一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物及其制备方法
专利名称：一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物药物技术领域，具体涉及一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合 物及其制备方法。
背景技术：
过敏性疾病(也称变态反应性疾病)是一类发病率高、危害严重、社会影响大的疾 病。2005年世界变态反应组织(WAO)公布了对30个国家进行的过敏性疾病流行病学调查， 结果在这些国家的12亿总人口中，22%的人群患有IgE介导的过敏性疾病。在发达国家， 过敏性疾病已经以其高发病率跃居第六大慢性病，大约15 20%的人群患有各种不同的 过敏性疾病，其中主要包括过敏性哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎、过敏性结膜炎等。变态反应是异常的、有害的、病理性的免疫反应。引起变态反应的抗原物质称为变 应原(allergen)。变应原可以是完全抗原(如微生物、寄生虫、花粉、异种动物血清等)，也 可以是半抗原(如药物和一些化学制剂)。有时变性的自身成分作为自身抗原，也可引起变 态反应发生。变态反应的发生可分为两个阶段致敏阶段，当机体初次接触变应原后，需要 有一个潜伏期(1 2周)，免疫活性细胞才能产生相应抗体或致敏淋巴细胞，在此期间机体 无任何异常反应，但已具备了发生变态反应的潜在能力。变态反应发生阶段，当致敏机体再 次与同一变应原接触，变应原与相应抗体或致敏淋巴细胞结合，引起机体生理功能紊乱或 组织损伤，也就是异常免疫反应出现，此过程出现较快，少则几秒至几十秒，多则2 3天。 变态反应发生的原因一是个体的免疫机能状态；二是进入机体的变应原的性质、纯度及途 径等。这两个因素中主要因素是前者，即个体免疫应答的差异。变态反应发生的特点是必 须有变应原的刺激；具有严格的针对性，即两次接触的变应原必须相同；有一定的潜伏期， 必须经历从致敏到变态反应发生两个阶段；必须有过敏体质者存在。变态反应发生的原因 和表现十分复杂，对其分类曾有不同的观点。但目前大多按照造成免疫病理的机制，将变态 反应分为四类1型(速发型)、Π型(细胞毒型)、III型(免疫复合物型)、IV型(迟发 型)。特异性免疫治疗(special immunotherapy, SIT)又称脱敏治疗，是针对变应性疾 病的病因进行治疗。SIT最初是1903年由德国的Dunbar等开始试用。后来Noon和Freeman 等对SIT加以发展并进行广泛的推广，到1911年就有大量的临床研究报道。SIT的治疗方 式是以用变应原活性成分规律性地递增给药，如治疗花粉或尘螨等引起的过敏性疾病。大 量的临床研究结果表明，在临床上对治疗变应性鼻炎、过敏性哮喘、特应性皮炎和过敏性结 膜炎方面均有效，并且可以减少炎症的发生。结果还表明，免疫治疗短期疗效不如抗组胺药 或者类固醇类药物治疗，但是长期疗效优于药物治疗。临床实践证实经过正规的脱敏治疗 者多可终生受益，这是一般的药物治疗难以达到的。标准化变应原特异性免疫治疗能够改 变变态反应性疾病的基本病理生理机制，是世界卫生组织和全球各变态反应、哮喘与免疫 学学会唯一共同推荐的对因治疗。目前较为公认的有两种标准化特异性免疫治疗的给药方式，即皮下注射给药方式和舌下含服给药方式。并且，由于舌下含服脱敏治疗在疗效及安全性上所展现的优势，世界 卫生组织于2001年发表的ARIA报告中，正式推荐舌下含服为可替代传统皮下注射方式的 特异性免疫治疗方法，并建议使用于成人及儿童过敏病人身上。目前脱敏药物舌下含服给 药的剂型主要为舌下含服滴剂，但舌下含服滴剂属于液体制剂，而变应原是一种活性蛋白， 活性蛋白一般都需要低温保存才能保持活性以保证疗效，这就给运输、储存、携带以及使用 带来不便；并且给药剂量由小到大逐渐递增，特别是至最佳维持剂量时因液体给药量容积 大而使患者尤其是儿童和老年患者的准确定量给药带来不便，不利于标准化给药的实施。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物及其制备方法。为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合 物，它包含治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。在一个优选的实施方 案中，所述膜剂药物组合物是由治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体组 成的。在另一个优选的实施方案中，所述成膜物选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、普鲁兰多糖、羟 丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、甲基纤维素、透明质酸、壳 聚糖、几丁质、山梨糖醇、木糖醇、海藻酸钠、胶原蛋白、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、果胶、魔芋 胶、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、甲基异丁烯酸共聚物、聚 羧乙烯聚合物或其组合。在一个更优选的实施方案中，所述成膜物占整个膜剂药物组合物的质量百分比为 30% 99%。在一个还要优选的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与普鲁兰多糖的组合物， 其中，海藻酸钠与普鲁兰多糖的质量比为1 1 10 1。在一个最优选的实施方案中，所 述海藻酸钠占整个膜剂药物组合物的质量百分比为20 % 85 % (更佳40 % 75 % )，所述 普鲁兰多糖占整个膜剂药物组合物的质量百分比为5% 25% (更佳8% 20% )。在另一个还要优选的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与蔗糖的组合物，其中， 海藻酸钠与蔗糖的质量比为1 1 10 1。在另一个最优选的实施方案中，所述海藻酸 钠占整个膜剂药物组合物的质量百分比为20 % 85 % (更佳40 % 75 % )，所述蔗糖占整 个膜剂药物组合物的质量百分比为5% 25% (更佳8% 20% )。在一个较佳的实施方案中，所述变应原选自尘螨变应原、花粉变应原、昆虫变应 原、动物皮毛变应原、食品变应原、微生物变应原或其组合。在另一个较佳的实施方案中，所 述变应原是天然变应原提取液、纯化的天然变应原或重组变应原等。在还有一个较佳的实施方案中，所述膜剂药物组合物是密闭真空包装的。在一个优选的实施方案中，以整个膜剂药物组合物的质量计，所述膜剂药物组合 物是由治疗有效量的变应原、质量百分比20% 85%的海藻酸钠、质量百分比5% 25% 的普鲁兰多糖或蔗糖、质量百分比0% 65%的填充剂、质量百分比0% 20%的增塑剂、 质量百分比0% 5%的表面活性剂、质量百分比0% 5%的消泡剂、质量百分比0% 3%的防腐剂、质量百分比0. 01% 5%的盐、以及质量百分比0. 01% 20%的水组成的。 以上所述所有组分质量百分比之和为100%。
