氨基磺酰吡唑类化合物及其用途的制作方法

专利名称：：氨基磺酰吡唑类化合物及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及氨基磺酰吡唑类化合物及其制备方法，该类物质可用于解热镇痛抗炎和肿瘤防治。
背景技术：
：氨基磺酰吡唑类药物作为新型解热、镇痛和抗炎药物避免了经典NSAIDs常见的胃肠道和肾脏损害作用，将治疗作用与不良作用有效分离，在很大程度上避免了传统NSAIDs所带来的胃肠道毒副反应，是抗炎药发展史上的一个新的里程碑。随着C0X-2与各器官功能及疾病关系的不断阐明，吡唑类C0X-2选择性抑制剂除镇痛、解热和抗炎用于风湿性关节炎及骨性关节炎等疾病的治疗外，近年广泛用于缺血再灌注、中风、胃腺癌、结肠癌、家族性直肠多发性息肉和老年性痴呆(AlzheimersDisease)等症的治疗中并取得一定的进展。另外，手术或创伤等组织损伤会导致炎性介质释放，从而激活外周伤害感受器，后者被激活后，伤害性信号便会经脊髓上行传导束传至丘脑和大脑皮层，这些信号在中枢进行整合后就会使人产生疼痛感觉，中枢神经系统又经下行传导通路对疼痛进行调控。选择性C0X-2抑制剂以其独特的药理机制，降低了疼痛患者的痛觉超敏，实现了治疗各种急性疼痛的良好疗效，且患者对其耐受性较好，在手术期和其他急性疼痛治疗中应用更具优势和临床价值，已成为急性疼痛患者治疗的新选择。发明人曾对氨基磺酰吡唑类药物作了研究，在多个文献中(a)ActaPharmacolSin,2005，26(12)，1505—1511；b)ActaPharmacolSin,2004,25(11),1509-1514；c)世界华人消化杂志，2008，16(2)，1287-1293；d)第四军医大学学位论文，张邦乐，2003；郝丽丽，2004；白卉，2008;e)中国新药杂志，2002;11(11)859)公开了设计合成的氨基磺酰吡唑类前体药物分子的镇痛抗炎、肿瘤防治等作用。但已报道化合物生物利用度低，水溶性差，极大限制了其应用。本发明采用前体药物方式，设计制备一类新型的氨基磺酰吡唑类化合物及其药学上可接受的盐，修饰或改变该类化合物的理化性质，并将其用于解热镇痛抗炎和肿瘤防治方面。
发明内容本发明的目的是提供一类具有药用价值的氨基磺酰吡唑类化合物或其药学上可接受的盐，进一步的目的在于提供该类化合物在解热镇痛抗炎和肿瘤防治中的应用。本发明的药物结构通式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中n为16的整数；礼为C1C9烷基，C3C7元脂肪环或杂环，卤素、硝基、C1C6烷基、C1C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含13个杂原子的芳杂环；R2为氢；R3为氢或C02H.上述化合物药学上可接受的盐(R2的氢成盐或R3中co2H成盐CO2R4)，所述盐R2，R4阳离子为碱金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子、C1C9烷基取代的铵阳离子、芳香基取代的铵阳离子或碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸或组氨酸)。其中优选化合物4-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸5N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺64-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸84-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐9和二钠盐104-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐11和二钠盐12N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐134-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-卩比唑-1-基)-苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸144-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-卩比唑-1-基)-苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐15二钠盐16N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺17N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐18N-[4-(5-(2-萘基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_丙酰胺钠盐19N-[4-(5-(2-萘基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_丁酰胺钠盐204-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸214-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐22和二钠盐234-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸244-[4-(5-(噻唑-2-基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐25和二钠盐264-[4-(5-乙基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸274-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐28和二钠盐294-[4-(5-丙基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸304-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐31和二钠盐324-[4-(5-(3-甲基丙基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸334-[4-(5-(3-甲基丙基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐34和二钠盐354-[4-(4，5-并环己基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸364-[4-(4，