紫金砂中香豆素和色原酮类提取物、其制备方法及用途的制作方法
专利名称：紫金砂中香豆素和色原酮类提取物、其制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药、化学药物领域，具体地，本发明涉及富含香豆素和色原酮类成分的紫金砂提取物、其制备方法及在治疗疼痛和/或炎性疾病的药物中的应用。
背景技术：
紫金砂为为伞形科当归属植物拐芹(Angelica polymorpha Maxim)的根及根茎。 主要功效为祛风、散寒、燥湿、止痛。现多用于感冒鼻塞、胃痛、腹痛、胸胁痛、风湿关节痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等症。现代药理研究发现紫金砂在抗菌、解痉、抗溃疡、免疫调节等方面具有较好疗效。紫金砂中主要含有香豆素类、挥发油等成分。迄今为止，国内外学者从紫金砂中分离得到的化合物大多为直线呋喃型香豆素类，主要包括氧化前胡内酯、石当归素、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素、佛手柑内酯、异氧化前胡内酯、独活素、3-甲基白芷属脑、异石当归素等。有关紫金砂化学成分的药理活性、应用及制备方法，目前公开的发明专利有“紫金砂提取物及其医药用途”(申请号200610105622. 6)，发明涉及紫金砂提取物，其提取方法， 含有该提取物的药物组合物及其用于制备炎性疾病和/或疼痛的药物产品的用途。此发明仅通过乙醇提取制得提取物，其提取方案没有明确技术特征，有效成分不清楚。目前公开的专利还有“含有紫金砂提取物的药物制备方法及其应用”(申请号200710051331. 8)，该发明涉及一种含有以挥发油为主的紫金砂提取物的药物的制备方法及其在镇痛、抗溃疡及解痉挛药物中的应用，其提取物制备方法是通过分别以水、95%乙醇加热回流提取制得提取物，再将两部分混合得到紫金砂提取物。其涉及的化学成分为没药烷吉酮和水芹烯。由于中药化学成分复杂，难以确定有效成分，因此，难以准确评价药效，同时，由于中药成分含量因产地、批次不同而不同，导致中成药质量难以控制。针对中药研究中存在的缺点，本发明人对中药紫金砂中各类化学成分进行系统分离和活性筛选研究，发现一类具有显著抗炎、 镇痛活性的提取物，其化学成分与上述两个专利所披露的化学成分不同，主要为香豆素类、 色原酮类成分的组合。本发明的提取物的制备方法与前述专利明显不同，在紫金砂粗提物基础上又经过溶剂萃取与大孔树脂精制，其技术方案新颖，化学成分明确，质量可控。国内外相关研究中未见有从紫金砂中获得抗炎镇痛活性良好的香豆素类、色原酮类成分复合物的相关报道。
发明内容
本发明的一个方面涉及一种紫金砂提取物，其富含有香豆素类和色原酮类成分。 其中，香豆素类成分为水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索(osthol)、 佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素(isopimpinellin)、氧化前胡素乙基醚的一种或多种；色原酮类成分为3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、 Iedebouriellol 的一种或多种。
在本发明的一个实施方案中，以提取物的总重量计算，上述香豆素类、色原酮类含量以重量百分比计合计为40-100%，50-100%，优选为60-80%。在本发明的一个实施方案中，以提取物的总重量计算，水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚五种成分的含量以重量百分比计分别为:10-30 %,0. 6-3. 0%U. 0-6. 0%,0. 3-1. 5%,0. 1-1. 0%，优选为 15-25%, 1. 0-2. 0%Λ. 0-3. 5%,0. 5-1. 3%,0. 3-0. 7%。本发明的另一方面涉及上述的紫金砂提取物的制备方法，包括如下步骤1)将紫金砂以溶剂提取法或(X)2超临界萃取法进行提取，浓缩后得到粗提物；2)取药材粗提物在水中分散均勻，用低极性溶剂进行萃取，得到萃取液；3)萃取液蒸干，用低极性溶剂超声洗涤，静置，过滤沉淀，干燥。4)萃取后水溶液过大孔树脂柱，乙醇洗脱，浓缩洗脱液，蒸干。