一种花芪中药制剂的质量检测方法

专利名称：：一种花芪中药制剂的质量检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种花芪中药制剂的质量检测方法，属于药品的
技术领域：
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背景技术：
：本发明是一种花芪中药制剂的质量检测方法，属于药品的
技术领域：
。花芪中药制剂是以黄芪、地黄、黄精、五味子、山茱萸等味药组成，具有益气养阴、润燥清热的功效，用于消渴属气阴两虚兼燥热证等。本发明提供了一种花芪中药制剂的质量检测方法，方法的提供直接向有关的生产、检测机构等提供了花芪制剂的检测指标、技术方法等等；以便更好控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性和疗效，能够更好的指导生产，为消费者提供一种品质优良的产品。
发明内容本发明的目的在于提供一种花芪中药制剂的质量检测方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地。本发明涉及山茱萸药材或其提取物、大黄药材或其提取物、五味子药材或其提取物、黄芪药材或其提取物、丹参药材或其提取物、知母药材或其提取物等按照一定的比例组方制成的中药制剂的质量控制方法，主要包括鉴别、含量测定等项目，它是将熊果酸、马钱苷、山茱萸对照药材、知母对照药材、知母皂苷、菝葜皂苷元、黄柏对照药材、盐酸小檗碱中、大黄对照药材、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、土大黄苷、五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙、黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖、丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮I1B、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙、中的全部或部分品种作为该中药制剂的质量控制的检测指标。上述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，采用以下方法中全部或部分作为质量检测的方法作为鉴别项对于松花粉的鉴别技术取本品粉碎，采用显微鉴别；对于松花粉的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以松花粉对照药材作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于山茱萸的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530之间任一体积，以熊果酸、马钱苷、山茱萸对照药材中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于知母的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以知母对照药材、知母皂苷、菝葜皂苷元中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于黄柏的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iil之间任一体积，以黄柏对照药材、盐酸小檗碱中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于大黄的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF^或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以大黄对照药材、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、土大黄苷中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于五味子的鉴别方法采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于黄芪的鉴别方法采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮的方法，展开剂可以为乙酸乙酉旨、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化铁乙醇溶液等溶液显色的方法；对于丹参的鉴别方法采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以丹参对照药材、丹参酮1、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酉旨、石油醚、甲酸乙酉旨、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；上述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，采用以下方法鉴别对于松花粉的鉴别取本品内容物，置显微镜下观察花粉粒椭圆形，长4555iim，直径2940iim，表面光滑，两侧各有1膨大气囊，气囊壁有明显的网状纹理，网眼多角形。对于山茱萸的鉴别取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。对于五味子的鉴别取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ii1及上述对照品溶液2ii1，分别点于同一硅胶GF^薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254mm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。对于松花粉的鉴别取松花粉对照药材3g，加乙醚60ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加2ml三氯甲烷使溶解，作为对照药材溶液。取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液及上述对照品溶液各5ia，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。对于知母的鉴别取本品内容物3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液加盐酸2ml，继续回流1小时，用40X氢氧化钠溶液调pH至中性，回收乙醇至无醇味，加水20ml，加苯30ml，振摇提取，水液弃去，回收苯至约2ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，5g，湿法装柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脱，收集洗脱液，回收洗脱液至约0.5ml，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10iU、对照品溶液5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(3060°C-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛-无水乙醇-浓硫酸(0.4:8:1.5)溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。对于黄柏的鉴别取本品内容物5g，加硅藻土5g，混匀，加无水乙醇80ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液浓縮至约10ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，10g，湿法装柱)上，用无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，浓縮至约5ml;作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ii1、对照品溶液1P1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。