5-并环己基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐37和二钠盐384-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸394-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐40和二钠盐41N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺42N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺43N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺钠盐44N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺钠盐454-[4-(5-(2,4-二氯噻吩_3_基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸464-[4-(5-(2,4-二氯噻吩_3_基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐47和二钠盐484-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸494-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐50和二钠盐514-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸524-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸单钠盐53和二钠盐544-[4-((4，5)并(1，2)四氢萘基_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸554-[4-((4，5)并(1，2)四氢萘基_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐56和二钠盐57N-[4-((4，5)并(1，2)四氢萘基_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐58N-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐59N-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐60N-[4-(5-(2,4-二氯噻吩_3_基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐61N-[4-(5-甲基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐62N-[4-(5-乙基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐63N-[4-(5-丙基-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐64N-[4-(4，5-并环己基_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐65N-[4-(5-(3-甲基乙基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐66N-[4-(5-(噻唑-2-基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐67通式(I)化合物的制备方法通式⑴所示的衍生物可以用如下所示方法制备。以系列化合物2为原料(该类化合物的合成可采用发明人公开的文献方法合成，见
背景技术：
相关文献)，经与一元或二元酸或酸酐在氯化亚砜/吡啶；CH2Cl2/NEt3；或吡啶/DMAP下酰化得系列目标化合物3，3与1分子或2分子无机碱、有机碱或碱性氨基酸在溶剂甲醇、乙醇、乙醚、四氢呋喃、丙酮、水、1，4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺或上述溶剂的混合溶剂中成盐反应进一步得药学上可接受的盐。制备路线如下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>以上反应路线中的取代基R1,R2,R3的含义如前所述。本发明同时提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分与适合的药物载体或赋形剂形成的药用组合物的应用。该类化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种生理上可接受的赋形剂或载体(如生理盐水、注射用水、淀粉、糊精等)混合后，可以配制成注射、口服、口腔、舌下、植入、局部用药或直肠给药的药用组合物。本发明的氨基磺酰吡唑类衍生物或其药学上可接受的盐可以应用于解热镇痛抗炎和肿瘤防治方面。试验结果表明，上述化合物具有明显的解热镇痛抗炎和肿瘤防治作用。检测解热镇痛抗炎和肿瘤防治作用效果的体内外试验方法是本领域技术人员公知的，参见2007吕秋军化学工业出版社《新药药理学研究方法》，在此引入作为参考。而且，在相关实施方案中，预期本发明的方法与其它药物，尤其抗肿瘤疗法联合使用时，用于协同治疗或降低每种疗法剂量和药物毒副作用。具体实施例方式下面通过实施例对本发明作进一步描述，本发明范围不限于以下实例。实施例14-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸5的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>方法1在装有磁力搅拌器和回流装置的干燥的250mL圆底烧瓶中加入42.2g、丁二酸酐2.65g、三乙胺3.21g和二氯甲烷50mL,加热回流20小时(TLC检测终点)，冷却，减压蒸除溶剂二氯甲烷。残余物直接硅胶柱层析分离(二氯甲烷-甲醇为流动相)，得白色固体2.26goY=83%;mp:104°C105°C；力NMR(CD3OD,400MHz)δ7.98(d,J=8.4Hz,2H),7.857.55(m，4H)，7.527.48(m，4Η)，7.26(d，J=8.4Hz，1H)，7.06(s，1H)，2.52(s，2H),2.48(s,2H)ppm；MS(m/z,ESI+)518[M+H]541[M+Na]+；IR(KBr):3433，3055，2987，2684,2358,1629，1265cm-1.方法2在干燥的50mL圆底烧瓶中加入4，在新蒸吡啶和DMAP中110°C加热回流12小时(TLC监测反应)，分离纯化后得纯品，收率46%。