5)将3)或4)所得提取物用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(0 100-100 0)梯度洗脱，划分成F1-F20段；F3段用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯12 1洗脱，再用石油醚 /乙酸乙酯(1 1)重结晶，得到单体化合物异欧前胡素；F4段用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯10 1洗脱，再将F4-2反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1 1洗脱)，得到单体化合物奥斯索；F5段经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(10 1-7 1)梯度洗脱，再将F5-1段经RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脱，得到欧前胡素、佛手柑内酯；F5-2段经 RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脱，得到二氢欧山芹素；F-7段经硅胶柱层析， 石油醚-乙酸乙酯(8 1)洗脱，再将F7-3段经RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脱，得到拐芹色原酮；F7-4段反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1 1洗脱)，得到氧化前胡素乙基醚。F-8段经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(6 1)洗脱，再将F8-2段经RP-18 柱，甲醇-水(30 70-80 20)梯度洗脱，再经过凝胶柱层析(氯仿甲醇1 1洗脱)得到栓翅芹烯醇、ledebouriellol ;F10段经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(3 1)洗脱，再将 F10-2段经RP-18柱，甲醇-水(30 70-80 20)梯度洗脱，再经过凝胶柱层析(氯仿甲醇 1 1洗脱)得到3，R-(+)-亥茅酚；F10-3段经过RP-18柱，甲醇-水GO 60-80 20) 梯度洗脱，得到3’ -0-乙酰基亥茅酚、异虎耳草素。F-14段经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯(1 2)洗脱，F14-6段重结晶得到水合氧化前胡素内酯。采用溶剂提取法提取时，包括以下步骤取适量紫金砂药材粉碎，加入固液比为 1:6-1: 10的水、甲醇、乙醇或丙酮或者其混合溶剂，加热回流提取，然后合并提取液，减压浓缩至干。其中优选的溶剂为含水的乙醇。提取时可以采用煎煮、加热回流、超声提取、 冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等方法。采用CO2超临界萃取法进行提取时，包括以下步骤取适量紫金砂药材粉碎，过 20-60数目的筛；选用超临界萃取装置，以无水乙醇作夹带剂，在萃取温度40-50°C、萃取压力25-45MPa时提取-小时，将萃取物于40_50°C减压蒸干。采用溶剂萃取法进行萃取时，包括以下步骤取药材粗提物在水中分散，然后用加入体积比为1 2-1 6的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取2-3次，以去除其中的色素及焦油物。其中优选的溶剂为石油醚、环己烷、乙酸乙酯。将萃取得到的乙酸乙酯萃取液蒸干，浓缩成膏状，加入石油醚，超声30分钟后静置，析出沉淀，过滤，沉淀用石油醚洗涤，干燥得到提取物。
采用大孔吸附树脂法时，包括以下步骤取萃取后的水溶液蒸干，用10-30%的乙醇溶散均勻，上大孔树脂柱，树脂柱径高比1 6-1 10，上样后用4-8倍BV的10-40% 乙醇洗去杂质，除杂流速为1. 5-6BV/h,再用3-10倍BV的60-95%乙醇洗脱，洗脱流速为 3-9BV/h，收集后者洗脱部分，减压浓缩至干，得到富含有香豆素类和色原酮类成分的紫金砂提取物。大孔吸附树脂包括非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型的树脂，如 HP20、D101、D4020、HPD400、AB-8、S_8、HZ-806、D4006、X_5、NKA-II、NKA-9 等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如HP20、AB-8、I-IPD400、D101、D4006、X-5等，其中最优选AB-8型树脂。本发明的又一方面涉及该提取物制备的药物组合物，该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，用于制备药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片齐 、丸齐 、颗粒剂、口服液、糖浆、冲齐 、酒齐 、注射齐 、膏齐 、散齐 、饮料等。本发明药物组合物中含有的载体或赋形剂包括药剂学常规应用的载体和赋形剂， 例如填充剂、粘合剂、防腐剂、矫味剂、稀释剂、着色剂等，本发明药物组合物可按本领域已知方法制备。本发明的又一方面涉及紫金砂提取物在制备治疗炎症和/或疼痛的产品或药物中的应用，其中的炎症包括痛风性关节炎、风湿性关节炎、类风湿性关节炎等；其中的疼痛包括痛风性关节痛、风湿性关节痛、类风湿性关节痛、头痛、腹痛、胃痛、跌打损伤痛等。本发明的提取物可采用本领域已知的或者本文公开的途径给药。