专利名称:一种具有抗肿瘤作用的黄三七总皂苷的提取方法及其组成的制作方法
技术领域:
本发明涉及植物黄三七总皂苷的提取制备及其在肿瘤的化学预防和治疗中的应用;同时涉及通过植物化学分离手段从黄三七活性部位中分离出具有抗肿瘤活性的13个环菠萝蜜烷型三萜及其木糖皂苷化合物及其制备方法。
背景技术:
黄三七[Souliea vaginata(Maxim. )Franch.]为毛茛科升麻族黄三七属多年生草本植物,为单属单种,是我国特有的药用植物,主要分布于西藏、云南、四川、甘肃、陕西等省,为民间常用草药,其全草或根状茎可供药用,具有清热解毒、消炎和消肿等功效,民间用来治疗眼结膜炎、风湿性关节痛、红白痢、咽喉肿痛等,外敷可以治疗疮疖和毒蛇咬伤。对黄三七化学成分的研究,文献报道较少,仅报道6个环菠萝蜜烷型三萜皂苷。在化学分类学上,升麻族植物含有特征性环菠萝蜜烷型三萜皂苷及桂皮酸的衍生物,这一点有别于毛茛科其他植物类群。已报道的此种类型的皂苷具有广泛的药理学活性,其活性涉及到解热、镇痛、抗炎、抗风湿、抗肿瘤、抑制核苷转运、抗骨质疏松、心血管和免疫学领域。但目前国内外对黄三七在抗肿瘤方面的研究为一片空白,特别是针对黄三七在抗肿瘤活性部位及其有效成分组成方面没有文献报道。本发明通过对黄三七总皂苷的系统研究,药理筛选发现黄三七总皂苷对多种癌细胞具有显著的抑制作用,在此基础上,进一步对黄三七总皂苷中单体成分进行了研究, 分离得到了黄三七皂苷A(soulieosides A),黄三七皂苷B(soulieosides B),黄三七皂 1^f C(soulieosides C),黄三七阜苷 D(soulieosides D),黄三七阜苷 E(soulieosides
E),黄三七皂苷F(soulieosidesF),黄三七皂苷G(soulieosides G),黄三七皂苷 H(soulieosidesH),黄三七阜苷 I (soulieosides I),黄三七素 A(soulieonins A), 25-anhydrocimicigenol, 25-0-乙酰升麻醇木糖苷[25-0-acetylcimigenol-3-0- β -D-xy lopyranoside],26(R)-甲氧基阿特素口 6 (R)-methoxyactein]共 13 种三萜皂苷。
发明内容
本发明的目的之一是提供安全有效毒副作用低的抗肿瘤效果显著的中药活性部位,并提供一种制备方法。本发明目的之二是提供一种具有抗肿瘤活性的药物,以黄三七提取物和药用辅料组成。本发明目的之三是对黄三七活性部位中单体成分进行研究,以期寻找抗肿瘤活性强的单体皂苷。本发明的目的之四是提供制备这13种化合物(黄三七皂苷A(S0Ulie0SideS A),黄三七皂苷B(soulieosides B),黄三七皂苷C(soulieosides C),黄三七皂苷 D(soulieosides D),黄三七阜苷 E(soulieosidesE),黄三七阜苷 F(soulieosides
F),黄三七皂苷G(soulieosidesG),黄三七皂苷H(soulieosides H),黄三七皂苷I (soulieosides I),黄三七素 A (soulieonins A), 25-anhydrocimicigenol, 25-0-乙酉先升麻醇木糖苷[25-0-acetylcimigenol-3-0- β -D-xylopyran-oside],26 (R)-甲氧基阿特素 [26(R)-methoxyactein])的方法。本发明的技术方案依次包含如下方法步骤1、黄三七活性部位的制备将黄三七全草粉碎后,用10倍量水或含水有机溶剂回流或超声提取3次;每次回流提取时间为1-3小时,超声提取时间为0. 5-2小时,提取液减压浓缩至波密度为1. 12时, 加入吸附剂(硅胶或硅藻土)进行柱层析;先以己烷或石油醚洗去油脂,然后用乙酸乙酯洗脱,得到的乙酸乙酯部分经减压浓缩得到总皂苷,收率为6-8%左右。提取中所用含水有机溶剂是指含不同量的水的甲醇、乙醇、异丙醇等。