实施例2N-[4-(5-(2_萘基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺6的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>参照实施例1方法，由化合物4与醋酐制得。收率78%。IR(KBr)=3401,3052,2992,2312,1415,892,708cm_1；δ7.94(d,J=8.0Hz，2H)，7.817.53(m，4H)，7.507.47(m,4H),7.25(d,J=8.OHz,1H),7.03(s,1H),2.15(s，3H)ppm；MS(m/z,ESI+)460[M+H]+.其它氨基磺酰吡唑类化合物单酸酰化产物也参照实施例1方法制得。实施例34-[4-(5-(4-甲基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸8的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>参照实施例1方法由化合物7制得。mp76-78°C；IR(KBr):3389，3055，2988，2831，2685,2305,1421,897,706cm_1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ2.14(s,3H),2.37(t,J=9.2Hz2H)，2·53(t,J=4.4Hz2Η)，6·90(s,1Η)，7.15(d,J=8.0Ηζ，2Η)，7·21(d，J=7.2Ηζ，2Η)，7.51(d，J=8.8Ηζ，2Η)，8·01(d，J=8.4Hz，2H)ppm；MS[m/z,ESI+]:504[M+Na]+。单酸酰化产物参照实施例2方法制得。实施例44-[4-(5-(2_萘基)_3_三氟甲基氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐9和二钠盐10的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>在干燥的50mL圆底烧瓶中加入化合物(5)0.22g和甲醇10mL。冰浴下将温度降至0°C-5°C，加碳酸氢钠0.073g,搅拌下反应0.5小时后撤去冰浴。常温下继续反应6小时。30°C减压蒸除溶剂。加20mL乙醚，振荡，抽滤，干燥得白色固体(10)0.19g。收率77.3%;mp3200C(分解).MS(m/z，ESI-)516[M-2Na+H]_.IR(KBr):2925，2358，2341，1645，1097，669CHT1.同上过程，加入碳酸氢钠0.03g可制得目标化合物9。MS(m/z,ESF)516[M-Na]".IR(KBr)=2918,2346,2337,1612,975cm_1.实施例54-[4-(5-(4-甲基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐11和二钠盐12的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>参照实施例4方法由化合物7制得盐11和12。盐12收率87.8%;mp2200C(分解)；IR(KBr)3448,3385,2858,2341,2560,1383,1238,1138cm-1；MS[m/z,ESF]502[M-Na]^o盐11:收率83%；IR(KBr)3398,3376,2323,1378,1234,1037cm-1；MS[m/z,ESI”480[M-Nar。实施例6N-[4-(5-(2_萘基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐13的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>参照实施例4方法，与1.2eq碳酸氢钠制得。收率76%。IR(KBr):3048，2995，2218，1416，897cm-1；MS(m/z,ESD458[M-Na]".其它氨基磺酰吡唑类化合物单酸酰化产物钠盐也参照实施例4方法制得。实施例74-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸14参照实施例1方法制得。IR(KBr):3412，3011，2985，2834，2322，1423，891，TUcm1；1HNMR[CD30D，400MHz]δ1.34(s，9H)，2.35(t，J=9.0Hz,2H),2.50(t,J=4.2Hz，2H)，6.87(s，1H)，7.15(d，J=8.0Hz，2H)，7.38(d，J=8.2Hz，2H)，7.51(d，J=8.OHz，2H)，7.97(d，J=8.4Hz，2H)ppm.实施例84-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐15二钠盐16参照实施例4方法由化合物14制得盐15和16。盐15收率91%;IR(KBr)3012,2987,2834,2322,1238,1138,712cm_1；MS[m/z,ESF]:522[Μ_Ν&Γ。盐16:收率83%；IR(KBr):3398，3376，2323，1378，1234，1037cm—1；MS[m/z,ESF]522[M-2Na+H]"0实施例9N-[4-(5_(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺17参照实施例1方法，与醋酐制得。收率82%。IR(KBr):3022，2995，2314，1416，895,712cm-1；1HWR(CDCl3，400MHz)δ1.33(s，9H)，2·14(s，3H)，6·75(s，1H)，7·16(d，2H)，7.40(d,2H)，7.51(d,2H)，7.93(d,2H)ppm.实施例ION-[4-(5-(4_叔丁基苯基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐18参照实施例4方法，与1.2eq碳酸氢钠制得。收率78%。IR(KBr)=3025,2995,2212,897cm-1；MS(m/z,ESF):464[M-Na]_.实施例114-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)_3_三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸21参照实施例1方法与丁二酸酐制得。IR(KBr):3408，3312，3065，1593，1526，1491，1326,1240,843cm-1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ2.32(t,J=8.8Hz,2H),2.51(t,J=4.OHz,2H)，2.60(s，3H)，2.85(s，3H)，6.75(s，2H)，7.12(s，1H)，7.62(d,J=8.2Hz，2H)，8.02(d,J=8.2Hz,2H)ppm.