在一个更优选的实施方案中，所述治疗有效量的变应原占整个膜剂药物组合物的 质量百分比为0. 0001% 10%。本发明第二方面提供了一种制备上述膜剂药物组合物的方法，包括如下步骤a)将成膜物与药学上可接受的载体溶解于溶剂中，静置，得到成膜液；b)将变应原与步骤a)得到的成膜液混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜。在一个较佳的实施方案中，在所述步骤C)中，所述涂布的方法选自逆辊式涂布、 凹版涂布、浸渍涂布、挤压涂布、辊式刮刀涂布、气刀涂布、或落帘涂布。在另一个较佳的实 施方案中，在所述步骤c)中，所述涂布干燥的温度为20°C 50°C。在还有一个较佳的实施方案中，所述的制备方法还包括将所述步骤c)制得的膜 分割切膜、灭菌、密闭真空包装的步骤。优选地，所述灭菌的方法采用紫外灭菌的方法。本发明提供的含有变应原的膜剂药物组合物在口腔中可以迅速溶化(快速分 散)，很快被舌下粘膜吸收，起效较快。由于膜剂在室温下能长时间保持生物活性(变应原 活性)的稳定，所以质量稳定；加之含量准确，并且体积小、重量轻，便于运输、储存、携带以 及使用。另外膜剂的施用方便了儿童和老年患者的使用，为变应原特异性免疫治疗的标准 化给药提供了便利。具体实施方案具体而言，本发明提供了一种含有变应原的膜剂药物组合物，它包含治疗有效量 的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。此处的术语“包含……”指的是该药物组合 物中还可以含有任何其它组分，这些组分可以以任何含量存在，只要以该含量存在的该组 分是人体可接受的，并对于本发明药物组合物中活性成分的生物活性(包括稳定性)以及 膜剂药物组合物的理化性质没有实质性的影响即可。在一个优选的实施方案中，所述膜剂 药物组合物是由治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体组成的。本发明所述的成膜物一般应具有如下特性可以溶解于水(或者至少是部分可以 溶解于水)，并且吸水后可膨胀崩解。优选地，所述成膜物在吸水后至少可以增加20%的重 量。另外，适用于本发明的成膜物应当是能够用于口服给药的材料。在一个较佳的实施方案中，所述成膜物选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、普鲁兰多糖、羟丙 基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、甲基纤维素、透明质酸、壳聚 糖、几丁质、山梨糖醇、木糖醇、海藻酸钠、胶原蛋白、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、果胶、魔芋胶、 聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、甲基异丁烯酸共聚物、聚羧 乙烯聚合物或其组合。较佳地，所述成膜物占整个膜剂药物组合物的质量百分比为30% 99%，还要佳 60% 95%。在一个更佳的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与普鲁兰多糖的组合物，其 中，海藻酸钠与普鲁兰多糖的质量比为1 1 10 1，还要佳2 1 5 1。在另一个 较佳的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与蔗糖的组合物，其中，海藻酸钠与蔗糖的质量 比为1 1 10 1，还要佳2 1 5 1。其中，优选的海藻酸钠(i%，2(rc )的黏度 为SOitfa· s 200mPa· s，优选的普鲁兰多糖的分子量为1X105 5X105。选用不同的成膜物对于成膜液的粘度有很大影响，一般优选的粘度为lOOcps lOOOOOcps，更优选500cps 80000cps，还要优选lOOOcps 40000cps。可以采用不同方 法调整成膜液的粘度，例如，加入高分子量的多聚物或者交联剂(如钙盐、钠盐、钾盐)可以 增加成膜液的粘度；温度也可以影响成膜液的粘度。在另一个较佳的实施方案中，所述变应原选自尘螨变应原、花粉变应原、昆虫变 应原、动物皮毛变应原、食品变应原、微生物变应原或其组合。其中所述尘螨变应原是以 尘螨为来源获得的变应原，包括但不限于下列尘螨变应原粉尘螨(Dermatophagoides farinae)、户 1 ■ (Dermatophagoides pteronyssinus)、■角 1 ■ (Dermatophagoides microceras)、埋内欧尘螨(Euroglyphus maynei)变应原等。花粉变应原是以花粉为来源 获得的变应原，包括但不限于下列花粉变应原蒿属(Artemisia)花粉、豚草属(Ambrosia) 花粉、蓖麻属(Ricinus)花粉、潷草属(Hummlus)花粉、藜属(Chenlpldum)花粉、苋属 (Amaranthus)花粉、木麻黄属(Casuarina)花粉、桦木属(Betula)花粉、松属(Pinus)花 粉、云杉属(Picea)花粉、柳杉属(Cryptomeria)花粉、悬铃木属(Platanus)花粉变应原 等。其中，蒿属(Artemisia)花粉变应原主要包括北艾(Artemisia vulgaris Linn.)花 粉、黄花蒿(Artemisia annuaLinn.)花粉、大轩蒿(Artemisia sieversiana Ehrhart ex ffilld.)花粉、艾(Artemisia argyiLevl. et Van.)花粉变应原等。昆虫变应原是以昆虫为 来源获得的变应原，包括但不限于下列昆虫变应原美洲大蠊(Periplaneta americana), 黑胸大爐(Periplanetafuliginosa)、德国小爐(Blattella germanica)、家妮(Musca domestica)变应原等。动物皮毛变应原包括猫上皮、狗上皮变应原等。本发明所述微生物 变应原包括但不限于，各种细菌、真菌、酵母、病毒、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、原生 动物变应原等。食品变应原包括来源于任何形式的食品变应原，包括但不限于加工、未加 工，熟的、生的食品变应原(例如，生的海虾/蟹、熟的海虾/蟹变应原)等。应当理解，本发明所述变应原可以是单一成分的变应原(例如粉尘螨的Derf I变 应原、或北艾花粉的Art vl变应原等)，也可以是来源相同(单一来源)的变应原混合物 (例如粉尘螨变应原提取液、或豚草花粉变应原提取液等)，在不影响变应原自身活性和效 价的前提下，也可以是多种变应原来源的、以任何方式混合的变应原组合物(例如粉尘螨 变应原与户尘螨变应原的组合物，或粉尘螨变应原与豚草花粉变应原的组合物等)。此外，本发明所述变应原可以是从商业途径购买，也可以使用任何现有技术中不 使变应原降解或失活的方式从天然物质或动植物中提取的方法获得，还可以通过基因工程 手段获得任何种类的具有生物活性(变应原活性)的重组变应原(包括与天然变应原序列 一致的重组变应原、修饰变应原、或重组变应原的突变体等)。一般从天然物质或动植物中提取变应原的步骤为1)对原材料(如尘螨、花粉等) 进行脱脂处理；幻使用缓冲液(如生理盐水、磷酸缓冲液、coca' s液等)浸提；幻经过离 心或者过滤，再无菌处理，得到变应原提取液；4)冷冻干燥，去除水分。其中，所述步骤4) 为可选步骤。采用诸如BCA法、Lowry法测定变应原提取液(物)的总蛋白浓度，采用诸如 ELISA法测定主要变应原蛋白的含量。其中，主要变应原蛋白含量一般占变应原提取液总 蛋白浓度的 25% (质量百分比)，更常见为5% 15% (质量百分比)。常见的主要 变应原蛋白包括但不限于，粉尘螨变应原蛋白I、IKDerf I.Derf II)，户尘螨变应原蛋白 I>11 (Derp I.Derp II)，北艾花粉变应原蛋白1KCan fl)，德国小蠊变应原蛋白l、2(Bla gU Bla g2)等。需要特别说明的是，对于本发明膜剂药物组合物中变应原的剂量浓度并没有太多 限制，只要其能够起到有效治疗即可(即治疗有效量的变应原)。根据特异性免疫治疗(脱 敏治疗)的要求，本发明的膜剂药物组合物可以制备成多个剂量浓度的制剂，先从低剂量 浓度给药，剂量再由小到大逐渐递增，至最佳维持剂量浓度。近年来，也出现了以单一剂量 持续给药的脱敏治疗方案。因此，术语“治疗有效量的变应原”是指以单一剂量或者递增剂 量服用一次或者反复服用可以导致例如适应性免疫应答并因此使患者脱敏的剂量。当然， 对于不同过敏程度的病人，其最佳的治疗剂量与治疗方案可能不同。一般，本发明膜剂中含有变应原提取物的总蛋白约为0. 01 μ g IOmg/片，优选 的约为0. Iyg 5mg/片，更优选的约为1 μ g 2. 5mg/片，还要优选的约为10 μ g Img/片；或者，本发明膜剂中含有的主要变应原蛋白约为0. 001 μ g Img/片，优选的约 为0. 01 μ g 0. 5mg/片，更优选的约为0. 1 μ g 0. 25mg/片，还要优选的约为1 μ g 0. Img/片。一般，本发明膜剂药物组合物中，变应原占整个膜剂药物组合物的质量百分比为 0.0001% 10%，优选0.001% 5%，更优选0.01% 2.5%，还要优选0. (以 变应原提取物的总蛋白计)。本发明所述含有变应原的膜剂药物组合物可以用于治疗由所述变应原引起的过 敏性疾病(I型变态反应性疾病)，所述过敏性疾病包括但不限于，过敏性哮喘、变应性鼻 炎、荨麻疹、特应性皮炎、过敏性结膜炎或其合并症。