巧玲花中的皂苷类化合物及其提取方法和应用的制作方法
专利名称：巧玲花中的皂苷类化合物及其提取方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分提取分离及应用技术，特别涉及一种巧玲花中的皂苷类
化合物及其制备方法和应用。
(二)
背景技术：
巧玲花(Syringa pubescens Turca)为木犀科丁香属植物，灌木，又名毛(叶)丁 香，小叶丁香，产自河南、河北、陕西等省地。经前期研究表明，巧玲花中含有三萜类、黄酮类 和皂苷类化合物。目前的提取方法为采用乙醇提取，然后用有机溶剂石油醚，石油醚_乙酸 乙酯，正丁醇分别萃取，取正丁醇作为有效部位。此法最大的缺点是采用正丁醇作为提取溶 剂，毒性较大，对操作人员的健康构成了威胁；另外正丁醇沸点较高，回收需要消耗大量的 能量，且提取出的有效部位不完整含有较多的非皂苷类成分，活性成分的含量较低。
(三)
发明内容
本发明的目的在于提供一种巧玲花中的皂苷类化合物及其制备方法和应用，通过 简单便捷的方法对巧玲花中的皂苷类化合物进行提取和研究，获得具有药用价值的提纯 物。 本发明采用的技术方案如下 巧玲花中的皂苷类化合物，由下法制得将干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取， 提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附树脂分离，用 乙醇_水溶液体系梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。
较好的，将干燥的巧玲花粉碎至40-60目。 回流提取时加入的乙醇溶液质量为干燥巧玲花药材质量的10-15倍，乙醇溶液体
积浓度为50-90%。 回流提取3-5小时为宜。 重复回流提取过程1-2次，合并提取液减压蒸馏得到浸膏。
进一步，将浸膏用体积浓度为10-30%的乙醇溶解。 用大孔吸附树脂分离时，依次用体积浓度为10 % 、20 % 、30 % 、40 % 、50 % 、60 % 、 80 %和95 %的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为40-50 %的洗脱馏 分，减压浓縮得到膏状物。 大孔吸附树脂优选如AB-8、 D-lOl、 D-201、 HPD-100等大孔吸附树脂。 梯度洗脱时，每个梯度的乙醇水溶液即每个浓度的洗脱液洗脱体积为2. 0-3. OBV，
洗脱流速为1. 0-2. OBV/h。 将所述的膏状物在50-6(TC真空减压干燥，纯化即得巧玲花总皂苷类化合物。
纯化可采用硅胶柱色谱(填料300-400目)、凝胶柱色谱分离、高效液相色谱等方 法。 以橄榄苦苷作为标准品，用HPLC 测得到的皂苷类化合物中各物质的含量。得到的皂苷类化合物的主要成分为橄榄苦苷(oleuropein) (20-30 %) 、10-羟基 橄榄苦苷(10-hydroxyoleuropein) (5-10% )、 (8Z)-ligstroside (5-10 % )、松果菊苷 (echinacoside) (30-50% )，通式如下
<formula>formula see original document page 4</formula>
式I 式II
式I中，R1为H，R2为0H时，为橄榄苦苷；
Rl、 R2都为OH时，为10-羟基橄榄苦苷；
R1、R2都为H时，为(8Z)-ligstroside ;
式II为松果菊苷的结构式。 采用本法提取出的所述巧玲花中的皂苷类化合物在制备治疗肝病的药物中有很 好的应用，可以单独或与适宜的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服或非口服剂型用于 制备治疗肝病的药物。具体的，所述的皂苷类化合物的有效用量为10-20mg/Kg/d。
本发明相对于现有技术，有以下优点 本发明使用的大孔吸附树脂可以反复再生利用，用水和乙醇作为溶剂污染少，方 法经济简便，易于工业化；所得到的总皂苷化学成分明确，质量可控。
具体实施例方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此
实施例1 取干燥、粉碎成40目的豫西伏牛山巧玲花lKg，加入12Kg 50%乙醇浸泡过夜后， 加热回流提取4小时，残渣再加70 %乙醇回流提取2次，每次4小时，合并提取液，减压回收 乙醇得浸膏153g。将乙醇浸膏用10%乙醇溶解，过滤，用500克大孔吸附树脂进行色谱分 离，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脱，每个梯度体积 为2. 5BV，洗脱流速为1. 5BV/h，收集40-50%乙醇洗脱馏分，5(TC减压浓縮，得干燥总皂苷 粉末18克。高效液相色谱测得其中橄榄苦苷、10-羟基橄榄苦苷、(8Z)-ligstroside、松果 菊苷的含量分别为24. 1 % ， 7. 2% ， 6. 5% ， 45. 2% ，总皂苷含量大于95% 。