所得黄三七活性部位中应含有如下成分黄三七皂苷A(soulieosides A),黄三七皂苷B(soulieosides B),黄三七皂 1^f C(soulieosides C),黄三七阜苷 D(soulieosides D),黄三七阜苷 E(soulieosides E),黄三七皂苷F(soulieosides F),黄三七皂苷G(soulieosides G),黄三七皂苷 H(soulieosides H),黄三七阜苷 I (soulieosides I),黄三七素 A(soulieoninsA), 25-anhydrocimicigenol,25-0-乙酰升麻醇木糖苷[25-0-acetylcimigenol-3-0- β -D-xy lopyranoside],26 (R)-甲氧基阿特素[26 (R) -methoxyactein]。2、本发明中皂苷单体化合物的提取分离步骤和方法如下黄三七全草^g,按步骤1提取得黄三七总皂苷400g,进行柱色谱层析分离,用氯仿-甲醇梯度洗脱,TLC检测,将相同馏分合并,得到SVA-a(30g)、SVA-M2lg)、SVA-c (37g) 和SVA-d(60g)四个部分。SVA-a(30g)经300 400目硅胶柱层析,以氯仿甲醇 (10 0 9 1)梯度洗脱,分为 SVA-a-fr. 3、SVA-a-fr. 8、SVA-a-fr. 9、SVA-a-fr. 12、 SVA-a-fr. 14几个部分,对SVA-a-fr. 3 (800mg)经300 400目硅胶柱层析,石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 3)洗脱,得化合物 I ;SVA-a-fr. 8 和 SVA-a-9 合并 SVA-a-fr. 8, 9(3g)后,经氯仿:甲醇(99 1 95 5)洗脱,分为 SVA-a-8,9-fr. 4、SVA-a-8,9-fr. 7、 SVA-a-8,9-fr. 9、SVA-a-8,9-fr. 11 几个部分,对 SVA-a-8,9-fr. 4 (70mg) 300 400 目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 3)分为SVA-a-8,9-fr. 4-fr. 7几部分,对SVA-a-8,9-fr. 4-fr. 7经300 400目硅胶氯仿甲醇(1 1)柱层析,再经重结晶,得IV(5mg) ;SVA-a-8,9-fr. 7 (300mg)经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酉旨甲醇(70 30 4),得化合物 V(52mg) ;SVA_a_8,9-fr. 9 和 SVA_a_8,9-fr. 11 合并后(700mg),经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 5) 洗脱,得化合物IIlO60mg)。SVA-a-fr. 12(1. Ig),经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 5)洗脱,得化合物II(37mg) ;SVA-a-fr. 14(Ig)以经 300 400目硅胶柱层析,以氯仿甲醇(98 2 95 5)洗脱,得化合物VI (12mg)。 SVA-b(21g)以丙酮溶解过滤,丙酮不溶部分(13. 7g),经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇O 8 1.6)J4 5 0. 3 4 5 1)洗脱,分为SVA-b-fr. 3、 SVA-b-fr. 11几个部分,对SVA-b-fr. 3 (6g)经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇(65 35 7)洗脱,得化合物 XII(1050mg),SVA-b-fr. ll(300mg)经 300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇(60 40 8),得化合物¥111(10511^),对 SVA-b-fr. 11-fr. 7经300 400目硅胶柱层析和重结晶,得化合物IX (8mg)。对SVA_c (37g)经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇G 5 0. 