一种来源中药材莲子心的总碱混合物及其提取制备方法
专利名称：一种来源中药材莲子心的总碱混合物及其提取制备方法
技术领域：
本发明涉及莲心碱，尤其是涉及一种包含莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的莲心总
碱混合物及其提取制备方法。
背景技术：
中药材莲心为睡莲科科植物莲(Nelumbo皿cifera Gaertn.)的干燥成熟种子中 的干燥幼小叶及胚根。含有生物碱(主要包括莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等)、黄酮类 等化学成分，性味苦、寒，归心、肾经；中医认为莲心有清热，固精，安神，强心，止血，涩精之 效，可治高烧引起的烦躁不安，神智不清和梦遗滑精等症.莲心中含生物碱，还可以降血压 作用，同时还具有清心、安神、交通心肾，涩精止血。用于热入心包，神昏蟾语，心肾不交，失 眠遗精，血热吐血的治疗。 莲心药材中所含的莲心总碱主要为莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等的总碱混合 物，包括莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等三大类，不同的制备方法得到的莲心总碱中的莲 心总碱含量有所不同，其中总主要三种莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱的比例也会不同。不 能符合国家对于创新性中药研究五类中药的技术要求，均不能达到开发五类以上中药新药 的要求。至于现有莲心总碱的制备方法也尚存一些不足。虽然得到莲心碱的含量很高，但 属于其中的某单一成分的生物碱含量高，并制备过程复杂、麻烦，且不适应工业化大生产。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是弥补上述现有技术的缺陷，提出一种新的可作 为研发国家规定的五类以上中药新药的中间体——莲心总碱。 本发明所要解决的另一个技术问题是弥补上述现有技术的缺陷，提出一种从中药 莲子心中提取分离莲心总碱，简单易行，特别适合于工业化大生产的上述莲心总碱的制备 方法。 本发明提供的来源中药材莲子心的总碱混合物，包括莲心碱，异莲心碱，甲基莲 心碱，其莲心总碱的含量在50% W/W以上。其中以提取物总重量计莲心碱含量不低于 5% _40%、异莲心碱含量不低于1% _20%甲基莲心碱含量不低于5% -30%。
本发明所述来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法依次包括以下步骤 (1)酸性乙醇提取将莲心生药材粉碎过2000版药典规定的二号筛成粗粉，用60% 80% V/V、 pH = 1-3的酸性乙醇回流提取2 4次，酸性乙醇用量为莲心生药量的4 6倍，提 取时间为1 3小时，将各次提取液合并； (2)过滤浓縮将提取液过滤、浓縮至无醇味，并将提取液浓縮至每ml药液相当 于1克 3克的莲心生药材，在0°C l(TC下冷藏10小时 12小时，再将浓縮液在速度为 4000 6000转/分钟下离心过滤9分钟 11分钟； (3)大孔树脂吸附将离心过滤后的浓縮液滤液上大孔树脂柱吸附富集，得到中 间体；
4
(4)洗柱先用大量水将吸附的中间体洗至无色，且再继续冲洗至无糖，还原糖反 应显阴性，再用10% 20% V/V低浓度乙醇将吸附的中间体洗至无色，除去一部分脂溶性 的杂质，然后用60% 80% V/V、pH = 1-3的酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；
(5)浓縮将用60% 80% V/V酸性乙醇洗脱下来的洗脱液中和至pH = 8_9并 浓縮至相对密度为1. 15 1. 25(60°C )的稠膏； (6)干燥在60°C 8(TC下干燥至含水量为4% 6%的干膏；
(7)粉碎、过筛，即得。 本发明所用的大孔吸附树脂柱的孔径为90A° 100A° 、比表面积为500m2/g 550m2/g 本发明所述步骤(1)是用用量为莲心生药量的6倍的70% (V/V)酸性乙醇回流提 取3次，提取时间为2小时。 本发明所述步骤(2)是将提取液浓縮至每ml药液相当于2克的莲心生药材。
本发明所述所述步骤(2)是将浓縮液在速度为5000转/分钟下离心过滤10分钟。
本发明所述所述步骤(3)所用的大孔吸附树脂柱是非极性大孔吸附树脂柱。为 D101或AB-8或NKA或HPDIOO、 HPD300或HPD100a或XAD-2或HP20。 本发明所述所述步骤(6)干燥包括常压干燥、减压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微 波干燥、真空微波干燥。 本发明与现有技术对比的有益效果是本发明的莲心总碱，包括莲心碱、甲基莲心 碱、异莲心碱等，其三项的总含量在50%以上，能达到开发五类以上口服中药新药的技术要 求。 本发明的制备方法简单，相应的生产设备易得，生产技术容易掌握，特别适合于工 业化大生产。本发明仅通过一步醇提水沉、然后上大孔吸附树脂柱富集，收集相应浓度乙醇 的洗脱液，再经浓縮、干燥、粉碎，即得莲心总碱。
具体实施例方式
下面通过具体实施方式