实施例2 取干燥、粉碎成50目的豫西伏牛山巧玲花2. 5Kg，加入33Kg 70%乙醇浸泡过夜 后，加热回流提取4小时，残渣再加70%乙醇回流提取2次，每次4小时，合并提取液，减压 回收乙醇得浸膏364g。将乙醇浸膏用20%乙醇溶解，过滤，用1200克大孔吸附树脂进行色 谱分离，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脱，每个梯度体积为2. 5BV，洗脱流速为1. 5BV/h，收集40-50%乙醇洗脱馏分，55。C减压浓縮，得干燥总 皂苷粉末42克。高效液相色谱测得其中橄榄苦苷、10-羟基橄榄苦苷、(8Z)-ligstroside、 松果菊苷的含量分别为22. 1 % ， 7. 2% ， 5. 5% ， 42. 2% ，总皂苷含量大于90% 。
实施例3 取干燥、粉碎成60目的豫西伏牛山巧玲花5.0Kg，加入60Kg 60%乙醇浸泡过夜 后，加热回流提取4小时，残渣再加90%乙醇回流提取2次，每次4小时，合并提取液，减压 回收乙醇得浸膏705g。将乙醇浸膏用30%乙醇溶解，过滤，用2500克大孔吸附树脂进行色 谱分离，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脱，每个梯度 体积为2. 5BV，洗脱流速为1. 5BV/h，收集40-50^乙醇洗脱馏分，6(TC减压浓縮，得干燥总 皂苷粉末85克。高效液相色谱测得其中橄榄苦苷、10-羟基橄榄苦苷、(8Z)-ligstroside、 松果菊苷的含量分别为20. 1 % ， 6. 2% ， 5. 8% ， 43. 2% ，总皂苷含量大于90% 。
药理实验
1.试验材料 实施例1产品，四氯化碳(分析纯，天津市福晨化学试剂厂)，SPF级Wi star大鼠 48，雄性，河南科技大学实验动物中心提供，血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、血清冬 氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、血清白蛋白(ALB)试剂盒和血清球蛋白(GLB)试剂盒(中 生北控生物科技股份有限公司)。
1.方法 将36只大鼠随机分为3组。分为(l)正常组12只，以皮下注射花生油，2次/ 周，并以蒸馏水灌胃，1次/天，持续6周；(2)对照组12只，皮下注射CCL4与花生油体积比
为l : 1混合物，2次/周；10%酒精+蒸馏水(体积比l : 1)灌胃，l次/天，持续6周；
(3)剂量组12只，皮下注射CC1^与花生油1 : 1混合物，2次/周，10%酒精灌胃，同时分 别给予总皂苷，100mg/kg/天(人的用量为此用量的1/10)，持续6周。
3.结果
组别 n ALT AST ALB GLB
正常组 12 42. 10 ±3. 72
对照组 12 185. 28 ±61. 57
剂量组 12 81. 42 ± 32. 8" 与正常组比较"<0. 01 ;，<0. 01 ;与对照组比较AP〈0. 01 ;**P<0. 05 —J
P<0. 01; 与正常组相比较，对照组ALT及AST活性明显升高(P < 0. 01)，血清白蛋白含量明 显降低；与对照组比较，剂量组可以明显减少ALT释放(P〈0.01)，并可以升高血清白蛋白 比例。说明巧玲花总皂苷具有防治肝病作用。
1M. 16±10. 68 45. "±1." 21. M± 1.24 415. 21±95.61A 29. 62 ±3. 32』 21. 32 ± 1. 21 176. 47 ±48. 81" 36. 02 ± 5. 24" 20. 85 ± 1. 54
权利要求
巧玲花中的皂苷类化合物，其特征在于，由下法制得将干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取，提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附树脂分离，用乙醇-水体系为洗脱液进行梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。
2. 权利要求1所述巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，将干燥的巧玲 花粉碎，用乙醇回流提取，提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后， 采用大孔吸附树脂分离，用乙醇-水体系进行梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。
3. 如权利要求2所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，回流提取 时加入的乙醇溶液质量为干燥巧玲花药材质量的10-15倍，乙醇溶液体积浓度为50-90%。
