甲状旁腺素类似物的制作方法
专利名称：甲状旁腺素类似物的制作方法
甲状旁腺素类似物此案是1996年7月3日提交的、中国申请号为200610100113. 4、题目为“甲状旁 腺素类似物”的发明申请的分案申请。
背景技术：
甲状旁腺素(“PTH”)是甲状旁腺产生的一种多肽。这种激素成熟的循环形式包 含84个氨基酸残基。PTH的生物学活性可以由它的N末端肽片段(例如氨基酸残基1到 34)重现。甲状旁腺素相关蛋白(“PTHrP”)是一种N末端与PTH同源的139到173个氨 基酸的蛋白。PTHrP具有许多与PTH相同的生物学效应，包括与一种共有的PTH/PTHrP受体 结合。Tregear等，内分泌学(Endocrinol.), 93 =1349(1983) 0已经特征性描述了来自例如 人，牛，大鼠，鸡等多种不同来源的PTH肽。Nissenson等，受体(Receptor), 3 193 (1993) 已表明PTH能改进骨重量和质量。Dempster等，内分泌综述(EndocrineRev.)， 14 =690(1993)；以及 Riggs，美国医学杂志(Amer. J. Med.), 91 (Suppl. 5B) :37S(1991)。已观 察到在同时进行或不进行抗再吸收治疗的情况下对骨质疏松的男性或女性周期性施用PTH 具有合成代谢效应。Slovik 等，J. BoneMiner. Res，1 377(1986) ；Reeve 等，Br. Med. J.，301 314(1990)；以及 Hesch，R-D 等，Colcif. Tissue Int' 1,44:176(1989)。发明简述一方面，发明涉及具有下列通式的PTH(1_34)的肽变体
A,- Val-A3-GIu-Aj-G]n-A7-A8-His-Asn-An-A,2-Lys-His-A15-/ A,6-Al7-A,g-A,9-Arg-A2rGJu-A23-A24-Arg-Lys-A27-A38-01n-R2 Ajo-AjrAjz-Au-A^-Rj,其中A!是 Ser，Ala，或 Dap ；A3 是 Ser，Thr，或 Aib ；A^Leu，Nle, lie, Cha, 3_Nal，Trp, Pal, Phe 或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤 素，或CH3 ；八7是1^11，见6，lie,Cha, 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤 素，或CH3 ；A8 ^Met, Nva, Leu, Val, lie, Cha，或 Nle ；An 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal，Trp, Pal, Phe,或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一种卤 素，或CH3 ；A12 是 Gly 或 Aib;A15 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal, Trp, Pal, Phe,或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一种卤 素，或CH3 ；A16 是 Ser, Asn, Ala,或 Aib ；A17 是 S er，Thr，或 Aib ；
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A18 是 Met，Nva, Leu, Val, lie, Nle, Cha，或 Aib ；A19 是 Glu 或 Aib ；A21 是 Val，Cha，或 Met ;A23 是 Trp 或 Cha ；A24 是 Leu 或 Cha ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg, Gin,或 Cha ；A28 是 Leu 或 Cha ；A30 是 Asp 或 Lys ；A31 是 Val, Nle, Cha，或缺失；A32 是 His 或缺失；A33 是 Asn 或缺失；A34 是 Phe，Tyr，Amp, Aib,或缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ch2烷基，C2_C12链烯基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基 (napthylalkyl)，羟烷基，C2_12羟链烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(1羟萘烷基；或礼和R2 中的一个且只有一个是COEi，其中Ei是Ci_12烷基，C2_12链烯基，C7_2(1苯烷基，Cn_2(1萘烷基， (V12羟烷基，C2_12羟链烯基，C7_20羟-苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；以及R3是0H，NH2, (V12烷氧基，或NH-Y-CH2_Z，其中Y是一种烃部分并且Z是H， OH, C02H,或 C0NH2 ；条件是(i)A5，A7,A8, An, A15，A18，A21，A23, A24, A27, A28，和 A31 中至少一个是 Cha，或 A3，A12，A16，A17，A18，A19 和 A34 中至少一个是 Aib ；或(ii)至少 k,是 Dap, A7 是 3 -Nal，Trp, Pal，Phe，或 p-X-Phe, A15 是旦-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe, A27 是 h Arg,或 A31 是 N1 e。由上述通式包括的化合物的一个亚组是那些其中的A5，A7，An，A15，A18，A21，A23，A24， A27，A28，禾P A31中至少一个是Cha的化合物，例如，A3是Ser ;A5是lie ;A7是Leu或Cha ;A8是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A12 是 Gly ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A17 是 Ser ；A18 是 Met 或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, hArg,或 Cha ；A32 是 His ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ；^ 是 H ;R2 是 H ；以及 R3 是 NH2 ；条 件是 A5，A7，A8，An A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，禾口 A31 中至少"~~■个是 Cha，或 A3，A12，A16，A17， A18,A19和A34中至少一个是Aib。如果需要，A7和An中至少一个可以是Cha ；或A15，A23，A24， A27，A28，和A31中至少一个是Cha。在另一个亚组中，A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一个是Aib。例如，A3是Ser 或 Aib ;A5 是 lie ;A7 是 Leu 或 Cha ;A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ； A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ；队 是 H ;R2 是 H ；以及 R3 是 NH2 ；条件是 A5，A7，A8，An，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和 A31 中至少 有一个是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一个是Aib。如果需要，中至 少一个可以是Cha ；或A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一个是Cha。在另一个亚组中，A5,A7, A8, An, A15，A18，A21，A23，A24, A27，A28，和 A31 中至少一个是 Cha,或 A3，A12，A16，A17，A18，A19，和 A34 中至少一个是 Aib。例如，A3 是 Ser 或 Aib ;A5 是 lie ; A7 是 Leu 或 Cha ;A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ；A31 是 Val，Nle，或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe，Tye，Amp，或 Aib ；队是 H ;R2 是 H ；以及 民是冊2。如果需要，中至少一个是Cha并且A16，A19，和A34中至少一个是Aib ；或 者A24，A28，和A31中至少一个是Cha并且A16和A17中至少一个是Aib。在另一个亚组中，至少一个Ai 是 Dap，~是 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，A13 是旦-恥1，11卬，卩31，卩116，或？-1-卩116。如果，々1是5吐，617，或Dap ；八3是361~或Aib ；A8是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, bArg,或 Cha ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp，或Aib ；礼是11;1 2是11;以及民是順2。下面是上面通式包括的本发明肽的例子[Cha7] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha11] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha15] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7,11] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Tyr34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha23]hPTH(l_34)NH2 ； [Cha24] hPTH(l-34) NH2 ； [Nle8'18, Cha27]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha31] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha27] hPTH (1_34) NH2 ； [Cha27'29] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha28] bPTH (1-34) NH2 ； [Cha28] rPTH (1-34) NH2 ； [Cha24’28’31] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib19] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib16’19] hPTH(l-34)NH2 ； [Aib16’19’34]bPTH(l_34)NH2 ； [Aib16’34]hPTH(l_34)NH2 ； [Aib19’34]hPTH(l_34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib16'19, Tyr34] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18'31, Aib16'19, Tyr34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7, Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha11, Aib16] hPTH (1-34) 2 ； [Cha7, Aib34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha11, Aib34] hPTH(1—34) NH2 ； [Cha27, Aib16] hPTH(1—34) NH2 ； [Cha27, Aib34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha28, Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha28, Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Nle31] hPTH(l-34)NH2 ； [hArg27]hPTH(1-34)NH2 ； [Dap1, Nle8'18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Nle31] bPTH(l-34)NH2 ； [Nle31]rPTH(l_34)NH2 ； [hArg27] bPTH (1-34) NH2 ； [hArg27] rPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Aib19, Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Aib12]hPTH(l_34)NH2 ； [Cha24’28’31，Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28,31] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib3] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha8]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha15]hPTH(l_34) NH2 ； [Cha7'11, Aib19]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha7’ n, Aib16]hPTH(l-34)NH2 ； [Aib17] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha5] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib19, Tyr34] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib19, Lys30, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Cha7'n'15]hPTH(l-34)NH2 ； [Aib17]hPTH(1-34)NH2 ； [Cha7'11, Leu27] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15, Leu27] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7ai'27]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15'27] hPTH(l-34)NH2 ； [Trp15]hPTH(l-34)NH2 ； [Nal15]hPTH(l_34)NH2 ； [Trp15, Cha23] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha15'23]hPTH(1-34) NH2 ； [Phe7'11] hPTH (1-34) NH2 ； [Nal7'n]hPTH(l-34) NH2 ； [Trp7' n]hPTH(l-34)NH2 ； [Phe7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Nal7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Trp7'11'15] hPTH(l-34)NH2 ；和[Tyr7'lia5]hPTH(l-34)NH2。