茶黄素用作抗真菌药物增效剂的用途的制作方法

专利名称：：茶黄素用作抗真菌药物增效剂的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，是茶黄素用作抗真菌药物增效剂的新用途。
背景技术：
：茶黄素为茶多酚中的一种，研究显示茶黄素具有调节血脂、预防心血管疾病的功效，有降血脂的独特功能，茶黄素不仅是一种有效的自由基清除剂和抗氧化剂，而且具有抗癌、抗突变、改善和治疗心脑血管疾病、治疗糖尿病等多种生理功能，其在食品、医药保健等领域的作用也越来越突出。茶黄素也具有抗菌作用，但无抗真菌作用，也未见其作为增效剂与抗真菌药物联合使用治疗真菌病的报道。
发明内容本发明提供一种茶黄素作为抗真菌药物增效剂的新用途。经体外细胞实验证实，其对氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑等抗真菌药物有明显的增效作用，对于临床耐药性菌株，当抗真菌药物和茶黄素合用时，能明显降低抗真菌药物的用药剂量，增强对耐药真菌的抑制作用。因此可将茶黄素用作抗真菌药物的增效剂，用于不同深部和浅部真菌感染的治疗。本发明为茶黄素开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物的增效剂，不仅能提高药物的抗真菌作用，而且在临床真菌耐药性日趋普遍，耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，还可降低抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少药物的毒副作用。具体实施例方式下面具体结合实施例，对本发明作详细描述。实施例1茶黄素和氟康唑联用对不同临床真菌株的作用材料和方法1.试药茶黄素武汉远城科技发展有限公司氟康唑注射液辉瑞制药有限公司，批号9167802。二甲亚砜上海世仪生物科技有限公司。茶黄素用二甲亚砜配成溶液，浓度为6.4mg/ml。各试药置于_20°C保存。实验前，将药物取出置于35°C温箱融化，充分混勻，分别进行药效学检验。2.菌株临床株耐药白念珠菌，包括103、17、18、38和0710448五株，热带念珠菌，包括409、936、422、0710453和0710087五株，均由上海长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、热带念珠菌等球状菌于30°C培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4°C保存备用。3.培养液1)RPMI1640液体培养液RPMI1640(GibcoBRL)IOg，NaHCO32.0g，吗啡啉丙磺酸(Sigma)34.5g(0.165M)，加三蒸水900ml溶解，INNaOHi周pH至7.0(25°C)，三蒸水定容至1000ml,0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装后于4°C保存备用。2)沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。3)YEPD培养液酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。4.仪器设备MultiskanMK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品)隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)Sff-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)5.菌液制备实验前，用接种圈从4°C保存的SDA培养基上挑取白念珠菌、热带念珠菌各球状菌少量，分别接种至ImlYEPD培养液，于30°C，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。再分别将菌液至ImlYEPD培养液中，用上述方法再次活化，培养16h，用血细胞计数板计数，以RPMI1640培养液调整菌液浓度至1XIO35X103CFU/ml。6.药敏板制备各菌株分别取无菌96孔板，于每排1号孔加RPMI1640液体培养基100μ1作空白对照；312号孔各加新鲜配制的菌液99μ1;2号孔分别加菌液196μ1和氟康唑2μ1；12号孔不含药物，只加菌液100μ1作阳性生长对照。调配不同浓度的茶黄素为1.6mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.lmg/ml。在每排的2号孔加相应浓度的茶黄素2μ1，3H号孔各加μ1。对211号孔进行10级倍比稀释，使各孔的最终氟康唑药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0·5,0.25和0.125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于将各药敏板于30°C恒温箱培养。