例如，含有粉尘螨变应原的膜剂药物组 合物，可以按照临床脱敏治疗的方案治疗由粉尘螨引起的过敏性哮喘、变应性鼻炎、特应性 皮炎、过敏性结膜炎或其合并症。本发明所述膜剂药物组合物优选是通过口腔黏膜给药(更优选舌下给药)，因此， 该膜剂药物组合物可以很容易地粘附于含有唾液的口腔黏膜(更优选舌下粘膜)表面，并 且迅速崩解，释放出活性物质(变应原)，崩解时限较佳的为小于120秒，更佳的为小于90 秒，还要佳的为小于60秒，最佳的为小于30秒，甚至为小于10秒。所述膜剂药物组合物 的厚度优选为3 μ m 250 μ m，更优选50 μ m 200 μ m,还要优选75 μ m 150 μ m。所述 膜剂药物组合物的质量一般Img IOOmg/片，优选2mg 50mg/片，更优选5mg 30mg/ 片，还要优选IOmg 20mg/片。而对于膜剂的形状没有太多的限制，只要易于患者服用即 可，一般可以选择三角形、矩形、平行四边形、圆形、正方形等。一般每片膜剂的面积大小为 0. Icm2 IOcm2，优选的为0. 5cm2 2cm2。所述膜剂药物组合物的包装材料应无毒性、易于 防止污染、方便使用，并不会与变应原或成膜物发生理化作用(反应)。所述膜剂药物组合 物宜密闭真空包装，防止受潮、发霉、变质。术语“药学上可接受的载体”包括但不限于糖类，如乳糖、海藻糖；润滑剂，如硬 脂酸、硬脂酸镁、硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油、可可油；氨基 己酸，海藻酸，脂肪酸；消泡剂，如西甲硅油；表面活性剂，如卵磷脂、十二烷基磺酸钠、吐温 类(聚山梨醇酯类)；润湿剂，如月桂基硫酸钠；增塑剂，如甘油、丙二醇、甘油乙酸酯、双乙 酸酯、三乙酸酯、甘油三乙酸酯、十六烷醇、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯及其类似物；着色 剂，如色素、二氧化钛(钛白)；矫味剂，如二氢查耳酮、罗汉果提取物、甘草甜素、甜菊甙、 非洲竹芋甜素、糖精钠、环己基氨基磺酸盐、天门冬酰苯丙氨酸甲酯、乙酰磺胺酸钾、三氯蔗 糖、帕拉金糖、阿斯巴甜、甜蜜素；填充剂，如碳酸钙、二氧化硅、糊精；抗氧化剂；防腐剂，如苯酚、硫柳汞、苯甲酸、山梨酸、山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯类(尼泊金类)、苯甲醇、苯乙醇； 盐，如氯化钠、磷酸盐；水等，或其组合。此处需要说明的是，在成膜时可能有部分溶剂(如水分子)存留在最终得到的膜 制剂中，一般水占整个膜剂药物组合物的质量百分比为0.01% 20%，更优选为0. 10%，还要优选为 5%。此外，在制备变应原提取液时所需的提取缓冲液中一般会有盐成分(优选氯化 钠、磷酸盐或其组合)，因此，在最终的膜制剂中也会残留少量的盐，一般盐占整个膜剂药物 组合物的质量百分比为0. 01% 5%，更优选为0. 3%。在本发明的一个实施方案中，以整个膜剂药物组合物的质量计，所述膜剂药物组 合物是由治疗有效量的变应原、质量百分比20% 85% (优选40% 75%)的海藻酸钠、 质量百分比5% 25% (优选8% 20%)的普鲁兰多糖或蔗糖、质量百分比0% 65% (优选 65%，更优选10% 60%)的填充剂、质量百分比0% 20% (优选0.01% 10%，更优选0. 5% )的增塑剂、质量百分比0% 5% (优选0.01% 5%，更优选 0.1% 3%)的表面活性剂、质量百分比0% 5% (优选0.01% 5%，更优选0.05% 3%，还要优选0. 2% )的消泡剂、质量百分比0% 3% (优选0.01% 3% )的防 腐剂、质量百分比0.01% 5% (优选0. 3%)的盐、以及质量百分比0.01% 20% (优选0.1% 10%，更优选 5%)的水组成的。以上所述所有组分质量百分比之和 为 100%。在上述技术方案中，所述治疗有效量的变应原的质量百分比为0. 0001 % 10 %， 优选0. 001 % 5%，更优选0.01% 2.5%，还要优选0. 1%。所述填充剂选自碳酸钙、二氧化硅、糊精或其组合；优选质量百分比0% 65%的 二氧化硅，更优选1 % 65 %的二氧化硅，还要优选10 % 60 %的二氧化硅，最优选30 % 60%的二氧化硅。所述增塑剂选自甘油、丙二醇、甘油乙酸酯、双乙酸酯、三乙酸酯、甘油三乙酸酯、 十六烷醇、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯及其类似物或其组合；优选质量百分比0% 20% 的甘油，更优选0. 01 % 10 %的甘油，还要优选0. 1 % 5 %的甘油，最优选1 % 5 %的甘 油。所述表面活性剂选自磷脂、十二烷基磺酸钠、吐温类(聚山梨醇酯类)或其组合； 优选质量百分比0 % 5 %的吐温80，更优选0. 01 % 3 %的吐温80，还要优选0. 1 % 3 % 的吐温80，最优选1 % 3 %的吐温80。所述消泡剂优选质量百分比0. 01% 5%的西甲硅油，更优选0. 05% 3%的西 甲硅油，还要优选0. 2%的西甲硅油，最优选 2%的西甲硅油。所述防腐剂选自苯酚、硫柳汞、苯甲酸、山梨酸、山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯类(尼 泊金类)、苯甲醇、苯乙醇或其组合；优选质量百分比0. 05% 0.5%的山梨酸钾，更优选 0. 0. 3%的山梨酸钾。—般，用以评价膜剂药物组合物是否“稳定”的考察指标为总变应原活性与主要变 应原蛋白含量。在本发明中，总变应原活性的测定方法为检测SlgE的抑制率来反映总变应 原活性；主要变应原蛋白含量的测定方法为使用市售的ELISA试剂盒进行。具体方法可以 参见实施例。当然，本领域技术人员也可以使用其它方法来测定上述两项考察指标。
本发明膜剂药物组合物在温度25°C 士2°C、相对湿度60% 士 10%的条件下保存6 个月(较佳保存12个月，更佳保存M个月，还要佳保存36个月)后是稳定的。其中，术语“稳定”即表示所述药物组合物中总变应原活性的损失小于50%，较 佳小于30%，更佳小于20%，还要佳小于10%，最佳小于5% ；或/且至少一种主要变应原 蛋白含量的损失小于50 %，较佳小于30 %，更佳小于20 %，还要佳小于10 %，最佳小于5 %。在一个优选的实施方案中，所述含有变应原的膜剂药物组合物在温度 250C 士2°C、相对湿度60% 士 10%的条件下保存36个月后，所述药物组合物中的总变应原 活性的损失小于10%，并且至少一种主要变应原蛋白含量的损失小于25%。本发明另外还提供了一种制备上述膜剂药物组合物的方法，包括如下步骤a)将成膜有效量的成膜物与药学上可接受的载体溶解于溶剂中，静置，得到成膜 液；b)将变应原与步骤a)得到的成膜液混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜；d)分割切膜、灭菌、密闭真空包装。其中，在上述技术方案中，所述步骤d)是可选的步骤。在一个优选的实施方案中，所述涂布的方法选自逆辊式涂布、凹版涂布、浸渍涂 布、挤压涂布、辊式刮刀涂布、气刀涂布、或落帘涂布。在本发明的一个实施方案中，选用 了逆辊式涂布的方法。逆辊式涂布的涂布辊回转方向与基材运行方向相反，通常含有三 个或四个辊筒。按其供料特点可分为底部供料式和辊隙供料式两种，辊隙供料式三辊涂 布的方式应用范围最广，其特点是涂布最准确，可进行无疵点涂布。涂布干燥的温度一般 为-20 V 50°C，较佳为20 V 50°C，更佳25°C 40°C。其中，低温条件下即为冻干成 膜。涂布干燥的时间一般也与温度有关，温度越高干燥时间可以越短，优选干燥时间为1分 钟 12小时，更优选30分钟 6小时，还要优选1小时 3小时。所述成膜液中的气泡会严重影响膜剂的均一性。因此，一般在配制成膜液时可以 加入消泡剂，如西甲硅油(一般由90. 5 99%聚二甲基硅氧烷和4 7%二氧化硅组成的 混合物)，优选添加的比例为0.01% 5% (质量比)，更优选0.05% 3% (质量比)，还 要优选0.1% 2% (质量比)。或者在成膜液配制完成后也可以采用脱气的方法消除气 泡，优选的脱气的方法为离心脱气法、真空脱气法、超声脱气法等。也可以既在成膜液中添 加消泡剂，又采用脱气的方法消除气泡。在本发明的一个实施方案中，先在配制成膜液中添 加了消泡剂西甲硅油，然后又采用了离心脱气法3500转/分钟，20分钟脱气。因此，在一个更佳的实施方案中，制备本发明膜剂药物组合物的方法包括如下步 骤a)将成膜物与药学上可接受的载体按质量体积比1 5 1 35(较佳1 10 1 25)溶解于溶剂(优选水，更优选纯化水)中；30°C 50°C温浴，充分搅拌混勻；静置1 小时 16小时，消除混勻过程中产生的气泡，得到成膜液；b)将变应原缓慢加入到步骤a)得到的成膜液中，一边加入一边搅拌混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜，涂布干燥的温度一般为-20°C 50°C， 较佳为20°C 50°C，更佳25°C 40°C ；d)分割切膜、紫外灭菌、密闭真空包装。