另一方面，本发明涉及由下式包括的肽或其药学上可接受的盐； 其中是 Ala, Ser 或 Dap ；△3是561~，或八让；八5是圯8，lie，或Cha ；八7是1^11，0^，肌6，日-恥1，11印，卩&1，卩116，或？-父-卩116，其中1是011，一种卤素，或 CH3 ；A8 是 Leu, Met,或 Cha ；A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe，或 & -Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His;A15 是 lie，或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 Hi s，Aib，或 Glu ;A26 是 Hi s，Aib，或 Lys ;A27 是 Leu, Lys,或 Cha ;A28 走 lie, Leu, Lys,或 Cha ;A29 是 Ala，Glu，或 Aib ;A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32 是 His 或缺失；A33 是 Thr 或缺失；A34 是 Ala 或缺失；每一个礼和R2分别是H，Ch2烷基，C7_C2Q苯烷基，Cn_2(1萘烷基，CH2羟烷基，C2_12 羟链烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；或礼和R2中一个且只有一个是COEi，其中Ei
-12 焼基，C2-i2 焼基，C2-i2
链烯基， Cj-20 本焼基，Cn_20 萘烷基，Ci_12羟烷基，c2_12羟链烯基， c7_20羟苯烷基，或cn_2(l羟萘烷基；以及
R3是0H，NH2, (V12烷氧基，或NH-Y-CH2_Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H， OH, C02H 或 C0NH2 ；条件是(i)A5，A7,A8, An, A15，A18，A22，A23, A24, A27, A28，A30 和 A31 中至少一个是 Cha， 或A3， A12，A16，A17，A18，A19，A22，A25，A26，A29，A30， 禾口 A34 中至少一个是 Aib ；或(ii)A23，A24，A27， A28，或A31中至少一个是Lys。在一个实施例中，中至少一个是Cha。在另一个实施 例中，A16或A19中至少一个是Aib。刚叙述的式的肽的特殊例子包括，但不限于，[Cha7] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha11] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib16, Tyr34hPTHrP(l-34)NH2 ； [Aib19]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib16'19]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7’ "，Aib16hPTHrP(l-34)NH2 ;[Cha7'"，Aib19]hPTHrP (1-34)NH2 ;[Cha22，Leu23'28'31，Glu25'29，Lys26' 30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22’25’29，Leu23'28'31, Lys26'27'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22'23, Glu25’ 29，Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ;[Glu22’25’29，Lys23'26'30, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Cha30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23' 31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22'23'24'27'28'31, Glu25'29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Cha23'24'28'31, Lys26'27'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Cha23'24'27'31, Lys25'28'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22’25’29，Lys23'26'30, Cha24’27’28’31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28' 31，Glu25'29, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'31, Glu25'29, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Lys23'26'30, Glu25'29, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28'31, Glu25, Lys26'
30,Aib29] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'28'31, Lys26'27'30, Aib29]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Lys23'26'30, Leu28'31, Aib29] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'31, Lys26'28'30, Aib29]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP(l-34)NH2 ； [Cha7'11'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP(1-34) NH2;[Cha7'n, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11'22'23, Glu25'29, Leu28'
31,Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26' 30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15'22' 23，Glu25'29, Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2； [Cha15, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, LeU23’28’31，LyS26，Aib30]hPTHrP(l-34)NH2 ;[Cha15，GlU22’28’29，LeU23’31，LyS26’28’30]hPTHrP(l-34) NH2 ;[Cha15'30, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7' 8,22,23，Glu25'29, Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30] hPTHrP(1-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31]hPTHrP(l-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8'30, Glu22' 25,29，Lef，LyS26]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7'11'22, Met8, Asn10, His14, Leu23'28' 31，Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34)NH^tSer1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29,Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP(l-34)NH2 ^Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22,25,29， Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP(l-34)NH2 ；Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Lys23' 26,30，Ley]hpTHrp(1_34)NH2 ;[Serl，Ile cha7,n，Met8，Asn10, His14, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29，LyS26’3°]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7’11，Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28' 31，Lys26, Aib3。]PTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7'11'22'23, Met8, Asn10, His14, Glu25'29, Leu28' 31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'11'15, Met8, Asn10, His14]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11, His14, Aib16]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11'28'31, His14, Cha22'23, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, His14, Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys24'26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'29, Leu23'28' 31, Aib25, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23'28'31, Aib26, Lys30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28, Lys 26'30'31]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Cha22, Glu25'29, LyS26’3。]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'28'31, His14, Glu22'25'29, LyS23,26,3。]PTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25' 29，Lys26,27,30]hpTHrp(1_34)NH2 ； [Seri;工^，临仏八卯1。，Leu"'23'31, HiS14，G1U22,25,29，LyS26'