对于大黄的鉴别取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流l小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ia、上述对照药材及对照品溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点。置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。上述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，采用以下方法中全部或部分作为质量检测的含量测定方法方法1:采用高效液相色谱法测定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；方法2:采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；方法3:采用薄层色谱法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530ul之10品种作为对照品，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮的方法，展开剂可以为乙酸乙酉旨、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化铁乙醇溶液等溶液显色后用薄层扫描仪进行扫描的方法；方法4:采用高效液相色谱法测定本品中丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；上述的述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，采用以下技术作为含量测定方法对于黄芪的含量测定色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32:68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，倾出内容物，混匀，取约6g，精密称定，加氧化镁6g，混匀，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取4小时，弃去三氯甲烷液，残渣挥尽三氯甲烷，加甲醇100ml，加热回流提取6小时，提取液回收溶剂至于，残渣加水40ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液振摇洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇57ml使溶解，通过DIOI型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长16cm)，以水80ml洗脱，弃去水液。再用40%乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法精密吸取对照品溶液10iU、20ii1，供试品溶液20ii1，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。对于丹参的含量测定采用高效液相色谱法同时测定丹酚酸B的含量。色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇:乙月青(3:1)B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为lml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm，丹酚酸B为286nm。对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min，超声频率为30kHz，功率为30W，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。与现有技术相比，本发明提供的质量控制方法能更好的控制一种花芪中药制剂的产品质量，保证用药的安全性，这样更有利于指导生产，使工艺控制更加严格合理，让消费者全面认识产品品质、放心使用这类药品。本发明选取的含量测定指标成分是该产品按照中医理论君、臣、佐、使排序的君药和臣药的有效活性成分，对控制药品质量是十分必要的，作为含量控制的指标很理想。在研究中发现本方中的黄精、黄芪、知母含有大量的糖类物质，并且五味子、黄芪都含有多糖，由于苷类物质为一类极性较大、结构复杂的化合物，它无紫外吸收，无专一显色剂，再加上皂苷测定经常受糖的干扰，采用常规技术条件测定时，由于紫外检测末端吸收时灵敏度低，噪音影响大，且有干扰峰，很难使用，因此，本申请人经过流动相等测定条件的一系列考察，本申请人采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法进行黄芪中黄芪甲苷的含量测定，结果分离度好、重现性好、回收率高，得到的图谱能够很好的检测产品质量。所以本发明选定了一系列的成分和方法作为控制、检测产品质量的技术手段，使花芪中药制剂的生产技术有了保障，得到的制剂更加可靠，达到了发明的目的。为证明利用本发明提供的质量控制方法能更好的控制一种花芪中药制剂的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；实验例1丹酚酸B含量测定的方法学考察1.1仪器条件岛津高效液相色谱仪，LC-2010AHT。1.2试药甲醇(色谱纯、分析纯)，乙腈(色谱纯)，甲酸(分析纯)，水为高纯水；丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用)，样品益心舒胶囊(贵州信邦制药有限公司)。1.3色谱条件色谱柱VP-0DS;流动相甲醇_乙腈_0.5%甲酸水溶液(28:8:64)柱温30。C;检测波长286nm;流速lml/min;进样量10ul。1.4系统适应性试验分别取丹酚酸B对照品，花芪胶囊供试品(批号20081201)溶液缺丹参药材的阴性空白溶液注入色谱仪，记录色谱图，从图中看，丹酚酸B的保留时间为16.1分钟，阴性空白色谱图在丹酚酸B位置处无峰，丹酚酸B与其相近的其他峰分离度完全(分离度>1.5)，即本实验条件下丹酚酸B与其他组分分离完全。理论塔板数对照品中为2952;理论塔板数样品中丹酚酸B为2965;丹酚酸B与其他组分峰的分离度大于1.5。故理论塔板数以丹酚酸B峰计算，应不低于2000.1.5线性关系考察1.5.1标准溶液的制备精密取丹酚酸B对照品适量，加甲醇溶解，制成每lml含丹酚酸B0.1392mg的对照品溶液。1.5.2标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液lul、2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、20ul。分别注入液相色谱仪，记录色谱结果见表1，以峰面积A对质量数X(iig)进行线性回归计算，得线性回归方程为丹酚酸B:A=1015012X-28940r=0.9995(丹酚酸B在0.1392iig2.784iig范围内线性关系良好)。表1丹酚酸B线性关系考察实验次数1234567进样(M)0-13920.27840.55681.11361.67042.22722.784峰面积13219426720553711110844281629014219871928500021.6《埃试品溶液提取时间的选择提取方法:回流提取(75%甲醇)，》:则定结果表2。表2不同时间提取考察(样品花芪胶囊20081201)提取时间(min)20406080100称样量g1.12901.12071.15081.13301.1099峰面积492031490495522577514279505094含量(mg/g)2.212,222.312.302.31结果从表2中可见，提取60分钟即可将制剂中的丹酚酸B提取完全，故选择加热回流提取1小时。