一种桑叶抗炎、降血糖提取物及其制剂的制备方法

专利名称：：一种桑叶抗炎、降血糖提取物及其制剂的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种桑叶抗炎、降血糖提取物的制备方法及其制剂，该提取物含有较高浓度的桑叶黄酮、生物碱和多糖成分，该提取物及其制剂明显的抗炎和降低血糖作用。
背景技术：
：桑叶为桑料植物桑(MorusalbaL.)的叶，其药用价值最早见于《神农本草经》，桑叶性寒，味苦，归肺、肝经，具有祛风清热、凉血明目等功效《本草经疏》记载桑叶性味苦、甘、寒，甘所以益血，寒所以凉血，甘寒相合，故下气而益阴，又能明目而止咳，有补益之功。现代化学研究表明桑叶含有黄酮及黄酮苷、生物碱、多糖、甾醇、挥发油、氨基酸、维生素、微量元素等多种对人体健康有利的化学物质。药理研究表明，桑叶对人体及为安全，且具有降血糖、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒等多种治疗功能。桑叶有效成分提取物的研究报道及专利申请已非常多，如洪春力申报的发明专利'一种桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法'(公开号CN1430964A)，介绍了一种治疗糖尿病桑叶总生物碱浸膏的提取方法；李淑芬，等申报的发明专利'从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法'(公开号CN101209284)，介绍了从桑叶中连续提取纯化生物碱、黄酮、多糖类成分的方法。但通过文献查询，目前尚未发现对桑叶抗炎、降血糖有效成分同时提取的研究报道和专利的申报记录。本发明的目的在于研制一种桑叶抗炎、降血糖提取物及其制剂，扩大桑叶的应用范围。
发明内容本发明公开了一种桑叶抗炎、降血糖提取物的制备方法及其制剂。该制备方法简易可行，制剂稳定安全，非常有利于工业化生产，通过动物药效学实验，证明该制备方法生产的提取物有显著的抗炎和降血糖作用。桑叶抗炎、降血糖有效成分同时提取的研究未见报道，本发明在采用传统提取分离方法的基础上，应用了一些专门技术以提高桑叶提取物的抗炎、降血糖作用。具体步骤如下桑叶药材适当粉碎后，用10%到95%含水甲醇或乙醇，在静态或动态下，室温或加热(包括回流、微波等)提取，提取溶剂用量为药材的515倍，提取次数为13次，提取液过滤合并、减压或常压蒸馏回收醇溶剂到收集液醇含量低于20%后，继续蒸发浓縮到无醇味(相对密度1.051.25/8CTC)、加水26倍量，加酸调节pH=32后，放24到72小时，过滤。过滤收集的不溶物低温烘干、粉碎备用。滤液先过聚酰胺树脂充分吸附后，过阳离子交换树脂充分吸附。吸附滤液的聚酰胺树脂水洗净、氨水闷制4小时后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液用醋酸调节pH近中性，回收醇溶剂，减压浓縮成浸膏后干燥粉碎备用。吸附滤液的离子交换树脂水洗净、氨水闷制4小时后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液回收醇溶剂，减压浓縮成浸膏后干燥粉碎备用。醇提取后的桑叶粗粉除去残余的醇溶液，用水提取，提取液过滤合并，减压蒸发浓4縮到相对密度大于1.20/8(TC，加入含醇量大于85%的乙醇溶液调节溶液含醇量在50%70%搅拌均匀，放置2472小时后过滤收集沉淀物，低温烘干粉碎备用。将前述制得的物料粉末充分混合均匀即得。本发明制成的提取物在生产药品、健康相关产品制剂时，可加入国家和行业标准及法规允许加入的辅料，比如淀粉、蔗糖、糊精、甘露醇、甘油、硅衍生物、硬脂酸镁、滑石粉等。本发明制成的提取物可通过适当方法制成药品、健康相关产品的任何剂型，这些剂型包括片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、含服片剂、泡腾片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、颗粒剂、茶剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、硬膏剂、软膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂等。本发明优先选择的剂型为口服制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂等。本发明制成的提取物通过以下药效学实验证明其有益效果—、抗炎作用1.实验材料1.l药物桑叶提取物，用实例l方法制备，实验前用水配成所需浓度；阳性对照药地塞米松(浙江仙琚制药股份有限公司，批号071010)。角叉菜胶(中国药品生物制品检定所提供)。1.2动物KM小鼠，1822g，$;SD大鼠，体重110140g，古。1.3仪器与试剂EL204万分之一克电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。