内毒素和凝集素的药用组合物及其用途的制作方法
专利名称：内毒素和凝集素的药用组合物及其用途的制作方法
内毒素和凝集素的药用组合物及其用途
技术领域：
本发明涉及一种免疫调节剂，具体说是内毒素与凝集素药用组合物及
其用途，即内毒素与凝集素药用组合物在制备人体抗癌抗感染和治疗免疫系统疾病的药物中的应用。背景技术：
当今人类社会进步，文明发达，而人类免疫系统功能进化的速度远远
落后于社会的进步速度，且人们过多地依赖药物的治疗作用，导致一系列的疾患发生率大幅增加，各类感染肿瘤等疾病时有发生，顽固性反复发作性的慢性感染如尿路感染、口腔溃疡、老慢支，以及免疫功能失衡疾病如硬皮病、红斑狼疮、牛皮癣等，均系常见病多发病，至今仍无一种理想的能够治愈的药物。 一般情况下药物的主攻方向也是越疱代俎，绕过机体免疫系统而直接作用于发病因素，往往是治标不治本。 恶性循环，使更多的人沦为药物的奴隶，对药物过度过久服用导致了大量患者死亡。感冒了，医生说先打一针青霉素，以前是肌注，现在是点滴，青霉素不灵光了，幸好有了先锋霉素，先锋霉素不灵光了 ，还有氨苄青霉素，当氨苄青霉素无效时，还可以换用头孢菌素，甚至于对头孢菌素耐药的耐甲氧西林金葡萄菌失效时，人们还有最后一道防线-一 万古霉素。但在1992年，美国首次发现了对万古霉素产生耐药性的MRSA，几乎将医生逼到无药可用的尴尬境地。 在医院里随时可看到细菌惊人的适应能力，效果强烈的抗生素为形成抗药性强的细菌提供了重要的选择条件。随着细菌在进化过程中，战胜一种又一种抗生素，治疗感染变成了一项生物进化的军备竞赛。这是一个不断升级的循环，能够抓住最后一个机会的生物体将会取胜。迄今为止，没有任何迹象表明我们将成为胜者。解决办法是以生物进化为基础的新战略。 人体内存在几种状态免疫耐受，机体耐药性，抗药性病菌，病菌携带者等等，许多疑难杂症和慢性病即是如此，他们的免疫系统功能处于某种沉默状态，难以克制发病因素，发病因素也难以迅速爆发，在这种对峙过程中，有两种结果"不在沉默中爆发，就在沉默中灭亡！"通过多种手段打破这种沉默状态，促使免疫系统发挥作用，克制发病因素，这才是正道途径，我们不能越疱代俎，代替人体免疫系统而行使药物功能。 20世纪40年代以后，由于抗生素和磺胺类化学药物的疗效显著，对此类药物的发展和重视程度远远超过了对生物制品的研究。但细菌的抗药性越来越严重，这使临床医学家感到极大的困扰，进而寻求高效免疫系统的剌激剂。直到上世纪70年代，法国科学家在动物实验中发现左旋咪唑具有免疫增强功能，才使免疫疗法受到普遍的重视，人们逐渐认识到生物制品对控制和消灭传染病的重大作用。 上世纪80年代初，Oldham提出了生物反应调节剂的理论，奠定了恶性肿瘤生物治疗的理论基础，才开始了继手术、放疗、化疗之后的第四种治疗肿瘤模式-一 生物疗法。
目前，已有治疗性疫苗治疗麻风、利什曼病、布氏杆菌病、艾滋病、慢性乙肝等疾病的临床试验报告，但治疗效果并不十分稳定和理想，还需不断进行治疗剂量和免疫次数的优化，改进疫苗组分，更新附加因子等的研究。 在众多的治疗疫苗中，人们更注重一对一的免疫保护功能，而往往忽略了人类与生倶来的、广泛的抗感染抗肿瘤的本能功能，而这种功能是非特异的，对所有的感染和肿瘤都有效果，是人类亿万年从原生动物开始的进化过程中形成的自我保护功能。而这种非特异免疫功能，因与微生物斗争而进化和存在，也因与微生物斗争而发展壮大。内毒素和凝集素作为丝裂原(mitogen)，是人体免疫系统的高效引火发怒剂和生物调理素，促进淋巴细胞
的增殖分化，增强网状内皮系统的吞噬功能，唤醒人体先天性的抗感染抗肿瘤功能，打破机体免疫耐受状态，全面激活人体免疫系统的功能，对病原菌进行吞噬杀伤消灭和清除有害异物及衰老颓变的细胞(包括癌细胞)。并高效调节人体的生理机能，维持机体内环境的稳定，促进人体的自愈能力，从而达到治病的目的。 内毒素的生物学活性非常复杂，小剂量时引起免疫反应，大剂量则引起病理反应，内毒素LPS的致病作用通过激活单核巨噬细胞系统释放过量内源性细胞因子而实现，临床表现有致死性、热原性、弥漫性血管内凝血等。 内毒素增强机体非特异性免疫力及佐剂作用，少量内毒素注入机体，可产生一定程度的非特异免疫力，即由一种革兰氏阴性细菌内毒素剌激产生的免疫力对多种微生物均有作用。它能间接增强机体非特异性防御机能而发挥抗感染作用。 凝集素(lectin)是非免疫源的，能与糖类专一结合的一类糖蛋白质，具有使细胞凝集和多糖沉淀的性质.最早的凝集素是1888年在植物中发现的，所以命名为植物凝集素(Phytohaemagglutinin).至今，已分离了几百种凝集素，如刀豆素ConA，花生凝集素PNA，麦胚素WGA，大豆凝集素SBA。发现其不仅存在于植物中，亦存在于动物和微生物中，几乎见于各种生活的有机体，并不限于特殊的器官和组织。