作为抗癌剂的新型吖吲哚噻唑啉酮的制作方法
专利名称：作为抗癌剂的新型吖吲哚噻唑啉酮的制作方法
技术领域：
本发明的领域涉及吖吲哚噻唑啉酮衍生物，其证明具有CDK1和CDK2抗增殖活性，并且可以用作抗癌剂。
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)是在调节细胞周期不同阶段之间的过渡中起关键作用的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，所述的过渡如在从G1中的静止段(对于新一轮的细胞分裂在有丝分裂和DNA复制开始之间的间隔)到S(活跃DNA合成期间)的进展，或者从G2至M阶段的进展，其中发生活跃的有丝分裂和细胞分裂(参见，例如，在Science，2741643-1677(1996)；和Ann.Rev.Cell Dev.Biol，13261-291(1997)中编辑的论文)。通过调节的细胞周期蛋白亚单元(例如，细胞周期蛋白A、B1、B2、D1、D2、D3和E)和催化的激酶亚单元(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5和CDK6)的缔合形成CDK配合物。如名称所暗示，CDKs对细胞周期蛋白亚单元显示绝对的相关性，以将它们的目标基质磷酸化，并且不同的激酶/细胞周期蛋白对起着通过细胞周期的具体阶段调节进展的功能。
如上所见，这些蛋白激酶是一类调节各种细胞功能的蛋白(酶)。这是通过在蛋白底物上的特定的氨基酸的磷酸化，从而导致底物蛋白的构象改变而完成的。构象变化调整底物的活性或其与其它结合伙伴相互作用的能力。蛋白激酶的酶活性是指激酶将磷酸基加到底物上的速率。例如，这可以通过测定转变为产物的底物的量随时间的变化来测量。底物的磷酸化发生在蛋白激酶的活性位点。
考虑到上述性质，这些激酶在导致细胞增殖、分化和迁移的生长因子信号转导的传播中扮演重要的部分。成纤维细胞生长因子(FGF)和脉管内皮生长因子(VEGF)已被公认为肿瘤促进血管形成的重要介体。VEGF根据通过两种高亲合力受体发信号而活化内皮细胞，所述的两种高亲合力受体中的一种是含激酶插入域的受体(KDR)(参见，Hennequin L.F.等，J.Med.Chem.45(6)1300(2002)。FGF通过FGF受体(FGFR)发出信号而活化内皮细胞。实体瘤依赖新血管的形成(血管形成)而生长。因此，干扰生长信号转导并且由此减慢或防止血管形成的受体FGFR和KDR的抑制剂在预防和治疗实体瘤中是有用的药剂(参见，Klohs W.E.等，Current Opinion inBiotechnology，10544(1999))。
由于CDKs如CDK1和CDK2充当细胞分裂的一般活化剂，所以可以将CDK1和CDK2的抑制剂用作抗增殖药剂。可以将这些抑制剂用于开发在抑制失控细胞周期进展中的治疗干涉。
根据本发明，发现了式I化合物， I其中R1选自氢，低级烷基，羟基-低级烷基，环烷基，低级烷氧基-低级烷基和R2-(X)n；X选自低级亚烷基，羟基-低级亚烷基，亚环烷基，低级烷氧基-低级亚烷基和低级烷酰氧基-低级亚烷基；R2是 ；和 选自芳基环；含有3至5个碳原子和1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的4至6元杂环烷基环；和含有1至2个选自氧、硫和氮的杂原子的5或6元杂芳环；
R5和R6独立地选自羟基，羟基-低级烷基，氢，低级烷基，卤素，全氟低级烷基和低级烷氧基；和n是0至1的整数；或其中R2含有杂芳环中的氮的化合物的N-氧化物，其中R2含有杂环烷基环或杂芳环中的硫的砜；或者其药用盐，抑制CDKs活性，特别是抑制CDK1和CDK2活性。
本发明的药剂和含有这些药剂的药物组合物可以用于治疗与不受控制的或不需要的细胞增殖有关的各种疾病或疾病状态，如癌症、自身免疫疾病、病毒性疾病、真菌病、神经变性疾病和心血管疾病。
抑制和/或调节CDKs的活性，特别是CDK1和CDK2的活性，使这些式I化合物和含有这些化合物的组合物可以用于治疗由激酶活性介导的疾病，特别是作为治疗癌症，更特别是治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌中的抗肿瘤药剂。
如本文中所指出的，式I化合物是可能的抗增殖药剂，并且可以用于介导和/或抑制CDKs，特别是CDK1的活性，从而提供用于治疗与不受控制或异常的细胞增殖有关的癌症或其它疾病的抗肿瘤药剂。
其中，优选的式I化合物是式I-A的化合物I-A其中R1′是氢，低级烷基，羟基-低级烷基，低级烷氧基-低级烷基或环烷基；或其药用盐；和式I-B的化合物
I-B其中R1″是R2-(X)n，并且R2、X和n如上；或其中R2含有杂芳环中的氮的化合物的N-氧化物，其中R2含有杂环烷基环或杂芳环中的硫的砜；或者其药用盐。
在其中R2和X是含有芳基部分的取代基的化合物I和I-B中，优选的芳基部分是苯基。
在本发明的优选实施方案中，提供式I-A化合物，其中R1′是氢，羟基-(C1-C6)烷基或环丙基。
在本发明的另一优选实施方案中，提供式I-B化合物，其中n是1，X是(C1-C6)亚烷基，羟基-(C1-C6)亚烷基，(C1-C6)烷酰氧基-(C1-C6)亚烷基，或亚环丙基；R2是噻吩基，吡嗪基或苯基；并且R5和R6独立地选自氢，卤素和(C1-C6)烷基。
如在本文中使用的，卤素包括全部四种卤素如氟、氯、溴和碘。特别优选氟和氯。
如在说明书中所使用的，术语″低级烷基″单独或组合地是指含有1至6个碳原子的一价直链或支链饱和烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
术语″环烷基″是指环状低级烷基取代基，其为一价未取代的3至6元饱和碳环烃环。其中，优选的环烷基取代基是环丙基、环丁基、环己基等，特别优选环丙基。
术语″低级烷氧基″是指由含有1至6个碳原子的低级烷基形成的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。
术语″芳基″是指一价单-或双环未取代的芳族烃环，如苯基或萘基，其中优选苯基。
术语″杂环烷基″是指含有3至5个碳原子和1个或2个选自氧、氮或硫中的杂原子的4至6元单环饱和环。其中，优选的杂环烷基包括吗啉基、噻喃基或四氢吡喃基。
术语″杂芳环″是指含有4至5个碳原子和1至2个选自氧、氮或硫中的杂原子的一价5元或6元单环杂芳环。其中，优选的杂芳族基包括噻吩基、噻唑基、吡啶基、呋喃基等。
术语″低级亚烷基″表示含有1至6个碳原子的二价饱和直链或支链烃。
术语“低级烷酰氧基”表示含有2至6个碳原子的饱和脂肪羧酸的一价残基，其中羧基(-COOH)部分上的氢原子已经被除去。其中，优选的低级烷酰氧基包括乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基。
术语“亚环烷基”表示二价环-低级亚烷基，其是二价未取代的3至6元饱和碳环烃环。其中，优选的亚环烷基取代基是二价环丙基和二价环丁基。
术语“低级烷酰氧基低级亚烷基”表示被低级烷酰氧取代的、优选单取代的低级亚烷基取代基，其中低级烷酰氧基如上定义。
术语“低级烷氧基-低级亚烷基”表示被低级烷氧基取代的、优选单取代的如此前指明的低级亚烷基取代基，其中低级烷氧基如上定义。
术语“羟基-低级亚烷基”表示被羟基取代的、优选单取代的低级亚烷基取代基。
术语″芳氧基″表示芳氧基取代基，其中芳基如上。优选的芳基为苯基，并且优选的芳氧基为苯氧基。
术语″全氟低级烷基″是指其中低级烷基的全部氢被氟所取代或代替的任何低级烷基。其中，优选的全氟低级烷基为三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基等，其中特别优选三氟甲基。
术语″药用盐″是指由合适的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成的保留了式I、I-A和I-B的化合物的生物效力和性质的常规酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐的实例包括从无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨磺酸、磷酸和硝酸衍生的那些盐，和从有机酸如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等衍生的那些盐。碱加成盐的实例包括从铵、钾、钠和季铵氢氧化物如氢氧化四甲铵衍生的那些盐。为了获得改善的化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性，药物化合物(即，药)形成盐的化学修饰是药物化学家公知的技术。参见，例如H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(第6版，1995)第196和1456-1457页。
根据本发明，可以由式II化合物制备式I化合物， II式II化合物经由以下的反应方案1转化成式I化合物，其中R1如上。
方案1根据本发明，式II化合物通过Knoevenegel反应与式III-A化合物[绕丹宁(2-硫代-噻唑啉-4-酮)]反应，以制备式IV化合物。在进行此缩合时，可以采用在进行Knoevenegel反应时常规的任何条件。通常，此反应在碱金属乙酸盐和乙酸存在下、在回流温度进行。在此合成的下一步骤中，用甲基化试剂处理所得到的式IV的取代噻唑烷，以甲基化在式IV化合物上的硫代基团，制备式V化合物。优选的甲基化试剂是碘代甲烷。此反应在有机胺碱如二异丙基乙胺(DIEA)中进行。在进行此反应时，温度和压力不是关键的，并且此反应可以在室温和大气压下进行。事实上，在进行此反应时，可以使用在甲基化硫代基团中常规的任何条件。
在此合成的下一步骤中，式V化合物与式VI化合物反应，以制备式I化合物。式VI化合物为胺，并且在进行此反应时，可以使用在甲硫基的胺取代中常规使用的任何方法。根据一个实施方案，通过在常规溶剂如乙腈存在下，将式VI化合物与式V化合物反应，来进行此取代。通常，此反应在胺碱如二异丙基乙胺存在下进行。
另一方面，式I化合物可通过式II化合物与式VII化合物反应来制备 VII其中R1如上。
式VII化合物与式II化合物制备式I化合物的反应是在封闭体系中，在50℃至200℃的高温，在高度沸腾的有机溶剂如苯或甲苯中进行的。如此，该反应在高温和高压下进行。另外，该反应理想地适用于制备其中R1是氢的式I化合物。式VII化合物可以通过用式III-A化合物与式VI化合物反应的直接置换而直接形成R1-NH2VI其中R1如上。该置换反应通常在用于式IX的噻吩基化合物中的噻吩基的活化剂存在下和胺碱存在下进行。其中，优选的活化剂是氯化汞。此反应在惰性有机溶剂中进行。可以利用任何常规的惰性有机溶剂，如乙腈、二氯甲烷等。在进行此反应时，使用胺碱，如二异丙基乙胺。在进行此反应时，温度和压力不是关键的，并且此反应可以在室温和大气压下进行。在进行此反应时，可以采用用胺置换噻吩基的任何常规方法。
在其中R1为X、n为1，并且X为羟基低级亚烷基的式VI化合物中，这些化合物可以由相应的氨基酸或氨基酸酯通过用碱金属硼氢化物还原而制备。另一方面，这些羟基低级亚烷基化合物可以通过用氢化铝锂还原相应的氰基羧酸酯而制备。还原反应将氰基还原为氨基，并且将酯还原为羟基。此还原应当在式VI化合物与式V化合物反应之前发生。
在环 是形成环 的含氮环中的氮原子的N-氧化物的情况下，这些N-氧化物可以由叔环氮原子通过氧化而形成。可以采用将叔氮原子氧化为N-氧化物的任何常规方法。优选的氧化剂为间氯过苯甲酸(MCPBA)。
式I-A化合物包括其中R1’是氢的化合物。式I-A化合物的另一类化合物是其中R1’是环低级烷基、优选环丙基的那些化合物。式1A化合物的另一类化合物是其中R1’是羟基低级烷基或低级烷氧基低级烷基、特别优选羟基低级烷基的那些化合物。
在其中R1”是R2-(X)n的式I-B化合物中，n可以是0或1。n为0时，优选的一类化合物是其中 是苯基的那些化合物。优选的其中n是0并且R2是苯基的一类化合物是其中R5和R6或者都是氢，或者R5和R6中一个是氢而另一个是低级烷氧基或低级烷基的那些化合物。
另一方面，优选的另一类式I-B化合物是其中R1”是R2-(X)n并且n是1的那些化合物。这类化合物中包括其中X是环低级亚烷基、优选亚环丙基的那些化合物。至于其中n是1并且X是环低级亚烷基的这类化合物，包括其中 是苯基并且R5和R6都是氢，或者R5和R6中一个是氢而另一个是低级烷基的那些化合物。其中R2是苯基的另一类式I-B化合物为其中R5和R6是氢或卤素并且R5和R6中至少一个是卤素的那些化合物。其中n是1的另一类式I-B化合物为其中X是低级烷酰氧基低级亚烷基的那些化合物。至于其中R1”是R2-(X)n、n是1并且X是低级烷酰氧基低级亚烷基的这类化合物，其为其中R2是 并且 是苯基的的那些化合物，是其中R5和R6都是氢，或者R5和R6中一个是氢而另一个是低级烯基或卤素的那些化合物。根据本发明的另一实施方案是那些其中n是1并且X是低级烯基的优选的式I-B化合物。其中，这类化合物的优选实施方案是其中R2是 并且 是苯基的化合物。至于本发明的该实施方案，优选实施方案是其中R5和R6都是氢，或者R5和R6是氢或低级烷基或卤素，并且R5和R6中至少一个不是氢的那些化合物。其中n是1并且X是低级亚烷基的另一类式I-B化合物是其中 是含有1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的杂芳环的那些化合物。其中 是杂芳环的这类化合物中优选的化合物是那些含有1个杂原子、优选硫的杂芳环。在这种情况下，R5和R6可以都是氢，或者R5和R6中的一个可以是氢而另一个是卤素或低级烷基。
其中n是1的式I-B化合物的另一类化合物是其中X为羟基-低级亚烷基的那些化合物。至于其中X是羟基-低级亚烷基的这类化合物，为其中 是苯环的那些化合物。这种优选的化合物包括其中R5和R6都是氢的那些化合物和其中R5和R6是氢、低级烷基、低级烷氧基或卤素，并且R5和R6中至少一个不是氢的那些化合物。
根据本发明的药物组合物可以备选地或除了式I化合物外，还含有作为活性成分的药用前药、药学活性代谢物和这些化合物和代谢物的药用盐。这些化合物、前药、多聚体、盐和代谢物有时在本文中统称为″活性药剂″或″药剂″。
在药剂是固体的情况下，本领域的技术人员应当理解，本发明的化合物和盐可以以不同的晶体或多晶型形式存在，并且其全部都将在本发明和限定式的范围内。
可以将治疗有效量的本发明活性药剂用于治疗由蛋白激酶CDK1的调制或调节介导的疾病。″有效量″意指药剂显著地抑制增殖和/或防止真核细胞如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞去分化的量，并且对于所指示的效用如特定治疗处理是有效的。
给定药剂与这样量相对应的量将根据因素如具体的化合物、疾病状态及其严重性、受试者或需要这种治疗的宿主的特性(例如，重量)而变化，但仍然可以根据此情形周围的具体环境，包括例如给药的具体药剂、给药路径、待治疗的症状以及将治疗的受试者或宿主，以本领域中已知的方式常规地确定。″治疗″意指至少减轻受试者如哺乳动物(例如，人类)中至少部分地由CDK1蛋白激酶的活性而影响的疾病状态，包括防止疾病状态在哺乳动物中发生，特别是当发现哺乳动物倾向于具有该疾病状态而尚未诊断为具有该疾病状态时；调节和/或抑制疾病状态；和/或缓和该疾病状态。
本发明还涉及通过给药本发明的药剂而调节或抑制例如哺乳动物组织中的蛋白激酶CDK1活性的方法。作为抗增殖剂的药剂的活性可以容易地由已知的方法测量，例如通过在MTT检测中使用全细胞培养来测量。可由本领域技术人员可以获得的任何方法测量作为CDK1蛋白激酶活性调节剂的本发明药剂的活性，包括体内和/或体外检测。用于活性测量的适宜检测的实例包括在以下文献中所述的那些国际公布号WO 99/21845；Parast等，Biochemistry，37，16788-16801(1998)；Connell-Crowley和Harpes，Cell CycleMaterials and Methods，(Michele Pagano编辑，Springer，Berlin，Germany)(1995)；国际公布号WO 97/34876；和国际公布号WO 96/14843。这些性质可以例如通过使用在下面的实施例中列出的一种或多种生物学试验程序进行评估。
可以将本发明的活性药剂配制成如下所述的药物组合物。本发明的药物组合物包含有效调制、调节或抑制量的式I化合物和惰性的、药用载体或稀释剂。在药物组合物的一个实施方案中，提供有效水平的本发明药剂，以提供包括抗增殖活性的治疗益处。″有效水平″是指其中增殖得到抑制或控制的水平。将这些组合物以适宜于给药模式如肠胃外或口服给药的单位剂量形式制备。
本发明的药剂可以以常规剂量形式给药，常规剂量形式是通过将治疗有效量的作为活性成分的药剂(例如，式I的化合物)与适宜的药学载体或稀释剂根据常规程序制备的。这些程序可以包括适宜于所需制剂的混合、粒化和压实或溶解所述成分。
所采用的药学载体可以是固体或液体。示例性的固体载体是乳糖、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示例性的液体载体是糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，载体或稀释剂可以包括本领域已知的延时或缓释材料，如单独的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，或含有蜡、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯等的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
可以采用各种药物形式。因此，如果使用固体载体，制剂可以形成片剂，以粉末或丸剂形式放置于硬明胶胶囊中，或者为锭或锭剂形式。固体载体的量可以变化。如果使用液体载体，制剂形式可以是糖浆、乳剂、软明胶胶囊、在安瓿或小瓶中的可无菌注射的溶液或混悬液或非水性液体混悬液。
为了得到稳定的水溶性剂量形式，可以将本发明药剂的药用盐溶解于有机或无机酸的水溶液中。如果不能得到可溶盐形式，则可以将药剂溶解于适宜的共溶剂或共溶剂的组合中。
应当理解，在本发明的组合物中使用的药剂的实际剂量将根据所使用的具体复合物、配制的具体组合物、给药的模式和将治疗的具体位置、宿主和疾病而变化。对于给定的一组症状的最佳剂量可以由本领域的技术人员考虑到药剂的实验数据，使用常规的剂量确定试验而确定。
本发明的组合物可以以用于制备药物组合物的通常已知的方式制备，例如使用常规的技术如混合、溶解、粒化、制糖丸、研磨、乳化、制胶囊、捕集或冻干。可以以常规方式使用一种或多种生理学上可以接受的载体配制药物组合物，所述的载体可以选自有利于将活性化合物加工成为药学上可以使用的制剂的赋形剂和辅剂。
