一种用于治疗冠心病的中药有效部位组合物的制作方法
专利名称：一种用于治疗冠心病的中药有效部位组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种治疗冠心病的药物，具体地说是由丹参总酚 酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜组成的药物组合物。
背景技术：
冠心病为严重危害人民健康的重大疾病之一，因其发病率高且死亡率高，成为“人 类的第一杀手”。针对中国中年人群的最新研究结果显示，1998年至2008年间，中国男性冠 心病发病率较以往同期增加26. 1%，女性增加19%，我国每年死于各种冠心病的人数估计 超过100万，是我国居民死因构成中上升最快的疾病。随着我国社会老龄化和人类生活方 式的改变，中国将成为一个冠心病发病大国。因此，加强治疗冠心病的药物研究具有重要的 社会和经济意义。随着西药的局限性逐渐被人们认识以及世界疾病谱和医学模式的改变，崇尚天然 药物正成为一种世界性潮流，中药产业面临着前所未有的机遇。但是，由于传统中药产业的 现代化水平低下等原因，中药产业普遍存在生产工艺落后、产品质量不稳定、科技含量低等 诸多问题，导致中药产业的国际市场竞争力弱，中药产业面临着严峻的挑战。复方制剂是中 药临床应用的特色，也是中药制剂的主要形式。中药有效部位组合物具有药效物质基本明 确，作用机理相对清楚，临床适应病症比较确切，而且有较强针对性，安全有效，适应现代制 造业的工艺技术和质量标准的优势，是具备“三效”(高效、速效、长效)、“三小”(剂量、毒 性、副作用小)、“三便”(贮存、携带、服用方便)特点的新型现代中药。冠心病属中医学厥心痛、胸痹、真心痛等范畴，其病机可概括为“不通则痛”和“不荣则痛”。现代大量临床研究表明冠心病是中医药治疗的优势疾病，和西药相比，中医药治 疗冠心病具有以下优势毒副作用相对较少，适合于长期应用；一个药物可作用于冠心病 的多个病理环节；改善患者伴随的症状如气短、乏力、精神抑郁等较为明显；能提高患者生 存质量，减少患者经济负担，符合卫生经济学的要求。基础研究证实活血化瘀、益气活血、清 热解毒等方法具有降低血脂、扩张冠脉、抗凝等多重作用，作用包括了影响内皮功能、易损 斑块、血小板活化、左室重构、血管重构、血管新生等方面，体现了中医药治疗从整体调节入 手，在综合调整冠心病的病理生理、改善临床症状等方面有着化学合成药物不可替代的优 势。加之中医药治病手段和方法来自于自然，副作用少，在世界崇尚绿色的背景下，治疗冠 心病的中成药研制已经成为国内乃至国际上的热点。在目前众多治疗冠心病的中成药中， 以有效部位为主要活性成分的丹参总酚酸、三七总皂苷、葛根黄酮等中成药愈来愈受到人 们重视，治疗冠心病的各种中药有效部位的功效各有所侧重与不同，临床上存在联合用药 的巨大需求。因此，提供药效物质基本明确，作用机理相对清楚，临床适应病症针对性较强， 安全有效，适应现代制造业的工艺技术和质量标准的中药有效部位复方制剂具有重要的临 床意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗冠心病的中药有效部位组合物，其药效物质基 本明确，作用机理相对清楚，质量可控，且能活血化瘀、通络止痛，产生协同作用，疗效显著 提高，提供一种临床上疗效更好、更安全、更方便的中药有效部位复方组合物及其制剂。 本发明通过下述技术方案予以实施。本发明提供的药物组合物所用原料的重量配比为丹参总酚酸1. 25-1. 5份，三七 总皂苷1-1. 5份，荜茇总生物碱0. 02 0. 13份，琥珀总倍半萜0. 02 0. 09份。本发明药物剂型是片剂、滴丸、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂等口服制剂，辅料为药剂学 上可以接受的相应辅料。本发明所用的丹参总酚酸含量不低于50%，三七总皂苷含量不低于50%，荜茇总 生物碱含量不低于50%，琥珀总倍半萜含量不低于50%。本发明治疗冠心病的药物组合物中，所述的丹参总酚酸是从丹参中提取的，三七总 皂苷是从三七中提取的，荜茇总生物碱是从荜茇中提取的，琥珀总倍半萜是从琥珀中提取的； 所述的丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜的含量均符合上述要求。该组合物中的活性成分均可用文献方法制备[1-4]，也可以从市场购买，还可以自 己制备。所述的丹参总酚酸可用下列方法制备丹参药材粉碎成粗粉，以乙醇超声提取2 次，第一次加10倍量乙醇浸泡12小时后超声提取；第二次加5倍乙醇超声提取，每次1小 时。合并提取液，滤过，滤液浓缩至0. 2 0. Sg生药材/ml，加入SIPI905大孔吸附树脂，先 用水洗除糖类等杂质至molish反应呈阴性，然后用3 4倍体积70%乙醇洗脱，收集洗脱 液，减压浓缩，真空干燥至恒重，即得丹参总酚酸含量不得低于50%，其中丹酚酸B含量不 得低于30%。上述超声提取时，功率250w，频率30KHz。上述丹参总酚酸中丹酚酸B的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统 适应性试验B:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇乙腈甲酸水 (30 10 ；1 ；59)；流速为lmL/min ；柱温为25°C;检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰 计算在2000以上。对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每ImL含 0. 44mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品2片，研细，取粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入75%甲醇50mL，称定重量，加热回流lh，取出，冷却后再称定重量，用75%甲醇 补足减失的重量，摇勻，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪进行测定。上述丹参总酚酸的含量测定(紫外_可见光光度法)对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B25mg置于IOOmL量瓶中，加甲醇适量使溶解 并稀释至刻度，摇勻，精密量取上述溶液10mL，加水稀释至IOOmL配置成25 μ g/mL的对照品 溶液。供试品溶液的制备取本品约0. lg，精密称定，置50mL量瓶中，加水适量使溶解 并稀释至刻度，摇勻，精密量取10mL，置分液漏斗中，加入乙酸乙酯饱和的0. Imol/mL盐酸50mL，摇勻，用0. Imol/mL盐酸饱和的乙酸乙酯提取3次，每次20mL，取乙酸乙酯液，水浴蒸 干，残渣加甲醇溶解并定量转移至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，精密量取上述溶 液IOmL置IOOmL量瓶中，加水稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别取对照品与供试品溶液，以溶剂为空白，照紫外-可见分光光度法 (中国药典2005年版一部附录VA)，在286nm波长处测定吸收度，计算即得。
本发明组合物中的三七总皂苷可直接购买的市售商品，购买的产品必须符合国家 标准。优选三七总皂苷是按照下述方法制备的将三七药材采用70%乙醇提取，滤过，滤液 减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，用80 %乙醇洗脱，洗脱液脱色后减压浓缩，精制，干燥，即得 三七总皂苷，其中含三七皂苷Rl不得少于5. 0 %、人参皂苷Rgl不得少于20. 0 %、人参皂苷 Rbl不得少于25. 0%。本发明组合物中的荜茇总生物碱可用下列方法制备采用SFE-CO2萃取，即得荜茇 总生物碱不得低于50%，其中胡椒碱含量不得低于30%，采用环糊精包合，结果以2 6倍 于超临界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水，包合时间2h，即得β -⑶包合物。上述的荜茇总生物碱中胡椒碱的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水溶液 (77 23)为流动相；流速为lmL/min ；柱温为25°C ；检测波长为343nm。按胡椒碱峰计算， 理论板数在2000以上。对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品适量，加甲醇制成每ImL含40μ g的溶 液，即得.供试品溶液的制备取本品2片，研细，取粉末约0. 5g，精密称定，置50mL量瓶中， 加甲醇45mL，超声处理(功率250W，频率20kHz) 30min,放冷，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取 续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪进行测定。