进一步说明本发明。 本发明提取分离所得的莲心总碱中的含量，是依据《2010版中华人民共和国药典 一部莲心药材质量标准项下P256记载的莲心药材质量标准中含量测定项下的方法进行测 定，具体操作如下含量测定照高效液相色谱法(附录VI D) 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈-O. 015mol/L十二烷基磺酸钠溶液(取十二烷基磺酸钠O. 41g，加水100ml使溶解)-冰醋 酸(56 : 43 : 1)为流动相；检测波长为282nm。理论板数按莲心碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取莲心碱高氯酸盐对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml 含25ug的溶液，即得(莲心碱重量=莲心碱高氯酸盐重量/1. 3587)。供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，精密加入2X盐 酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足 减失的重量，摇匀，精密量取续滤液5ml置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对即得。 异莲心碱(Isoliensinine) CAS :6817-41-0源植物莲子心Lotus Rhizome Node. 分子式C37H42N206，结构式 和甲基莲心碱(Neferine)，将参照一下方法进行含量测定。含量测定以Hypsil C18 (4. 6mmX 250mm， 5 y m)为固定相，甲醇-磷酸盐缓冲 液(73 : 27，pH9. 0)为流动相，检测波长为286nm及230nm，流速lmL'mirT-l。结果3种 生物碱分离良好，在20 700ii g mL"-l。线性关系良好。其24小时、48小时的RSD在 0. 24% 4. 83%间，二种生物碱的加样回收率分别为98. 4%，98. 1%。利用该方法测定了 不同批次不同方法提取的莲心总碱中的异莲心碱和甲基莲心碱二种生物碱含量，结果显示 本法简单、快捷、适合于测定莲子心中异莲心碱、甲基莲心碱的含量。 样品的前处理取本品适量Wl(约相当于莲心总碱2mg)，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加甲醇25ml，称定重量，回流提取20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液2ml，置具塞试管中，精密加入甲醇3ml，密塞， 摇匀，置58士rC水浴中加热2小时，迅速冷却，以甲醇代替供试品溶液，同法制成空白溶 液。照上述方法测定。 以下结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1第一种莲心总碱的制备方法 取干燥的莲子心药材1000g，粉碎过10目筛，每次用4倍量的酸性60%乙醇(pH =2)回流提取2次(1小时/次)，合并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积 至每ml药液相当于1克的生药，(TC以下冷藏10小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱 (D101);上柱后，使之充分吸附，先用水洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇 洗至无色，然后用80%酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，减压浓縮、干燥、粉碎，即 得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总碱为65. 2%。
实施例2第二种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用5倍量的70%酸性乙醇(ph = 2)回流提取2次(2小时 /次)，合并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的 生药，5t:下冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(AB-8);上柱后，使之充分 吸附，先用水洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用10%乙醇洗至无色，然后用70%酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、常压干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测 定，含莲心总碱为59.3%。 实施例3 :第三种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用6倍量的80%酸性乙醇回流提取2次(3小时/次)，合并 提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于3克的生药，1(TC下 冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(NKA-9);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用15%乙醇洗至无色，然后用75%酸性乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、喷雾干燥，即得蒺藜总甾体皂苷，经前述方法测定，含莲心 总碱为63. 5% 。 实施例4第四种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用5倍量的60%酸性乙醇回流提取3次(3小时/次)，合并 提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的生药，5t:下冷 藏10小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用10%乙醇洗至无色，然后用60%酸性乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、常压干燥、粉碎，即得蒺藜总甾体皂苷，经前述方法测定，含 莲心总碱为55.9%。 实施例5第五种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用6倍量的70X酸性乙醇回流提取3次(l小时/次)，合 并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于1克的生药，4t:下 冷藏IO小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(HP20);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇洗至无色，然后用75%乙醇洗脱，收集洗 脱液，回收乙醇至尽，浓縮、微波干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总碱为 62. 8%。 实施例6第六种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用4倍量的70%酸性乙醇回流提取3次(2小时/次)，合并
