一株施氏假单胞菌及其培养方法与应用的制作方法

xiaoxiao2020-6-24  6

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专利名称:一株施氏假单胞菌及其培养方法与应用的制作方法
技术领域
本发明涉及一株菌种及其培养方法与应用,具体涉及一株施氏假单胞菌及其培养方法与应用。
背景技术
聚合物生产菌株在采油上的应用主要在微生物调剖方面,微生物调剖(Microbial plugging)技术,是通过注入微生物或激活地层本源微生物,利用微生物生长繁殖及代谢过程中产生的气体、生物聚合物和无机盐沉淀形成生物膜的作用,调整注入井吸水剖面,达到调剖堵水提高采收率的目的,而目前的现有技术中,缺少优秀的生物聚合物生产菌株应用于微生物采油现场,限制了生物聚合物生产菌株的在采油作业中作用的发挥。

发明内容
本发明的目的是提供一株能发酵生成生物聚合物、调剖堵水提高采收率的施氏假单胞菌及其培养方法与应用。本发明所采用的技术方案是
一株施氏假单胞菌(/^ewi/offloaas stutzeri)W\ CGMCC Νο·5Μ1,其 16S rDNA 基因序列为
CGAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGAAGAGAGCTTGCTCTCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCC TAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAG GGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCG ACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAA GCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGCTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGT GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCA GAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCT GGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAAC GATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACG GCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG CGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGACACAGG TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGT TACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCT AATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTG AATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAG AAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGACGGTACCACG ;上述16S rDNA基因序列的长度为1417个核苷酸。一株施氏假单胞菌 G^ei/i/offloaas stutzeri) DPI CGMCC No. 5M1 的培养方法,是将施氏假单胞菌(/^ei/i/offloaas StutzerOWl CGMCC No. 5241接种到专用培养基,在50°C 的培养温度下,摇床转速120转/分,培养72小时;
所述的专用培养基的配方为
种子瓶葡萄糖2. 0g、玉米浆0. Sg、淀粉1. 0g、硝酸钠0. 3g、磷酸氢二钠0. lg、磷酸氢二钾0. lg、磷酸二氢钾0. 05g、硫酸镁0. 05g、氯化钠0. lg、氯化钙0. 005g、pH值7. 3 ;
发酵瓶葡萄糖6. 0g、玉米浆1. Sg、淀粉3. 0g、硝酸钠0. 5g、磷酸氢二钠0. 15g、磷酸氢二钾0. lg、磷酸二氢钾0. 05g、硫酸镁0. 05g、氯化钠0. 5g、氯化钙0. 005g、pH值7. 3。所述的一株施氏假单胞菌G^ei/i/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在提高油田采收率中的应用。所述的一株施氏假单胞菌G^ei/i/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在制备油田开发生物解堵剂中的应用。本发明具有以下优点
本发明提供的施氏假单胞菌株,可应用于低渗透性油田的三次开发,通过注入微生物, 利用微生物生长繁殖及代谢过程中产生的气体、生物聚合物和无机盐沉淀形成生物膜的作用,菌体细胞及其代谢产出的生物聚合物对高渗透层带起较好的选择性封堵作用,从而改善层间油水运动状况,扩大波及区域,调整注入井吸水剖面,达到调剖堵水提高采收率的目的。应用光学和电子显微镜对聚合物进行了观察,发现生物聚合物是一种水不溶性的相互缠绕的网状结构;利用纸层析分析其酸水解产物是葡萄糖,推断生物聚合物为纤维素类物质。此外,该菌培养方法简单易操作,生长繁殖迅速,具有扩大化生产的可行性,具有较高的研究、应用及市场价值。