28’30]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25, Aib29, Lys26' 30]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25'29, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ；or [Ser1, I le5，Met8] hPTHrP (1-34) NH2。除了 N末端氨基酸以外，此公开中所有氨基酸简称(例如六^或。代 表-NH-CHR)-C0-结构，其中，R是氨基酸的侧链(例如，013是々13侧链)。对于N末端氨基 酸，简称代表=N-CH(R)-C0-结构，其中R是氨基酸侧链。0_Nal，Nle，Dap，Cha，Nva，Amp， Pal，和Aib分别是下列a-氨基酸的简称邛-(2-萘基)丙氨酸，正亮氨酸，a，0 - 二氨 基丙酸，环己基丙氨酸，正缬氨酸，4-氨基-苯丙氨酸，3-吡啶丙氨酸，和a -氨基异丁酸。 在上式中，羟烷基，羟苯烷基，和羟萘烷基可能含有1-4个羟基取代基。又及，COEi代表-C =0 E10 -C = 0 Ei的例子包括，但不限于，乙酰基和苯丙酰基。本发明的肽在此处也以另一种形式表示，例如，[Cha7ai]hPTH(l-34)NH2，具有在第 二对括号中的天然序列的取代氨基酸(例如，在pHTH中以Cha7取代Leu7，并以Cha11取代 Leu11)。简称hPTH代表人pTH，hPTHrP代表人PTHrP，rPTH代表大鼠PHT，以及bPTH代表 牛PTH。括号中的数字是指肽中存在的氨基酸数目(例如，hPTH(l-34)是人PTH肽序列的 1 到 34 位氨基酸)。hPTH(l-34), hPTHrP (1-34), bPTH(l_34)，和 rPTH(l_34)的序列列表 于 Nissenson 等，受体(Receptor), 3 =193(1993) PTH(1-34) NH2 中的名称 “NH2” 表明肽的 C末端是氨化的。与此相反，PTH(l-34)具有游离酸C末端。本发明的每一种肽都能够刺激受治疗者(换言之，一个哺乳动物例如病人)的骨 生长。因而，当单独施用或与抗再吸收治疗例如二磷酸盐和降钙素等共同使用时，在治疗骨 质疏松和骨折中是有效的。本发明的肽可以药学可接受盐的形式提供。此类盐的例子包括，但不限于，那些与 有机酸(例如，乙酸，乳酸，马来酸，柠檬酸，苹果酸，抗坏血酸，琥珀酸，苯甲酸，甲磺酸，甲苯磺酸，或pamoic acid)，无机酸(例如，盐酸，硫酸，或磷酸)，以及聚酸(例如，单宁酸，羧 甲基纤维素，聚乳酸，聚乙二醇酸，或聚乳酸-聚乙二醇酸共聚物)形成的盐。治疗有效量的本发明的肽与一种药学可接受载体物质(例如，碳酸镁，乳糖，或一 种磷脂，用其使治疗组合物能形成微团)一起形成一种用于对受治疗者给药(例如，口服， 静脉内给药，穿皮给药，经肺给药，阴道给药，皮下给药，鼻内给药，离子电渗给药，或气管内 给药)的治疗组合物(例如，丸剂，片剂，胶囊，或液体)。用于口服的丸剂，片剂，或胶囊可 用一种物质包被，以保护活性成分在胃部一定时间内不被胃酸或肠内的酶破坏，足以使它 在进入小肠时未被消化。治疗组合物也可以生物可降解或生物不可降解缓释制剂的形式 用于皮下或肌肉内给药。参看，例如，美国专利3，773，919和4，767，628和PCT申请No. Wo 94/15587。也可使用可移植的或外接泵(例如，INFUSAID pump)进行连续给药。也可进 行间歇的例如每天注射一次，或低剂量连续的，例如缓释剂型给药。用于治疗上述疾病或紊乱的本发明肽的剂量根据给药方式，受治疗者的年龄和体 重，以及要治疗的受治疗者的健康状况而变化，并且最终由护理医生或兽医决定。在本发明范围内还考虑到把由上述通式包括的肽用于治疗与骨生长缺陷等有关 的疾病或紊乱，例如骨质疏松或骨折。本发明其它的特征和优点将通过详细的描述以及权利要求说明。基于此处的描述，本发明可得以最充分程度地使用。要理解下面的特定实施例仅 是为了说明，而不在任何意义上限制本公开的其余部分。此外，此处引用的所有出版物都以 参考文献并入本发明。结构已报道PTH(1_34)有两个双嗜性a螺旋结构域。参看，例如，Barden等，生物化 学(Biochem.)，32 7126 (1992)。第一个a -螺旋在氨基酸残基4到13之间形成，而第二 个a “螺旋在氨基酸残基21到29之间形成。本发明的一些肽含有在PTH(1_34)这两个区 域内部或附近的一个或多个残基的Cha取代，例如，第一个a -螺旋内的Cha7和Cha11或者 第二个a -螺旋内的Cha27和Cha28。本发明还包括具有Aib对邻近a -螺旋的取代，例如，Aib16，Aib19，和Aib34 ；hArg27 和Nle31，或Dpa对N-末端残基取代的PTH(1_34)的变体。合成本发明的肽可通过标准的固相合成法制备。参看，例如Stewart，J.M.等，固相合 成(Solid Phase Synthesis) (Pierce Chemical Co.，2d ed. 1984)。下面是对怎样制备 [Aib34]hPTH(1-34)NH2的描述。本发明的其它肽可以由本技术领域普通技术人员通过类似 方式制备。肽在Applied Biosystems (Foster City, CA)的改进以加速 Boc-化学固相肽 合成的430A型肽合成仪上合成。参看Schnoize，等，“国际肽和蛋白质研究杂志”(Int. J. Peptide Protein Res.)，90 :180 (1992)。使用 了具有 0. 93mmol/g 取代基的 4-甲基 二苯甲基胺(MBHA)树脂(Peninsula，Belmont, CA)。使用具有下面的侧链保护的Boc 氨基酸(Bachem, CA, Torrance, CA ；Nova Biochem.，La Jolla, CA) :Boc_Arg(Tos)_0H， Boc-Asp(0cHxl)-0H, Boc-Asn(Xan)-OH, Boc-Glu(OcHxl)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Asn-GH,Boc—Val—OH，Boc—Leu—OH，Boc-Ser-0H, Boc-Gly-0H, Boc—Met—OH，Boc—Gln—OH，Boc-Ile-OH, Boc-Lys (2C1Z) -OH, Boc-Ser (Bzl) -OH,和 Boc-Trp (Fm) -OH。合成在 0. 14mmol 的量进行。用100% TFA处理2X 1分钟去除Boc基团。Boc氨基酸(2. 5mmol)在4ml DMF 中用HBTU(2. Ommol)和DIEA(1. 0ml)预活化并在不预先中和肽-树脂TFA盐条件下偶联。 偶联时间是5分钟，但Boc-Aib-OH和下面Boc-Asn (Xan) -0H残基的情况除外，其偶联时间 是20分钟。肽链装配结束之后，在DMF中用20%巯基乙醇/10% D正A溶液处理树脂2 X 30分 钟以去除组氨酸侧链上的DNP基团。然后用100 % TFA处理2 X 2分钟去除N末端Boc基团。 用DMF中的10%DIEA中和肽-树脂(1X1分钟)之后，用15%乙醇胺/15%水/70% DMF 溶液处理2 X 30分钟去除色氨酸侧链上的甲酰基。用DMF和DCM洗脱部分去保护的肽-树 脂并减压干燥。最后一步断裂通过在含有lmL苯甲醚的lOmLHF中于0°C下振荡肽-树脂 75分钟进行。用氮气流除去HF。用乙醚(6X10mL)洗脱残余物并用4NH0Ac (6X 10mL)提 取。使用反相Vydac C18柱(Nest Group, Southborough, MA)用反相制备高压液相色 谱(HPLC)方法纯化水提物中的肽混合物。以10ml/分钟的流速采取线性梯度(130分钟内 溶液B从10%到45% )洗脱柱(溶液A = 0. TFA水溶液；溶液B =含0. TFA的乙 腈)。收集级分并用检测HPLC测定。把含有纯产物的级分合并，并冷冻干燥。获得62. 3 毫克白色固体。根据检测HPLC测定的纯度>99%。电喷射质谱仪检测得到的分子量是 4054. 7 (与计算分子量4054. 7相符)。[Cha7'11] hPTH (1-34) NH2 的合成和纯化以与上述[Aib34] hPTH (1-34) NH2 的合成相同 的方式进行。被保护的氨基酸Boc-Cha-OH购于Bachem，CA。终产物纯度> 98%，电喷射质 谱仪得到的分子量是4197. 0 (计算分子量是4196. 9)。上面所用简称的全名如下Boc代表叔丁氧羰基，HF代表氧化氢，Fm代表甲酰基， Xan代表咕吨基，Bzl代表苄基，Tos代表甲苯磺酰基，DNP代表2，4- 二硝基苯基，DMF代表 二甲基甲酰胺，DCM代表二氯甲烷，HBTU代表2-(lH-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲 六氟磷酸，DIEA代表二异丙基乙胺，HOAc代表乙酸，TFA代表三氟乙酸，2C1Z代表2-氯苄 氧羰基以及OcHxl代表邻-环己酯。上述通式中的取代基礼和R2可以通过本技术领域熟知的标准方法连结到N末端 氨基酸的游离胺。例如，烷基，诸如，。2烷基，可以使用还原烷基化方法连结。羟烷基，例 如Ci_12羟烷基，也可以在用叔丁酯保护自由羟基情况下使用还原烷基化方法连结。酰基，例 如，COEi，可以通过把全部树脂与二氯甲烷中3摩尔当量的两种游离酸和二异丙基碳二亚胺 混合1小时，并以产生的树脂按上述洗脱程序(a)至⑴步骤循环，将游离酸例如EfOOH偶 联到N末端氨基酸的游离胺实现结合。如果游离酸含有自由羟基，例如，对_羟苯丙酸，则 偶联应当在添加3摩尔当量H0BT的情况下进行。本发明的其它肽可以由本技术领域普通技术人员按照类似方法制备。功能检测A.与PTH受体的结合测定了本发明肽结合到Sa0S_2(人骨肉瘤细胞)上PTH受体的能力。Sa0S_2细 胞(美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, Rockville,MD ；ATCC # HTB 85)保存于于37°C下空气中含5%二氧化碳的潮湿空气中的补充有10%胎牛血清(FBS)和2mM谷氨酸的RPMI 1640培养基中(Sigma，St. Louis，M0)。每三或四天换一次培 养基，每星期通过胰蛋白酶消化对细胞传代培养。将SaOS-2细胞保持四天直到铺满为止。用含5 % FBS的RPMI 1640培养基 替换原培养基，并在10_"M到10_4M之间不同浓度的竞争性发明肽存在下与10X104cpm 单-125I-[Nle8,18，Tyr34 ( 3-125I)]bPTH(l-34)NH2—起室温培养 2 小时。使用冰冷 PBS 洗细 胞四次并用0. 1M氢氧化钠裂解，细胞相联的放射活性用闪烁计数仪计数。单-125I-[Nle8’ 18，Tyr34 (3-125I) ]bPTH(1-34) NH2 按照 Goldman, M. E.等，内分泌学(Endocrinol.)，123 1468(1988)所述进行合成。对本发明的不同肽进行了结合检测，并计算了每种肽的IC5Q值(单-125I-[Nle8’18， Tyr34 ( 3-125I)]bPTH (1-34) NH2 结合的半最大抑制)。如表I所示，所有检测的肽对SaOS-2细胞上的PTH受体具有高结合亲合性。B.刺激腺苷酸环化酶活性检测了本发明肽诱导SaOS-2细胞生物学反应的能力。更特定地，通过按 Rodan 等，“临床研究杂志” (J.Clin. Invest.) 72 1511(1983)和 Goldman 等，“内分泌 学”(Endocrinol.) 123 1468 (1988)所述检测cAMP (腺嘌呤核苷3'，5'-单磷酸)的合 成水平测定了对腺苷酸环化酶的刺激。在24孔板上新鲜培养基中铺满的SA0S-2细胞与 0. 5 u Ci [3H]腺嘌呤(26. 9Ci/mmol，New England Nuclear, Boston,MA) 一起 37°C温育 2 小 时，并用Hank' s平衡盐溶液(GibC0，GaitherSburg，MD)洗两次。细胞在新鲜培养基中用 ImM IBMX[异丁甲基-黄嘌呤，Sigma，St，Louis，M0]处理15分钟，并将发明的肽加到培养 基中温育5分钟。加入1.2M三氯乙酸(TCA) (Sigma, St. Louis,M0)终止反应，随后用4N氢 氧化钾中和样品。用双柱色谱方法(Salmon，等，1974，分析生物化学(Anal. Biochem.) 58， 541)分离cAMP。在闪烁计数仪中(液体闪烁计数仪2200 CA, PACKARD, Downers Grove, IL) 计数放射活性。分别计算供试肽的EC5(i值(腺苷酸环化酶半最大刺激)并显示于表1。所有供试 肽都是对腺苷酸环化酶活性的有效刺激物，其表现为作为次于成骨细胞增殖(例如，骨生 长)的信号的生化途径。表 1 注Kd(iiM)解离常数；EC5Q(nM)半最大刺激浓度。其它实施方案必须了解当与其详细描述结合描述本发明时，前面的描述是为了说明而不是限制 发明的范围，它由附上的权利要求的范围确定。其它方面，优点以及改进都在权利要求中。
权利要求
下式的一种肽或其药学上可接受的盐其中A1是Ser，Ala，或Dap；A3是Ser，Thr，或Aib；A5是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A7是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Cha，或Nle；A11是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A12是Gly或Aib；A15是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A16是Ser，Asn，Ala，或Aib；A17是Ser，Thr，或Aib；A18是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Nle，Cha，或Aib；A19是Glu或Aib；A21是Val，Cha，或Met；A23是Trp或Cha；A24是Leu或Cha；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，Gln，或Cha；A28是Leu或Cha；A30是Asp或Lys；A31是Val，Nle，Cha，或缺失；A32是His或缺失；A33是Asn或缺失；A34是Phe，Tyr，Amp，Aib，或缺失；每一个R1和R2独立地是H，C1-12烷基，C2-C12链烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羟烷基，C2-12羟链烯基，C7-20羟苯烷基，或C11-20羟萘烷基；或R1和R2中的一个且只有一个是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12链烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羟烷基，C2-12羟链烯基，C7-20羟-苯烷基，或C11-20羟萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z其中Y是一个C1-12烃部分并且Z是H，OH，CO2H，或CONH2；条件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一个是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19和A34中至少一个是Aib。FSA00000070239800011.tif
2.根据权利要求1的肽或其药学上可接受的盐，其中A7，An，A15，A23，A24，A27，A28，和A31 中至少一个是Cha。
3.根据权利要求2的肽或其药学上可接受的盐，其中 A3 是 Ser ；A5是lie ；A7 是 Leu ；或 Cha ；A8 :^Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A12 是 Gly ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A17 是 Ser ；A18 是 Met，或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, hArg,或 Cha ； A32 是 His ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
4.根据权利要求3的肽或其药学可接受的盐，其中A7和An中至少一个是Cha。
5.根据权利要求4的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Cha7ai]hPTH(l-34)NH2， [Cha7'11, Nle8'18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Chan]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15]hPTH(l-34)NH2 ； 或[Cha7] hPTH (1-34) NH2。
6.根据权利要求3的肽或其药学可接受盐，其中A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一个 是 ChaD
