。C，60。C，8(rC)、高湿(RH92.5%、RH75%，25°C以及光照(4000Lx)等影响因素饰演后，外观形状、澄明度、pH值、含量以及无菌检查均符合要求。本发明产品加速试验(4(TC，RH75^)3个月的考察结果，外观形状、澄明度、pH值、含量以及无菌检查均符合要求。本发明产品室温留样考察1、3、6、12个月，经定期取样检查各项目均符合要求。药理学实验实验一对小鼠S180肉瘤的抑制作用实验药物本发明海胆黄多糖注射制剂实验动物ICR小鼠，雄性，1822g实验方法1小鼠S180肿瘤模型建立按移植性肿瘤研究法建立小鼠模型。选择接种S1807d后的小鼠，消毒腹部皮肤，用无菌空针抽吸腹水，生理盐水稀释，台盼蓝染色后用血球计数板在倒置式显微镜下计数，活细胞数为98%以上，调整细胞浓度为1X107ml。取昆明小鼠60只，随机分为6组分正常对照组、模型组、环磷酰胺阳性对照及海胆黄多糖SEP高、中、低剂量组，称重并记录。除正常对照组外，于其他各组小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2mlS180细胞悬液。接种24h后开始给药，正常对照组和模型组均给等量的生理盐水，环磷酰胺组剂量为20mg/kg，SEP高、中、低三个剂量组分别为16，8，4mg/kg，给药方式均为尾静脉注射(iv)。每天固定时间给药一次并记录小鼠的活动情况，连续10d。2SEP对小鼠S180移植瘤的抑制作用末次给药24h后称重，颈椎脱臼处死小鼠，取瘤块、脾脏及胸腺分别称重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。公式如下_一+"给药组小鼠平均瘤重(g)，innn/抑瘤率=[1--^x100%肿瘤对照组平均瘤重(g)脾指数=小鼠的脾重(mg)/小鼠的体重(g)胸腺指数=小鼠的胸腺重(mg)/小鼠的体重(g)数据用X士SD表示，组间t检验，结果见表l表1SEP对小鼠移植性肉瘤实体瘤S180的影响(n-10，f±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*P<0.05，**P<0.Olvs模型组；#P<0.05，##P<0.Olvs空白组实验结论，结果显示，，SEP高、中、低三个剂量对小鼠移植性肉瘤实体瘤S180的抑制率分别为16.51%、12.77%、9.05%，环磷酰胺组的肿瘤抑制率为28.13%，SEP中剂量接近环磷酰胺抑瘤率的一半，效果比较明显。与环磷酰胺组相比，SEP对小鼠的体重无显著影响，而且可不同程度地提高脾指数/胸腺指数，表明免疫调节是SEP抗肿瘤的一种重要作用方式。具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明作进一步详细描述。实施例一取海胆黄多糖0.5克(海胆黄多糖含量为99%)，在搅拌下加入注射用水480毫升，使其全部溶解，搅拌下缓缓加入1摩尔/升NaOH溶液，调节pH为7.0_7.5，用注射用水补充至500毫升，过滤除菌，滤液澄清，滤液浓度为1毫克/毫升，按每安瓿分装2毫升，即得注射用海胆黄多糖注射液。将该注射液于4t:冰箱中或室温放置12个月，均未见固体析出，注射液的澄明度检查符合最新版中国药典。实施例二取海胆黄多糖1.0克(海胆黄多糖含量为99%)，在搅拌下加入注射用水960毫升，使其全部溶解，搅拌下缓缓加入1摩尔/升NaOH溶液，调节pH为7.0_7.5，用注射用水补充至1000毫升，过滤除菌，滤液澄清，滤液浓度为1毫克/毫升，按每安瓿分装2毫升，即得注射用海胆黄多糖注射液。将该注射液于4t:冰箱中或室温放置12个月，均未见固体析出，注射液的澄明度检查符合最新版中国药典。实施例三取海胆黄多糖1.0克(海胆黄多糖含量为99%)，在搅拌下加入注射用水480毫升，使其全部溶解，搅拌下缓缓加入1摩尔/升NaOH溶液，调节pH为7.0-7.5，加入市售20%甘露醇注射也200毫升，搅拌均匀，用注射用水补充至1000毫升，除菌过滤，测含量，按每安瓿分装2毫升，冷冻干燥，即得海胆黄多糖冻干粉针剂。实施例四取海胆黄多糖2.0克(海胆黄多糖含量为99%)，在搅拌下加入注射用水1000毫升，使其全部溶解，搅拌下缓缓加入1摩尔/升NaOH溶液，调节pH为7.0_7.5。取市售注射用甘露醇40克，加适量注射用水加入溶解，加0.1%w/v注射用活性炭于85t:加热10分钟，冷却至6(TC时过滤，滤液中加入海胆黄多糖溶液，补充注射用水至2000毫升，然后用滤膜除菌过滤，测含量，封于安瓿瓶中，每瓶2毫升冻干，即得。含量测定采用苯酚硫酸法。权利要求一种海胆黄多糖注射液，其特征在于单海胆黄多糖溶解于注射用水，搅拌下加入合适浓度的NaOH，调节pH至7.0-7.5，过滤，滤液分装所需量至安瓿中，高温消毒，制得海胆黄多糖注射液。2.根据权利要求1所述注射液对制备方法，其特征在于海胆黄多糖溶于注射用水，搅拌下加入合适浓度的NaOH，调节pH至7.0_7.5，过滤，滤液分装所需量至安瓿中，高温消毒，制得海胆黄多糖注射液。3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于用NaOH调节pH值。4.一种海胆黄多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取海胆黄多糖，溶于适量注射用水，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调节pH值至7.0-7.5，过滤，冷冻干燥，制备成本发明海胆黄多糖冻干粉针剂。5.根据权利要求4所述海胆黄多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于冻干赋形剂为甘露醇。全文摘要本发明采用纯化的海胆黄多糖SEP经注射用水溶解，NaOH调节pH到7.0至7.5，过滤除菌，滤液分装，即得海胆黄多糖注射液，或加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调节pH值至7.0-7.5，过滤，冷冻干燥，制备成本发明海胆黄多糖冻干粉针剂。药效学研究，本发明海胆黄多糖注射剂具有抗肿瘤作用。文档编号A61P35/00GK101716140SQ20101001827公开日2010年6月2日申请日期2010年1月21日优先权日2010年1月21日发明者周长林,唐莹,奚涛,窦洁申请人:中国药科大学