提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2. 5克的生药，6°CT
冷藏ll小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(SH825);上柱后，使之充分吸附，先用水
洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用10%乙醇洗至无色，然后用65%酸性乙醇洗脱，收
集洗脱液，回收乙醇至尽，继续浓縮至稠膏，微波干燥，即得蒺藜总甾体皂苷，经前述方法测
定，含莲心总碱为61.4%。 实施例7第七种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用6倍量的60%酸性乙醇回流提取4次(2小时/次)，合 并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于1. 5克的生药， 『C下冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(D101);上柱后，使之充分吸附，先 用水洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇洗至无色，然后用80%乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、真空干燥，即得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总碱为 65. 7%。 实施例8第八种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用4倍量的70%酸性乙醇回流提取4次(3小时/次)，合并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的生药，5t:下冷 藏11小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇洗至无色，然后用80%乙醇洗脱，收集洗 脱液，回收乙醇至尽，浓縮、减压至-0. 06Mpa干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测定， 含莲心总碱为64.4%。 实施例9第九种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用5倍量的80%酸性乙醇回流提取4次(1小时/次)，合并 提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的生药，1(TC下 冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(AB-8);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用15%乙醇洗至无色，然后用75%酸性乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、常压干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总 碱为61. 8%。 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，其架构形式能够灵活多变，可以派生系列产品。只是做出若干 简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。
权利要求
一种来源中药材莲子心的总碱混合物，其特征在于包括莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的三项总和的莲心总碱的含量在50％W/W以上。
2. 如权利要求1所述的来源中药材莲子心的总碱混合物，其特征在于其中以提取物总重量计莲心碱含量不低于5% _40%、异莲心碱含量不低于1% -20%甲基莲心碱含量不 低于5% -30%。
3. —种来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征在于依次包括以下步骤(1) 酸性乙醇提取将莲心生药材粉碎过2000版药典规定的二号筛成粗粉，用60% 80% V/V、pH = 1_3 的酸性乙醇回流提取2 4次，酸性乙醇用量为莲心生药量的4 6倍，提取时间为1 3 小时，将各次提取液合并；(2) 过滤浓縮将提取液过滤、浓縮至无醇味，并将提取液浓縮至每ml药液相当于1克 3克的莲心 生药材，在0°C l(TC下冷藏10小时 12小时，再将浓縮液在速度为4000 6000转/分 钟下离心过滤9分钟 11分钟；(3) 大孔树脂吸附将离心过滤后的浓縮液滤液上大孔树脂柱吸附富集，得到中间体；(4) 洗柱先用大量水将吸附的中间体洗至无色，且再继续冲洗至无糖，还原糖反应显阴性，再用 10% 20% V/V低浓度乙醇将吸附的中间体洗至无色，除去一部分脂溶性的杂质，然后用 60% 80% V/V、pH = 1-3的酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；(5) 浓縮将用60% 80% V/V酸性乙醇洗脱下来的洗脱液中和至pH = 8-9并浓縮至相对密度 为1. 15 1. 25(60°C )的稠膏；(6) 干燥在6(TC 8(TC下干燥至含水量为4% 6%的干膏；(7) 粉碎、过筛，即得。
