用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂及其制备方法
专利名称：用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及上述用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的制备方法，在搅拌条件下将溶解有脂质的有机溶剂与肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行混合形成脂质体的混悬液，再分离其中的有机溶剂并进行超声，得到脂质体制剂。
本发明涉及上述用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的另一种制备方法，通过将脂质溶解于有机溶剂中，通过旋转蒸发除去有机溶剂使其形脂质体膜，然后将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行以下两种任一一种方法 a)将水溶液加入脂质体膜中进行水合，冷冻干燥过夜并重新水合，形成脂质体的混悬液，反复冻融并超声处理； b)将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液加入超声振荡，形成脂质体的混悬液，高压乳均处理； 从而得到脂质体制剂。
根据本发明的技术方案所制备的脂质体包裹于抗原外部，同时内水相中含有碳酸氢盐或碳酸盐。通过内水相中的碳酸氢盐或碳酸盐中和内吞体或溶酶体的酸性环境，破坏内吞体或溶酶体内酶发生作用所需的酸碱环境，从而保护抗原免遭过度降解，保留了抗原表位，提高交叉提呈效率。
本发明能够根据不同的肿瘤，选择其肿瘤特异性或肿瘤相关抗原，用本发明所描述的制剂进行装载，然后给药，促进抗原提呈细胞对肿瘤抗原的交叉提呈，诱导机体产生针对肿瘤抗原的细胞免疫，从而达到抑制肿瘤生长，延长患者生存期的目的，既可以单独用于治疗肿瘤，也可以与其他治疗手段，如放疗、化疗和手术治疗等结合，也可以用于治疗肿瘤，也可以用于病毒感染疾病。
具体实施例方式 下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1 以0.3％碳酸钠溶液溶解20mg/mL的鸡卵白蛋白(ovalbumin)溶液，以氯化钠调节等渗，采用卵磷脂(EPC)/胆固醇(cholesterol)摩尔比1/1的脂质处方，通过乙醇注入法制备脂质体，将20mg EPC和10mg cholesterol溶于1mL乙醇中，用微孔滤膜过滤乙醇溶液，待用。将14mL20mg/mL的ovalbumin的0.3％碳酸钠溶液加入到50mL含有搅拌子的烧瓶中，然后在高速搅拌下将1mL脂质的乙醇溶液迅速注入形成脂质体的混悬液。透析除去乙醇，再对制得的脂质体进行超声，使其平均粒径为500纳米。
通过利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％ Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸钠浓度为0.3％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.4％，脂质浓度为0.2％。同样方法制备普通脂质体(以pH7.4的HEPES溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
向小鼠来源的骨髓来源树突状细胞(BMDC)中分别加入等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体、以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，37℃，5％CO2环境中培养12小时后，收集各孔细胞，离心洗去抗原，将各孔细胞分别与RF33.70细胞共培养，24小时后测定细胞培养上清液中的白介素-2含量。
表1RF33.70细胞分泌的白介素-2浓度 由表1可见，加入ovalbumin新型脂质体的树突状细胞能够更好实现交叉提呈，使特异性的RF33.70细胞分泌更高浓度的白介素-2。
实施例2 通过冷冻干燥法制备脂质体，以0.9％碳酸氢钠溶解ovalbumin形成2mg/mL的蛋白溶液，以氯化钠调节等渗，将含有40mg DPPC和10mg cholesterol溶于氯仿溶液，置于茄形瓶中，旋转蒸发仪上低压除去氯仿，加入1mL ovalbumin溶液水合，液氮冷冻，冷冻干燥过夜，重新水合，得到脂质体混悬液。对制得的脂质体进行反复冻融并超声，然后先后通过1000nm、400nm、200nm、100nm的膜，使其平均粒径为100nm左右。
利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸氢钠浓度为0.9％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.04％，脂质浓度为5％。同样方法制备普通脂质体(以pH7.4的PBS溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