1.7精密度试验取丹酚酸B对照品10ul，重复进样6次，测定峰面积，求平均峰面积和相对平均标准偏差(RSD)。结果见表3:表3花芪测定的精密度试验进样次数Ii^iii平均值RSD⑨丹酚酸B峰面积1366776~~1364923~~1375889~1356356~1361092~135963613641120.50%1.8稳定性试验取本品(批号20081201)内容物，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，取出放冷，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。分别于0、1、2、4、8、12小时进行测定，结果列入表4，丹酚酸B平均峰面积为528853，RSD为1.69%，说明供试品溶液在12小时内稳定性良好。表4花芪胶囊中丹酚酸B测定稳定性试验13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>1.9重复性试验取本品(批号20051201)内容物，制备方法同前，平行制备5份供试液，分别进样10iU，测定峰面积，计算结果见表5，丹酚酸B的平均含量为2.35mg/g，RSD为1.56%。表5花芪胶囊中丹酚酸B测定重复性试验进样次数12345平均值RSD(%)称样量g1.02501.00551.00311.00041.0056"峰面积4273694209194082534017214133212.351.56含量(mg/g)2.382.392.332.302.351.10回收率试验采用加样回收法，分别精密称取6份已测定含量的样品(丹酚酸的含量为2.35mg/g)约O.5g，精密加入丹酚酸B(0.2304mg/ml)对照液5ml，置具塞锥形瓶中，加入75%甲醇至50ml，称定重量，加热回流1小时，取出放冷，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。分别精密吸取上述供试液各10yl，注入色谱仪，测定，即得。结果见表6。表6花芪胶囊(批号20081201)中丹酚酸B测定回收率试验试验样品量含丹酚酸B加入丹酚酸B率RSD次数(g)(mg)(mg)(%)10.50011.17521.1522.3588102.720.50091.17711.1522.302897.730.50081.17691.1522.297997.398.92.4340.50031.17571.1522.283196.150.50181.17921.1522.3374100.560.50621.1896_1.152_2.328998.9_1.ll样品测定按前述方法制备供试液和对照溶液，分别进样10iU，记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算含量，10个批样品中丹酚酸B含量测定结果见表7。表7IO批样品中丹酚酸B含量测定结果14测得量回收率平均回收(mg)(%)(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实验例2黄芪甲苷含量测定的方法学考察2.1仪器条件岛津高效液相色谱仪，LC-2010AHT;蒸发光散射检测ELSD20002.2试药乙腈为色谱纯，甲醇、醋酸乙酯、正丁醇、氨水均为分析纯，氢氧化钾为化学纯，水为重蒸水；黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用)，样品花芪胶囊(贵州信邦制药有限公司)。2.3色谱条件色谱柱美国Phenomenex公司C18柱；流动相乙腈-水(37:63)柱温25°C;流速0.5ml/min;ELSD漂移管温度10(TC;载气流速2.7L/min;进样量10ul。2.4系统适应性试验分别取黄芪甲苷对照品，花芪胶囊供试品(批号20081201)溶液缺黄芪药材的阴性空白溶液注入色谱仪，记录色谱图，从图中看，黄芪甲苷的保留时间为16.1分钟，阴性空白色谱图在黄芪甲苷位置处无峰，黄芪甲苷与其相近的其他峰分离度完全(分离度>1.5)，即本实验条件下丹黄芪甲苷与其他组分分离完全。2.5标准曲线及线性范围精密称取黄芪甲苷对照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的对照品溶液，作为对照品贮备液。分别精密吸取上述对照品溶液lml、3ml、5ml、7ml、9ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10(ul)，以进样量(ug)的常用对数值为横坐标，以峰面积的常用对数值为纵坐标，作标准曲线，得回归方程为Y=4.9358+1.4956X，r=0.9995，进样量在0.3963.564ug范围内线性关系良好。因该标准曲线不过原点，样品测定采用外标两点法计算。2.6精密度实验取同一份供试品溶液，连续重复进样6次，每次进样10ul，测定峰面积，RSD为0.48%。2.7稳定性试验取供试品溶液，分别在Oh、2h、4h、6h、8h、24h、进样，进行稳定性试验，测定结果表明，在24h之内黄芪甲苷色谱峰面积无明显改变。RSD为1.1%。2.8重现性试验取同一样品按供试品溶液的制备方法制备6份供试液，分别进样，测定黄芪甲苷的峰面积，计算含量，RSD为1.15%。2.9回收率试验精密称取18.8mg黄芪甲苷对照品置200ml量瓶中，加2%KOH-甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密称取样品O.15g，精密加入对照品贮备溶液5ml，按"l.8"项下的方法制成供试品溶液，每次进样量为10ul。平均回收率为97.94%，RSD为0.68%。2.10样品的含量测定取10批样品，按含量测定项下方法制备供试液，进行测定结果见表8:表8IO批样品中黄芪甲苷含量测定结果批号黄芪甲苷含』tmg/g平均值mg/gRSD%12200803010.12010.12210.12111.17200801020.11980.12040.1201.0.35200812010.12280.12440.12360.91200802010.13110.12910.13011.1020080502-o.12430.12510.12470.45200806010.12510.12570.12540.34200807010.13150.簡0.13090.65200804010.12250.12330.12290.46200808010.13020.12880.12950.76200810010.12840.12760.12800.44具体实施例实施例1一种花芪中药胶囊剂的质量检测方法，主要包括鉴别、含量测定等项目。1、处方黄芪270g地黄200g太子参60g山药45g黄精90g山茱萸60g五味子60g松花粉70g知母40g黄柏60g桑白皮150g丹参45g大黄30g荔枝核360g鸡内金30g玉米须1200g162、制法以上十六味，鸡内金粉碎成细粉；黄芪、太子参、知母、黄柏、玉米须加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至相对密度1.301.35(50°C)的稠膏；地黄、山药、黄精、桑白皮、荔枝核加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至相对密度1.081.12(50°C)，放冷至室温，加1.5倍量乙醇使沉淀，静置，取上清液回收乙醇后，减压浓縮至相对密度1.301.35(50°C)的稠膏；山茱萸、五味子、丹参、大黄用80%乙醇回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓縮至相对密度为1.301.35(5(TC)的稠膏。合并以上稠膏，与鸡内金细粉、松花粉混匀，干燥，粉碎，制成IOOO粒胶囊，即得。3、鉴别(1)取本品内容物，置显微镜下观察花粉粒椭圆形，长4555iim，直径2940um，表面光滑，两侧各有1膨大气囊，气囊壁有明显的网状纹理，网眼多角形。