5 4 5 1 4:6: 1.2)梯度洗脱,分为SVA-c-fr. 3几个部分,对SVA-c-fr. 3经300 400目硅胶柱层析,氯仿甲醇(93 7),得化合物乂111(6011^)。SVA_d(60g)经300 400目硅胶柱层析, 以石油醚丙酮(10 0-7 3)梯度洗脱,分为 SVA-d-fr. 14、SVA_d-fr. 15、SVA_d-fr. 17 几个部分,对 SVA-d-fr. 14 和 SVA-d-fr. 15 合并 SVA-d-fr. 14,15(1. 5g)后,以石油醚丙酮(95 5-70 30)梯度洗脱,分为 SVA-d-fr. 14,15-fr. 11 几个部分,对 SVA-d-fr. 14, 15-fr. 11经300 400目硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯(85 15)洗脱,得化合物 XI (13mg),对SVA-d-fr. 17(500mg)经300 400目硅胶柱层析,以石油醚丙酮(85 15) 洗脱,得化合物X OOmg)。水层上大孔树脂DlOl的95%乙醇洗脱物GOg),经100 200目硅胶柱层析,分别以氯仿甲醇(10 0 9 1)、氯仿甲醇水(8 2 0.2)、氯仿 甲醇水(65 35 3. 5)梯度洗脱,分为fr. 13几个部分,对fr. 13(1. 2g)经300 400 目硅胶柱层析,以氯仿甲醇(88 12),分为fr. 13-fr. 4几个部分,对fr. 13-fr. 4 (90mg) 经硅胶柱层析,以石油醚乙酸乙酯甲醇O 8 1.6)洗脱,得化合物VII(40mg)。具体化合物结构如下
权利要求
1.一种具有抗肿瘤作用的黄三七总皂苷的提取方法,其特征在于将黄三七全草粉碎后,用10倍量水或含水有机溶剂回流或超声提取3次;每次回流提取时间为1-3小时,超声提取时间为0. 5-2小时,提取液减压浓缩至波密度为1. 12时,加入吸附剂(硅胶或硅藻土) 进行柱层析;先以己烷或石油醚洗去油脂,然后用乙酸乙酯洗脱,得到的乙酸乙酯部分经减压浓缩得到总皂苷,收率为6-8%左右。
2.具有抗肿瘤作用的黄三七总皂苷的组成,其特征在于黄三七皂苷A(S0Ulie0SideS A),黄三七皂苷B(soulieosides B),黄三七皂苷C(soulieosides C),黄三七皂苷 D(soulieosides D),黄三七阜苷 E(soulieosidesE),黄三七阜苷 F(soulieosides F),黄三七皂苷G(soulieosides G),黄三七皂苷H(soulieosides H),黄三七皂苷 I (soulieosides I),黄三七素 A (soulieonins A), 25-anhydrocimicigenol, 25-0-乙酉先升麻醇木糖苷[25-O-acetylcimigenol-3-O-0 -D-xylopyranoside]J6(R)-甲氧基阿特素 [26(R)-methoxyactein]。
3.黄三七总皂苷的抗癌活性,其特征在于在体外对人结肠癌HCT-8细胞、人肝癌细胞BEL-7402、人胃癌MGC-823细胞、肺腺癌细胞A549、人白血病HL-60细胞、人肝肿瘤细胞 H印G2、乳腺癌细胞SF-268和乳腺癌细胞McF_7均有良好的抑制作用,而对正常小鼠肝细胞损伤作用相对微弱,可望用作临床肿瘤预防和治疗药物。
全文摘要
本发明涉及一种黄三七总皂苷的提取组成及其在肿瘤治疗、肿瘤预防和抗氧化损伤中的应用,所说总皂苷是将黄三七药材粉碎过筛后,用80%乙醇加热回流提取、过滤、减压浓缩,加入吸附剂(硅胶或硅藻土)进行柱层析,先以工业己烷洗去油脂,然后用乙酸乙酯洗脱,得到的乙酸乙酯部分经减压浓缩得总皂苷,工艺简单,收率提高,成本降低,极有利于工业化生产,药效学实验证明,所说总皂苷可望用于制备肿瘤化学预防和治疗药物。
文档编号A61P35/00GK102188502SQ201010120858
公开日2011年9月21日 申请日期2010年3月10日 优先权日2010年3月10日
发明者吴海峰, 周亮, 杨峻山, 许旭东, 陈士林 申请人:中国医学科学院药用植物研究所