一种鹿茸全成分均一冻干制剂及其生产方法
专利名称：一种鹿茸全成分均一冻干制剂及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种含有中药活性成分的冻干赋形制剂及其生产方法，特别是涉及一种鹿茸全成分均一冻干制剂及其生产方法。
背景技术：
鹿茸药用最早见于古代《神农本草经》，李时珍在《本草纲目》中更为详尽地介绍了鹿茸的炮制方法和药用功效。
鹿茸是雄性鹿尚未骨化的幼嫩茸角。鹿茸加工应从取茸开始。取茸方法基本有两种，一是用锯贴头皮锯下，称锯茸；二是连头盖骨带茸砍下，称砍茸。取下的鹿茸先要用水洗净，抽出茸内积血。砍茸还要进行修骨整形，使形状美观。药典规定的鹿茸为梅花鹿茸药材分为二杠、三岔。马鹿茸药材分为三岔和莲花。
市售鹿茸切片一般分为四级，一等花茸片为鹿茸顶端的一段切成，称为血片；第二等由于切面平滑，无海绵样孔隙，颜色如蜡样光洁，习称蜡片；第三等因为表面不均一，无蜡样光泽，习称砂片，第四等因为表面有海绵样孔隙，习称骨片。
鹿茸“禀纯阳之质，含生发之气”，被中医列为峻补“元阳”的首选药。从现代医学观点看，“元阳”包括了生殖、生长代谢等人体基本生理功能。鹿茸具有生精补髓、益血助阳、强筋健骨的功能，主治一切虚损、头晕、耳聋、目暗、阳痿、滑精、腰膝无力、虚寒带下、崩漏等病症。临床常用量为1.5～3g，一般最多不超过6g。现代药理学研究发现，鹿茸具有强心、提高机体免疫功能、促进创伤愈合，以及性激素样作用。鹿茸除在中医处方中使用外，还常见于滋补类保健品，例如鹿茸精、鹿茸酒、鹿茸胶等等。
鹿茸加工的主要目的是脱水、干燥、防腐、消毒、保形、保色，提高质量，利于保存。长期以来，我国鹿茸加工一直采用沸水煮炸和高温烘烤技术。但是这种加工方法存在很大的缺陷。这是由于鹿茸的药理学活性的基础主要为其中含有的大量蛋白质类生物活性因子，而即使加入白酒也会使蛋白质变性，因此传统的鹿茸加工方法造成茸内有效成分活性物质遭到不同程度的流失和破坏。
综上所述，传统鹿茸炮制方法和饮片在实际应用中，存在如下2个问题 (1)鹿茸中含有的神经生长因子、表皮生长因子、类胰岛素样生长因子等生长因子类物质都是蛋白激素或多肽激素类成分，高温热炸工艺使这些活性成分损失殆尽； (2)传统的鹿茸分级是在外观性状上的分级，是定性的，而非定量的，这给医生和患者用药带来了极大的困惑，各分级鹿茸饮片之间没有换算关系，等量换算会在不同饮片之间切换时，造成药效的巨大差异。
为了解决如上问题，冻干鹿茸应运而生，冻干鹿茸的炮制方法是采用现代食品和生物制品冷冻保鲜与干燥技术理论，结合鹿茸的组织结构和生物学特性，设法使茸体内的游离水和结构水易于析出，使鲜茸经速冻后，在低温真空条件下直接升华脱水干燥成优质商品茸的新工艺。避免了现行的“水煮、烘烤”加工法对鹿茸内热敏活性成分如酶、蛋白激素和多肽激素等的破坏；可保持鲜鹿茸的形状、色泽、味道基本不变；并最大限度地保持鹿茸的营养成分和生理活性成分不流失、不破坏，提高了鹿茸的产品质量和外观性能。
以这种加工方式获得的鹿茸虽然解决了传统炮制饮片的第1个问题，即活性因子类成分和其他热敏感成分活性保存的难题，但是同样因存在鹿茸的组织结构和外形特征，第2个问题同样存在。从鹿茸顶部到底部，不同部位饮片的差异，在实际使用中对剂量难以较为准确的把握，造成疗效的差异和使用中的困惑，也不符合现代药物对质量稳定可控的基本要求。
为了解决如上问题，尝试将冻干鹿茸通过粉碎、混合等工艺，试图获得粉末，或者将其填入胶囊，成为一种全成分均一饮片或制剂。但是各级粉碎等工艺过程中的机械力和产热会极大的破坏活性因子类成分和其他热敏感成分的活性，同时因鹿茸的解剖结构分为骨部和皮部，骨部在干燥后较易粉碎，而皮部在干燥后，犹如鞣制后的皮革，非常难以粉碎，往往造成该类物质受热过度，而鹿茸茸皮中含有大量的有效成分，在粉碎过程中损失尤其巨大，即使采用低温粉碎，也很难将干燥茸皮粉碎到合适粒度。
即使在未来，有可能将保鲜鹿茸处理得到保鲜茸粉，其制剂形态所形成的服用方式也会导致活性因子类成分和其他热敏感成分难以发挥作用，口服粉剂和粉剂填充的胶囊使活性因子类成分和其他热敏感成分在胃肠道酸碱和各种消化酶的作用下，基本降解，很难吸收发挥作用。同时，口服粉剂的口感也很难令人接受。
冻干赋形制剂是采用冷冻干燥法，在工艺过程中加以适当的辅料赋形而获得的制剂。早期用于制备化学药物，Gregory等采用冷冻干燥技术制造了高孔隙率的药物载体，该载体在口腔遇到唾液后崩解，不需水送服，给一些吞咽功能不好和取水不便的病人服药提供了方便，以其独特的优越性越来越受到患者的喜爱。
但是传统冻干赋形制剂对辅料有严格的要求，必须具备一定量的粘结剂和骨架支持剂才能形成高孔隙率的载体，且载药量有限，每毫升最大载药量不超过100毫克。对于鹿茸干品动辄1至2克，甚至更大的药量而言，没有用武之地。
发明内容
本专利申请的发明人针对现有技术中存在的问题，锐意进取，经过深入地研究出人意料地发现可以以鲜品鹿茸内的如胶原蛋白、透明质酸等成分成为载体材料，进一步通过冷冻干燥法保存活性因子类成分和其他热敏感成分的活性，同时获得赋形，成为一种含有各种热敏性成分在内的鹿茸全成分均一制剂。产生的制剂可以在口腔内崩解，通过粘膜吸收，发挥各种热敏性成分，尤其是生物因子类活性成分的作用，从而完成了本发明。
本发明目的在于提供一种鹿茸全成分均一冻干赋形制剂；本发明另一目的在于提供该鹿茸全成分均一冻干赋形制剂的制备方法。
本发明的目的还在于提供一种将人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等贵细料药材和全成分均一鹿茸配伍的冻干赋形制剂及其所述制剂的制备方法。
