番茄水溶性皂苷提取物、其制备方法及其应用的制作方法

专利名称：：番茄水溶性皂苷提取物、其制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及从植物中提取的活性成分，具体涉及从新鲜番茄中提取的水溶性皂苷类提取物；本发明还涉及这种提取物的制备方法及其应用。
背景技术：
：番茄(LycopersiconesculentumMILL.)是我们日常食用最多的一年生蔬菜之一，为茄科番茄属植物。原产南美洲，我国各地均普遍栽培。番茄中主要的营养成分就是胡萝卜素中的一种-番茄红素(Lycopene)。近年来，科学家们对番茄红素健康作用的研究有了很多新的突破，已经证明的包括具有独特的抗氧化能力，可以清除人体内导致衰老和疾病的自由基；预防心血管疾病的发生；阻止前列腺的癌变进程，并有效地减少胰腺癌、直肠癌、喉癌、口腔癌、乳腺癌等癌症的发病危险(见2000年第26卷第2期《食品与发酵工业》第7579页)。番茄红素是一种脂溶性的不饱和碳氢化合物，在番茄中除了脂溶性化合物夕卜，尚存在有含量并不低的水溶性皂苷类化合物。2004年日本熊本大学药学部学者藤原章雄，野原稔弘等首先从日本产的一种称为桃太郎的番茄中分到得到两个结构复杂的留体生物碱皂苷，命名为番茄皂苷A(EsculeosideΑ)和番茄皂苷B(EsculeosideB)(Tetrahedron2004，60:49154920)。番茄皂苷A(EsculeosideA)是番茄中主要的皂苷成分，在原料中的含量为番茄红素的3倍。通过进一步药理活性研究他们发现番茄皂苷A及其苷元(EsculeogeninA)体外可抑制泡沫细胞的形成，为一种较好的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(acyl-coA:cholesterolacyltransferase，ACAT)抑制剂，是有前景的抗动脉粥样硬化症化合物(ArteriosclerThrombVascBiol.2007，27:24002406)，因此受到了国内外心血管专家的高度关注。高脂血症是我国目前动脉粥样硬化心脑血管疾病的重要危险因素之一，因此降低血浆胆固醇水平也是治疗动脉粥样硬化疾病的有效方法，降血脂药物的研究与发展越来越受到人们的重视。自20世纪80年代末，洛伐他汀(IOTastatin)首次上市以来，他汀类药物已成为广泛应用于临床的降脂药，其降脂作用是通过抑制3-羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶活性，减少甲羟戊酸的合成，使血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量降低，以达到降血脂目的(AmHeartJ.2002，144(6):10441051;AmJCardiol.2003,91(4):418424；Atherosclerosis.2002，162(2)373379)。他汀类药物一般为合成物，最近有他汀类药物对心肾肝功能影响的报道(JCardFail.1997,3(4)249254；IntJCardiol.2007，118173177)。中药及中成药在临床运用中具有有效、简便、安全、经济等特点，近年来运用中成药治疗高脂血症的方剂较多，国家法定标准的中成药明确提出降脂作用且效果较好的品种有血脂灵片、血脂康胶囊，降脂灵片，脂可清胶囊，月见草油、脂脉康胶囊，通脉降脂片等。但至今还没有关于用番茄中的水溶性皂苷类化合物为活性成分治疗高脂血症的报道。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供一种从番茄中提取的以水溶性皂苷类化合物为主要成分的番茄水溶性皂苷提取物，以及这种提取物的制备方法及其在制备治疗高血脂症的药中的应用。本发明的技术方案如下一种番茄水溶性皂苷提取物，它是取新鲜番茄洗净，打浆，酶解，酶解液过滤后经大孔树脂柱分离，体积浓度为80100%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥而制得，其中番茄皂苷A含量>17%。本发明所述的番茄水溶性皂苷提取物中，番茄皂苷A(ESCule0SideSΑ)为其中主要的水溶性皂苷成分，其化学结构式如下式所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>申请人:以番茄皂苷A纯品(99.0%)为对照，采用蒸发光散射_高效液相色谱法(ELSD-HPLC)进行检测，测得提取物中番茄皂苷A的含量>17%。所采用的色谱条件为色谱柱Z0RBAXSB-C18柱(4.6謹X150mm,5μm)；柱温30°C；流动相甲醇-水(梯度洗脱O—5min30%甲醇；5—12min60%甲醇；12—20min80%甲醇)；检测时间:20min；流速0.8ml/min；进样量:10μ1。ELSD检测器参数漂移管温度100°C；空气流速2.7L/min。上述番茄水溶性皂苷提取物的制备方法，包括以下步骤1)打浆、酶解取新鲜番茄洗净，打碎成浆汁，加入相当于原料重量0.040.06%的果胶酶，于5060°C条件下保温酶解1.52h；2)过滤酶解液先用80100目滤布粗滤，所得滤液再经离心机离心分离，收集上清液；3)吸附，洗脱所得上清液过大孔树脂柱，水洗树脂柱直至流出液澄清，然后用体积浓度为80100%的乙醇洗脱，收集洗脱液；4)浓缩，干燥洗脱液减压浓缩至浸膏状，所得浸膏于真空条件下干燥，即得。其中步骤1)中，所述的番茄可为市售蔬菜用的大番茄和水果用的樱桃小番茄；所述的果胶酶可为市售食品添加剂用的果胶酶。步骤2)中，离心机的转速优选为30005000r/min，时间为812min。步骤3)中，大孔树脂的用量优选为原料重量的0.050.1倍；乙醇的用量为树脂柱体积的46倍。步骤3)中，大孔树脂的型号可为DlOl型、AB-8型或DiaionHP20型。吸附流速优选为25倍柱体积/小时(BV/h)，解吸的流速优选为810BV/h。