(2)取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4ia，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](2)项下的供试品溶液10y1及上述对照品溶液2ii1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254mm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(4)取松花粉对照药材3g，加乙醚60ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加2ml三氯甲烷使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](2)项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(5)取本品内容物3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液加盐酸2ml，继续回流1小时，用40%氢氧化钠溶液调pH至中性，回收乙醇至无醇味，加水20ml，加苯30ml，振摇提取，水液弃去，回收苯至约2ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，5g，湿法装柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脱，收集洗脱液，回收洗脱液至约0.5ml，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10iU、对照品溶液5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛-无水乙醇-浓硫酸(0.4:8:1.5)溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(6)取本品内容物5g，加硅藻土5g，混匀，加无水乙醇80ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液浓縮至约10ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，10g，湿法装柱)上，用1无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，浓縮至约5ml;作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ia、对照品溶液liU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。(7)取大黄对照药材0.2g，照[鉴别](2)项下供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](2)项下的供试品溶液10ia、上述对照药材及对照品溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点。置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。(8)取本品内容物3g，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，回收甲醇，残渣加水25ml使溶解，以水饱和正丁醇提取2次(25、20ml)，合并正丁醇液，用5%碳酸氢钠溶液25ml洗涤，弃去碳酸氢钠液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取玉米须对照药材3g，加甲醇30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(10:2:0.15)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘约57分钟，取出，即刻于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。4、含量测定黄芪甲苷的含量测定色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32:68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，倾出内容物，混匀，取约6g，精密称定，加氧化镁6g，混匀，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取4小时，弃去三氯甲烷液，残渣挥尽三氯甲烷，加甲醇100ml，加热回流提取6小时，提取液回收溶剂至干，残渣加水40ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液振摇洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇57ml使溶解，通过DIOI型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长16cm)，以水80ml洗脱，弃去水液。再用40%乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法精密吸取对照品溶液10iil、20ia，供试品溶液20ia，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。本品含黄芪以黄芪甲苷(C41H6504)计，每粒不得少于0.10mg。丹参的含量测定色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为lml/min;检测波长丹酚酸B为286nm。对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min，超声频率为30kHz，功率为30W，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液lOul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本品含丹参以丹酚酸B计，每粒不得少于1.10mg。实施例2—种花芪中药胶囊剂的质量检测方法，主要包括鉴别、含量测定等项目。1、处方黄芪270g地黄200g太子参60g山药45g黄精90g山茱萸60g五味子60g松花粉70g知母40g黄柏60g桑白皮150g丹参45g大黄30g荔枝核360g鸡内金30g玉米须1200g2、制法以上十六味，鸡内金粉碎成细粉；黄芪、太子参、知母、黄柏、玉米须加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至相对密度1.301.35(50°C)的稠膏；地黄、山药、黄精、桑白皮、荔枝核加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至相对密度1.081.12(50°C)，放冷至室温，加1.5倍量乙醇使沉淀，静置，取上清液回收乙醇后，减压浓縮至相对密度1.301.35(50°C)的稠膏；山茱萸、五味子、丹参、大黄用80%乙醇回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓縮至相对密度为1.301.35(50°C)的稠膏。合并以上稠膏，与鸡内金细粉、松花粉混匀，干燥，粉碎，制成1000粒胶囊，即得。3、鉴别:(1)取本品内容物，置显微镜下观察花粉粒椭圆形，长4555iim，直径2940um，表面光滑，两侧各有1膨大气囊，气囊壁有明显的网状纹理，网眼多角形。