本发明所述一种鹿茸全成分均一冻干制剂，由完整鹿茸经冷冻干燥制得，其特征在于其具有固定的形态而非粉体，其中含有鹿茸全成分，并且所述制剂的活力指数可以为10-1000IU/克，10-1500IU/克，10-1800IU/克，10-2000IU/克，10-2500IU/克，10-3,000IU/克，10-3,500IU/克，20-1000IU/克，20-1500IU/克，20-1800IU/克，20-2000IU/克，20-2500IU/克，20-3000IU/克，20-3,500IU/克，30-1000IU/克，30-1500IU/克，30-1800IU/克，30-2000IU/克，30-2500IU/克，30-3000IU/克，30-3500IU/克(以2005年版药典附录XH重组人表皮生长因子生物学活性测定法细胞增殖/MTT比色法测定)，优选10-3,000IU/克，特别优选20-2500IU/克。
所述鹿茸全成分为梅花鹿或马鹿或其它合适的鹿的完整鹿茸经低温冷冻、冷冻粉碎、低温匀浆后得到的物质。所述鹿茸全成分在鹿茸全成分均一冻干制剂中的含量范围可以为1-100％，1-99％，2-99％，5-99％，10-99％，20-99％，30-99％，1-95％，2-95％，5-95％，10-95％，20-95％，30-95％，1-90％，2-90％，5-90％，10-90％，20-90％，30-90％，1-80％，2-80％，5-80％，10-80％，20-80％，30-80％，优选5-100％，更加优选10-100％，特别优选20-100％，最优选30-100％。
本发明的鹿茸全成分均一冻干赋形制剂中除含有均一的鹿茸全成分外，还可以含有其它中药材或中药材提取物以及其他辅料，例如各种糖类、氨基酸、长链天然或合成高分子聚合物以及香精或矫味剂。
所述其它中药材或中药材提取物可以为鲜药材，如鲜人参、鲜西洋参、鲜三七、鲜蛤士蟆等，或药材饮片，如生晒参、生晒西洋参、红参、高丽参、糖参、三七、蛤士蟆，或药材的提取物，如人参提取物、三七提取物、蛤士蟆提取物、人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷、蛤士蟆油等，还可以是鹿茸的活性浓缩物，即鲜鹿茸匀浆离心后得到的上清液的浓缩物。所述其它中药材优选人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等。其可以以单一或者配伍形式加入到鹿茸全成分均一冻干制剂中，含量范围为0-98％，优选1-90或5-90％，更加优选10-80％，特别优选20-70％，最优选30-60％。
所述糖类为甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、异麦芽糖醇、乳糖、木糖、棉籽糖、麦芽糖、葡萄糖、半乳糖、海藻糖、糊精或羟丙基环糊精；所述糖类优选甘露醇、赤藓糖醇、麦芽糖、海藻糖，最优选甘露醇，所述糖类在鹿茸全成分均一冻干赋形制剂的含量范围为0-50％，优选0.2-40％，更加优选0.3-30％，特别优选0.5-30％，最优选1-30％ 所述氨基酸为具有2个至12个碳原子的氨基酸的一种或一种以上的混合物；所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸。优选为甘氨酸。所述氨基酸在鹿茸全成分均一冻干赋形制剂中的含量范围为0-50％，优选2-40％，更加优选3-30％，特别优选4-30％，最优选5-30％。
所述长链天然或合成高分子聚合物包括但不限于普鲁兰、明胶、黄原胶、魔芋胶、右旋糖酐、海藻胶、阿拉伯胶、瓜儿豆胶、琼脂、羟甲基纤维素、角叉菜胶、果胶等天然来源胶类和合成高分子化合物或聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、葡聚糖以及其他多肽或多糖中的任一种或数种的混合物；所述长链天然或合成高分子聚合物优选普鲁兰、明胶及其水解物。所述长链天然或合成高分子聚合物在鹿茸全成分均一冻干赋形制剂中的含量范围为0-50％，优选2-40％，更加优选3-30％，特别优选4-30％，最优选5-30％。
其中所述香精或矫味剂包括但不限于薄荷味、茉莉味、桂圆味、菊花味、草莓味、香蕉味、巧克力味、花生味、山楂味、芒果味、枣味、杏味、桂花味、菠萝味、西番莲味、石榴味、番石榴味、无花果味、芝麻味、蛋黄味、番茄味、玉米味、奶油味、黑加仑味、蓝莓味、甘草味、橙味、葡萄味、柠檬味、猕猴桃味、焦糖味、香草味、樱桃味、哈密瓜味、木瓜味、苹果味、番木瓜味、荔枝味、梨味、桃味、咖啡味、茶味、牛奶味等的香精或以上一种或几种香味的混合物；其含量可以是0.01-5％。
本发明的鹿茸全成分均一冻干制剂的制备方法包括以下步骤(本领域技术人员在不背离本发明实质的前提下，可以适当再加入其它步骤) 1.新鲜鹿茸低温(0℃以下)冷冻； 2.冷冻的鹿茸，40℃以下粉碎成冷冻的颗粒(粒径20目左右)； 3.纯化水中加入适量含有人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等药材或其提取物，加或不加各种糖类、氨基酸、长链天然或合成高分子聚合物，加或不加香精或矫味剂，混合溶解分散后降至低温40℃以下； 4.第2步得到的冷冻颗粒40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液，或将第2步得到的冷冻颗粒分散入纯化水或者第3步得到的溶液、悬浊液或乳浊液中，40℃以下以均质乳化机均质或匀浆形成混悬配制液； 5.第4步得到的混悬配制液，分装至合适体积的模具，经预冻和冷冻干燥两个工艺步骤后得到鹿茸全成分均一冻干赋形制剂。