对于口服给药，可以容易地将所述的化合物与本领域中已知的药用载体组合来配制该化合物。这些载体可以将本发明的化合物配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂、混悬液等，用于由受治患者经口摄入。口服使用的药物制剂可以通过以下方法得到使用与活性成分(药剂)混合的固体赋形剂，任选研磨得到的混合物，并且如果需要，在加入适宜的辅剂之后加工颗粒的混合物，以得到片剂或糖衣核。
下面将由实施例进一步说明本发明，但这些实施例不意在限制本发明的范围。除非明确另外声明，温度以摄氏度(℃)表示。
实施例实施例15-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮 a)3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的制备 在室温向7-吖吲哚(5g，42.2mmol)的THF(400mL)溶液首先加入固体N-溴琥珀酰亚胺(8g，45.0mmol)，然后加入20滴浓硫酸。在搅拌的同时，在2天的过程中形成某一悬浮液。将混合物用饱和氯化铵溶液稀释并且分离两层。水层用乙酸乙酯(4×150mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂并且在真空下除去溶剂，得到粗的黄色固体。将该固体在热条件下溶解在乙酸乙酯(～100mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体，并且用乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出6.2g(75％产率)的3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶，为黄色固体EI-HRMS m/e C7H5BrN2(M+)的计算值195.9636，实测195.9636。
b)1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛的制备
在-70℃向3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(9.85g，50.0mmol)的THF(300mL)悬浮液中滴加2.5M的正丁基锂的己烷(42mL，105.0mmol，2.1当量)溶液。在加入过程中反应混合物的温度升高到-60℃并且变为澄清溶液。让得到的砖红色溶液在1h内缓慢升温到-10℃，然后在此温度搅拌4h。再次将混合物冷却到-70℃，并且滴加二甲基甲酰胺(8.5mL，110.0mmol)的THF(30mL)溶液。加完后，让混合物温热至室温并且搅拌15h。然后，将混合物用饱和氯化铵溶液稀释并且分离两层。水层用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂并且在真空下除去溶剂，得到粗的棕色固体，将其在热条件下溶解在乙酸乙酯(～70mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体并且用乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出6.05g(83％产率)的1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛，为黄色固体EI-HRMS m/e C8H6N2O(M+)的计算值146.0480，实测146.0478。
c)1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛的一步制备 在室温向1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(11.80g，100mmol)在含有33％乙酸(200mL)的水的悬浮液中加入六甲撑四胺(16.8g，120mmol)。将该溶液加热到110-120℃(油浴温度)并且搅拌15h。然后，将反应混合物冷却到室温，在此期间形成大量固体。将此悬浮液倒入含有冰的烧杯(2L)中并且用水(50mL)冲洗烧瓶。然后用饱和碳酸氢钠溶液缓慢中和。在中和后，通过过滤收集固体并且用水洗涤。在空气中干燥后，分离出9.5g(65％产率)的1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛，为白色固体EI-HRMS m/e C8H6N2O(M+)的计算值146.0480，实测146.0478。
d)2-[(噻吩-2-基-甲基)-氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向噻吩-2-基-甲胺(22.63g，200mmol)和绕丹宁(13.32g，100mmol)在乙腈(200mL)中的悬浮液中加入二异丙基乙胺(DIPEA)(34.8mL，45.0mmol)。然后，在2分钟内得到澄清溶液，并且将该溶液冷却到0℃。向该溶液中在15分钟内分3次加入氯化汞(27.15g，100mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，用二氯甲烷(500mL)和甲醇(1.0L)洗涤。真空下除去合并的溶剂，并且将粗的残余物用水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)稀释。分离两层，水层用二氯甲烷(2×250mL)萃取。两次的有机萃取物分别用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的固体。将该固体在热条件下溶解在乙腈(～100mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体并且用冷乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出12.32g(58％产率)的2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C8H8N2OS2(M+)的计算值212.0078，实测212.0083。
e)5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮(225mg，1.06mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(193.6mg，1.35mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液中加入苯甲酸(13mg，0.11mmol)和哌啶(11uL，0.11mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出330mg(91.5％产率)的5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为灰白色固体mp243-246℃；HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值341.0526，实测341.0528。
实施例25-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮盐酸盐 HCl在室温向5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮(50mg，0.15mmol)在甲醇(2mL)中的悬浮液滴加三甲基氯硅烷(19uL，0.15mmol)。混合物1h后成为澄清溶液，并且再搅拌2h。然后，将混合物用叔丁基甲基醚(10mL)稀释。通过过滤收集得到的固体，用叔丁基甲基醚洗涤。在空气中干燥后，以盐酸盐形式分离出40mg(73％产率)的5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为无定形固体HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值341.0526，实测341.0528。
实施例32-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮
a)2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向(R)-(-)-2-苯基甘氨醇(glycinol)(15.34g，111.82mmol)和绕丹宁(14.65g，110mmol)在乙腈(200mL)中的悬浮液加入DIPEA(20.03mL，115mmol)。然后，在2分钟内得到澄清溶液，将该溶液冷却到0℃。向该溶液中在15分钟内分三次加入氯化汞(31.22g，115mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(500mL)和甲醇(1.0L)洗涤。真空下除去合并的溶剂，粗的残余物用水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)稀释。分离两层，水层用二氯甲烷(2×250mL)萃取。两次的有机萃取物分别用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的黄色固体。将该固体在热条件下溶解在乙腈(～100mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体并且用冷的乙腈(20mL)洗涤。在空气中干燥后，分离出12.99g(50％产率)的2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C11H12N2O2S(M-H2O)的计算值218.0514，实测218.0511。
b)2-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备
在室温向微波管中的2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮(100mg，0.43mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(77.3mg，0.53mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(5.2mg，0.043mmol)和哌啶(4.3uL，0.043mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出135mg(87.5％产率)的2-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体mp 317-319℃；HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值365.1067，实测365.1070。
实施例42-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向3-氯-4-氟苄胺(2.5g，15.66mmol)和绕丹宁(2g，15mmol)在乙腈(50mL)中的悬浮液加入DIPEA(5.57mL，32mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(4.34g，16mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(200mL)和甲醇(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，粗的残余物用水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)稀释。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去部分溶剂，得到大量固体。在冰箱中冷却后，通过过滤收集固体，并且用冷的乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出2.5g(64％产率)的2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C10H8ClFN2OS(M+)的计算值258.0030，实测258.0029。
b)2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-噻唑-4-酮(100mg，0.39mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(71mg，0.48mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(4.8mg，0.39mmol)和哌啶(3.9uL，0.039mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出145mg(97％产率)的2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体mp 318-320℃；HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值387.0477，实测387.0477。
实施例52-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向(1R，2S)-2-苯基-环丙胺盐酸盐(0.85g，5mmol)和绕丹宁(0.68g，5mmol)在乙腈(20mL)中的悬浮液中加入DIPEA(2.61mL，15mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(1.35g，5mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去溶剂，粗的残余物用水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)稀释。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的残余物。使用Biotage硅胶柱色谱将其纯化，得到0.474g(42％产率)的2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-噻唑-4-酮，分离为白色无定形固体EI-HRMS m/eC12H12N2OS(M+)的计算值232.0670，实测232.0665。
b)2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-噻唑-4-酮(225mg，1.06mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(193.6mg，1.35mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(13mg，0.11mmol)和哌啶(11uL，0.11mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出330mg(91.5％产率)的2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为暗棕色固体mp 308-310℃；HRES(+)m/e C20H16N4OS(M+H)+的计算值361.1118，实测361.1122。
实施例62-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向(R)-缬氨醇(valinol)(1g，9.69mmol)和绕丹宁(1.3g，9.69mmol)在乙腈(40mL)中的悬浮液中加入DIPEA(5.06mL，29mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(2.72g，10mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去滤液，粗的残余物用水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)稀释。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的残余物。使用Biotage硅胶柱色谱纯化，获得0.82g(42％产率)的2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-噻唑-4-酮，分离为白色无定形固体EI-HRMS m/eC8H14N2O2S(M+)的计算值202.0776，实测202.0778。
b)2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-噻唑-4-酮(70mg，0.35mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(63mg，0.43mmol)在甲苯(700uL)中的悬浮液加入苯甲酸(4.3mg，0.035mmol)和哌啶(3.5uL，0.035mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。得到的固体用二氯甲烷和甲醇处理，以除去一些颜色和其它杂质。过滤固体并且在空气中干燥，得到14mg(36.7％产率)的2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体mp 269-271℃；HRES(+)m/e C16H18N4O2S(M+)的计算值331.1223，实测331.1226。
实施例7乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯 a)乙酸2-[4-氧代-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯的制备 向2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮(6.37g，26.9mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入三乙胺(7.52mL，54mmol)，然后在5℃加入乙酰氯(2.3mL，32.28mmol)。加完后，让溶液温热至室温并且搅拌2天。将该溶液转移到分液漏斗中，用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的黄色油状物。使用Biotage(40m)硅胶柱色谱纯化该油状物，得到4.6g(61.5％产率)所需的乙酸2-[4-氧代-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯，为白色无定形固体ES-LRMS m/e C13H14N2O3S(M+)的计算值279.33，实测279.1。