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为剌激淋巴细胞增殖的试剂。 凝集素为广谱抗病毒药，可剌激T淋巴细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞，效应T细胞分泌产生大量细胞因子(如干扰素等)杀伤病毒，细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。可同时剌激B细胞转化为浆母细胞后增殖分化为浆细胞，浆细胞产生大量非特异性抗体来中和病毒。提高骨髓造血机能，促进机体白细胞及多核白细胞数量明显增加；提高机体细胞诱生干扰素，增强机体免疫力，促进抗体形成，增强机体对病原微生物的吞噬作用。 凝集素与黄芪多糖、左旋咪唑、阿糖腺苷配伍，有明显的增效作用；与部分抗生素等配伍具有相加作用。凝集素肌肉注射后约5-15分钟血药浓度达高峰，口服约1小时后血药浓度达高峰，代谢产物主要从尿液排出。 凝集素使用方便、广泛，可以与许多药物同时使用，具有协同作用或相加作用。在粉、散剂中添加凝集素，具有明显提高原有产品疗效的作用，同时不干扰原产品的检测，且无种属特异性，适用于各种动物。 凝集素可以与疫苗同时使用，能起到弥补免疫空白期、减缓疫苗应激反应、增强免疫效果的作用。凝集素打破免疫耐受，促进细菌感染的恢复，引发和加重疾病，助其透发，縮短病程，提高疗效。 凝集素是普遍存在于动植物中的非酶糖蛋白。在过去十几年里，大量的生物化学和医学的基础研究已证实凝集素和肿瘤的发生和转移密切相关。对各种凝集素功能和药学特性的研究已产生了许多有希望的进展，个别种类的凝集素作为肿瘤治疗药物已经进入临床试验。凝集素和内毒素组合，为抗击艾滋和癌症等提供了一条新方法。
发明内容本发明的目的是提供包含内毒素和凝集素的药用组合物，作为免疫调 节剂用于制备人体抗癌抗感染和治疗免疫系统疾病药物中的应用。 本发明第一方面是将两种不同的淋巴细胞激活剂-一 内毒素和凝集素组合成药 物，共同作用于人体免疫系统。内毒素和凝集素是人体免疫系统的高效引火发怒剂和生物 调理素，作为丝裂原(mitogen)促进淋巴细胞的增殖分化，增强网状内皮系统的吞噬功能， 唤醒人体先天性的抗感染抗肿瘤功能，打破机体免疫耐受状态，全面激活人体免疫系统的
功能，对病原菌进行吞噬杀伤消灭和清除有害异物及衰老颓变的细胞(包括癌细胞)。并高 效调节人体的生理机能，维持机体内环境的稳定，促进人体的自愈能力。
经过本发明人长期研究发现含有内毒素和凝集素的组合药物，可广泛用于治疗人 体抗感染抗肿瘤和治疗免疫系统性疾病。 本发明所述内毒素为革兰氏阴性菌细胞壁结构成分，化学成分主要为磷脂-多 糖-蛋白质复合物，含有内毒素的菌体也在本发明之列。内毒素能激活人体网状内皮系统 细胞吞噬功能，提高巨噬细胞和中性白细胞的杀菌作用，并释放内源性细胞因子，激发宿主 对病原体感染的防卫，并引起肿瘤坏死。 本发明所述凝集素为识别并粘附于特异性糖结构的来源于植物甚至微生物或动 物的一类糖蛋白，也包括含有凝集素的动植物和微生物等天然组合物中的或从中纯化的凝 集素，化学合成的凝集素，修饰的凝集素或其衍生物。凝集素能激活淋巴细胞，抗病毒抗肿 瘤，以及调节机体免疫功能；与内毒素具有协同增效作用，减缓内毒素应激毒性；打破免疫 耐受，促进细菌感染的恢复，引发和加重疾病，助其透发，縮短病程，提高疗效。
本发明第二方面是将含有内毒素和凝集素组合的药物，制备成为包括冻干粉针的 注射液类型，隔日使用一次或每日使用一次，一般10次为一疗程，可根据病情再增加疗程。
本发明第三方面提供了多种临床方案，所述含有内毒素和凝集素组合的药物，通 过临床验证，适用于抗感染包括所有革兰氏阴性细菌、所有耐药菌以及部分革兰氏阳性细 菌和部分真菌的感染，并可抑杀病毒；抗肿瘤类型包括肺癌、恶性淋巴瘤、白血病、乳腺癌、 鼻咽癌、肝癌；治疗免疫系统性疾病包括牛皮癣、红斑狼疮、糖尿病、甲亢、过敏性鼻炎、口腔 溃疡、类风湿关节炎、哮踹和重症肌无力。根据临床病例，该组合药物表现出了很好的疗效。
本发明所述含有内毒素和凝集素组合的药物，注射进入体内，或者将内毒素单独 注射进入体内，再配合含凝集素的腥膻发物饮食，可起到事半功倍的疗效，腥膻发物包括雄 鸡、鲤鱼、牛羊肉、海鲜、韭菜、扁豆、南瓜、紫苏、生姜、啤酒、甜酒，多种腥膻发物交替或混合 使用，也包括口服从动植物中纯化的发物成分即凝集素。 本发明所述含有内毒素和凝集素药用组合物治疗临床疾病，在病灶部位或接近病 灶部位给药，但要偏离感染红肿部位10厘米给药，并结合中药补气补血，可显著提高疗效。 含有内毒素和凝集素的药物，切不可注入血管内直接进入血液，可与其他药物联合使用；患 者处于疲劳、饥饿、感冒和急性感染状态时，不能使用；注射部位出现红肿发热及硬块，是正 常的免疫反应，属正常情况，无需处理会自然消失，第二次注射要偏离上次注射的红肿硬结 部位，不然会引起更大的发热红肿甚至全身反应。