7.根据权利要求6的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Cha23]hPTH(1-34)NH2， [Cha24] hPTH (1-34) NH2, [Nle8'18, Cha27] hPTH (1-34) NH2，[Cha28] hPTH (1-34) NH2，[Cha31] hPTH(l-34)NH2, [Cha24,28,31]hPTH(1—34) NH2 ； [Cha24'28'31，Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28'31] hPTH(l-34)NH2 ；或[Cha15] hPTH (1-34) NH2。
8.根据权利要求1的肽或其药学可接受盐，其中A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少 一个是Aib。
9.根据权利要求8的肽或其药学可接受盐，其中 A3 是 Ser 或 Aib ；3八5是lie ； A7 是 Leu 或 Cha ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
10.根据权利要求9的肽或其药学可接受盐，其中A3，A12，A16，A17，A19，和A34中至少一个 是 Aib。
11.根据权利要求10的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Aib16]hPTH(1-34)NH2， [Aib19]hPTH(1-34) NH2, [Aib34]hPTH(1-34) NH2 ； [Aib16’19]hPTH(l_34)NH2 ； [Aib3]hPTH(l_34) NH2 ； [Aib17]hPTH(l-34)NH2 ；或[Aib12]hPTH(1-34) NH2。
12.根据权利要求1所述的肽或其药学可接受盐，其中A7，An，A15，A23，A24，A27，A28，和A31 中至少一个是Cha并且A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一个是Aib。
13.根据权利要求12所述的肽或其药学可接受盐，其中 A3 是 Ser 或 Aib ；八5是lie ； A7 是 Leu 或 Cha ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tye, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ;R2是H ；以及民是^12。
14.根据权利要求13的肽或其药学可接受盐，其中中至少一个是Cha并且A16， A19，和A34中至少一个是Aib。
15.根据权利要求14 的肽，其中所述肽是[Cha7'11, Nle8’18，Aib16’19，Tyr34]hPTH(l_34) NH2，[Cha7'1\Nle8'18'31, Aib16,19,Tyr34]hPTH(l-34)NH2 ;[Cha7'n,Aib19]hPTH(l-34)NH2 ;[Cha7' "，Aib16]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib34]hPTH(1-34) NH2 ；或[Cha7'11, Aib19, Lys30] hPTH(l-34)NH2。
16.根据权利要求13的肽或其药学可接受盐，其中A24，A28，和A31中至少一个是Cha并 且A16和A17中至少一个是Aib。
17.根据权利要求16的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Cha28，Nle8'18,Aib16’19， Tyr34]hPTH(l-34)NH2，或[Cha28，Aib16’19]PTH(l_34)NH2。
18.下式的肽或其药学可接受盐 其中八3是361~，1111~，或 Aib ；A5 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal，Trp, Pal, Phe 或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一种卤素，或ch3；A^Leu，lie, Nle, Cha, 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 H，0H，一种卤素， 或 CH3 ；A8 ^Met, Nva, Leu, Val, lie, Cha,或 Nle ；An 是 Leu，Nle, lie, Cha, ^-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤素， 或 CH3 ；A12 是 Gly 或 Aib ；A15 是 Leu，Nle, lie, Cha, ^-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤素， 或 CH3 ；A16 是 Ser, Asn, Ala,或 Aib ； A17 是 Ser，Thr，或 Aib ；A18 是 Met, Nva, Leu, Val, lie, Nle, Cha,或 Aib ；A19 是 Glu 或 Aib ；A21 是 Val, Cha,或 Met ；A23 是 Trp 或 Cha ；A24 是 Leu 或 Cha ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg, Gin, Cha ；A1-Val-A3-Glu-A5-Gln-A7-A8-His-Asn-A11A28 是 Leu 或 Cha ；A30 是 Asp 或 Lys ；A31 是 Val，Nle, Cha，或缺失；A32是His或缺失;A33是Asn或缺失；A34 是 Phe，Tyr，Amp, Aib，或缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ci_12烷基，C2-C12链烯基，C7_20苯烷基，Cn_20萘烷基，Ci_12羟 烷基，C2_12羟链烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；或礼和R2中的一个且只有一个是 COEi，其中Ei是Ci_12烷基，C2_12链烯基，C7_2(1苯烷基，Cn_2(1萘烷基，Ci_12羟烷基，C2_12羟链烯 基，C7_20羟-苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；R3是0H，NH2, Ci_12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H，0H， C02H,或 C0NH2 ；条件是至少 Ai 是0(1 ，~是 3-妝1，扑？，卩31，卩1^，或？-1-卩116 ；P15 是 0-Nal，Trp，Pal， Phe,或 p-X-Phe, A27 是 hArg,或 A31 是 Nle。
19.根据权利要求18的肽或其药学可接受盐，其中 是 Ser, Gly,或 Dap ；A3 是 Ser 或 Aib ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib 或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
20.根据权利要求19的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Nle31]hPTH(1-34)NH2， [hArg27]hPTH(1-34)朋2，或[Dap1，Nle8'18, Tyr34]hPTH(l_34)NH2。
21.有下面分子式的肽或其药学可接受盐 其中是 Ala, Ser 或 Dap ； A3 是 Ser，或 Aib ； A5 是 His, lie,或 Cha ；八7是1^11，0^，肌6，3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤素，或 CH3 ； A8 是 Leu, Met,或 Cha ； A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe,或旦 _Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His ；A15 是 lie,或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 His, Aib,或 Glu ；A26 是 His, Aib,或 Lys ；A27 是 Leu, Lys,或 Cha ；A28 是 lie, Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Ala, Glu,或 Aib ；A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32是His或缺失;A33是Thr或缺失；A34是Ala缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ci_12烷基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基，Ci_12羟烷基，C2_12羟链 烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(1羟萘烷基；或礼和R2中一个且只有一个是COEi，其中Ei是Ci_12 焼基，C2_12焼基，C2_12 链烯基， Cj-20 本焼基，Cn_2Q 萘烷基，Ci_12羟烷基，c2_12羟链烯基，c7_20羟 苯烷基，或cn_2(l羟萘烷基；以及R3是0H，NH2，(V12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H，0H，C02H 或 C0NH2 ；条件是 A5，A7，A8，An，A15，A 18，A22，A23，A24 A27 A28 A30 或A31中至少一个是Cha,或A3，A12， A16，A17 A18 A19 A22 A25 A26 A29 A30 或A34中至少一个是Aib。
22.根据权利要求21的肽或其药学可接受盐，其中A22是Phe或Cha；A23是Phe或Cha ； A25 是 His ；A26 是 His ；A27 是 Leu 或 Cha ；A28 是 lie 或 Cha ；A29 是 Ala ；A30 是 Glu 或 Lys ；A31 是 lie 或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
23.根据权利要求22的肽或其药学可接受盐，其中A7和An中至少一个是Cha。
24.根据权利要求22的肽或其药学可接受盐，其中A16或A19中至少一个是Aib。
25.根据权利要求21的肽或其药学可接受盐，其中A22是Glu,Aib或Cha ；A23是Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 Aib 或 Glu ；A26 是 Aib 或 Lys ；A28 是 Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Glu 或 Aib ； A30 是 Cha, Aib 或 Lys ；A31 是 leu, Cha 或 Lys ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
26.根据权利要求25的肽或其药学可接受盐，其中A7和An中至少一个是Cha。
27.根据权利要求25的肽或其药学可接受盐，其中A16或A19中至少一个是Aib。
28.下式的肽或其药学可接受盐 其中是 Ala, Ser 或 Dap ； A3 是 Ser 或 Aib ； A5 是 His, lie,或 Cha ；八7是1^11，0^，肌6，旦-恥1，！1印，卩31，卩116，或？-父-卩116，其中乂是011，一种卤素，或013 ； A8 是 Leu, Met,或 Cha ； A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe,或旦 _Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His ；A15 是 lie,或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 His, Aib,或 Glu ；A26 是 His, Aib,或 Lys ；A27 是 Leu, Lys,或 Cha ；A28 是 lie, Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Ala, Glu,或 Aib ；A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32是His或缺失;A33是Thr或缺失；A34是Ala或缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ci_12烷基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基，Ci_12羟烷基，C2_12羟链 烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(1羟萘烷基；或礼和R2中一个且只有一个是COEi，其中Ei是Ci_12 焼基，C2_12焼基，C2_12 链烯基， Cj-20 本焼基，Cn_2Q 萘烷基，Ci_12羟烷基，c2_12羟链烯基，c7_20羟 苯烷基，或cn_2(l羟萘烷基；以及R3是0H，NH2，(V12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H，0H，C02H 或 C0NH2 ；条件是A23' A24 A27j A28或A31中至少一个是Lys。
29.根据权利要求28的肽或其药学可接受盐，其中A22是Glu，Aib，或Cha；A23是Leu， Lys,或 Cha ；A25 是 Aib 或 Glu ；A26 是 Aib 或 Lys ；A28 是 Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Glu 或 Aib ； A30 是 Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 Leu, Cha,或 Lys ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
30.根据权利要求29的肽或其药学可接受盐，其中A7和An中至少一个是Cha；或其药 学可接受盐。
31.根据权利要求29的肽或其药学可接受盐，其中A16或A19中至少一个是Aib。
全文摘要
甲状旁腺素片段(1-34)的肽变体，其中在位于7，11，23，24，27，28和31位的氨基酸残基中至少有一个是环己基丙氨酸，或在位于3，16，17，18，19和34位的氨基酸残基中至少有一个是α-氨基异丁酸；或者，至少在1位的氨基酸残基是α，β-二氨基丙酸，27位的氨基酸残基是高精氨酸，或31位的氨基酸残基是正亮氨酸。
文档编号A61P3/14GK101851288SQ20101015054
