一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法

专利名称：：一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法
技术领域：
：本发明属于α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备
技术领域：
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背景技术：
：根据国际糖尿病联盟报告，目前全球糖尿病人已逾1亿，预测2025年将突破3亿，主体为2型糖尿病。糖尿病前期即葡萄糖调节受损(impairedglucoseregulation,IGR),期中包括空腹血糖受损(impairedfastingglucose,IFG)和葡萄糖耐量受损(impairedglucosetolerance,IGT)0对于IGT和2型糖尿病早期患者，均表现为餐后高血糖，而餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖。餐后高血糖不仅极易诱发大血管、微血管、周围神经等组织的病变，引起各种并发症，而且其与冠心病和糖尿病的总死亡率之间的相关性大于空腹高血糖，所以降低餐后血糖是预防2型糖尿病的发生，减少其并发症和降低死亡率的重要措施之一。α-葡萄糖苷酶是一种能使不被吸收的复合碳水化合物分解成小肠可吸收的单糖的酶，而α-葡萄糖苷酶活性抑制剂则通过抑制该酶作用以减少餐后血糖升高，主要代表药物有阿卡波糖(Acarbose)和伏格列波糖(Voglibose)，前者是通过竞争性和可逆性抑制小肠粘膜刷状缘α“葡萄糖苷酶，阻断淀粉及蔗糖的裂解，从而延长葡萄糖和果糖在消化道的吸收速度，降低餐后血糖；后者为选择性双糖水解酶抑制剂，适当延缓糖的吸收，改善餐后血糖，对肠道的麦芽糖酶和蔗糖酶抑制作用比葡萄糖苷酶抑制剂作用强。它们有腹部不适、胀气、排气等不良反应。因此，另辟新径，寻找α-葡萄糖苷酶的安全有效的抑制剂，对于治疗、预防非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、高脂血症和高脂蛋白血症具有重要的临床应用价值。
发明内容本发明的目的在于以中药泽泻为原料，通过简单实用的工艺处理，得到可抑制α-葡萄糖苷酶活性的提取物，利用该提取物再加入药物载体制备α-葡萄糖苷酶抑制剂剂型。本发明的技术方案是采用浸提法从中药泽泻中提取得到粗提取物，再将泽泻粗提取物依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，分别获得石油醚部分、醋酸乙酯部分和正丁醇部分，正丁醇部分合并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。本发明技术方案是通过以下工艺步骤实现的(1)粉碎将干燥泽泻颗粒粉碎至580目；(2)粗提取用水或水溶性有机溶剂浸提泽泻，得到提取液，过滤，浓缩至小体积，冷却，加乙醇于浓缩液中，静置冷藏，分取上层清液，下层料渣离心，所得清液与上层清液合并，浓缩，得到泽泻粗提取液；(3)萃取精提将泽泻粗提取液置于分液漏斗中，然后加入等体积的萃取剂，所用萃取剂依次为石油醚、醋酸乙酯、正丁醇，将萃取剂为正丁醇萃取的有机层合并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。在上述步骤(2)中，泽泻浸提包括震荡法浸提或回流法浸提，提取时间为0.57小时，可提取3次；所用水溶性有机溶剂包括浓度为100%以下的含16个碳原子的醇、烷或酯的水溶液，其加入量为泽泻颗粒的210倍；浓缩液中加入乙醇终浓度为3090%；静置冷藏温度为310°C，冷藏时间为1248小时。泽泻提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性作用的测定(1)酶活力测定试剂的配制67mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PH=6.8)将磷酸氢二钾7.646g，磷酸二氢钾4.559g混合溶解于蒸馏水中，定容至500mL。4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)溶液将0.091gPNPG溶解于ImL二甲基亚砜，加入1.6mL磷酸钾缓冲液，配成0.116mol/L底物溶液。α-葡萄糖苷酶溶液称3.5mg固体酶，加入67mmol/L磷酸钾缓冲液200μ，配成0.IU/μL酶溶液。Na2CO3溶液称取0.53gNa2CO3用蒸馏水定容至50mL，配成0.lmol/L的溶液。还原型谷胱甘肽10mg还原型谷胱甘肽溶解于IOmL磷酸钾缓冲溶液中。(2)提取物抑制酶活性的测定在2mL磷酸盐缓冲液(pH6.8)中，加入lmg/mL谷胱甘肽溶液50μL，力卩α-葡萄糖苷酶5μL，在37°C保温IOmin后，加入待测样品溶液100μL与PNPG50μL(终浓度)，37°C反应lOmin。加入Na2CO3溶液IOmL终止反应，在波长400nm处测定吸收值。其中酶活力单位定义为在37°C，pH6.8的条件下，Imin内水解PNPG释放1μmolPNP所需的酶量为一个酶活力单位(U)。抑制剂活力单位定义为在相同的条件下降低1个酶活力单位所需的抑制剂量。以阿卡波糖为阳性对照。结果见表。酶抑制率公式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>A空白不加样品反应后的吸收值A样品加入样品反应后的吸收值A背景只加样品的吸收值。表1泽泻各提取物抑制酶活性的情况<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>由以上表1可知，泽泻中α-葡萄糖苷酶抑制活性较强成份存在于正丁醇部分。本发明的有益效果是泽泻提取物的制备工艺简单易行，非常适合推广应用。该提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性作用与
背景技术：
相当，其抑制率不低于阳性对照物阿卡波糖。泽泻提取物可加入到药物载体，混合，制粒，干燥，然后按照常规的药剂制备方法制成颗粒剂、或胶囊剂、或片剂、或口服液、或注射剂；或者加入载体，按照常规方法制成保健饮料或保健食品。具体实施方式实施例1将泽泻粉碎，过5目筛，称取100g，加入IOOOmL水在60°C水浴震荡浸提7h。第二次加入800mL水在60°C水浴震荡浸提5h。第三次加入600mL30%乙醇在60°C水浴震荡浸提3h。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇含量达30%。在3°C中静置48h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉淀离心(4950r/min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别进行萃取，各三次，合并对应的有机层，分别得到石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分。将正丁醇部分减压蒸馏浓缩，干燥后即得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的泽泻提取物。表2泽泻各提取物的得率情况<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例2将泽泻粉碎，过10目筛，称取100g，加入700mL30%乙醇在60°C水浴回流提取4h。