本发明的有益效果 1.内毒素和凝集素共同作用于免疫系统，具有互补增效协同作用。 Taylor等研究表明口服有菌毛的霍乱弧菌减毒菌苗，其血清中抗毒抗菌抗体明显升高，且临床症状也减轻了许多，证明了菌毛素(凝集素)是一种重要的保护免疫原。野 生菌毛菌体疫苗已成功地用于阻止养殖动物大肠杆菌的感染，菌毛凝集素和内毒素让养殖 动物获得强大免疫保护力。 2.内毒素和凝集素组合，互减毒性，增加患者的依从性。 内毒素有致死性、热原性、弥漫性血管内凝血等毒性，凝集素能促进细菌感染的恢 复，加重病患，临床上常常讲"忌口"就是这个原因。而两者组合后，毒性互减，如Taylor研 究的霍乱弧菌减毒菌苗，菌毛凝集素缓解了内毒素的毒性；内毒素增强机体的防御机能，加 强对病原物的清除，可抵消凝集素的透发毒性。 3.内毒素和凝集素两者协作，治疗疾病起效更快，疗程縮短，并提高治愈率。
凝集素可诱发痼疾慢性病，加重新病，打破耐受状态，打破休眠，助其透发，促使各 种病原微生物呈活跃状态。同时内毒素和凝集素共同作用于免疫系统，产生一系列的免疫 应答反应，释放出多种淋巴因子，作用于单核巨噬细胞系统使之向病灶部位聚集，对病原菌 进行吞噬消灭和清除有害异物及衰老颓变的细胞，达到全面彻底根治的目的。
下面结合具体实施例对本发明进一步说明
具体实施方式
实施例1.内毒素和凝集素的组合类型有三种方式 第一种是革兰氏阴性菌和菌毛的组合，即含菌毛素的全菌体菌苗。
1.菌种的筛选和培养菌种应筛选表达菌毛高的弱毒菌株，并选择适合的培养基
和培养方法进行培养，1 %甲醛灭活菌体，离心清洗甲醛，收集菌体冷藏备用。 2.菌毛素菌体药用组合物的配制无菌操作，采用pH7. 2磷酸盐缓冲液的生理盐
水配制，将上述冷藏菌体稀释成一定浓度的菌悬液，加入0.6%苯甲醇防腐剂，再分装至安瓶中。 第二种是革兰氏阴性菌和/或菌毛，再加上凝集素的组合。基本同第一种的制作 过程，只是在配制后期加入适量凝集素如刀豆素ConA、植物血凝素PHA、麦胚素WGA等。
第三种是提纯了的内毒素和凝集素的组合。例如在伤寒杆菌内毒素注射液中加入 适量的凝集素，可减缓毒性，增加疗效。 实施例2.内毒素和凝集素的组合物的药学研究 许多大肠杆菌菌毛具有血凝作用，能剌激B淋巴细胞使之分化(Po皿iah等， 1989)。菌毛凝集素激活B淋巴细胞可产生多克隆IgM，并在第三天达到最高峰。FinH等菌 毛凝集素具有甘露糖特异性，在激活B淋巴细胞中起关键作用，同时菌毛凝集素还介导其 他病理生理作用(Po皿iah等，1992)。内毒素存在于菌体细胞壁内，菌毛全菌体即是内毒素 和凝集素的组合物，在此以含PilinA甘露糖特异性凝集素的铜绿假单胞菌为例进行药学 研究 1.毒性试验以含菌毛素150亿死菌体腹腔注射入体重18-20克小鼠，观察7日， 无一死亡，活泼如常。对照组不含菌毛素，同样的操作，存活70% ，且30%进食不佳，仅40% 活泼如常。 2.免疫力保护试验选体重14-16克小鼠，试验组皮下注射10亿菌毛素菌体，三 天一次，共注射三次，过7天后，用3LD50的毒菌攻击，观察三天，试验组存活80%，对照组(没有皮下注射菌毛素菌体)100%死亡。 3.抑瘤试验小鼠腹腔接种S180病毒，5天后取小鼠腹水瘤细胞，将瘤细胞接种于 试验小鼠的腹股沟皮下，治疗组注射菌毛素死菌体4亿/鼠，隔日 一次共注射8次，对照组 注射等量的生理盐水，处死小鼠，取瘤称重，计算抑瘤率，结果治疗组的抑瘤率可高达68%， 如果还结合口服凝集素，效果会更好。 4.内毒素和凝集素的协作试验取小鼠腹腔巨噬细胞在体外用内毒素剌激产生 IL-1，然后以IL-l协同刀豆素ConA剌激胸腺细胞发生有丝分裂，以分裂增殖的强度来判断 IL-1的活性。试验本身就说明了内毒素和凝集素ConA等的协同增效关系，动物试验和临床 表明铜绿假单胞菌注射液能直接转化淋巴细胞，并能增强淋巴细胞对刀豆素ConA的转化率。 实施例3.内毒素和凝集素的组合物的临床应用，在此以含菌毛凝集素的铜绿假 单胞菌注射液的临床应用为例 1.治疗反复发作性尿路感染的疗效良好，治疗有效率95%，治愈率92.5%，患者 的免疫低下状态获得明显改善，且对多种病原体包括革兰氏阴性菌及其L型和金黄色葡萄 球菌及其L型所致的尿路感染效果都很好。 2.治疗慢性乙型肝炎的例症徐，男，40岁，湖南人，患乙型肝炎多年，吃药打针治 疗了几年，未能痊愈，本发明人用了十支铜绿假单胞菌注射液，并配合含凝集素的腥膻发物 饮食，发物使注射部位红肿加重，免疫反应加强，结果治愈了 。 3.治疗骨结核的病例马，女，45岁，湖南人，左手无名手指关节患结核，用抗结核 药物治疗了三月，患处皮肤已黑化坏死，仍不见好转，本发明人在她的左手背上注射铜绿假 单胞菌注射液，只用了三针即见好转，结果用了十支药痊愈了 。 