给药途径包括但不局限于下述几种外用(包括眼、鼻)；吸入(包括气管内、口腔内、过皮或皮外的乳化剂或喷雾剂)；口服；注射或点滴(包括静脉、动脉、皮下腹腔或肌肉内)；颅内给药(包括鞘膜、脑室内)。本发明提取物及其有效成分的用量取决于适用对象的年龄、体重和疾病的类型及严重程度等因素。本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种1.香豆素类、色原酮类成分总含量测定(紫外分光光度法)对照品溶液的配制精密称取水合氧化前胡素内酯对照品3. Omg，置IOml量瓶中， 加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度，摇勻，作为对照品溶液。标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2. 5ml至25ml容量瓶中，定容。分别吸取 2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. 0,6. 7ml，用甲醇稀释定容到IOml量瓶中，摇勻，在307nm波长处测定吸光度。以水合氧化前胡素内酯对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。供试品溶液的配置取紫金砂提取物适量，加甲醇溶解定容至25ml量瓶中，摇勻。 精密吸取1ml，加甲醇定容至IOml量瓶中，摇勻。测定法取供试品溶液在307nm波长处测定吸光度，按标准曲线法计算样品中香豆素、色原酮类成分总含量，即得。香豆素类、色原酮类成分含量测定(紫外分光光度法)2.紫金砂提取物中水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’R_(+)_亥茅酚、3’-0_乙酰基亥茅酚含量测定(高效液相法)色谱条件色谱柱用十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-水；流速1. Oml/mim ；柱温室温。洗脱条件如表1 表1.梯度洗脱条件
权利要求
1.一种紫金砂提取物，其含有香豆素和色原酮类成分，其中，所述香豆素类成分为选自水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索、佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素、氧化前胡素乙基醚中的一种或多种，所述色原酮类成分为3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、Iedebouriellol的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的提取物，其中，以提取物总重量计算，香豆素类和色原酮类成分以重量比计算分别为40-100%，优选为60-80%。
3.根据权利要求1所述的提取物，以提取物的总重量计算，水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚五种成分以重量比计算， 含量分别为:10-30 %,0. 6-3. 0%U. 0-6. 0%,0. 3-1. 5%^P 0. 1-1. 0% ；优选为 15-25%, 1. 0-2. 0%Λ. 0-3. 5%,0. 5-1. 3%和 0. 3-0. 7%。
4.权利要求1-3中任一项所述提取物的制备方法，包括如下步骤1)将紫金砂药材以溶剂提取法或CO2超临界萃取法进行提取，浓缩后得到粗提物；2)取药材粗提物在水中分散均勻，用低极性溶剂进行萃取，得到萃取液；3)萃取液蒸干，用低极性溶剂超声洗涤，静置，过滤沉淀，干燥；或者按照4)处理萃取液，将萃取液过大孔树脂柱，乙醇洗脱，浓缩洗脱液，蒸干，得到产品。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤1)中所述的溶剂提取法包括如下步骤 取适量紫金砂药材粉碎，加入固液体积比为1 6-1 10的溶剂，加热回流提取，然后合并提取液，减压浓缩至干，其中所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙酮、或者它们的混合物，优选地，所述溶剂为乙醇。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤1)所述的CO2超临界萃取法，包括如下步骤取适量紫金砂药材粉碎，过20-60目筛；以无水乙醇作夹带剂，在萃取温度40-50°C、 萃取压力25-45MPa时提取1小时，将萃取物于40_50°C减压蒸干。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤幻包括以下步骤将步骤1)中的粗提物在水中分散均勻，然后按照1 2-1 4的体积比加入低极性的溶剂萃取2-3次，其中所述低极性的溶剂选自烷烃类、酯类或醚类，优选为石油醚、环己烷、乙酸乙酯。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤幻包括如下步骤将步骤幻中得到的萃取液蒸干，浓缩成膏状，加入石油醚，超声30分钟后静置，析出沉淀，过滤，沉淀用石油醚洗涤，干燥得到提取物。