公开日2010年10月6日 申请日期1996年7月3日 优先权日1995年7月13日
发明者董正欣 申请人:益普生药业公司
甲状旁腺素类似物此案是1996年7月3日提交的、中国申请号为200610100113. 4、题目为“甲状旁 腺素类似物”的发明申请的分案申请。
背景技术：
甲状旁腺素(“PTH”)是甲状旁腺产生的一种多肽。这种激素成熟的循环形式包 含84个氨基酸残基。PTH的生物学活性可以由它的N末端肽片段(例如氨基酸残基1到 34)重现。甲状旁腺素相关蛋白(“PTHrP”)是一种N末端与PTH同源的139到173个氨 基酸的蛋白。PTHrP具有许多与PTH相同的生物学效应，包括与一种共有的PTH/PTHrP受体 结合。Tregear等，内分泌学(Endocrinol.), 93 =1349(1983) 0已经特征性描述了来自例如 人，牛，大鼠，鸡等多种不同来源的PTH肽。Nissenson等，受体(Receptor), 3 193 (1993) 已表明PTH能改进骨重量和质量。Dempster等，内分泌综述(EndocrineRev.)， 14 =690(1993)；以及 Riggs，美国医学杂志(Amer. J. Med.), 91 (Suppl. 5B) :37S(1991)。已观 察到在同时进行或不进行抗再吸收治疗的情况下对骨质疏松的男性或女性周期性施用PTH 具有合成代谢效应。Slovik 等，J. BoneMiner. Res，1 377(1986) ；Reeve 等，Br. Med. J.，301 314(1990)；以及 Hesch，R-D 等，Colcif. Tissue Int' 1,44:176(1989)。发明简述一方面，发明涉及具有下列通式的PTH(1_34)的肽变体
A,- Val-A3-GIu-Aj-G]n-A7-A8-His-Asn-An-A,2-Lys-His-A15-/ A,6-Al7-A,g-A,9-Arg-A2rGJu-A23-A24-Arg-Lys-A27-A38-01n-R2 Ajo-AjrAjz-Au-A^-Rj,其中A!是 Ser，Ala，或 Dap ；A3 是 Ser，Thr，或 Aib ；A^Leu，Nle, lie, Cha, 3_Nal，Trp, Pal, Phe 或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤 素，或CH3 ；八7是1^11，见6，lie,Cha, 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤 素，或CH3 ；A8 ^Met, Nva, Leu, Val, lie, Cha，或 Nle ；An 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal，Trp, Pal, Phe,或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一种卤 素，或CH3 ；A12 是 Gly 或 Aib;A15 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal, Trp, Pal, Phe,或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一种卤 素，或CH3 ；A16 是 Ser, Asn, Ala,或 Aib ；A17 是 S er，Thr，或 Aib ；
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A18 是 Met，Nva, Leu, Val, lie, Nle, Cha，或 Aib ；A19 是 Glu 或 Aib ；A21 是 Val，Cha，或 Met ;A23 是 Trp 或 Cha ；A24 是 Leu 或 Cha ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg, Gin,或 Cha ；A28 是 Leu 或 Cha ；A30 是 Asp 或 Lys ；A31 是 Val, Nle, Cha，或缺失；A32 是 His 或缺失；A33 是 Asn 或缺失；A34 是 Phe，Tyr，Amp, Aib,或缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ch2烷基，C2_C12链烯基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基 (napthylalkyl)，羟烷基，C2_12羟链烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(1羟萘烷基；或礼和R2 中的一个且只有一个是COEi，其中Ei是Ci_12烷基，C2_12链烯基，C7_2(1苯烷基，Cn_2(1萘烷基， (V12羟烷基，C2_12羟链烯基，C7_20羟-苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；以及R3是0H，NH2, (V12烷氧基，或NH-Y-CH2_Z，其中Y是一种烃部分并且Z是H， OH, C02H,或 C0NH2 ；条件是(i)A5，A7,A8, An, A15，A18，A21，A23, A24, A27, A28，和 A31 中至少一个是 Cha，或 A3，A12，A16，A17，A18，A19 和 A34 中至少一个是 Aib ；或(ii)至少 k,是 Dap, A7 是 3 -Nal，Trp, Pal，Phe，或 p-X-Phe, A15 是旦-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe, A27 是 h Arg,或 A31 是 N1 e。由上述通式包括的化合物的一个亚组是那些其中的A5，A7，An，A15，A18，A21，A23，A24， A27，A28，禾P A31中至少一个是Cha的化合物，例如，A3是Ser ;A5是lie ;A7是Leu或Cha ;A8是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A12 是 Gly ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A17 是 Ser ；A18 是 Met 或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, hArg,或 Cha ；A32 是 His ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ；^ 是 H ;R2 是 H ；以及 R3 是 NH2 ；条 件是 A5，A7，A8，An A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，禾口 A31 中至少"~~■个是 Cha，或 A3，A12，A16，A17， A18,A19和A34中至少一个是Aib。如果需要，A7和An中至少一个可以是Cha ；或A15，A23，A24， A27，A28，和A31中至少一个是Cha。在另一个亚组中，A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一个是Aib。例如，A3是Ser 或 Aib ;A5 是 lie ;A7 是 Leu 或 Cha ;A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ； A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ；队 是 H ;R2 是 H ；以及 R3 是 NH2 ；条件是 A5，A7，A8，An，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和 A31 中至少 有一个是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一个是Aib。如果需要，中至 少一个可以是Cha ；或A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一个是Cha。在另一个亚组中，A5,A7, A8, An, A15，A18，A21，A23，A24, A27，A28，和 A31 中至少一个是 Cha,或 A3，A12，A16，A17，A18，A19，和 A34 中至少一个是 Aib。例如，A3 是 Ser 或 Aib ;A5 是 lie ; A7 是 Leu 或 Cha ;A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ；A31 是 Val，Nle，或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe，Tye，Amp，或 Aib ；队是 H ;R2 是 H ；以及 民是冊2。如果需要，中至少一个是Cha并且A16，A19，和A34中至少一个是Aib ；或 者A24，A28，和A31中至少一个是Cha并且A16和A17中至少一个是Aib。在另一个亚组中，至少一个Ai 是 Dap，~是 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，A13 是旦-恥1，11卬，卩31，卩116，或？-1-卩116。如果，々1是5吐，617，或Dap ；八3是361~或Aib ；A8是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, bArg,或 Cha ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp，或Aib ；礼是11;1 2是11;以及民是順2。下面是上面通式包括的本发明肽的例子[Cha7] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha11] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha15] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7,11] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Tyr34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha23]hPTH(l_34)NH2 ； [Cha24] hPTH(l-34) NH2 ； [Nle8'18, Cha27]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha31] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha27] hPTH (1_34) NH2 ； [Cha27'29] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha28] bPTH (1-34) NH2 ； [Cha28] rPTH (1-34) NH2 ； [Cha24’28’31] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib19] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib16’19] hPTH(l-34)NH2 ； [Aib16’19’34]bPTH(l_34)NH2 ； [Aib16’34]hPTH(l_34)NH2 ； [Aib19’34]hPTH(l_34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib16'19, Tyr34] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18'31, Aib16'19, Tyr34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7, Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha11, Aib16] hPTH (1-34) 2 ； [Cha7, Aib34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha11, Aib34] hPTH(1—34) NH2 ； [Cha27, Aib16] hPTH(1—34) NH2 ； [Cha27, Aib34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha28, Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha28, Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Nle31] hPTH(l-34)NH2 ； [hArg27]hPTH(1-34)NH2 ； [Dap1, Nle8'18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Nle31] bPTH(l-34)NH2 ； [Nle31]rPTH(l_34)NH2 ； [hArg27] bPTH (1-34) NH2 ； [hArg27] rPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Aib19, Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Aib12]hPTH(l_34)NH2 ； [Cha24’28’31，Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28,31] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib3] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha8]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha15]hPTH(l_34) NH2 ； [Cha7'11, Aib19]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha7’ n, Aib16]hPTH(l-34)NH2 ； [Aib17] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha5] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib19, Tyr34] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib19, Lys30, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Cha7'n'15]hPTH(l-34)NH2 ； [Aib17]hPTH(1-34)NH2 ； [Cha7'11, Leu27] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15, Leu27] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7ai'27]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15'27] hPTH(l-34)NH2 ； [Trp15]hPTH(l-34)NH2 ； [Nal15]hPTH(l_34)NH2 ； [Trp15, Cha23] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha15'23]hPTH(1-34) NH2 ； [Phe7'11] hPTH (1-34) NH2 ； [Nal7'n]hPTH(l-34) NH2 ； [Trp7' n]hPTH(l-34)NH2 ； [Phe7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Nal7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Trp7'11'15] hPTH(l-34)NH2 ；和[Tyr7'lia5]hPTH(l-34)NH2。