b)乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯的制备 在室温向微波管中的乙酸2-[4-氧代-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯(400mg，1.43mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(77.3mg，0.53mmol)在甲苯(5mL)中的悬浮液加入苯甲酸(17.64mg，0.144mmol)和哌啶(14.5uL，0.144mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体，并且用甲苯和二氯甲烷洗涤。在空气中干燥后，分离出313mg(53.6％产率)的乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯，为白色固体mp 243.7-246.8℃；HRES(+)m/e C21H18N4O3S(M+H)+的计算值407.1173，实测407.1172。
实施例82-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(2-氯-苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向2-氯苄胺(7.88g，55mmol)和绕丹宁(6.65g，50mmol)在乙腈(150mL)中的悬浮液加入DIPEA(19.15mL，110mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(13.5g，50mmol)在15分钟内分三次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(1L)和甲醇(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，粗的残余物用水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)稀释。振荡后，将形成的大量固体通过过滤收集，获得1.25g所需产物。然后，分离两层，乙酸乙酯层用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤后，部分除去乙酸乙酯溶液，然后在冰箱中储存。通过过滤收集得到的固体，获得2.67g所需产物。然后，水层用二氯甲烷(2×150mL)萃取。将二氯甲烷萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的残余物。使用Biotage(40m)硅胶柱色谱纯化该残余物，获得4.2g(总产物8.12g，67.5％产率)的2-(2-氯苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C10H9ClN2OS(M+)的计算值240.0124，实测240.0122。
b)2-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(2-氯苄基氨基)-噻唑-4-酮(120mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(3mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(5.9uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将其悬浮在甲醇(15mL)中并且用空气加热枪加热。尽管没有完全溶解，但是将其冷却到室温，通过过滤收集固体并且用甲醇洗涤。在空气中干燥后，分离出175mg(95％产率)的2-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体。HRES(+)m/e C18H13ClN4OS(M+H)+的计算值369.0572，实测369.0574。
实施例92-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向2-氯-6-甲基苄胺(650mg，4.2mmol)和绕丹宁(559mg，4.2mmol)的乙腈(25mL)溶液加入DIPEA(1.74mL，10mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且一次加入氯化汞(1.22g，4.5mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(500mL)和甲醇(250mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物在热条件下溶解在乙酸乙酯(25mL)中，并且在冰箱中储存过夜。然后，通过过滤收集固体并且用乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出305mg(28.5％产率)的2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C11H11ClN2OS(M+)的计算值254.0281，实测254.0282。
b)2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-噻唑-4-酮(63mg，0.25mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(44mg，0.3mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(3.8mg，0.03mmol)和哌啶(3uL，0.03mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将这些固体悬浮在甲醇(10mL)中并且用空气加热枪加热。尽管没有完全溶解，但是将其冷却到室温，通过过滤收集固体并且用甲醇洗涤。在空气中干燥后，分离出58mg(61％产率)的2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为淡绿色固体。HRES(+)m/eC19H15ClN4OS(M+H)+的计算值383.0730，实测383.0728。
实施例102-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮
a)2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向3-甲基-噻吩-2-基甲胺(700mg，5.5mmol)和绕丹宁(732mg，5.5mmol)的乙腈(30mL)溶液加入DIPEA(1.91mL，11mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且一次加入氯化汞(1.52g，5.6mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙腈(200mL)和乙酸乙酯(250mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物溶解在二氯甲烷(150mL)中，并且用水(100mL)和盐水溶液洗涤。在用无水硫酸镁干燥后，真空下除去滤液，将残余物溶解在二氯甲烷(10mL)中并且用己烷(10mL)稀释。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用二氯甲烷洗涤。在空气中干燥后，分离出390mg (31.5％产率)的2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为淡黄色无定形固体EI-HRMS m/e C9H10N2OS2(M+)的计算值226.0235，实测226.0232。
b)2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备
在室温向微波管中的2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮(57mg，0.25mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(44mg，0.3mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(3.8mg，0.03mmol)和哌啶(3uL，0.03mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将这些固体悬浮在甲醇(10mL)中并且用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲醇洗涤。在空气中干燥后，分离出35mg(39.5％产率)的2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为无定形黄色固体。HRES(+)m/eC17H14N4OS(M+H)+的计算值355.0682，实测355.0686。
实施例112-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向2-氯-4-氟-苄胺(4.5g，28.19mmol)和绕丹宁(3.75g，28.2mmol)的乙腈(170mL)溶液加入DIPEA(9.82mL，56.4mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(8.42g，31.02mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙腈(1.0L)和乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物溶解在乙酸乙酯(150mL)中并且用水(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤。在用硫酸镁干燥后，真空下除去滤液，并且将残余物溶解在乙酸乙酯(50mL)中。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用己烷洗涤。在空气中干燥后，分离出1.2g(16.5％产率)的2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/eC10H8FN2OS2(M+)的计算值258.0030，实测258.0027。
b)2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-噻唑-4-酮(130mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(4mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(6uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将这些固体在热条件下溶解在DMSO(5mL)中并且用乙腈(25mL)稀释。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出69mg(36％产率)的2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为无定形绿色固体。HRES(+)m/eC18H12ClFN4OS(M+H)+的计算值387.0477，实测387.0476。
实施例122-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向2-(氨基甲基)-5-甲基-吡嗪(3.69g，30mmol)和绕丹宁(3.59g，27mmol)的乙腈(100mL)溶液加入DIPEA(10.45mL，60mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(8.15g，30mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤并且用乙腈(1.0L)和乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物在热条件下溶解在乙腈(25mL)中。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出1.5g(25％产率)的2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基)-噻唑-4-酮，为白色固体HRES(+)m/e C9H10N4OS(M+H)+的计算值223.0648，实测223.0648。
b)2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基)-噻唑-4-酮(112mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(4mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(6uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出80mg(45.7％产率)的2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为无定形绿色固体。HRES(+)m/e C17H14N6OS(M+H)+的计算值351.1023，实测351.1021。
实施例132-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮
a)2-[2-(3-氟苯基)-乙基氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向3-氟苯乙基胺(3.06g，22mmol)和绕丹宁(2.66g，20mmol)的乙腈(70mL)溶液加入DIPEA(7.66mL，44mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(5.97g，22mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙腈(1.0L)和乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物溶解在乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)中。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。在过滤干燥剂后，真空下除去滤液，并且将粗的残余物在热条件溶解在乙腈(25mL)中。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出3.65g(76.6％产率)的2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-噻唑-4-酮，为白色固体HRES(+)m/eC11H11FN2OS(M+H)+的计算值239.0649，实测239.0647。
b)2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备
在室温向微波管中的2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-噻唑-4-酮(120mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(4mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(6uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出170mg(93％产率)的2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体。HRES(+)m/e C19H15FN4OS(M+H)+的计算值367.1024，实测367.1021。
实施例142-环丙基氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮的制备 将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(实施例1b，1.2g，8.22mmol)、绕丹宁(1.09g，8.22mmol)和乙酸钠(2.69g，32.8mmol)在乙酸(12mL)中的悬浮液在回流下搅拌12h。冷却到室温后，加入水(150mL)。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥，获得5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2-硫代-噻唑烷-4-酮(2.2g，100％)，为棕色固体。LC-MS m/e 262(MH+)。
将5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2-硫代-噻唑烷-4-酮(2.2g，8.22mmol)、碘代甲烷(1.05mL，16.8mmol)和DIEA(3.0mL，16.8mmol)在无水乙醇(110mL)中的悬浮液在100℃搅拌2h。在加入水(200mL)后，通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥，获得2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(1.48g，60.8％)，为灰色固体。LC-MSm/e 276(MH+)。
b)2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮的制备将2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(55mg，02mmol，实施例14a)、环丙胺(23mg，0.4mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(70uL，0.4mmol)在乙腈(1.0mL)中的悬浮液在80℃搅拌12h。冷却到室温后，通过过滤收集固体，用少许乙腈洗涤并且干燥。经快速色谱(Merck硅胶60，230-400目，0％-10％甲醇在二氯甲烷中，30min)，得到2-环丙基氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮(40mg，71％)，为淡黄色固体。LC-MS m/e 285(MH+)。