上述的荜茇总生物碱的测定对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品5mg，置IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀 释至刻度，摇勻，取2mL至25mL容量瓶中，分别加5mL缓冲液(pH = 5)，2mL溴麝香草酚蓝 试液，摇勻，再加三氯甲烷定容，充分摇勻，移入分液漏斗中，放置分层，取三氯甲烷层(下 层液)，过滤，即得。供试品溶液的制备取本品粉末约0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加三氯甲烷 35mL，超声处理(功率250W，频率20kHz) 30min，冷却后，加5mL pH = 5的缓冲液、2mL溴麝 香草酚蓝试液，摇勻，再加三氯甲烷定容，充分摇勻，移人分液漏斗中，放置分层，取三氯甲 烷层(下层液)过滤，即得。测定法分别取对照品与供试品溶液，以三氯甲烷为空白，照紫外_可见分光光度 法(中国药典2005年版一部附录VA)，在343nm波长处测定吸收度，计算即得。本发明组合物中的琥珀总倍半萜可用下列方法制备本发明组合物中的琥珀总倍 半萜可用下列方法制备采用SFE-CO2萃取，即得总倍半萜含量不得低于50%，采用环糊精 包合，结果以2 6倍于超临界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水，包合时间2h，即得 β-CD包合物。本发明的另一目的是提供了本发明药物组合物的制备方法，该方法可以采用制药领域的常规方法，使用常规的药用辅料进行。例如采用一般方法将丹参总酚酸、三七总皂 苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜均勻混合后，与任意一种或一种以上药剂学上常用的载体 或辅料混合，然后制成各种口服剂型。所述的载体例如赋形剂、填料、稀释剂、润滑剂、湿润 齐U、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、甜味剂、芳香剂等。具体地，所述载体例如淀粉、糊精、乳 糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、 甘氨酸等。根据需要，本发明的药物组合物可制成适于口服用药的制剂，可以是下述的任一 剂型片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸、分散片、口腔崩解片、丸剂。本发明的另一目的是提供了本发明药物组合物在治疗冠心病及心衰、心律失常等 方面的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果是该药物组合物含有丹参总酚酸、三七总皂 苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜，能活血化瘀、产生协同作用，经药效学试验证明其疗效显
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具体实施例方式为了对本发明进行更进一步的详细描述，给出具体实施例，但仅作为阐明本发明， 而不是为了限制本发明的范围。实施例1本发明药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊剂型颗粒剂的制备采用常规制备颗粒剂工艺，取丹参总酚酸1. 5份、三七总皂苷1. 5 份，荜茇总生物碱0. 02份，琥珀总倍半萜0. 02份，辅料适量。混勻，制粒，过筛，干燥，制得 颗粒剂型的药物组合物。片剂的制备将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即制得含丹参总酚酸1. 5份、 三七总皂苷1. 5份，荜茇总生物碱0. 02份，琥珀总倍半萜0. 02份的片剂剂型的药物组合 物。胶囊剂的制备将制得的颗粒装入胶囊壳，制成胶囊剂，即制得含丹参总酚酸1. 2 份、三七总皂苷1份，荜茇总生物碱0. 02份，琥珀总倍半萜0. 02份的片剂剂型的药物组合 物。实施例2本发明组合物的滴丸剂型制备采用常规制备滴丸的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1. 2份，荜茇 总生物碱0. 10份，琥珀总倍半萜0. 08份，辅料适量，制得该药物组合物的滴丸。实施例3本发明组合物的软胶囊剂型制备采用常规制备软胶囊的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇 总生物碱0. 12份，琥珀总倍半萜0. 07份，辅料适量，混勻，用明胶作囊壳材料，压制成软胶 囊，制得该药物组合物的软胶囊。实施例4本发明组合物的微丸剂型制备采用常规制备微丸的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇总生物碱0. 05份，琥珀总倍半萜0. 05份，辅料适量，制得该药物组合物的微丸。实施例5本发明组合物的口腔崩解片制备采用常规制备口腔崩解片的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇总生物碱0. 07份，琥珀总倍半萜0. 04份，辅料适量，制得该药物组合物的口腔崩解片。实施例6本发明组合物的分散片制备采用常规制备分散片的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇 总生物碱0. 03份，琥珀总倍半萜0. 03份，辅料适量，制得该药物组合物的分散片。实施例7本发明组合物的药效试验(一 )本发明组合物的处方配伍优选试验 为了考察不同配伍的丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜的药 效，找到最佳药效的处方，本试验选定丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半 萜作为考察的4个因素，以无与有为2个水平，进行四因素二水平的L8(27)试验。表1因素水平设计表 表2L8(27)正交设计表 动物随机分为9组模型组，合心爽组、荜茇总生物碱+琥珀总倍半萜组，三七总皂 苷+琥珀总倍半萜组，三七总皂苷+荜茇总生物碱组，丹参总酚酸+琥珀总倍半萜组，丹参 总酚酸+荜茇总生物碱组，丹参总酚酸+三七总皂苷组，丹参总酚酸+三七总皂苷+荜茇总 生物碱+琥珀总倍半萜组。药物以0. 5% CMC溶至所需浓度，给药体积为3ml/kg，给药途径 为十二指肠。试验按照文献方法进行。结扎2小时后，心脏结扎线以下横切5片，N-BT染色，采 用多媒体彩色病理图文分析系统，以固定象距测量总心肌面积及梗塞心肌面积，观察心肌 梗塞程度；结果进行统计学处理(t检验)。表3本发明组合物(护心康)不同配伍对心肌梗塞大鼠梗塞面积的影响(X士SD， η = 8) 注与模型组比较，*P< 0. 05，**P < 0. 01。通过正交直观与方差分析，结果表明丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜对心肌梗塞面积的影响均作用显著(P < 0. 05)，因此选用丹参总酚酸、三七总 皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜4种提取物配伍进行护心康组方。( 二 )不同配比组合物肌梗塞模型的影响试验本发明组合物的抗心肌缺血作用由以下药效学试验证明选用健康成年犬30只， 雌雄兼用，随机分为5组，每组6只以丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份、荜拨总生物碱
0.02份、琥珀总倍半萜0. 02份为组合物A组，以丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1. 2份、荜 拨总生物碱0. 04份、琥珀总倍半萜0. 06份为组合物B组，丹参总酚酸1. 5份、三七总皂苷
1.5份、荜拨总生物碱0. 06份、琥珀总倍半萜0. 08为组合物C组，阴性对照生理盐水组、西 药阳性药物合心爽组，共5组。试验方法分别于缺血前、缺血15min(药前)、药后15、30、60、90、120、180min记 录心外膜点图的变化。心外膜点图观察指标以ST段升高2mv以上的导联数(NST)和ST 段升高值的总和为指标观察给药前后的变化，并计算心肌缺血的程度与范围。取动静脉血， 以血氧测定仪分别测定冠状静脉窦、动脉血氧含量，并通过冠脉血流量(CABF)计算心肌耗 氧量(MOC)、血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)，血浆内皮素(ET)、血栓素(TXB2)和 6_酮-前列腺素Fla (B-Keto-PGFla)0药后ISOmin记录完毕，立即取下心脏，NS液冲洗，称 重，心脏结扎线下，平行于冠状沟均勻地将心室部分切成5片，置于硝基四氮唑兰(N-BT)染 液中，常温染色15min。医学图象分析系统测量每片心肌双侧的梗塞区(N-BT非染色区)与 非梗塞区(N-BT染色区)，计算每片心肌的面积，心室总面积和梗塞区总面积。计算梗塞区 占心室及占全心脏的百分比。实验结果进行统计学处理，以t检验判断其显著性。实验结果1、对犬心肌缺血程度(Σ -ST)的影响结果见表4。经十二指肠给药，本发明组合物A、B、C组均有明显减轻心肌缺血程度 (Σ -ST)的作用。