4.治疗肿瘤的病例曾，女，41岁，湖北人，子宫左侧附件肿瘤，直径约4厘米，左 侧肾有四颗直径约0. 2厘米的结石，右肾有一颗小结石。本发明申请人直接在肿瘤附近部 位注射铜绿假单胞菌注射液，患者于第四针时，吃了雄鸡发物，导致肿瘤结石等部位疼痛难 忍，赶忙去医院检查，结果是肿瘤直径为2.4X1.8厘米，由以前的空心瘤变成了实心瘤 (良性)，结石也有明显松动，后来继续用药五针，肿瘤结石全部消退。该患者家住农村，平 常很少打针吃药，免疫系统功能强健。 5.治疗过敏性哮喘的病例张，女，50岁，北京人，患过敏性哮喘多年，医治无效， 本发明人给患者提供了 5支铜绿假单胞菌注射液，患者使用两支铜绿假单胞菌注射液后， 即见好转，也仅用了 5支药就痊愈了 ，近两年未见复发。 6.治疗牛皮癣的病例雷，男，35岁，广州人，牛皮癣患病症状中度，本发明人给他 提供了 6支铜绿假单胞菌注射液，使用三支后即好了一大半，原本打算再给他提供药物的， 可6支使用完后病也痊愈了，近一年未见复发。
权利要求
一种内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是含有内毒素和凝集素的药用组合物，可在制备人体抗感染抗肿瘤和治疗免疫系统疾病药物中应用。
2. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述内毒素为革兰氏阴性菌细胞壁结构成分，化学成分主要为磷脂_多糖_蛋白质复合物，含有内毒素的菌体也在本发明之列。
3. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述凝集素为识别并粘附于特异性糖结构的来源于植物甚至微生物或动物的一类糖蛋白，也包括含有凝集素的动植物和微生物的天然物中或从中纯化的凝集素、化学合成的凝集素、修饰的凝集素或其衍生物。
4. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素组合的药物，为包括冻干粉针的注射液类型，隔日使用一次或每日使用一次，一般10次为一疗程，可根据病情再增加疗程。
5. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素组合的药物，抗感染包括所有革兰氏阴性细菌、所有耐药菌以及部分革兰氏阳性细菌和部分真菌的感染，并可抑杀病毒；抗肿瘤类型包括肺癌、恶性淋巴瘤、白血病、乳腺癌、鼻咽癌、肝癌；治疗免疫系统性疾病包括牛皮癣、红斑狼疮、糖尿病、甲亢、过敏性鼻炎、口腔溃疡、类风湿关节炎、哮喘和重症肌无力。
6. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素组合药物注射进入体内，或者将内毒素单独注射进入体内，再配合含凝集素的腥膻发物饮食，可起到事半功倍的疗效，腥膻发物包括雄鸡、鲤鱼、牛羊肉、海鲜、韭菜、扁豆、南瓜、紫苏、生姜、啤酒、甜酒，可以是多种腥膻发物交替或混合使用，也包括口服从动植物中纯化的发物成分即凝集素。
7. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素药用组合物治疗临床疾病，在病灶部位或接近病灶部位给药，但要偏离感染红肿部位IO厘米给药，并结合中药补气补血，可显著提高疗效。
8. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素的药物，切不可注入血管内直接进入血液，可与其他药物联合使用；患者处于疲劳、饥饿、感冒和急性感染状态时，不能使用；注射部位出现红肿发热及硬块，是正常的免疫反应，属正常情况，无需处理会自然消失，第二次注射要偏离上次注射的红肿硬结部位，不然会引起更大的发热红肿甚至全身反应。
全文摘要
一种内毒素和凝集素的药用组合物及其用途，主要在制备人体抗癌抗感染和治疗免疫系统疾病药物中的应用。内毒素和凝集素是人体免疫系统的高效引火发怒剂和生物调理素内毒素能激活网状内皮系统细胞吞噬功能，提高巨噬细胞和中性白细胞的杀菌作用，并释放内源性细胞因子，激发宿主对病原体感染的防卫，引起肿瘤坏死。凝集素能激活淋巴细胞，抗病毒抗肿瘤，以及调节机体免疫功能；与内毒素具有协同增效作用，减缓内毒素应激毒性；打破免疫耐受，促进细菌感染的恢复，引发和加重疾病，助其透发，缩短病程，提高疗效。含内毒素和凝集素注射液，动物试验证明，抑瘤率达68％以上，抗感染保护率达80％以上，可用于抗感染抗肿瘤和免疫系统性疾病的治疗。
文档编号A61P3/10GK101780271SQ20101010158
公开日2010年7月21日 申请日期2010年1月22日 优先权日2010年1月22日
发明者韩少坤 申请人:韩少坤