另一方面，本发明涉及由下式包括的肽或其药学上可接受的盐； 其中是 Ala, Ser 或 Dap ；△3是561~，或八让；八5是圯8，lie，或Cha ；八7是1^11，0^，肌6，日-恥1，11印，卩&1，卩116，或？-父-卩116，其中1是011，一种卤素，或 CH3 ；A8 是 Leu, Met,或 Cha ；A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe，或 & -Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His;A15 是 lie，或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 Hi s，Aib，或 Glu ;A26 是 Hi s，Aib，或 Lys ;A27 是 Leu, Lys,或 Cha ;A28 走 lie, Leu, Lys,或 Cha ;A29 是 Ala，Glu，或 Aib ;A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32 是 His 或缺失；A33 是 Thr 或缺失；A34 是 Ala 或缺失；每一个礼和R2分别是H，Ch2烷基，C7_C2Q苯烷基，Cn_2(1萘烷基，CH2羟烷基，C2_12 羟链烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；或礼和R2中一个且只有一个是COEi，其中Ei
-12 焼基，C2-i2 焼基，C2-i2
链烯基， Cj-20 本焼基，Cn_20 萘烷基，Ci_12羟烷基，c2_12羟链烯基， c7_20羟苯烷基，或cn_2(l羟萘烷基；以及
R3是0H，NH2, (V12烷氧基，或NH-Y-CH2_Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H， OH, C02H 或 C0NH2 ；条件是(i)A5，A7,A8, An, A15，A18，A22，A23, A24, A27, A28，A30 和 A31 中至少一个是 Cha， 或A3， A12，A16，A17，A18，A19，A22，A25，A26，A29，A30， 禾口 A34 中至少一个是 Aib ；或(ii)A23，A24，A27， A28，或A31中至少一个是Lys。在一个实施例中，中至少一个是Cha。在另一个实施 例中，A16或A19中至少一个是Aib。刚叙述的式的肽的特殊例子包括，但不限于，[Cha7] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha11] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib16, Tyr34hPTHrP(l-34)NH2 ； [Aib19]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib16'19]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7’ "，Aib16hPTHrP(l-34)NH2 ;[Cha7'"，Aib19]hPTHrP (1-34)NH2 ;[Cha22，Leu23'28'31，Glu25'29，Lys26' 30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22’25’29，Leu23'28'31, Lys26'27'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22'23, Glu25’ 29，Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ;[Glu22’25’29，Lys23'26'30, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Cha30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23' 31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22'23'24'27'28'31, Glu25'29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Cha23'24'28'31, Lys26'27'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Cha23'24'27'31, Lys25'28'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22’25’29，Lys23'26'30, Cha24’27’28’31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28' 31，Glu25'29, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'31, Glu25'29, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Lys23'26'30, Glu25'29, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28'31, Glu25, Lys26'
30,Aib29] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'28'31, Lys26'27'30, Aib29]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Lys23'26'30, Leu28'31, Aib29] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'31, Lys26'28'30, Aib29]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP(l-34)NH2 ； [Cha7'11'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP(1-34) NH2;[Cha7'n, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11'22'23, Glu25'29, Leu28'
31,Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26' 30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15'22' 23，Glu25'29, Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2； [Cha15, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, LeU23’28’31，LyS26，Aib30]hPTHrP(l-34)NH2 ;[Cha15，GlU22’28’29，LeU23’31，LyS26’28’30]hPTHrP(l-34) NH2 ;[Cha15'30, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7' 8,22,23，Glu25'29, Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30] hPTHrP(1-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31]hPTHrP(l-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8'30, Glu22' 25,29，Lef，LyS26]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7'11'22, Met8, Asn10, His14, Leu23'28' 31，Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34)NH^tSer1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29,Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP(l-34)NH2 ^Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22,25,29， Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP(l-34)NH2 ；Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Lys23' 26,30，Ley]hpTHrp(1_34)NH2 ;[Serl，Ile cha7,n，Met8，Asn10, His14, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29，LyS26’3°]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7’11，Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28' 31，Lys26, Aib3。]PTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7'11'22'23, Met8, Asn10, His14, Glu25'29, Leu28' 31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'11'15, Met8, Asn10, His14]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11, His14, Aib16]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11'28'31, His14, Cha22'23, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, His14, Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys24'26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'29, Leu23'28' 31, Aib25, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23'28'31, Aib26, Lys30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28, Lys 26'30'31]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Cha22, Glu25'29, LyS26’3。]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'28'31, His14, Glu22'25'29, LyS23,26,3。]PTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25' 29，Lys26,27,30]hpTHrp(1_34)NH2 ； [Seri;工^，临仏八卯1。，Leu"'23'31, HiS14，G1U22,25,29，LyS26'