实施例152-氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(实施例1b，200mg，1.4mmol)、假海硫因(159mg，1.4mmol)和乙酸钠(459mg，5.6mmol)在乙酸(2mL)中的悬浮液在回流下搅拌12h。冷却到室温后，加入水。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥，获得2-氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮(280mg，82％)，为淡黄色固体。LC-MS m/e 245(MH+)。
实施例162-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 采用类似于实施例14b中所述的程序，由2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(实施例14a)、2-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁胺和DIEA开始，得到2-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。LC-MS m/e 345(MH+)。
实施例172-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)(R)-2-(4-氟-苯基)-1-羟基甲基-乙胺的制备向硼氢化钠(0.54g，14.2mmol)的THF(10mL)溶液加入D-4-氟苯基甘氨酸(1.0g，5.9mmol)。冷却到0℃后，滴加碘(1.5g，5.9mmol)的THF(10mL)溶液。混合物在回流下搅拌18h。冷却到室温后，加入甲醇(7mL)以停止反应。在除去溶剂后，加入20％氢氧化钾(50mL)。将混合物搅拌4h并且用二氯甲烷(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥、过滤并且真空浓缩。经快速色谱(Merck硅胶60，70-230目，0％-10％甲醇在0％-5％甲醇在二氯甲烷中，30min)，得到(R)-2-(4-氟-苯基)-1-羟基甲基-乙胺(0.63g，69％)。
b)2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备然后，采用类似于实施例14b中所述的程序，由2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(实施例14a)、2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙胺和DIEA开始，得到2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。LC-MS m/e383(MH+)。
实施例182-(2-甲氧基-苯基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 采用类似于实施例14b中所述的程序，由2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(实施例14a)、2-(2-甲氧基-苯胺和DIEA开始，得到2-(2-甲氧基-苯基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。LC-MS m/e 351(MH+)。
实施例19药理学检测本发明化合物的药理学性能可以由许多药理学检测证实。已经用根据本发明的化合物及它们的盐进行了下面的示例性药理学检测。本发明化合物显示出CDK1/细胞周期蛋白B和CDK2/细胞周期蛋白E活性，其中Ki值低于5.0μM。这证明所有这些化合物对于抑制CDK1/细胞周期蛋白B和CDK2/细胞周期蛋白E具有活性。
为了测定CDK1活性的抑制，进行FlashPlateTM(NENTM-Life ScienceProducts)检测或HTRF检测。两种类型的激酶检测都是使用重组人CDK1/细胞周期蛋白B复合物进行的。在杆状病毒载体中的GST-细胞周期蛋白B(GST-cycB)和CDK1 cDNA克隆由Baylor College of Medicine，Houston，TX的W.Harper博士提供。在High FiveTM昆虫细胞中共表达蛋白质，如前所描述(Harper，J.W.等Cell 1993，75，805-816)，在谷胱甘肽琼脂糖树脂(Pharmacia，Piscataway，NJ)上纯化复合物。成视网膜细胞瘤(Rb)蛋白(氨基酸386-928)的6x-组氨酸标记的截短型被用作CDK1/细胞周期蛋白B检测的底物(表达质粒由英国Welwyn Garden City，Roche Research Centre，Department of Molecular Virology的Veronica Sullivan博士提供)。Rb蛋白为通过CDK1磷酸化的天然底物(参见Herwig和Strauss Eur.J.Biochem.Vol.246(1997)pp.581-601，及其中引用的参考文献)。62Kd蛋白的表达受M15E.Coli菌株中IPTG可诱导的启动子控制。通过超声处理裂解细胞，并且通过将pH 8.0的裂解产物结合到预先用1mM咪唑预处理的Ni-螯合的琼脂糖柱上，进行纯化。然后用逐渐降低至pH 6.0的pH缓冲液洗涤树脂几次，用500mM咪唑洗脱。将洗脱的蛋白用20mM HEPES pH 7.5、30％甘油、200mM NaCl和1mM DTT透析。定量纯化的Rb融合蛋白原液的蛋白浓度，分成等份，在-70℃下储存。
对于FlashPlate激酶的检测，用Rb蛋白以10μg/ml的浓度涂布96孔FlashPlate，每孔使用100μl。将该板在4℃温育过夜，或在振摇器、室温下温育3小时。为了控制非特异性磷酸化，一行孔用100μl/孔的涂布缓冲液(20mM HEPES，0.2M NaCl)涂布。然后用洗涤缓冲液(0.01％吐温20的磷酸盐缓冲盐水)冲洗该板两次。要测试的化合物(“测试化合物”)以5×最终浓度加入到孔中。通过立即加入40μl反应混合物(25mM HEPES，20mMMgCl2，0.002％吐温20，2mM DTT，1μM ATP，4nM 33P-ATP)和足够量的酶引发反应，获得高于背景至少10倍的计数。在振摇器上、室温下温育该板30分钟。将该板用洗涤缓冲液洗涤4次，密封，并在TopCount闪烁计数器(Packard Instrument Co.，Downers Grove，IL]上计数。根据下式确定Rb磷酸化抑制百分数，其为CDK活性抑制的衡量标准100×[1-(测试化合物-非特异性数)/(总数-非特异性数)]其中“测试化合物”指重复测试的每分钟的平均计数，“非特异性数”指当不加入CDK1/细胞周期蛋白B等时的每分钟平均计数，而“总数”指不加入化合物时每分钟的平均计数。IC50值为在所述测试条件下放射标记的蛋白激酶诱导的结合减少50％的测试化合物的浓度。由下式计算抑制剂常数Ki的值Ki＝IC50/(1+[S]/Km)，其中[S]是ATP浓度，并且Km为Michaelis常数。
使用96-孔聚丙烯板(BD Biosciences，Bedford，MA)进行均匀时间分辨荧光(HTRF)激酶检测。将试验化合物首先溶解于DMSO中，然后稀释于激酶检测缓冲液1(25mM HEPES，pH7.0，8mM MgCl2，1.5mM DTT和162μM ATP)，其中DMSO浓度为15％。将CDK1/细胞周期蛋白B酶稀释于激酶检测缓冲液2(25mM HEPES，pH 7.0，8mM MgCl2，0.003％吐温20，0.045％BSA，1.5mM DTT和0.675μM Rb蛋白)。为了引发激酶反应，将20μL的化合物溶液与40μL的CDK1/细胞周期蛋白B溶液在检测板中混合，其中CDK1/细胞周期蛋白B和Rb的最终浓度分别为0.1μg/mL和0.225μM，并且在37℃温育30分钟。将15μL的抗-磷酸-Rb(Ser 780)抗体(CellSignaling Technology，Beverly，MA)在抗体1∶7692稀释的条件下加入。于37℃继续温育25分钟，然后，将LANCE Eu-W1024标记的抗兔IgG(1nM，PerkinElmer，Wellesley，MA)和共轭到SureLight-Allophucocyanin的抗-His抗体(20nM，PerkinElmer，Wellesley，MA)加入至孔中。在37℃继续温育40分钟。将温育完成后，将35μl的反应混合物转移到新鲜的384-孔黑聚苯乙烯板(Corning Incorporated，Corning，NY)中，并且在340nm的激发波长和665/615nm的发射波长下在荧光板读出器上读出。
为了测定CDK2活性的抑制，将类似于CDK1/细胞周期蛋白B检测中所述的程序用于CDK2/细胞周期蛋白E活性，不同之处仅在于，在检测中使用CDK2/细胞周期蛋白E复合物。
显示出适于本发明主题的化合物的CDK1/细胞周期蛋白B活性和CDK2/细胞周期蛋白E活性的Ki值的范围为约0.001μM至约5.000μM。一些实施例的具体数据如下
权利要求
1.一种式I化合物 其中R1选自氢，低级烷基，羟基-低级烷基，环烷基，低级烷氧基-低级烷基和R2-(X)n；X选自低级亚烷基，羟基-低级亚烷基，亚环烷基，低级烷氧基-低级亚烷基和低级烷酰氧基-低级亚烷基；R2是 并且 选自芳基环，含有3至5个碳原子和1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的4至6元杂环烷基环；和含有1至2个选自氧、硫和氮的杂原子的5或6元杂芳环；R5和R6独立地选自羟基，羟基-低级烷基，氢，低级烷基，卤素，全氟低级烷基和低级烷氧基；并且n是0至1的整数；或者其中R2含有杂芳环中的氮的化合物的N-氧化物，其中R2含有杂环烷基环或杂芳环中的硫的砜；或者其药用盐。
2.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式I-A 其中R1′选自氢，低级烷基，羟基低级烷基，低级烷氧基-低级烷基和环烷基；或者其药用盐。
3.权利要求2的化合物，其中R1’是氢或低级烷基。
4.权利要求3的化合物，其中所述化合物是2-氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
5.权利要求3的化合物，其中R1’是环烷基。
6.权利要求5的化合物，其中所述化合物是2-环丙基氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
7.权利要求2的化合物，其中R1’是羟基-低级烷基或低级烷氧基低级烷基。
8.权利要求7的化合物，其中所述化合物是2-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
9.权利要求7的化合物，其中所述化合物是2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
10.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式I-B 其中R1″是R2-(X)n-；并且R2、n和X如权利要求1中所定义；或者其药用盐。
11.权利要求10的化合物，其中芳基是苯基。
12.权利要求11的化合物，其中n是1。
13.权利要求12的化合物，其中X是亚环烷基。
14.权利要求13的化合物，其中所述亚环烷基是亚环丙基。
15.权利要求14的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
16.权利要求15的化合物，其中所述化合物是2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
17.权利要求12的化合物，其中X是低级烷酰氧基-低级亚烷基。
18.权利要求17的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
19.权利要求18的化合物，其中所述化合物是乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯。
20.权利要求12的化合物，其中X是低级亚烷基。
21.权利要求20的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
22.权利要求21的化合物，其中R5和R6是氢。
23.权利要求21的化合物，其中R5独立地为卤素，三氟甲基或低级烷基；并且R6是氢，卤素，三氟甲基或低级烷基。
24.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
25.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
26.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
27.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
28.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
29.权利要求20的化合物，其中R2是 并且 是含有1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的杂芳环；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
30.权利要求29的化合物，其中所述杂芳环含有1个杂原子。
31.权利要求30的化合物，其中所述杂原子是硫。
32.权利要求30的化合物，其中R5和R6是氢或低级烷基。
33.权利要求32的化合物，其中所述化合物是5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基-甲基)-氨基]-噻唑-4-酮。
34.权利要求32的化合物，其中所述化合物是2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
35.权利要求29的化合物，其中所述杂芳环含有两个杂原子。
36.权利要求34的化合物，其中所述两个杂原子都是氮。
37.权利要求36的化合物，其中R5和R6各自选自氢和低级烷基。
38.权利要求37的化合物，其中所述化合物是2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
39.权利要求12的化合物，其中X是羟基-低级亚烷基。
40.权利要求39的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
41.权利要求40的化合物，其中R5和R6各自选自卤素，三氟甲基，氢和低级烷基。
42.权利要求41的化合物，其中所述化合物是2-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
43.权利要求41的化合物，其中所述化合物是2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
44.权利要求11的化合物，其中n是0；和R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
45.权利要求44的化合物，其中R5和R6各自选自氢，低级烷基和低级烷氧基。
46.权利要求45的化合物，其中所述化合物是2-(2-甲氧基-苯基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
47.根据权利要求1的式I化合物的制备方法，其中a)将式II化合物 在式III-A化合物存在下进行反应， 得到式IV化合物 b)将所述式IV化合物在甲基化试剂存在下进一步反应，得到式V化合物 c)将所述式V化合物在式VI的胺的存在下进一步反应R1-NH2VI，其中R1具有权利要求1中给出的含义，得到相应的式I化合物；和d)将所述式I化合物从反应混合物中分离，并且如果需要，转化成药用盐。
48.根据权利要求47的方法，其中反应步骤b)的甲基化试剂是碘代甲烷。
49.根据权利要求1的式I化合物，其用于治疗癌症，特别是乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌。
50.根据权利要求1的式I化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗癌症，特别是乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌。
51.一种药物组合物，其包含根据权利要求1的式I化合物，以及药用辅剂。
52.根据权利要求51的药物组合物，其用于治疗癌症，特别是乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌。
53.采用根据权利要求47的方法制备的根据权利要求1的式I化合物。
54.基本上如上所述的新型化合物、组合物、方法和用途。
全文摘要
本发明公开了通式(I)的吖吲哚噻唑啉酮衍生物，该化合物证明具有CDK1和CDK2抗增殖活性，并且可以用作抗癌剂；还公开了制备所述化合物以及含有它们的药物的方法。
文档编号A61P35/00GK101039943SQ200580034649
公开日2007年9月19日 申请日期2005年10月5日 优先权日2004年10月14日
发明者陈少清, 阿奇犬塔罗·西杜瑞 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
技术领域：
本发明的领域涉及吖吲哚噻唑啉酮衍生物，其证明具有CDK1和CDK2抗增殖活性，并且可以用作抗癌剂。
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)是在调节细胞周期不同阶段之间的过渡中起关键作用的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，所述的过渡如在从G1中的静止段(对于新一轮的细胞分裂在有丝分裂和DNA复制开始之间的间隔)到S(活跃DNA合成期间)的进展，或者从G2至M阶段的进展，其中发生活跃的有丝分裂和细胞分裂(参见，例如，在Science，2741643-1677(1996)；和Ann.Rev.Cell Dev.Biol，13261-291(1997)中编辑的论文)。通过调节的细胞周期蛋白亚单元(例如，细胞周期蛋白A、B1、B2、D1、D2、D3和E)和催化的激酶亚单元(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5和CDK6)的缔合形成CDK配合物。如名称所暗示，CDKs对细胞周期蛋白亚单元显示绝对的相关性，以将它们的目标基质磷酸化，并且不同的激酶/细胞周期蛋白对起着通过细胞周期的具体阶段调节进展的功能。