其中，在上述技术方案中，所述步骤d)是可选的步骤。将本发明实施例中各个配方制得的膜剂按照《中华人民共和国药典2005年版二 部》附录XA “崩解时限检查法”进行试验，结果显示所有膜剂的崩解时限在30秒 60秒之 间。将本发明实施例中各个配方制得的膜剂按照《中华人民共和国药典2005年版二部》附 录X E “含量均勻度检查法”进行试验，结果显示符合要求。下面将结合实施例进一步详细地描述本发明。然而应当理解，列举这些实施例只 是为了起说明作用，而并不是用来限制本发明的范围。实施例1变应原提取液的制备( 一 )粉尘螨(Dermatophagoides farinae)变应原提取液的制备(1)清洗、研磨、脱脂、干燥在面粉培养基中培养粉尘螨，温度25°C，湿度70% 80%，使其密度达到300 500只/克。用饱和NaCl溶液悬浮分离，收集粉尘螨螨体。将获得的粉尘螨螨体以生理盐 水悬浮清洗，晾干后，置于-20°C保存备用。称取虫体，对虫体进行液氮研磨，连续用丙酮浸 泡脱脂3次，每次4小时，至脱脂后的丙酮为无色后，将脱脂后的固体物自然干燥至无丙酮 味后称重。(2)浸提将粉尘螨虫体和生理盐水二者以1 25(W/V)浸泡提取(即每1克脱脂后的粉尘 螨虫体用25毫升生理盐水溶液提取)，40C间歇磁力搅拌72小时(每次搅拌时间为8小时， 静置过夜后再次磁力搅拌8小时，如此反复)。(3)过滤将上述浸提液先用普通滤纸过滤，得到粗滤液。将得到的粗滤液用孔径0. 22 μ m 的无菌微孔滤膜进行过滤除菌，得到的滤液为粉尘螨变应原提取液，于4°C低温保存。(4)总蛋白浓度的测定用Pierce公司的BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。粉尘螨变应原提取液的 总蛋白浓度为1.2mg/ml。(二)北艾(Artemisia vulgaris)花粉变应原提取液的制备(1)花粉脱脂与干燥称取干燥的北艾花粉，按质量体积比1 5加入丙酮，连续搅拌脱脂2小时，再静 置30分钟，去掉上层丙酮，重复上述脱脂过程5次；将脱脂后的固体铺平，于通风厨中干燥， 至呈干粉状，且没有丙酮气味。(2)浸提称取上述脱脂花粉，按质量体积比1 30加入pH8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 缓冲液，在4°C条件下，连续搅拌浸提60小时。(3)过滤将上述浸提液先用普通滤纸过滤，除去大颗粒物质；缓慢加入磷酸二氢钠调解PH 为6. 0 ；再使用0. 45 μ m、0. 22 μ m无菌微孔滤膜依次过滤，得到北艾花粉变应原提取液，于 4 °C低温保存。(4)总蛋白浓度的测定用Pierce公司的BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。北艾花粉变应原提取液的总蛋白浓度为1.0mg/ml。(三)豚草(Ambrosiaartemisiifolia)花粉变应原提取液的制备(1)花粉脱脂与干燥称取干燥的豚草花粉，按质量体积比1 5加入丙酮，连续搅拌脱脂2小时，再静 置30分钟，去掉上层丙酮，重复上述脱脂过程5次；将脱脂后的固体铺平，于通风厨中干燥， 至呈干粉状，且没有丙酮气味。(2)浸提称取上述脱脂花粉，按质量体积比1 30加入pH8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 缓冲液，在4°C条件下，连续搅拌浸提60小时。(3)过滤将上述浸提液先用普通滤纸过滤，除去大颗粒物质；缓慢加入磷酸二氢钠调解PH 为6. 0 ；再使用0. 45 μ m、0. 22 μ m无菌微孔滤膜依次过滤，得到豚草花粉变应原提取液，于 4 °C低温保存。(4)总蛋白浓度的测定用Pierce公司的BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。豚草花粉变应原提取液 的总蛋白浓度为0. 8mg/ml。实施例2膜剂的制备(1)成膜液的配制将表1配方1 配方6中各组分分别溶解于120ml纯化水中，40°C温浴，充分溶胀， 静置2 8小时，直至消除混勻过程中产生的气泡。表 权利要求
1.一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物，其特征在于，该膜剂药物组合物包含治 疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。
2.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述变应原选自尘螨变应原、 花粉变应原、昆虫变应原、动物皮毛变应原、食品变应原、微生物变应原或其组合。
3.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物选自葡萄糖、蔗 糖、淀粉、普鲁兰多糖、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、甲 基纤维素、透明质酸、壳聚糖、几丁质、山梨糖醇、木糖醇、海藻酸钠、胶原蛋白、黄原胶、阿拉 伯胶、明胶、果胶、魔芋胶、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、甲 基异丁烯酸共聚物、聚羧乙烯聚合物或其组合。
4.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物占整个膜剂药物 组合物的质量百分比为30% 99%。
5.根据权利要求4所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物是海藻酸钠与普 鲁兰多糖的组合物，其中，所述海藻酸钠与普鲁兰多糖的质量比为2 1 10 1。
6.根据权利要求4所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物是海藻酸钠与蔗 糖的组合物，其中，所述海藻酸钠与蔗糖的质量比为2 1 10 1。
7.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，以整个膜剂药物组合物的质 量计，该膜剂药物组合物是由治疗有效量的变应原、质量百分比20% 85%的海藻酸钠、 质量百分比5% 25%的普鲁兰多糖或蔗糖、质量百分比0% 65%的填充剂、质量百分比 0 % 20 %的增塑剂、质量百分比0 % 5 %的表面活性剂、质量百分比0 % 5 %的消泡剂、 质量百分比0% 3%的防腐剂、质量百分比0. 01% 5%的盐、以及质量百分比0. 01% 20%的水组成的。
8.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述膜剂药物组合物是密闭 真空包装的。
9.根据权利要求1-8任一项所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述膜剂药物组合 物在温度25°C 士2°C、相对湿度60% 士 10%的条件下保存6个月后是稳定的。
10.一种制备权利要求1所述膜剂药物组合物的方法，其特征在于，所述方法包括如下 步骤a)将成膜物与药学上可接受的载体溶解于溶剂中，静置，得到成膜液；b)将变应原与步骤a)得到的成膜液混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜。
全文摘要
本发明公开了一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物，它包含治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。在一个优选的实施方案中，所述成膜物占整个膜剂药物组合物的质量百分比为30％～99％。此外，本发明还涉及该膜剂药物组合物的制备方法。变应原膜剂的施用为变应原特异性免疫治疗的标准化给药提供了便利。