在0、7、14天向6周龄的雄性C57/BL6小鼠左腹部皮下分别注射等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体、以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，第21天取小鼠T细胞，调整其浓度至3×106/mL，然后3×105T细胞和6×104事先用丝裂霉素C(50μg/mL，45分钟)处理过的E.G7-OVA细胞共培养，在24小时测IL-2含量，48小时测IFN-γ含量。
表2免疫小鼠T细胞分泌的白介素-2和干扰素-γ浓度 由表2可见，以ovalbumin新型脂质体免疫可以使小鼠产生细胞免疫，分泌更高浓度的IL-2和IFN-γ。
实施例3 通过薄膜分散法制备脂质体，将5mg DPPC、0.6mg cholesterol和0.4mg DOTAP溶于氯仿溶液中，加入茄形瓶中，30℃水浴，旋转蒸发除去氯仿使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，以3％碳酸氢钠溶解ovalbumin蛋白为10mg/mL的溶液，向茄形瓶中加入1mL ovalbumin溶液，超声振荡，室温放置2h，形成半透明的脂质复合物的混悬液。对制得的脂质体进行高压乳匀，使其平均粒径为200nm左右。
利用超速离心分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸氢钠浓度为3％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.005％，脂质浓度为0.6％。同样方法制备普通脂质体(以pH7.4的PBS溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
在0、7、14天向6周龄的雄性C57/BL6小鼠左腹部皮下分别注射等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，第21天取小鼠T细胞，用5×105/mL用丝裂霉素处理后的E.G7-OVA细胞刺激5天，培养液中同时加入IL-2，然后收集CTL效应细胞。E.G7-OVA作为靶细胞，以Na2CrO4标记测定细胞毒性。
表3免疫小鼠抗原特异性CTL活力(specific lysis％)
由表3可见，本实施例描述的ovalbumin新型脂质体诱导产生了较强的CTL活力。
实施例4 通过薄膜分散法制备脂质体，将10mg DMPC溶于氯仿溶液中，然后加入茄形瓶中，30℃水浴，旋转蒸发除去氯仿使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，以0.9％碳酸钠溶解ovalbumin蛋白为30mg/mL，向茄形瓶中加入1mL ovalbumin溶液，超声振荡，室温放置2h，形成半透明的脂质复合物的混悬液。对制得的脂质体进行高压乳匀，使其平均粒径为200nm左右。
利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸钠浓度为0.9％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.15％，脂质浓度为3％。同样方法制备普通脂质体(以0.9％NaCl溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
在第0、7、14天向6周龄的雄性C57/BL6小鼠左腹部皮下分别注射等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，在第21天，在小鼠皮下种E.G7肿瘤细胞，每只3×105 E.G7肿瘤细胞，然后每隔一天检测肿瘤直径。
表4免疫小鼠的肿瘤生长速度
由表4可见，本实施例描述的ovalbumin新型脂质体能够使免疫小鼠肿瘤生长速度明显减缓。
实施例5 通过薄膜分散法制备脂质体，将40mg DMPC和10mg cholesterol溶于氯仿溶液中，然后加入茄形瓶中，30℃水浴，旋转蒸发除去氯仿使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，以0.9％碳酸氢钠溶解人乳头瘤病毒(HPV)的E7蛋白为2mg/mL，向茄形瓶中加入1mLE7溶液，超声振荡，室温放置2h，形成半透明的脂质复合物的混悬液。对制得的脂质体进行高压乳匀，使其平均粒径为200nm左右。
利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中E7浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸氢钠浓度为0.9％，E7蛋白抗原浓度为0.05％，脂质浓度为5％。同样方法制备普通脂质体(以0.9％NaCl溶液作为E7蛋白的溶剂)，作为参比脂质体。
给6周龄的雌性C57/BL6小鼠注射TC-1细胞建立肿瘤，在第6天左腹部皮下分别注射等浓度的E7溶液、E7参比脂质体以及本实施例描述的E7新型脂质体，统计肿瘤生长小鼠的比例 表5免疫小鼠的肿瘤生长比例
由表5可见，本实施例描述的含有E7蛋白的新型脂质体能够使免疫小鼠肿瘤得到治愈。
权利要求
1.一种用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征在于，包括重量百分比为0.3～3％的碳酸氢盐或碳酸盐、重量百分比为0.0001～5％肿瘤蛋白质抗原、重量百分比为0.1～10％脂质，余量为水。