Lambda35UVPerkinElmer(美国珀金艾尔默公司)，LG16-W型高速离心机(北京医用离心机厂)。PV-200足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司)。2.统计学处理应用统计软件SPSS11.0对所得实验数据进行t检验。3.实验方法3.l对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响取小鼠75只，随机分为5组，分别为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松，6mg/kg)、桑叶提取物高(10g生药/kg)、中(5g生药/kg)、低(2g生药/kg)三个剂量组。灌胃给药，l次/d，给药容量为20mL/kg，连续7d。末次药后60min，各鼠以0.02ml二甲苯滴于右耳致炎，15min后处死，沿耳廓基线剪下二耳。用6mm直径打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳重量差作为肿胀度。3.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响取小鼠60只，随机分为5组，分别为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松，6mg/kg)、桑叶提取物高(10g生药/kg)、中(5g生药/kg)、低(2g生药/kg)三个剂量组。灌胃给药，1次/d，给药容量为20mL/kg，连续7d。末次药后60min，各鼠尾静脉注射0.25%伊文斯兰0.lml/10g，同时腹腔注射0.6%醋酸溶液0.lml/10g。15min后处死，立即注入6ml生理盐水冲洗腹腔，剪开腹腔，滤出腹腔洗出液，2000rpm离心10min，取上清液于590nm处测定OD值。3.3对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响取大鼠60只，随机分为空白对照组(生理盐水)，阳性对照组(地塞米松，4.5mg/kg)，桑叶提取物高剂量(9g生药/kg)、中剂量(4g生药/kg)、低剂量(2g生药/kg)三个剂量组。灌胃给药，1次/d，给药容量为20ml/kg，连续7d。末次给药lh后，将0.08mLl^角叉菜胶注入大鼠右后足趾皮下，用足趾容积测量仪分别测量注射前、注射后1、2、3、4、5h大鼠足趾至踝关节容积，并用公式计算其肿胀度(肿5胀度E(%)=(Vt-Vn)/VnX100%，其中Vn和Vt分别代表用致炎剂前后足趾容积值)。4.实验结果与分析抗炎实验结果见下表1和表2:表1桑叶醇提物对耳廓肿胀度(n=15)和腹腔毛细血管通透性的影响(n=12)组别动物数剂量(g/kg)耳廓肿胀度(g)腹腔液OD值空白对照组15;12—0.0070±0.00370.2124±0.0580阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组15;1215;1215;1215;120扁1020.0025±0.0015**0.0028±0.0022**0.0041士0.0029**0.0060±0.00300.1419±0.0354**0.1429±0扁5**0.1315±0.0460**0.1650±0.0338**P<0.05**P<0.01表2桑叶提取物对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的影响(3f±s，n=12)组别剂量g/kg致炎后肿胀度(％)lh2h3h4h5h空白对照组一35.46土0.0849.80土0.0S'57.41±0.1454.99±0.1349.14±0.13阳性对照组0.004510.74±0.07'*18.92±0.10'"21.04土0.09"20.94士0.08"17.10i0.09"高剂量组717.05土0.09"34.27土0.07'"46.76士0.07'41.03士0.08"37.90±0.11'中剂量组424.24±0.07"39.50土0.08'"48.13±0.05'45.94士0.06'40.04±0.07'低剂量组220.83土0.05"39.58土0.09'"47息0.06'40.65士0.09"32.82±0.11*'*P<0.05**P<0.01实验结果分析1)桑叶提取物高、中剂量组分别使小鼠的耳廓肿胀的程度由空白组的0.0070±0.0037，降低到0.0041±0.0029，和0.0028±0.0022，高剂量组几乎接近阳性试药地塞米松的水平。均可显著减轻二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的程度能对抗炎症急性期的渗出(P〈0.01)(表l)。表1结果还显示，桑叶提取物的高、中、低剂量组使醋酸致腹腔毛细血管通透性增加的作用由空白组的0.2124±0.05800.分别降低为0.1429±0.0205、0.1315±0.0460和0.1650±0.03380.