4. 如权利要求3所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征在 于所用的大孔吸附树脂柱的孔径为90A。 100A° 、比表面积为500m7g 550m7g
5. 如权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征 在于所述步骤(1)是用用量为莲心生药量的6倍的70% (V/V)酸性乙醇回流提取3次， 提取时间为2小时。
6. 根据权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特 征在于所述步骤(2)是将提取液浓縮至每ml药液相当于2克的莲心生药材。
7. 根据权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特 征在于所述步骤(2)是将浓縮液在速度为5000转/分钟下离心过滤10分钟。
8. 根据权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特 征在于所述步骤(3)所用的大孔吸附树脂柱是非极性大孔吸附树脂柱。
9. 根据权利要求8所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征在于所述非极性大孔吸附树脂柱为D101或AB-8或NKA或HPDIOO、 HPD300或HPDlOOa或 XAD-2或HP20。
10.如权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征 在于所述步骤(6)干燥包括常压干燥、减压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微波干燥、真空微 波干燥。
全文摘要
本发明公开了一种莲心总碱，包括莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱，三项总和的莲心总碱的含量在50％(W/W)以上，以提取物总重量计莲心碱含量不低于5％-40％、异莲心碱含量不低于1％-20％甲基莲心碱含量不低于5％-30％，能达到开发五类以上中药新药的要求。本发明还公开了一种莲心总碱的制备方法，包括以下步骤酸性乙醇提取；过滤浓缩；大孔树脂吸附；洗柱；浓缩；干燥；粉碎，即得莲心总碱。大孔树脂吸附是将浓缩液滤液上孔径为90A°～100A°、比表面积为500m2/g～550m2/g的大孔吸附树脂柱富集，得到中间体。本发明制备方法简单，相应的生产设备易得，生产技术容易掌握，特别适合于工业化大生产。
文档编号A61P29/00GK101791335SQ20101014220
公开日2010年8月4日 申请日期2010年4月8日 优先权日2010年4月8日
发明者熊学敏, 蒋金龙, 蔡友良, 袁阳亮, 赵丹 申请人:江西民康制药有限公司
技术领域：
本发明涉及莲心碱，尤其是涉及一种包含莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的莲心总
碱混合物及其提取制备方法。
背景技术：
中药材莲心为睡莲科科植物莲(Nelumbo皿cifera Gaertn.)的干燥成熟种子中 的干燥幼小叶及胚根。含有生物碱(主要包括莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等)、黄酮类 等化学成分，性味苦、寒，归心、肾经；中医认为莲心有清热，固精，安神，强心，止血，涩精之 效，可治高烧引起的烦躁不安，神智不清和梦遗滑精等症.莲心中含生物碱，还可以降血压 作用，同时还具有清心、安神、交通心肾，涩精止血。用于热入心包，神昏蟾语，心肾不交，失 眠遗精，血热吐血的治疗。 莲心药材中所含的莲心总碱主要为莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等的总碱混合 物，包括莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等三大类，不同的制备方法得到的莲心总碱中的莲 心总碱含量有所不同，其中总主要三种莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱的比例也会不同。不 能符合国家对于创新性中药研究五类中药的技术要求，均不能达到开发五类以上中药新药 的要求。至于现有莲心总碱的制备方法也尚存一些不足。虽然得到莲心碱的含量很高，但 属于其中的某单一成分的生物碱含量高，并制备过程复杂、麻烦，且不适应工业化大生产。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是弥补上述现有技术的缺陷，提出一种新的可作 为研发国家规定的五类以上中药新药的中间体——莲心总碱。 本发明所要解决的另一个技术问题是弥补上述现有技术的缺陷，提出一种从中药 莲子心中提取分离莲心总碱，简单易行，特别适合于工业化大生产的上述莲心总碱的制备 方法。 本发明提供的来源中药材莲子心的总碱混合物，包括莲心碱，异莲心碱，甲基莲 心碱，其莲心总碱的含量在50% W/W以上。其中以提取物总重量计莲心碱含量不低于 5% _40%、异莲心碱含量不低于1% _20%甲基莲心碱含量不低于5% -30%。
本发明所述来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法依次包括以下步骤 (1)酸性乙醇提取将莲心生药材粉碎过2000版药典规定的二号筛成粗粉，用60% 80% V/V、 pH = 1-3的酸性乙醇回流提取2 4次，酸性乙醇用量为莲心生药量的4 6倍，提 取时间为1 3小时，将各次提取液合并； (2)过滤浓縮将提取液过滤、浓縮至无醇味，并将提取液浓縮至每ml药液相当 于1克 3克的莲心生药材，在0°C l(TC下冷藏10小时 12小时，再将浓縮液在速度为 4000 6000转/分钟下离心过滤9分钟 11分钟； (3)大孔树脂吸附将离心过滤后的浓縮液滤液上大孔树脂柱吸附富集，得到中 间体；