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤4)包括如下步骤将步骤幻中萃取液蒸干，用10-30%的乙醇溶散均勻，上大孔树脂柱，树脂柱径高比1 6-1 10，上样后用4-8倍BV的10-40%乙醇洗去杂质，除杂流速为1. 5-6BV/h,再用3-10倍BV的60-95% 乙醇洗脱，洗脱液流速为3-9BV/h，收集后者洗脱部分，减压浓缩至干，得到紫金砂提取物， 其中大孔树脂优选为弱极性或中等极性的树脂HP20、AB-8、I-IPD400、D101、D4006、X-5，更优选为AB-8型树脂。
10.根据含有权利要求1-3任一项所述提取物制备的药物组合物，所述提取物可以单独或与其他任何中西药按任意比例配伍，所述药物组合物的剂型为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂。
11.含有权利要求1-3任一项所述提取物用于制备治疗炎症或疼痛的药物的用途，其中，所述炎症包括痛风性关节炎、风湿性关节炎和类风湿性关节炎，所述疼痛包括痛风性关节痛、风湿性关节痛、类风湿性关节痛、头痛、腹痛、胃痛和跌打损伤痛。
全文摘要
本发明涉及一种紫金砂提取物，所述提取物含有香豆素类和色原酮类成分。其中，香豆素类为水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索、佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素、氧化前胡素乙基醚的一种或多种；色原酮类为3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、ledebouriellol的一种或多种。本发明还涉及紫金砂提取物的制备方法、质量控制方法、药物组合物及其在制备治疗疼痛和/或炎性疾病的药物或产品中的应用。本发明提取物的药效学和急性毒性实验表明，本发明提取物具有有效成分清楚、药效作用强、毒副作用小，以及产品纯度高，服用剂量较小，质量可控等优点。
文档编号A61P19/06GK102188464SQ20101012715
公开日2011年9月21日 申请日期2010年3月16日 优先权日2010年3月16日
发明者于能江, 杨郁, 梁菲菲, 赵毅民 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
技术领域：
本发明属于中药、化学药物领域，具体地，本发明涉及富含香豆素和色原酮类成分的紫金砂提取物、其制备方法及在治疗疼痛和/或炎性疾病的药物中的应用。
背景技术：
紫金砂为为伞形科当归属植物拐芹(Angelica polymorpha Maxim)的根及根茎。 主要功效为祛风、散寒、燥湿、止痛。现多用于感冒鼻塞、胃痛、腹痛、胸胁痛、风湿关节痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等症。现代药理研究发现紫金砂在抗菌、解痉、抗溃疡、免疫调节等方面具有较好疗效。紫金砂中主要含有香豆素类、挥发油等成分。迄今为止，国内外学者从紫金砂中分离得到的化合物大多为直线呋喃型香豆素类，主要包括氧化前胡内酯、石当归素、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素、佛手柑内酯、异氧化前胡内酯、独活素、3-甲基白芷属脑、异石当归素等。有关紫金砂化学成分的药理活性、应用及制备方法，目前公开的发明专利有“紫金砂提取物及其医药用途”(申请号200610105622. 6)，发明涉及紫金砂提取物，其提取方法， 含有该提取物的药物组合物及其用于制备炎性疾病和/或疼痛的药物产品的用途。此发明仅通过乙醇提取制得提取物，其提取方案没有明确技术特征，有效成分不清楚。目前公开的专利还有“含有紫金砂提取物的药物制备方法及其应用”(申请号200710051331. 8)，该发明涉及一种含有以挥发油为主的紫金砂提取物的药物的制备方法及其在镇痛、抗溃疡及解痉挛药物中的应用，其提取物制备方法是通过分别以水、95%乙醇加热回流提取制得提取物，再将两部分混合得到紫金砂提取物。其涉及的化学成分为没药烷吉酮和水芹烯。由于中药化学成分复杂，难以确定有效成分，因此，难以准确评价药效，同时，由于中药成分含量因产地、批次不同而不同，导致中成药质量难以控制。针对中药研究中存在的缺点，本发明人对中药紫金砂中各类化学成分进行系统分离和活性筛选研究，发现一类具有显著抗炎、 镇痛活性的提取物，其化学成分与上述两个专利所披露的化学成分不同，主要为香豆素类、 色原酮类成分的组合。本发明的提取物的制备方法与前述专利明显不同，在紫金砂粗提物基础上又经过溶剂萃取与大孔树脂精制，其技术方案新颖，化学成分明确，质量可控。国内外相关研究中未见有从紫金砂中获得抗炎镇痛活性良好的香豆素类、色原酮类成分复合物的相关报道。
发明内容