本发明在现有技术没有任何教导的情况下，创造性地提出以鲜品鹿茸内的如胶原蛋白、透明质酸等成分成为载体材料，进一步通过冷冻干燥法赋形，获得了一种具有固定的形态而非粉体的鹿茸全成分均一制剂，从而完成了本发明。本发明所形成的全新的鹿茸全成分均一制剂，有效保存了鹿茸中的热敏、高活性物质；其制剂形态使粘膜吸收得以实现，保证全成分的有效吸收并发挥作用；其均一性提供了可供调剂和处方使用物质基础，同时为解决中药，尤其是饮片，质量均一和可控的难题提供了一种新的解决方式；其中可加入参(人参、高丽参、西洋参)、七(三七)、哈士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等贵细料药材和提取物，使得中药的配伍使用提高到更高的水平。并改变了用药时的口感和依从性。
此外，本发明鹿茸全成分均一冻干制剂的活力指数为10-3,500IU/克，活力较高。之所以采用活力指数来表征本发明的鹿茸全成分均一冻干赋形制剂是由于以往的鹿茸加工炮制，如果是对整支的鲜鹿茸采用冷冻干燥的方法进行加工处理，往往发现有更好的药理效果，但是对这种生物效果的物质表征只是以“在某个分子量范围处，发现有大量蛋白，或者是水溶性的总蛋白量增加量为多少。”在物质基础和药效活性之间，没有建立起必然的联系，对质量均一和质量控制而言，也没有评价和控制的指标。本发明采用活性单位作为对活性鹿茸的质量评价指标，有机地将冷冻干燥工艺的优势和物质与药效的基础统一起来，为优化和稳定工艺、持续稳定产品质量提供了条件和保障。
此外，文献报道，冻干鹿茸水提物促大鼠成骨样细胞增殖活性(MTT法)高达245.25％，是传统热炸鹿茸的2.2倍；IGF-I分泌量也高达66.3ng/ml，是热炸茸的1.2倍；抑制肝癌细胞活性为47.64％，是热炸茸的1.4倍。所以很多方法都是将鲜鹿茸低温匀浆后取上清液冻干替代鹿茸入药。
但是这种创新没有考虑到低温匀浆取上清液后被抛弃的鹿茸中还有大量的有效成分，如次黄嘌呤、脑素、唾液酸、磷脂等是在非上清液部分也有分布的，丢弃非上清液部分则有大量其他有效成分损失，而且不能反映全成分鹿茸的特点，与传统中医药理论指导下的中药用药有着比较显著的差距。
所以本发明，不但保存了高活性的敏感性成分，也保留了鹿茸的全成分，是以中医药理论为体，以现代科学手段为用的中药现代化的有益尝试。该发明还能够保证所获得鹿茸产品的质量持续均一可控，能够产业化，并满足现代法律法规对药物药材和保健品的要求，对中药走向世界提供了一种强有力的支持方式。
同时，所获得的制剂服用方便，口腔崩溶，独特工艺中激发的原料粘性可以促进鹿茸的粘膜黏附性，与其他如片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂等口服形态相比，可增加通过胃前粘膜产生的吸收，使工艺保护的生物活性因子和其他热敏性物质不会受到胃肠道酸碱、多种酶类的破坏而失活，更好的发挥鲜鹿茸的功效。因此本发明相对于现有技术具有较好的有益效果。具体实验数据参见实施例。
具体实施例方式 以下通过实施例进一步详细地说明本发明，但这些实施例只是本发明的举例，本发明并不仅限于此。
根据表1所示的成分及其数量制备鹿茸全成分均一制剂，其具体方法如下 1.新鲜鹿茸低温(0摄氏度以下)冷冻； 2.冷冻的鹿茸，40摄氏度以下粉碎成冷冻的颗粒(粒径20目左右)； 3.纯化水中加入适量含有人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等药材或其提取物，加或不加各种糖类、氨基酸、长链天然或人工高分子聚合物，加或不加香精或矫味剂，混合溶解分散后降至40℃以下； 4.第2步得到的冷冻颗粒40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液，或将第2步得到的冷冻颗粒分散入纯化水或者第3步得到的溶液、悬浊液或乳浊液中，40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液； 5.第4步得到的混悬配制液，分装至合适体积的模具，经预冻和冷冻干燥两个工艺步骤后得到鹿茸全成分均一冻干赋形制剂。
表1 注甘氨酸北京精求化工有限责任公司， 甘露醇北京精求化工有限责任公司 薄荷醇苏州禾田香料有限公司 安赛蜜张家港浩波化学品有限公司 实验例 实施例1-8制备的鹿茸全成分均一制剂的活性测定 测定方法采用2005年版中国药典附录XH重组人表皮生长因子生物学活性 测定法细胞增殖/MTT比色法 1实验材料 1.1RPMI1640培养液 每1000ml加2.2g碳酸氢钠，4℃保存待用。
1.2完全培养液 1640培养液添加10％(ml/ml)小牛血清，4℃保存待用。
1.3维持培养液 1640培养液添加4％(ml/ml)小牛血清，4℃保存待用。
1.4PBS 取8g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠、0.24g磷酸二氢钾加蒸馏水配制成1000ml的溶液121℃、15min灭菌。
1.5噻唑兰MTT溶液 用PBS配制成5.0mg/ml的溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，置于玻璃或塑料瓶中，4℃避光保存。
1.6裂解液 二甲亚砜(DMSO，分析纯) 1.7BALB/c3T3细胞株 传代后48小时用于效价测试。
1.8rh EGF活性测定用标准品 2试验步骤 以下2.1～2.9步骤均需在无菌条件下进行。
2.1试验准备 将试验所用溶液预温至37±1℃。
2.2制备细胞原液 取足量的BALB/c3T3细胞培养液，离心收集BALB/c3T3细胞，用完全培养液洗涤三次，然后重悬于完全培养液配制成5.0×104个细胞/ml的细胞原液，置于37±1℃备用。
2.3标准品溶液 取一支标准品用无菌水配制成1000IU/ml，用完全培养液稀释至50IU/ml。