4. 如权利要求3所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，回流提取 3-5小时。
5. 如权利要求4所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，重复回流 提取过程1-2次，合并提取液减压蒸馏得到浸膏。
6. 如权利要求2所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，将浸膏用 体积浓度为10-30 %的乙醇溶解。
7. 如权利要求2所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，用大孔 吸附树脂分离时，依次用体积浓度为10 % 、20 % 、30 % 、40 % 、50 % 、60 % 、80 %和95 %的乙 醇_水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为40-50%的洗脱馏分，减压浓縮得到 膏状物。
8. 如权利要求7所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，梯度洗脱 时，每个梯度的乙醇水溶液洗脱体积为2. 0-3. 0BV，洗脱流速为1. 0-2. 0BV/h。
9. 权利要求1所述巧玲花中的皂苷类化合物在制备治疗肝病的药物中的应用。
10. 如权利要求9所述巧玲花中的皂苷类化合物在制备治疗肝病的药物中的应用，其 特征在于，所述的皂苷类化合物的有效用量为10-20mg/Kg/d。
全文摘要
本发明属于中药有效成分提取分离及应用技术，特别涉及一种巧玲花中的皂苷类化合物及其制备方法和应用。所述巧玲花中的皂苷类化合物由下法制得将干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取，提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附树脂分离，用乙醇-水体系为洗脱液进行梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。本发明使用的大孔吸附树脂可以反复再生利用，用水和乙醇作为溶剂污染少，方法经济简便，易于工业化；所得到的总皂苷化学成分明确，质量可控。
文档编号A61K133/00GK101780126SQ201010126938
公开日2010年7月21日 申请日期2010年3月18日 优先权日2010年3月18日
发明者刘普, 尹卫平, 梁菊, 段文录, 邓瑞雪 申请人:河南科技大学
技术领域：
本发明属于中药有效成分提取分离及应用技术，特别涉及一种巧玲花中的皂苷类
化合物及其制备方法和应用。
(二)
背景技术：
巧玲花(Syringa pubescens Turca)为木犀科丁香属植物，灌木，又名毛(叶)丁 香，小叶丁香，产自河南、河北、陕西等省地。经前期研究表明，巧玲花中含有三萜类、黄酮类 和皂苷类化合物。目前的提取方法为采用乙醇提取，然后用有机溶剂石油醚，石油醚_乙酸 乙酯，正丁醇分别萃取，取正丁醇作为有效部位。此法最大的缺点是采用正丁醇作为提取溶 剂，毒性较大，对操作人员的健康构成了威胁；另外正丁醇沸点较高，回收需要消耗大量的 能量，且提取出的有效部位不完整含有较多的非皂苷类成分，活性成分的含量较低。
(三)
发明内容
本发明的目的在于提供一种巧玲花中的皂苷类化合物及其制备方法和应用，通过 简单便捷的方法对巧玲花中的皂苷类化合物进行提取和研究，获得具有药用价值的提纯 物。 本发明采用的技术方案如下 巧玲花中的皂苷类化合物，由下法制得将干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取， 提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附树脂分离，用 乙醇_水溶液体系梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。
较好的，将干燥的巧玲花粉碎至40-60目。 回流提取时加入的乙醇溶液质量为干燥巧玲花药材质量的10-15倍，乙醇溶液体
积浓度为50-90%。 回流提取3-5小时为宜。 重复回流提取过程1-2次，合并提取液减压蒸馏得到浸膏。
进一步，将浸膏用体积浓度为10-30%的乙醇溶解。 用大孔吸附树脂分离时，依次用体积浓度为10 % 、20 % 、30 % 、40 % 、50 % 、60 % 、 80 %和95 %的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为40-50 %的洗脱馏 分，减压浓縮得到膏状物。 大孔吸附树脂优选如AB-8、 D-lOl、 D-201、 HPD-100等大孔吸附树脂。 梯度洗脱时，每个梯度的乙醇水溶液即每个浓度的洗脱液洗脱体积为2. 0-3. OBV，
洗脱流速为1. 0-2. OBV/h。 将所述的膏状物在50-6(TC真空减压干燥，纯化即得巧玲花总皂苷类化合物。