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(4)洗柱先用大量水将吸附的中间体洗至无色，且再继续冲洗至无糖，还原糖反 应显阴性，再用10% 20% V/V低浓度乙醇将吸附的中间体洗至无色，除去一部分脂溶性 的杂质，然后用60% 80% V/V、pH = 1-3的酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；
(5)浓縮将用60% 80% V/V酸性乙醇洗脱下来的洗脱液中和至pH = 8_9并 浓縮至相对密度为1. 15 1. 25(60°C )的稠膏； (6)干燥在60°C 8(TC下干燥至含水量为4% 6%的干膏；
(7)粉碎、过筛，即得。 本发明所用的大孔吸附树脂柱的孔径为90A° 100A° 、比表面积为500m2/g 550m2/g 本发明所述步骤(1)是用用量为莲心生药量的6倍的70% (V/V)酸性乙醇回流提 取3次，提取时间为2小时。 本发明所述步骤(2)是将提取液浓縮至每ml药液相当于2克的莲心生药材。
本发明所述所述步骤(2)是将浓縮液在速度为5000转/分钟下离心过滤10分钟。
本发明所述所述步骤(3)所用的大孔吸附树脂柱是非极性大孔吸附树脂柱。为 D101或AB-8或NKA或HPDIOO、 HPD300或HPD100a或XAD-2或HP20。 本发明所述所述步骤(6)干燥包括常压干燥、减压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微 波干燥、真空微波干燥。 本发明与现有技术对比的有益效果是本发明的莲心总碱，包括莲心碱、甲基莲心 碱、异莲心碱等，其三项的总含量在50%以上，能达到开发五类以上口服中药新药的技术要 求。 本发明的制备方法简单，相应的生产设备易得，生产技术容易掌握，特别适合于工 业化大生产。本发明仅通过一步醇提水沉、然后上大孔吸附树脂柱富集，收集相应浓度乙醇 的洗脱液，再经浓縮、干燥、粉碎，即得莲心总碱。
具体实施例方式
下面通过具体实施方式
进一步说明本发明。 本发明提取分离所得的莲心总碱中的含量，是依据《2010版中华人民共和国药典 一部莲心药材质量标准项下P256记载的莲心药材质量标准中含量测定项下的方法进行测 定，具体操作如下含量测定照高效液相色谱法(附录VI D) 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈-O. 015mol/L十二烷基磺酸钠溶液(取十二烷基磺酸钠O. 41g，加水100ml使溶解)-冰醋 酸(56 : 43 : 1)为流动相；检测波长为282nm。理论板数按莲心碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取莲心碱高氯酸盐对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml 含25ug的溶液，即得(莲心碱重量=莲心碱高氯酸盐重量/1. 3587)。供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，精密加入2X盐 酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足 减失的重量，摇匀，精密量取续滤液5ml置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对即得。 异莲心碱(Isoliensinine) CAS :6817-41-0源植物莲子心Lotus Rhizome Node. 分子式C37H42N206，结构式 和甲基莲心碱(Neferine)，将参照一下方法进行含量测定。含量测定以Hypsil C18 (4. 6mmX 250mm， 5 y m)为固定相，甲醇-磷酸盐缓冲 液(73 : 27，pH9. 0)为流动相，检测波长为286nm及230nm，流速lmL'mirT-l。结果3种 生物碱分离良好，在20 700ii g mL"-l。线性关系良好。其24小时、48小时的RSD在 0. 24% 4. 83%间，二种生物碱的加样回收率分别为98. 4%，98. 1%。利用该方法测定了 不同批次不同方法提取的莲心总碱中的异莲心碱和甲基莲心碱二种生物碱含量，结果显示 本法简单、快捷、适合于测定莲子心中异莲心碱、甲基莲心碱的含量。 样品的前处理取本品适量Wl(约相当于莲心总碱2mg)，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加甲醇25ml，称定重量，回流提取20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液2ml，置具塞试管中，精密加入甲醇3ml，密塞， 摇匀，置58士rC水浴中加热2小时，迅速冷却，以甲醇代替供试品溶液，同法制成空白溶 液。照上述方法测定。 以下结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1第一种莲心总碱的制备方法 取干燥的莲子心药材1000g，粉碎过10目筛，每次用4倍量的酸性60%乙醇(pH =2)回流提取2次(1小时/次)，合并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积 至每ml药液相当于1克的生药，(TC以下冷藏10小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱 (D101);上柱后，使之充分吸附，先用水洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇 洗至无色，然后用80%酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，减压浓縮、干燥、粉碎，即 得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总碱为65. 2%。