其中组合物C组药后30min药物即可发挥作用，并持续至药后180min，动 物Σ -ST 由药前(387. 81 士37. 67)mv 降至(205. 38士 15. 17)mv，下降了 (46. 62士 11. 72) % , 组合物C组在30min 180mi η的Σ -ST与药前及与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 01 0. 05)；组合物B组药后45min药物即可发挥作用，并持续至药后180min，动物 Σ -ST 由药前(394. 24士62. 59)mv 降至(241. 70士71. 37)mv，下降了 (30. 16士 16. 69) %,组合物B组在45min 180min的Σ -ST与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. Ol 0.05)；组合物A组药后60min药物即可发挥作用，并持续至药后120min，动物Σ -ST由药 前(399. 22士60. 53)mv 降至(297. 56士59. 98)mv，下降了 (25. 57士 13. 09) %，组合物 A 组在 60min 120min的Σ -ST与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 05)。2、对犬心肌缺血范围(N-ST)的影响
结果见表5。对照组给入0. 5% CMC后，心肌缺血范围(N-ST)无明显改变。组合 物A、B、C组均有不同程度的减小心肌缺血范围(N-ST)的作用，其中组合物C组药后30min 药物即可发挥作用，并持续至药后180min。动物N-ST由药前(29. 93士0. 82)个标测点降至 (23. 83士3. 31)个标测点，下降了(18. 80士 10. 55)%，组合物 C 组 30min 180min 的 N-ST 与药前及与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 01 0. 05)；组合物B组药后45min 药物即可发挥作用，并持续至药后180min，动物N-ST由药前29. 55士0. 75mv个标测点降至 (24. 87士3. 27)个标测点，下降了 (15. 39士 12. 17) %，组合物B组45min 180min与药前 及对照组比较差异具有统计学意义(P <0.01 0.05)；组合物A组药后60min药物发挥作 用，并持续至药后90min，动物N-ST由药前(29. 37士0. 86)mv个标测点降至(28. 11 士 1.01) 个标测点，下降了(4. 92士2. 78) %，组合物B组45min ISOmin与药前及对照组比较差异 具有统计学意义(P < 0. 05)。以上结果表明，组合物A、B、C均对实验性急性犬心肌缺血有显著的改善作用，可 显著减轻心肌缺血程度(Σ -ST)、缩小心肌缺血范围(N-ST)。3、对犬急性心肌梗塞范围(N-BT染色法测定)的影响结果见表6。护心康组合物A、B、C可减少动物心肌梗塞区面积，与对照组比较均 有显著性差异(P < 0. 05或P < 0. 01)，其中组合物C组心肌梗塞区面积分别占心脏及心室 的(2. 91 士 1.30)%、(6. 54士2. 41)%，与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 01)；组 合物B组心肌梗塞区面积分别占心脏及心室的4. 22士2. 45%、(9. 17士3. 85) %，与对照组 降比较差异具有统计学意义(P <0.01)；组合物A组心肌梗塞区面积分别占心脏及心室的 (5. 89 士 1. 71) %、(13. 47 士 5. 27) %，与对照组降比较差异具有统计学意义(P < 0. 05)。综上，组合物A、B、C，即处方在丹参总酚酸1. 25-1. 5份，三七总皂苷1_1. 5份，荜 茇总生物碱0. 02、. 13份，琥珀总倍半萜0. 02、. 09份之间配比，均具有良好的抗心肌缺血 作用。
(三)本发明组合物对大鼠体外血栓形成及血液粘度的影响本发明组合物抑制血栓形成、降低血液黏度的作用由以下药效学试验证明选用
健康雄性SD大鼠60只，随机分6组，每组10只护心康高、中、低剂量组，护心康高、中、低剂 量组，正常对照组，模型对照组，西药阳性药物阿司匹林对照组。灌胃给药，连续给药7日， 给药第6d，除空白对照组，各组大鼠皮下注射盐酸肾上腺素0. 08mL/100g鼠重，2次/日，间 隔4h，连续2d。注射肾上腺素之间将各组大鼠浸入冰水浴中4min，水温5°C。第2d同法操 作重复1次。末次给药后lh，水合氯醛(300mg/kg)麻醉，硅化聚乙烯插管穿刺颈总动脉，取 2mL血用于体外血栓测定，取血3ml (肝素抗凝)用于血液粘度测定。试验结果如下1.对血瘀型大鼠体外血栓形成的影响由表7可见，与空白组比较，模型组血栓长度、湿重、干重均显著增加，提示血瘀模 型复制成功。与模型组比较，护心康片各剂量组、阿司匹林组的血栓长度、湿重和干重与对 照组比较均有显著性差异。表7.本发明组合物(护心康)对大鼠体外血栓形成的影响(±SD ) 注与模型组比较*P < 0. 05，**P < 0. 01 (下同)2.对血液粘度的影响由表8可见，与模型对照组比较，护心康提取物360g生药/kg剂量组大鼠的全血 粘度在切变率SS-ijOS—11下均明显显著降低(？<0.01)，在切变率1005-、2005-1下有明显降 低(P < 0. 05)；护心康提取物180g生药/kg剂量组大鼠的全血粘度在切变率5S—1及30S—1 下均明显降低(P < 0. 05)，在切变率lOOS—ijOOS—1下有降低趋势，护心康提取物90g生药 /kg剂量组大鼠的全血粘度有下降趋势。阿司匹林组大鼠的全血粘度在在切变率5S—1均显 著降低(P < 0. 01)，在切变率30S—11下均明显降低(P < 0. 05)，在切变率100S—1 JOOS—1下 有降低趋势。各给药组大鼠的血浆粘度与对照组比较均无明显差异。表8.本发明组合物(护心康)对大鼠血液粘度的影响(n = 10，y ±SD ) 注与模型组比较*P < 0. 05，**P < 0. 01 (下同)实验结果显示，大鼠连续灌胃给药7天，护心康提取物明显缩短血栓长度(P < 0. 05)、明显减轻血栓湿重和干重(P < 0. 05)；明显降低切变率5S"\30S^及100S—1下的 全血粘度(P<0.05)。表明护心康提取物具有明显抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。(四)护心康对家兔血小板聚集的影响本发明组合物抑制血小板聚集的作用，由以下药效学试验证明选用雄性日本大 耳白兔60只，给药前穿刺耳中动脉取血测定血小板聚集率，根据血小板聚集率水平及体 重，随机分6组，分组及给药剂量表1。1次/日，连续灌胃7d，末次给药后lh，穿刺耳中动 脉取血，测定血小板聚集率。试验结果见下表9.护心康片对家兔血小板聚集率的影响(i ± s，n = 10，% ) 表9示，各诱导剂诱导聚集时，给药前各组间血小板聚集率无明显差异；给药后护 心康片大剂量组的血小板聚集率与对照组比较呈显著下降趋势(P < 0.01)，小剂量组的血 小板聚集率与对照组比较无明显差异，阳性组与空白组比较，血小板聚集率有下降趋势(P < 0. 05)。结果表明，护心康提取物具有显著抑制血小板聚集的作用。实施例14本发明组合物的作用机理探讨(一 )抗心肌细胞缺氧/再复氧损伤机制的研究为了考察本发明组合物对心肌细胞的保护作用，本试验以心肌细胞复制缺氧/再 复氧损伤模型，采用心肌细胞SOD活性、MDA含量及凋亡心肌细胞相关因子Bcl-2、BaX表达 为考察指标，将培养的心肌细胞随机分为6组(具体见下表)，进行护心康抗心肌细胞氧自 由基损伤与细胞凋亡作用的研究，结果如下1、本发明组合物对缺氧/再复氧损伤心肌细胞SOD活性的影响见表10。表10.对缺氧/再复氧损伤心肌细胞SOD活性的影响G ± s，n = 8) 注与空白组比较*P < 0. 01 ；与缺氧/再复氧组比较#P < 0. 01 ；与合贝爽组 比较:AP < 0. 01，AAP > 0. 05。缺氧/再复氧组SOD活性较空白对照组明显下降(P < 0. 01)；各治疗组SOD活性 均较缺氧/再复氧组显著升高(P < 0.01)。合贝爽组和本发明组合物组比较，与低剂量组 差异明显(P< 0.01)，而与中、高剂量组差异不十分显著(P>0. 05)。2、本发明组合物对缺氧/再复氧损伤心肌细胞MDA含量的影响见表11。表11.对缺氧/再复氧损伤心肌细胞MDA含量的影响(^ ± s，n = 8) 注与空白组比较*P < 0.01 ；与缺氧/再复氧组比较#P < 0.01 ；与合贝爽组