本发明的一个方面涉及一种紫金砂提取物，其富含有香豆素类和色原酮类成分。 其中，香豆素类成分为水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索(osthol)、 佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素(isopimpinellin)、氧化前胡素乙基醚的一种或多种；色原酮类成分为3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、 Iedebouriellol 的一种或多种。
在本发明的一个实施方案中，以提取物的总重量计算，上述香豆素类、色原酮类含量以重量百分比计合计为40-100%，50-100%，优选为60-80%。在本发明的一个实施方案中，以提取物的总重量计算，水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚五种成分的含量以重量百分比计分别为:10-30 %,0. 6-3. 0%U. 0-6. 0%,0. 3-1. 5%,0. 1-1. 0%，优选为 15-25%, 1. 0-2. 0%Λ. 0-3. 5%,0. 5-1. 3%,0. 3-0. 7%。本发明的另一方面涉及上述的紫金砂提取物的制备方法，包括如下步骤1)将紫金砂以溶剂提取法或(X)2超临界萃取法进行提取，浓缩后得到粗提物；2)取药材粗提物在水中分散均勻，用低极性溶剂进行萃取，得到萃取液；3)萃取液蒸干，用低极性溶剂超声洗涤，静置，过滤沉淀，干燥。4)萃取后水溶液过大孔树脂柱，乙醇洗脱，浓缩洗脱液，蒸干。5)将3)或4)所得提取物用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(0 100-100 0)梯度洗脱，划分成F1-F20段；F3段用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯12 1洗脱，再用石油醚 /乙酸乙酯(1 1)重结晶，得到单体化合物异欧前胡素；F4段用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯10 1洗脱，再将F4-2反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1 1洗脱)，得到单体化合物奥斯索；F5段经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(10 1-7 1)梯度洗脱，再将F5-1段经RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脱，得到欧前胡素、佛手柑内酯；F5-2段经 RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脱，得到二氢欧山芹素；F-7段经硅胶柱层析， 石油醚-乙酸乙酯(8 1)洗脱，再将F7-3段经RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脱，得到拐芹色原酮；F7-4段反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1 1洗脱)，得到氧化前胡素乙基醚。F-8段经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(6 1)洗脱，再将F8-2段经RP-18 柱，甲醇-水(30 70-80 20)梯度洗脱，再经过凝胶柱层析(氯仿甲醇1 1洗脱)得到栓翅芹烯醇、ledebouriellol ;F10段经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(3 1)洗脱，再将 F10-2段经RP-18柱，甲醇-水(30 70-80 20)梯度洗脱，再经过凝胶柱层析(氯仿甲醇 1 1洗脱)得到3，R-(+)-亥茅酚；F10-3段经过RP-18柱，甲醇-水GO 60-80 20) 梯度洗脱，得到3’ -0-乙酰基亥茅酚、异虎耳草素。F-14段经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯(1 2)洗脱，F14-6段重结晶得到水合氧化前胡素内酯。采用溶剂提取法提取时，包括以下步骤取适量紫金砂药材粉碎，加入固液比为 1:6-1: 10的水、甲醇、乙醇或丙酮或者其混合溶剂，加热回流提取，然后合并提取液，减压浓缩至干。其中优选的溶剂为含水的乙醇。提取时可以采用煎煮、加热回流、超声提取、 冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等方法。采用CO2超临界萃取法进行提取时，包括以下步骤取适量紫金砂药材粉碎，过 20-60数目的筛；选用超临界萃取装置，以无水乙醇作夹带剂，在萃取温度40-50°C、萃取压力25-45MPa时提取-小时，将萃取物于40_50°C减压蒸干。采用溶剂萃取法进行萃取时，包括以下步骤取药材粗提物在水中分散，然后用加入体积比为1 2-1 6的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取2-3次，以去除其中的色素及焦油物。其中优选的溶剂为石油醚、环己烷、乙酸乙酯。将萃取得到的乙酸乙酯萃取液蒸干，浓缩成膏状，加入石油醚，超声30分钟后静置，析出沉淀，过滤，沉淀用石油醚洗涤，干燥得到提取物。