文档编号A61K39/35GK102048712SQ20101012234
公开日2011年5月11日 申请日期2010年3月12日 优先权日2009年11月10日
发明者管祯玮 申请人:浙江我武生物科技有限公司
技术领域：
本发明属于生物药物技术领域，具体涉及一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合 物及其制备方法。
背景技术：
过敏性疾病(也称变态反应性疾病)是一类发病率高、危害严重、社会影响大的疾 病。2005年世界变态反应组织(WAO)公布了对30个国家进行的过敏性疾病流行病学调查， 结果在这些国家的12亿总人口中，22%的人群患有IgE介导的过敏性疾病。在发达国家， 过敏性疾病已经以其高发病率跃居第六大慢性病，大约15 20%的人群患有各种不同的 过敏性疾病，其中主要包括过敏性哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎、过敏性结膜炎等。变态反应是异常的、有害的、病理性的免疫反应。引起变态反应的抗原物质称为变 应原(allergen)。变应原可以是完全抗原(如微生物、寄生虫、花粉、异种动物血清等)，也 可以是半抗原(如药物和一些化学制剂)。有时变性的自身成分作为自身抗原，也可引起变 态反应发生。变态反应的发生可分为两个阶段致敏阶段，当机体初次接触变应原后，需要 有一个潜伏期(1 2周)，免疫活性细胞才能产生相应抗体或致敏淋巴细胞，在此期间机体 无任何异常反应，但已具备了发生变态反应的潜在能力。变态反应发生阶段，当致敏机体再 次与同一变应原接触，变应原与相应抗体或致敏淋巴细胞结合，引起机体生理功能紊乱或 组织损伤，也就是异常免疫反应出现，此过程出现较快，少则几秒至几十秒，多则2 3天。 变态反应发生的原因一是个体的免疫机能状态；二是进入机体的变应原的性质、纯度及途 径等。这两个因素中主要因素是前者，即个体免疫应答的差异。变态反应发生的特点是必 须有变应原的刺激；具有严格的针对性，即两次接触的变应原必须相同；有一定的潜伏期， 必须经历从致敏到变态反应发生两个阶段；必须有过敏体质者存在。变态反应发生的原因 和表现十分复杂，对其分类曾有不同的观点。但目前大多按照造成免疫病理的机制，将变态 反应分为四类1型(速发型)、Π型(细胞毒型)、III型(免疫复合物型)、IV型(迟发 型)。特异性免疫治疗(special immunotherapy, SIT)又称脱敏治疗，是针对变应性疾 病的病因进行治疗。SIT最初是1903年由德国的Dunbar等开始试用。后来Noon和Freeman 等对SIT加以发展并进行广泛的推广，到1911年就有大量的临床研究报道。SIT的治疗方 式是以用变应原活性成分规律性地递增给药，如治疗花粉或尘螨等引起的过敏性疾病。大 量的临床研究结果表明，在临床上对治疗变应性鼻炎、过敏性哮喘、特应性皮炎和过敏性结 膜炎方面均有效，并且可以减少炎症的发生。结果还表明，免疫治疗短期疗效不如抗组胺药 或者类固醇类药物治疗，但是长期疗效优于药物治疗。临床实践证实经过正规的脱敏治疗 者多可终生受益，这是一般的药物治疗难以达到的。标准化变应原特异性免疫治疗能够改 变变态反应性疾病的基本病理生理机制，是世界卫生组织和全球各变态反应、哮喘与免疫 学学会唯一共同推荐的对因治疗。目前较为公认的有两种标准化特异性免疫治疗的给药方式，即皮下注射给药方式和舌下含服给药方式。并且，由于舌下含服脱敏治疗在疗效及安全性上所展现的优势，世界 卫生组织于2001年发表的ARIA报告中，正式推荐舌下含服为可替代传统皮下注射方式的 特异性免疫治疗方法，并建议使用于成人及儿童过敏病人身上。目前脱敏药物舌下含服给 药的剂型主要为舌下含服滴剂，但舌下含服滴剂属于液体制剂，而变应原是一种活性蛋白， 活性蛋白一般都需要低温保存才能保持活性以保证疗效，这就给运输、储存、携带以及使用 带来不便；并且给药剂量由小到大逐渐递增，特别是至最佳维持剂量时因液体给药量容积 大而使患者尤其是儿童和老年患者的准确定量给药带来不便，不利于标准化给药的实施。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物及其制备方法。为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合 物，它包含治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。在一个优选的实施方 案中，所述膜剂药物组合物是由治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体组 成的。在另一个优选的实施方案中，所述成膜物选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、普鲁兰多糖、羟 丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、甲基纤维素、透明质酸、壳 聚糖、几丁质、山梨糖醇、木糖醇、海藻酸钠、胶原蛋白、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、果胶、魔芋 胶、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、甲基异丁烯酸共聚物、聚 羧乙烯聚合物或其组合。在一个更优选的实施方案中，所述成膜物占整个膜剂药物组合物的质量百分比为 30% 99%。在一个还要优选的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与普鲁兰多糖的组合物， 其中，海藻酸钠与普鲁兰多糖的质量比为1 1 10 1。在一个最优选的实施方案中，所 述海藻酸钠占整个膜剂药物组合物的质量百分比为20 % 85 % (更佳40 % 75 % )，所述 普鲁兰多糖占整个膜剂药物组合物的质量百分比为5% 25% (更佳8% 20% )。在另一个还要优选的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与蔗糖的组合物，其中， 海藻酸钠与蔗糖的质量比为1 1 10 1。在另一个最优选的实施方案中，所述海藻酸 钠占整个膜剂药物组合物的质量百分比为20 % 85 % (更佳40 % 75 % )，所述蔗糖占整 个膜剂药物组合物的质量百分比为5% 25% (更佳8% 20% )。在一个较佳的实施方案中，所述变应原选自尘螨变应原、花粉变应原、昆虫变应 原、动物皮毛变应原、食品变应原、微生物变应原或其组合。在另一个较佳的实施方案中，所 述变应原是天然变应原提取液、纯化的天然变应原或重组变应原等。在还有一个较佳的实施方案中，所述膜剂药物组合物是密闭真空包装的。在一个优选的实施方案中，以整个膜剂药物组合物的质量计，所述膜剂药物组合 物是由治疗有效量的变应原、质量百分比20% 85%的海藻酸钠、质量百分比5% 25% 的普鲁兰多糖或蔗糖、质量百分比0% 65%的填充剂、质量百分比0% 20%的增塑剂、 质量百分比0% 5%的表面活性剂、质量百分比0% 5%的消泡剂、质量百分比0% 3%的防腐剂、质量百分比0. 01% 5%的盐、以及质量百分比0. 01% 20%的水组成的。 以上所述所有组分质量百分比之和为100%。