步骤4)中，洗脱液优选在旋转蒸发仪中在0.040.05Mpa、60°C以下条件下减压回收乙醇，然后进一步在0.060.07Mpa条件下减压浓缩至浸膏状；所得浸膏置于80°C以下，真空度为0.080.09Mpa条件下真空干燥。本发明还提供所述番茄水溶性皂苷提取物在制备治疗高脂血症的药中的应用。具体地说是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中总胆固醇水平的药中的应用。是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中甘油三酯水平的药中的应用。是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中低密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。是番茄水溶性皂苷提取物在制备提高血清中高密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。也可以是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，同时提高血清中高密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。本发明所述的番茄水溶性皂苷提取物提取工艺简单，产品中的番茄皂苷A的重量含量>17%，有很好的调节血脂的作用。具体实施例方式下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。以下实施例中，乙醇的浓度均为体积浓度。实施例1番茄水溶性皂苷提取物的制备1)精选成熟、无腐烂的新鲜樱桃小番茄果实1000g，洗净，用搅碎机打碎成浆汁；加入相当于鲜果重量0.05%的果胶酶，搅拌均勻，60°C保温酶解澄清2小时；2)酶解液先用100目滤布粗滤，粗滤液经离心机离心lOmin，转速为4000r/min，分离完毕后倾出上清液；3)上清液上DlOl型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.05倍，吸附流速为3BV/h)，然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清，再用5倍柱体积、100%的乙醇洗脱(流速为9BV/h)，收集洗脱液；4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中，在0.05Mpa、60°C条件下减压回收乙醇，并进一步在0.07Mpa条件下减压浓缩至浸膏状，浸膏转入真空干燥箱，在真空度为0.09Mpa,温度为60°C条件下真空干燥，粉碎，得到番茄总皂苷2.7g，得率为0.27%。经蒸发光散射_高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为23.83%。实施例2番茄水溶性皂苷提取物的制备1)精选成熟、无腐烂的新鲜樱桃小番茄果实1000g，洗净，用搅碎机打碎成浆汁；加入相当于鲜果重量0.05%的果胶酶，搅拌均勻，50°C保温酶解澄清1.5小时；2)酶解液先用80目滤布粗滤，粗滤液经离心机离心lOmin，转速为4000r/min，分离完毕后倾出上清液；3)上清液上AB-8型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.05倍，吸附流速为4BV/h)，然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清，再用6倍柱体积、80%的乙醇洗脱(流速为10BV/h)，收集洗脱液；4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中，在0.05Mpa、60°C条件下减压回收乙醇，并进一步在0.07Mpa条件下减压浓缩至浸膏状，浸膏转入真空干燥箱，在真空度为0.09Mpa,温度为30°C条件下真空干燥，粉碎，得到番茄总皂苷2.lg，得率为0.21%。经蒸发光散射_高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为23.43%。实施例3番茄水溶性皂苷提取物的制备1)精选成熟、无腐烂的新鲜大番茄果实1000g，洗净，用搅碎机打碎成浆汁；加入相当于鲜果重量0.04%的果胶酶，搅拌均勻，60°C保温酶解澄清2小时；2)酶解液先用100目滤布粗滤，粗滤液经离心机离心8min，转速为3000r/min，分离完毕后倾出上清液；3)上清液上DiaionHP20型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.1倍，吸附流速为4BV/h)，然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清，再用5倍柱体积、90%的乙醇洗脱(流速为8.5BV/h)，收集洗脱液；4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中，在0.04Mpa、50°C条件下减压回收乙醇，并进一步在0.06Mpa条件下减压浓缩至浸膏状，浸膏转入真空干燥箱，在真空度为0.OSMpa,温度为80°C条件下真空干燥，粉碎，得到番茄总皂苷1.9g，得率为0.19%。经蒸发光散射_高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为18.81%。