内毒素和凝集素的药用组合物及其用途
技术领域：
本发明涉及一种免疫调节剂，具体说是内毒素与凝集素药用组合物及
其用途，即内毒素与凝集素药用组合物在制备人体抗癌抗感染和治疗免疫系统疾病的药物中的应用。背景技术：
当今人类社会进步，文明发达，而人类免疫系统功能进化的速度远远
落后于社会的进步速度，且人们过多地依赖药物的治疗作用，导致一系列的疾患发生率大幅增加，各类感染肿瘤等疾病时有发生，顽固性反复发作性的慢性感染如尿路感染、口腔溃疡、老慢支，以及免疫功能失衡疾病如硬皮病、红斑狼疮、牛皮癣等，均系常见病多发病，至今仍无一种理想的能够治愈的药物。 一般情况下药物的主攻方向也是越疱代俎，绕过机体免疫系统而直接作用于发病因素，往往是治标不治本。 恶性循环，使更多的人沦为药物的奴隶，对药物过度过久服用导致了大量患者死亡。感冒了，医生说先打一针青霉素，以前是肌注，现在是点滴，青霉素不灵光了，幸好有了先锋霉素，先锋霉素不灵光了 ，还有氨苄青霉素，当氨苄青霉素无效时，还可以换用头孢菌素，甚至于对头孢菌素耐药的耐甲氧西林金葡萄菌失效时，人们还有最后一道防线-一 万古霉素。但在1992年，美国首次发现了对万古霉素产生耐药性的MRSA，几乎将医生逼到无药可用的尴尬境地。 在医院里随时可看到细菌惊人的适应能力，效果强烈的抗生素为形成抗药性强的细菌提供了重要的选择条件。随着细菌在进化过程中，战胜一种又一种抗生素，治疗感染变成了一项生物进化的军备竞赛。这是一个不断升级的循环，能够抓住最后一个机会的生物体将会取胜。迄今为止，没有任何迹象表明我们将成为胜者。解决办法是以生物进化为基础的新战略。 人体内存在几种状态免疫耐受，机体耐药性，抗药性病菌，病菌携带者等等，许多疑难杂症和慢性病即是如此，他们的免疫系统功能处于某种沉默状态，难以克制发病因素，发病因素也难以迅速爆发，在这种对峙过程中，有两种结果"不在沉默中爆发，就在沉默中灭亡！"通过多种手段打破这种沉默状态，促使免疫系统发挥作用，克制发病因素，这才是正道途径，我们不能越疱代俎，代替人体免疫系统而行使药物功能。 20世纪40年代以后，由于抗生素和磺胺类化学药物的疗效显著，对此类药物的发展和重视程度远远超过了对生物制品的研究。但细菌的抗药性越来越严重，这使临床医学家感到极大的困扰，进而寻求高效免疫系统的剌激剂。直到上世纪70年代，法国科学家在动物实验中发现左旋咪唑具有免疫增强功能，才使免疫疗法受到普遍的重视，人们逐渐认识到生物制品对控制和消灭传染病的重大作用。 上世纪80年代初，Oldham提出了生物反应调节剂的理论，奠定了恶性肿瘤生物治疗的理论基础，才开始了继手术、放疗、化疗之后的第四种治疗肿瘤模式-一 生物疗法。
目前，已有治疗性疫苗治疗麻风、利什曼病、布氏杆菌病、艾滋病、慢性乙肝等疾病的临床试验报告，但治疗效果并不十分稳定和理想，还需不断进行治疗剂量和免疫次数的优化，改进疫苗组分，更新附加因子等的研究。 在众多的治疗疫苗中，人们更注重一对一的免疫保护功能，而往往忽略了人类与生倶来的、广泛的抗感染抗肿瘤的本能功能，而这种功能是非特异的，对所有的感染和肿瘤都有效果，是人类亿万年从原生动物开始的进化过程中形成的自我保护功能。而这种非特异免疫功能，因与微生物斗争而进化和存在，也因与微生物斗争而发展壮大。内毒素和凝集素作为丝裂原(mitogen)，是人体免疫系统的高效引火发怒剂和生物调理素，促进淋巴细胞
的增殖分化，增强网状内皮系统的吞噬功能，唤醒人体先天性的抗感染抗肿瘤功能，打破机体免疫耐受状态，全面激活人体免疫系统的功能，对病原菌进行吞噬杀伤消灭和清除有害异物及衰老颓变的细胞(包括癌细胞)。并高效调节人体的生理机能，维持机体内环境的稳定，促进人体的自愈能力，从而达到治病的目的。 内毒素的生物学活性非常复杂，小剂量时引起免疫反应，大剂量则引起病理反应，内毒素LPS的致病作用通过激活单核巨噬细胞系统释放过量内源性细胞因子而实现，临床表现有致死性、热原性、弥漫性血管内凝血等。 内毒素增强机体非特异性免疫力及佐剂作用，少量内毒素注入机体，可产生一定程度的非特异免疫力，即由一种革兰氏阴性细菌内毒素剌激产生的免疫力对多种微生物均有作用。它能间接增强机体非特异性防御机能而发挥抗感染作用。 凝集素(lectin)是非免疫源的，能与糖类专一结合的一类糖蛋白质，具有使细胞凝集和多糖沉淀的性质.最早的凝集素是1888年在植物中发现的，所以命名为植物凝集素(Phytohaemagglutinin).至今，已分离了几百种凝集素，如刀豆素ConA，花生凝集素PNA，麦胚素WGA，大豆凝集素SBA。发现其不仅存在于植物中，亦存在于动物和微生物中，几乎见于各种生活的有机体，并不限于特殊的器官和组织。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为剌激淋巴细胞增殖的试剂。 