2.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的碳酸氢盐为碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸氢钙中的一种或其组合。
3.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的肿瘤蛋白质抗原为肿瘤特异性抗原和肿瘤的抗原。
4.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的脂质是指阳离子磷脂、阴离子磷脂或中性磷脂的聚乙二醇修饰产物或胆固醇中的一种或其混合，其粒径在20nm到50μm之间。
5.根据权利要求4所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的阳离子磷脂、阴离子磷脂或中性磷脂为两亲性双分子层囊泡结构或脂质颗粒结构。
6.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的碳酸盐为碳酸钠、碳酸钾或碳酸钙中的一种或其组合。
7.一种根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的制备方法，其特征在于，在搅拌条件下将溶解有脂质的有机溶剂与肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行混合形成脂质体的混悬液，再分离其中的有机溶剂并进行超声，得到脂质体制剂。
8.一种根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的制备方法，其特征在于，通过将脂质溶解于有机溶剂中，通过旋转蒸发除去有机溶剂使其形成脂质体膜，然后将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行以下两种任一一种方法
a)将水溶液加入脂质体膜中进行水合，冷冻干燥过夜并重新水合，形成脂质体的混悬液，反复冻融并超声处理；
b)将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液作超声振荡处理，形成脂质体的混悬液，高压乳均处理；
从而得到脂质体制剂。
全文摘要
一种抗肿瘤药物技术领域的制剂及其制备方法，包括重量百分比为0.3～3％的碳酸氢盐或碳酸盐、0.0001～5％肿瘤蛋白质抗原、0.1～10％脂质，余量为水。本发明能够促进对其所装载的蛋白或多肽抗原的交叉提呈，从而引起特异性的细胞免疫，达到治疗肿瘤或病毒感染的目的。
文档编号A61K47/24GK101816631SQ20101015716
公开日2010年9月1日 申请日期2010年4月27日 优先权日2010年4月27日
发明者徐宇虹, 陈剑 申请人:上海交通大学
技术领域：
本发明涉及上述用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的制备方法，在搅拌条件下将溶解有脂质的有机溶剂与肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行混合形成脂质体的混悬液，再分离其中的有机溶剂并进行超声，得到脂质体制剂。
本发明涉及上述用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的另一种制备方法，通过将脂质溶解于有机溶剂中，通过旋转蒸发除去有机溶剂使其形脂质体膜，然后将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行以下两种任一一种方法 a)将水溶液加入脂质体膜中进行水合，冷冻干燥过夜并重新水合，形成脂质体的混悬液，反复冻融并超声处理； b)将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液加入超声振荡，形成脂质体的混悬液，高压乳均处理； 从而得到脂质体制剂。
根据本发明的技术方案所制备的脂质体包裹于抗原外部，同时内水相中含有碳酸氢盐或碳酸盐。通过内水相中的碳酸氢盐或碳酸盐中和内吞体或溶酶体的酸性环境，破坏内吞体或溶酶体内酶发生作用所需的酸碱环境，从而保护抗原免遭过度降解，保留了抗原表位，提高交叉提呈效率。
本发明能够根据不同的肿瘤，选择其肿瘤特异性或肿瘤相关抗原，用本发明所描述的制剂进行装载，然后给药，促进抗原提呈细胞对肿瘤抗原的交叉提呈，诱导机体产生针对肿瘤抗原的细胞免疫，从而达到抑制肿瘤生长，延长患者生存期的目的，既可以单独用于治疗肿瘤，也可以与其他治疗手段，如放疗、化疗和手术治疗等结合，也可以用于治疗肿瘤，也可以用于病毒感染疾病。
具体实施例方式 下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1 以0.3％碳酸钠溶液溶解20mg/mL的鸡卵白蛋白(ovalbumin)溶液，以氯化钠调节等渗，采用卵磷脂(EPC)/胆固醇(cholesterol)摩尔比1/1的脂质处方，通过乙醇注入法制备脂质体，将20mg EPC和10mg cholesterol溶于1mL乙醇中，用微孔滤膜过滤乙醇溶液，待用。将14mL20mg/mL的ovalbumin的0.3％碳酸钠溶液加入到50mL含有搅拌子的烧瓶中，然后在高速搅拌下将1mL脂质的乙醇溶液迅速注入形成脂质体的混悬液。透析除去乙醇，再对制得的脂质体进行超声，使其平均粒径为500纳米。