实施例4番茄水溶性皂苷提取物的制备1)精选成熟、无腐烂的新鲜大番茄果实1000g，洗净，用搅碎机打碎成浆汁；加入相当于鲜果重量0.06%的果胶酶，搅拌均勻，55°C保温酶解1.8小时；2)酶解液先用90目滤布粗滤，粗滤液经离心机离心12min，转速为5000r/min，分离完毕后倾出上清液；3)上清液上DiaionHP20型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.08倍，吸附流速为3.5BV/h)，然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清，再用4.5倍柱体积、85%的乙醇洗脱(流速为9BV/h)，收集洗脱液；4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中，在0.04Mpa、60°C条件下减压回收乙醇，并进一步在0.06Mpa条件下减压浓缩至浸膏状，浸膏转入真空干燥箱，在真空度为0.OSMpa,温度为40°C条件下真空干燥，粉碎，得到番茄总皂苷1.6g，得率为0.16%。经蒸发光散射_高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为17.43%。实验例番茄水溶性皂苷提取物调节血脂实验(1)实验动物Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重(150士20)g，由桂林医学院实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(桂)2007-0001。(2)主要试剂及仪器胆固醇国药集团化学试剂有限公司，批号F20090313；猪胆盐国药集团化学试剂有限公司，批号20090813；丙基硫氧嘧啶上海蓝季科技发展有限公司，批号091202；总胆固醇(TC)测定试剂盒四川省迈克科技有限责任公司，批号0909081；甘油三酯(TG)测定试剂盒四川省迈克科技有限责任公司，批号0709051；低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒长春汇力生物技术有限公司，批号2009046；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒四川省迈克科技有限责任公司，批号1009041；辛伐他汀广东彼迪药业有限公司，批号20091001。TGL-16R型高速台式离心机，珠海黑马公司；RT-9100型半自动生化分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司。(3)番茄水溶性皂苷提取物(以下简称番茄总皂苷)的制备同上述实施例1。(4)动物分组和模型建立健康成年雄性Wistar大鼠60只，体重150士20g，随机分为6组(每组10只)正常对照组、高脂模型组、番茄总皂苷低、中、高剂量组(低0.3g/kg、中0.6g/kg、高1.2g/kg)、辛伐他汀阳性对照组(4mg/kg)。正常对照组给予普通饲料，其它各组给予高脂饲料(普通饲料82.3%，加2%胆固醇、10%猪油、0.5%胆盐、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%蔗糖)，连续40d。给药40d后动物禁食不禁水12h，由尾静脉采血测定血清脂质含量。正常对照组血清TC、TG含量与高脂模型组、番茄总皂苷低、中、高剂量组、辛伐他汀阳性对照组比较均有明显升高，差异显著(P<0.01)(见表1)，说明高脂模型造模成功。(5)动物灌胃给药治疗高脂模型造模成功后开始灌胃给药，番茄皂苷低、中、高剂量组和辛伐他汀阳性对照组灌胃给予相应浓度药液，10mL/kg,正常对照组和高脂模型组均灌给予等体积生理盐水，1次/d，连续60d，正常对照组继续饲以普通饲料，高脂模型对照组、番茄总皂苷低、中、高剂量组、辛伐他汀阳性对照组继续饲以高脂饲料。每周称量体重1次，以便调整给药剂量。分别在给药30d、45d、60d后，动物禁食不禁水12h，由尾静脉采血，离心制备血清，半自动生化分析仪检测总胆固醇(Tc)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。采用SPSS11.5统计软件进行数据分析，实验数据均以士s表示，两个独立样本均数比较采用t检验，多个样本之间的两两比较采用单因素方差分析，P<0.05为具有统计学意义。(6)实验结果造模40d后，给予高脂饲料的造模各组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量与正常对照组比较均有明显升高，差异显著(P<0.01)，同时HDL-C含量均有明显降低，差异显著(P<0.01)，说明高脂模型造模成功，结果见表1。表1造模40d时大鼠血清脂质含量的变化(i士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与正常对照组比较，Δρ<0.05，ΔΔΡ<0.01。番茄总皂苷给药30d后，与正常对照组比较高脂模型组中大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.01)，同时HDL-C含量明显降低，差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较番茄总皂苷中、高剂量和辛伐他汀组中大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均明显降低，差异显著(P<0.05或P<0.01)，同时HDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.05)，结果见表2。表2番茄总皂苷给药30d对高脂血症大鼠血清脂质含量的影响(士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与正常对照组比较，Δρ<0.05，ΔΔΡ<0.01；与高脂模型组比较，*Ρ<0.05，**Ρ<0.01。