如上所见，这些蛋白激酶是一类调节各种细胞功能的蛋白(酶)。这是通过在蛋白底物上的特定的氨基酸的磷酸化，从而导致底物蛋白的构象改变而完成的。构象变化调整底物的活性或其与其它结合伙伴相互作用的能力。蛋白激酶的酶活性是指激酶将磷酸基加到底物上的速率。例如，这可以通过测定转变为产物的底物的量随时间的变化来测量。底物的磷酸化发生在蛋白激酶的活性位点。
考虑到上述性质，这些激酶在导致细胞增殖、分化和迁移的生长因子信号转导的传播中扮演重要的部分。成纤维细胞生长因子(FGF)和脉管内皮生长因子(VEGF)已被公认为肿瘤促进血管形成的重要介体。VEGF根据通过两种高亲合力受体发信号而活化内皮细胞，所述的两种高亲合力受体中的一种是含激酶插入域的受体(KDR)(参见，Hennequin L.F.等，J.Med.Chem.45(6)1300(2002)。FGF通过FGF受体(FGFR)发出信号而活化内皮细胞。实体瘤依赖新血管的形成(血管形成)而生长。因此，干扰生长信号转导并且由此减慢或防止血管形成的受体FGFR和KDR的抑制剂在预防和治疗实体瘤中是有用的药剂(参见，Klohs W.E.等，Current Opinion inBiotechnology，10544(1999))。
由于CDKs如CDK1和CDK2充当细胞分裂的一般活化剂，所以可以将CDK1和CDK2的抑制剂用作抗增殖药剂。可以将这些抑制剂用于开发在抑制失控细胞周期进展中的治疗干涉。
根据本发明，发现了式I化合物， I其中R1选自氢，低级烷基，羟基-低级烷基，环烷基，低级烷氧基-低级烷基和R2-(X)n；X选自低级亚烷基，羟基-低级亚烷基，亚环烷基，低级烷氧基-低级亚烷基和低级烷酰氧基-低级亚烷基；R2是 ；和 选自芳基环；含有3至5个碳原子和1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的4至6元杂环烷基环；和含有1至2个选自氧、硫和氮的杂原子的5或6元杂芳环；
R5和R6独立地选自羟基，羟基-低级烷基，氢，低级烷基，卤素，全氟低级烷基和低级烷氧基；和n是0至1的整数；或其中R2含有杂芳环中的氮的化合物的N-氧化物，其中R2含有杂环烷基环或杂芳环中的硫的砜；或者其药用盐，抑制CDKs活性，特别是抑制CDK1和CDK2活性。
本发明的药剂和含有这些药剂的药物组合物可以用于治疗与不受控制的或不需要的细胞增殖有关的各种疾病或疾病状态，如癌症、自身免疫疾病、病毒性疾病、真菌病、神经变性疾病和心血管疾病。
抑制和/或调节CDKs的活性，特别是CDK1和CDK2的活性，使这些式I化合物和含有这些化合物的组合物可以用于治疗由激酶活性介导的疾病，特别是作为治疗癌症，更特别是治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌中的抗肿瘤药剂。
如本文中所指出的，式I化合物是可能的抗增殖药剂，并且可以用于介导和/或抑制CDKs，特别是CDK1的活性，从而提供用于治疗与不受控制或异常的细胞增殖有关的癌症或其它疾病的抗肿瘤药剂。
其中，优选的式I化合物是式I-A的化合物I-A其中R1′是氢，低级烷基，羟基-低级烷基，低级烷氧基-低级烷基或环烷基；或其药用盐；和式I-B的化合物
I-B其中R1″是R2-(X)n，并且R2、X和n如上；或其中R2含有杂芳环中的氮的化合物的N-氧化物，其中R2含有杂环烷基环或杂芳环中的硫的砜；或者其药用盐。
在其中R2和X是含有芳基部分的取代基的化合物I和I-B中，优选的芳基部分是苯基。
在本发明的优选实施方案中，提供式I-A化合物，其中R1′是氢，羟基-(C1-C6)烷基或环丙基。
在本发明的另一优选实施方案中，提供式I-B化合物，其中n是1，X是(C1-C6)亚烷基，羟基-(C1-C6)亚烷基，(C1-C6)烷酰氧基-(C1-C6)亚烷基，或亚环丙基；R2是噻吩基，吡嗪基或苯基；并且R5和R6独立地选自氢，卤素和(C1-C6)烷基。
如在本文中使用的，卤素包括全部四种卤素如氟、氯、溴和碘。特别优选氟和氯。
如在说明书中所使用的，术语″低级烷基″单独或组合地是指含有1至6个碳原子的一价直链或支链饱和烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
术语″环烷基″是指环状低级烷基取代基，其为一价未取代的3至6元饱和碳环烃环。其中，优选的环烷基取代基是环丙基、环丁基、环己基等，特别优选环丙基。
术语″低级烷氧基″是指由含有1至6个碳原子的低级烷基形成的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。
术语″芳基″是指一价单-或双环未取代的芳族烃环，如苯基或萘基，其中优选苯基。
术语″杂环烷基″是指含有3至5个碳原子和1个或2个选自氧、氮或硫中的杂原子的4至6元单环饱和环。其中，优选的杂环烷基包括吗啉基、噻喃基或四氢吡喃基。
术语″杂芳环″是指含有4至5个碳原子和1至2个选自氧、氮或硫中的杂原子的一价5元或6元单环杂芳环。其中，优选的杂芳族基包括噻吩基、噻唑基、吡啶基、呋喃基等。
术语″低级亚烷基″表示含有1至6个碳原子的二价饱和直链或支链烃。
术语“低级烷酰氧基”表示含有2至6个碳原子的饱和脂肪羧酸的一价残基，其中羧基(-COOH)部分上的氢原子已经被除去。其中，优选的低级烷酰氧基包括乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基。
术语“亚环烷基”表示二价环-低级亚烷基，其是二价未取代的3至6元饱和碳环烃环。其中，优选的亚环烷基取代基是二价环丙基和二价环丁基。
术语“低级烷酰氧基低级亚烷基”表示被低级烷酰氧取代的、优选单取代的低级亚烷基取代基，其中低级烷酰氧基如上定义。
术语“低级烷氧基-低级亚烷基”表示被低级烷氧基取代的、优选单取代的如此前指明的低级亚烷基取代基，其中低级烷氧基如上定义。
术语“羟基-低级亚烷基”表示被羟基取代的、优选单取代的低级亚烷基取代基。
术语″芳氧基″表示芳氧基取代基，其中芳基如上。优选的芳基为苯基，并且优选的芳氧基为苯氧基。
术语″全氟低级烷基″是指其中低级烷基的全部氢被氟所取代或代替的任何低级烷基。其中，优选的全氟低级烷基为三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基等，其中特别优选三氟甲基。
术语″药用盐″是指由合适的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成的保留了式I、I-A和I-B的化合物的生物效力和性质的常规酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐的实例包括从无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨磺酸、磷酸和硝酸衍生的那些盐，和从有机酸如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等衍生的那些盐。碱加成盐的实例包括从铵、钾、钠和季铵氢氧化物如氢氧化四甲铵衍生的那些盐。为了获得改善的化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性，药物化合物(即，药)形成盐的化学修饰是药物化学家公知的技术。参见，例如H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(第6版，1995)第196和1456-1457页。
根据本发明，可以由式II化合物制备式I化合物， II式II化合物经由以下的反应方案1转化成式I化合物，其中R1如上。
方案1根据本发明，式II化合物通过Knoevenegel反应与式III-A化合物[绕丹宁(2-硫代-噻唑啉-4-酮)]反应，以制备式IV化合物。在进行此缩合时，可以采用在进行Knoevenegel反应时常规的任何条件。通常，此反应在碱金属乙酸盐和乙酸存在下、在回流温度进行。在此合成的下一步骤中，用甲基化试剂处理所得到的式IV的取代噻唑烷，以甲基化在式IV化合物上的硫代基团，制备式V化合物。优选的甲基化试剂是碘代甲烷。此反应在有机胺碱如二异丙基乙胺(DIEA)中进行。在进行此反应时，温度和压力不是关键的，并且此反应可以在室温和大气压下进行。事实上，在进行此反应时，可以使用在甲基化硫代基团中常规的任何条件。
在此合成的下一步骤中，式V化合物与式VI化合物反应，以制备式I化合物。式VI化合物为胺，并且在进行此反应时，可以使用在甲硫基的胺取代中常规使用的任何方法。根据一个实施方案，通过在常规溶剂如乙腈存在下，将式VI化合物与式V化合物反应，来进行此取代。通常，此反应在胺碱如二异丙基乙胺存在下进行。
另一方面，式I化合物可通过式II化合物与式VII化合物反应来制备 VII其中R1如上。
式VII化合物与式II化合物制备式I化合物的反应是在封闭体系中，在50℃至200℃的高温，在高度沸腾的有机溶剂如苯或甲苯中进行的。如此，该反应在高温和高压下进行。另外，该反应理想地适用于制备其中R1是氢的式I化合物。式VII化合物可以通过用式III-A化合物与式VI化合物反应的直接置换而直接形成R1-NH2VI其中R1如上。该置换反应通常在用于式IX的噻吩基化合物中的噻吩基的活化剂存在下和胺碱存在下进行。其中，优选的活化剂是氯化汞。此反应在惰性有机溶剂中进行。可以利用任何常规的惰性有机溶剂，如乙腈、二氯甲烷等。在进行此反应时，使用胺碱，如二异丙基乙胺。在进行此反应时，温度和压力不是关键的，并且此反应可以在室温和大气压下进行。在进行此反应时，可以采用用胺置换噻吩基的任何常规方法。
在其中R1为X、n为1，并且X为羟基低级亚烷基的式VI化合物中，这些化合物可以由相应的氨基酸或氨基酸酯通过用碱金属硼氢化物还原而制备。另一方面，这些羟基低级亚烷基化合物可以通过用氢化铝锂还原相应的氰基羧酸酯而制备。还原反应将氰基还原为氨基，并且将酯还原为羟基。此还原应当在式VI化合物与式V化合物反应之前发生。
在环 是形成环 的含氮环中的氮原子的N-氧化物的情况下，这些N-氧化物可以由叔环氮原子通过氧化而形成。可以采用将叔氮原子氧化为N-氧化物的任何常规方法。优选的氧化剂为间氯过苯甲酸(MCPBA)。
式I-A化合物包括其中R1’是氢的化合物。式I-A化合物的另一类化合物是其中R1’是环低级烷基、优选环丙基的那些化合物。式1A化合物的另一类化合物是其中R1’是羟基低级烷基或低级烷氧基低级烷基、特别优选羟基低级烷基的那些化合物。
在其中R1”是R2-(X)n的式I-B化合物中，n可以是0或1。n为0时，优选的一类化合物是其中 是苯基的那些化合物。优选的其中n是0并且R2是苯基的一类化合物是其中R5和R6或者都是氢，或者R5和R6中一个是氢而另一个是低级烷氧基或低级烷基的那些化合物。
另一方面，优选的另一类式I-B化合物是其中R1”是R2-(X)n并且n是1的那些化合物。这类化合物中包括其中X是环低级亚烷基、优选亚环丙基的那些化合物。至于其中n是1并且X是环低级亚烷基的这类化合物，包括其中 是苯基并且R5和R6都是氢，或者R5和R6中一个是氢而另一个是低级烷基的那些化合物。其中R2是苯基的另一类式I-B化合物为其中R5和R6是氢或卤素并且R5和R6中至少一个是卤素的那些化合物。其中n是1的另一类式I-B化合物为其中X是低级烷酰氧基低级亚烷基的那些化合物。至于其中R1”是R2-(X)n、n是1并且X是低级烷酰氧基低级亚烷基的这类化合物，其为其中R2是 并且 是苯基的的那些化合物，是其中R5和R6都是氢，或者R5和R6中一个是氢而另一个是低级烯基或卤素的那些化合物。根据本发明的另一实施方案是那些其中n是1并且X是低级烯基的优选的式I-B化合物。其中，这类化合物的优选实施方案是其中R2是 并且 是苯基的化合物。至于本发明的该实施方案，优选实施方案是其中R5和R6都是氢，或者R5和R6是氢或低级烷基或卤素，并且R5和R6中至少一个不是氢的那些化合物。其中n是1并且X是低级亚烷基的另一类式I-B化合物是其中 是含有1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的杂芳环的那些化合物。其中 是杂芳环的这类化合物中优选的化合物是那些含有1个杂原子、优选硫的杂芳环。在这种情况下，R5和R6可以都是氢，或者R5和R6中的一个可以是氢而另一个是卤素或低级烷基。
其中n是1的式I-B化合物的另一类化合物是其中X为羟基-低级亚烷基的那些化合物。至于其中X是羟基-低级亚烷基的这类化合物，为其中 是苯环的那些化合物。这种优选的化合物包括其中R5和R6都是氢的那些化合物和其中R5和R6是氢、低级烷基、低级烷氧基或卤素，并且R5和R6中至少一个不是氢的那些化合物。
根据本发明的药物组合物可以备选地或除了式I化合物外，还含有作为活性成分的药用前药、药学活性代谢物和这些化合物和代谢物的药用盐。这些化合物、前药、多聚体、盐和代谢物有时在本文中统称为″活性药剂″或″药剂″。
在药剂是固体的情况下，本领域的技术人员应当理解，本发明的化合物和盐可以以不同的晶体或多晶型形式存在，并且其全部都将在本发明和限定式的范围内。
可以将治疗有效量的本发明活性药剂用于治疗由蛋白激酶CDK1的调制或调节介导的疾病。″有效量″意指药剂显著地抑制增殖和/或防止真核细胞如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞去分化的量，并且对于所指示的效用如特定治疗处理是有效的。
给定药剂与这样量相对应的量将根据因素如具体的化合物、疾病状态及其严重性、受试者或需要这种治疗的宿主的特性(例如，重量)而变化，但仍然可以根据此情形周围的具体环境，包括例如给药的具体药剂、给药路径、待治疗的症状以及将治疗的受试者或宿主，以本领域中已知的方式常规地确定。″治疗″意指至少减轻受试者如哺乳动物(例如，人类)中至少部分地由CDK1蛋白激酶的活性而影响的疾病状态，包括防止疾病状态在哺乳动物中发生，特别是当发现哺乳动物倾向于具有该疾病状态而尚未诊断为具有该疾病状态时；调节和/或抑制疾病状态；和/或缓和该疾病状态。
本发明还涉及通过给药本发明的药剂而调节或抑制例如哺乳动物组织中的蛋白激酶CDK1活性的方法。作为抗增殖剂的药剂的活性可以容易地由已知的方法测量，例如通过在MTT检测中使用全细胞培养来测量。可由本领域技术人员可以获得的任何方法测量作为CDK1蛋白激酶活性调节剂的本发明药剂的活性，包括体内和/或体外检测。用于活性测量的适宜检测的实例包括在以下文献中所述的那些国际公布号WO 99/21845；Parast等，Biochemistry，37，16788-16801(1998)；Connell-Crowley和Harpes，Cell CycleMaterials and Methods，(Michele Pagano编辑，Springer，Berlin，Germany)(1995)；国际公布号WO 97/34876；和国际公布号WO 96/14843。这些性质可以例如通过使用在下面的实施例中列出的一种或多种生物学试验程序进行评估。
可以将本发明的活性药剂配制成如下所述的药物组合物。本发明的药物组合物包含有效调制、调节或抑制量的式I化合物和惰性的、药用载体或稀释剂。在药物组合物的一个实施方案中，提供有效水平的本发明药剂，以提供包括抗增殖活性的治疗益处。″有效水平″是指其中增殖得到抑制或控制的水平。将这些组合物以适宜于给药模式如肠胃外或口服给药的单位剂量形式制备。
本发明的药剂可以以常规剂量形式给药，常规剂量形式是通过将治疗有效量的作为活性成分的药剂(例如，式I的化合物)与适宜的药学载体或稀释剂根据常规程序制备的。这些程序可以包括适宜于所需制剂的混合、粒化和压实或溶解所述成分。
所采用的药学载体可以是固体或液体。示例性的固体载体是乳糖、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示例性的液体载体是糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，载体或稀释剂可以包括本领域已知的延时或缓释材料，如单独的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，或含有蜡、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯等的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
可以采用各种药物形式。因此，如果使用固体载体，制剂可以形成片剂，以粉末或丸剂形式放置于硬明胶胶囊中，或者为锭或锭剂形式。固体载体的量可以变化。如果使用液体载体，制剂形式可以是糖浆、乳剂、软明胶胶囊、在安瓿或小瓶中的可无菌注射的溶液或混悬液或非水性液体混悬液。
为了得到稳定的水溶性剂量形式，可以将本发明药剂的药用盐溶解于有机或无机酸的水溶液中。如果不能得到可溶盐形式，则可以将药剂溶解于适宜的共溶剂或共溶剂的组合中。
应当理解，在本发明的组合物中使用的药剂的实际剂量将根据所使用的具体复合物、配制的具体组合物、给药的模式和将治疗的具体位置、宿主和疾病而变化。对于给定的一组症状的最佳剂量可以由本领域的技术人员考虑到药剂的实验数据，使用常规的剂量确定试验而确定。
本发明的组合物可以以用于制备药物组合物的通常已知的方式制备，例如使用常规的技术如混合、溶解、粒化、制糖丸、研磨、乳化、制胶囊、捕集或冻干。可以以常规方式使用一种或多种生理学上可以接受的载体配制药物组合物，所述的载体可以选自有利于将活性化合物加工成为药学上可以使用的制剂的赋形剂和辅剂。
对于口服给药，可以容易地将所述的化合物与本领域中已知的药用载体组合来配制该化合物。这些载体可以将本发明的化合物配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂、混悬液等，用于由受治患者经口摄入。口服使用的药物制剂可以通过以下方法得到使用与活性成分(药剂)混合的固体赋形剂，任选研磨得到的混合物，并且如果需要，在加入适宜的辅剂之后加工颗粒的混合物，以得到片剂或糖衣核。
下面将由实施例进一步说明本发明，但这些实施例不意在限制本发明的范围。除非明确另外声明，温度以摄氏度(℃)表示。