28’30]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25, Aib29, Lys26' 30]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25'29, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ；or [Ser1, I le5，Met8] hPTHrP (1-34) NH2。除了 N末端氨基酸以外，此公开中所有氨基酸简称(例如六^或。代 表-NH-CHR)-C0-结构，其中，R是氨基酸的侧链(例如，013是々13侧链)。对于N末端氨基 酸，简称代表=N-CH(R)-C0-结构，其中R是氨基酸侧链。0_Nal，Nle，Dap，Cha，Nva，Amp， Pal，和Aib分别是下列a-氨基酸的简称邛-(2-萘基)丙氨酸，正亮氨酸，a，0 - 二氨 基丙酸，环己基丙氨酸，正缬氨酸，4-氨基-苯丙氨酸，3-吡啶丙氨酸，和a -氨基异丁酸。 在上式中，羟烷基，羟苯烷基，和羟萘烷基可能含有1-4个羟基取代基。又及，COEi代表-C =0 E10 -C = 0 Ei的例子包括，但不限于，乙酰基和苯丙酰基。本发明的肽在此处也以另一种形式表示，例如，[Cha7ai]hPTH(l-34)NH2，具有在第 二对括号中的天然序列的取代氨基酸(例如，在pHTH中以Cha7取代Leu7，并以Cha11取代 Leu11)。简称hPTH代表人pTH，hPTHrP代表人PTHrP，rPTH代表大鼠PHT，以及bPTH代表 牛PTH。括号中的数字是指肽中存在的氨基酸数目(例如，hPTH(l-34)是人PTH肽序列的 1 到 34 位氨基酸)。hPTH(l-34), hPTHrP (1-34), bPTH(l_34)，和 rPTH(l_34)的序列列表 于 Nissenson 等，受体(Receptor), 3 =193(1993) PTH(1-34) NH2 中的名称 “NH2” 表明肽的 C末端是氨化的。与此相反，PTH(l-34)具有游离酸C末端。本发明的每一种肽都能够刺激受治疗者(换言之，一个哺乳动物例如病人)的骨 生长。因而，当单独施用或与抗再吸收治疗例如二磷酸盐和降钙素等共同使用时，在治疗骨 质疏松和骨折中是有效的。本发明的肽可以药学可接受盐的形式提供。此类盐的例子包括，但不限于，那些与 有机酸(例如，乙酸，乳酸，马来酸，柠檬酸，苹果酸，抗坏血酸，琥珀酸，苯甲酸，甲磺酸，甲苯磺酸，或pamoic acid)，无机酸(例如，盐酸，硫酸，或磷酸)，以及聚酸(例如，单宁酸，羧 甲基纤维素，聚乳酸，聚乙二醇酸，或聚乳酸-聚乙二醇酸共聚物)形成的盐。治疗有效量的本发明的肽与一种药学可接受载体物质(例如，碳酸镁，乳糖，或一 种磷脂，用其使治疗组合物能形成微团)一起形成一种用于对受治疗者给药(例如，口服， 静脉内给药，穿皮给药，经肺给药，阴道给药，皮下给药，鼻内给药，离子电渗给药，或气管内 给药)的治疗组合物(例如，丸剂，片剂，胶囊，或液体)。用于口服的丸剂，片剂，或胶囊可 用一种物质包被，以保护活性成分在胃部一定时间内不被胃酸或肠内的酶破坏，足以使它 在进入小肠时未被消化。治疗组合物也可以生物可降解或生物不可降解缓释制剂的形式 用于皮下或肌肉内给药。参看，例如，美国专利3，773，919和4，767，628和PCT申请No. Wo 94/15587。也可使用可移植的或外接泵(例如，INFUSAID pump)进行连续给药。也可进 行间歇的例如每天注射一次，或低剂量连续的，例如缓释剂型给药。用于治疗上述疾病或紊乱的本发明肽的剂量根据给药方式，受治疗者的年龄和体 重，以及要治疗的受治疗者的健康状况而变化，并且最终由护理医生或兽医决定。在本发明范围内还考虑到把由上述通式包括的肽用于治疗与骨生长缺陷等有关 的疾病或紊乱，例如骨质疏松或骨折。本发明其它的特征和优点将通过详细的描述以及权利要求说明。基于此处的描述，本发明可得以最充分程度地使用。要理解下面的特定实施例仅 是为了说明，而不在任何意义上限制本公开的其余部分。此外，此处引用的所有出版物都以 参考文献并入本发明。结构已报道PTH(1_34)有两个双嗜性a螺旋结构域。参看，例如，Barden等，生物化 学(Biochem.)，32 7126 (1992)。第一个a -螺旋在氨基酸残基4到13之间形成，而第二 个a “螺旋在氨基酸残基21到29之间形成。本发明的一些肽含有在PTH(1_34)这两个区 域内部或附近的一个或多个残基的Cha取代，例如，第一个a -螺旋内的Cha7和Cha11或者 第二个a -螺旋内的Cha27和Cha28。本发明还包括具有Aib对邻近a -螺旋的取代，例如，Aib16，Aib19，和Aib34 ；hArg27 和Nle31，或Dpa对N-末端残基取代的PTH(1_34)的变体。合成本发明的肽可通过标准的固相合成法制备。参看，例如Stewart，J.M.等，固相合 成(Solid Phase Synthesis) (Pierce Chemical Co.，2d ed. 1984)。下面是对怎样制备 [Aib34]hPTH(1-34)NH2的描述。本发明的其它肽可以由本技术领域普通技术人员通过类似 方式制备。肽在Applied Biosystems (Foster City, CA)的改进以加速 Boc-化学固相肽 合成的430A型肽合成仪上合成。参看Schnoize，等，“国际肽和蛋白质研究杂志”(Int. J. Peptide Protein Res.)，90 :180 (1992)。使用 了具有 0. 93mmol/g 取代基的 4-甲基 二苯甲基胺(MBHA)树脂(Peninsula，Belmont, CA)。使用具有下面的侧链保护的Boc 氨基酸(Bachem, CA, Torrance, CA ；Nova Biochem.，La Jolla, CA) :Boc_Arg(Tos)_0H， Boc-Asp(0cHxl)-0H, Boc-Asn(Xan)-OH, Boc-Glu(OcHxl)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Asn-GH,Boc—Val—OH，Boc—Leu—OH，Boc-Ser-0H, Boc-Gly-0H, Boc—Met—OH，Boc—Gln—OH，Boc-Ile-OH, Boc-Lys (2C1Z) -OH, Boc-Ser (Bzl) -OH,和 Boc-Trp (Fm) -OH。合成在 0. 14mmol 的量进行。用100% TFA处理2X 1分钟去除Boc基团。Boc氨基酸(2. 5mmol)在4ml DMF 中用HBTU(2. Ommol)和DIEA(1. 0ml)预活化并在不预先中和肽-树脂TFA盐条件下偶联。 偶联时间是5分钟，但Boc-Aib-OH和下面Boc-Asn (Xan) -0H残基的情况除外，其偶联时间 是20分钟。肽链装配结束之后，在DMF中用20%巯基乙醇/10% D正A溶液处理树脂2 X 30分 钟以去除组氨酸侧链上的DNP基团。然后用100 % TFA处理2 X 2分钟去除N末端Boc基团。 用DMF中的10%DIEA中和肽-树脂(1X1分钟)之后，用15%乙醇胺/15%水/70% DMF 溶液处理2 X 30分钟去除色氨酸侧链上的甲酰基。用DMF和DCM洗脱部分去保护的肽-树 脂并减压干燥。最后一步断裂通过在含有lmL苯甲醚的lOmLHF中于0°C下振荡肽-树脂 75分钟进行。用氮气流除去HF。用乙醚(6X10mL)洗脱残余物并用4NH0Ac (6X 10mL)提 取。使用反相Vydac C18柱(Nest Group, Southborough, MA)用反相制备高压液相色 谱(HPLC)方法纯化水提物中的肽混合物。以10ml/分钟的流速采取线性梯度(130分钟内 溶液B从10%到45% )洗脱柱(溶液A = 0. TFA水溶液；溶液B =含0. TFA的乙 腈)。收集级分并用检测HPLC测定。把含有纯产物的级分合并，并冷冻干燥。获得62. 3 毫克白色固体。根据检测HPLC测定的纯度>99%。电喷射质谱仪检测得到的分子量是 4054. 7 (与计算分子量4054. 7相符)。[Cha7'11] hPTH (1-34) NH2 的合成和纯化以与上述[Aib34] hPTH (1-34) NH2 的合成相同 的方式进行。被保护的氨基酸Boc-Cha-OH购于Bachem，CA。终产物纯度> 98%，电喷射质 谱仪得到的分子量是4197. 0 (计算分子量是4196. 9)。上面所用简称的全名如下Boc代表叔丁氧羰基，HF代表氧化氢，Fm代表甲酰基， Xan代表咕吨基，Bzl代表苄基，Tos代表甲苯磺酰基，DNP代表2，4- 二硝基苯基，DMF代表 二甲基甲酰胺，DCM代表二氯甲烷，HBTU代表2-(lH-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲 六氟磷酸，DIEA代表二异丙基乙胺，HOAc代表乙酸，TFA代表三氟乙酸，2C1Z代表2-氯苄 氧羰基以及OcHxl代表邻-环己酯。上述通式中的取代基礼和R2可以通过本技术领域熟知的标准方法连结到N末端 氨基酸的游离胺。例如，烷基，诸如，。2烷基，可以使用还原烷基化方法连结。羟烷基，例 如Ci_12羟烷基，也可以在用叔丁酯保护自由羟基情况下使用还原烷基化方法连结。酰基，例 如，COEi，可以通过把全部树脂与二氯甲烷中3摩尔当量的两种游离酸和二异丙基碳二亚胺 混合1小时，并以产生的树脂按上述洗脱程序(a)至⑴步骤循环，将游离酸例如EfOOH偶 联到N末端氨基酸的游离胺实现结合。如果游离酸含有自由羟基，例如，对_羟苯丙酸，则 偶联应当在添加3摩尔当量H0BT的情况下进行。本发明的其它肽可以由本技术领域普通技术人员按照类似方法制备。功能检测A.与PTH受体的结合测定了本发明肽结合到Sa0S_2(人骨肉瘤细胞)上PTH受体的能力。Sa0S_2细 胞(美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, Rockville,MD ；ATCC # HTB 85)保存于于37°C下空气中含5%二氧化碳的潮湿空气中的补充有10%胎牛血清(FBS)和2mM谷氨酸的RPMI 1640培养基中(Sigma，St. Louis，M0)。每三或四天换一次培 养基，每星期通过胰蛋白酶消化对细胞传代培养。将SaOS-2细胞保持四天直到铺满为止。用含5 % FBS的RPMI 1640培养基 替换原培养基，并在10_"M到10_4M之间不同浓度的竞争性发明肽存在下与10X104cpm 单-125I-[Nle8,18，Tyr34 ( 3-125I)]bPTH(l-34)NH2—起室温培养 2 小时。使用冰冷 PBS 洗细 胞四次并用0. 1M氢氧化钠裂解，细胞相联的放射活性用闪烁计数仪计数。单-125I-[Nle8’ 18，Tyr34 (3-125I) ]bPTH(1-34) NH2 按照 Goldman, M. E.等，内分泌学(Endocrinol.)，123 1468(1988)所述进行合成。对本发明的不同肽进行了结合检测，并计算了每种肽的IC5Q值(单-125I-[Nle8’18， Tyr34 ( 3-125I)]bPTH (1-34) NH2 结合的半最大抑制)。如表I所示，所有检测的肽对SaOS-2细胞上的PTH受体具有高结合亲合性。B.刺激腺苷酸环化酶活性检测了本发明肽诱导SaOS-2细胞生物学反应的能力。更特定地，通过按 Rodan 等，“临床研究杂志” (J.Clin. Invest.) 72 1511(1983)和 Goldman 等，“内分泌 学”(Endocrinol.) 123 1468 (1988)所述检测cAMP (腺嘌呤核苷3'，5'-单磷酸)的合 成水平测定了对腺苷酸环化酶的刺激。在24孔板上新鲜培养基中铺满的SA0S-2细胞与 0. 5 u Ci [3H]腺嘌呤(26. 9Ci/mmol，New England Nuclear, Boston,MA) 一起 37°C温育 2 小 时，并用Hank' s平衡盐溶液(GibC0，GaitherSburg，MD)洗两次。细胞在新鲜培养基中用 ImM IBMX[异丁甲基-黄嘌呤，Sigma，St，Louis，M0]处理15分钟，并将发明的肽加到培养 基中温育5分钟。加入1.2M三氯乙酸(TCA) (Sigma, St. Louis,M0)终止反应，随后用4N氢 氧化钾中和样品。用双柱色谱方法(Salmon，等，1974，分析生物化学(Anal. Biochem.) 58， 541)分离cAMP。在闪烁计数仪中(液体闪烁计数仪2200 CA, PACKARD, Downers Grove, IL) 计数放射活性。分别计算供试肽的EC5(i值(腺苷酸环化酶半最大刺激)并显示于表1。所有供试 肽都是对腺苷酸环化酶活性的有效刺激物，其表现为作为次于成骨细胞增殖(例如，骨生 长)的信号的生化途径。表 1 注Kd(iiM)解离常数；EC5Q(nM)半最大刺激浓度。其它实施方案必须了解当与其详细描述结合描述本发明时，前面的描述是为了说明而不是限制 发明的范围，它由附上的权利要求的范围确定。其它方面，优点以及改进都在权利要求中。
权利要求
下式的一种肽或其药学上可接受的盐其中A1是Ser，Ala，或Dap；A3是Ser，Thr，或Aib；A5是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A7是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Cha，或Nle；A11是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A12是Gly或Aib；A15是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一种卤素，或CH3；A16是Ser，Asn，Ala，或Aib；A17是Ser，Thr，或Aib；A18是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Nle，Cha，或Aib；A19是Glu或Aib；A21是Val，Cha，或Met；A23是Trp或Cha；A24是Leu或Cha；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，Gln，或Cha；A28是Leu或Cha；A30是Asp或Lys；A31是Val，Nle，Cha，或缺失；A32是His或缺失；A33是Asn或缺失；A34是Phe，Tyr，Amp，Aib，或缺失；每一个R1和R2独立地是H，C1-12烷基，C2-C12链烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羟烷基，C2-12羟链烯基，C7-20羟苯烷基，或C11-20羟萘烷基；或R1和R2中的一个且只有一个是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12链烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羟烷基，C2-12羟链烯基，C7-20羟-苯烷基，或C11-20羟萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z其中Y是一个C1-12烃部分并且Z是H，OH，CO2H，或CONH2；条件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一个是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19和A34中至少一个是Aib。FSA00000070239800011.tif
2.根据权利要求1的肽或其药学上可接受的盐，其中A7，An，A15，A23，A24，A27，A28，和A31 中至少一个是Cha。
3.根据权利要求2的肽或其药学上可接受的盐，其中 A3 是 Ser ；A5是lie ；A7 是 Leu ；或 Cha ；A8 :^Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A12 是 Gly ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A17 是 Ser ；A18 是 Met，或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, hArg,或 Cha ； A32 是 His ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
4.根据权利要求3的肽或其药学可接受的盐，其中A7和An中至少一个是Cha。
5.根据权利要求4的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Cha7ai]hPTH(l-34)NH2， [Cha7'11, Nle8'18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Chan]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15]hPTH(l-34)NH2 ； 或[Cha7] hPTH (1-34) NH2。
6.根据权利要求3的肽或其药学可接受盐，其中A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一个 是 ChaD