凝集素为广谱抗病毒药，可剌激T淋巴细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞，效应T细胞分泌产生大量细胞因子(如干扰素等)杀伤病毒，细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。可同时剌激B细胞转化为浆母细胞后增殖分化为浆细胞，浆细胞产生大量非特异性抗体来中和病毒。提高骨髓造血机能，促进机体白细胞及多核白细胞数量明显增加；提高机体细胞诱生干扰素，增强机体免疫力，促进抗体形成，增强机体对病原微生物的吞噬作用。 凝集素与黄芪多糖、左旋咪唑、阿糖腺苷配伍，有明显的增效作用；与部分抗生素等配伍具有相加作用。凝集素肌肉注射后约5-15分钟血药浓度达高峰，口服约1小时后血药浓度达高峰，代谢产物主要从尿液排出。 凝集素使用方便、广泛，可以与许多药物同时使用，具有协同作用或相加作用。在粉、散剂中添加凝集素，具有明显提高原有产品疗效的作用，同时不干扰原产品的检测，且无种属特异性，适用于各种动物。 凝集素可以与疫苗同时使用，能起到弥补免疫空白期、减缓疫苗应激反应、增强免疫效果的作用。凝集素打破免疫耐受，促进细菌感染的恢复，引发和加重疾病，助其透发，縮短病程，提高疗效。 凝集素是普遍存在于动植物中的非酶糖蛋白。在过去十几年里，大量的生物化学和医学的基础研究已证实凝集素和肿瘤的发生和转移密切相关。对各种凝集素功能和药学特性的研究已产生了许多有希望的进展，个别种类的凝集素作为肿瘤治疗药物已经进入临床试验。凝集素和内毒素组合，为抗击艾滋和癌症等提供了一条新方法。
发明内容本发明的目的是提供包含内毒素和凝集素的药用组合物，作为免疫调 节剂用于制备人体抗癌抗感染和治疗免疫系统疾病药物中的应用。 本发明第一方面是将两种不同的淋巴细胞激活剂-一 内毒素和凝集素组合成药 物，共同作用于人体免疫系统。内毒素和凝集素是人体免疫系统的高效引火发怒剂和生物 调理素，作为丝裂原(mitogen)促进淋巴细胞的增殖分化，增强网状内皮系统的吞噬功能， 唤醒人体先天性的抗感染抗肿瘤功能，打破机体免疫耐受状态，全面激活人体免疫系统的
功能，对病原菌进行吞噬杀伤消灭和清除有害异物及衰老颓变的细胞(包括癌细胞)。并高 效调节人体的生理机能，维持机体内环境的稳定，促进人体的自愈能力。
经过本发明人长期研究发现含有内毒素和凝集素的组合药物，可广泛用于治疗人 体抗感染抗肿瘤和治疗免疫系统性疾病。 本发明所述内毒素为革兰氏阴性菌细胞壁结构成分，化学成分主要为磷脂-多 糖-蛋白质复合物，含有内毒素的菌体也在本发明之列。内毒素能激活人体网状内皮系统 细胞吞噬功能，提高巨噬细胞和中性白细胞的杀菌作用，并释放内源性细胞因子，激发宿主 对病原体感染的防卫，并引起肿瘤坏死。 本发明所述凝集素为识别并粘附于特异性糖结构的来源于植物甚至微生物或动 物的一类糖蛋白，也包括含有凝集素的动植物和微生物等天然组合物中的或从中纯化的凝 集素，化学合成的凝集素，修饰的凝集素或其衍生物。凝集素能激活淋巴细胞，抗病毒抗肿 瘤，以及调节机体免疫功能；与内毒素具有协同增效作用，减缓内毒素应激毒性；打破免疫 耐受，促进细菌感染的恢复，引发和加重疾病，助其透发，縮短病程，提高疗效。
本发明第二方面是将含有内毒素和凝集素组合的药物，制备成为包括冻干粉针的 注射液类型，隔日使用一次或每日使用一次，一般10次为一疗程，可根据病情再增加疗程。
本发明第三方面提供了多种临床方案，所述含有内毒素和凝集素组合的药物，通 过临床验证，适用于抗感染包括所有革兰氏阴性细菌、所有耐药菌以及部分革兰氏阳性细 菌和部分真菌的感染，并可抑杀病毒；抗肿瘤类型包括肺癌、恶性淋巴瘤、白血病、乳腺癌、 鼻咽癌、肝癌；治疗免疫系统性疾病包括牛皮癣、红斑狼疮、糖尿病、甲亢、过敏性鼻炎、口腔 溃疡、类风湿关节炎、哮踹和重症肌无力。根据临床病例，该组合药物表现出了很好的疗效。
本发明所述含有内毒素和凝集素组合的药物，注射进入体内，或者将内毒素单独 注射进入体内，再配合含凝集素的腥膻发物饮食，可起到事半功倍的疗效，腥膻发物包括雄 鸡、鲤鱼、牛羊肉、海鲜、韭菜、扁豆、南瓜、紫苏、生姜、啤酒、甜酒，多种腥膻发物交替或混合 使用，也包括口服从动植物中纯化的发物成分即凝集素。 本发明所述含有内毒素和凝集素药用组合物治疗临床疾病，在病灶部位或接近病 灶部位给药，但要偏离感染红肿部位10厘米给药，并结合中药补气补血，可显著提高疗效。 含有内毒素和凝集素的药物，切不可注入血管内直接进入血液，可与其他药物联合使用；患 者处于疲劳、饥饿、感冒和急性感染状态时，不能使用；注射部位出现红肿发热及硬块，是正 常的免疫反应，属正常情况，无需处理会自然消失，第二次注射要偏离上次注射的红肿硬结 部位，不然会引起更大的发热红肿甚至全身反应。
