蟾毒它灵在制备治疗肺部肿瘤药物中的应用的制作方法

专利名称：：蟾毒它灵在制备治疗肺部肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及蟾毒它灵的新用途，具体是涉及蟾毒它灵及其组合物在制备治疗肺部肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮，故亦称支气管肺癌。近50多年来，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位。肺癌晚期可出现各个不同脏器的转移，可引起相应的症状，常常给病人带来极大的痛苦，甚至威胁到生命。临床最常见肺癌转移到脑、骨、肝及肾与肾上腺等部位。肺癌有以下两种基本类型1)小细胞肺癌(SCLC)近20%的肺癌患者属于这种类型；2)非小细胞肺癌(NSCLC)类，约80%的肺癌患者属于这种类型。目前肺癌的治疗有化疗、放疗及手术治疗等，但是由于SCLC特有的生物学行为，且对化疗敏感，所以化疗全身治疗很重要。许多化疗药如环磷酰胺(CTX)、异环磷酰胺(IF0)、长春花硷(VLB)、长春新碱(VCR)、氮芥(HN2)、足叶乙甙(VP16)及其口服胶囊、蒽环类药、卡铂(CBP)等，其单药的近期有效率在40%以上。非小细胞肺癌(NSCLC)，对放疗或化疗不甚敏感或不敏感，所以一经确诊，首选手术切除治疗，术后再根据情况予以补充治疗。一方面切除率低，另一方面即使切除，术后复发、转移的机率也高，所以对于NSCLC，需手术、放疗、化疗等综合治疗，才有可能改善生活质量，提高生存率。凡术前可能切除困难的、术后有潜在的复发转移倾向的、术后出现复发转移的、病期晚已失去手术切除机会的，均需化疗治疗。由于化疗的进展及有效化疗药物的增多，提高了NSCLC化疗的近期有效率，但达到CR的病例不多。但近年来，综观文献报道，已在逐渐改变对转移性NSCLC化疗不能延长生存期的状况，而出现部分病例通过化疗可适当延长生存期，因之化疗在NSCLC的综合治疗中，已成为不可缺少的手段。当然现有化疗的毒性不容忽视，如肾毒性及胃肠道反应等。现有化疗药物的治疗效果、毒性及病人对化疗药物的耐受性均对新的化疗药物的出现寄予极大期待。
发明内容本发明所要解决的技术问题是公开一致蟾毒它灵在制备治疗肺部肿瘤药物中的应用，以满足临床应用的需要。蟾毒它灵，是从中药蟾酥或蟾皮以及蟾蜍分泌物中提取分离得到的一种化合物，其结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>所述蟾毒它灵可采用文献报道的方法进行制备(杨秀伟等，华蟾毒精和羟基华蟾毒精的人肠内细菌代谢研究[J].北京大学学报(医学版)，2001,33(3):199-204.;张英等.中华大蟾蜍皮的化学成分[J].沈阳药科大学学报，2007，24(8):484-487.)，或者可采用商业化的产品，如J&KCHEMICALLTD.公司提供CAS号为471-95-4的产品。发明人发现，所述蟾毒它灵，具有优异的抑制肿瘤生长的功能，尤其是抑制肺部肿瘤生长的功能，可以用于治疗肺部肿瘤。可以以组合物的形成，通过口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者，剂量一般为0.053mg/天/Kg，具体可根据病人的病情、年龄等，由医师决定；所述组合物，包括治疗有效量的蟾毒它灵和医药学上可接受的载体，所述载体包括稀释齐U、赋形剂如水等，填充剂，如淀粉、蔗糖等，粘合剂，如纤维素衍生物明胶、聚乙烯吡咯烷酮等，润滑剂，如滑石粉等。含有蟾毒它灵的组合物中，蟾毒它灵的重量含量为0.01%99.9%;优选的重量含量为0.1%99.0%。可采用本领域公知的方法，将含有蟾毒它灵的组合物，制备成为粉针剂、颗粒剂、胶囊、膏剂、霜剂、透皮贴剂或其他口服剂。经过蟾毒它灵体外抗肿瘤实验，申请人发现，动物肺部药物浓度均高于起效药物浓度，蟾毒它灵对人非小细胞肺癌及其它肺部肿瘤细胞株具有较强的抑制活性，IG。在15200ng/ml，并且具有较好的量效关系。实验结果显示，蟾毒它灵的抑制肿瘤生长效果优于临床现在应用的药物，具有很大开发应用前景。具体实施例方式实施例1化合物蟾毒它灵的分离精制将蟾酥药材敲碎后利用粉碎机打成细小颗粒，称取300g置于5L圆底烧瓶中，加入3L体积浓度为95%的乙醇，水浴加热回流6h，提取液过滤；药渣再加5L体积浓度为95%乙醇同上操作，共提取3次，合并全部滤液，在55t:水浴旋转浓縮至250ml时，转移至大梨型瓶中再加入500ml纯水，加入500ml氯仿，盖塞振摇并超声2h，放置过夜分层，分取氯仿层；剩余水层再加入氯仿同上操作，共萃取多次。