在一个更优选的实施方案中，所述治疗有效量的变应原占整个膜剂药物组合物的 质量百分比为0. 0001% 10%。本发明第二方面提供了一种制备上述膜剂药物组合物的方法，包括如下步骤a)将成膜物与药学上可接受的载体溶解于溶剂中，静置，得到成膜液；b)将变应原与步骤a)得到的成膜液混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜。在一个较佳的实施方案中，在所述步骤C)中，所述涂布的方法选自逆辊式涂布、 凹版涂布、浸渍涂布、挤压涂布、辊式刮刀涂布、气刀涂布、或落帘涂布。在另一个较佳的实 施方案中，在所述步骤c)中，所述涂布干燥的温度为20°C 50°C。在还有一个较佳的实施方案中，所述的制备方法还包括将所述步骤c)制得的膜 分割切膜、灭菌、密闭真空包装的步骤。优选地，所述灭菌的方法采用紫外灭菌的方法。本发明提供的含有变应原的膜剂药物组合物在口腔中可以迅速溶化(快速分 散)，很快被舌下粘膜吸收，起效较快。由于膜剂在室温下能长时间保持生物活性(变应原 活性)的稳定，所以质量稳定；加之含量准确，并且体积小、重量轻，便于运输、储存、携带以 及使用。另外膜剂的施用方便了儿童和老年患者的使用，为变应原特异性免疫治疗的标准 化给药提供了便利。具体实施方案具体而言，本发明提供了一种含有变应原的膜剂药物组合物，它包含治疗有效量 的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。此处的术语“包含……”指的是该药物组合 物中还可以含有任何其它组分，这些组分可以以任何含量存在，只要以该含量存在的该组 分是人体可接受的，并对于本发明药物组合物中活性成分的生物活性(包括稳定性)以及 膜剂药物组合物的理化性质没有实质性的影响即可。在一个优选的实施方案中，所述膜剂 药物组合物是由治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体组成的。本发明所述的成膜物一般应具有如下特性可以溶解于水(或者至少是部分可以 溶解于水)，并且吸水后可膨胀崩解。优选地，所述成膜物在吸水后至少可以增加20%的重 量。另外，适用于本发明的成膜物应当是能够用于口服给药的材料。在一个较佳的实施方案中，所述成膜物选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、普鲁兰多糖、羟丙 基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、甲基纤维素、透明质酸、壳聚 糖、几丁质、山梨糖醇、木糖醇、海藻酸钠、胶原蛋白、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、果胶、魔芋胶、 聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、甲基异丁烯酸共聚物、聚羧 乙烯聚合物或其组合。较佳地，所述成膜物占整个膜剂药物组合物的质量百分比为30% 99%，还要佳 60% 95%。在一个更佳的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与普鲁兰多糖的组合物，其 中，海藻酸钠与普鲁兰多糖的质量比为1 1 10 1，还要佳2 1 5 1。在另一个 较佳的实施方案中，所述成膜物是海藻酸钠与蔗糖的组合物，其中，海藻酸钠与蔗糖的质量 比为1 1 10 1，还要佳2 1 5 1。其中，优选的海藻酸钠(i%，2(rc )的黏度 为SOitfa· s 200mPa· s，优选的普鲁兰多糖的分子量为1X105 5X105。选用不同的成膜物对于成膜液的粘度有很大影响，一般优选的粘度为lOOcps lOOOOOcps，更优选500cps 80000cps，还要优选lOOOcps 40000cps。可以采用不同方 法调整成膜液的粘度，例如，加入高分子量的多聚物或者交联剂(如钙盐、钠盐、钾盐)可以 增加成膜液的粘度；温度也可以影响成膜液的粘度。在另一个较佳的实施方案中，所述变应原选自尘螨变应原、花粉变应原、昆虫变 应原、动物皮毛变应原、食品变应原、微生物变应原或其组合。其中所述尘螨变应原是以 尘螨为来源获得的变应原，包括但不限于下列尘螨变应原粉尘螨(Dermatophagoides farinae)、户 1 ■ (Dermatophagoides pteronyssinus)、■角 1 ■ (Dermatophagoides microceras)、埋内欧尘螨(Euroglyphus maynei)变应原等。花粉变应原是以花粉为来源 获得的变应原，包括但不限于下列花粉变应原蒿属(Artemisia)花粉、豚草属(Ambrosia) 花粉、蓖麻属(Ricinus)花粉、潷草属(Hummlus)花粉、藜属(Chenlpldum)花粉、苋属 (Amaranthus)花粉、木麻黄属(Casuarina)花粉、桦木属(Betula)花粉、松属(Pinus)花 粉、云杉属(Picea)花粉、柳杉属(Cryptomeria)花粉、悬铃木属(Platanus)花粉变应原 等。其中，蒿属(Artemisia)花粉变应原主要包括北艾(Artemisia vulgaris Linn.)花 粉、黄花蒿(Artemisia annuaLinn.)花粉、大轩蒿(Artemisia sieversiana Ehrhart ex ffilld.)花粉、艾(Artemisia argyiLevl. et Van.)花粉变应原等。昆虫变应原是以昆虫为 来源获得的变应原，包括但不限于下列昆虫变应原美洲大蠊(Periplaneta americana), 黑胸大爐(Periplanetafuliginosa)、德国小爐(Blattella germanica)、家妮(Musca domestica)变应原等。动物皮毛变应原包括猫上皮、狗上皮变应原等。本发明所述微生物 变应原包括但不限于，各种细菌、真菌、酵母、病毒、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、原生 动物变应原等。食品变应原包括来源于任何形式的食品变应原，包括但不限于加工、未加 工，熟的、生的食品变应原(例如，生的海虾/蟹、熟的海虾/蟹变应原)等。应当理解，本发明所述变应原可以是单一成分的变应原(例如粉尘螨的Derf I变 应原、或北艾花粉的Art vl变应原等)，也可以是来源相同(单一来源)的变应原混合物 (例如粉尘螨变应原提取液、或豚草花粉变应原提取液等)，在不影响变应原自身活性和效 价的前提下，也可以是多种变应原来源的、以任何方式混合的变应原组合物(例如粉尘螨 变应原与户尘螨变应原的组合物，或粉尘螨变应原与豚草花粉变应原的组合物等)。此外，本发明所述变应原可以是从商业途径购买，也可以使用任何现有技术中不 使变应原降解或失活的方式从天然物质或动植物中提取的方法获得，还可以通过基因工程 手段获得任何种类的具有生物活性(变应原活性)的重组变应原(包括与天然变应原序列 一致的重组变应原、修饰变应原、或重组变应原的突变体等)。一般从天然物质或动植物中提取变应原的步骤为1)对原材料(如尘螨、花粉等) 进行脱脂处理；幻使用缓冲液(如生理盐水、磷酸缓冲液、coca' s液等)浸提；幻经过离 心或者过滤，再无菌处理，得到变应原提取液；4)冷冻干燥，去除水分。其中，所述步骤4) 为可选步骤。采用诸如BCA法、Lowry法测定变应原提取液(物)的总蛋白浓度，采用诸如 ELISA法测定主要变应原蛋白的含量。其中，主要变应原蛋白含量一般占变应原提取液总 蛋白浓度的 25% (质量百分比)，更常见为5% 15% (质量百分比)。常见的主要 变应原蛋白包括但不限于，粉尘螨变应原蛋白I、IKDerf I.Derf II)，户尘螨变应原蛋白 I>11 (Derp I.Derp II)，北艾花粉变应原蛋白1KCan fl)，德国小蠊变应原蛋白l、2(Bla gU Bla g2)等。需要特别说明的是，对于本发明膜剂药物组合物中变应原的剂量浓度并没有太多 限制，只要其能够起到有效治疗即可(即治疗有效量的变应原)。根据特异性免疫治疗(脱 敏治疗)的要求，本发明的膜剂药物组合物可以制备成多个剂量浓度的制剂，先从低剂量 浓度给药，剂量再由小到大逐渐递增，至最佳维持剂量浓度。近年来，也出现了以单一剂量 持续给药的脱敏治疗方案。因此，术语“治疗有效量的变应原”是指以单一剂量或者递增剂 量服用一次或者反复服用可以导致例如适应性免疫应答并因此使患者脱敏的剂量。当然， 对于不同过敏程度的病人，其最佳的治疗剂量与治疗方案可能不同。一般，本发明膜剂中含有变应原提取物的总蛋白约为0. 01 μ g IOmg/片，优选 的约为0. Iyg 5mg/片，更优选的约为1 μ g 2. 5mg/片，还要优选的约为10 μ g Img/片；或者，本发明膜剂中含有的主要变应原蛋白约为0. 001 μ g Img/片，优选的约 为0. 01 μ g 0. 5mg/片，更优选的约为0. 1 μ g 0. 25mg/片，还要优选的约为1 μ g 0. Img/片。一般，本发明膜剂药物组合物中，变应原占整个膜剂药物组合物的质量百分比为 0.0001% 10%，优选0.001% 5%，更优选0.01% 2.5%，还要优选0. (以 变应原提取物的总蛋白计)。本发明所述含有变应原的膜剂药物组合物可以用于治疗由所述变应原引起的过 敏性疾病(I型变态反应性疾病)，所述过敏性疾病包括但不限于，过敏性哮喘、变应性鼻 炎、荨麻疹、特应性皮炎、过敏性结膜炎或其合并症。