实施例124-[4-(5-(3-甲基丙基)_3_三氟甲基氢-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸33参照实施例1方法与丁二酸酐制得。IR(KBr):3412，3360，3241，3105，2938，1610，1562,1243,1155,845cm-1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ0.97(d,6H),1.92(m,1H),2.31(t,J=9.0Hz，2H)，2.50(t,J=4.3Hz，2H)，2.61(d，2H)，5·32(s，2H)，6·53(s,1H)，7·64(d，2H)，8.ll(d,2H)ppm.实施例134-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸52参照实施例1方法与丁二酸酐制得。IR(KBr):3410，3238，3102，2992，1598，1571，1481，1340，1248，1160，1133,849cm-1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ2.06(m，2H)，2·25(m,2H),2.32(t,J=9.0Hz,2H),2.38(m,2H),2.51(t,J=4.2Hz,2H),3.54(ρ,1H),6.65(s,1H)7.62(d,2H)8.10(d,2H)ppm.其它氨基磺酰吡唑类化合物单或双取代钠盐类产物(通式[1])参照实施例4方法制得，如以有机碱或碱性氨基酸代替无机碱碳酸氢钠与氨基磺酰吡唑类化合物5或7反应时可得其它药学上可接收的盐。当以Κ0Η，有机碱或碱性氨基酸代替无机碱碳酸氢钠与单钠盐反应时，可得通式[1]中所示其它混合盐类。实施例14氨基磺酰吡唑类化合物单或双取代盐类产物溶解度测定按常规药物溶解度测定方法，建立标准曲线后测定20°C下各化合物的饱和溶液浓度，并计算溶解度。成盐后各化合物溶解度明显提高，其中10的溶解度为25.6mg/mL,12的溶解度为31.5mg/mL,13的溶解度为16.9mg/mL,16的溶解度为17.3mg/mL,18的溶解度为7.8mg/mL，可方便地用于药效学评价时静脉注射。实施例15氨基磺酰吡唑类化合物药效学评价1实验材料实验中所用氨基磺酰吡唑类化合物均为实验室合成；吐温80为化学纯，天津市博迪化工有限公司；醋酸为分析纯，西安化学试剂厂；小鼠由第四军医大学动物中心提供，动物合格证号陕医动第08-014号；各细胞株购于中国科学院上海细胞库；二甲基亚砜(DMSO)，四甲基偶氮唑盐(MTT)购于Sigma公司。小牛血清购于Hyclone公司。DMEM培养基购于Gibco公司。2实验过程2.1小鼠炎症模型制作及抗炎作用评价采用小鼠耳廓肿胀模型。昆明种小鼠，随机分组，每组8只(1)模型组灌胃给予生理盐水；(2)溶媒组灌胃给予0.5%CMC-Na;(3)阳性对照灌胃给予乙酰水杨酸(Asp)200mg/kg;(4)受试药物组灌胃给予200mg/kg各受试氨基磺酰吡唑类化合物。各组小鼠均按0.2mL/10g灌胃给予生理盐水、CMC-Na溶液或受试药物-CMC-Na混悬液。给药30min后，各鼠右耳两侧均勻涂以0.03mL二甲苯，左耳作对照，2h后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下双耳，以直径9mm打孔器分别在左右耳同一部位打下圆形耳片，电子天平称重。以左、右耳片重量之差作为衡量肿胀程度的指标，抗炎作用强度以抑制率表示。2.2小鼠疼痛模型制作及镇痛作用评价昆明种小鼠，雌雄各半，体重1822g。随机分为四组模型组(空白组)、塞来昔布组(阳性对照组)、各受试氨基磺酰吡唑类化合物组，每组10只。各受试氨基磺酰吡唑类化合物用一定量吐温80润湿(23滴)，用生理盐水稀释至所需浓度0.014mol/L,给药容量为0.133mL/10g小鼠。每组给药5min后，腹腔注射1%醋酸溶液(0.2mL/只)，观察、记录各组小鼠给药后30min内的扭体(腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高)次数。2.3肿瘤细胞增殖抑制作用评价2.3.1溶液的配制DMEM配养基干粉15.6g，NaHC033.7g，青霉素100U/ml，链霉素100U/ml，加去离子水1000ml，调pH值为7.2-7.4，0.22μm微孔滤膜滤过除菌，分装后，4°C保存。0.lmol/LPBS液:NaC18.0g,KC10.2g,Na2HPO4·7Η202·16g,KH2PO4O.2g，加去离子水1000ml，溶解后分装，15磅压力灭菌30min。胰蛋白酶活力1250，用PBS磷酸盐缓冲液配制成0.25%溶液，0.22μπι微孔滤膜过滤除菌，分装后，_20°C冷冻保存。MTT溶液称取250mgMTT，加入50ml0.lmol/LPBS(ρΗ7·4)，配制成5mg/ml的贮存液，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装后，4°C保存，两周内有效。2.3.2四氮唑盐(MTT)比色方法人肝癌细胞H印G2或其它肿瘤细胞，常规培养于含10%灭活小牛血清的DMEM培养基中，置37°C，5%CO2孵箱内培养。以IXlO4/孔的密度接种!fepG2细胞于96孔培养板，置5%CO2孵箱内过夜。细胞贴壁后，吸弃上清，加入含不同浓度受试氨基磺酰吡唑类化合物的培养液共孵育。细胞分别在给药2d后每孔加20μ1MTT(5mg/ml)，继续培养4h，弃上清，加DMSO150μ1，室温震荡lOmin，使甲臜结晶完全溶解。酶联免疫检测分析仪测定570nm(A570J的吸光值。结果以mean士SD表示。用origin6.0软件非线性拟合求IC50值。3实验数据的统计学处理实验数据进行平均值和方差计算，两组间比较均采用t_检验。4实验结果上述实验结果表明，受试氨基磺酰吡唑类化合物对醋酸引起的腹痛都有很强的抑制作用，与模型组比较疗效显著(P<0.5)；而且具有明显的抗炎作用和抑制肝癌、乳腺癌和结肠癌等肿瘤细胞生长的作用，部分化合物活性如表1-表4。表1.化合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抗炎作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表2受试氨基磺酰吡唑类化合物对小鼠镇痛作用的影响(扭体法)G士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>权利要求通式(I)所示的氨基磺酰吡唑类化合物或其药学上可接受的盐类，其中n为1～6的整数；R1为C1～C9烷基，C3～C7元脂肪环或杂环，卤素、硝基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含1～3个杂原子的芳杂环；R2为氢；R3为氢或CO2H。