2.4样品溶液 将实施例1-7制备的产品用无菌水溶解后，待测。
2.5稀释度的测定 在96孔细胞培养板中，对标准品、样品溶液以4倍系列稀释，参考品和样品同做8个稀释度，每个梯度做2个复孔。
2.6加入细胞原液并培养 取细胞原液接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl。置于37±1℃，5％CO2条件下培养24小时后，换成维持培养液，继续置于37±1℃，5％CO2条件下培养24小时。
2.7加入样品及标准品溶液培养 制备的细胞培养板弃去维持液，加入标准品及样品溶液，每孔100μl。置于37±1℃，5％CO2条件下培养66～72小时。
2.8加入MTT溶液并培养 每孔加入20μl MTT溶液，置37℃，5％CO2培养4h-6h。
2.9加入裂解液 弃去培养板中的液体，每孔加入100μl裂解液，混匀溶解。
2.10测定吸光度值 在酶标仪上比色，测定波长570nm，参比波长630nm，记录测定结果。
2.11结果计算 用四参数回归计算法进行处理，分别计算各待检品的半效稀释倍数(即从待检样本溶液至相当于参考品50％最大效应点的稀释倍数)并按下式计算结果。
.................................................................(式1) 式中T1………………………样品效价，IU T0………………………标准品效价，IU D1………………………样品预稀释倍数 D0………………………标准品预稀释倍数 H1………………………样品半效稀释倍数 H0………………………标准品半效稀释倍数 活性测定结果 应该注意的是，本领域技术人员对于本发明的各种细节可以进行各种的修改，但毫无疑问，这些修改都将落入本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种鹿茸全成分均一冻干制剂，由完整鹿茸经冷冻干燥制得，其特征在于其具有固定的形态而非粉体，其中含有鹿茸全成分，所述鹿茸全成分在鹿茸全成分均一冻干制剂中的含量范围为1-100％，并且所述制剂的活力指数为10-3500IU/克，所述活力指数以2005年版中国药典附录XH重组人表皮生长因子生物学活性测定法测定。
2.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于还含有其它中药材或中药材提取物。
3.如权利要求2所述的冻干制剂，其特征在于所述其它中药材为人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝中的一种或一种以上，所述中药材提取物为人参提取物、三七提取物、蛤士蟆提取物、鹿茸的活性浓缩物中的一种或一种以上。
4.如权利要求1-3任一项所述的冻干制剂，其特征在于还含有各种糖类、氨基酸、长链天然或合成高分子聚合物、香精和/或矫味剂。
5.如权利要求4所述的冻干片，其特征在于所述糖类为甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、异麦芽糖醇、乳糖、木糖、棉籽糖、麦芽糖、葡萄糖、半乳糖、海藻糖、糊精或羟丙基环糊精中的一种或一种以上。
6.如权利要求4或5所述的冻干片，其特征在于所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸中的一种或一种以上。
7.如权利要求4-6任一项所述的冻干片，其特征在于所述长链天然或合成高分子聚合物为选自普鲁兰、明胶、黄原胶、魔芋胶、右旋糖酐、海藻胶、阿拉伯胶、瓜儿豆胶、琼脂、羟甲基纤维素、角叉菜胶、果胶中的一种或一种以上的天然来源胶类和选自聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、葡聚糖中的一种或一种以上的合成高分子聚合物。
8.如权利要求1-7任意一项所述的冻干片的制备方法，包括以下步骤
(1)新鲜鹿茸0摄氏度以下冷冻；
(2)冷冻的鹿茸，40摄氏度以下粉碎成冷冻的颗粒，所述颗粒的粒径20目左右；
(3)纯化水中加入适量含有人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等药材或其提取物，加或不加各种糖类、氨基酸、长链天然或人工高分子聚合物，加或不加香精或矫味剂，混合溶解分散后降温至40℃以下；
(4)第2步得到的冷冻颗粒40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液，或将第2步得到的冷冻颗粒分散入纯化水或者第3步得到的溶液、悬浊液或乳浊液中，40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液；
(5)第4步得到的混悬配制液，分装至合适体积的模具，经预冻和冷冻干燥两个工艺步骤后得到鹿茸全成分均一冻干赋形制剂。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种含有鹿茸全成分的均一制剂，与分级成为血片、蜡片、砂片、骨片等多种规格的传统鹿茸饮片相比，本发明含有以均一状态存在的鹿茸全成分，为医生使用或患者自用鹿茸治疗疾病提供了质量均一的药材或药物，为确保疗效、防止药效波动提供了物质基础。与现代新型的鹿茸冻干后粉碎成为干粉的加工工艺相比，全程无高温工艺，有效保护了生物因子类成分的活性，同时提供了一种可以通过口腔粘膜迅速吸收小分子活性物质和肽类成分的剂型形态。还通过矫味、掩味技术手段，使得该饮片和制剂口感良好，提高了使用依从性。
文档编号A61K35/413GK101757031SQ20101012773