(2)取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4ia，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](2)项下的供试品溶液10y1及上述对照品溶液2ii1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷_醋酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254mm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(4)取本品内容物3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液加盐酸2ml，继续回流1小时，用40%氢氧化钠溶液调pH至中性，回收乙醇至无醇味，加水20ml，加苯30ml，振摇提取，水液弃去，回收苯至约2ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，5g，湿法装柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脱，收集洗脱液，回收洗脱液至约0.5ml，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10iU、对照品溶液5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛-无水乙醇-浓硫酸(0.4:8:1.5)溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(5)取本品内容物5g，加硅藻土5g，混匀，加无水乙醇80ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液浓縮至约10ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，10g，湿法装柱)上，用无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，浓縮至约5ml;作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ia、对照品溶液liU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。(6)取大黄对照药材0.2g，照[鉴别](2)项下供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](2)项下的供试品溶液10ia、上述对照药材及对照品溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点。置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。4、含量测定黄芪甲苷的含量测定色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32:68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，倾出内容物，混匀，取约6g，精密称定，加氧化镁6g，混匀，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取4小时，弃去三氯甲烷液，残渣挥尽三氯甲烷，加甲醇100ml，加热回流提取6小时，提取液回收溶剂至干，残渣加水40ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液振摇洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇57ml使溶解，通过D1Q1型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长16cm)，以水80ml洗脱，弃去水液。再用40X乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法精密吸取对照品溶液10ii1、20ii1，供试品溶液20ii1，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。本品含黄芪以黄芪甲苷(C41H6504)计，每粒不得少于0.10mg。权利要求一种花芪中药制剂的质量检测方法，主要包括鉴别、含量测定等项目，其特征在于它是将熊果酸、马钱苷、山茱萸对照药材、知母对照药材、知母皂苷、菝葜皂苷元、黄柏对照药材、盐酸小檗碱中、大黄对照药材、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、土大黄苷、五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙、黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖、丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙、中的全部或部分品种作为该中药制剂的质量控制的检测指标。2.按照权利要求1所述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，其特征在于对于鉴别技术，采用以下方法中全部或部分作为质量控制的方法对于松花粉的鉴别技术取本品粉碎，采用显微鉴别；对于松花粉的鉴别采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以松花粉对照药材作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于山茱萸的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以熊果酸、马钱苷、山茱萸对照药材中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于知母的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以知母对照药材、知母皂苷、菝葜皂苷元中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于黄柏的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以黄柏对照药材、盐酸小檗碱中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于大黄的鉴别技术采用薄层色谱法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以大黄对照药材、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、土大黄苷中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于五味子的鉴别方法采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；对于黄芪的鉴别方法采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530iU之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、妣啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化铁乙醇溶液等溶液显色的方法；对于丹参的鉴别方法采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530i！1之间任一体积，以丹参对照药材、丹参酮1、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法。3.