缺氧/再复氧组MDA含量较空白对照组明显升高(P< 0.01)；各治疗组MDA含量 与缺氧/再复氧组相比较均明显下降(P<0.01)。合贝爽组和本发明组合物组比较，与低 剂量组差异明显(p<0. 05)，而与中、高剂量组差异不十分显著(P>0. 05)。3、本发明组合物对缺氧/再复氧损伤心肌细胞凋亡基因Bcl-2、BaX蛋白表达的影 响见表12。表12.对缺氧/再复氧损伤心肌细胞凋亡基因Bcl-2、BaX蛋白表达的影响G± s， n = 8) 注与空白组比较*P < 0.01 ；与缺氧/再复氧组比较#P < 0.01 ；与合贝爽组 比较:AP < 0. 01，AAP > 0. 05。结果表明，缺氧/再复氧组与空白对照组相比，bcl-2的表达减少(P<0.01)，bax 表达增加(P<0.01)。合贝爽组和本发明组合物高、中、低剂量组与缺氧/再复氧组比较 均可明显提高bcl-2的表达(P < 0. 01)，降低bax的表达(P < 0. 01)。合贝爽组和本发明 组合物组比较，与低剂量组差异明显(P< 0.01)，而与中、高剂量组差异不十分显著(P> 0. 05)。( 二 )对心肌缺血大鼠炎症因子的影响为了考察本发明组合物对心肌缺血大鼠炎症因子影响，采用冠状动脉结扎复制心 肌缺血损伤模型，随机分组，分别给药，于术后12、24h处死动物，分别采用ELISA、免疫组化 和PCR方法检测TNF- a，IL-1, VCAM-1，iNOS, NFkB和IkB的含量与表达。结果见下1、本发明组合物对心肌缺血大鼠TNF- a、VCAM-1表达的影响表13本发明组合物(护心康)对心肌缺血大鼠TNF-a表达的影响(n = 5，？± s， 个/mm2) 注与模型组比较，**P < 0.01 ；与地尔硫革组比较，A AP < 0. 01。表14本发明组合物(护心康)对心肌缺血大鼠VCAM表达的影响(n = 5，& 土 s , 个/mm2)
注与模型组比较，< 0. 05 ；与地尔硫卓组比较，AP < 0. 05。从表13、14可知，TNF-a和VCAM-1在正常心脏有一定量的表达，心肌缺血损伤 后两者表达明显增强，地尔硫卓和护心康均能下调其表达，与模型组比较，差异有显著性P < 0.05或P < 0.01 ；护心康片组与地尔硫卓TNF-a比较差异有显著性，P < 0.05，但在 VCAM-1差异无显著性P > 0. 05。2、本发明组合物对心肌缺血大鼠IL-1 0水平、iNos含量的影响IL-1在正常大鼠血清有一定水平的表达，心肌缺血后IL-1含量迅速增加，给予护 心康和地尔硫卓后IL-1含量有所下降，与模型组比较差异有显著性(P < 0. 05)，两组间差 异亦有显著性(P < 0. 05)。见表15。表15本发明组合物(护心康)对心肌缺血血IL-1 0含量的影响(n = 5，^ ± s , 个/mm2) 注与模型组比较，< 0.01 ；与地尔硫卓组比较，AP < 0. 05。从表15可知，正常大鼠血中iNos含量为(5. 31 士 1. 13) u /ml，心肌缺血后迅速增 加，24h后较12h有明显下降，地尔硝卓和本发明组合物均能下调iNos的水平，两组与模型 组差异有显著性，且两组间差异亦有显著性，P < 0. 05。见表16。表16本发明组合物(护心康)对心肌缺血大鼠血iNos含量的影响(n = 5，^±s， 个/mm2) 注与模型组比较，*P < 0. 05 ；与地尔硫卓组比较，AP < 0. 05。从表16可知，IL-1，iNOS在正常大鼠血清有一定水平的表达，心肌缺血后两者含 量迅速增加，给予护心康提取物和地尔硫卓下调IL-1、iNos，两组与模型组差异有显著性， 且两组间差异亦有显著性，P < 0. 05。3、本发明组合物对NFkBP65、1KB表达的影响正常情况下NFkBP65有较低水平的表达，心肌缺血损伤后NFkBP65增加，地尔硫卓、 本发明组合物均能下调NFkBP65的表达，但地尔硫卓不如本发明组合物，P < 0. 05。见表17。表17本发明组合物(护心康)对心肌缺血组织NFkBP65表达的影响(n = 5，^ 土 s , 个/mm2) 注与模型组比较，*P < 0. 05 **P < 0. 01 ；与地尔硫卓比较，AP < 0. 05。心肌缺血损伤可抑制1KB表达，本发明组合物能上调其表达，与模型组和对照组 差异有显著性，P < 0.05。见表18。表18本发明组合物(护心康)对1KB表达的影响(n = 5J 土 s ,个/mm2) 注与模型组比，*P < 0. 05 **P < 0. 01 ；与地尔硫卓比较AP < 0. 05。正常情况下NFkBP65、1KB有较低水平的表达，心肌缺血损伤后NFkBP65增加1KB 表达被抑制，地尔硫卓和护心康提取物均能下调NFkBP65的表达，上调1KB，与模型组，差异 有显著性，P < 0. 05，且地尔硫卓不如护心康提取物，P < 0. 05。试验结果表明，本发明组合物能明显改善心肌缺血大鼠的炎症因子，下调血管粘 附因子-1和NO激酶，调节核转录因子kB和IkB的表达，影响炎症信号通路是其可能作用
机理之一。综上，本发明组合物是通过多靶点作用于炎症通路而实现抗心肌缺血作用的。参考文献[1]顾娟，罗海燕，安莲英等.丹参酚酸水提取工艺的研究[J].天然产物研究与开 发，2005，17 (6) 781-783.[2]房信胜，谭晓梅，王建华.大孔吸附树脂纯化丹参总酚酸的工艺研究[J].中草药，2006，37 (10) 1502-1504.[3]罗晓健，周书余，王丹蕾等。均勻设计优化三七总皂苷提取工艺[J].沈阳药科大学学报，2002，19 (2) 122-124.[4]李佳林，云彩麟.蒙药荜茇中胡椒碱提取工艺研究[J].中国民族医药杂志， 2007，13 (4) 63-64.
权利要求
一种用于治疗冠心病的中药组合物，该组合物含有丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜作为活性成分，所用各原料的重量配比为丹参总酚酸1.25-1.5份，三七总皂苷1-1.5份，荜茇总生物碱0.02~0.13份，琥珀总倍半萜0.02~0.09份。
2.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述丹参总酚酸的纯度为不低 于 50%。
3.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的三七总皂苷的纯度为不 低于50%。
4.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的荜茇总生物碱的纯度为 不低于50%。
5.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的琥珀总倍半萜的纯度为 不低于50%。
6.根据权利要求1所述的治疗冠心病的药物组合物，其中所述的丹参总酚酸是由丹参 提取的，所述的三七总皂苷是由三七提取的，所述的荜茇总生物碱是由荜茇提取的，琥珀总 倍半萜是由琥珀提取的。
7.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的丹参总酚酸是按照下述 方法制备的将丹参药材用水或不同浓度乙醇提取，提取液回收乙醇，浓缩至适当体积；浓 缩液用大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液无色，再用低浓度乙醇解吸附，收集乙醇洗脱 液，回收乙醇，干燥，即得丹参总酚酸，其中丹酚酸B的含量不得少于30%。
8.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的荜茇总生物碱是按照下 述方法制备的将荜茇药材采用SFE-CO2萃取或醇提，经得到的总生物碱经纯化、重结晶，即 得荜茇总生物碱，其中胡椒碱含量不得少于30%，采用环糊精包合，结果以2 6倍于超临 界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水，包合时间2h，即得荜茇总生物碱β -⑶包合物。
9.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的三七总皂苷是按照下述 方法制备的将三七药材采用70%乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，用 80%乙醇洗脱，洗脱液脱色后减压浓缩，精制，干燥，即得三七总皂苷，其中含三七皂苷Rl 不得少于5.0%、人参皂苷Rg 1不得少于20. 0%、人参皂苷Rb 1不得少于25. 0%。
10.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的琥珀总倍半萜是按照 下述方法制备的将琥珀药材采用SFE-CO2萃取，即得三萜类成分含量大于50%的琥珀总 倍半萜，采用环糊精包合，结果以2 6倍于超临界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水， 包合时间2h，即得琥珀总倍半萜β -⑶包合物。
11.根据权利要求1-11任意一项所述的药物组合物在制备治疗冠心病及心衰、心律失 常疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于预防或治疗冠心病的中药组合物。它能安全、有效地预防或治疗冠心病，以丹参总酚酸为有效部位的丹参提取物、以三七总皂苷为有效部位的三七提取物、以荜茇总生物碱为有效部位的荜茇提取物、以琥珀总倍半萜为有效部位的琥珀提取物的组合物，利用其中各成分配伍具有的治疗冠心病作用，发挥多环节、多途径、多靶点的活血化瘀、通络止痛作用，该组合物可以是医学上可以接受的固体口服制剂，如片剂、胶囊剂(软胶囊或硬胶囊)、颗粒剂等剂型。本发明用于治疗冠心病及心衰、心律失常等，使用安全、有效、稳定、可控、方便。
文档编号A61K47/48GK101843669SQ201010101800
公开日2010年9月29日 申请日期2010年1月27日 优先权日2010年1月27日