公开日2010年6月30日 申请日期2010年3月19日 优先权日2010年3月19日
发明者董玲 申请人:董玲
技术领域：
本发明涉及一种含有中药活性成分的冻干赋形制剂及其生产方法，特别是涉及一种鹿茸全成分均一冻干制剂及其生产方法。
背景技术：
鹿茸药用最早见于古代《神农本草经》，李时珍在《本草纲目》中更为详尽地介绍了鹿茸的炮制方法和药用功效。
鹿茸是雄性鹿尚未骨化的幼嫩茸角。鹿茸加工应从取茸开始。取茸方法基本有两种，一是用锯贴头皮锯下，称锯茸；二是连头盖骨带茸砍下，称砍茸。取下的鹿茸先要用水洗净，抽出茸内积血。砍茸还要进行修骨整形，使形状美观。药典规定的鹿茸为梅花鹿茸药材分为二杠、三岔。马鹿茸药材分为三岔和莲花。
市售鹿茸切片一般分为四级，一等花茸片为鹿茸顶端的一段切成，称为血片；第二等由于切面平滑，无海绵样孔隙，颜色如蜡样光洁，习称蜡片；第三等因为表面不均一，无蜡样光泽，习称砂片，第四等因为表面有海绵样孔隙，习称骨片。
鹿茸“禀纯阳之质，含生发之气”，被中医列为峻补“元阳”的首选药。从现代医学观点看，“元阳”包括了生殖、生长代谢等人体基本生理功能。鹿茸具有生精补髓、益血助阳、强筋健骨的功能，主治一切虚损、头晕、耳聋、目暗、阳痿、滑精、腰膝无力、虚寒带下、崩漏等病症。临床常用量为1.5～3g，一般最多不超过6g。现代药理学研究发现，鹿茸具有强心、提高机体免疫功能、促进创伤愈合，以及性激素样作用。鹿茸除在中医处方中使用外，还常见于滋补类保健品，例如鹿茸精、鹿茸酒、鹿茸胶等等。
鹿茸加工的主要目的是脱水、干燥、防腐、消毒、保形、保色，提高质量，利于保存。长期以来，我国鹿茸加工一直采用沸水煮炸和高温烘烤技术。但是这种加工方法存在很大的缺陷。这是由于鹿茸的药理学活性的基础主要为其中含有的大量蛋白质类生物活性因子，而即使加入白酒也会使蛋白质变性，因此传统的鹿茸加工方法造成茸内有效成分活性物质遭到不同程度的流失和破坏。
综上所述，传统鹿茸炮制方法和饮片在实际应用中，存在如下2个问题 (1)鹿茸中含有的神经生长因子、表皮生长因子、类胰岛素样生长因子等生长因子类物质都是蛋白激素或多肽激素类成分，高温热炸工艺使这些活性成分损失殆尽； (2)传统的鹿茸分级是在外观性状上的分级，是定性的，而非定量的，这给医生和患者用药带来了极大的困惑，各分级鹿茸饮片之间没有换算关系，等量换算会在不同饮片之间切换时，造成药效的巨大差异。
为了解决如上问题，冻干鹿茸应运而生，冻干鹿茸的炮制方法是采用现代食品和生物制品冷冻保鲜与干燥技术理论，结合鹿茸的组织结构和生物学特性，设法使茸体内的游离水和结构水易于析出，使鲜茸经速冻后，在低温真空条件下直接升华脱水干燥成优质商品茸的新工艺。避免了现行的“水煮、烘烤”加工法对鹿茸内热敏活性成分如酶、蛋白激素和多肽激素等的破坏；可保持鲜鹿茸的形状、色泽、味道基本不变；并最大限度地保持鹿茸的营养成分和生理活性成分不流失、不破坏，提高了鹿茸的产品质量和外观性能。
以这种加工方式获得的鹿茸虽然解决了传统炮制饮片的第1个问题，即活性因子类成分和其他热敏感成分活性保存的难题，但是同样因存在鹿茸的组织结构和外形特征，第2个问题同样存在。从鹿茸顶部到底部，不同部位饮片的差异，在实际使用中对剂量难以较为准确的把握，造成疗效的差异和使用中的困惑，也不符合现代药物对质量稳定可控的基本要求。
为了解决如上问题，尝试将冻干鹿茸通过粉碎、混合等工艺，试图获得粉末，或者将其填入胶囊，成为一种全成分均一饮片或制剂。但是各级粉碎等工艺过程中的机械力和产热会极大的破坏活性因子类成分和其他热敏感成分的活性，同时因鹿茸的解剖结构分为骨部和皮部，骨部在干燥后较易粉碎，而皮部在干燥后，犹如鞣制后的皮革，非常难以粉碎，往往造成该类物质受热过度，而鹿茸茸皮中含有大量的有效成分，在粉碎过程中损失尤其巨大，即使采用低温粉碎，也很难将干燥茸皮粉碎到合适粒度。
即使在未来，有可能将保鲜鹿茸处理得到保鲜茸粉，其制剂形态所形成的服用方式也会导致活性因子类成分和其他热敏感成分难以发挥作用，口服粉剂和粉剂填充的胶囊使活性因子类成分和其他热敏感成分在胃肠道酸碱和各种消化酶的作用下，基本降解，很难吸收发挥作用。同时，口服粉剂的口感也很难令人接受。
冻干赋形制剂是采用冷冻干燥法，在工艺过程中加以适当的辅料赋形而获得的制剂。早期用于制备化学药物，Gregory等采用冷冻干燥技术制造了高孔隙率的药物载体，该载体在口腔遇到唾液后崩解，不需水送服，给一些吞咽功能不好和取水不便的病人服药提供了方便，以其独特的优越性越来越受到患者的喜爱。
但是传统冻干赋形制剂对辅料有严格的要求，必须具备一定量的粘结剂和骨架支持剂才能形成高孔隙率的载体，且载药量有限，每毫升最大载药量不超过100毫克。对于鹿茸干品动辄1至2克，甚至更大的药量而言，没有用武之地。
发明内容
本专利申请的发明人针对现有技术中存在的问题，锐意进取，经过深入地研究出人意料地发现可以以鲜品鹿茸内的如胶原蛋白、透明质酸等成分成为载体材料，进一步通过冷冻干燥法保存活性因子类成分和其他热敏感成分的活性，同时获得赋形，成为一种含有各种热敏性成分在内的鹿茸全成分均一制剂。产生的制剂可以在口腔内崩解，通过粘膜吸收，发挥各种热敏性成分，尤其是生物因子类活性成分的作用，从而完成了本发明。
本发明目的在于提供一种鹿茸全成分均一冻干赋形制剂；本发明另一目的在于提供该鹿茸全成分均一冻干赋形制剂的制备方法。
本发明的目的还在于提供一种将人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等贵细料药材和全成分均一鹿茸配伍的冻干赋形制剂及其所述制剂的制备方法。