采用大孔吸附树脂法时，包括以下步骤取萃取后的水溶液蒸干，用10-30%的乙醇溶散均勻，上大孔树脂柱，树脂柱径高比1 6-1 10，上样后用4-8倍BV的10-40% 乙醇洗去杂质，除杂流速为1. 5-6BV/h,再用3-10倍BV的60-95%乙醇洗脱，洗脱流速为 3-9BV/h，收集后者洗脱部分，减压浓缩至干，得到富含有香豆素类和色原酮类成分的紫金砂提取物。大孔吸附树脂包括非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型的树脂，如 HP20、D101、D4020、HPD400、AB-8、S_8、HZ-806、D4006、X_5、NKA-II、NKA-9 等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如HP20、AB-8、I-IPD400、D101、D4006、X-5等，其中最优选AB-8型树脂。本发明的又一方面涉及该提取物制备的药物组合物，该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，用于制备药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片齐 、丸齐 、颗粒剂、口服液、糖浆、冲齐 、酒齐 、注射齐 、膏齐 、散齐 、饮料等。本发明药物组合物中含有的载体或赋形剂包括药剂学常规应用的载体和赋形剂， 例如填充剂、粘合剂、防腐剂、矫味剂、稀释剂、着色剂等，本发明药物组合物可按本领域已知方法制备。本发明的又一方面涉及紫金砂提取物在制备治疗炎症和/或疼痛的产品或药物中的应用，其中的炎症包括痛风性关节炎、风湿性关节炎、类风湿性关节炎等；其中的疼痛包括痛风性关节痛、风湿性关节痛、类风湿性关节痛、头痛、腹痛、胃痛、跌打损伤痛等。本发明的提取物可采用本领域已知的或者本文公开的途径给药。给药途径包括但不局限于下述几种外用(包括眼、鼻)；吸入(包括气管内、口腔内、过皮或皮外的乳化剂或喷雾剂)；口服；注射或点滴(包括静脉、动脉、皮下腹腔或肌肉内)；颅内给药(包括鞘膜、脑室内)。本发明提取物及其有效成分的用量取决于适用对象的年龄、体重和疾病的类型及严重程度等因素。本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种1.香豆素类、色原酮类成分总含量测定(紫外分光光度法)对照品溶液的配制精密称取水合氧化前胡素内酯对照品3. Omg，置IOml量瓶中， 加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度，摇勻，作为对照品溶液。标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2. 5ml至25ml容量瓶中，定容。分别吸取 2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. 0,6. 7ml，用甲醇稀释定容到IOml量瓶中，摇勻，在307nm波长处测定吸光度。以水合氧化前胡素内酯对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。供试品溶液的配置取紫金砂提取物适量，加甲醇溶解定容至25ml量瓶中，摇勻。 精密吸取1ml，加甲醇定容至IOml量瓶中，摇勻。测定法取供试品溶液在307nm波长处测定吸光度，按标准曲线法计算样品中香豆素、色原酮类成分总含量，即得。香豆素类、色原酮类成分含量测定(紫外分光光度法)2.紫金砂提取物中水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’R_(+)_亥茅酚、3’-0_乙酰基亥茅酚含量测定(高效液相法)色谱条件色谱柱用十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-水；流速1. Oml/mim ；柱温室温。洗脱条件如表1 表1.梯度洗脱条件
权利要求
1.一种紫金砂提取物，其含有香豆素和色原酮类成分，其中，所述香豆素类成分为选自水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索、佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素、氧化前胡素乙基醚中的一种或多种，所述色原酮类成分为3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、Iedebouriellol的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的提取物，其中，以提取物总重量计算，香豆素类和色原酮类成分以重量比计算分别为40-100%，优选为60-80%。