纯化可采用硅胶柱色谱(填料300-400目)、凝胶柱色谱分离、高效液相色谱等方 法。 以橄榄苦苷作为标准品，用HPLC 测得到的皂苷类化合物中各物质的含量。得到的皂苷类化合物的主要成分为橄榄苦苷(oleuropein) (20-30 %) 、10-羟基 橄榄苦苷(10-hydroxyoleuropein) (5-10% )、 (8Z)-ligstroside (5-10 % )、松果菊苷 (echinacoside) (30-50% )，通式如下
<formula>formula see original document page 4</formula>
式I 式II
式I中，R1为H，R2为0H时，为橄榄苦苷；
Rl、 R2都为OH时，为10-羟基橄榄苦苷；
R1、R2都为H时，为(8Z)-ligstroside ;
式II为松果菊苷的结构式。 采用本法提取出的所述巧玲花中的皂苷类化合物在制备治疗肝病的药物中有很 好的应用，可以单独或与适宜的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服或非口服剂型用于 制备治疗肝病的药物。具体的，所述的皂苷类化合物的有效用量为10-20mg/Kg/d。
本发明相对于现有技术，有以下优点 本发明使用的大孔吸附树脂可以反复再生利用，用水和乙醇作为溶剂污染少，方 法经济简便，易于工业化；所得到的总皂苷化学成分明确，质量可控。
具体实施例方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此
实施例1 取干燥、粉碎成40目的豫西伏牛山巧玲花lKg，加入12Kg 50%乙醇浸泡过夜后， 加热回流提取4小时，残渣再加70 %乙醇回流提取2次，每次4小时，合并提取液，减压回收 乙醇得浸膏153g。将乙醇浸膏用10%乙醇溶解，过滤，用500克大孔吸附树脂进行色谱分 离，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脱，每个梯度体积 为2. 5BV，洗脱流速为1. 5BV/h，收集40-50%乙醇洗脱馏分，5(TC减压浓縮，得干燥总皂苷 粉末18克。高效液相色谱测得其中橄榄苦苷、10-羟基橄榄苦苷、(8Z)-ligstroside、松果 菊苷的含量分别为24. 1 % ， 7. 2% ， 6. 5% ， 45. 2% ，总皂苷含量大于95% 。
实施例2 取干燥、粉碎成50目的豫西伏牛山巧玲花2. 5Kg，加入33Kg 70%乙醇浸泡过夜 后，加热回流提取4小时，残渣再加70%乙醇回流提取2次，每次4小时，合并提取液，减压 回收乙醇得浸膏364g。将乙醇浸膏用20%乙醇溶解，过滤，用1200克大孔吸附树脂进行色 谱分离，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脱，每个梯度体积为2. 5BV，洗脱流速为1. 5BV/h，收集40-50%乙醇洗脱馏分，55。C减压浓縮，得干燥总 皂苷粉末42克。高效液相色谱测得其中橄榄苦苷、10-羟基橄榄苦苷、(8Z)-ligstroside、 松果菊苷的含量分别为22. 1 % ， 7. 2% ， 5. 5% ， 42. 2% ，总皂苷含量大于90% 。
实施例3 取干燥、粉碎成60目的豫西伏牛山巧玲花5.0Kg，加入60Kg 60%乙醇浸泡过夜 后，加热回流提取4小时，残渣再加90%乙醇回流提取2次，每次4小时，合并提取液，减压 回收乙醇得浸膏705g。将乙醇浸膏用30%乙醇溶解，过滤，用2500克大孔吸附树脂进行色 谱分离，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脱，每个梯度 体积为2. 5BV，洗脱流速为1. 5BV/h，收集40-50^乙醇洗脱馏分，6(TC减压浓縮，得干燥总 皂苷粉末85克。高效液相色谱测得其中橄榄苦苷、10-羟基橄榄苦苷、(8Z)-ligstroside、 松果菊苷的含量分别为20. 1 % ， 6. 2% ， 5. 8% ， 43. 2% ，总皂苷含量大于90% 。
药理实验
1.试验材料 实施例1产品，四氯化碳(分析纯，天津市福晨化学试剂厂)，SPF级Wi star大鼠 48，雄性，河南科技大学实验动物中心提供，血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、血清冬 氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、血清白蛋白(ALB)试剂盒和血清球蛋白(GLB)试剂盒(中 生北控生物科技股份有限公司)。
1.方法 将36只大鼠随机分为3组。分为(l)正常组12只，以皮下注射花生油，2次/ 周，并以蒸馏水灌胃，1次/天，持续6周；(2)对照组12只，皮下注射CCL4与花生油体积比
为l : 1混合物，2次/周；10%酒精+蒸馏水(体积比l : 1)灌胃，l次/天，持续6周；