合并全部氯仿层减压浓縮至干，得固体。取氯仿萃取物，用氯仿溶解后，加薄层层析硅胶G拌样，用硅胶H上柱，用石油醚和乙酸乙脂梯度洗脱层析分离，得到多个流份。将含有蟾毒它灵的流份，以体积浓度为45%的甲醇为流动相进行分离收集相应组分并浓縮至干，即可获得蟾毒它灵纯品。实施例2配制蟾毒它灵注射液配方(以重量比例计)蟾毒它灵i-io份，药用级乙醇5100份CremophorEL5100份.维生素C0.0012份.采用公知的方法，配制成为注射液。实施例3片剂(以重j淀粉羟丙甲纤维素微粉硅胶硬脂酸镁:比例计)i-io份5-100份0.1-10份0.01-0.5份0.01-0.5份采用公知的方法，制备成为片剂。实施例4蟾毒它灵对人非小细胞肺癌A549的抑制作用采用文献(黄银久，等〃SRB法和MTT法抗肿瘤药物筛选结果相关性研究.〃生物学杂志(04):13-16.)报道相同的SRB法，对人非小细胞肺癌A549进行体外抑制活性测试。人非小细胞肺癌A549由中国科学院上海细胞库提供。试验药物将蟾毒它灵溶解在甲醇或匿SO中配制成不同浓度的溶液，其中，蟾毒它灵由J&KCHEMICALLTD提供。将不同浓度的药物分别加样测其对人非小细胞肺癌A549细胞生长的抑制活性，加样量不超过1%。试验结果见表1。l，对人非小细胞肺癌A549细胞生长的抑制率％浓度(Hg/ml)0.10.050.0250.01250.00630.00310.00160.00078ic50(吗/ml)蟾毒它灵80.475.362.749.321.80.017实验结果显示蟾毒它灵对人非小细胞肺癌A549具有较强的抑制作用，呈现了较好的量效关系，其IC5。在0.018iig/ml。实施例5蟾毒它灵在肺内药物浓度测定采用HPLC分析方法，采用C185iim250X4.6mm色谱柱，以0.5%KH2P04_乙腈(用磷酸调pH值至3.0)(60:40)作为流动相，流速1.Oml/min，检测波长UV296nm，柱温:40°C。5将蟾毒它灵配制成lmg/ml的注射液，取小鼠，准确称重后，以每28分钟输入4mg/kg的剂量进行小鼠尾静脉恒速注射。注射结束后，迅速脱臼处死小鼠，取出肺组织，纯水洗后吸干，用剪刀剪碎后放入10ml具塞玻璃离心管中并精密称定重量，加入乙酸乙脂3.0ml，涡旋振荡2min，超声20min，3000R/min离心10min，顷出上层(其中血浆放入_201:冰箱，待下部结冰固化后再顷出上层)吹干后，各加入100y1甲醇溶解，静置，取上清液20ii1进行HPLC分析。分析结果见表2。表2恒速输注小鼠(4mg/kg28min)肺组织中蟾毒它灵分布结果(单位Pg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表2可见，小鼠肺内组织药物浓度可以达到0.872±0.3165iig/g，远远高于药物起效的有效浓度，显示了蟾毒它灵可以很好的分布到肺组织。蟾毒它灵及含有蟾毒它灵的组合物可以很好的分布到肺组织，，并能在稳态状况下达到有效药物浓度之上，而且具有很高的对肺部肿瘤组织的生长抑制活性，因此具有很大的开发成治疗肺部肿瘤药物的前景。权利要求蟾毒它灵在制备治疗肺部肿瘤药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括治疗有效量的蟾毒它灵和药学上可接受的载体。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物为注射剂、粉针剂、颗粒剂、胶囊、膏剂、霜剂、透皮贴剂或其他口服剂。4.根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于，所述肺部肿瘤为人非小细胞肺癌。全文摘要本发明公开了蟾毒它灵在制备治疗肺部肿瘤药物中的应用，蟾毒它灵体外抗肿瘤实验证明，动物肺部药物浓度均高于起效药物浓度，蟾毒它灵对人非小细胞肺癌及其它肺部肿瘤细胞株具有较强的抑制活性，IC50在15～200ng/ml，并且具有较好的量效关系。实验结果显示，蟾毒它灵的抑制肿瘤生长效果优于临床现在应用的药物，具有很大开发应用前景。文档编号A61K31/585GK101785777SQ201010136070公开日2010年7月28日申请日期2010年3月30日优先权日2010年3月30日发明者于垂亮,侯惠民申请人:上海现代药物制剂工程研究中心有限公司