本发明的有益效果 1.内毒素和凝集素共同作用于免疫系统，具有互补增效协同作用。 Taylor等研究表明口服有菌毛的霍乱弧菌减毒菌苗，其血清中抗毒抗菌抗体明显升高，且临床症状也减轻了许多，证明了菌毛素(凝集素)是一种重要的保护免疫原。野 生菌毛菌体疫苗已成功地用于阻止养殖动物大肠杆菌的感染，菌毛凝集素和内毒素让养殖 动物获得强大免疫保护力。 2.内毒素和凝集素组合，互减毒性，增加患者的依从性。 内毒素有致死性、热原性、弥漫性血管内凝血等毒性，凝集素能促进细菌感染的恢 复，加重病患，临床上常常讲"忌口"就是这个原因。而两者组合后，毒性互减，如Taylor研 究的霍乱弧菌减毒菌苗，菌毛凝集素缓解了内毒素的毒性；内毒素增强机体的防御机能，加 强对病原物的清除，可抵消凝集素的透发毒性。 3.内毒素和凝集素两者协作，治疗疾病起效更快，疗程縮短，并提高治愈率。
凝集素可诱发痼疾慢性病，加重新病，打破耐受状态，打破休眠，助其透发，促使各 种病原微生物呈活跃状态。同时内毒素和凝集素共同作用于免疫系统，产生一系列的免疫 应答反应，释放出多种淋巴因子，作用于单核巨噬细胞系统使之向病灶部位聚集，对病原菌 进行吞噬消灭和清除有害异物及衰老颓变的细胞，达到全面彻底根治的目的。
下面结合具体实施例对本发明进一步说明
具体实施方式
实施例1.内毒素和凝集素的组合类型有三种方式 第一种是革兰氏阴性菌和菌毛的组合，即含菌毛素的全菌体菌苗。
1.菌种的筛选和培养菌种应筛选表达菌毛高的弱毒菌株，并选择适合的培养基
和培养方法进行培养，1 %甲醛灭活菌体，离心清洗甲醛，收集菌体冷藏备用。 2.菌毛素菌体药用组合物的配制无菌操作，采用pH7. 2磷酸盐缓冲液的生理盐
水配制，将上述冷藏菌体稀释成一定浓度的菌悬液，加入0.6%苯甲醇防腐剂，再分装至安瓶中。 第二种是革兰氏阴性菌和/或菌毛，再加上凝集素的组合。基本同第一种的制作 过程，只是在配制后期加入适量凝集素如刀豆素ConA、植物血凝素PHA、麦胚素WGA等。
第三种是提纯了的内毒素和凝集素的组合。例如在伤寒杆菌内毒素注射液中加入 适量的凝集素，可减缓毒性，增加疗效。 实施例2.内毒素和凝集素的组合物的药学研究 许多大肠杆菌菌毛具有血凝作用，能剌激B淋巴细胞使之分化(Po皿iah等， 1989)。菌毛凝集素激活B淋巴细胞可产生多克隆IgM，并在第三天达到最高峰。FinH等菌 毛凝集素具有甘露糖特异性，在激活B淋巴细胞中起关键作用，同时菌毛凝集素还介导其 他病理生理作用(Po皿iah等，1992)。内毒素存在于菌体细胞壁内，菌毛全菌体即是内毒素 和凝集素的组合物，在此以含PilinA甘露糖特异性凝集素的铜绿假单胞菌为例进行药学 研究 1.毒性试验以含菌毛素150亿死菌体腹腔注射入体重18-20克小鼠，观察7日， 无一死亡，活泼如常。对照组不含菌毛素，同样的操作，存活70% ，且30%进食不佳，仅40% 活泼如常。 2.免疫力保护试验选体重14-16克小鼠，试验组皮下注射10亿菌毛素菌体，三 天一次，共注射三次，过7天后，用3LD50的毒菌攻击，观察三天，试验组存活80%，对照组(没有皮下注射菌毛素菌体)100%死亡。 3.抑瘤试验小鼠腹腔接种S180病毒，5天后取小鼠腹水瘤细胞，将瘤细胞接种于 试验小鼠的腹股沟皮下，治疗组注射菌毛素死菌体4亿/鼠，隔日 一次共注射8次，对照组 注射等量的生理盐水，处死小鼠，取瘤称重，计算抑瘤率，结果治疗组的抑瘤率可高达68%， 如果还结合口服凝集素，效果会更好。 4.内毒素和凝集素的协作试验取小鼠腹腔巨噬细胞在体外用内毒素剌激产生 IL-1，然后以IL-l协同刀豆素ConA剌激胸腺细胞发生有丝分裂，以分裂增殖的强度来判断 IL-1的活性。试验本身就说明了内毒素和凝集素ConA等的协同增效关系，动物试验和临床 表明铜绿假单胞菌注射液能直接转化淋巴细胞，并能增强淋巴细胞对刀豆素ConA的转化率。 实施例3.内毒素和凝集素的组合物的临床应用，在此以含菌毛凝集素的铜绿假 单胞菌注射液的临床应用为例 1.治疗反复发作性尿路感染的疗效良好，治疗有效率95%，治愈率92.5%，患者 的免疫低下状态获得明显改善，且对多种病原体包括革兰氏阴性菌及其L型和金黄色葡萄 球菌及其L型所致的尿路感染效果都很好。 2.治疗慢性乙型肝炎的例症徐，男，40岁，湖南人，患乙型肝炎多年，吃药打针治 疗了几年，未能痊愈，本发明人用了十支铜绿假单胞菌注射液，并配合含凝集素的腥膻发物 饮食，发物使注射部位红肿加重，免疫反应加强，结果治愈了 。 3.治疗骨结核的病例马，女，45岁，湖南人，左手无名手指关节患结核，用抗结核 药物治疗了三月，患处皮肤已黑化坏死，仍不见好转，本发明人在她的左手背上注射铜绿假 单胞菌注射液，只用了三针即见好转，结果用了十支药痊愈了 。 4.