FDA0000020334420000011.tif2.根据权利要求1所述氨基磺酰吡唑类化合物或其药学上可接受的盐类，其特征在于所述盐阳离子选自碱金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子、C1C9烷基取代的铵阳离子、芳香基取代的铵阳离子或碱性氨基酸。3.权利要求1所述化合物的合成方法，其特征在于如下通式(II)化合物与一元或二元酸或酸酐在氯化亚砜/吡啶，CH2Cl2/NEt3，或吡啶/DMAP下酰化得通式(I)所示的氨基磺酰吡唑类化合物或其药学上可接受的盐类，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>队为CIC9烷基，C3C7元脂肪环或杂环，卤素、硝基、C1C6烷基、C1C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含13个杂原子的芳杂环。4.权利要求2所述化合物药学上可接受的盐的合成方法，其特征在于通式(I)所述的化合物与无机碱、有机碱或碱性氨基酸成盐反应在溶剂甲醇、乙醇、乙醚、四氢呋喃、丙酮、水、1，4_二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺或上述溶剂的混合溶剂中进行，其中通式(I)中R2=H，R3=H或C02H。5.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于优选的化合物为4-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺4-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐和二钠盐4-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐和二钠盐N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐4-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐二钠盐N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺钠盐N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺钠盐4-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3_三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-(3-甲基丙基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(3-甲基丙基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(4，5-并环己基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(4，5-并环己基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺钠盐N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺钠盐4-[4-(5-(2，4-二氯噻吩-3-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(2，4-二氯噻吩-3-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐4-[4-((4，5)并(1，2)四氢萘基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-((4，5)并(1，2)四氢萘基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸单钠盐或二钠盐N-[4-((4，5)并(1，2)四氢萘基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐N-[4-(5-环丁基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐N-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠盐N-[4-(5-(2,4-二氯噻吩-3-基)-3-三氟甲基氢-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐N-[4-(5-甲基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐N-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐N-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐N-[4-(4，5-并环己基-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺钠盐N-[4-(5-(3-甲基乙基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠Trrt.N-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氢-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺钠Trrt.o6.一种药物组合物，其含有权利要求1、2或5中所述的通式(I)化合物或其药学上可接受的盐类，以及一种或多种药物载体或赋形剂。7.权利要求1、2或5中所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐类在解热镇痛抗炎或肿瘤防治药物方面的应用。全文摘要通式(I)所示的氨基磺酰吡唑类化合物或其药学上可接受的盐类，其中n为1～6的整数；R1为C1～C9烷基，C3～C7元脂肪环或杂环，卤素、硝基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含1～3个杂原子的芳杂环；R2为氢；R3为氢或CO2H。本发明的氨基磺酰吡唑类衍生物或其药学上可接受的盐可以应用于解热镇痛抗炎和肿瘤防治方面。文档编号A61K31/415GK101805290SQ20101013745公开日2010年8月18日申请日期2010年4月1日优先权日2010年4月1日发明者何炜,刘宏飞,周四元,张邦乐,石鑫,祝春来,袁晓峰申请人:中国人民解放军第四军医大学