通过利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％ Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸钠浓度为0.3％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.4％，脂质浓度为0.2％。同样方法制备普通脂质体(以pH7.4的HEPES溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
向小鼠来源的骨髓来源树突状细胞(BMDC)中分别加入等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体、以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，37℃，5％CO2环境中培养12小时后，收集各孔细胞，离心洗去抗原，将各孔细胞分别与RF33.70细胞共培养，24小时后测定细胞培养上清液中的白介素-2含量。
表1RF33.70细胞分泌的白介素-2浓度 由表1可见，加入ovalbumin新型脂质体的树突状细胞能够更好实现交叉提呈，使特异性的RF33.70细胞分泌更高浓度的白介素-2。
实施例2 通过冷冻干燥法制备脂质体，以0.9％碳酸氢钠溶解ovalbumin形成2mg/mL的蛋白溶液，以氯化钠调节等渗，将含有40mg DPPC和10mg cholesterol溶于氯仿溶液，置于茄形瓶中，旋转蒸发仪上低压除去氯仿，加入1mL ovalbumin溶液水合，液氮冷冻，冷冻干燥过夜，重新水合，得到脂质体混悬液。对制得的脂质体进行反复冻融并超声，然后先后通过1000nm、400nm、200nm、100nm的膜，使其平均粒径为100nm左右。
利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸氢钠浓度为0.9％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.04％，脂质浓度为5％。同样方法制备普通脂质体(以pH7.4的PBS溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
在0、7、14天向6周龄的雄性C57/BL6小鼠左腹部皮下分别注射等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体、以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，第21天取小鼠T细胞，调整其浓度至3×106/mL，然后3×105T细胞和6×104事先用丝裂霉素C(50μg/mL，45分钟)处理过的E.G7-OVA细胞共培养，在24小时测IL-2含量，48小时测IFN-γ含量。
表2免疫小鼠T细胞分泌的白介素-2和干扰素-γ浓度 由表2可见，以ovalbumin新型脂质体免疫可以使小鼠产生细胞免疫，分泌更高浓度的IL-2和IFN-γ。
实施例3 通过薄膜分散法制备脂质体，将5mg DPPC、0.6mg cholesterol和0.4mg DOTAP溶于氯仿溶液中，加入茄形瓶中，30℃水浴，旋转蒸发除去氯仿使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，以3％碳酸氢钠溶解ovalbumin蛋白为10mg/mL的溶液，向茄形瓶中加入1mL ovalbumin溶液，超声振荡，室温放置2h，形成半透明的脂质复合物的混悬液。对制得的脂质体进行高压乳匀，使其平均粒径为200nm左右。
利用超速离心分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸氢钠浓度为3％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.005％，脂质浓度为0.6％。同样方法制备普通脂质体(以pH7.4的PBS溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
在0、7、14天向6周龄的雄性C57/BL6小鼠左腹部皮下分别注射等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，第21天取小鼠T细胞，用5×105/mL用丝裂霉素处理后的E.G7-OVA细胞刺激5天，培养液中同时加入IL-2，然后收集CTL效应细胞。E.G7-OVA作为靶细胞，以Na2CrO4标记测定细胞毒性。
表3免疫小鼠抗原特异性CTL活力(specific lysis％)
由表3可见，本实施例描述的ovalbumin新型脂质体诱导产生了较强的CTL活力。
实施例4 通过薄膜分散法制备脂质体，将10mg DMPC溶于氯仿溶液中，然后加入茄形瓶中，30℃水浴，旋转蒸发除去氯仿使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，以0.9％碳酸钠溶解ovalbumin蛋白为30mg/mL，向茄形瓶中加入1mL ovalbumin溶液，超声振荡，室温放置2h，形成半透明的脂质复合物的混悬液。对制得的脂质体进行高压乳匀，使其平均粒径为200nm左右。