发明者张水寒, 杨永华, 王宇红, 蔡光先, 蔡萍 申请人:湖南中医药大学;蔡光先
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种治疗冠心病的药物，具体地说是由丹参总酚 酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜组成的药物组合物。
背景技术：
冠心病为严重危害人民健康的重大疾病之一，因其发病率高且死亡率高，成为“人 类的第一杀手”。针对中国中年人群的最新研究结果显示，1998年至2008年间，中国男性冠 心病发病率较以往同期增加26. 1%，女性增加19%，我国每年死于各种冠心病的人数估计 超过100万，是我国居民死因构成中上升最快的疾病。随着我国社会老龄化和人类生活方 式的改变，中国将成为一个冠心病发病大国。因此，加强治疗冠心病的药物研究具有重要的 社会和经济意义。随着西药的局限性逐渐被人们认识以及世界疾病谱和医学模式的改变，崇尚天然 药物正成为一种世界性潮流，中药产业面临着前所未有的机遇。但是，由于传统中药产业的 现代化水平低下等原因，中药产业普遍存在生产工艺落后、产品质量不稳定、科技含量低等 诸多问题，导致中药产业的国际市场竞争力弱，中药产业面临着严峻的挑战。复方制剂是中 药临床应用的特色，也是中药制剂的主要形式。中药有效部位组合物具有药效物质基本明 确，作用机理相对清楚，临床适应病症比较确切，而且有较强针对性，安全有效，适应现代制 造业的工艺技术和质量标准的优势，是具备“三效”(高效、速效、长效)、“三小”(剂量、毒 性、副作用小)、“三便”(贮存、携带、服用方便)特点的新型现代中药。冠心病属中医学厥心痛、胸痹、真心痛等范畴，其病机可概括为“不通则痛”和“不荣则痛”。现代大量临床研究表明冠心病是中医药治疗的优势疾病，和西药相比，中医药治 疗冠心病具有以下优势毒副作用相对较少，适合于长期应用；一个药物可作用于冠心病 的多个病理环节；改善患者伴随的症状如气短、乏力、精神抑郁等较为明显；能提高患者生 存质量，减少患者经济负担，符合卫生经济学的要求。基础研究证实活血化瘀、益气活血、清 热解毒等方法具有降低血脂、扩张冠脉、抗凝等多重作用，作用包括了影响内皮功能、易损 斑块、血小板活化、左室重构、血管重构、血管新生等方面，体现了中医药治疗从整体调节入 手，在综合调整冠心病的病理生理、改善临床症状等方面有着化学合成药物不可替代的优 势。加之中医药治病手段和方法来自于自然，副作用少，在世界崇尚绿色的背景下，治疗冠 心病的中成药研制已经成为国内乃至国际上的热点。在目前众多治疗冠心病的中成药中， 以有效部位为主要活性成分的丹参总酚酸、三七总皂苷、葛根黄酮等中成药愈来愈受到人 们重视，治疗冠心病的各种中药有效部位的功效各有所侧重与不同，临床上存在联合用药 的巨大需求。因此，提供药效物质基本明确，作用机理相对清楚，临床适应病症针对性较强， 安全有效，适应现代制造业的工艺技术和质量标准的中药有效部位复方制剂具有重要的临 床意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗冠心病的中药有效部位组合物，其药效物质基 本明确，作用机理相对清楚，质量可控，且能活血化瘀、通络止痛，产生协同作用，疗效显著 提高，提供一种临床上疗效更好、更安全、更方便的中药有效部位复方组合物及其制剂。 本发明通过下述技术方案予以实施。本发明提供的药物组合物所用原料的重量配比为丹参总酚酸1. 25-1. 5份，三七 总皂苷1-1. 5份，荜茇总生物碱0. 02 0. 13份，琥珀总倍半萜0. 02 0. 09份。本发明药物剂型是片剂、滴丸、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂等口服制剂，辅料为药剂学 上可以接受的相应辅料。本发明所用的丹参总酚酸含量不低于50%，三七总皂苷含量不低于50%，荜茇总 生物碱含量不低于50%，琥珀总倍半萜含量不低于50%。本发明治疗冠心病的药物组合物中，所述的丹参总酚酸是从丹参中提取的，三七总 皂苷是从三七中提取的，荜茇总生物碱是从荜茇中提取的，琥珀总倍半萜是从琥珀中提取的； 所述的丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜的含量均符合上述要求。该组合物中的活性成分均可用文献方法制备[1-4]，也可以从市场购买，还可以自 己制备。所述的丹参总酚酸可用下列方法制备丹参药材粉碎成粗粉，以乙醇超声提取2 次，第一次加10倍量乙醇浸泡12小时后超声提取；第二次加5倍乙醇超声提取，每次1小 时。合并提取液，滤过，滤液浓缩至0. 2 0. Sg生药材/ml，加入SIPI905大孔吸附树脂，先 用水洗除糖类等杂质至molish反应呈阴性，然后用3 4倍体积70%乙醇洗脱，收集洗脱 液，减压浓缩，真空干燥至恒重，即得丹参总酚酸含量不得低于50%，其中丹酚酸B含量不 得低于30%。上述超声提取时，功率250w，频率30KHz。上述丹参总酚酸中丹酚酸B的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统 适应性试验B:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇乙腈甲酸水 (30 10 ；1 ；59)；流速为lmL/min ；柱温为25°C;检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰 计算在2000以上。对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每ImL含 0. 44mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品2片，研细，取粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入75%甲醇50mL，称定重量，加热回流lh，取出，冷却后再称定重量，用75%甲醇 补足减失的重量，摇勻，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪进行测定。上述丹参总酚酸的含量测定(紫外_可见光光度法)对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B25mg置于IOOmL量瓶中，加甲醇适量使溶解 并稀释至刻度，摇勻，精密量取上述溶液10mL，加水稀释至IOOmL配置成25 μ g/mL的对照品 溶液。供试品溶液的制备取本品约0. lg，精密称定，置50mL量瓶中，加水适量使溶解 并稀释至刻度，摇勻，精密量取10mL，置分液漏斗中，加入乙酸乙酯饱和的0. Imol/mL盐酸50mL，摇勻，用0. Imol/mL盐酸饱和的乙酸乙酯提取3次，每次20mL，取乙酸乙酯液，水浴蒸 干，残渣加甲醇溶解并定量转移至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，精密量取上述溶 液IOmL置IOOmL量瓶中，加水稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别取对照品与供试品溶液，以溶剂为空白，照紫外-可见分光光度法 (中国药典2005年版一部附录VA)，在286nm波长处测定吸收度，计算即得。
本发明组合物中的三七总皂苷可直接购买的市售商品，购买的产品必须符合国家 标准。优选三七总皂苷是按照下述方法制备的将三七药材采用70%乙醇提取，滤过，滤液 减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，用80 %乙醇洗脱，洗脱液脱色后减压浓缩，精制，干燥，即得 三七总皂苷，其中含三七皂苷Rl不得少于5. 0 %、人参皂苷Rgl不得少于20. 0 %、人参皂苷 Rbl不得少于25. 0%。本发明组合物中的荜茇总生物碱可用下列方法制备采用SFE-CO2萃取，即得荜茇 总生物碱不得低于50%，其中胡椒碱含量不得低于30%，采用环糊精包合，结果以2 6倍 于超临界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水，包合时间2h，即得β -⑶包合物。上述的荜茇总生物碱中胡椒碱的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水溶液 (77 23)为流动相；流速为lmL/min ；柱温为25°C ；检测波长为343nm。按胡椒碱峰计算， 理论板数在2000以上。对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品适量，加甲醇制成每ImL含40μ g的溶 液，即得.供试品溶液的制备取本品2片，研细，取粉末约0. 5g，精密称定，置50mL量瓶中， 加甲醇45mL，超声处理(功率250W，频率20kHz) 30min,放冷，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取 续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪进行测定。