3.根据权利要求1所述的提取物，以提取物的总重量计算，水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚五种成分以重量比计算， 含量分别为:10-30 %,0. 6-3. 0%U. 0-6. 0%,0. 3-1. 5%^P 0. 1-1. 0% ；优选为 15-25%, 1. 0-2. 0%Λ. 0-3. 5%,0. 5-1. 3%和 0. 3-0. 7%。
4.权利要求1-3中任一项所述提取物的制备方法，包括如下步骤1)将紫金砂药材以溶剂提取法或CO2超临界萃取法进行提取，浓缩后得到粗提物；2)取药材粗提物在水中分散均勻，用低极性溶剂进行萃取，得到萃取液；3)萃取液蒸干，用低极性溶剂超声洗涤，静置，过滤沉淀，干燥；或者按照4)处理萃取液，将萃取液过大孔树脂柱，乙醇洗脱，浓缩洗脱液，蒸干，得到产品。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤1)中所述的溶剂提取法包括如下步骤 取适量紫金砂药材粉碎，加入固液体积比为1 6-1 10的溶剂，加热回流提取，然后合并提取液，减压浓缩至干，其中所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙酮、或者它们的混合物，优选地，所述溶剂为乙醇。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤1)所述的CO2超临界萃取法，包括如下步骤取适量紫金砂药材粉碎，过20-60目筛；以无水乙醇作夹带剂，在萃取温度40-50°C、 萃取压力25-45MPa时提取1小时，将萃取物于40_50°C减压蒸干。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤幻包括以下步骤将步骤1)中的粗提物在水中分散均勻，然后按照1 2-1 4的体积比加入低极性的溶剂萃取2-3次，其中所述低极性的溶剂选自烷烃类、酯类或醚类，优选为石油醚、环己烷、乙酸乙酯。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤幻包括如下步骤将步骤幻中得到的萃取液蒸干，浓缩成膏状，加入石油醚，超声30分钟后静置，析出沉淀，过滤，沉淀用石油醚洗涤，干燥得到提取物。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤4)包括如下步骤将步骤幻中萃取液蒸干，用10-30%的乙醇溶散均勻，上大孔树脂柱，树脂柱径高比1 6-1 10，上样后用4-8倍BV的10-40%乙醇洗去杂质，除杂流速为1. 5-6BV/h,再用3-10倍BV的60-95% 乙醇洗脱，洗脱液流速为3-9BV/h，收集后者洗脱部分，减压浓缩至干，得到紫金砂提取物， 其中大孔树脂优选为弱极性或中等极性的树脂HP20、AB-8、I-IPD400、D101、D4006、X-5，更优选为AB-8型树脂。
10.根据含有权利要求1-3任一项所述提取物制备的药物组合物，所述提取物可以单独或与其他任何中西药按任意比例配伍，所述药物组合物的剂型为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂。
11.含有权利要求1-3任一项所述提取物用于制备治疗炎症或疼痛的药物的用途，其中，所述炎症包括痛风性关节炎、风湿性关节炎和类风湿性关节炎，所述疼痛包括痛风性关节痛、风湿性关节痛、类风湿性关节痛、头痛、腹痛、胃痛和跌打损伤痛。
全文摘要
本发明涉及一种紫金砂提取物，所述提取物含有香豆素类和色原酮类成分。其中，香豆素类为水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索、佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素、氧化前胡素乙基醚的一种或多种；色原酮类为3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、ledebouriellol的一种或多种。本发明还涉及紫金砂提取物的制备方法、质量控制方法、药物组合物及其在制备治疗疼痛和/或炎性疾病的药物或产品中的应用。本发明提取物的药效学和急性毒性实验表明，本发明提取物具有有效成分清楚、药效作用强、毒副作用小，以及产品纯度高，服用剂量较小，质量可控等优点。
文档编号A61P19/06GK102188464SQ20101012715
公开日2011年9月21日 申请日期2010年3月16日 优先权日2010年3月16日
发明者于能江, 杨郁, 梁菲菲, 赵毅民 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
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