实施例实施例15-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮 a)3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶的制备 在室温向7-吖吲哚(5g，42.2mmol)的THF(400mL)溶液首先加入固体N-溴琥珀酰亚胺(8g，45.0mmol)，然后加入20滴浓硫酸。在搅拌的同时，在2天的过程中形成某一悬浮液。将混合物用饱和氯化铵溶液稀释并且分离两层。水层用乙酸乙酯(4×150mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂并且在真空下除去溶剂，得到粗的黄色固体。将该固体在热条件下溶解在乙酸乙酯(～100mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体，并且用乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出6.2g(75％产率)的3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶，为黄色固体EI-HRMS m/e C7H5BrN2(M+)的计算值195.9636，实测195.9636。
b)1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛的制备
在-70℃向3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(9.85g，50.0mmol)的THF(300mL)悬浮液中滴加2.5M的正丁基锂的己烷(42mL，105.0mmol，2.1当量)溶液。在加入过程中反应混合物的温度升高到-60℃并且变为澄清溶液。让得到的砖红色溶液在1h内缓慢升温到-10℃，然后在此温度搅拌4h。再次将混合物冷却到-70℃，并且滴加二甲基甲酰胺(8.5mL，110.0mmol)的THF(30mL)溶液。加完后，让混合物温热至室温并且搅拌15h。然后，将混合物用饱和氯化铵溶液稀释并且分离两层。水层用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂并且在真空下除去溶剂，得到粗的棕色固体，将其在热条件下溶解在乙酸乙酯(～70mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体并且用乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出6.05g(83％产率)的1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛，为黄色固体EI-HRMS m/e C8H6N2O(M+)的计算值146.0480，实测146.0478。
c)1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛的一步制备 在室温向1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(11.80g，100mmol)在含有33％乙酸(200mL)的水的悬浮液中加入六甲撑四胺(16.8g，120mmol)。将该溶液加热到110-120℃(油浴温度)并且搅拌15h。然后，将反应混合物冷却到室温，在此期间形成大量固体。将此悬浮液倒入含有冰的烧杯(2L)中并且用水(50mL)冲洗烧瓶。然后用饱和碳酸氢钠溶液缓慢中和。在中和后，通过过滤收集固体并且用水洗涤。在空气中干燥后，分离出9.5g(65％产率)的1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛，为白色固体EI-HRMS m/e C8H6N2O(M+)的计算值146.0480，实测146.0478。
d)2-[(噻吩-2-基-甲基)-氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向噻吩-2-基-甲胺(22.63g，200mmol)和绕丹宁(13.32g，100mmol)在乙腈(200mL)中的悬浮液中加入二异丙基乙胺(DIPEA)(34.8mL，45.0mmol)。然后，在2分钟内得到澄清溶液，并且将该溶液冷却到0℃。向该溶液中在15分钟内分3次加入氯化汞(27.15g，100mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，用二氯甲烷(500mL)和甲醇(1.0L)洗涤。真空下除去合并的溶剂，并且将粗的残余物用水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)稀释。分离两层，水层用二氯甲烷(2×250mL)萃取。两次的有机萃取物分别用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的固体。将该固体在热条件下溶解在乙腈(～100mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体并且用冷乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出12.32g(58％产率)的2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C8H8N2OS2(M+)的计算值212.0078，实测212.0083。
e)5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮(225mg，1.06mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(193.6mg，1.35mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液中加入苯甲酸(13mg，0.11mmol)和哌啶(11uL，0.11mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出330mg(91.5％产率)的5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为灰白色固体mp243-246℃；HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值341.0526，实测341.0528。
实施例25-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮盐酸盐 HCl在室温向5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮(50mg，0.15mmol)在甲醇(2mL)中的悬浮液滴加三甲基氯硅烷(19uL，0.15mmol)。混合物1h后成为澄清溶液，并且再搅拌2h。然后，将混合物用叔丁基甲基醚(10mL)稀释。通过过滤收集得到的固体，用叔丁基甲基醚洗涤。在空气中干燥后，以盐酸盐形式分离出40mg(73％产率)的5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为无定形固体HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值341.0526，实测341.0528。
实施例32-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮
a)2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向(R)-(-)-2-苯基甘氨醇(glycinol)(15.34g，111.82mmol)和绕丹宁(14.65g，110mmol)在乙腈(200mL)中的悬浮液加入DIPEA(20.03mL，115mmol)。然后，在2分钟内得到澄清溶液，将该溶液冷却到0℃。向该溶液中在15分钟内分三次加入氯化汞(31.22g，115mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(500mL)和甲醇(1.0L)洗涤。真空下除去合并的溶剂，粗的残余物用水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)稀释。分离两层，水层用二氯甲烷(2×250mL)萃取。两次的有机萃取物分别用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的黄色固体。将该固体在热条件下溶解在乙腈(～100mL)中，然后在冰箱中储存过夜。通过过滤收集固体并且用冷的乙腈(20mL)洗涤。在空气中干燥后，分离出12.99g(50％产率)的2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C11H12N2O2S(M-H2O)的计算值218.0514，实测218.0511。
b)2-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备
在室温向微波管中的2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮(100mg，0.43mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(77.3mg，0.53mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(5.2mg，0.043mmol)和哌啶(4.3uL，0.043mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出135mg(87.5％产率)的2-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体mp 317-319℃；HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值365.1067，实测365.1070。
实施例42-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向3-氯-4-氟苄胺(2.5g，15.66mmol)和绕丹宁(2g，15mmol)在乙腈(50mL)中的悬浮液加入DIPEA(5.57mL，32mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(4.34g，16mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(200mL)和甲醇(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，粗的残余物用水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)稀释。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去部分溶剂，得到大量固体。在冰箱中冷却后，通过过滤收集固体，并且用冷的乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出2.5g(64％产率)的2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C10H8ClFN2OS(M+)的计算值258.0030，实测258.0029。
b)2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-噻唑-4-酮(100mg，0.39mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(71mg，0.48mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(4.8mg，0.39mmol)和哌啶(3.9uL，0.039mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出145mg(97％产率)的2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体mp 318-320℃；HRES(+)m/e C16H12N4OS2(M+H)+的计算值387.0477，实测387.0477。
实施例52-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向(1R，2S)-2-苯基-环丙胺盐酸盐(0.85g，5mmol)和绕丹宁(0.68g，5mmol)在乙腈(20mL)中的悬浮液中加入DIPEA(2.61mL，15mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(1.35g，5mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去溶剂，粗的残余物用水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)稀释。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的残余物。使用Biotage硅胶柱色谱将其纯化，得到0.474g(42％产率)的2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-噻唑-4-酮，分离为白色无定形固体EI-HRMS m/eC12H12N2OS(M+)的计算值232.0670，实测232.0665。
b)2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-噻唑-4-酮(225mg，1.06mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(193.6mg，1.35mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(13mg，0.11mmol)和哌啶(11uL，0.11mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出330mg(91.5％产率)的2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为暗棕色固体mp 308-310℃；HRES(+)m/e C20H16N4OS(M+H)+的计算值361.1118，实测361.1122。
实施例62-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向(R)-缬氨醇(valinol)(1g，9.69mmol)和绕丹宁(1.3g，9.69mmol)在乙腈(40mL)中的悬浮液中加入DIPEA(5.06mL，29mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(2.72g，10mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去滤液，粗的残余物用水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)稀释。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的残余物。使用Biotage硅胶柱色谱纯化，获得0.82g(42％产率)的2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-噻唑-4-酮，分离为白色无定形固体EI-HRMS m/eC8H14N2O2S(M+)的计算值202.0776，实测202.0778。
b)2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-噻唑-4-酮(70mg，0.35mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(63mg，0.43mmol)在甲苯(700uL)中的悬浮液加入苯甲酸(4.3mg，0.035mmol)和哌啶(3.5uL，0.035mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。得到的固体用二氯甲烷和甲醇处理，以除去一些颜色和其它杂质。过滤固体并且在空气中干燥，得到14mg(36.7％产率)的2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体mp 269-271℃；HRES(+)m/e C16H18N4O2S(M+)的计算值331.1223，实测331.1226。
实施例7乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯 a)乙酸2-[4-氧代-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯的制备 向2-(2-(R)-羟基-1-苯基-乙基氨基)-噻唑-4-酮(6.37g，26.9mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入三乙胺(7.52mL，54mmol)，然后在5℃加入乙酰氯(2.3mL，32.28mmol)。加完后，让溶液温热至室温并且搅拌2天。将该溶液转移到分液漏斗中，用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的黄色油状物。使用Biotage(40m)硅胶柱色谱纯化该油状物，得到4.6g(61.5％产率)所需的乙酸2-[4-氧代-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯，为白色无定形固体ES-LRMS m/e C13H14N2O3S(M+)的计算值279.33，实测279.1。
b)乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯的制备 在室温向微波管中的乙酸2-[4-氧代-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯(400mg，1.43mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(77.3mg，0.53mmol)在甲苯(5mL)中的悬浮液加入苯甲酸(17.64mg，0.144mmol)和哌啶(14.5uL，0.144mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃1h。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体，并且用甲苯和二氯甲烷洗涤。在空气中干燥后，分离出313mg(53.6％产率)的乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯，为白色固体mp 243.7-246.8℃；HRES(+)m/e C21H18N4O3S(M+H)+的计算值407.1173，实测407.1172。