按照权利要求1或2所述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，其特征在于对于鉴别技术采用以下方法对于松花粉的鉴别取本品内容物，置显微镜下观察花粉粒椭圆形，长4555ym，直径2940iim，表面光滑，两侧各有1膨大气囊，气囊壁有明显的网状纹理，网眼多角形；对于山茱萸的鉴别取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；对于五味子的鉴别取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液；取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；取上述供试品溶液10iU及对照品溶液2ia，分别点于同一硅胶GF^薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254mm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；对于松花粉的鉴别取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液；取松花粉对照药材3g，加乙醚60ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加2ml三氯甲烷使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5ia，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对于知母的鉴别取本品内容物3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液加盐酸2ml，继续回流1小时，用40%氢氧化钠溶液调pH至中性，回收乙醇至无醇味，加水20ml，加苯30ml，振摇提取，水液弃去，回收苯至约2ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，5g，湿法装柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脱，收集洗脱液，回收洗脱液至约0.5ml，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液5ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(3060°C)_甲酸乙酯_甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛-无水乙醇-浓硫酸(0.4:8:1.5)溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；对于黄柏的鉴别取本品内容物5g，加硅藻土5g，混匀，加无水乙醇80ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液浓縮至约10ml，置已处理好的中性氧化铝柱(内径15mm，10g，湿法装柱)上，用无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，浓縮至约5ml作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5iU、对照品溶液lia，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；对于大黄的鉴别取本品内容物10g，加硅藻土5g，混匀，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，回收乙醚至干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液10ia、对照品溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。4.按照权利要求1所述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，其特征在于对于含量测定技术，采用以下方法中全部或部分作为质量控制的方法方法1:采用高效液相色谱法测定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；方法2:采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；方法3:采用薄层色谱法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530ul之间任一体积，以黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮的方法，展开剂可以为乙酸乙酉旨、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化铁乙醇溶液等溶液显色后用薄层扫描仪进行扫描的方法；方法4:采用高效液相色谱法测定本品中丹参酮I、丹参酮I1A、丹参酮I1B、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；5.根据权力要求1或4的所述的一种花芪中药制剂的质量检测方法，对于含量测定技术采用以下方法对于黄芪的含量测定色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32:68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000;对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含O.5mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，倾出内容物，混匀，取约6g，精密称定，加氧化镁6g，混匀，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取4小时，弃去三氯甲烷液，残渣挥尽三氯甲烷，加甲醇100ml，加热回流提取6小时，提取液回收溶剂至干，残渣加水40ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液振摇洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇57ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长16cm)，以水80ml洗脱，弃去水液。再用40%乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密吸取对照品溶液10ia、20iU，供试品溶液20iU，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；对于丹酚酸B的含量测定色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含lOml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为lml/min;检测波长丹酚酸B为286nm;对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液；供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约O.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min，超声频率为30kHz，功率为30W，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液lOul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。全文摘要本发明是一种花芪中药制剂的质量检测方法，属于药品的
技术领域：
。花芪中药制剂是以黄芪、地黄、黄精、五味子、山茱萸等味药组成，具有益气养阴、润燥清热的功效，用于消渴属气阴两虚兼燥热证等。本发明提供了一种花芪中药制剂的质量检测方法，方法的提供直接向有关的生产、检测机构等提供了花芪制剂的检测指标、技术方法等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性和疗效，能够更好的指导生产，为消费者提供一种品质优良的产品。文档编号A61P1/00GK101732607SQ20101004180公开日2010年6月16日申请日期2010年1月5日优先权日2010年1月5日发明者张观福申请人:贵州信邦制药股份有限公司