利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中ovalbumin浓度进行定量，，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸钠浓度为0.9％，ovalbumin蛋白抗原浓度为0.15％，脂质浓度为3％。同样方法制备普通脂质体(以0.9％NaCl溶液作为ovalbumin的溶剂)，作为参比脂质体。
在第0、7、14天向6周龄的雄性C57/BL6小鼠左腹部皮下分别注射等浓度的ovalbumin溶液、ovalbumin参比脂质体以及本实施例描述的ovalbumin新型脂质体，在第21天，在小鼠皮下种E.G7肿瘤细胞，每只3×105 E.G7肿瘤细胞，然后每隔一天检测肿瘤直径。
表4免疫小鼠的肿瘤生长速度
由表4可见，本实施例描述的ovalbumin新型脂质体能够使免疫小鼠肿瘤生长速度明显减缓。
实施例5 通过薄膜分散法制备脂质体，将40mg DMPC和10mg cholesterol溶于氯仿溶液中，然后加入茄形瓶中，30℃水浴，旋转蒸发除去氯仿使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，以0.9％碳酸氢钠溶解人乳头瘤病毒(HPV)的E7蛋白为2mg/mL，向茄形瓶中加入1mLE7溶液，超声振荡，室温放置2h，形成半透明的脂质复合物的混悬液。对制得的脂质体进行高压乳匀，使其平均粒径为200nm左右。
利用分子筛凝胶柱分离脂质体与游离蛋白，10％Triton溶液将脂质体破膜，HPLC对其中E7浓度进行定量，以测定所制备的脂质体的组分。最终的脂质体中碳酸氢钠浓度为0.9％，E7蛋白抗原浓度为0.05％，脂质浓度为5％。同样方法制备普通脂质体(以0.9％NaCl溶液作为E7蛋白的溶剂)，作为参比脂质体。
给6周龄的雌性C57/BL6小鼠注射TC-1细胞建立肿瘤，在第6天左腹部皮下分别注射等浓度的E7溶液、E7参比脂质体以及本实施例描述的E7新型脂质体，统计肿瘤生长小鼠的比例 表5免疫小鼠的肿瘤生长比例
由表5可见，本实施例描述的含有E7蛋白的新型脂质体能够使免疫小鼠肿瘤得到治愈。
权利要求
1.一种用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征在于，包括重量百分比为0.3～3％的碳酸氢盐或碳酸盐、重量百分比为0.0001～5％肿瘤蛋白质抗原、重量百分比为0.1～10％脂质，余量为水。
2.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的碳酸氢盐为碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸氢钙中的一种或其组合。
3.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的肿瘤蛋白质抗原为肿瘤特异性抗原和肿瘤的抗原。
4.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的脂质是指阳离子磷脂、阴离子磷脂或中性磷脂的聚乙二醇修饰产物或胆固醇中的一种或其混合，其粒径在20nm到50μm之间。
5.根据权利要求4所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的阳离子磷脂、阴离子磷脂或中性磷脂为两亲性双分子层囊泡结构或脂质颗粒结构。
6.根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂，其特征是，所述的碳酸盐为碳酸钠、碳酸钾或碳酸钙中的一种或其组合。
7.一种根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的制备方法，其特征在于，在搅拌条件下将溶解有脂质的有机溶剂与肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行混合形成脂质体的混悬液，再分离其中的有机溶剂并进行超声，得到脂质体制剂。
8.一种根据权利要求1所述的用于肿瘤治疗性疫苗的脂质体制剂的制备方法，其特征在于，通过将脂质溶解于有机溶剂中，通过旋转蒸发除去有机溶剂使其形成脂质体膜，然后将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液进行以下两种任一一种方法
a)将水溶液加入脂质体膜中进行水合，冷冻干燥过夜并重新水合，形成脂质体的混悬液，反复冻融并超声处理；
b)将肿瘤蛋白抗原的碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液作超声振荡处理，形成脂质体的混悬液，高压乳均处理；
从而得到脂质体制剂。
全文摘要
一种抗肿瘤药物技术领域的制剂及其制备方法，包括重量百分比为0.3～3％的碳酸氢盐或碳酸盐、0.0001～5％肿瘤蛋白质抗原、0.1～10％脂质，余量为水。本发明能够促进对其所装载的蛋白或多肽抗原的交叉提呈，从而引起特异性的细胞免疫，达到治疗肿瘤或病毒感染的目的。
文档编号A61K47/24GK101816631SQ20101015716
公开日2010年9月1日 申请日期2010年4月27日 优先权日2010年4月27日
发明者徐宇虹, 陈剑 申请人:上海交通大学
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