上述的荜茇总生物碱的测定对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品5mg，置IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀 释至刻度，摇勻，取2mL至25mL容量瓶中，分别加5mL缓冲液(pH = 5)，2mL溴麝香草酚蓝 试液，摇勻，再加三氯甲烷定容，充分摇勻，移入分液漏斗中，放置分层，取三氯甲烷层(下 层液)，过滤，即得。供试品溶液的制备取本品粉末约0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加三氯甲烷 35mL，超声处理(功率250W，频率20kHz) 30min，冷却后，加5mL pH = 5的缓冲液、2mL溴麝 香草酚蓝试液，摇勻，再加三氯甲烷定容，充分摇勻，移人分液漏斗中，放置分层，取三氯甲 烷层(下层液)过滤，即得。测定法分别取对照品与供试品溶液，以三氯甲烷为空白，照紫外_可见分光光度 法(中国药典2005年版一部附录VA)，在343nm波长处测定吸收度，计算即得。本发明组合物中的琥珀总倍半萜可用下列方法制备本发明组合物中的琥珀总倍 半萜可用下列方法制备采用SFE-CO2萃取，即得总倍半萜含量不得低于50%，采用环糊精 包合，结果以2 6倍于超临界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水，包合时间2h，即得 β-CD包合物。本发明的另一目的是提供了本发明药物组合物的制备方法，该方法可以采用制药领域的常规方法，使用常规的药用辅料进行。例如采用一般方法将丹参总酚酸、三七总皂 苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜均勻混合后，与任意一种或一种以上药剂学上常用的载体 或辅料混合，然后制成各种口服剂型。所述的载体例如赋形剂、填料、稀释剂、润滑剂、湿润 齐U、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、甜味剂、芳香剂等。具体地，所述载体例如淀粉、糊精、乳 糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、 甘氨酸等。根据需要，本发明的药物组合物可制成适于口服用药的制剂，可以是下述的任一 剂型片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸、分散片、口腔崩解片、丸剂。本发明的另一目的是提供了本发明药物组合物在治疗冠心病及心衰、心律失常等 方面的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果是该药物组合物含有丹参总酚酸、三七总皂 苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜，能活血化瘀、产生协同作用，经药效学试验证明其疗效显
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具体实施例方式为了对本发明进行更进一步的详细描述，给出具体实施例，但仅作为阐明本发明， 而不是为了限制本发明的范围。实施例1本发明药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊剂型颗粒剂的制备采用常规制备颗粒剂工艺，取丹参总酚酸1. 5份、三七总皂苷1. 5 份，荜茇总生物碱0. 02份，琥珀总倍半萜0. 02份，辅料适量。混勻，制粒，过筛，干燥，制得 颗粒剂型的药物组合物。片剂的制备将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即制得含丹参总酚酸1. 5份、 三七总皂苷1. 5份，荜茇总生物碱0. 02份，琥珀总倍半萜0. 02份的片剂剂型的药物组合 物。胶囊剂的制备将制得的颗粒装入胶囊壳，制成胶囊剂，即制得含丹参总酚酸1. 2 份、三七总皂苷1份，荜茇总生物碱0. 02份，琥珀总倍半萜0. 02份的片剂剂型的药物组合 物。实施例2本发明组合物的滴丸剂型制备采用常规制备滴丸的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1. 2份，荜茇 总生物碱0. 10份，琥珀总倍半萜0. 08份，辅料适量，制得该药物组合物的滴丸。实施例3本发明组合物的软胶囊剂型制备采用常规制备软胶囊的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇 总生物碱0. 12份，琥珀总倍半萜0. 07份，辅料适量，混勻，用明胶作囊壳材料，压制成软胶 囊，制得该药物组合物的软胶囊。实施例4本发明组合物的微丸剂型制备采用常规制备微丸的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇总生物碱0. 05份，琥珀总倍半萜0. 05份，辅料适量，制得该药物组合物的微丸。实施例5本发明组合物的口腔崩解片制备采用常规制备口腔崩解片的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇总生物碱0. 07份，琥珀总倍半萜0. 04份，辅料适量，制得该药物组合物的口腔崩解片。实施例6本发明组合物的分散片制备采用常规制备分散片的工艺，取丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份，荜茇 总生物碱0. 03份，琥珀总倍半萜0. 03份，辅料适量，制得该药物组合物的分散片。实施例7本发明组合物的药效试验(一 )本发明组合物的处方配伍优选试验 为了考察不同配伍的丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜的药 效，找到最佳药效的处方，本试验选定丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半 萜作为考察的4个因素，以无与有为2个水平，进行四因素二水平的L8(27)试验。表1因素水平设计表 表2L8(27)正交设计表 动物随机分为9组模型组，合心爽组、荜茇总生物碱+琥珀总倍半萜组，三七总皂 苷+琥珀总倍半萜组，三七总皂苷+荜茇总生物碱组，丹参总酚酸+琥珀总倍半萜组，丹参 总酚酸+荜茇总生物碱组，丹参总酚酸+三七总皂苷组，丹参总酚酸+三七总皂苷+荜茇总 生物碱+琥珀总倍半萜组。药物以0. 5% CMC溶至所需浓度，给药体积为3ml/kg，给药途径 为十二指肠。试验按照文献方法进行。结扎2小时后，心脏结扎线以下横切5片，N-BT染色，采 用多媒体彩色病理图文分析系统，以固定象距测量总心肌面积及梗塞心肌面积，观察心肌 梗塞程度；结果进行统计学处理(t检验)。表3本发明组合物(护心康)不同配伍对心肌梗塞大鼠梗塞面积的影响(X士SD， η = 8) 注与模型组比较，*P< 0. 05，**P < 0. 01。通过正交直观与方差分析，结果表明丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜对心肌梗塞面积的影响均作用显著(P < 0. 05)，因此选用丹参总酚酸、三七总 皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜4种提取物配伍进行护心康组方。( 二 )不同配比组合物肌梗塞模型的影响试验本发明组合物的抗心肌缺血作用由以下药效学试验证明选用健康成年犬30只， 雌雄兼用，随机分为5组，每组6只以丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1份、荜拨总生物碱
0.02份、琥珀总倍半萜0. 02份为组合物A组，以丹参总酚酸1. 25份、三七总皂苷1. 2份、荜 拨总生物碱0. 04份、琥珀总倍半萜0. 06份为组合物B组，丹参总酚酸1. 5份、三七总皂苷
1.5份、荜拨总生物碱0. 06份、琥珀总倍半萜0. 08为组合物C组，阴性对照生理盐水组、西 药阳性药物合心爽组，共5组。试验方法分别于缺血前、缺血15min(药前)、药后15、30、60、90、120、180min记 录心外膜点图的变化。心外膜点图观察指标以ST段升高2mv以上的导联数(NST)和ST 段升高值的总和为指标观察给药前后的变化，并计算心肌缺血的程度与范围。取动静脉血， 以血氧测定仪分别测定冠状静脉窦、动脉血氧含量，并通过冠脉血流量(CABF)计算心肌耗 氧量(MOC)、血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)，血浆内皮素(ET)、血栓素(TXB2)和 6_酮-前列腺素Fla (B-Keto-PGFla)0药后ISOmin记录完毕，立即取下心脏，NS液冲洗，称 重，心脏结扎线下，平行于冠状沟均勻地将心室部分切成5片，置于硝基四氮唑兰(N-BT)染 液中，常温染色15min。医学图象分析系统测量每片心肌双侧的梗塞区(N-BT非染色区)与 非梗塞区(N-BT染色区)，计算每片心肌的面积，心室总面积和梗塞区总面积。计算梗塞区 占心室及占全心脏的百分比。实验结果进行统计学处理，以t检验判断其显著性。实验结果1、对犬心肌缺血程度(Σ -ST)的影响结果见表4。经十二指肠给药，本发明组合物A、B、C组均有明显减轻心肌缺血程度 (Σ -ST)的作用。其中组合物C组药后30min药物即可发挥作用，并持续至药后180min，动 物Σ -ST 由药前(387. 81 士37. 67)mv 降至(205. 38士 15. 17)mv，下降了 (46. 62士 11. 72) % , 组合物C组在30min 180mi η的Σ -ST与药前及与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 01 0. 05)；组合物B组药后45min药物即可发挥作用，并持续至药后180min，动物 Σ -ST 由药前(394. 24士62. 59)mv 降至(241. 70士71. 37)mv，下降了 (30. 16士 16. 69) %,组合物B组在45min 180min的Σ -ST与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. Ol 0.05)；组合物A组药后60min药物即可发挥作用，并持续至药后120min，动物Σ -ST由药 前(399. 22士60. 53)mv 降至(297. 56士59. 98)mv，下降了 (25. 57士 13. 09) %，组合物 A 组在 60min 120min的Σ -ST与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 05)。2、对犬心肌缺血范围(N-ST)的影响