番茄总皂苷给药45d后，与正常对照组比较高脂模型组中大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.01)，同时HDL-C含量明显降低，差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较番茄总皂苷中、高剂量和辛伐他汀组中大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均明显降低，差异显著(P<0.05或P<0.01)，同时HDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.05)，结果见表3。表3番茄总皂苷给药45d对高脂血症大鼠血清脂质含量的影响(士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与正常对照组比较，Δρ<0.05，ΔΔΡ<0.01；与高脂模型组比较，*Ρ<0.05，**Ρ<0.01。番茄总皂苷给药60d后，与正常对照组比较高脂模型组中大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.01)，同时HDL-C含量明显降低，差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较番茄总皂苷中、高剂量和辛伐他汀组中大鼠血清TC、TG、LDL-C含量明显降低，差异显著(P<0.01)，同时HDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.01)，结果见表4。表4番茄总皂苷给药60d对高脂血症大鼠血清脂质含量的影响(〒士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与正常对照组比较，Δρ<0.05，ΔΔΡ<0.01；与高脂模型组比较，*Ρ<0.05，**Ρ<0.01。.实验研究结果表明，番茄总皂苷中、高剂量在给药30d、45d、60d后大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量与高脂模型组比较均明显降低，差异显著(P<0.05或P<0.01)，同时HDL-C含量均明显升高，差异显著(P<0.05或P<0.01)，从上述结果可看出，随着番茄总皂苷给药时间的延长其调节血脂的效果越明显，说明番茄总皂苷具有较好的调节血脂的作用。权利要求一种番茄水溶性皂苷提取物，其特征在于它是取新鲜番茄洗净，打浆，酶解，酶解液过滤后经大孔树脂柱分离，体积浓度为80～100％的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥而制得，其中番茄皂苷A的含量≥17％。2.权利要求1所述的番茄水溶性皂苷提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)打浆、酶解取新鲜番茄洗净，打碎成浆汁，加入相当于原料重量0.040.06%的果胶酶，于5060°C条件下保温酶解1.52h；2)过滤酶解液先用80100目滤布粗滤，所得滤液再经离心机离心分离，收集上清液；3)吸附，洗脱所得上清液过大孔树脂柱，水洗树脂柱直至流出液澄清，然后用体积浓度为80100%的乙醇洗脱，收集洗脱液；4)浓缩，干燥洗脱液减压浓缩至浸膏状，所得浸膏于真空条件下干燥，即得。3.根据权利要求2所述的番茄水溶性皂苷提取物的制备方法，其特征在于步骤3)中，大孔树脂的用量为原料重量的0.050.1倍；乙醇的用量为柱体积的46倍。4.根据权利要求2所述的番茄水溶性皂苷提取物的制备方法，其特征在于步骤3)中，大孔树脂的型号为DlOl型、AB-8型或DiaionHP20型。5.权利要求1所述的番茄水溶性皂苷提取物在制备治疗高脂血症的药中的应用。6.根据权利要求5所述的番茄水溶性皂苷提取物的应用，其特征在于番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中总胆固醇水平的药中的应用。7.根据权利要求5所述的番茄水溶性皂苷提取物的应用，其特征在于番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中甘油三酯水平的药中的应用。8.根据权利要求5所述的番茄水溶性皂苷提取物的应用，其特征在于番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中低密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。9.根据权利要求5所述的番茄水溶性皂苷提取物的应用，其特征在于番茄水溶性皂苷提取物在制备提高血清中高密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。10.根据权利要求5所述的番茄水溶性皂苷提取物的应用，其特征在于番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，同时提高血清中高密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。全文摘要本发明公开了一种番茄水溶性皂苷提取物，该提取物的制备方法及其在制备治疗高血脂症的药中的应用。该提取物的制备方法是取新鲜番茄洗净，打碎成浆汁，加入相当于原料重量0.04～0.06％的果胶酶，于50～60℃条件下保温酶解1.5～2h；酶解液先用80～100目滤布粗滤，所得滤液再经离心机离心分离，收集上清液；所得上清液过大孔树脂柱，水洗树脂柱直至流出液澄清，然后用体积浓度为80～100％的乙醇洗脱，收集洗脱液；浓缩，干燥即得。本发明所述的番茄水溶性皂苷提取物提取工艺简单，产品中的番茄皂苷A的含量≥17％，有很好的调节血脂的作用。文档编号A61K36/81GK101804122SQ20101014389公开日2010年8月18日申请日期2010年4月9日优先权日2010年4月9日发明者刘金磊,卢凤来,吴建璋,文永新,李典鹏,李赐玉,陈思成,陈月圆,黄永林申请人:广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所