本发明所述一种鹿茸全成分均一冻干制剂，由完整鹿茸经冷冻干燥制得，其特征在于其具有固定的形态而非粉体，其中含有鹿茸全成分，并且所述制剂的活力指数可以为10-1000IU/克，10-1500IU/克，10-1800IU/克，10-2000IU/克，10-2500IU/克，10-3,000IU/克，10-3,500IU/克，20-1000IU/克，20-1500IU/克，20-1800IU/克，20-2000IU/克，20-2500IU/克，20-3000IU/克，20-3,500IU/克，30-1000IU/克，30-1500IU/克，30-1800IU/克，30-2000IU/克，30-2500IU/克，30-3000IU/克，30-3500IU/克(以2005年版药典附录XH重组人表皮生长因子生物学活性测定法细胞增殖/MTT比色法测定)，优选10-3,000IU/克，特别优选20-2500IU/克。
所述鹿茸全成分为梅花鹿或马鹿或其它合适的鹿的完整鹿茸经低温冷冻、冷冻粉碎、低温匀浆后得到的物质。所述鹿茸全成分在鹿茸全成分均一冻干制剂中的含量范围可以为1-100％，1-99％，2-99％，5-99％，10-99％，20-99％，30-99％，1-95％，2-95％，5-95％，10-95％，20-95％，30-95％，1-90％，2-90％，5-90％，10-90％，20-90％，30-90％，1-80％，2-80％，5-80％，10-80％，20-80％，30-80％，优选5-100％，更加优选10-100％，特别优选20-100％，最优选30-100％。
本发明的鹿茸全成分均一冻干赋形制剂中除含有均一的鹿茸全成分外，还可以含有其它中药材或中药材提取物以及其他辅料，例如各种糖类、氨基酸、长链天然或合成高分子聚合物以及香精或矫味剂。
所述其它中药材或中药材提取物可以为鲜药材，如鲜人参、鲜西洋参、鲜三七、鲜蛤士蟆等，或药材饮片，如生晒参、生晒西洋参、红参、高丽参、糖参、三七、蛤士蟆，或药材的提取物，如人参提取物、三七提取物、蛤士蟆提取物、人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷、蛤士蟆油等，还可以是鹿茸的活性浓缩物，即鲜鹿茸匀浆离心后得到的上清液的浓缩物。所述其它中药材优选人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等。其可以以单一或者配伍形式加入到鹿茸全成分均一冻干制剂中，含量范围为0-98％，优选1-90或5-90％，更加优选10-80％，特别优选20-70％，最优选30-60％。
所述糖类为甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、异麦芽糖醇、乳糖、木糖、棉籽糖、麦芽糖、葡萄糖、半乳糖、海藻糖、糊精或羟丙基环糊精；所述糖类优选甘露醇、赤藓糖醇、麦芽糖、海藻糖，最优选甘露醇，所述糖类在鹿茸全成分均一冻干赋形制剂的含量范围为0-50％，优选0.2-40％，更加优选0.3-30％，特别优选0.5-30％，最优选1-30％ 所述氨基酸为具有2个至12个碳原子的氨基酸的一种或一种以上的混合物；所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸。优选为甘氨酸。所述氨基酸在鹿茸全成分均一冻干赋形制剂中的含量范围为0-50％，优选2-40％，更加优选3-30％，特别优选4-30％，最优选5-30％。
所述长链天然或合成高分子聚合物包括但不限于普鲁兰、明胶、黄原胶、魔芋胶、右旋糖酐、海藻胶、阿拉伯胶、瓜儿豆胶、琼脂、羟甲基纤维素、角叉菜胶、果胶等天然来源胶类和合成高分子化合物或聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、葡聚糖以及其他多肽或多糖中的任一种或数种的混合物；所述长链天然或合成高分子聚合物优选普鲁兰、明胶及其水解物。所述长链天然或合成高分子聚合物在鹿茸全成分均一冻干赋形制剂中的含量范围为0-50％，优选2-40％，更加优选3-30％，特别优选4-30％，最优选5-30％。
其中所述香精或矫味剂包括但不限于薄荷味、茉莉味、桂圆味、菊花味、草莓味、香蕉味、巧克力味、花生味、山楂味、芒果味、枣味、杏味、桂花味、菠萝味、西番莲味、石榴味、番石榴味、无花果味、芝麻味、蛋黄味、番茄味、玉米味、奶油味、黑加仑味、蓝莓味、甘草味、橙味、葡萄味、柠檬味、猕猴桃味、焦糖味、香草味、樱桃味、哈密瓜味、木瓜味、苹果味、番木瓜味、荔枝味、梨味、桃味、咖啡味、茶味、牛奶味等的香精或以上一种或几种香味的混合物；其含量可以是0.01-5％。
本发明的鹿茸全成分均一冻干制剂的制备方法包括以下步骤(本领域技术人员在不背离本发明实质的前提下，可以适当再加入其它步骤) 1.新鲜鹿茸低温(0℃以下)冷冻； 2.冷冻的鹿茸，40℃以下粉碎成冷冻的颗粒(粒径20目左右)； 3.纯化水中加入适量含有人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等药材或其提取物，加或不加各种糖类、氨基酸、长链天然或合成高分子聚合物，加或不加香精或矫味剂，混合溶解分散后降至低温40℃以下； 4.第2步得到的冷冻颗粒40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液，或将第2步得到的冷冻颗粒分散入纯化水或者第3步得到的溶液、悬浊液或乳浊液中，40℃以下以均质乳化机均质或匀浆形成混悬配制液； 5.第4步得到的混悬配制液，分装至合适体积的模具，经预冻和冷冻干燥两个工艺步骤后得到鹿茸全成分均一冻干赋形制剂。