实施例2第二种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用5倍量的70%酸性乙醇(ph = 2)回流提取2次(2小时 /次)，合并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的 生药，5t:下冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(AB-8);上柱后，使之充分 吸附，先用水洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用10%乙醇洗至无色，然后用70%酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、常压干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测 定，含莲心总碱为59.3%。 实施例3 :第三种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用6倍量的80%酸性乙醇回流提取2次(3小时/次)，合并 提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于3克的生药，1(TC下 冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(NKA-9);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用15%乙醇洗至无色，然后用75%酸性乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、喷雾干燥，即得蒺藜总甾体皂苷，经前述方法测定，含莲心 总碱为63. 5% 。 实施例4第四种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用5倍量的60%酸性乙醇回流提取3次(3小时/次)，合并 提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的生药，5t:下冷 藏10小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用10%乙醇洗至无色，然后用60%酸性乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、常压干燥、粉碎，即得蒺藜总甾体皂苷，经前述方法测定，含 莲心总碱为55.9%。 实施例5第五种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用6倍量的70X酸性乙醇回流提取3次(l小时/次)，合 并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于1克的生药，4t:下 冷藏IO小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(HP20);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇洗至无色，然后用75%乙醇洗脱，收集洗 脱液，回收乙醇至尽，浓縮、微波干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总碱为 62. 8%。 实施例6第六种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用4倍量的70%酸性乙醇回流提取3次(2小时/次)，合并
提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2. 5克的生药，6°CT
冷藏ll小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(SH825);上柱后，使之充分吸附，先用水
洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用10%乙醇洗至无色，然后用65%酸性乙醇洗脱，收
集洗脱液，回收乙醇至尽，继续浓縮至稠膏，微波干燥，即得蒺藜总甾体皂苷，经前述方法测
定，含莲心总碱为61.4%。 实施例7第七种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用6倍量的60%酸性乙醇回流提取4次(2小时/次)，合 并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于1. 5克的生药， 『C下冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(D101);上柱后，使之充分吸附，先 用水洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇洗至无色，然后用80%乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、真空干燥，即得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总碱为 65. 7%。 实施例8第八种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用4倍量的70%酸性乙醇回流提取4次(3小时/次)，合并提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的生药，5t:下冷 藏11小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用20%乙醇洗至无色，然后用80%乙醇洗脱，收集洗 脱液，回收乙醇至尽，浓縮、减压至-0. 