均有明显抑制醋酸致腹腔毛细血管通透性增加的作用(P<0.050.01)，提示均能对抗炎症急性期的渗出。2)桑叶提取物高、中、低剂量组于末次给药后lh、2h、3h、4、5h均有不同程度地明显抑制角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的程度(P<0.050.01)，提示均能对抗炎症急性期的渗出。结论以上实验结果说明，本桑叶提取物对实验性动物炎症有较好的抑制作用。二、降低实验性血糖升高作用1.实验材料2.1药物桑叶提取物，用实例1方法制备，实验前用水配成所需浓度。阳性对照药盐酸二甲双胍肠溶片(贵州圣济堂制药有限公司，批号20070501)。61.2动物KM小鼠，1822g，古。1.3仪器与试剂EL204万分之一克电子天平(梅特勒_托利多仪器(上海)有限公司)，Lambda35UVPerkinElmer(美国珀金艾尔默公司)，LG16-W型高速离心机(北京医用离心机厂)；血糖GOD-PAP法检测试剂盒(四川省迈克科技有限责任公司，批号0308091)。2.统计学处理应用统计软件SPSS11.0对所得实验数据进行t检验。3.实验方法及实验结果分析取禁食不禁水24h后的小鼠，随机分为正常对照组(空白对照组)和造模对照组。正常对照组腹腔注射生理盐水，造模对照组按65mg/kg体重腹腔注射四氧嘧啶，72h后(禁食不禁水12h)各鼠眼眶静脉丛取血测血糖值，选择血糖值在1033mmol/L的小鼠为造模成功小鼠(称为模型对照组)，按血糖水平随机分为四氧嘧啶模型对照组，二甲双胍阳性对照组(0.75g/kg)、桑叶提取物高(7g生药/kg)、中(4g生药/kg)、低(2g生药/kg)三个剂量组。灌胃给药，1次/d，给药容量为20ml/kg，连续7d，正常对照组和模型对照组给同容量生理盐水。末次给药后(禁食不禁水12h)60min，于眼眶静脉丛取血，按血糖测定试剂盒操作测定血糖值，结果见下表3:表3桑叶提取物对四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖的影响(±s，n=12)组别动物数剂量(g/kg)药前血糖值(mmol/L)药后血糖值(mol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实验结论本桑叶提取物对四氧嘧啶性高血糖小鼠的血糖有明显降低作用。具体实施例方式以下通过实施实例进一步说明本发明的具体实施过程实施实例1桑叶药材粉碎成粗粉10kg，以70%的乙醇回流提取2次，首次150kg，2次80kg;乙醇提取液过滤合并，6(TC减压回收乙醇、浓縮到相对密度等于1.15/8CTC(已无醇味)，称量得1.93kg，加水8kg，煮沸30分钟后放冷，加盐酸调节pH=32，放24到72小时后抽滤分别收集不溶物和滤液。不溶物8(TC减压烘干称重得682g，粉碎备用。滤液先用处理好的聚酰胺树脂柱(树脂重5kg)充分吸附，聚酰胺处理后的溶液用阳离子交换树脂柱(树脂重10kg)充分吸附。吸附滤液的聚酰胺树脂水洗净、氨水闷制4小时后用80%乙醇回流提取3次(首次加醇为40kg，2次和3次均为25kg)，醇提取液过滤合并，冰醋酸调节pH=6.57，减压回收乙醇，减压蒸发浓縮成相对密度大于1.30/80°C的浸膏，8(TC减压烘干称重得218g，粉碎备用。吸附溶液的阳离子交换树脂充分吸附，水洗净、氨水闷制4小时后用80%乙醇回流提取2次(首次加醇为80kg，2次50kg)，醇提取液过滤合并，减压回收乙醇，减压蒸发浓縮成相对密度大于1.30/8(TC的浸膏，8(TC减压烘干称重得413g，粉碎备用。醇提取后的桑叶粗粉8(TC烘除残余的醇溶液，用水煮沸提取2次，首次加水为药材重量的150kg，2次为100kg，提取液过滤合并，减压蒸发浓縮到相对密度大于1.20/80°C，加入含醇量大于85%的乙醇溶液，调节溶液含醇量在70%，搅拌均匀，放置72小时后过滤收集沉淀物，8(TC减压烘干称重得351g、粉碎备用。将前述提取制得的各物料粉按比例等量递增混合均匀即得。实施实例2胶囊剂[处方]桑叶干膏200g药用淀粉98g硬脂酸镁2g共制成硬胶囊1000粒。[制法]将桑叶浸膏制成细粉，按等量递增方法与药用淀粉、硬脂酸镁充分混合均匀装入硬胶囊壳中即可。实施实例3片剂[处方]桑叶干膏200g药用淀粉100g硬脂酸镁2g共制成1000片糖衣片。[制法]将桑叶浸膏制成细粉，按等量递增方法与药用淀粉充分混合均匀，以60%乙醇制压片颗粒，干燥、整粒，加入硬脂酸镁充分混合均匀，压片、包糖衣即可。实施实例4颗粒剂[处方]桑叶干膏1000g糊精980g甜味剂及其它辅料20g共制成100袋。[制法]将桑叶浸膏制成细粉，按等量递增方法与糊精、甜味剂等充分混合均匀，以60%乙醇制颗粒，干燥、整粒，分装于适当容器中即可。权利要求一种具有抗炎、降血糖作用的桑叶提取物，其特征在于该桑叶提取物含有桑叶生物碱、黄酮、多糖等有效成分。2.