例如，含有粉尘螨变应原的膜剂药物组 合物，可以按照临床脱敏治疗的方案治疗由粉尘螨引起的过敏性哮喘、变应性鼻炎、特应性 皮炎、过敏性结膜炎或其合并症。本发明所述膜剂药物组合物优选是通过口腔黏膜给药(更优选舌下给药)，因此， 该膜剂药物组合物可以很容易地粘附于含有唾液的口腔黏膜(更优选舌下粘膜)表面，并 且迅速崩解，释放出活性物质(变应原)，崩解时限较佳的为小于120秒，更佳的为小于90 秒，还要佳的为小于60秒，最佳的为小于30秒，甚至为小于10秒。所述膜剂药物组合物 的厚度优选为3 μ m 250 μ m，更优选50 μ m 200 μ m,还要优选75 μ m 150 μ m。所述 膜剂药物组合物的质量一般Img IOOmg/片，优选2mg 50mg/片，更优选5mg 30mg/ 片，还要优选IOmg 20mg/片。而对于膜剂的形状没有太多的限制，只要易于患者服用即 可，一般可以选择三角形、矩形、平行四边形、圆形、正方形等。一般每片膜剂的面积大小为 0. Icm2 IOcm2，优选的为0. 5cm2 2cm2。所述膜剂药物组合物的包装材料应无毒性、易于 防止污染、方便使用，并不会与变应原或成膜物发生理化作用(反应)。所述膜剂药物组合 物宜密闭真空包装，防止受潮、发霉、变质。术语“药学上可接受的载体”包括但不限于糖类，如乳糖、海藻糖；润滑剂，如硬 脂酸、硬脂酸镁、硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油、可可油；氨基 己酸，海藻酸，脂肪酸；消泡剂，如西甲硅油；表面活性剂，如卵磷脂、十二烷基磺酸钠、吐温 类(聚山梨醇酯类)；润湿剂，如月桂基硫酸钠；增塑剂，如甘油、丙二醇、甘油乙酸酯、双乙 酸酯、三乙酸酯、甘油三乙酸酯、十六烷醇、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯及其类似物；着色 剂，如色素、二氧化钛(钛白)；矫味剂，如二氢查耳酮、罗汉果提取物、甘草甜素、甜菊甙、 非洲竹芋甜素、糖精钠、环己基氨基磺酸盐、天门冬酰苯丙氨酸甲酯、乙酰磺胺酸钾、三氯蔗 糖、帕拉金糖、阿斯巴甜、甜蜜素；填充剂，如碳酸钙、二氧化硅、糊精；抗氧化剂；防腐剂，如苯酚、硫柳汞、苯甲酸、山梨酸、山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯类(尼泊金类)、苯甲醇、苯乙醇； 盐，如氯化钠、磷酸盐；水等，或其组合。此处需要说明的是，在成膜时可能有部分溶剂(如水分子)存留在最终得到的膜 制剂中，一般水占整个膜剂药物组合物的质量百分比为0.01% 20%，更优选为0. 10%，还要优选为 5%。此外，在制备变应原提取液时所需的提取缓冲液中一般会有盐成分(优选氯化 钠、磷酸盐或其组合)，因此，在最终的膜制剂中也会残留少量的盐，一般盐占整个膜剂药物 组合物的质量百分比为0. 01% 5%，更优选为0. 3%。在本发明的一个实施方案中，以整个膜剂药物组合物的质量计，所述膜剂药物组 合物是由治疗有效量的变应原、质量百分比20% 85% (优选40% 75%)的海藻酸钠、 质量百分比5% 25% (优选8% 20%)的普鲁兰多糖或蔗糖、质量百分比0% 65% (优选 65%，更优选10% 60%)的填充剂、质量百分比0% 20% (优选0.01% 10%，更优选0. 5% )的增塑剂、质量百分比0% 5% (优选0.01% 5%，更优选 0.1% 3%)的表面活性剂、质量百分比0% 5% (优选0.01% 5%，更优选0.05% 3%，还要优选0. 2% )的消泡剂、质量百分比0% 3% (优选0.01% 3% )的防 腐剂、质量百分比0.01% 5% (优选0. 3%)的盐、以及质量百分比0.01% 20% (优选0.1% 10%，更优选 5%)的水组成的。以上所述所有组分质量百分比之和 为 100%。在上述技术方案中，所述治疗有效量的变应原的质量百分比为0. 0001 % 10 %， 优选0. 001 % 5%，更优选0.01% 2.5%，还要优选0. 1%。所述填充剂选自碳酸钙、二氧化硅、糊精或其组合；优选质量百分比0% 65%的 二氧化硅，更优选1 % 65 %的二氧化硅，还要优选10 % 60 %的二氧化硅，最优选30 % 60%的二氧化硅。所述增塑剂选自甘油、丙二醇、甘油乙酸酯、双乙酸酯、三乙酸酯、甘油三乙酸酯、 十六烷醇、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯及其类似物或其组合；优选质量百分比0% 20% 的甘油，更优选0. 01 % 10 %的甘油，还要优选0. 1 % 5 %的甘油，最优选1 % 5 %的甘 油。所述表面活性剂选自磷脂、十二烷基磺酸钠、吐温类(聚山梨醇酯类)或其组合； 优选质量百分比0 % 5 %的吐温80，更优选0. 01 % 3 %的吐温80，还要优选0. 1 % 3 % 的吐温80，最优选1 % 3 %的吐温80。所述消泡剂优选质量百分比0. 01% 5%的西甲硅油，更优选0. 05% 3%的西 甲硅油，还要优选0. 2%的西甲硅油，最优选 2%的西甲硅油。所述防腐剂选自苯酚、硫柳汞、苯甲酸、山梨酸、山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯类(尼 泊金类)、苯甲醇、苯乙醇或其组合；优选质量百分比0. 05% 0.5%的山梨酸钾，更优选 0. 0. 3%的山梨酸钾。—般，用以评价膜剂药物组合物是否“稳定”的考察指标为总变应原活性与主要变 应原蛋白含量。在本发明中，总变应原活性的测定方法为检测SlgE的抑制率来反映总变应 原活性；主要变应原蛋白含量的测定方法为使用市售的ELISA试剂盒进行。具体方法可以 参见实施例。当然，本领域技术人员也可以使用其它方法来测定上述两项考察指标。
本发明膜剂药物组合物在温度25°C 士2°C、相对湿度60% 士 10%的条件下保存6 个月(较佳保存12个月，更佳保存M个月，还要佳保存36个月)后是稳定的。其中，术语“稳定”即表示所述药物组合物中总变应原活性的损失小于50%，较 佳小于30%，更佳小于20%，还要佳小于10%，最佳小于5% ；或/且至少一种主要变应原 蛋白含量的损失小于50 %，较佳小于30 %，更佳小于20 %，还要佳小于10 %，最佳小于5 %。在一个优选的实施方案中，所述含有变应原的膜剂药物组合物在温度 250C 士2°C、相对湿度60% 士 10%的条件下保存36个月后，所述药物组合物中的总变应原 活性的损失小于10%，并且至少一种主要变应原蛋白含量的损失小于25%。本发明另外还提供了一种制备上述膜剂药物组合物的方法，包括如下步骤a)将成膜有效量的成膜物与药学上可接受的载体溶解于溶剂中，静置，得到成膜 液；b)将变应原与步骤a)得到的成膜液混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜；d)分割切膜、灭菌、密闭真空包装。其中，在上述技术方案中，所述步骤d)是可选的步骤。在一个优选的实施方案中，所述涂布的方法选自逆辊式涂布、凹版涂布、浸渍涂 布、挤压涂布、辊式刮刀涂布、气刀涂布、或落帘涂布。在本发明的一个实施方案中，选用 了逆辊式涂布的方法。逆辊式涂布的涂布辊回转方向与基材运行方向相反，通常含有三 个或四个辊筒。按其供料特点可分为底部供料式和辊隙供料式两种，辊隙供料式三辊涂 布的方式应用范围最广，其特点是涂布最准确，可进行无疵点涂布。涂布干燥的温度一般 为-20 V 50°C，较佳为20 V 50°C，更佳25°C 40°C。其中，低温条件下即为冻干成 膜。涂布干燥的时间一般也与温度有关，温度越高干燥时间可以越短，优选干燥时间为1分 钟 12小时，更优选30分钟 6小时，还要优选1小时 3小时。所述成膜液中的气泡会严重影响膜剂的均一性。因此，一般在配制成膜液时可以 加入消泡剂，如西甲硅油(一般由90. 5 99%聚二甲基硅氧烷和4 7%二氧化硅组成的 混合物)，优选添加的比例为0.01% 5% (质量比)，更优选0.05% 3% (质量比)，还 要优选0.1% 2% (质量比)。或者在成膜液配制完成后也可以采用脱气的方法消除气 泡，优选的脱气的方法为离心脱气法、真空脱气法、超声脱气法等。也可以既在成膜液中添 加消泡剂，又采用脱气的方法消除气泡。在本发明的一个实施方案中，先在配制成膜液中添 加了消泡剂西甲硅油，然后又采用了离心脱气法3500转/分钟，20分钟脱气。因此，在一个更佳的实施方案中，制备本发明膜剂药物组合物的方法包括如下步 骤a)将成膜物与药学上可接受的载体按质量体积比1 5 1 35(较佳1 10 1 25)溶解于溶剂(优选水，更优选纯化水)中；30°C 50°C温浴，充分搅拌混勻；静置1 小时 16小时，消除混勻过程中产生的气泡，得到成膜液；b)将变应原缓慢加入到步骤a)得到的成膜液中，一边加入一边搅拌混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜，涂布干燥的温度一般为-20°C 50°C， 较佳为20°C 50°C，更佳25°C 40°C ；d)分割切膜、紫外灭菌、密闭真空包装。