06Mpa干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测定， 含莲心总碱为64.4%。 实施例9第九种莲心总碱的制备方法 取莲心药材lkg，每次用5倍量的80%酸性乙醇回流提取4次(1小时/次)，合并 提取液，过滤，滤液浓縮至无醇味，并调浓縮液体积至每ml药液相当于2克的生药，1(TC下 冷藏12小时，离心过滤，取滤液上大孔吸附树脂柱(AB-8);上柱后，使之充分吸附，先用水 洗至无色、且还原糖反应显阴性时，再用15%乙醇洗至无色，然后用75%酸性乙醇洗脱，收 集洗脱液，回收乙醇至尽，浓縮、常压干燥、粉碎，即得莲心总碱，经前述方法测定，含莲心总 碱为61. 8%。 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，其架构形式能够灵活多变，可以派生系列产品。只是做出若干 简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。
权利要求
一种来源中药材莲子心的总碱混合物，其特征在于包括莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的三项总和的莲心总碱的含量在50％W/W以上。
2. 如权利要求1所述的来源中药材莲子心的总碱混合物，其特征在于其中以提取物总重量计莲心碱含量不低于5% _40%、异莲心碱含量不低于1% -20%甲基莲心碱含量不 低于5% -30%。
3. —种来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征在于依次包括以下步骤(1) 酸性乙醇提取将莲心生药材粉碎过2000版药典规定的二号筛成粗粉，用60% 80% V/V、pH = 1_3 的酸性乙醇回流提取2 4次，酸性乙醇用量为莲心生药量的4 6倍，提取时间为1 3 小时，将各次提取液合并；(2) 过滤浓縮将提取液过滤、浓縮至无醇味，并将提取液浓縮至每ml药液相当于1克 3克的莲心 生药材，在0°C l(TC下冷藏10小时 12小时，再将浓縮液在速度为4000 6000转/分 钟下离心过滤9分钟 11分钟；(3) 大孔树脂吸附将离心过滤后的浓縮液滤液上大孔树脂柱吸附富集，得到中间体；(4) 洗柱先用大量水将吸附的中间体洗至无色，且再继续冲洗至无糖，还原糖反应显阴性，再用 10% 20% V/V低浓度乙醇将吸附的中间体洗至无色，除去一部分脂溶性的杂质，然后用 60% 80% V/V、pH = 1-3的酸性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；(5) 浓縮将用60% 80% V/V酸性乙醇洗脱下来的洗脱液中和至pH = 8-9并浓縮至相对密度 为1. 15 1. 25(60°C )的稠膏；(6) 干燥在6(TC 8(TC下干燥至含水量为4% 6%的干膏；(7) 粉碎、过筛，即得。
4. 如权利要求3所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征在 于所用的大孔吸附树脂柱的孔径为90A。 100A° 、比表面积为500m7g 550m7g
5. 如权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征 在于所述步骤(1)是用用量为莲心生药量的6倍的70% (V/V)酸性乙醇回流提取3次， 提取时间为2小时。
6. 根据权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特 征在于所述步骤(2)是将提取液浓縮至每ml药液相当于2克的莲心生药材。
7. 根据权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特 征在于所述步骤(2)是将浓縮液在速度为5000转/分钟下离心过滤10分钟。
8. 根据权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特 征在于所述步骤(3)所用的大孔吸附树脂柱是非极性大孔吸附树脂柱。
9. 根据权利要求8所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征在于所述非极性大孔吸附树脂柱为D101或AB-8或NKA或HPDIOO、 HPD300或HPDlOOa或 XAD-2或HP20。
10.如权利要求3或4所述的来源中药材莲子心的总碱混合物的提取制备方法，其特征 在于所述步骤(6)干燥包括常压干燥、减压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微波干燥、真空微 波干燥。
全文摘要
本发明公开了一种莲心总碱，包括莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱，三项总和的莲心总碱的含量在50％(W/W)以上，以提取物总重量计莲心碱含量不低于5％-40％、异莲心碱含量不低于1％-20％甲基莲心碱含量不低于5％-30％，能达到开发五类以上中药新药的要求。本发明还公开了一种莲心总碱的制备方法，包括以下步骤酸性乙醇提取；过滤浓缩；大孔树脂吸附；洗柱；浓缩；干燥；粉碎，即得莲心总碱。大孔树脂吸附是将浓缩液滤液上孔径为90A°～100A°、比表面积为500m2/g～550m2/g的大孔吸附树脂柱富集，得到中间体。本发明制备方法简单，相应的生产设备易得，生产技术容易掌握，特别适合于工业化大生产。
文档编号A61P29/00GK101791335SQ20101014220
公开日2010年8月4日 申请日期2010年4月8日 优先权日2010年4月8日
发明者熊学敏, 蒋金龙, 蔡友良, 袁阳亮, 赵丹 申请人:江西民康制药有限公司
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