第二次加入500mL30%乙醇在60°C水浴回流提取3h。第三次加入300mL30%乙醇在60°C水浴回流提取2h。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇含量达60%。在7°C中静置24h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉淀离心(4950r/min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别进行萃取，各三次，合并对应的有机层，分别得到石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分。将正丁醇部分减压蒸馏浓缩，干燥后即得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的泽泻提取物。表3泽泻各提取物的得率情况<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例3将泽泻粉碎，过20目筛，称取100g，加入800mL30%甲醇在60°C水浴回流提取4h。第二次加入600mL30%甲醇在60°C水浴回流提取3h。第三次加入400mL30%甲醇在60°C水浴回流提取2h。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇含量达45%。在5°C中静置24h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉淀离心(4950r/min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别进行萃取，各三次，合并对应的有机层，分别得到石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分。将正丁醇部分减压蒸馏浓缩，干燥后即得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的泽泻提取物。表4泽泻各提取物的得率情况<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例4将泽泻粉碎，过65目筛，称取100g，加入500mL75%乙醇在60°C水浴回流提取3h。第二次加入300mL75%乙醇在60°C水浴回流提取2h。第三次加入200mL75%乙醇在60°C水浴回流提取lh。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇含量达85%。在10°C中静置12h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉淀离心(4950r/min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别进行萃取，各三次，合并对应的有机层，分别得到石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分。将正丁醇部分减压蒸馏浓缩，干燥后即得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的泽泻提取物。表5泽泻各提取物的得率情况泽泻提取物名称_提取物重(g)_得率(％)_石油醚部分0.300.30醋酸乙酯部分0.420.42正丁醇部分_030_0_30_实施例5将泽泻粉碎，过80目筛，称取100g，加入600mL80%甲醇在60°C水浴回流提取lh。第二次加入300mL80%甲醇在60°C水浴回流提取0.5h。第三次加入300mL80%甲醇在60°C水浴回流提取0.5h。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇含量达90%。在10°C中静置12h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉淀离心(4950r/min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别进行萃取，各三次，合并对应的有机层，分别得到石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分。将正丁醇部分减压蒸馏浓缩，干燥后即得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的泽泻提取物。表6泽泻各提取物的得率情况<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤(1)粉碎将泽泻原料粉碎；(2)粗提取用水或水溶性有机溶剂浸提泽泻，得到提取液，过滤，浓缩至小体积，冷却，加乙醇于浓缩液中，静置冷藏，分取上层清液，下层料渣离心，所得清液与上层清液合并，浓缩，得到泽泻粗提取液；(3)萃取精提将泽泻粗提取液置于分液漏斗中，然后加入等体积的萃取剂，所用萃取剂依次为石油醚、醋酸乙酯、正丁醇，将萃取剂为正丁醇萃取的有机层合并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。2.根据权力要求1所述的可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于泽泻为干燥的泽泻颗粒，粉碎至580目。3.根据权力要求1所述的可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于粗提取中浸提包括震荡法浸提或回流法浸提，提取时间为0.57小时，可提取3次。4.根据权力要求1所述的可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于粗提取中所用水溶性有机溶剂是浓度为100%以下的含16个碳原子的醇、烷或酯的水溶液。5.根据权力要求1或4所述的可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于水或水溶性有机溶剂加入量为泽泻颗粒的210倍。6.根据权力要求1所述的可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于粗提取中的浓缩液中加入乙醇终浓度为3090%。7.根据权力要求1所述的可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于泽泻提取液静置冷藏温度为310°C，冷藏时间为648小时。全文摘要一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，是将泽泻粉碎，浸提，过滤，浓缩，静置冷藏，分取清液，浓缩，得到泽泻粗提取液；依次用有机溶剂进行萃取，将正丁醇萃取部分合并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。该泽泻提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，酶抑制率可达92.30％，加入到药物载体，制成颗粒剂、或胶囊剂、或片剂、或口服液、或注射剂；或者加入载体，按照常规方法制成保健饮料或保健食品。该发明简单易行，适于推广。文档编号A61P3/10GK101797312SQ20101004585公开日2010年8月11日申请日期2010年1月19日优先权日2010年1月19日发明者仲秋晨,张建平,易醒,焦爽,肖小年申请人:南昌大学