实施例82-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(2-氯-苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向2-氯苄胺(7.88g，55mmol)和绕丹宁(6.65g，50mmol)在乙腈(150mL)中的悬浮液加入DIPEA(19.15mL，110mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(13.5g，50mmol)在15分钟内分三次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(1L)和甲醇(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，粗的残余物用水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)稀释。振荡后，将形成的大量固体通过过滤收集，获得1.25g所需产物。然后，分离两层，乙酸乙酯层用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤后，部分除去乙酸乙酯溶液，然后在冰箱中储存。通过过滤收集得到的固体，获得2.67g所需产物。然后，水层用二氯甲烷(2×150mL)萃取。将二氯甲烷萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到粗的残余物。使用Biotage(40m)硅胶柱色谱纯化该残余物，获得4.2g(总产物8.12g，67.5％产率)的2-(2-氯苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C10H9ClN2OS(M+)的计算值240.0124，实测240.0122。
b)2-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(2-氯苄基氨基)-噻唑-4-酮(120mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(3mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(5.9uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将其悬浮在甲醇(15mL)中并且用空气加热枪加热。尽管没有完全溶解，但是将其冷却到室温，通过过滤收集固体并且用甲醇洗涤。在空气中干燥后，分离出175mg(95％产率)的2-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体。HRES(+)m/e C18H13ClN4OS(M+H)+的计算值369.0572，实测369.0574。
实施例92-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向2-氯-6-甲基苄胺(650mg，4.2mmol)和绕丹宁(559mg，4.2mmol)的乙腈(25mL)溶液加入DIPEA(1.74mL，10mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且一次加入氯化汞(1.22g，4.5mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用二氯甲烷(500mL)和甲醇(250mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物在热条件下溶解在乙酸乙酯(25mL)中，并且在冰箱中储存过夜。然后，通过过滤收集固体并且用乙酸乙酯洗涤。在空气中干燥后，分离出305mg(28.5％产率)的2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/e C11H11ClN2OS(M+)的计算值254.0281，实测254.0282。
b)2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-噻唑-4-酮(63mg，0.25mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(44mg，0.3mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(3.8mg，0.03mmol)和哌啶(3uL，0.03mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温并且用甲苯稀释。通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将这些固体悬浮在甲醇(10mL)中并且用空气加热枪加热。尽管没有完全溶解，但是将其冷却到室温，通过过滤收集固体并且用甲醇洗涤。在空气中干燥后，分离出58mg(61％产率)的2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为淡绿色固体。HRES(+)m/eC19H15ClN4OS(M+H)+的计算值383.0730，实测383.0728。
实施例102-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮
a)2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向3-甲基-噻吩-2-基甲胺(700mg，5.5mmol)和绕丹宁(732mg，5.5mmol)的乙腈(30mL)溶液加入DIPEA(1.91mL，11mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且一次加入氯化汞(1.52g，5.6mmol)。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙腈(200mL)和乙酸乙酯(250mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物溶解在二氯甲烷(150mL)中，并且用水(100mL)和盐水溶液洗涤。在用无水硫酸镁干燥后，真空下除去滤液，将残余物溶解在二氯甲烷(10mL)中并且用己烷(10mL)稀释。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用二氯甲烷洗涤。在空气中干燥后，分离出390mg (31.5％产率)的2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮，为淡黄色无定形固体EI-HRMS m/e C9H10N2OS2(M+)的计算值226.0235，实测226.0232。
b)2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备
在室温向微波管中的2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基]-噻唑-4-酮(57mg，0.25mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(44mg，0.3mmol)在甲苯(2mL)中的悬浮液加入苯甲酸(3.8mg，0.03mmol)和哌啶(3uL，0.03mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将这些固体悬浮在甲醇(10mL)中并且用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲醇洗涤。在空气中干燥后，分离出35mg(39.5％产率)的2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为无定形黄色固体。HRES(+)m/eC17H14N4OS(M+H)+的计算值355.0682，实测355.0686。
实施例112-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-噻唑-4-酮的制备
在室温向2-氯-4-氟-苄胺(4.5g，28.19mmol)和绕丹宁(3.75g，28.2mmol)的乙腈(170mL)溶液加入DIPEA(9.82mL，56.4mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(8.42g，31.02mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙腈(1.0L)和乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物溶解在乙酸乙酯(150mL)中并且用水(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤。在用硫酸镁干燥后，真空下除去滤液，并且将残余物溶解在乙酸乙酯(50mL)中。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用己烷洗涤。在空气中干燥后，分离出1.2g(16.5％产率)的2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-噻唑-4-酮，为白色无定形固体EI-HRMS m/eC10H8FN2OS2(M+)的计算值258.0030，实测258.0027。
b)2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-噻唑-4-酮(130mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(4mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(6uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。将这些固体在热条件下溶解在DMSO(5mL)中并且用乙腈(25mL)稀释。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出69mg(36％产率)的2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为无定形绿色固体。HRES(+)m/eC18H12ClFN4OS(M+H)+的计算值387.0477，实测387.0476。
实施例122-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基)-噻唑-4-酮的制备 在室温向2-(氨基甲基)-5-甲基-吡嗪(3.69g，30mmol)和绕丹宁(3.59g，27mmol)的乙腈(100mL)溶液加入DIPEA(10.45mL，60mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(8.15g，30mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌3天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤并且用乙腈(1.0L)和乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物在热条件下溶解在乙腈(25mL)中。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出1.5g(25％产率)的2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基)-噻唑-4-酮，为白色固体HRES(+)m/e C9H10N4OS(M+H)+的计算值223.0648，实测223.0648。
b)2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向微波管中的2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基)-噻唑-4-酮(112mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(4mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(6uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用甲苯洗涤。在空气中干燥后，分离出80mg(45.7％产率)的2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为无定形绿色固体。HRES(+)m/e C17H14N6OS(M+H)+的计算值351.1023，实测351.1021。
实施例132-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮
a)2-[2-(3-氟苯基)-乙基氨基]-噻唑-4-酮的制备 在室温向3-氟苯乙基胺(3.06g，22mmol)和绕丹宁(2.66g，20mmol)的乙腈(70mL)溶液加入DIPEA(7.66mL，44mmol)。然后，将该溶液冷却到0℃，并且将氯化汞(5.97g，22mmol)在10分钟内分两次加入。加完后，让悬浮液温热至室温并且搅拌2天。将得到的黑色固体通过C盐塞过滤，并且用乙腈(1.0L)和乙酸乙酯(500mL)洗涤。真空下除去合并的溶剂，将粗的残余物溶解在乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)中。分离两层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的萃取物用盐水溶液洗涤并且用无水硫酸镁干燥。在过滤干燥剂后，真空下除去滤液，并且将粗的残余物在热条件溶解在乙腈(25mL)中。在冰箱中冷却过夜后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出3.65g(76.6％产率)的2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-噻唑-4-酮，为白色固体HRES(+)m/eC11H11FN2OS(M+H)+的计算值239.0649，实测239.0647。
b)2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备
在室温向微波管中的2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-噻唑-4-酮(120mg，0.5mmol)和1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(88mg，0.6mmol)在甲苯(4mL)中的悬浮液加入苯甲酸(7.5mg，0.06mmol)和哌啶(6uL，0.06mmol)。密封微波管并且在封闭的微波中加热到150℃，历时30min。然后，将混合物冷却到室温，用甲苯(2mL)和乙腈(2mL)稀释，并且将混合物用空气加热枪加热。冷却到室温后，通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。在空气中干燥后，分离出170mg(93％产率)的2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮，为黄色固体。HRES(+)m/e C19H15FN4OS(M+H)+的计算值367.1024，实测367.1021。
实施例142-环丙基氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮的制备 将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(实施例1b，1.2g，8.22mmol)、绕丹宁(1.09g，8.22mmol)和乙酸钠(2.69g，32.8mmol)在乙酸(12mL)中的悬浮液在回流下搅拌12h。冷却到室温后，加入水(150mL)。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥，获得5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2-硫代-噻唑烷-4-酮(2.2g，100％)，为棕色固体。LC-MS m/e 262(MH+)。
将5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2-硫代-噻唑烷-4-酮(2.2g，8.22mmol)、碘代甲烷(1.05mL，16.8mmol)和DIEA(3.0mL，16.8mmol)在无水乙醇(110mL)中的悬浮液在100℃搅拌2h。在加入水(200mL)后，通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥，获得2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(1.48g，60.8％)，为灰色固体。LC-MSm/e 276(MH+)。
b)2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮的制备将2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(55mg，02mmol，实施例14a)、环丙胺(23mg，0.4mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(70uL，0.4mmol)在乙腈(1.0mL)中的悬浮液在80℃搅拌12h。冷却到室温后，通过过滤收集固体，用少许乙腈洗涤并且干燥。经快速色谱(Merck硅胶60，230-400目，0％-10％甲醇在二氯甲烷中，30min)，得到2-环丙基氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮(40mg，71％)，为淡黄色固体。LC-MS m/e 285(MH+)。