图1为不同温度条件下施氏假单胞菌菌株DPl的生长曲线。图2为不同培养时间施氏假单胞菌菌株DPl的生长曲线。图3为岩心1中0. IPV施氏假单胞菌菌株DPl的采收率与压力曲线。图4为岩心2中0. 3PV施氏假单胞菌菌株DPl的采收率与压力曲线。图5为岩心3中0. 5PV施氏假单胞菌菌株DPl的采收率与压力曲线。图6为岩心4中0. 7PV施氏假单胞菌菌株DPl的采收率与压力曲线。图7为不同岩心即不同渗透率模型中施氏假单胞菌菌株DPl的采收率曲线。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行详细的说明。本发明所涉及的施氏假单胞菌G^ewi/offloaas stutzeri) DPI,已于2011年9月9 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No. 5241。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;下述实施例中所用的实验材料,如无特殊说明,均为常规生化试剂。一、施氏假单胞菌菌株G^ei/i/offloftas stutzeri) DPI CGMCC No. 5M1 的分离筛选与纯化
1、培养基
种子瓶糖2. Og,玉米桨0. 6g,硝酸钠0. 2g,磷酸氢二钠0. Ig,磷酸二氢钾0. 05g,硫酸镁0. 05g,氯化钠0. 5g,氯化钾0. 2g,氯化钙0. 005g, pH 7. 2
发酵瓶糖10g,玉米桨1. 8g,硝酸钠0. 6g,磷酸氢二钠0. 2g,磷酸氢二钾0. lg,硫酸镁0. 05g,氯化钠0. 5g,氯化钾1. Og,氯化钙0. 05g, ρΗ7· 2
2、培养条件
培养温度50°C,摇床转速120转/分。通过显微镜观察菌株的生长情况。图1为不同温度条件下施氏假单胞菌菌株DPl的生长曲线,图2为不同培养时间施氏假单胞菌菌株DPl 的生长曲线。施氏假单胞菌菌株DPl在50°C条件下培养,测定72小时内发酵液黏度,见表1。表1发酵液粘度随培养时间变化
权利要求
1.一株施氏假单胞菌 O^ewi/offloaas stutzeri)Wl CGMCC Νο·5Μ1,其 16S rDNA 基因序列为CGAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGAAGAGAGCTTGCTCTCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCC TAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAG GGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCG ACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAA GCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGCTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGT GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCA GAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCT GGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAAC GATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACG GCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG CGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGACACAGG TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGT TACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCT AATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTG AATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAG AAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGACGGTACCACG ;上述16S rDNA基因序列的长度为1417个核苷酸。
2.一株施氏假单胞菌(/^ewi/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241的培养方法,是将施氏假单胞菌(/^ei/i/offloaas StutzerOWl CGMCC No. 5241接种到专用培养基,在50°C的培养温度下,摇床转速120转/分,培养72小时;所述的专用培养基的配方为种子瓶葡萄糖2. 0g、玉米浆0. Sg、淀粉1. 0g、硝酸钠0. 3g、磷酸氢二钠0. lg、磷酸氢二钾0. lg、磷酸二氢钾0. 05g、硫酸镁0. 05g、氯化钠0. lg、氯化钙0. 005g、pH值7. 3 ;发酵瓶葡萄糖6. 0g、玉米浆1. Sg、淀粉3. 0g、硝酸钠0. 5g、磷酸氢二钠0. 15g、磷酸氢二钾0. lg、磷酸二氢钾0. 05g、硫酸镁0. 05g、氯化钠0. 5g、氯化钙0. 005g、pH值7. 3。
3.权利要求1所述的一株施氏假单胞菌O^ei/i/offloaasstutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在提高油田采收率中的应用。
4.权利要求1所述的一株施氏假单胞菌O^ei/i/offloaasstutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在制备油田开发生物解堵剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及一株施氏假单胞菌菌株DP1CGMCCNo.5241及其培养方法与应用。施氏假单胞菌DP1的培养方法是将施氏假单胞菌DP1接种到专用培养基,50℃下,摇床转速120转/分,培养72小时;专用培养基的配方为种子瓶葡萄糖、玉米浆、淀粉、硝酸钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钠、氯化钙;发酵瓶葡萄糖、玉米浆、淀粉、硝酸钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钠、氯化钙。本发明应用于低渗透性油田的三次开发,利用微生物生长繁殖及代谢过程中产生的气体、生物聚合物和无机盐沉淀形成生物膜的作用,改善层间油水运动状况,达到调剖堵水提高采收率的目的。
文档编号C12N1/20GK102559551SQ201210001458
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月5日 优先权日2012年1月5日
发明者张积耀, 李世强, 梁凯强, 江绍静, 洪玲, 王香增, 薛媛, 赵丽, 高瑞民 申请人:陕西延长石油(集团)有限责任公司研究院

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