本发明在现有技术没有任何教导的情况下，创造性地提出以鲜品鹿茸内的如胶原蛋白、透明质酸等成分成为载体材料，进一步通过冷冻干燥法赋形，获得了一种具有固定的形态而非粉体的鹿茸全成分均一制剂，从而完成了本发明。本发明所形成的全新的鹿茸全成分均一制剂，有效保存了鹿茸中的热敏、高活性物质；其制剂形态使粘膜吸收得以实现，保证全成分的有效吸收并发挥作用；其均一性提供了可供调剂和处方使用物质基础，同时为解决中药，尤其是饮片，质量均一和可控的难题提供了一种新的解决方式；其中可加入参(人参、高丽参、西洋参)、七(三七)、哈士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等贵细料药材和提取物，使得中药的配伍使用提高到更高的水平。并改变了用药时的口感和依从性。
此外，本发明鹿茸全成分均一冻干制剂的活力指数为10-3,500IU/克，活力较高。之所以采用活力指数来表征本发明的鹿茸全成分均一冻干赋形制剂是由于以往的鹿茸加工炮制，如果是对整支的鲜鹿茸采用冷冻干燥的方法进行加工处理，往往发现有更好的药理效果，但是对这种生物效果的物质表征只是以“在某个分子量范围处，发现有大量蛋白，或者是水溶性的总蛋白量增加量为多少。”在物质基础和药效活性之间，没有建立起必然的联系，对质量均一和质量控制而言，也没有评价和控制的指标。本发明采用活性单位作为对活性鹿茸的质量评价指标，有机地将冷冻干燥工艺的优势和物质与药效的基础统一起来，为优化和稳定工艺、持续稳定产品质量提供了条件和保障。
此外，文献报道，冻干鹿茸水提物促大鼠成骨样细胞增殖活性(MTT法)高达245.25％，是传统热炸鹿茸的2.2倍；IGF-I分泌量也高达66.3ng/ml，是热炸茸的1.2倍；抑制肝癌细胞活性为47.64％，是热炸茸的1.4倍。所以很多方法都是将鲜鹿茸低温匀浆后取上清液冻干替代鹿茸入药。
但是这种创新没有考虑到低温匀浆取上清液后被抛弃的鹿茸中还有大量的有效成分，如次黄嘌呤、脑素、唾液酸、磷脂等是在非上清液部分也有分布的，丢弃非上清液部分则有大量其他有效成分损失，而且不能反映全成分鹿茸的特点，与传统中医药理论指导下的中药用药有着比较显著的差距。
所以本发明，不但保存了高活性的敏感性成分，也保留了鹿茸的全成分，是以中医药理论为体，以现代科学手段为用的中药现代化的有益尝试。该发明还能够保证所获得鹿茸产品的质量持续均一可控，能够产业化，并满足现代法律法规对药物药材和保健品的要求，对中药走向世界提供了一种强有力的支持方式。
同时，所获得的制剂服用方便，口腔崩溶，独特工艺中激发的原料粘性可以促进鹿茸的粘膜黏附性，与其他如片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂等口服形态相比，可增加通过胃前粘膜产生的吸收，使工艺保护的生物活性因子和其他热敏性物质不会受到胃肠道酸碱、多种酶类的破坏而失活，更好的发挥鲜鹿茸的功效。因此本发明相对于现有技术具有较好的有益效果。具体实验数据参见实施例。
具体实施例方式 以下通过实施例进一步详细地说明本发明，但这些实施例只是本发明的举例，本发明并不仅限于此。
根据表1所示的成分及其数量制备鹿茸全成分均一制剂，其具体方法如下 1.新鲜鹿茸低温(0摄氏度以下)冷冻； 2.冷冻的鹿茸，40摄氏度以下粉碎成冷冻的颗粒(粒径20目左右)； 3.纯化水中加入适量含有人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等药材或其提取物，加或不加各种糖类、氨基酸、长链天然或人工高分子聚合物，加或不加香精或矫味剂，混合溶解分散后降至40℃以下； 4.第2步得到的冷冻颗粒40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液，或将第2步得到的冷冻颗粒分散入纯化水或者第3步得到的溶液、悬浊液或乳浊液中，40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液； 5.第4步得到的混悬配制液，分装至合适体积的模具，经预冻和冷冻干燥两个工艺步骤后得到鹿茸全成分均一冻干赋形制剂。
表1 注甘氨酸北京精求化工有限责任公司， 甘露醇北京精求化工有限责任公司 薄荷醇苏州禾田香料有限公司 安赛蜜张家港浩波化学品有限公司 实验例 实施例1-8制备的鹿茸全成分均一制剂的活性测定 测定方法采用2005年版中国药典附录XH重组人表皮生长因子生物学活性 测定法细胞增殖/MTT比色法 1实验材料 1.1RPMI1640培养液 每1000ml加2.2g碳酸氢钠，4℃保存待用。
1.2完全培养液 1640培养液添加10％(ml/ml)小牛血清，4℃保存待用。
1.3维持培养液 1640培养液添加4％(ml/ml)小牛血清，4℃保存待用。
1.4PBS 取8g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠、0.24g磷酸二氢钾加蒸馏水配制成1000ml的溶液121℃、15min灭菌。
1.5噻唑兰MTT溶液 用PBS配制成5.0mg/ml的溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，置于玻璃或塑料瓶中，4℃避光保存。
1.6裂解液 二甲亚砜(DMSO，分析纯) 1.7BALB/c3T3细胞株 传代后48小时用于效价测试。
1.8rh EGF活性测定用标准品 2试验步骤 以下2.1～2.9步骤均需在无菌条件下进行。
2.1试验准备 将试验所用溶液预温至37±1℃。
2.2制备细胞原液 取足量的BALB/c3T3细胞培养液，离心收集BALB/c3T3细胞，用完全培养液洗涤三次，然后重悬于完全培养液配制成5.0×104个细胞/ml的细胞原液，置于37±1℃备用。
2.3标准品溶液 取一支标准品用无菌水配制成1000IU/ml，用完全培养液稀释至50IU/ml。
2.4样品溶液 将实施例1-7制备的产品用无菌水溶解后，待测。