权力要求1的桑叶提取物的制备方法，其特征在于经过以下步骤2.1将桑叶药材粉碎成粗粉，用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取；2.2提取液过滤、浓縮、加水，加酸放置后过滤；2.3过滤收集的不溶物低温烘干、粉碎备用，滤液先过聚酰胺树脂充分吸附后，过阳离子交换树脂充分吸附，2.4吸附滤液的聚酰胺树脂水洗净、氨水闷制4小时后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液用醋酸调节pH近中性，回收醇溶剂，减压浓縮成浸膏后干燥粉碎备用；2.5吸附滤液的离子交换树脂水洗净、氨水闷制4小时后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液回收醇溶剂，减压浓縮成浸膏后干燥粉碎备用；2.6醇提取后的桑叶粗粉除去残余的醇溶液，用水提取，提取液过滤合并，减压蒸发浓縮到相对密度大于1.20/8(TC，加入含醇量大于85%的乙醇溶液调节溶液含醇量在50%70%搅拌均匀，放置2472小时后过滤收集沉淀物，低温烘干粉碎备用；2.7将2.3、2.4、2.5和2.6的物料粉末充分混合均匀即得。3.权力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑叶提取物的制备方法，其特征是最佳生产工艺如下以70%的乙醇回流提取2次，首次15倍，2次8倍；乙醇提取液过滤合并，减压回收乙醇后，浓縮到相对密度等于1.15/8(TC，加入4倍量水、煮沸30分钟后放冷，加盐酸调节pH=32，放24到72小时后抽滤分别收集不溶物和滤液。不溶物8(TC减压烘干、粉碎备用。滤液先用处理好的聚酰胺树脂充分吸附，聚酰胺处理后的溶液用阳离子交换树脂充分吸附。吸附滤液的聚酰胺树脂水洗净、氨水闷制4小时后用80%乙醇回流提取3次(首次加醇为树脂湿重点8倍，2次和3次均为5倍)，醇提取液过滤合并，冰醋酸调节pH=6.57，减压回收乙醇，减压蒸发浓縮成相对密度大于1.30/8(TC的浸膏，8(TC减压烘干、粉碎备用。吸附溶液的阳离子交换树脂充分吸附，水洗净、氨水闷制4小时后用80%乙醇回流提取2次(首次加醇为树脂湿重点8倍，2次为5倍)，醇提取液过滤合并，减压回收乙醇，减压蒸发浓縮成相对密度大于1.30/8(TC的浸膏，8(TC减压烘干、粉碎备用。醇提取后的桑叶粗粉8(TC烘除残余的醇溶液，用水煮沸提取2次，首次加水为药材重量的15倍，2次为10倍，提取液过滤合并，减压蒸发浓縮到相对密度大于1.20/8(TC，加入含醇量大于85%的乙醇溶液，调节溶液含醇量在70%，搅拌均匀，放置72小时后过滤收集沉淀物，80°C减压烘干、粉碎备用。将前述提取制得的各物料粉按比例等量递增混合均匀即得。4.权力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑叶提取物的制备方法，其特征是药材的提取可采用动态的回流提取、煮沸提取、渗漉提取，静态的浸泡、微波提取等。提取浸膏干燥方式可采用常温烘干、减压烘干、喷雾干燥等方式。5.权力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑叶提取物，其特征是可添加适当辅料制成任何剂型，如(不仅仅包括)糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、含服片剂、泡腾片剂，硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、颗粒剂、茶剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、硬膏剂、软膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂等，作为药品、健康相关产品运用。本发明优先选择的剂型为口服制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂等。6.权力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑叶提取物及其制剂，其特征是制备制剂的辅料是国家和行业标准及法规允许加入的辅料，比如(不仅仅包括)淀粉、蔗糖、糊精、甘露醇、甘油、硅衍生物、硬脂酸镁、滑石粉等。7.权力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑叶提取物，其特征是可用于非致病病原体感染性疾病引起的炎症、糖尿病等疾病的预防、治疗和康复；也可与抗病原微生物药物联合应用，治疗致病病原体感染性疾病引起的炎症。全文摘要本发明涉及一种桑叶提取物及其制剂的制备方法，该提取物含有较高浓度的桑叶生物碱、黄酮和多糖类成分，对实验动物有明显的抗炎和降低非正常高血糖作用，可作为药品或健康相关产品推广使用。文档编号A61P29/00GK101780147SQ20101012259公开日2010年7月21日申请日期2010年3月12日优先权日2010年3月12日发明者蓝鸣生,陈路申请人:广西药用植物园制药厂