7.根据权利要求6的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Cha23]hPTH(1-34)NH2， [Cha24] hPTH (1-34) NH2, [Nle8'18, Cha27] hPTH (1-34) NH2，[Cha28] hPTH (1-34) NH2，[Cha31] hPTH(l-34)NH2, [Cha24,28,31]hPTH(1—34) NH2 ； [Cha24'28'31，Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28'31] hPTH(l-34)NH2 ；或[Cha15] hPTH (1-34) NH2。
8.根据权利要求1的肽或其药学可接受盐，其中A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少 一个是Aib。
9.根据权利要求8的肽或其药学可接受盐，其中 A3 是 Ser 或 Aib ；3八5是lie ； A7 是 Leu 或 Cha ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
10.根据权利要求9的肽或其药学可接受盐，其中A3，A12，A16，A17，A19，和A34中至少一个 是 Aib。
11.根据权利要求10的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Aib16]hPTH(1-34)NH2， [Aib19]hPTH(1-34) NH2, [Aib34]hPTH(1-34) NH2 ； [Aib16’19]hPTH(l_34)NH2 ； [Aib3]hPTH(l_34) NH2 ； [Aib17]hPTH(l-34)NH2 ；或[Aib12]hPTH(1-34) NH2。
12.根据权利要求1所述的肽或其药学可接受盐，其中A7，An，A15，A23，A24，A27，A28，和A31 中至少一个是Cha并且A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一个是Aib。
13.根据权利要求12所述的肽或其药学可接受盐，其中 A3 是 Ser 或 Aib ；八5是lie ； A7 是 Leu 或 Cha ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tye, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ;R2是H ；以及民是^12。
14.根据权利要求13的肽或其药学可接受盐，其中中至少一个是Cha并且A16， A19，和A34中至少一个是Aib。
15.根据权利要求14 的肽，其中所述肽是[Cha7'11, Nle8’18，Aib16’19，Tyr34]hPTH(l_34) NH2，[Cha7'1\Nle8'18'31, Aib16,19,Tyr34]hPTH(l-34)NH2 ;[Cha7'n,Aib19]hPTH(l-34)NH2 ;[Cha7' "，Aib16]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib34]hPTH(1-34) NH2 ；或[Cha7'11, Aib19, Lys30] hPTH(l-34)NH2。
16.根据权利要求13的肽或其药学可接受盐，其中A24，A28，和A31中至少一个是Cha并 且A16和A17中至少一个是Aib。
17.根据权利要求16的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Cha28，Nle8'18,Aib16’19， Tyr34]hPTH(l-34)NH2，或[Cha28，Aib16’19]PTH(l_34)NH2。
18.下式的肽或其药学可接受盐 其中八3是361~，1111~，或 Aib ；A5 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal，Trp, Pal, Phe 或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一种卤素，或ch3；A^Leu，lie, Nle, Cha, 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 H，0H，一种卤素， 或 CH3 ；A8 ^Met, Nva, Leu, Val, lie, Cha,或 Nle ；An 是 Leu，Nle, lie, Cha, ^-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤素， 或 CH3 ；A12 是 Gly 或 Aib ；A15 是 Leu，Nle, lie, Cha, ^-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤素， 或 CH3 ；A16 是 Ser, Asn, Ala,或 Aib ； A17 是 Ser，Thr，或 Aib ；A18 是 Met, Nva, Leu, Val, lie, Nle, Cha,或 Aib ；A19 是 Glu 或 Aib ；A21 是 Val, Cha,或 Met ；A23 是 Trp 或 Cha ；A24 是 Leu 或 Cha ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg, Gin, Cha ；A1-Val-A3-Glu-A5-Gln-A7-A8-His-Asn-A11A28 是 Leu 或 Cha ；A30 是 Asp 或 Lys ；A31 是 Val，Nle, Cha，或缺失；A32是His或缺失;A33是Asn或缺失；A34 是 Phe，Tyr，Amp, Aib，或缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ci_12烷基，C2-C12链烯基，C7_20苯烷基，Cn_20萘烷基，Ci_12羟 烷基，C2_12羟链烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；或礼和R2中的一个且只有一个是 COEi，其中Ei是Ci_12烷基，C2_12链烯基，C7_2(1苯烷基，Cn_2(1萘烷基，Ci_12羟烷基，C2_12羟链烯 基，C7_20羟-苯烷基，或Cn_2(l羟萘烷基；R3是0H，NH2, Ci_12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H，0H， C02H,或 C0NH2 ；条件是至少 Ai 是0(1 ，~是 3-妝1，扑？，卩31，卩1^，或？-1-卩116 ；P15 是 0-Nal，Trp，Pal， Phe,或 p-X-Phe, A27 是 hArg,或 A31 是 Nle。
19.根据权利要求18的肽或其药学可接受盐，其中 是 Ser, Gly,或 Dap ；A3 是 Ser 或 Aib ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib 或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
20.根据权利要求19的肽或其药学可接受盐，其中所述肽是[Nle31]hPTH(1-34)NH2， [hArg27]hPTH(1-34)朋2，或[Dap1，Nle8'18, Tyr34]hPTH(l_34)NH2。
21.有下面分子式的肽或其药学可接受盐 其中是 Ala, Ser 或 Dap ； A3 是 Ser，或 Aib ； A5 是 His, lie,或 Cha ；八7是1^11，0^，肌6，3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一种卤素，或 CH3 ； A8 是 Leu, Met,或 Cha ； A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe,或旦 _Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His ；A15 是 lie,或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 His, Aib,或 Glu ；A26 是 His, Aib,或 Lys ；A27 是 Leu, Lys,或 Cha ；A28 是 lie, Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Ala, Glu,或 Aib ；A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32是His或缺失;A33是Thr或缺失；A34是Ala缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ci_12烷基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基，Ci_12羟烷基，C2_12羟链 烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(1羟萘烷基；或礼和R2中一个且只有一个是COEi，其中Ei是Ci_12 焼基，C2_12焼基，C2_12 链烯基， Cj-20 本焼基，Cn_2Q 萘烷基，Ci_12羟烷基，c2_12羟链烯基，c7_20羟 苯烷基，或cn_2(l羟萘烷基；以及R3是0H，NH2，(V12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H，0H，C02H 或 C0NH2 ；条件是 A5，A7，A8，An，A15，A 18，A22，A23，A24 A27 A28 A30 或A31中至少一个是Cha,或A3，A12， A16，A17 A18 A19 A22 A25 A26 A29 A30 或A34中至少一个是Aib。
22.根据权利要求21的肽或其药学可接受盐，其中A22是Phe或Cha；A23是Phe或Cha ； A25 是 His ；A26 是 His ；A27 是 Leu 或 Cha ；A28 是 lie 或 Cha ；A29 是 Ala ；A30 是 Glu 或 Lys ；A31 是 lie 或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
23.根据权利要求22的肽或其药学可接受盐，其中A7和An中至少一个是Cha。
24.根据权利要求22的肽或其药学可接受盐，其中A16或A19中至少一个是Aib。
25.根据权利要求21的肽或其药学可接受盐，其中A22是Glu,Aib或Cha ；A23是Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 Aib 或 Glu ；A26 是 Aib 或 Lys ；A28 是 Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Glu 或 Aib ； A30 是 Cha, Aib 或 Lys ；A31 是 leu, Cha 或 Lys ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
26.根据权利要求25的肽或其药学可接受盐，其中A7和An中至少一个是Cha。
27.根据权利要求25的肽或其药学可接受盐，其中A16或A19中至少一个是Aib。
28.下式的肽或其药学可接受盐 其中是 Ala, Ser 或 Dap ； A3 是 Ser 或 Aib ； A5 是 His, lie,或 Cha ；八7是1^11，0^，肌6，旦-恥1，！1印，卩31，卩116，或？-父-卩116，其中乂是011，一种卤素，或013 ； A8 是 Leu, Met,或 Cha ； A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe,或旦 _Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His ；A15 是 lie,或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 His, Aib,或 Glu ；A26 是 His, Aib,或 Lys ；A27 是 Leu, Lys,或 Cha ；A28 是 lie, Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Ala, Glu,或 Aib ；A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32是His或缺失;A33是Thr或缺失；A34是Ala或缺失；每一个礼和R2独立地是H，Ci_12烷基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基，Ci_12羟烷基，C2_12羟链 烯基，C7_20羟苯烷基，或Cn_2(1羟萘烷基；或礼和R2中一个且只有一个是COEi，其中Ei是Ci_12 焼基，C2_12焼基，C2_12 链烯基， Cj-20 本焼基，Cn_2Q 萘烷基，Ci_12羟烷基，c2_12羟链烯基，c7_20羟 苯烷基，或cn_2(l羟萘烷基；以及R3是0H，NH2，(V12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一个烃部分并且Z是H，0H，C02H 或 C0NH2 ；条件是A23' A24 A27j A28或A31中至少一个是Lys。
29.根据权利要求28的肽或其药学可接受盐，其中A22是Glu，Aib，或Cha；A23是Leu， Lys,或 Cha ；A25 是 Aib 或 Glu ；A26 是 Aib 或 Lys ；A28 是 Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Glu 或 Aib ； A30 是 Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 Leu, Cha,或 Lys ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
30.根据权利要求29的肽或其药学可接受盐，其中A7和An中至少一个是Cha；或其药 学可接受盐。
31.根据权利要求29的肽或其药学可接受盐，其中A16或A19中至少一个是Aib。
全文摘要
甲状旁腺素片段(1-34)的肽变体，其中在位于7，11，23，24，27，28和31位的氨基酸残基中至少有一个是环己基丙氨酸，或在位于3，16，17，18，19和34位的氨基酸残基中至少有一个是α-氨基异丁酸；或者，至少在1位的氨基酸残基是α，β-二氨基丙酸，27位的氨基酸残基是高精氨酸，或31位的氨基酸残基是正亮氨酸。
文档编号A61P3/14GK101851288SQ20101015054
公开日2010年10月6日 申请日期1996年7月3日 优先权日1995年7月13日
发明者董正欣 申请人:益普生药业公司
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