结果见表5。对照组给入0. 5% CMC后，心肌缺血范围(N-ST)无明显改变。组合 物A、B、C组均有不同程度的减小心肌缺血范围(N-ST)的作用，其中组合物C组药后30min 药物即可发挥作用，并持续至药后180min。动物N-ST由药前(29. 93士0. 82)个标测点降至 (23. 83士3. 31)个标测点，下降了(18. 80士 10. 55)%，组合物 C 组 30min 180min 的 N-ST 与药前及与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 01 0. 05)；组合物B组药后45min 药物即可发挥作用，并持续至药后180min，动物N-ST由药前29. 55士0. 75mv个标测点降至 (24. 87士3. 27)个标测点，下降了 (15. 39士 12. 17) %，组合物B组45min 180min与药前 及对照组比较差异具有统计学意义(P <0.01 0.05)；组合物A组药后60min药物发挥作 用，并持续至药后90min，动物N-ST由药前(29. 37士0. 86)mv个标测点降至(28. 11 士 1.01) 个标测点，下降了(4. 92士2. 78) %，组合物B组45min ISOmin与药前及对照组比较差异 具有统计学意义(P < 0. 05)。以上结果表明，组合物A、B、C均对实验性急性犬心肌缺血有显著的改善作用，可 显著减轻心肌缺血程度(Σ -ST)、缩小心肌缺血范围(N-ST)。3、对犬急性心肌梗塞范围(N-BT染色法测定)的影响结果见表6。护心康组合物A、B、C可减少动物心肌梗塞区面积，与对照组比较均 有显著性差异(P < 0. 05或P < 0. 01)，其中组合物C组心肌梗塞区面积分别占心脏及心室 的(2. 91 士 1.30)%、(6. 54士2. 41)%，与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0. 01)；组 合物B组心肌梗塞区面积分别占心脏及心室的4. 22士2. 45%、(9. 17士3. 85) %，与对照组 降比较差异具有统计学意义(P <0.01)；组合物A组心肌梗塞区面积分别占心脏及心室的 (5. 89 士 1. 71) %、(13. 47 士 5. 27) %，与对照组降比较差异具有统计学意义(P < 0. 05)。综上，组合物A、B、C，即处方在丹参总酚酸1. 25-1. 5份，三七总皂苷1_1. 5份，荜 茇总生物碱0. 02、. 13份，琥珀总倍半萜0. 02、. 09份之间配比，均具有良好的抗心肌缺血 作用。
(三)本发明组合物对大鼠体外血栓形成及血液粘度的影响本发明组合物抑制血栓形成、降低血液黏度的作用由以下药效学试验证明选用
健康雄性SD大鼠60只，随机分6组，每组10只护心康高、中、低剂量组，护心康高、中、低剂 量组，正常对照组，模型对照组，西药阳性药物阿司匹林对照组。灌胃给药，连续给药7日， 给药第6d，除空白对照组，各组大鼠皮下注射盐酸肾上腺素0. 08mL/100g鼠重，2次/日，间 隔4h，连续2d。注射肾上腺素之间将各组大鼠浸入冰水浴中4min，水温5°C。第2d同法操 作重复1次。末次给药后lh，水合氯醛(300mg/kg)麻醉，硅化聚乙烯插管穿刺颈总动脉，取 2mL血用于体外血栓测定，取血3ml (肝素抗凝)用于血液粘度测定。试验结果如下1.对血瘀型大鼠体外血栓形成的影响由表7可见，与空白组比较，模型组血栓长度、湿重、干重均显著增加，提示血瘀模 型复制成功。与模型组比较，护心康片各剂量组、阿司匹林组的血栓长度、湿重和干重与对 照组比较均有显著性差异。表7.本发明组合物(护心康)对大鼠体外血栓形成的影响(±SD ) 注与模型组比较*P < 0. 05，**P < 0. 01 (下同)2.对血液粘度的影响由表8可见，与模型对照组比较，护心康提取物360g生药/kg剂量组大鼠的全血 粘度在切变率SS-ijOS—11下均明显显著降低(？<0.01)，在切变率1005-、2005-1下有明显降 低(P < 0. 05)；护心康提取物180g生药/kg剂量组大鼠的全血粘度在切变率5S—1及30S—1 下均明显降低(P < 0. 05)，在切变率lOOS—ijOOS—1下有降低趋势，护心康提取物90g生药 /kg剂量组大鼠的全血粘度有下降趋势。阿司匹林组大鼠的全血粘度在在切变率5S—1均显 著降低(P < 0. 01)，在切变率30S—11下均明显降低(P < 0. 05)，在切变率100S—1 JOOS—1下 有降低趋势。各给药组大鼠的血浆粘度与对照组比较均无明显差异。表8.本发明组合物(护心康)对大鼠血液粘度的影响(n = 10，y ±SD ) 注与模型组比较*P < 0. 05，**P < 0. 01 (下同)实验结果显示，大鼠连续灌胃给药7天，护心康提取物明显缩短血栓长度(P < 0. 05)、明显减轻血栓湿重和干重(P < 0. 05)；明显降低切变率5S"\30S^及100S—1下的 全血粘度(P<0.05)。表明护心康提取物具有明显抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。(四)护心康对家兔血小板聚集的影响本发明组合物抑制血小板聚集的作用，由以下药效学试验证明选用雄性日本大 耳白兔60只，给药前穿刺耳中动脉取血测定血小板聚集率，根据血小板聚集率水平及体 重，随机分6组，分组及给药剂量表1。1次/日，连续灌胃7d，末次给药后lh，穿刺耳中动 脉取血，测定血小板聚集率。试验结果见下表9.护心康片对家兔血小板聚集率的影响(i ± s，n = 10，% ) 表9示，各诱导剂诱导聚集时，给药前各组间血小板聚集率无明显差异；给药后护 心康片大剂量组的血小板聚集率与对照组比较呈显著下降趋势(P < 0.01)，小剂量组的血 小板聚集率与对照组比较无明显差异，阳性组与空白组比较，血小板聚集率有下降趋势(P < 0. 05)。结果表明，护心康提取物具有显著抑制血小板聚集的作用。实施例14本发明组合物的作用机理探讨(一 )抗心肌细胞缺氧/再复氧损伤机制的研究为了考察本发明组合物对心肌细胞的保护作用，本试验以心肌细胞复制缺氧/再 复氧损伤模型，采用心肌细胞SOD活性、MDA含量及凋亡心肌细胞相关因子Bcl-2、BaX表达 为考察指标，将培养的心肌细胞随机分为6组(具体见下表)，进行护心康抗心肌细胞氧自 由基损伤与细胞凋亡作用的研究，结果如下1、本发明组合物对缺氧/再复氧损伤心肌细胞SOD活性的影响见表10。表10.对缺氧/再复氧损伤心肌细胞SOD活性的影响G ± s，n = 8) 注与空白组比较*P < 0. 01 ；与缺氧/再复氧组比较#P < 0. 01 ；与合贝爽组 比较:AP < 0. 01，AAP > 0. 05。缺氧/再复氧组SOD活性较空白对照组明显下降(P < 0. 01)；各治疗组SOD活性 均较缺氧/再复氧组显著升高(P < 0.01)。合贝爽组和本发明组合物组比较，与低剂量组 差异明显(P< 0.01)，而与中、高剂量组差异不十分显著(P>0. 05)。2、本发明组合物对缺氧/再复氧损伤心肌细胞MDA含量的影响见表11。表11.对缺氧/再复氧损伤心肌细胞MDA含量的影响(^ ± s，n = 8) 注与空白组比较*P < 0.01 ；与缺氧/再复氧组比较#P < 0.01 ；与合贝爽组