实施例152-氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲醛(实施例1b，200mg，1.4mmol)、假海硫因(159mg，1.4mmol)和乙酸钠(459mg，5.6mmol)在乙酸(2mL)中的悬浮液在回流下搅拌12h。冷却到室温后，加入水。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥，获得2-氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮(280mg，82％)，为淡黄色固体。LC-MS m/e 245(MH+)。
实施例162-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 采用类似于实施例14b中所述的程序，由2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(实施例14a)、2-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁胺和DIEA开始，得到2-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。LC-MS m/e 345(MH+)。
实施例172-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 a)(R)-2-(4-氟-苯基)-1-羟基甲基-乙胺的制备向硼氢化钠(0.54g，14.2mmol)的THF(10mL)溶液加入D-4-氟苯基甘氨酸(1.0g，5.9mmol)。冷却到0℃后，滴加碘(1.5g，5.9mmol)的THF(10mL)溶液。混合物在回流下搅拌18h。冷却到室温后，加入甲醇(7mL)以停止反应。在除去溶剂后，加入20％氢氧化钾(50mL)。将混合物搅拌4h并且用二氯甲烷(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥、过滤并且真空浓缩。经快速色谱(Merck硅胶60，70-230目，0％-10％甲醇在0％-5％甲醇在二氯甲烷中，30min)，得到(R)-2-(4-氟-苯基)-1-羟基甲基-乙胺(0.63g，69％)。
b)2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮的制备然后，采用类似于实施例14b中所述的程序，由2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(实施例14a)、2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙胺和DIEA开始，得到2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。LC-MS m/e383(MH+)。
实施例182-(2-甲氧基-苯基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮 采用类似于实施例14b中所述的程序，由2-甲硫基-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基亚甲基)-噻唑-4-酮(实施例14a)、2-(2-甲氧基-苯胺和DIEA开始，得到2-(2-甲氧基-苯基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。LC-MS m/e 351(MH+)。
实施例19药理学检测本发明化合物的药理学性能可以由许多药理学检测证实。已经用根据本发明的化合物及它们的盐进行了下面的示例性药理学检测。本发明化合物显示出CDK1/细胞周期蛋白B和CDK2/细胞周期蛋白E活性，其中Ki值低于5.0μM。这证明所有这些化合物对于抑制CDK1/细胞周期蛋白B和CDK2/细胞周期蛋白E具有活性。
为了测定CDK1活性的抑制，进行FlashPlateTM(NENTM-Life ScienceProducts)检测或HTRF检测。两种类型的激酶检测都是使用重组人CDK1/细胞周期蛋白B复合物进行的。在杆状病毒载体中的GST-细胞周期蛋白B(GST-cycB)和CDK1 cDNA克隆由Baylor College of Medicine，Houston，TX的W.Harper博士提供。在High FiveTM昆虫细胞中共表达蛋白质，如前所描述(Harper，J.W.等Cell 1993，75，805-816)，在谷胱甘肽琼脂糖树脂(Pharmacia，Piscataway，NJ)上纯化复合物。成视网膜细胞瘤(Rb)蛋白(氨基酸386-928)的6x-组氨酸标记的截短型被用作CDK1/细胞周期蛋白B检测的底物(表达质粒由英国Welwyn Garden City，Roche Research Centre，Department of Molecular Virology的Veronica Sullivan博士提供)。Rb蛋白为通过CDK1磷酸化的天然底物(参见Herwig和Strauss Eur.J.Biochem.Vol.246(1997)pp.581-601，及其中引用的参考文献)。62Kd蛋白的表达受M15E.Coli菌株中IPTG可诱导的启动子控制。通过超声处理裂解细胞，并且通过将pH 8.0的裂解产物结合到预先用1mM咪唑预处理的Ni-螯合的琼脂糖柱上，进行纯化。然后用逐渐降低至pH 6.0的pH缓冲液洗涤树脂几次，用500mM咪唑洗脱。将洗脱的蛋白用20mM HEPES pH 7.5、30％甘油、200mM NaCl和1mM DTT透析。定量纯化的Rb融合蛋白原液的蛋白浓度，分成等份，在-70℃下储存。
对于FlashPlate激酶的检测，用Rb蛋白以10μg/ml的浓度涂布96孔FlashPlate，每孔使用100μl。将该板在4℃温育过夜，或在振摇器、室温下温育3小时。为了控制非特异性磷酸化，一行孔用100μl/孔的涂布缓冲液(20mM HEPES，0.2M NaCl)涂布。然后用洗涤缓冲液(0.01％吐温20的磷酸盐缓冲盐水)冲洗该板两次。要测试的化合物(“测试化合物”)以5×最终浓度加入到孔中。通过立即加入40μl反应混合物(25mM HEPES，20mMMgCl2，0.002％吐温20，2mM DTT，1μM ATP，4nM 33P-ATP)和足够量的酶引发反应，获得高于背景至少10倍的计数。在振摇器上、室温下温育该板30分钟。将该板用洗涤缓冲液洗涤4次，密封，并在TopCount闪烁计数器(Packard Instrument Co.，Downers Grove，IL]上计数。根据下式确定Rb磷酸化抑制百分数，其为CDK活性抑制的衡量标准100×[1-(测试化合物-非特异性数)/(总数-非特异性数)]其中“测试化合物”指重复测试的每分钟的平均计数，“非特异性数”指当不加入CDK1/细胞周期蛋白B等时的每分钟平均计数，而“总数”指不加入化合物时每分钟的平均计数。IC50值为在所述测试条件下放射标记的蛋白激酶诱导的结合减少50％的测试化合物的浓度。由下式计算抑制剂常数Ki的值Ki＝IC50/(1+[S]/Km)，其中[S]是ATP浓度，并且Km为Michaelis常数。
使用96-孔聚丙烯板(BD Biosciences，Bedford，MA)进行均匀时间分辨荧光(HTRF)激酶检测。将试验化合物首先溶解于DMSO中，然后稀释于激酶检测缓冲液1(25mM HEPES，pH7.0，8mM MgCl2，1.5mM DTT和162μM ATP)，其中DMSO浓度为15％。将CDK1/细胞周期蛋白B酶稀释于激酶检测缓冲液2(25mM HEPES，pH 7.0，8mM MgCl2，0.003％吐温20，0.045％BSA，1.5mM DTT和0.675μM Rb蛋白)。为了引发激酶反应，将20μL的化合物溶液与40μL的CDK1/细胞周期蛋白B溶液在检测板中混合，其中CDK1/细胞周期蛋白B和Rb的最终浓度分别为0.1μg/mL和0.225μM，并且在37℃温育30分钟。将15μL的抗-磷酸-Rb(Ser 780)抗体(CellSignaling Technology，Beverly，MA)在抗体1∶7692稀释的条件下加入。于37℃继续温育25分钟，然后，将LANCE Eu-W1024标记的抗兔IgG(1nM，PerkinElmer，Wellesley，MA)和共轭到SureLight-Allophucocyanin的抗-His抗体(20nM，PerkinElmer，Wellesley，MA)加入至孔中。在37℃继续温育40分钟。将温育完成后，将35μl的反应混合物转移到新鲜的384-孔黑聚苯乙烯板(Corning Incorporated，Corning，NY)中，并且在340nm的激发波长和665/615nm的发射波长下在荧光板读出器上读出。
为了测定CDK2活性的抑制，将类似于CDK1/细胞周期蛋白B检测中所述的程序用于CDK2/细胞周期蛋白E活性，不同之处仅在于，在检测中使用CDK2/细胞周期蛋白E复合物。
显示出适于本发明主题的化合物的CDK1/细胞周期蛋白B活性和CDK2/细胞周期蛋白E活性的Ki值的范围为约0.001μM至约5.000μM。一些实施例的具体数据如下
权利要求
1.一种式I化合物 其中R1选自氢，低级烷基，羟基-低级烷基，环烷基，低级烷氧基-低级烷基和R2-(X)n；X选自低级亚烷基，羟基-低级亚烷基，亚环烷基，低级烷氧基-低级亚烷基和低级烷酰氧基-低级亚烷基；R2是 并且 选自芳基环，含有3至5个碳原子和1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的4至6元杂环烷基环；和含有1至2个选自氧、硫和氮的杂原子的5或6元杂芳环；R5和R6独立地选自羟基，羟基-低级烷基，氢，低级烷基，卤素，全氟低级烷基和低级烷氧基；并且n是0至1的整数；或者其中R2含有杂芳环中的氮的化合物的N-氧化物，其中R2含有杂环烷基环或杂芳环中的硫的砜；或者其药用盐。
2.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式I-A 其中R1′选自氢，低级烷基，羟基低级烷基，低级烷氧基-低级烷基和环烷基；或者其药用盐。
3.权利要求2的化合物，其中R1’是氢或低级烷基。
4.权利要求3的化合物，其中所述化合物是2-氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
5.权利要求3的化合物，其中R1’是环烷基。
6.权利要求5的化合物，其中所述化合物是2-环丙基氨基-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
7.权利要求2的化合物，其中R1’是羟基-低级烷基或低级烷氧基低级烷基。
8.权利要求7的化合物，其中所述化合物是2-((R)-1-羟基甲基-3-甲基-丁基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
9.权利要求7的化合物，其中所述化合物是2-(1-(R)-羟基甲基-2-甲基丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
10.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式I-B 其中R1″是R2-(X)n-；并且R2、n和X如权利要求1中所定义；或者其药用盐。
11.权利要求10的化合物，其中芳基是苯基。
12.权利要求11的化合物，其中n是1。
13.权利要求12的化合物，其中X是亚环烷基。
14.权利要求13的化合物，其中所述亚环烷基是亚环丙基。
15.权利要求14的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
16.权利要求15的化合物，其中所述化合物是2-((1R，2S)-2-苯基-环丙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
17.权利要求12的化合物，其中X是低级烷酰氧基-低级亚烷基。
18.权利要求17的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
19.权利要求18的化合物，其中所述化合物是乙酸2-[4-氧代-5-(1H-吡咯并[2，3，b]吡啶-3-基亚甲基)-4，5-二氢-噻唑-2-基氨基]-2-(R)-苯基-乙基酯。
20.权利要求12的化合物，其中X是低级亚烷基。
21.权利要求20的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
22.权利要求21的化合物，其中R5和R6是氢。
23.权利要求21的化合物，其中R5独立地为卤素，三氟甲基或低级烷基；并且R6是氢，卤素，三氟甲基或低级烷基。
24.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(2-氯苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
25.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(2-氯-6-甲基苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
26.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(3-氯-4-氟苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
27.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-(2-氯-4-氟-苄基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
28.权利要求23的化合物，其中所述化合物是2-[2-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
29.权利要求20的化合物，其中R2是 并且 是含有1至2个选自氧、氮和硫的杂原子的杂芳环；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
30.权利要求29的化合物，其中所述杂芳环含有1个杂原子。
31.权利要求30的化合物，其中所述杂原子是硫。
32.权利要求30的化合物，其中R5和R6是氢或低级烷基。
33.权利要求32的化合物，其中所述化合物是5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-2-[(噻吩-2-基-甲基)-氨基]-噻唑-4-酮。
34.权利要求32的化合物，其中所述化合物是2-[(3-甲基-噻吩-2-基甲基)-氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
35.权利要求29的化合物，其中所述杂芳环含有两个杂原子。
36.权利要求34的化合物，其中所述两个杂原子都是氮。
37.权利要求36的化合物，其中R5和R6各自选自氢和低级烷基。
38.权利要求37的化合物，其中所述化合物是2-[(5-甲基-吡嗪-2-基甲基)-氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
39.权利要求12的化合物，其中X是羟基-低级亚烷基。
40.权利要求39的化合物，其中R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
41.权利要求40的化合物，其中R5和R6各自选自卤素，三氟甲基，氢和低级烷基。
42.权利要求41的化合物，其中所述化合物是2-(2-羟基-1-(R)-苯基-乙基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
43.权利要求41的化合物，其中所述化合物是2-[(R)-1-(4-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
44.权利要求11的化合物，其中n是0；和R2是 是苯基；并且R5和R6具有权利要求1中给出的含义。
45.权利要求44的化合物，其中R5和R6各自选自氢，低级烷基和低级烷氧基。
46.权利要求45的化合物，其中所述化合物是2-(2-甲氧基-苯基氨基)-5-[1-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-甲-(Z)-亚基]-噻唑-4-酮。
47.根据权利要求1的式I化合物的制备方法，其中a)将式II化合物 在式III-A化合物存在下进行反应， 得到式IV化合物 b)将所述式IV化合物在甲基化试剂存在下进一步反应，得到式V化合物 c)将所述式V化合物在式VI的胺的存在下进一步反应R1-NH2VI，其中R1具有权利要求1中给出的含义，得到相应的式I化合物；和d)将所述式I化合物从反应混合物中分离，并且如果需要，转化成药用盐。
48.根据权利要求47的方法，其中反应步骤b)的甲基化试剂是碘代甲烷。
49.根据权利要求1的式I化合物，其用于治疗癌症，特别是乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌。
50.根据权利要求1的式I化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗癌症，特别是乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌。
51.一种药物组合物，其包含根据权利要求1的式I化合物，以及药用辅剂。
52.根据权利要求51的药物组合物，其用于治疗癌症，特别是乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌。
53.采用根据权利要求47的方法制备的根据权利要求1的式I化合物。
54.基本上如上所述的新型化合物、组合物、方法和用途。
全文摘要
本发明公开了通式(I)的吖吲哚噻唑啉酮衍生物，该化合物证明具有CDK1和CDK2抗增殖活性，并且可以用作抗癌剂；还公开了制备所述化合物以及含有它们的药物的方法。
文档编号A61P35/00GK101039943SQ200580034649
公开日2007年9月19日 申请日期2005年10月5日 优先权日2004年10月14日
发明者陈少清, 阿奇犬塔罗·西杜瑞 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
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