治疗肿瘤的病例曾，女，41岁，湖北人，子宫左侧附件肿瘤，直径约4厘米，左 侧肾有四颗直径约0. 2厘米的结石，右肾有一颗小结石。本发明申请人直接在肿瘤附近部 位注射铜绿假单胞菌注射液，患者于第四针时，吃了雄鸡发物，导致肿瘤结石等部位疼痛难 忍，赶忙去医院检查，结果是肿瘤直径为2.4X1.8厘米，由以前的空心瘤变成了实心瘤 (良性)，结石也有明显松动，后来继续用药五针，肿瘤结石全部消退。该患者家住农村，平 常很少打针吃药，免疫系统功能强健。 5.治疗过敏性哮喘的病例张，女，50岁，北京人，患过敏性哮喘多年，医治无效， 本发明人给患者提供了 5支铜绿假单胞菌注射液，患者使用两支铜绿假单胞菌注射液后， 即见好转，也仅用了 5支药就痊愈了 ，近两年未见复发。 6.治疗牛皮癣的病例雷，男，35岁，广州人，牛皮癣患病症状中度，本发明人给他 提供了 6支铜绿假单胞菌注射液，使用三支后即好了一大半，原本打算再给他提供药物的， 可6支使用完后病也痊愈了，近一年未见复发。
权利要求
一种内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是含有内毒素和凝集素的药用组合物，可在制备人体抗感染抗肿瘤和治疗免疫系统疾病药物中应用。
2. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述内毒素为革兰氏阴性菌细胞壁结构成分，化学成分主要为磷脂_多糖_蛋白质复合物，含有内毒素的菌体也在本发明之列。
3. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述凝集素为识别并粘附于特异性糖结构的来源于植物甚至微生物或动物的一类糖蛋白，也包括含有凝集素的动植物和微生物的天然物中或从中纯化的凝集素、化学合成的凝集素、修饰的凝集素或其衍生物。
4. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素组合的药物，为包括冻干粉针的注射液类型，隔日使用一次或每日使用一次，一般10次为一疗程，可根据病情再增加疗程。
5. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素组合的药物，抗感染包括所有革兰氏阴性细菌、所有耐药菌以及部分革兰氏阳性细菌和部分真菌的感染，并可抑杀病毒；抗肿瘤类型包括肺癌、恶性淋巴瘤、白血病、乳腺癌、鼻咽癌、肝癌；治疗免疫系统性疾病包括牛皮癣、红斑狼疮、糖尿病、甲亢、过敏性鼻炎、口腔溃疡、类风湿关节炎、哮喘和重症肌无力。
6. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素组合药物注射进入体内，或者将内毒素单独注射进入体内，再配合含凝集素的腥膻发物饮食，可起到事半功倍的疗效，腥膻发物包括雄鸡、鲤鱼、牛羊肉、海鲜、韭菜、扁豆、南瓜、紫苏、生姜、啤酒、甜酒，可以是多种腥膻发物交替或混合使用，也包括口服从动植物中纯化的发物成分即凝集素。
7. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素药用组合物治疗临床疾病，在病灶部位或接近病灶部位给药，但要偏离感染红肿部位IO厘米给药，并结合中药补气补血，可显著提高疗效。
8. 根据权利要求1所述内毒素和凝集素药用组合物的用途，其特征是所述含有内毒素和凝集素的药物，切不可注入血管内直接进入血液，可与其他药物联合使用；患者处于疲劳、饥饿、感冒和急性感染状态时，不能使用；注射部位出现红肿发热及硬块，是正常的免疫反应，属正常情况，无需处理会自然消失，第二次注射要偏离上次注射的红肿硬结部位，不然会引起更大的发热红肿甚至全身反应。
全文摘要
一种内毒素和凝集素的药用组合物及其用途，主要在制备人体抗癌抗感染和治疗免疫系统疾病药物中的应用。内毒素和凝集素是人体免疫系统的高效引火发怒剂和生物调理素内毒素能激活网状内皮系统细胞吞噬功能，提高巨噬细胞和中性白细胞的杀菌作用，并释放内源性细胞因子，激发宿主对病原体感染的防卫，引起肿瘤坏死。凝集素能激活淋巴细胞，抗病毒抗肿瘤，以及调节机体免疫功能；与内毒素具有协同增效作用，减缓内毒素应激毒性；打破免疫耐受，促进细菌感染的恢复，引发和加重疾病，助其透发，缩短病程，提高疗效。含内毒素和凝集素注射液，动物试验证明，抑瘤率达68％以上，抗感染保护率达80％以上，可用于抗感染抗肿瘤和免疫系统性疾病的治疗。
文档编号A61P3/10GK101780271SQ20101010158
公开日2010年7月21日 申请日期2010年1月22日 优先权日2010年1月22日
发明者韩少坤 申请人:韩少坤
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