缺氧/再复氧组MDA含量较空白对照组明显升高(P< 0.01)；各治疗组MDA含量 与缺氧/再复氧组相比较均明显下降(P<0.01)。合贝爽组和本发明组合物组比较，与低 剂量组差异明显(p<0. 05)，而与中、高剂量组差异不十分显著(P>0. 05)。3、本发明组合物对缺氧/再复氧损伤心肌细胞凋亡基因Bcl-2、BaX蛋白表达的影 响见表12。表12.对缺氧/再复氧损伤心肌细胞凋亡基因Bcl-2、BaX蛋白表达的影响G± s， n = 8) 注与空白组比较*P < 0.01 ；与缺氧/再复氧组比较#P < 0.01 ；与合贝爽组 比较:AP < 0. 01，AAP > 0. 05。结果表明，缺氧/再复氧组与空白对照组相比，bcl-2的表达减少(P<0.01)，bax 表达增加(P<0.01)。合贝爽组和本发明组合物高、中、低剂量组与缺氧/再复氧组比较 均可明显提高bcl-2的表达(P < 0. 01)，降低bax的表达(P < 0. 01)。合贝爽组和本发明 组合物组比较，与低剂量组差异明显(P< 0.01)，而与中、高剂量组差异不十分显著(P> 0. 05)。( 二 )对心肌缺血大鼠炎症因子的影响为了考察本发明组合物对心肌缺血大鼠炎症因子影响，采用冠状动脉结扎复制心 肌缺血损伤模型，随机分组，分别给药，于术后12、24h处死动物，分别采用ELISA、免疫组化 和PCR方法检测TNF- a，IL-1, VCAM-1，iNOS, NFkB和IkB的含量与表达。结果见下1、本发明组合物对心肌缺血大鼠TNF- a、VCAM-1表达的影响表13本发明组合物(护心康)对心肌缺血大鼠TNF-a表达的影响(n = 5，？± s， 个/mm2) 注与模型组比较，**P < 0.01 ；与地尔硫革组比较，A AP < 0. 01。表14本发明组合物(护心康)对心肌缺血大鼠VCAM表达的影响(n = 5，& 土 s , 个/mm2)
注与模型组比较，< 0. 05 ；与地尔硫卓组比较，AP < 0. 05。从表13、14可知，TNF-a和VCAM-1在正常心脏有一定量的表达，心肌缺血损伤 后两者表达明显增强，地尔硫卓和护心康均能下调其表达，与模型组比较，差异有显著性P < 0.05或P < 0.01 ；护心康片组与地尔硫卓TNF-a比较差异有显著性，P < 0.05，但在 VCAM-1差异无显著性P > 0. 05。2、本发明组合物对心肌缺血大鼠IL-1 0水平、iNos含量的影响IL-1在正常大鼠血清有一定水平的表达，心肌缺血后IL-1含量迅速增加，给予护 心康和地尔硫卓后IL-1含量有所下降，与模型组比较差异有显著性(P < 0. 05)，两组间差 异亦有显著性(P < 0. 05)。见表15。表15本发明组合物(护心康)对心肌缺血血IL-1 0含量的影响(n = 5，^ ± s , 个/mm2) 注与模型组比较，< 0.01 ；与地尔硫卓组比较，AP < 0. 05。从表15可知，正常大鼠血中iNos含量为(5. 31 士 1. 13) u /ml，心肌缺血后迅速增 加，24h后较12h有明显下降，地尔硝卓和本发明组合物均能下调iNos的水平，两组与模型 组差异有显著性，且两组间差异亦有显著性，P < 0. 05。见表16。表16本发明组合物(护心康)对心肌缺血大鼠血iNos含量的影响(n = 5，^±s， 个/mm2) 注与模型组比较，*P < 0. 05 ；与地尔硫卓组比较，AP < 0. 05。从表16可知，IL-1，iNOS在正常大鼠血清有一定水平的表达，心肌缺血后两者含 量迅速增加，给予护心康提取物和地尔硫卓下调IL-1、iNos，两组与模型组差异有显著性， 且两组间差异亦有显著性，P < 0. 05。3、本发明组合物对NFkBP65、1KB表达的影响正常情况下NFkBP65有较低水平的表达，心肌缺血损伤后NFkBP65增加，地尔硫卓、 本发明组合物均能下调NFkBP65的表达，但地尔硫卓不如本发明组合物，P < 0. 05。见表17。表17本发明组合物(护心康)对心肌缺血组织NFkBP65表达的影响(n = 5，^ 土 s , 个/mm2) 注与模型组比较，*P < 0. 05 **P < 0. 01 ；与地尔硫卓比较，AP < 0. 05。心肌缺血损伤可抑制1KB表达，本发明组合物能上调其表达，与模型组和对照组 差异有显著性，P < 0.05。见表18。表18本发明组合物(护心康)对1KB表达的影响(n = 5J 土 s ,个/mm2) 注与模型组比，*P < 0. 05 **P < 0. 01 ；与地尔硫卓比较AP < 0. 05。正常情况下NFkBP65、1KB有较低水平的表达，心肌缺血损伤后NFkBP65增加1KB 表达被抑制，地尔硫卓和护心康提取物均能下调NFkBP65的表达，上调1KB，与模型组，差异 有显著性，P < 0. 05，且地尔硫卓不如护心康提取物，P < 0. 05。试验结果表明，本发明组合物能明显改善心肌缺血大鼠的炎症因子，下调血管粘 附因子-1和NO激酶，调节核转录因子kB和IkB的表达，影响炎症信号通路是其可能作用
机理之一。综上，本发明组合物是通过多靶点作用于炎症通路而实现抗心肌缺血作用的。参考文献[1]顾娟，罗海燕，安莲英等.丹参酚酸水提取工艺的研究[J].天然产物研究与开 发，2005，17 (6) 781-783.[2]房信胜，谭晓梅，王建华.大孔吸附树脂纯化丹参总酚酸的工艺研究[J].中草药，2006，37 (10) 1502-1504.[3]罗晓健，周书余，王丹蕾等。均勻设计优化三七总皂苷提取工艺[J].沈阳药科大学学报，2002，19 (2) 122-124.[4]李佳林，云彩麟.蒙药荜茇中胡椒碱提取工艺研究[J].中国民族医药杂志， 2007，13 (4) 63-64.
权利要求
一种用于治疗冠心病的中药组合物，该组合物含有丹参总酚酸、三七总皂苷、荜茇总生物碱、琥珀总倍半萜作为活性成分，所用各原料的重量配比为丹参总酚酸1.25-1.5份，三七总皂苷1-1.5份，荜茇总生物碱0.02~0.13份，琥珀总倍半萜0.02~0.09份。
2.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述丹参总酚酸的纯度为不低 于 50%。
3.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的三七总皂苷的纯度为不 低于50%。
4.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的荜茇总生物碱的纯度为 不低于50%。
5.根据权利要求1所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的琥珀总倍半萜的纯度为 不低于50%。
6.根据权利要求1所述的治疗冠心病的药物组合物，其中所述的丹参总酚酸是由丹参 提取的，所述的三七总皂苷是由三七提取的，所述的荜茇总生物碱是由荜茇提取的，琥珀总 倍半萜是由琥珀提取的。
7.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的丹参总酚酸是按照下述 方法制备的将丹参药材用水或不同浓度乙醇提取，提取液回收乙醇，浓缩至适当体积；浓 缩液用大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液无色，再用低浓度乙醇解吸附，收集乙醇洗脱 液，回收乙醇，干燥，即得丹参总酚酸，其中丹酚酸B的含量不得少于30%。
8.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的荜茇总生物碱是按照下 述方法制备的将荜茇药材采用SFE-CO2萃取或醇提，经得到的总生物碱经纯化、重结晶，即 得荜茇总生物碱，其中胡椒碱含量不得少于30%，采用环糊精包合，结果以2 6倍于超临 界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水，包合时间2h，即得荜茇总生物碱β -⑶包合物。
9.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的三七总皂苷是按照下述 方法制备的将三七药材采用70%乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，用 80%乙醇洗脱，洗脱液脱色后减压浓缩，精制，干燥，即得三七总皂苷，其中含三七皂苷Rl 不得少于5.0%、人参皂苷Rg 1不得少于20. 0%、人参皂苷Rb 1不得少于25. 0%。
10.根据权利要求6所述治疗冠心病的药物组合物，其中所述的琥珀总倍半萜是按照 下述方法制备的将琥珀药材采用SFE-CO2萃取，即得三萜类成分含量大于50%的琥珀总 倍半萜，采用环糊精包合，结果以2 6倍于超临界CO2萃取物的β -⑶包合，加4倍量水， 包合时间2h，即得琥珀总倍半萜β -⑶包合物。
11.根据权利要求1-11任意一项所述的药物组合物在制备治疗冠心病及心衰、心律失 常疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于预防或治疗冠心病的中药组合物。它能安全、有效地预防或治疗冠心病，以丹参总酚酸为有效部位的丹参提取物、以三七总皂苷为有效部位的三七提取物、以荜茇总生物碱为有效部位的荜茇提取物、以琥珀总倍半萜为有效部位的琥珀提取物的组合物，利用其中各成分配伍具有的治疗冠心病作用，发挥多环节、多途径、多靶点的活血化瘀、通络止痛作用，该组合物可以是医学上可以接受的固体口服制剂，如片剂、胶囊剂(软胶囊或硬胶囊)、颗粒剂等剂型。本发明用于治疗冠心病及心衰、心律失常等，使用安全、有效、稳定、可控、方便。
文档编号A61K47/48GK101843669SQ201010101800
公开日2010年9月29日 申请日期2010年1月27日 优先权日2010年1月27日
发明者张水寒, 杨永华, 王宇红, 蔡光先, 蔡萍 申请人:湖南中医药大学;蔡光先
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