2.5稀释度的测定 在96孔细胞培养板中，对标准品、样品溶液以4倍系列稀释，参考品和样品同做8个稀释度，每个梯度做2个复孔。
2.6加入细胞原液并培养 取细胞原液接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl。置于37±1℃，5％CO2条件下培养24小时后，换成维持培养液，继续置于37±1℃，5％CO2条件下培养24小时。
2.7加入样品及标准品溶液培养 制备的细胞培养板弃去维持液，加入标准品及样品溶液，每孔100μl。置于37±1℃，5％CO2条件下培养66～72小时。
2.8加入MTT溶液并培养 每孔加入20μl MTT溶液，置37℃，5％CO2培养4h-6h。
2.9加入裂解液 弃去培养板中的液体，每孔加入100μl裂解液，混匀溶解。
2.10测定吸光度值 在酶标仪上比色，测定波长570nm，参比波长630nm，记录测定结果。
2.11结果计算 用四参数回归计算法进行处理，分别计算各待检品的半效稀释倍数(即从待检样本溶液至相当于参考品50％最大效应点的稀释倍数)并按下式计算结果。
.................................................................(式1) 式中T1………………………样品效价，IU T0………………………标准品效价，IU D1………………………样品预稀释倍数 D0………………………标准品预稀释倍数 H1………………………样品半效稀释倍数 H0………………………标准品半效稀释倍数 活性测定结果 应该注意的是，本领域技术人员对于本发明的各种细节可以进行各种的修改，但毫无疑问，这些修改都将落入本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种鹿茸全成分均一冻干制剂，由完整鹿茸经冷冻干燥制得，其特征在于其具有固定的形态而非粉体，其中含有鹿茸全成分，所述鹿茸全成分在鹿茸全成分均一冻干制剂中的含量范围为1-100％，并且所述制剂的活力指数为10-3500IU/克，所述活力指数以2005年版中国药典附录XH重组人表皮生长因子生物学活性测定法测定。
2.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于还含有其它中药材或中药材提取物。
3.如权利要求2所述的冻干制剂，其特征在于所述其它中药材为人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝中的一种或一种以上，所述中药材提取物为人参提取物、三七提取物、蛤士蟆提取物、鹿茸的活性浓缩物中的一种或一种以上。
4.如权利要求1-3任一项所述的冻干制剂，其特征在于还含有各种糖类、氨基酸、长链天然或合成高分子聚合物、香精和/或矫味剂。
5.如权利要求4所述的冻干片，其特征在于所述糖类为甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、异麦芽糖醇、乳糖、木糖、棉籽糖、麦芽糖、葡萄糖、半乳糖、海藻糖、糊精或羟丙基环糊精中的一种或一种以上。
6.如权利要求4或5所述的冻干片，其特征在于所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸中的一种或一种以上。
7.如权利要求4-6任一项所述的冻干片，其特征在于所述长链天然或合成高分子聚合物为选自普鲁兰、明胶、黄原胶、魔芋胶、右旋糖酐、海藻胶、阿拉伯胶、瓜儿豆胶、琼脂、羟甲基纤维素、角叉菜胶、果胶中的一种或一种以上的天然来源胶类和选自聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、葡聚糖中的一种或一种以上的合成高分子聚合物。
8.如权利要求1-7任意一项所述的冻干片的制备方法，包括以下步骤
(1)新鲜鹿茸0摄氏度以下冷冻；
(2)冷冻的鹿茸，40摄氏度以下粉碎成冷冻的颗粒，所述颗粒的粒径20目左右；
(3)纯化水中加入适量含有人参、三七、蛤士蟆、燕窝、虫草、天麻、熊胆、灵芝等药材或其提取物，加或不加各种糖类、氨基酸、长链天然或人工高分子聚合物，加或不加香精或矫味剂，混合溶解分散后降温至40℃以下；
(4)第2步得到的冷冻颗粒40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液，或将第2步得到的冷冻颗粒分散入纯化水或者第3步得到的溶液、悬浊液或乳浊液中，40℃以下均质或匀浆形成混悬配制液；
(5)第4步得到的混悬配制液，分装至合适体积的模具，经预冻和冷冻干燥两个工艺步骤后得到鹿茸全成分均一冻干赋形制剂。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种含有鹿茸全成分的均一制剂，与分级成为血片、蜡片、砂片、骨片等多种规格的传统鹿茸饮片相比，本发明含有以均一状态存在的鹿茸全成分，为医生使用或患者自用鹿茸治疗疾病提供了质量均一的药材或药物，为确保疗效、防止药效波动提供了物质基础。与现代新型的鹿茸冻干后粉碎成为干粉的加工工艺相比，全程无高温工艺，有效保护了生物因子类成分的活性，同时提供了一种可以通过口腔粘膜迅速吸收小分子活性物质和肽类成分的剂型形态。还通过矫味、掩味技术手段，使得该饮片和制剂口感良好，提高了使用依从性。
文档编号A61K35/413GK101757031SQ20101012773
公开日2010年6月30日 申请日期2010年3月19日 优先权日2010年3月19日
发明者董玲 申请人:董玲
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