(3)剂量组12只，皮下注射CC1^与花生油1 : 1混合物，2次/周，10%酒精灌胃，同时分 别给予总皂苷，100mg/kg/天(人的用量为此用量的1/10)，持续6周。
3.结果
组别 n ALT AST ALB GLB
正常组 12 42. 10 ±3. 72
对照组 12 185. 28 ±61. 57
剂量组 12 81. 42 ± 32. 8" 与正常组比较"<0. 01 ;，<0. 01 ;与对照组比较AP〈0. 01 ;**P<0. 05 —J
P<0. 01; 与正常组相比较，对照组ALT及AST活性明显升高(P < 0. 01)，血清白蛋白含量明 显降低；与对照组比较，剂量组可以明显减少ALT释放(P〈0.01)，并可以升高血清白蛋白 比例。说明巧玲花总皂苷具有防治肝病作用。
1M. 16±10. 68 45. "±1." 21. M± 1.24 415. 21±95.61A 29. 62 ±3. 32』 21. 32 ± 1. 21 176. 47 ±48. 81" 36. 02 ± 5. 24" 20. 85 ± 1. 54
权利要求
巧玲花中的皂苷类化合物，其特征在于，由下法制得将干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取，提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附树脂分离，用乙醇-水体系为洗脱液进行梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。
2. 权利要求1所述巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，将干燥的巧玲 花粉碎，用乙醇回流提取，提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后， 采用大孔吸附树脂分离，用乙醇-水体系进行梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。
3. 如权利要求2所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，回流提取 时加入的乙醇溶液质量为干燥巧玲花药材质量的10-15倍，乙醇溶液体积浓度为50-90%。
4. 如权利要求3所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，回流提取 3-5小时。
5. 如权利要求4所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，重复回流 提取过程1-2次，合并提取液减压蒸馏得到浸膏。
6. 如权利要求2所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，将浸膏用 体积浓度为10-30 %的乙醇溶解。
7. 如权利要求2所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，用大孔 吸附树脂分离时，依次用体积浓度为10 % 、20 % 、30 % 、40 % 、50 % 、60 % 、80 %和95 %的乙 醇_水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为40-50%的洗脱馏分，减压浓縮得到 膏状物。
8. 如权利要求7所述的巧玲花中的皂苷类化合物的提取方法，其特征在于，梯度洗脱 时，每个梯度的乙醇水溶液洗脱体积为2. 0-3. 0BV，洗脱流速为1. 0-2. 0BV/h。
9. 权利要求1所述巧玲花中的皂苷类化合物在制备治疗肝病的药物中的应用。
10. 如权利要求9所述巧玲花中的皂苷类化合物在制备治疗肝病的药物中的应用，其 特征在于，所述的皂苷类化合物的有效用量为10-20mg/Kg/d。
全文摘要
本发明属于中药有效成分提取分离及应用技术，特别涉及一种巧玲花中的皂苷类化合物及其制备方法和应用。所述巧玲花中的皂苷类化合物由下法制得将干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取，提取液减压蒸馏得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附树脂分离，用乙醇-水体系为洗脱液进行梯度洗脱，纯化后得到巧玲花皂苷类化合物。本发明使用的大孔吸附树脂可以反复再生利用，用水和乙醇作为溶剂污染少，方法经济简便，易于工业化；所得到的总皂苷化学成分明确，质量可控。
文档编号A61K133/00GK101780126SQ201010126938
公开日2010年7月21日 申请日期2010年3月18日 优先权日2010年3月18日
发明者刘普, 尹卫平, 梁菊, 段文录, 邓瑞雪 申请人:河南科技大学
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