其中，在上述技术方案中，所述步骤d)是可选的步骤。将本发明实施例中各个配方制得的膜剂按照《中华人民共和国药典2005年版二 部》附录XA “崩解时限检查法”进行试验，结果显示所有膜剂的崩解时限在30秒 60秒之 间。将本发明实施例中各个配方制得的膜剂按照《中华人民共和国药典2005年版二部》附 录X E “含量均勻度检查法”进行试验，结果显示符合要求。下面将结合实施例进一步详细地描述本发明。然而应当理解，列举这些实施例只 是为了起说明作用，而并不是用来限制本发明的范围。实施例1变应原提取液的制备( 一 )粉尘螨(Dermatophagoides farinae)变应原提取液的制备(1)清洗、研磨、脱脂、干燥在面粉培养基中培养粉尘螨，温度25°C，湿度70% 80%，使其密度达到300 500只/克。用饱和NaCl溶液悬浮分离，收集粉尘螨螨体。将获得的粉尘螨螨体以生理盐 水悬浮清洗，晾干后，置于-20°C保存备用。称取虫体，对虫体进行液氮研磨，连续用丙酮浸 泡脱脂3次，每次4小时，至脱脂后的丙酮为无色后，将脱脂后的固体物自然干燥至无丙酮 味后称重。(2)浸提将粉尘螨虫体和生理盐水二者以1 25(W/V)浸泡提取(即每1克脱脂后的粉尘 螨虫体用25毫升生理盐水溶液提取)，40C间歇磁力搅拌72小时(每次搅拌时间为8小时， 静置过夜后再次磁力搅拌8小时，如此反复)。(3)过滤将上述浸提液先用普通滤纸过滤，得到粗滤液。将得到的粗滤液用孔径0. 22 μ m 的无菌微孔滤膜进行过滤除菌，得到的滤液为粉尘螨变应原提取液，于4°C低温保存。(4)总蛋白浓度的测定用Pierce公司的BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。粉尘螨变应原提取液的 总蛋白浓度为1.2mg/ml。(二)北艾(Artemisia vulgaris)花粉变应原提取液的制备(1)花粉脱脂与干燥称取干燥的北艾花粉，按质量体积比1 5加入丙酮，连续搅拌脱脂2小时，再静 置30分钟，去掉上层丙酮，重复上述脱脂过程5次；将脱脂后的固体铺平，于通风厨中干燥， 至呈干粉状，且没有丙酮气味。(2)浸提称取上述脱脂花粉，按质量体积比1 30加入pH8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 缓冲液，在4°C条件下，连续搅拌浸提60小时。(3)过滤将上述浸提液先用普通滤纸过滤，除去大颗粒物质；缓慢加入磷酸二氢钠调解PH 为6. 0 ；再使用0. 45 μ m、0. 22 μ m无菌微孔滤膜依次过滤，得到北艾花粉变应原提取液，于 4 °C低温保存。(4)总蛋白浓度的测定用Pierce公司的BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。北艾花粉变应原提取液的总蛋白浓度为1.0mg/ml。(三)豚草(Ambrosiaartemisiifolia)花粉变应原提取液的制备(1)花粉脱脂与干燥称取干燥的豚草花粉，按质量体积比1 5加入丙酮，连续搅拌脱脂2小时，再静 置30分钟，去掉上层丙酮，重复上述脱脂过程5次；将脱脂后的固体铺平，于通风厨中干燥， 至呈干粉状，且没有丙酮气味。(2)浸提称取上述脱脂花粉，按质量体积比1 30加入pH8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 缓冲液，在4°C条件下，连续搅拌浸提60小时。(3)过滤将上述浸提液先用普通滤纸过滤，除去大颗粒物质；缓慢加入磷酸二氢钠调解PH 为6. 0 ；再使用0. 45 μ m、0. 22 μ m无菌微孔滤膜依次过滤，得到豚草花粉变应原提取液，于 4 °C低温保存。(4)总蛋白浓度的测定用Pierce公司的BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。豚草花粉变应原提取液 的总蛋白浓度为0. 8mg/ml。实施例2膜剂的制备(1)成膜液的配制将表1配方1 配方6中各组分分别溶解于120ml纯化水中，40°C温浴，充分溶胀， 静置2 8小时，直至消除混勻过程中产生的气泡。表 权利要求
1.一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物，其特征在于，该膜剂药物组合物包含治 疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。
2.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述变应原选自尘螨变应原、 花粉变应原、昆虫变应原、动物皮毛变应原、食品变应原、微生物变应原或其组合。
3.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物选自葡萄糖、蔗 糖、淀粉、普鲁兰多糖、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、甲 基纤维素、透明质酸、壳聚糖、几丁质、山梨糖醇、木糖醇、海藻酸钠、胶原蛋白、黄原胶、阿拉 伯胶、明胶、果胶、魔芋胶、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、甲 基异丁烯酸共聚物、聚羧乙烯聚合物或其组合。
4.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物占整个膜剂药物 组合物的质量百分比为30% 99%。
5.根据权利要求4所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物是海藻酸钠与普 鲁兰多糖的组合物，其中，所述海藻酸钠与普鲁兰多糖的质量比为2 1 10 1。
6.根据权利要求4所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述成膜物是海藻酸钠与蔗 糖的组合物，其中，所述海藻酸钠与蔗糖的质量比为2 1 10 1。
7.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，以整个膜剂药物组合物的质 量计，该膜剂药物组合物是由治疗有效量的变应原、质量百分比20% 85%的海藻酸钠、 质量百分比5% 25%的普鲁兰多糖或蔗糖、质量百分比0% 65%的填充剂、质量百分比 0 % 20 %的增塑剂、质量百分比0 % 5 %的表面活性剂、质量百分比0 % 5 %的消泡剂、 质量百分比0% 3%的防腐剂、质量百分比0. 01% 5%的盐、以及质量百分比0. 01% 20%的水组成的。
8.根据权利要求1所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述膜剂药物组合物是密闭 真空包装的。
9.根据权利要求1-8任一项所述的膜剂药物组合物，其特征在于，所述膜剂药物组合 物在温度25°C 士2°C、相对湿度60% 士 10%的条件下保存6个月后是稳定的。
10.一种制备权利要求1所述膜剂药物组合物的方法，其特征在于，所述方法包括如下 步骤a)将成膜物与药学上可接受的载体溶解于溶剂中，静置，得到成膜液；b)将变应原与步骤a)得到的成膜液混勻，脱气；c)将步骤b)得到的混合液涂布干燥成膜。
全文摘要
本发明公开了一种稳定的含有变应原的膜剂药物组合物，它包含治疗有效量的变应原、成膜物、以及药学上可接受的载体。在一个优选的实施方案中，所述成膜物占整个膜剂药物组合物的质量百分比为30％～99％。此外，本发明还涉及该膜剂药物组合物的制备方法。变应原膜剂的施用为变应原特异性免疫治疗的标准化给药提供了便利。
文档编号A61K39/35GK102048712SQ20101012234
公开日2011年5月11日 申请日期2010年3月12日 优先权日2009年11月10日
发明者管祯玮 申请人:浙江我武生物科技有限公司
最新回复(0)