7.MIC80值判定在30°C恒温箱中，念珠菌培养48h，用酶标分析仪于630nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80%以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC8tl(真菌生长80%被抑制时的药物浓度)。当药物的MIC8tl值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计=MIC8tl值高于最高浓度64μg/ml时，计为“>64μg/ml”;MIC8(1值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“彡0.125μg/ml”。上述实验均平行操作2到3次，当MIC8tl值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC8tl值；当MIC8tl值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。实验结果见表1、表2。表1茶黄素与氟康唑合用对5株临床耐药白念珠菌的MIC8tl值纟￡趴耐药白念珠菌(茶黄素Pg/ml)17_18_38_K)3_0710448FLC+茶黄素(16)0.1250.1250.1250.1250.125FLC+茶黄素(8)0.1250.1250.1250.1250.125FLC+茶黄素(4)0.250.250.1250.1250.125FLC+茶黄素(2)0.250.250.1250.1250.125FLC+茶黄素(1)0.250.250.1250.1250.125FLC>64>64>64>64>64茶黄素_32_64_16_16_16_注FLC表示氟康唑(下同)。表2茶黄素与氟康唑合用对5株热带念珠菌的MIC8tl值<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表1、2可见，16μg/ml的茶黄素与氟康唑合用，即可使临床耐药白念珠菌对氟康唑的MIC8tl值从>64μg/ml下降到0.06250.125μg/ml，使临床热带念珠菌对氟康唑的MIC8tl值从>64μg/ml下降到0.125μg/ml，说明茶黄素能明显增强氟康唑的抗真菌作用。实施例2茶黄素与其他唑类抗真菌药物的联合用药材料和方法1.药物伊曲康唑第二军医大学药学院提供酮康唑第二军医大学药学院提供咪康唑第二军医大学药学院提供伊曲康唑、酮康唑和咪康唑二甲亚砜配成6.4mg/ml，茶黄素用二甲亚砜配成6.4mg/ml，各试药置于-20°C保存。实验前，将药物取出置于35°C温箱融化，充分混勻，分别进行药效学检验。其他实验步骤和方法同实施例1，实验结果见表3、4、5。表3茶黄素与伊曲康唑合用对5株临床耐药白念珠菌的MIC8tl值<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注ITR表示伊曲康唑表4茶黄素与咪康唑合用对5株临床耐药白念珠菌的MIC8tl值<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注MCZ表示咪康唑表5茶黄素与酮康唑合用对5临床耐药白念珠菌的MIC8tl值<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注KCZ表示酮康唑由表3、4、5可见，茶黄素不仅可与氟康唑合用产生增效作用，而且与伊曲康唑、咪康唑、酮康唑等抗真菌药物同样具有抗菌增效作用。合用16μg/ml的茶黄素即可使伊曲康唑、咪康唑、酮康唑对耐药的白念珠菌的MIC8tl值从464μg/ml下降到0.1250.25μg/ml，且随茶黄素剂量增加效应增强，具有剂量依赖性。上述实验结果表明茶黄素具有联合抗真菌药物治疗真菌感染的作用，因此可用作抗真菌药物的增效剂。权利要求茶黄素用作抗真菌药物增效剂在制备抗真菌药物中的应用。2.根据权利要求1所述的茶黄素在制备抗真菌药物中的应用，其特征在于所说的抗真菌药物为唑类抗真菌药物。3.按权利要求2所述的茶黄素在制备抗真菌药物中的应用，其特征在于所说的唑类抗真菌药物为氟康唑、伊曲康唑、咪康唑或酮康唑。全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，是将茶黄素用作抗真菌药物增效剂的新用途。经体外实验，茶黄素与氟康唑、伊曲康唑、咪康唑和酮康唑等抗真菌药合用，能不同程度地提高对浅表部和深部真菌感染的治疗效果，并能使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用。因此可用作抗真菌药物的增效剂。本发明为茶黄素开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物的增效剂，不仅能提高药物的抗真菌作用，而且在临床真菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，可降低抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少了药物的毒副作用。文档编号A61P31/10GK101816646SQ201010157469公开日2010年9月1日申请日期2010年4月27日优先权日2010年4月27日发明者刘伟,刘银丽,姜远英,曹永兵申请人:中国人民解放军第二军医大学